O número crescente de descobertas de substâncias bioativas produzidas pelo metabolismo secundário de cianobactérias tem despertado o interesse de grupos de pesquisa no mundo todo com o objetivo comum de descrever e explorar estas moléculas e entender a sua biossíntese. No Brasil, as pesquisas sobre moléculas bioativas produzidas por linhagens de cianobactérias nativas são escassas. Neste trabalho, utilizando iniciadores específicos da PCR e sequenciamento, a presença de genes envolvidos na biossíntese da neurotoxina saxitoxina (STX) foi confirmada em representantes dos gêneros Dolichospermum, Sphaerospermopsis, Cuspidothrix e Cylindrospermopsis, enquanto que genes da citotoxina cilindrospermopsina (CYN) foram detectados somente em representantes de Cylindrospermopsis. Genes envolvidos com a produção dos inibidores enzimáticos, microviridina (MDN) e a cianobactina microciclamida (MCA) foram sequenciados em isolados do gênero Microcystis. Os genomas das linhagens de Cylindrospermopsis raciborskii CENA302 e CENA303 foram sequenciados usando a plataforma HiScan SQ (Ilumina) com biblioteca pareada 2 x 100 pb. O genoma da Sphaerospermopsis torques-reginae ITEP-024 foi sequenciado utilizando a plataforma Ion Torrent (Life Technologies) com tamanhos de fragmentos de até 200 pb. As tentativas de montagem ab initio dos genomas foram realizadas e o agrupamento gênico da saxitoxina (28 kb) da linhagem C. raciborskii CENA302 foi identificado e caracterizado. As análises filogenéticas das sequências de aminoácidos envolvidos com a biossíntese das moléculas bioativas avaliadas demonstraram que os isolados brasileiros de cianobactérias formam clados com elevado valor de reamostragem com sequências homólogas de cianobactérias conhecidas como produtoras dessas moléculas. Neste estudo é relatada pela primeira vez a presença de genes cyr em linhagens da América do Sul de C. raciborskii e a presença simultânea de genes cyr e sxt em uma única linhagem de C. raciborskii. Além disso, este é o primeiro estudo que relata a presença de genes envolvidos na biossíntese de MDN e MCA nas espécies de cianobactérias M. protocystis, M. panniformis e M. wesenbergii. Análises por espectrometria de massas acoplada a cromatografia líquida (LC-MS) e imunoensaio enzimático (ELISA) foram utilizadas a fim de detectar e identificar variantes estruturais das moléculas bioativas das cianobactérias que tiveram os genes biossintéticos sequenciados. A análise de LC-MS mostrou a produção das variantes GTX2, GTX3, STX e dc-STX pela linhagem C. raciborskii CENA302, enquanto que a linhagem C. raciborskii CENA305 apresentou as variantes NEO, C1 e dcGTX3. As quatro novas variantes de MCY, [D-Val1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-YR e [D-Phe1]MC-LR, foram encontradas nas espécies M. panniformis SPC702 e M. protocystis SPC697. Este é o primeiro relato da produção de MCY por essas duas espécies de Microcystis. Dezesseis linhagens que ainda não possuíam as sequências do gene de RNAr 16S foram sequenciadas. O resultado da análise filogenética das sequências do gene de RNAr 16S foi coerente com as descrições morfológicas, sendo que todas as linhagens foram caracterizadas em nível de espécie. As informações geradas neste estudo contribuem para o aumento do conhecimento da diversidade metabólica dos isolados brasileiros de cianobactérias e trazem nova visão sobre a evolução dessas moléculas produzidas pelo metabolismo secundário / The growing numbers of discoveries of bioactive substances produced by cyanobacterial secondary metabolism has attracted the interest of research groups around the world with the common goal of describing and exploring these molecules and understanding their biosynthesis. In Brazil, researches on bioactive molecules produced by native cyanobacterial strains are scarce. In this work, using specific PCR primers and sequencing, the presence of genes involved in the biosynthesis of the neurotoxin saxitoxin (STX) was confirmed in representatives of the genera Dolichospermum, Sphaerospermopsis, Cuspidothrix and Cylindrospermopsis, while genes of the cytotoxin cylindrospermopsin (CYN) were detected only in representatives of Cylindrospermopsis. Genes involved in the production of protease inhibitors, microviridin (MDN) and the cianobactin microciclamide (MCA), were sequenced in isolates of the genus Microcystis. The genomes of Cylindrospermopsis raciborskii strains CENA302 and CENA303 were sequenced using the high-throughput platform HiScan SQ (Illumina) as paired-ends 2 x 100 bp. The Sphaerospermopsis torques-reginae ITEP-024 genome was sequenced using the high-throughput platform Ion Torrent (Life Technologies) with fragment sizes up to 200 bp. Attempts of ab initio genomes assembly were performed and the 28 kb saxitoxin gene cluster of C. raciborskii strains CENA302 was identified and characterized. Phylogenetic analyses of amino acid sequences involved in the biosynthesis of the bioactive molecules evaluated showed that the Brazilian cyanobacterial isolates formed clades with high bootstrap values with homologous sequences of known cyanobacterial producers of these molecules. In this study is reported for the first time the presence of cyr genes in South America strains of C. raciborskii and the simultaneous presence of cyr and sxt genes in a single C. raciborskii strain. Furthermore, this is the first study reporting the presence of genes involved in the biosynthesis of MDN and MCA in the cyanobacterial species M. protocystis, M. panniformis e M. wesenbergii. Analyses by mass spectrometry coupled to liquid chromatography (LC-MS) and enzyme immunoassay (ELISA) were used to detect and identify structural variants of bioactive molecules of the cyanobacteria that had the biosynthetic genes sequenced. Analysis of LC-MS showed the production of the variants GTX2, GTX3, STX and dc-STX by the C. raciborskii strain CENA302, whereas the strain C. raciborskii CENA305 presented the variants NEO, C1 and dcGTX3. The new four MCY variants [D-Val1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-YR and [D-Phe1]MC-LR were found in the species M. panniformis SPC702 and M. protocystis SPC697. This is the first report of the MCY production by these two species of Microcystis. Sixteen strains that still lacked the 16S rRNA gene sequences were sequenced. The result of the phylogenetic analysis of 16S rRNA gene sequences was consistent with the morphological descriptions, and all strains were characterized to species level. The informations generated in this study contribute to the increase of knowledge on metabolic diversity of Brazilian cyanobacterial strains and bring new insight into the evolution of these molecules produced by secondary metabolism

O aparecimento de cepas microbianas com resistência aos antibióticos comumente usados em âmbito mundial constitui um sério problema de saúde pública, estimulando a busca por novos compostos antimicrobianos para os quais a resistência ainda não foi adquirida. A secreção cutânea de várias espécies de anuros (rãs, sapos e pererecas) é uma rica fonte de peptídeos com amplo espectro de atividade antibacteriana e antifúngica, com grande potencial para o desenvolvimento de fármacos. O presente trabalho visou à investigação da presença de agentes antimicrobianos na secreção cutânea das espécies brasileiras Dermatonotus muelleri, Leptodactylus labyrinthicus, Phyllomedusa burmeisteri, Rhinella icterica, Trachycephalus resinifictrix. Utilizando a estimulação mecânica do tegumento para extração e posteriormente a liofilização dessas secreções. Os testes antimicrobianos foram realizados através da técnica de disco difusão, onde as secreções testadas foram solubilizadas em diferentes solventes e em placas contendo bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. As secreções com maior potencial antibacteriano foram fracionadas por Cromatografia líquida de alta eficiência fase reversa em uma coluna C8 e C18 5μm. Tendo suas frações também testadas em disco-difusão. As frações que formaram halos de inibição foram submetidas à espectrometria de massa para a identificação de suas moléculas. Desta forma foi comprovado a ação antimicrobiana das secreções de Rhinella icterica, Phyllomedusa burmeisteri e Trachycephalus resinifictrix e de suas receptivas frações. / The appearance of microbial strains that are resistant to common antibiotics used in a global scope represents a serious public health issue, stimulating the search for new antimicrobial compounds that resistance was not acquired yet. The cutaneous secretion of several anurans species (frogs, toads and tree frogs) is a rich source of peptides with a broad spectrum of antimicrobial and antifungal activity, with a big potential to drug development. The present work aimed the investigation of the presence of antimicrobial agents in the cutaneous secretion of the Brazilian species Dermatonotus muelleri, Leptodactylus labyrinthicus, Phyllomedusa burmeisteri, Rhinella icterica, Trachycephalus resinifictrix. For the extraction of these secretions it was utilized the integument mechanical stimulation and later on these secretions were lyophilized. For the antimicrobial tests it was used the disk diffusion technique, where the test secretions were solubilized in different solvents and in plates containing Gram-negative and Gram-positive bacteria. The secretions with the highest antimicrobial potential were fractionated by a high-performance liquid chromatography reverse phase in the columns C8 and C18 5μm. These fractions were also tested in disk diffusion. The fractions that formed inhibition zones were submitted to mass spectrometry for the identification of their molecules. This way it was evidenced antimicrobial activity of secretions from Rhinella icterica, Phyllomedusa burmeisteri and Trachycephalus resinifictrix and from their respective fractions.

O aparecimento de cepas microbianas com resistência aos antibióticos comumente usados em âmbito mundial constitui um sério problema de saúde pública, estimulando a busca por novos compostos antimicrobianos para os quais a resistência ainda não foi adquirida. A secreção cutânea de várias espécies de anuros (rãs, sapos e pererecas) é uma rica fonte de peptídeos com amplo espectro de atividade antibacteriana e antifúngica, com grande potencial para o desenvolvimento de fármacos. O presente trabalho visou à investigação da presença de agentes antimicrobianos na secreção cutânea das espécies brasileiras Dermatonotus muelleri, Leptodactylus labyrinthicus, Phyllomedusa burmeisteri, Rhinella icterica, Trachycephalus resinifictrix. Utilizando a estimulação mecânica do tegumento para extração e posteriormente a liofilização dessas secreções. Os testes antimicrobianos foram realizados através da técnica de disco difusão, onde as secreções testadas foram solubilizadas em diferentes solventes e em placas contendo bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. As secreções com maior potencial antibacteriano foram fracionadas por Cromatografia líquida de alta eficiência fase reversa em uma coluna C8 e C18 5μm. Tendo suas frações também testadas em disco-difusão. As frações que formaram halos de inibição foram submetidas à espectrometria de massa para a identificação de suas moléculas. Desta forma foi comprovado a ação antimicrobiana das secreções de Rhinella icterica, Phyllomedusa burmeisteri e Trachycephalus resinifictrix e de suas receptivas frações. / The appearance of microbial strains that are resistant to common antibiotics used in a global scope represents a serious public health issue, stimulating the search for new antimicrobial compounds that resistance was not acquired yet. The cutaneous secretion of several anurans species (frogs, toads and tree frogs) is a rich source of peptides with a broad spectrum of antimicrobial and antifungal activity, with a big potential to drug development. The present work aimed the investigation of the presence of antimicrobial agents in the cutaneous secretion of the Brazilian species Dermatonotus muelleri, Leptodactylus labyrinthicus, Phyllomedusa burmeisteri, Rhinella icterica, Trachycephalus resinifictrix. For the extraction of these secretions it was utilized the integument mechanical stimulation and later on these secretions were lyophilized. For the antimicrobial tests it was used the disk diffusion technique, where the test secretions were solubilized in different solvents and in plates containing Gram-negative and Gram-positive bacteria. The secretions with the highest antimicrobial potential were fractionated by a high-performance liquid chromatography reverse phase in the columns C8 and C18 5μm. These fractions were also tested in disk diffusion. The fractions that formed inhibition zones were submitted to mass spectrometry for the identification of their molecules. This way it was evidenced antimicrobial activity of secretions from Rhinella icterica, Phyllomedusa burmeisteri and Trachycephalus resinifictrix and from their respective fractions.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-02-08T11:32:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DISSERTAÇÃO _FABIANE_versaofinalcorrigida gustavo.pdf: 478077 bytes, checksum: 6878b81ae118091bcba4f74778c61995 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-02-16T11:14:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO _FABIANE_versaofinalcorrigida gustavo.pdf: 478077 bytes, checksum: 6878b81ae118091bcba4f74778c61995 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-16T11:14:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO _FABIANE_versaofinalcorrigida gustavo.pdf: 478077 bytes, checksum: 6878b81ae118091bcba4f74778c61995 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A Tagetes minuta L. é uma planta bioativa de ocorrência espontânea no Sul do Brasil, conhecida pelos agricultores familiares por ser uma espécie invasora e frequentemente usada como repelente de insetos. Contudo, pode se tornar uma nova alternativa de renda uma vez que seu óleo essencial possui propriedades de interesse na indústria de fármacos, cosméticos, alimentos e bioinsumos agrícolas. O objetivo do trabalho foi caracterizar o óleo essencial de populações espontâneas de T. minuta em municípios do sul do Rio Grande do Sul, tentando identificar a ocorrência de quimiotipos e fatores de variabilidade na sua composição. Foram coletadas plantas de seis populações de T. minuta entre abril e maio de 2015, quando as plantas estavam em plena floração. O óleo essencial foi extraído de flores e folhas com pecíolos por arraste a vapor e analisado por CG-EM/CG-DIC. Foram identificados 15 compostos, sendo que todos as populações tiveram os mesmos compostos majoritários, cis-tagetona, cis-β-ocimeno, dihidrotagetona, trans-tagetona e limoneno, que em média representaram 96% da composição do óleo. As populações fazem parte de um mesmo quimiotipo. As variações na proporção entre os compostos majoritários permitiu agrupar as populações em três grupos, sendo o primeiro com três amostras e 96% de similaridade, o segundo com duas amostras e 86% de similaridade e uma última amostra isolada, com 74% e 79% de similaridade com as duas anteriores respectivamente. As primeiras populações colhidas apresentaram maiores teores de dihidrotagetona e limoneno enquanto aquelas colhidas mais tardiamente tiveram teores mais elevados de cis-tagetona e cis-β-ocimeno. A data de colheita foi um fator determinante na proporção entre os compostos majoritários e apresentou uma correlação negativa com a temperatura média do ar. A ocorrência de elevada precipitação pluviométrica nos dias anteriores à colheita pode ter interferido na composição do óleo de pelo menos uma população. A radiação solar teve correlação positiva com os teores de cis-tagetona e cis-β-ocimeno e negativa com dihidrotagetona e limoneno. Finalizando, o óleo essencial é similar entre as diferentes populações de T. minuta avaliados e tende a apresentar uma composição uniforme dos compostos majoritários, com variações nas suas proporções devido ao estádio fenológico no momento da colheita. / Tagetes minuta L. is a bioactive plant of spontaneous occurrence in the South of Brazil, known to family farmers as an invasive species and frequently used as an insect repellent. However, it can become a new income alternative since its essential oil has properties of interest in the pharmaceutical, cosmetic, food and agricultural bioproducts industry. The aim of this work was to characterize the essential oil of spontaneous populations of T. minuta in municipalities of southern of the Rio Grande do Sul State, trying to identify the occurrence of chemotypes and variability factors in their composition. Plants of six populations of T. minuta were collected between April and May 2015, in the full flowering. The essential oil was extracted from flowers and leaves with petioles by steam-drag and analyzed by GC-MS/GC-FID. Fifteen compounds were identified, and all the populations had the same major compounds, cis-tagetone, cis-β-ocimene, dihydrotagetone, trans-tagetone and limonene, which on average represented 96% of the oil composition. The populations are of the same chemotype. Variations in the proportion of the major compounds allowed grouping the populations into three groups, the first with three samples and 96% similarity, the second with two samples and 86% similarity, and the last sample isolated, with 74% and 79% of similarity with the two previous ones respectively. The first populations harvested had higher levels of dihydrotagetone and limonene whereas those harvested later had higher levels of cis-tagetone and cis-β-ocimene. The date of harvest was a determinant factor in the proportion between the major compounds and presented a negative correlation with the mean air temperature. The occurrence of high rainfall in the days prior to harvest may have interfered in the oil composition of at least one population. The solar radiation had a positive correlation with the contents of cis-tagetone and cisβ-ocimene and negative with dihydrotagetone and limonene. Finally, the essential oil is similar among the different populations of T. minuta evaluated and tends to present a uniform composition of the major compounds, with variations in their proportions due to the phenological stage at the time of harvest.

FARIAS, D. F. Proteínas de sementes de Amburana cearensis (Allemao) A. C. Smith: valor nutricional e bioatividade contra patógenos e vetores de doenças. 2009. 187 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-26T20:59:40Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_dffarias.pdf: 1943323 bytes, checksum: dd2074b7cf88fa8338feee08dbcd7b3f (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-06T17:16:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_dffarias.pdf: 1943323 bytes, checksum: dd2074b7cf88fa8338feee08dbcd7b3f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-06T17:16:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_dffarias.pdf: 1943323 bytes, checksum: dd2074b7cf88fa8338feee08dbcd7b3f (MD5) Previous issue date: 2009 / Amburana cearensis (Allemao) A. C. Smith, usually known in portuguese language as “Imburana-de-Cheiro” or “Cumaru”, is a leguminous tree, subfamily Papilionoideae with common occurrence in “Caatinga” Dominium. Despite the numerous ethnobotanical uses, few studies report biological activities of medical interest and / or agribusiness for this species or yet its utilization as food for humans and / or animals. This study aimed to evaluate the proteins of A. cearensis on its nutritional value associated with its biochemical characterization and as to the presence of bioactivity against bacteria, yeasts and filamentous fungi, all pathogens of humans, animals or plants of economic importance, and also against the vectors of disease, Aedes aegypti and Ae. albopictus. For this, seeds were collected in areas of caatinga trees in the municipality of Quixadá - CE and, subsequently, dried and finely ground. The seeds of A. cearensis have high nutritional potential, evidenced by the high content of proteins (22.69  0.81 g 100 g-1), lipid (24.45 2.02 g 100 g-1) and dietary fiber (34.75 1.78 g 100 g-1), keeping smaller quantities of starch (11.43 0.18 g 100 g-1), of total sugars (5.60 0.09 g 100 g-1) and minerals (4.51 0.21 g 100 g-1). Its amino acid composition is comparable to that of soybeans and beans. Moreover, the seeds have moderate levels of antinutritional factors, being detected only trypsin inhibitory activity (27.41 ± 0.03 gTI Kg-1), urease activity (434 ± 34 U kg-1) and some secondary metabolites such as tannins, phenols, flavones, flavonols, and xantone steroids. Chemical components, probably of low molecular mass present in seeds flour incorporated into diets, seem to interfere with their acceptance and use by animals since when the protein fraction (F0/90), obtained from its soluble protein, was incorporated into the balanced diet, the rats accepted well the diets and their performance indicated that F0/90 a good source of protein, comparable to major sources of vegetable protein such as soy and beans. Proteins of A. cearensis seeds are mainly composed of globulins (74.43 g 100 g-1) and albumins (14.23 g 100 g-1), with smaller quantities of glutelin basic proteins (10.07 g 100g-1), prolamins (1.20 g 100 g-1) and glutelin acidic proteins (0.07 g 100 g-1). The seeds crude extract (GE) offers a wide variety of proteins as shown by electrophoretic profiles with a predominance of proteins with apparent molecular mass over 45.0 kDa. The seeds of A. cearensis show also high bioactive potential, especially the activities of their majority proteins (albumins and globulins) against the growth of human pathogenic bacteria and yeast and phytopathogenic filamentous fungi, and against larvae of Aedes aegypti and Ae. albopictus. The inhibitory activity of the growth of phytopathogenic fungi concentrated in the albumins F70/90 fraction, being rich in proteins of low molecular mass (<30 kDa). Thus we can conclude that F0/90 is a good source of protein food when compared to other plant sources already used by the population. In addition, the globulins and albumins of A. cearensis are promising sources of bioactive proteins to be studied further and in greater purity. / Amburana cearensis (Allemao) A. C. Smith, popularmente conhecida como Imburana-de-Cheiro ou Cumaru, é uma leguminosa arbórea da subfamília Papilionoideae de ocorrência freqüente na região do domínio Caatinga. Apesar dos inúmeros usos etnobotânicos, poucos trabalhos relatam atividades biológicas de interesse médico e/ou agroindustrial para esta espécie ou, mesmo, sua utilização como fonte de alimento para humanos e/ou animais. Assim, o presente trabalho objetivou avaliar as proteínas de A. cearensis quanto a seu valor nutricional aliado à sua caracterização bioquímica e quanto à presença de bioatividade contra bactérias, leveduras e fungos filamentosos, todos patógenos do homem, de animais ou de plantas de importância econômica, e, ainda, contra os vetores de doenças, Aedes aegypti e Ae. albopictus. Para tanto, sementes foram coletadas em área de caatinga arbórea, no município de Quixadá – CE, sendo, posteriormente, desidratadas e finamente moídas. As sementes de A. cearensis possuem alto potencial nutricional, revelado pelo alto teor de proteínas (22,69  0,81 g. 100 g-1), lipídios (24,45 2,02 g. 100 g-1) e fibra alimentrar (34,75 1,78 g.100 g-1), retendo quantidades menores de amido (11,43 0,18 g.100g-1), açúcares totais (5,60 0,09 g.100 g-1), e de minerais (4,51 0,21 g.100 g-1). Sua composição aminoacídica é comparável àquela da soja e feijão. Além disso, as sementes apresentam moderados níveis de fatores antinutricionais, sendo detectados apenas atividade inibitória de tripsina (27,41 ± 0,03 gTI.Kg-1), atividade ureásica (434,0 ± 34,0 U.Kg-1) e alguns metabólitos secundários, como taninos, fenóis, flavonas, flavonóis, xantonas e esteróides. Componentes químicos, provavelmente de baixa massa molecular, presentes nas sementes incorporadas a dietas interferem na sua aceitação e aproveitamento por parte dos animais, uma vez que quando a fração proteica (F0/90) obtida de suas proteínas solúveis é incorporada à dieta balanceada, apresenta boa aceitação pelos animais, mostrando-se uma boa fonte de proteínas, comparável a importantes fontes de proteínas vegetais como a soja e os feijões. As proteínas das sementes de A. cearensis são compostas principalmente por globulinas (74,43 g. 100g-1) e albuminas (14,23 g.100 g-1), com quantidades menores de proteínas do tipo glutelinas básicas (10,07 g.100 g-1), prolaminas (1,20 g.100 g-1) e proteínas do tipo glutelinas ácidas (0,07 g.100 g-1). O extrato bruto (EB) das sementes apresenta uma grande diversidade de bandas proteicas com predominância de bandas com massa molecular aparente > 45,0 kDa. As sementes de A. cearensis possuem também alto potencial bioativo, destacando-se as atividades de suas proteínas majoritárias (globulinas e albuminas) contra o crescimento de bactérias e leveduras patógenas do homem e de fungos filamentosos fitopatogênicos, e atividade contra larvas de Aedes aegypti e Ae. albopictus. A atividade inibitória do crescimento de fungos fitopatogênicos concentra-se na fração F70/90 das albuminas, sendo rica em proteínas de baixa massa molecular (< 30 kDa). Assim, pode-se concluir que a F0/90 é uma boa fonte de proteína alimentar quando comparada a outras fontes vegetais já utilizadas pela população. Além disso, as globulinas e albuminas de A. cearensis são fontes promissoras de proteínas bioativas que devem ser estudadas mais detalhadamente e em maior grau de pureza.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3825.pdf: 11572588 bytes, checksum: 5139f6f8274e9d9b46982514e6a5c21e (MD5) Previous issue date: 2011-06-30 / Universidade Federal de Minas Gerais / Chagas disease, caused by the flagellate protozoan of the family Trypanosomatidae Trypanosoma cruzi, is endemic in Latin America. The available drugs are ineffective and cause severe side effects. Therefore, it is necessary the discovery and development of new drugs for Chagas disease chemotherapy. The cruzain enzyme (EC 3.4.22.51) is expressed in all T. cruzi life cycle and represents a valid target against Chagas disease. The search for new cruzain enzyme inhibitors was carried out through the development of a new strategy using in silico methods, based on integrated ligand and target virtual screening. The consensus of different virtual screenings allowed the selection of 23 molecules for in vitro assays, from a virtual library containing approximately 8.5 million structures collected from the commercial database ZINC. The compounds were assayed against the cruzain and human homologous cathepsin-L and 12 presented inhibitory activity. The IC50 values ranged from 5.6 to 73.9 &#956;M for cruzain and 8.6 to 89.1 &#956;M for cathepsin-L. The apparent inhibition constant (Ki app) of the identified compounds ranged from 3.7 and 64.5 &#956;M for cruzaínain and 3.8 to 87.1 &#956;M for the cathepsin-L and showed competitive inhibition mechanisms. New molecular classes of non-covalent inhibitors of the enzyme cruzain were identified. Two substances were validated as inhibitors by evaluating compound analogs to establishing relationships between molecular structure and biological activity; a substance with the ligand efficiency of 0.33 kcal mol-1 NA-1 was identified. Two enzyme inhibitors showed trypanocidal activity against the Y strain of T. cruzi trypomastigotes with potency comparable to the drug benznidazole®. The micromolar activity of the compounds against the cruzain enzyme and the confirmed activity against the parasite provide the opportunity for molecular optimization and improve the bioactive compounds design with known mode of action. / A doença de Chagas, causada pelo parasito tripanossomatídeo Trypanosoma cruzi, é uma doença endêmica distribuída por toda América Latina. Os fármacos disponíveis são ineficientes e apresentam sérios efeitos colaterais. Portanto, são necessários novos fármacos para a quimioterapia da doença de Chagas. A enzima cruzaína (EC 3.4.22.51) de T. cruzi é expressa durante todo o ciclo de vida e representa um alvo validado contra a doença da Chagas. A busca de novos inibidores da enzima cruzaína foi realizada pelo desenvolvimento de uma estratégia integrada utilizando métodos in silico baseados na estrutura do ligante e do receptor e métodos in vitro. O consenso dos diferentes métodos de ensaios virtuais permitiu a seleção de 23 moléculas para os ensaios in vitro, a partir de uma coleção virtual com cerca de 8,5 milhões de estruturas provenientes do banco de moléculas comerciais ZINC e 12 apresentaram atividade inibitória frente à enzima cruzaína e sua homóloga catepsina-L de humanos. Os valores de IC50 variaram entre 5,6 e 73,9 &#956;M para cruzaína e 8,6 a 89,1 para catepsina-L. As constantes de inibição aparentes (Ki app) da série de compostos identificados variaram entre 3,7 e 64,5 &#956;M para a cruzaína e 3,8 a 87,1 &#956;M para a catepsina-L e apresentaram mecanismos competitivos de inibição. Novas classes moleculares inéditas de inibidores não covalentes da enzima cruzaína foram identificadas. Duas substâncias foram validadas como inibidores através de avaliação de análogos para o estabelecimento de relações entre a estrutura molecular e atividade biológica, uma substância com eficiência do ligante de 0,33 kcal mol-1 NA-1 foi identificada. Dois inibidores enzimáticos apresentaram atividade tripanossomicida frente à cepa Y do T. cruzi em sua forma tripomastigota com potência comparável ao Benzonidazol®. A inibição da enzima cruzaína com atividade confirmada frente ao T. cruzi oferece a oportunidade de otimização da estrutura molecular da substância matriz e valoriza a racionalização do processo de identificação de substâncias bioativas com modo de ação conhecido.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV10MA058.pdf: 1288592 bytes, checksum: a78d5ad5cb453cad5bba3781ca902dfd (MD5) Previous issue date: 2010-12-15 / High land fields in the Coxilha Rica region of Santa Catarina state have a worthy biodiversity due to low anthropic interference and the singular predominant ecosystem. Traditional extensive cattle system practiced during several generations allowed to keep some reminiscent forestry. The ecosystems that had low human interference may keep high biodiversity with several species, having therapeutic, aromatic, nutritional, and condiment properties. It is very important to study the native flora in such region once biodiversity is threatened by water powering (PCH`s), re-forestation, and agriculture large plantations. Native plant species that are endemically in such region may reduce gradually its occurrence or even became extinct. Culture and customs in this region have been strongly influenced by indigenous, slaves, and gauchos knowledge. The use of plants as medicines in the local communities of Coxilha Rica is a part of its tradition, but it has been decreases with time. Ethno-knowledge may help to maintain the communities integrated with local genetic resources. To recognize and prospect native genetic resources would be essential to rescue dignity and to empowering people for local sustainable development, which may improve live quality. Mostly of plant species that are characteristic successional species in the high land fields were not yet studied for their potential economic exploration, even they are already useed for local communities. Medicinal plants consisted of the most large group of plant that are currently used by the communities living in the high land fields and it gives the spatial name of medicina campeira . One of the most frequently used species is Poiretia spp., that is indicated for stomach pain. The presence of volatile essential oil gives the potential to be used also as cosmetic. The objective of this work was to do assessment of medicinal plants used by farmers living in Coxilha Rica region of Santa Catarina state. Studies were carried out in the follow communities: Cajurú, Morrinhos, Pinheiro Seco, São Jorge, Faxinal, Km 14, Raposo, Escurinho, Pelotinhas, Vigia, Santo Cristo, Borel, and Rincão do Perigo. Semi-structured questionnaire was applied to each visited farmer. Informations included social-cultural aspects, indicated treatment, medicinal plant occurrence, habitat, processing, and plant storage methods. The medicinal species of Poiretia latifolia was characterized by taking data of its natural habitat and the associated plant community. Multiplication systems of Poiretia latifolia were studied in the laboratory. Results showed that the farmers living in the Coxilha Rica region used frequently plant for human treatment. It was reported 121 plant species as medicinal and 50 of them to be native occurrence in the South Brazil. The most used plants include Achyrocline satureioides, Maytenus ilicifolia, Chionolaena latifolia, Persea pirifolia, Baccharis trimera, Malva sylvestris, Mentha pulegium, Poiretia latifolia, and Trichocline macrocephala. The most frequent treatments with plants were for stomach pain, hunting, and colt. Poiretia latifolia occurred in field areas, shallower soil covering rocks and stones. It is dispersed in all communities of Coxilha Rica region. It may be conclude that Poiretia latifolia is a frequent genetic resorce presente in the Planalto Serrano Catarinense and it has a valuable local knowledge associated with it. This makes the species P. latifolia a potential plant species for domestication and used in economic cropping. For domestication purposes of Poiretia latifolia it is necessary further studies about multiplication and ecology. There are several native plant species occurring in high land fields of the Coxilha Rica region that would be multiplied to cultivate as medicinal plant once local farmers had been used from long time / Os campos nativos de altitude da região da Coxilha Rica, SC, possuem biodiversidade peculiar pouco alterada, mantendo características naturais do ecossistema Campos. Isto se deve, sobretudo, pela pecuária extensiva tradicionalmente explorada há várias gerações associada a manutenção de remanescentes florestais,. Os ecossistemas pouco modificados apresentam alta riqueza de recursos genéticos e podem ser portadores de genótipos que contêm propriedades singulares para usos terapêuticos, aromáticos, condimentares, nutricionais, entre outros. A caracterização de espécies da flora silvestre dessa região é primordial para a manutenção e conservação da biodiversidade, ameaçada pela ação antrópica tais como agricultura extensiva, plantio de maciços florestais e construção de pequenas centrais hidrelétricas (PCH s). Com isto, várias espécies vegetais de ocorrência endêmica poderão reduzir gradativamente suas populações ou até mesmo desaparecerem. A região da Coxilha Rica é fortemente influenciada por uma cultura que preserva saberes tradicionais herdados de indígenas, escravos e tropeiros. O uso de plantas no tratamento de doenças na chamada medicina campeira faz parte da cultura popular e é uma alternativa de medicação de baixo custo. Porém, este conhecimento popular está sendo perdido ao longo do tempo. Estudos etnobotânicos poderiam auxiliar na perpetuação dos processos culturais integrados ao uso dos recursos genéticos locais. O reconhecimento e a prospecção destes germoplasmas silvestres, aliados a valorização da cultura tradicional local são essenciais para atingir a eqüidade social, resgatando a auto-estima, a dignidade e qualidade de vida do homem que ai reside. A maioria das espécies de plantas sucessionais nos campos naturais não tem ainda potencial de exploração econômica conhecido, embora já fazem parte do uso na cultura local. As plantas medicinais compõem um dos grupos de maior riqueza, tem sido utilizadas pelos moradores da região dos Campos Naturais de Altitude, originando o termo local de medicina campeira . Entre as espécies conhecidas e mais utilizadas pelas famílias locais, cita-se a erva-de-touro, empregada para tratar problemas estomacais e com alto potencial farmacológico e cosmético devido a sua composição com óleos voláteis aromáticos peculiares. O objetivo deste trabalho foi realizar levantamento de espécies utilizadas na medicina campeira por agricultores e pecuaristas da região da Coxilha Rica, SC. Foram realizadas visitas a agricultores/pecuaristas da região da Coxilha Rica, abrangendo as comunidades de Cajurú, Morrinhos, Pinheiro Seco, São Jorge, Faxinal, Km 14, Raposo, Escurinho, Pelotinhas, Vigia, Santo Cristo, Borel e Rincão do Perigo. Para cada visita foi aplicado questionário semi-estruturado abordando aspectos sócio-culturais do informante e informações sobre as plantas utilizadas medicinalmente, local de ocorrência destas plantas, formas de armazenagem, manipulação e uso. A erva-de-touro (Poiretia latifolia) teve caracterizado seu hábitat natural de ocorrência e a comunidade vegetal associada. Formas de multiplicação da erva-de-touro. foram estudadas em laboratório. Dados levantados permitiram verificar que moradores da região da Coxilha Rica usam com frequência plantas medicinais.Foram relatadas 121 espécies de plantas, sendo 50 de ocorrência natural da região Sul do Brasil. As plantas mais usadas foram a macela (Achyrocline satureioides), espinheira-santa (Maytenus ilicifolia), arnica (Chionolaena latifolia), pau-andrade (Persea pirifolia), carqueja (Baccharis trimera), malva (Malva sylvestris), poejo (Mentha pulegium), erva-de-touro (Poiretia latifolia) e cravo-do-campo (Trichocline macrocephala). Os usos mais comuns relatados foram para problemas digestivos, ferimentos e gripe. A erva-de-touro (P. latifolia) ocorreu predominantemente em áreas de campo e em solos pedregosos e é naturalmente dispersa em toda região da Coxilha Rica. Pode-se concluir que a erva-de-touro é um recurso genético do Planalto Serrano Catarinense, dispõe de considerável conhecimento associado à população local e tem potencial de exploração econômica. Para a domesticação da espécie e inclusão em sistemas de produção agrícola são necessários maiores estudos sobre a ecologia da espécie e formas de multiplicação. Por outro lado, outras espécies nativas são igualmente de alto valor medicinal conforme apontado pelos moradores da Coxilha Rica

Submitted by Marta Toyoda (1144061@mackenzie.br) on 2018-10-09T17:18:01Z No. of bitstreams: 2 Camila Paraíso Monção.pdf: 2300400 bytes, checksum: 51d40d978d5bf3204c042eb4fbdef32b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Paola Damato (repositorio@mackenzie.br) on 2018-11-14T13:27:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Camila Paraíso Monção.pdf: 2300400 bytes, checksum: 51d40d978d5bf3204c042eb4fbdef32b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T13:27:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Camila Paraíso Monção.pdf: 2300400 bytes, checksum: 51d40d978d5bf3204c042eb4fbdef32b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-10 / In this work the main characteristics, applications, potentialities and limitations of the controlled release systems were studied, as well as the mechanisms that directly influenced the release kinetics of the active agent. Micro and nanostructured systems have great potential for the controlled release and encapsulation of bioactive molecules. The various biodegradable polymer systems represent a new strategy for the delivery of active ingredients. A controlled release system enables the drug concentration profile to remain constant within the therapeutic range thereby promoting increased therapeutic index and immune response to the patient and avoiding adverse side effects when compared to conventional methods of administration. In this work were obtained membranes formed by polymeric biosystems for application in controlled release of drugs and other assets. Four release systems were obtained: beeswax / protein / lecithin; beeswax / protein / alginate / lecithin and beeswax / alginate / chitosan / lecithin by methods of complex coacervation and spray drying. The results show that the most effective system was bee / protein / alginate / lecithin. / Neste trabalho foram estudadas as principais características, aplicações, potencialidades e limitações dos sistemas de liberação controlada de farmácos, bem como os mecanismos que influenciaram diretamente a cinética de liberação do agente ativo. Os sistemas micro e nanoestruturados apresentam grande potencial para a liberação controlada e encapsulação de moléculas bioativas. Os diversos sistemas poliméricos biodegradáveis representam uma nova estratégia para a veiculação de ingredientes ativos. Um sistema de liberação controlada possibilita que o perfil de concentração da droga se mantenha constante dentro da faixa terapêutica promovendo dessa forma, aumento do índice terapêutico e da resposta imunológica ao paciente e evitando efeitos colaterais adversos quando comparado aos métodos convencionais de administração. Neste trabalho foram obtidas membranas formadas por biossitemas poliméricos para aplicação em liberação controlada de proteína concentrada do soro de leite WPC. Foram obtidos 4 sistemas de liberação: cera de abelha/proteína/lecitina; cera de abelha/proteína/alginato/lecitina e cera de abelha/alginato/quitosana/lecitina pelos métodos de coacervação complexa e spray drying. Com a simulação do pH do sistema gastrintestinal (pH 1,2 e pH 6,8) pode-se observar o tempo em que cada membrana liberou a proteína. Com esta informação concluimos o local teórico da liberação da proteína e quais membranas não são compativeis com o local de ação escolhido. Os resultados mostraram que o sistema mais efetivo foi o de cera de abelha/proteína/alginato/quitosana com liberação em pH 6,8 nas duas concentrações de proteína utilizadas 40% e 60% de proteína m/m.

O número crescente de descobertas de substâncias bioativas produzidas pelo metabolismo secundário de cianobactérias tem despertado o interesse de grupos de pesquisa no mundo todo com o objetivo comum de descrever e explorar estas moléculas e entender a sua biossíntese. No Brasil, as pesquisas sobre moléculas bioativas produzidas por linhagens de cianobactérias nativas são escassas. Neste trabalho, utilizando iniciadores específicos da PCR e sequenciamento, a presença de genes envolvidos na biossíntese da neurotoxina saxitoxina (STX) foi confirmada em representantes dos gêneros Dolichospermum, Sphaerospermopsis, Cuspidothrix e Cylindrospermopsis, enquanto que genes da citotoxina cilindrospermopsina (CYN) foram detectados somente em representantes de Cylindrospermopsis. Genes envolvidos com a produção dos inibidores enzimáticos, microviridina (MDN) e a cianobactina microciclamida (MCA) foram sequenciados em isolados do gênero Microcystis. Os genomas das linhagens de Cylindrospermopsis raciborskii CENA302 e CENA303 foram sequenciados usando a plataforma HiScan SQ (Ilumina) com biblioteca pareada 2 x 100 pb. O genoma da Sphaerospermopsis torques-reginae ITEP-024 foi sequenciado utilizando a plataforma Ion Torrent (Life Technologies) com tamanhos de fragmentos de até 200 pb. As tentativas de montagem ab initio dos genomas foram realizadas e o agrupamento gênico da saxitoxina (28 kb) da linhagem C. raciborskii CENA302 foi identificado e caracterizado. As análises filogenéticas das sequências de aminoácidos envolvidos com a biossíntese das moléculas bioativas avaliadas demonstraram que os isolados brasileiros de cianobactérias formam clados com elevado valor de reamostragem com sequências homólogas de cianobactérias conhecidas como produtoras dessas moléculas. Neste estudo é relatada pela primeira vez a presença de genes cyr em linhagens da América do Sul de C. raciborskii e a presença simultânea de genes cyr e sxt em uma única linhagem de C. raciborskii. Além disso, este é o primeiro estudo que relata a presença de genes envolvidos na biossíntese de MDN e MCA nas espécies de cianobactérias M. protocystis, M. panniformis e M. wesenbergii. Análises por espectrometria de massas acoplada a cromatografia líquida (LC-MS) e imunoensaio enzimático (ELISA) foram utilizadas a fim de detectar e identificar variantes estruturais das moléculas bioativas das cianobactérias que tiveram os genes biossintéticos sequenciados. A análise de LC-MS mostrou a produção das variantes GTX2, GTX3, STX e dc-STX pela linhagem C. raciborskii CENA302, enquanto que a linhagem C. raciborskii CENA305 apresentou as variantes NEO, C1 e dcGTX3. As quatro novas variantes de MCY, [D-Val1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-YR e [D-Phe1]MC-LR, foram encontradas nas espécies M. panniformis SPC702 e M. protocystis SPC697. Este é o primeiro relato da produção de MCY por essas duas espécies de Microcystis. Dezesseis linhagens que ainda não possuíam as sequências do gene de RNAr 16S foram sequenciadas. O resultado da análise filogenética das sequências do gene de RNAr 16S foi coerente com as descrições morfológicas, sendo que todas as linhagens foram caracterizadas em nível de espécie. As informações geradas neste estudo contribuem para o aumento do conhecimento da diversidade metabólica dos isolados brasileiros de cianobactérias e trazem nova visão sobre a evolução dessas moléculas produzidas pelo metabolismo secundário / The growing numbers of discoveries of bioactive substances produced by cyanobacterial secondary metabolism has attracted the interest of research groups around the world with the common goal of describing and exploring these molecules and understanding their biosynthesis. In Brazil, researches on bioactive molecules produced by native cyanobacterial strains are scarce. In this work, using specific PCR primers and sequencing, the presence of genes involved in the biosynthesis of the neurotoxin saxitoxin (STX) was confirmed in representatives of the genera Dolichospermum, Sphaerospermopsis, Cuspidothrix and Cylindrospermopsis, while genes of the cytotoxin cylindrospermopsin (CYN) were detected only in representatives of Cylindrospermopsis. Genes involved in the production of protease inhibitors, microviridin (MDN) and the cianobactin microciclamide (MCA), were sequenced in isolates of the genus Microcystis. The genomes of Cylindrospermopsis raciborskii strains CENA302 and CENA303 were sequenced using the high-throughput platform HiScan SQ (Illumina) as paired-ends 2 x 100 bp. The Sphaerospermopsis torques-reginae ITEP-024 genome was sequenced using the high-throughput platform Ion Torrent (Life Technologies) with fragment sizes up to 200 bp. Attempts of ab initio genomes assembly were performed and the 28 kb saxitoxin gene cluster of C. raciborskii strains CENA302 was identified and characterized. Phylogenetic analyses of amino acid sequences involved in the biosynthesis of the bioactive molecules evaluated showed that the Brazilian cyanobacterial isolates formed clades with high bootstrap values with homologous sequences of known cyanobacterial producers of these molecules. In this study is reported for the first time the presence of cyr genes in South America strains of C. raciborskii and the simultaneous presence of cyr and sxt genes in a single C. raciborskii strain. Furthermore, this is the first study reporting the presence of genes involved in the biosynthesis of MDN and MCA in the cyanobacterial species M. protocystis, M. panniformis e M. wesenbergii. Analyses by mass spectrometry coupled to liquid chromatography (LC-MS) and enzyme immunoassay (ELISA) were used to detect and identify structural variants of bioactive molecules of the cyanobacteria that had the biosynthetic genes sequenced. Analysis of LC-MS showed the production of the variants GTX2, GTX3, STX and dc-STX by the C. raciborskii strain CENA302, whereas the strain C. raciborskii CENA305 presented the variants NEO, C1 and dcGTX3. The new four MCY variants [D-Val1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-RR, [D-Leu/Ile1]MC-YR and [D-Phe1]MC-LR were found in the species M. panniformis SPC702 and M. protocystis SPC697. This is the first report of the MCY production by these two species of Microcystis. Sixteen strains that still lacked the 16S rRNA gene sequences were sequenced. The result of the phylogenetic analysis of 16S rRNA gene sequences was consistent with the morphological descriptions, and all strains were characterized to species level. The informations generated in this study contribute to the increase of knowledge on metabolic diversity of Brazilian cyanobacterial strains and bring new insight into the evolution of these molecules produced by secondary metabolism

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Marcio_de_Medeiros.pdf: 676169 bytes, checksum: 35c7abb7cdc119cc6b24fb32d00c1cb8 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / This study aimed to contribute to the development of organics systems production through the evaluation of plant protection imputs. The cultivation of potatoes in an organic system presents some challenges in pest control, and the Diabrotica speciosa and Phytophthora infestans are the most important. We sought to avaluate the efficiency of different imputs, both those available in the market as other locally produced, with laboratory and fields methods. There were jobs in the experimental fields and laboratories of Embrapa Clima Temperado. To control insects were tested imputs derived from leaves of Melia azedarach, Cedrela fissilis and Trichilia claussenii. The T. claussenii tincture 10 and 20% obtained the lowest values of leaf consumption by D. speciosa in no-choice tests and the free-choice tests. The Neem oil obtened better results in the free-choice tests, suggesting that presence of no trated food turn this product more efficient. Composto A in the laboratory trial had a negative effect on feeding D. speciosa in no-choice and free-choice tests. The test of Composto A persistence was made until 29 days after application, and was also the imput with the highest proportion of tubers without damage by insects in the field test. In the P. infestans imputs control evaluation in potatoes only the bordeaux mixture obtained similar results to positive control in the field tests. / A busca de insumos alternativos aos convencionais com características definidas para serem utilizadas na produção orgânica é uma atividade nova no cenário da pesquisa nacional. O cultivo da batata em sistema orgânico apresenta alguns desafios no controle fitossanitário, sendo a D. speciosa e a P. infestans os principais agentes. Buscou-se avaliar a eficiência de diferentes insumos, tanto aqueles disponíveis no mercado quanto outros produzidos localmente, com métodos laboratoriais e de campo. As plantas foram escolhidas com base em critérios objetivos como existência de informação prévia de sua ação e fácil cultivo. Realizaram-se os trabalhos nos campos experimentais e laboratórios da Embrapa Clima Temperado. Para controle de insetos testaram-se as tinturas oriundas de folhas de Melia azedarach, Cedrela fissilis e Trichilia claussenii. A T. claussenii obteve melhor desempenho nos dois testes realizados, sendo as concentrações de alcoolatura de 10 e 20% as que causaram redução no consumo foliar por D. speciosa, tanto nos testes sem chance de escolha como nos testes de livre escolha. O óleo de nim apresentou maior efeito antialimentar nos testes com chance de escolha, indicando melhor eficiência quando existe opção de alimento não tratado. O Composto A no ensaio laboratorial teve efeito negativo sobre a alimentação de D. speciosa nos testes com e sem chance de escolha, com ação observada no teste de persistência até os 29 dias após a aplicação. No teste de campo foi o único insumo que apresentou controle significativo, na categoria 1 (sem danos de insetos). A partir do método utilizado para avaliação do impacto ambiental da aplicação dos insumos não foi possível observar diferença entre os tratamentos, principalmente pela grande influência das modificações ambientais do próprio sistema de produção. Na avaliação de insumos para controle de P. infestans em batata a campo, somente a calda bordalesa obteve valores de severidade baixos e semelhantes a testemunha positiva no teste de campo.