Biomarcadores tem se tornado uma parte essencial da pesquisa clínica. Na psiquiatria, diversos biomarcadores séricos têm sido estudados. No Transtorno Bipolar, considerável atenção tem sido dada a marcadores inflamatórios e entre esses destacam-se as citocinas. No entanto, o entendimento dos diferentes padrões de envolvimento desses marcadores ainda não foi suficientemente estudado. Também, até o momento, poucos foram os estudos que avaliaram seu papel como marcadores de atividade ou preditores de curso de doença. A presente tese é composta por dois estudos: 1) uma comparação de citocinas inflamatórias entre pacientes eutímicos com um diagnóstico de Transtorno Bipolar em relação a pacientes com Esquizofrenia e controles saudáveis. 2) um estudo prospectivo de pacientes com Transtorno Bipolar avaliando medidas de citocinas no baseline em relação a variáveis clínicas de um ano de seguimento. Como um todo, os resultados apresentados corroboram o involvimento de citocinas inflamatórias no Transtorno Bipolar e na Esquizofrenia, no entanto evidenciando um padrão diferenciado de envolvimento nos dois transtornos. Também a IL-6 mostrou-se alterada em pacientes eutímicos que viriam a apresentar um ou mais episódios depressivos durante um ano de seguimento e seu aumento correlacionou-se com o numero de dias com sintomas depressivos. Esses achados fornecem apoio adicional para a investigação de citocinas como possíveis biomarcadores para a atividade da doença ou preditores de recorrência. / Biomarkers are becoming an essential part of clinical research. In Psychiatry, several serum biomarkers are currently being studied. In Bipolar Disorder, increasing attetion has been given to inflammatory markers and among these cytokines has received special attention. However, the understanding of the different patterns of inflammation has not yet been fully clarified. Few studies have focused on its properties as markers of disease activity and predictors of outcome. This thesis contains two different studies: 1) a comparison of cytokine levels in patients with Bipolar Disorder, Schizophrenia and healthy controls. 2) a prospective study of euthymic patients with Bipolar Disorder assessing baseline cytokines and theis association with clinical variables during follow-up. These studies reinforce the idea of an inflammatory response in both Bipolar Disorder and Schizophrenia; however, the pattern of reponse seems to be different between the two disorders. Also, increased levels of IL-6 were observed in euthymic patients that would later present a depressive episode during follow-up and this increase was correlated with the numbers of days depressed. These findings five further support for the investigation of cytokines as possible biomarkers of disease activity and predictors of recurrence.

Submitted by Naiara Fernanda Ignácio (naiaraignacio@yahoo.com.br) on 2018-07-23T04:19:42Z No. of bitstreams: 1 Tese de doutorado_ Naiara Fernanda Ignácio.pdf: 3478646 bytes, checksum: ad5f958489e90a28e31d1a3342b3eb4d (MD5) / Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2018-07-23T10:41:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ignacio_nf_dr_jabo.pdf: 3478646 bytes, checksum: ad5f958489e90a28e31d1a3342b3eb4d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-23T10:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ignacio_nf_dr_jabo.pdf: 3478646 bytes, checksum: ad5f958489e90a28e31d1a3342b3eb4d (MD5) Previous issue date: 2018-05-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se avaliar a capacidade de recuperação de alevinos de peixes das espécies de cativeiro pacu (Piaractus mesopotamicus) e tilápia (Oreochromis niloticus) após a intoxicação aguda com fipronil. A capacidade de recuperação foi avaliada nos peixes sobreviventes as concentrações de fipronil (Regent® 800WG) (0,56; 0,59; 0,61 e 0,64 mg.L-1 para o pacu; e 0,9; 0,11; 0,15 e 0,20 mg.L-1 para a tilápia) que causaram aproximadamente 10, 30, 50 e 70% de mortalidade após 24 horas de exposição aguda. Os peixes sobreviventes foram transferidos para água limpa. As avaliações foram realizadas no dia da transferência para a água limpa, e aos 15 e 30 dias de recuperação. Foram avaliadas as lesões em tecidos de brânquias, fígado e rins, e a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE) no cérebro e no músculo. Os sinais observados foram natação errática, espasmos musculares e mudança de coloração. Após 24 horas de exposição aguda, o fipronil, nas concentrações avaliadas, causou lesões estruturais nas brânquias, fígado e rins dos peixes, entre 70 e 73% de inibição da atividade da AChE no cérebro e entre 20 e 35% da AChE no músculo. Os peixes se recuperaram completamente dos sinais de intoxicação no terceiro dia. Aos 30 dias de recuperação, os peixes das duas espécies se recuperaram das lesões nos tecidos das brânquias, fígado e rins causadas pelo fipronil em concentração nas águas de até 0,61 mg.L-1 para o pacu, que causa até 54,2 % mortalidades; e de até 0,15 mg.L-1 para a tilápia, que causa até 46,7% de mortalidade. Em concentrações superiores a estas, o fipronil causou maior mortalidade e os peixes não se recuperaram totalmente. Os 30 dias em água limpa não são suficientes para a recuperação total da atividade da AChE, o que não altera o peso corpóreo. Portanto, os limites de aceitabilidade de inibição da atividade da AChE após 24 horas de exposição aguda ao fipronil é de 70% no cérebro dos peixes de ambas as espécies, 30% no músculo de pacu e 22% no da tilápia. As concentrações de fipronil não alteram as variáveis de qualidade de água. / The aim of this study was to evaluate the recovery capacity of juvenile fishes of the species pacu (Piaractus mesopotamicus) and tilapia (Oreochromis niloticus) after acute intoxication with fipronil. Recovery capacity was evaluated in fishes survivors from fipronil concentrations (Regent® 800WG) (0,56; 0,59; 0,61 e 0,64 mg.L-1 para for pacu; e 0,9; 0,11; 0,15 e 0,20 mg.L-1 for tilápia) in water that caused about 10, 30, 50 and 70% of mortality after 24 hours of acute exposure. The survivors were transferred to clean water. The evaluations were done on the day of transfer to clean water, and at 15 and 30 days of recovering. Damages were evaluated in gills, liver and kidneys tissues and the enzyme acetylcholinesterase (AChE) activity in the brain and muscle. The signs observed were erratic swimming, muscle spasms and color change. After 24 hours of acute exposure, fipronil at the tested concentrations causes histological damages in the gills, liver and kidneys of the fishes, 70 to 73% inhibition of AChE activity in the brain and between 20 and 35% in AChE in the muscle. The fishes recover completely from the intoxication signs on the third day. At 30 days of recovering, fishes from both species recovered from the damage in gills, liver and kidneys caused by fipronil at concentrations up to 0.61 mg.L-1 for pacu, which cause up to 54.2% of mortality; and up to 0.15 mg.L-1 for tilapia, which cause up to 46.7% of mortality. In higher concentrations than these, fipronil causes higher mortalities and the fishes do not recover fully. The 30 days in clean water are not enough for the total recovery of AChE activity, which does not change the body weight. Therefore, the acceptability of inhibition limit of AChE activity after 24 hours of acute fipronil exposure is 70% in fish brain of both species, 30% in pacu muscle and 22% in tilapia muscle. Fipronil concentrations do not alter the water quality variables.

En 2016, environ 53 070 patients ont reçu un diagnostic d'adénocarcinome canalaire pancréatique (PDA) aux États-Unis et la plupart d'entre eux mourront de leur maladie dans les 5 ans. Le registre belge du cancer rapporte une incidence estimée à 1200 nouveaux cas par an. La survie globale à 5 ans pour toutes stades confondus a marginalement augmenté au cours des 50 dernières années, passant de 2 à 6%, malgré l'imagerie, les soins périopératoires et l'amélioration des techniques chirurgicales.La chirurgie reste la seule chance de guérison, cependant, seulement 10-15% des patients nouvellement diagnostiqués sont jugés éligibles pour une chirurgie. Même s'il existe peu d'autres modalités de traitement efficaces qui puissent considérablement prolonger la survie globale, la plupart des patients finiront par mourir de métastases au foie, au poumon et / ou au péritoine, les sites de propagation les plus courants. Les patients, les cliniciens et les chercheurs restent frustrés par le manqué d’outils thérapeutiques et des nouvelles stratégies sont nécessaires pour comprendre et mieux prendre en charge cette maladie.Le terme «cancer» engendre un sentiment de peur et colère, en particulier quand on est confronté au diagnostic dévastateur de cancer du pancréas. En plus, une réaction commune est de personnifier le cancer comme une entité maléfique qui doit être combattue pour sauver la vie du patient. Les armes pour cette bataille comprennent le scalpel d'un chirurgien, la chimiothérapie, la radiothérapie, les thérapies ciblées, les immunothérapies, les approches holistiques et la foi religieuse. Mais nous avons trop souvent oublié ou sous-estimé la contribution de la recherche translationnelle pour la médecine de précision, pour mieux adapter les thérapies et éviter les toxicités inutiles.Dans un sens biologique, qu'est-ce qu'un cancer du pancréas ou un cancer? Le cancer est une maladie génétique, soumise à un phénomène évolutif avec ses propres règles, contraintes et caractéristiques prévisibles qui mènent finalement à un phénotype unique.La stratégie "one size fits all" dans la PDA a souvent échoué dans les essais de nouveaux médicaments dans une population non sélectionnée.Cette thèse est une contribution modeste et authentique à une approche plus personnalisée du PDA, de l'acquisition tissulaire, à l'analyse de biomarqueurs tissulaires, à une analyse moléculaire plus profonde afin de mieux comprendre cette maladie mortelle et de proposer l'intégration de biomarqueurs dans le developpement d’etudes cliniques guides par les analyses moléculaires. / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Cette thèse porte sur la sélection d’anticorps humains et la découverte de nouveaux biomarqueurs en vue d’un diagnostic et d’une thérapie de l’athérosclérose. Le premier volet concerne, dans un premier temps, la sélection d’anticorps humains dans un contexte physiopathologique chez un modèle animal de l’athérosclérose. La sélection in vivo a permis de sélectionner des anticorps sur large pannel de cibles dans leur conformation native et sous l’influence de leur microenvironnement. Suite à cela, afin d’accéder à la spécificité des clones, une méthode innovante de criblage a été développée, la cytométrie de flux à moyen débit. Cette technique, contrairement à l’ELISA couramment utilisé pour la caractérisation d’anticorps ou de peptides, ne nécessite pas de connaitre l’antigène et permet également de travailler à des concentrations de protéines moindres. Ainsi, deux cents anticorps ont pu être sélectionnés. Les tests d’affinité et de caractérisation de ces anticorps ont, par la suite, mené à l’identification d’une nouvelle cible de la plaque d’athérome, la galectine 3, protéine impliquée dans l’activation des macrophages ainsi que la rétention des LDL oxydées par ces dernières. Le deuxième volet concerne une seconde approche de criblage in silico des anticorps issus de la sélection in vivo, notamment grâce à l’utilisation de techniques de séquençage haut débit (Pacific Biosciences). Les résultats de cette étude pilote ont permis demettre en exergue plusieurs points : (1) la possibilité d’obtenir des séquences >1000bpcorrespondant à des scFv après analyse par IMGT/HighV-QUEST (database des immunoglobulines internationales) et (2) la possibilité d’identifier des séquences de clones préférentiellement enrichies après une sélection in vivo. En conclusion et perspectives, ces deux méthodes de criblage complémentaires nous donnent accès à de nouvelles voies d’obtention d’anticorps humains pour (1) le couplage à des nanoparticules pour le diagnostic par IRM de la plaque d’athérome ainsi que (2) apporter une thérapie in situ au site inflammatoire. / This thesis is based on the selection of human antibodies and identification of newbiomarkers to develop a diagnosis and a therapy of atherosclerosis. The part one treats, first,the selection of human antibodies in a pathophysiological context in an animal model ofatherosclerosis. To access not only to a large panel of targets but also proteins in their nativeconformation and influenced by their microenvironment, an in vivo selection was performed.In a second time, an innovative high throughput flow cytometry screening was implemented.Contrary to the use of ELISA screening which needs to have an identified target, the flowcytometry doesn’t have this limitation and uses a lower quantity of proteins than ELISAassays. By this screening, two thousand clones were selected. Characterization and specificitytests of these antibodies have yielded to the discovery of galectin 3 has a new biomarker. Thisprotein is implicated in macrophage activation, binding of oxLDL by macrophages to formfoam cells. The second part is about a second screening approach of the antibodies issuingfrom the in vivo selection by using Next Generation Sequencing methods (PacificBiosciences). The results of this primary study allowed for highlighingt two points: (1) thefeasibility to obtain long reads >1000bp identified as scFv after analysis by IMGT/HighVQUEST(international database of immunglobulins) and (2) the feasibility to identify hits ofclones preferentially enriched during the in vivo selection. In conclusion and perspectives,these two complementary methods give the opportunity to obtain human antibodies for (1) thecoupling to nanoparticles for diagnosis by MRI of atheroma plaque and (2) serve as ligandsfor in situ delivery of drugs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-26Bitstream added on 2014-06-13T20:00:29Z : No. of bitstreams: 1 felicio_ml_dr_botfm.pdf: 4502426 bytes, checksum: 483d4239c0cd07e3263224965a0b9835 (MD5) / A lesão renal aguda (LRA) apresenta uma alta incidência em pacientes submetidos à cirurgia cardíaca. O comprometimento da função renal está associado ao aumento de complicações pós-operatórias e diminuição da sobrevida. O sucesso de estratégias de tratamento da LRA depende do diagnóstico e intervenção precoce, assim como o conhecimento dos fatores de risco relacionados. O desenvolvimento da LRA é um processo complexo e multifatorial. A lesão renal oculta, consequente à aterosclerose, ao diabetes e à hipertensão arterial sistêmica, pode ser agravada por diversos fatores relacionados ao pré, intra e pós-operatórios. Imprescindível para realização de grande parte das cirurgias cardíacas, a circulação extracorpórea ainda representa um importante fator de agressão renal. A função renal geralmente é avaliada através da dosagem dos níveis séricos de creatinina. Apesar de ser um método amplamente utilizado, a análise da creatinina apresenta suas limitações, o que motiva a procura de novos métodos de diagnósticos e acompanhamento da LRA. Com isso, novos biomarcadores renais têm sido estudados, como a cistatina C, NGAL (neutrophil gelatinase associated lipocalin), interleucina 18 e KIM-1 (kidney injury molecule-1). O objetivo desta revisão é avaliar a importância da LRA como complicação da cirurgia cárdica, assim como discutir seus fatores de riscos e métodos diagnósticos / Acute kidney injury (AKI) has a high incidence in cardiac surgery patients. Renal function compromise is associated to an increase in postoperative complications and reduced survival. Success strategies for treating AKI depend on early diagnosis and intervention, as well as knowledge of the associated risk factors. AKI following cardiac surgery is a complex multifactor process. Hidden renal lesion, due to atherosclerosis, diabetes, and systemic arterial hypertension, can be aggravated by different pre, intra, and postoperative factors. Despite being indispensible in many interventions, cardiopulmonary bypass is still an important factor in renal injury. Renal function is generally evaluated through serum creatinine levels. Despite being widely used, creatinine analysis has its limitations which add incentive to looking for new methods of diagnosis and AKI follow-up. This has led to the study of new renal biomarkers such as cystatin C, NGAL (neutrophil gelatinase associated lipocalin), interleukin 18, and KIM-1 (kidney injury molecule-1). The objective of this review is to evaluate the importance of AKI as a cardiac surgery complication, and to discuss its risk factors and methods of diagnosis

A esquizofrenia (SZ) é uma doença mental crônica e grave, que compromete o funcionamento psicossocial do indivíduo nos mais variados graus. Atinge 1% da população mundial, considerando todo seu espectro de sintomas (DSM-IV). O pobre funcionamento cognitivo é um dos principais fatores que explicam as elevadas taxas de prejuízos e encargos associados à esquizofrenia. A etiologia da SZ é desconhecida, tendo muitas hipóteses etiológicas como fatores genéticos, epidemias virais durante a gestação, época de nascimento, traumatismos de parto, infecções perinatais, condições neurológicas ou neuropsiquiátricas que geram sintomas tipo esquizofrênicos ou desenvolvimento anormal (avaliados por testes psicológicos, estudos de neuroimagem e neuropatológicos que sugerem alterações no desenvolvimento cerebral). A fisiopatologia da SZ pode ser resultante de uma desregulação na plasticidade sináptica por alterações de neurotofinas, radicais livres e processos inflamatórios. Existe uma larga evidência que os radicais livres podem ter um papel importante na fisiopatologia da SZ, podendo induzir danos na membrana celular, em proteínas e DNA. Problemas com estresse oxidativo, como o aumento da peroxidação lipídica foram relatados previamente em pacientes com SZ em primeiro episódio, virgens de tratamento e naqueles cronicamente medicados. As citocinas inflamatórias têm sido estudadas como importantes participantes na etiologia e desenvolvimento das doenças psiquiatricas. Seu papel ainda não é bem estabelecido, porém diversas alterações têm sido vistas nas doenças psiquiátricas. Dentre as citocinas, destacam-se as interleucinas (IL) e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), que podem ter ação inflamatória e anti-inflamatória. Dentre as próinflamatórias, podemos destacar a IL-6 e o TNF-α. Alteração de IL na SZ tem sido relatada nesses últimos anos, relacionada à etiologia e à atividade da doença. Pacientes em episódio agudo da doença apresentaram aumento dos níveis séricos de IL pró-inflamatórias sugerindo atividade inflamatória sistêmica. Identificar, além dos sintomas clínicos, possíveis alterações bioquímicas e de neuroimagem em pacientes com SZ pode ajudar em futuras intervenções tanto para identificar, como para prevenir ou atenuar o curso da SZ. Estudos que permitam avançar no entendimento da psicopatologia deste grupo de pacientes são de grande importância, na medida em que proporcionarão futuras abordagens terapêuticas. Está bem estabelecido que a matéria cinzenta cortical e o volume de córtex préfrontal estão diminuídos em pacientes com SZ. Entretanto, os fatores que levam à perda de tecido não estão claras. Uma hipótese para esse fato é que o estado próinflamatório aumentado em SZ está relacionado com a diminuição volumétrica da massa cinzenta. O objetivo deste estudo piloto foi correlacionar os níveis séricos de IL-6 com o volume cortical total de pacientes com SZ e controles. Foram selecionados 36 pacientes com SZ (28 do sexo masculino, com idade média de 37,17 ± 12,05; anos de doença 15,56 ± 11,75), 35 controles pareados idade (21 do sexo masculino, idade média= 36,97 ± 13,04). As imagens foram adquiridas por um equipamento de ressonância magnética Philips Achieva 1.5T no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Brasil. Todas as imagens foram processadas usando o pipeline automatizado de FreeSurfer v5.1. Concluímos que a IL-6 está negativamente correlacionada com o volume cortical total (p= 0,027; rho= -0,370) nos pacientes com esquizofrenia, tal correlação não foi vista nos controles (p= 0,235, rho= -0,206). Nosso resultado sugere que a ativação inflamatória crônica em pacientes com SZ pode estar relacionada com a diminuição volumétrica total do córtex. / Schizophrenia (SZ) is a chronic and severe mental illness, which affects the psychosocial functioning of the individual in many degrees. It reaches 1% of the population, considering all its spectrum of symptoms (DSM-IV). Poor cognitive functioning is one of the main factors responsible for the high rates of disability and costs associated with schizophrenia. The etiology of SZ is unknown, and many etiological assumptions are taken, as genetic factors, viral epidemics during pregnancy, time of birth, birth trauma, perinatal infections, neuropsychiatric or neurological conditions that produce symptoms like schizophrenia or unnatural development (assessed by psychological tests, neuroimaging and neuropathological studies that suggest changes in brain development). The pathophysiology of SZ may be due to a deregulation in synaptic plasticity caused by changes in neurotrophins, free radicals and inflammatory processes. There is a wide evidence that free radicals may have a main role in the pathophysiology of SZ, and can induce damage into the membrane cell, in proteins and DNA. Problems with oxidative stress, such as increased lipid peroxidation have been previously reported in treatment virgem patients with SZ in first episodes and in those chronically treated. And inflammatory cytokines have been studied as important parts in the etiology of psychiatric diseases’ development. Its role is not well established, however a number of changes have been noticed in psychiatric illnesses. Among the cytokines, the Interleukins (IL) and the tumor necrosis factor alpha (TNF-α) stand out, these two may have inflammatory and anti-inflammatory action. Among the pro-inflammatory, we can highlight IL-6 and TNF-α. IL change in the SZ has been reported in these last few years, related to the etiology and disease activity. Patients with acute episode of the disease showed increased serum levels of IL proinflammatory suggesting systemic inflammatory activity. Identify not only the clinical symptoms, possible biochemical and neuroimaging abnormalities in patients with SZ can help in future interventions both to identify and prevent or slow down the course of SZ. Studies to enable progress in the understanding of psychopathology this group of patients are of great importance to the extent that provide future therapeutic approaches. It is well established that cortical gray matter and the prefrontal cortex volume are reduced in patients with SZ. However, the factors that lead to tissue loss are unclear. One possible explanation is that the increased proinflammatory state in SZ is related to the volumetric reduction of the gray matter. The objective of this pilot study was to correlate serum levels of IL-6 in the hole cortex volume of schizophrenic patients and controls. We selected 36 patients with SZ (28 male, average age 37.17±12.05; years of illness 15.56±11.75), 35 matched controls (21 male, average age= 36.97±13.04). Images were obtained by an MRI equipment, brand Philips Achieva 1.5T at Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Brazil. All images were processed using automated pipeline FreeSurfer v5.1. We concluded thatIL-6 is negatively correlated with the total cortical volume in patients (p= 0.027, rho= -0.370), this correlation was not seen in controls (p= 0.235; rho= -0.206). Our results suggest that chronic inflammatory activation in patients with SZ can be related to the total volumetric reduction of the cortex.

abstract: Cancer claims hundreds of thousands of lives every year in US alone. Finding ways for early detection of cancer onset is crucial for better management and treatment of cancer. Thus, biomarkers especially protein biomarkers, being the functional units which reflect dynamic physiological changes, need to be discovered. Though important, there are only a few approved protein cancer biomarkers till date. To accelerate this process, fast, comprehensive and affordable assays are required which can be applied to large population studies. For this, these assays should be able to comprehensively characterize and explore the molecular diversity of nominally "single" proteins across populations. This information is usually unavailable with commonly used immunoassays such as ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) which either ignore protein microheterogeneity, or are confounded by it. To this end, mass spectrometric immuno assays (MSIA) for three different human plasma proteins have been developed. These proteins viz. IGF-1, hemopexin and tetranectin have been found in reported literature to show correlations with many diseases along with several carcinomas. Developed assays were used to extract entire proteins from plasma samples and subsequently analyzed on mass spectrometric platforms. Matrix assisted laser desorption ionization (MALDI) and electrospray ionization (ESI) mass spectrometric techniques where used due to their availability and suitability for the analysis. This resulted in visibility of different structural forms of these proteins showing their structural micro-heterogeneity which is invisible to commonly used immunoassays. These assays are fast, comprehensive and can be applied in large sample studies to analyze proteins for biomarker discovery. / Dissertation/Thesis / M.S. Biochemistry 2012

INTRODUÇÃO: Os mecanismos moleculares que levam ao desenvolvimento do hiperparatireoidismo primário (pHPT) ainda são desconhecidos. No entanto, alguns genes parecem ter seu papel definido na oncogênese das paratireóides, como os genes PRAD1 e MEN-1 que apresentam expressão aumentada em adenomas de pacientes com pHPT em relação ao tecido normal. Outro achado importante é a expressão aumentada do gene HRPT2 em carcinomas de paratireóide familiares ou não. A distinção entre hiperplasia, adenoma e carcinoma é difícil pelas limitações técnicas dos exames histo-patológicos atuais. Assim, este estudo tem como objetivo central identificar genes que possam servir como marcadores diferenciais entre hiperplasia, adenoma e carcinoma em pacientes com pHPT, com o intuito utilizá-los de forma auxiliar no diagnóstico diferencial destas condições. MÉTODOS: Foram empregadas três metodologias: 1) utilização de clones obtidos no Projeto Genoma Humano do Câncer (HCGP) que foram fixados em membrana e hibridizados com sonda ora de adenomas (n = 2) ora de carcinoma (n = 1). 2) utilização de membranas comerciais (Atlas© cDNA Expression Array Human Oncogene/Tumor Suppressor, Human Cancer 1.2. BD Biosciences Clontech. Palo Alto, USA) contendo respectivamente 190 e 1176 genes conhecidos, utilizadas como substrato para hibridização com sondas de adenoma e carcinoma. 3) desenvolvimento da técnica de RDA (Representational Difference Analysis) para obtenção de fragmentos de cDNA diferencialmente expressos que foram clonados e seqüenciados para posterior análise. Os genes diferencialmente expressos, entre adenoma e carcinoma obtidos nas três metodologias tiveram sua expressão confirmada por RT-PCR em tecidos de paratireóide de pacientes portadores de pHPT, entre eles: hiperplasias, adenomas e carcinomas. RESULTADOS: foram escolhidos para confirmação por PCR os genes: IRF-1, RAF, TIMP-3, NOTCH-2 e bFGF, cuja expressão nas membranas mostrou-se aumentada nos adenomas e os genes IGF-1-R, PTK7 e RET, cuja expressão mostrou-se elevada nos carcinomas. Dois genes tiveram sua expressão diferencial confirmada. O gene IRF-1, apresenta expressão diminuída nas três condições estudadas (hiperplasia, adenoma e carcinoma) quando comparada à expressão do tecido normal. O gene PTK7, confirmou sua expressão aumentada nas amostras de carcinomas quando comparadas às hiperplasias e aos adenomas. DISCUSSÃO: Os dois genes que apresentaram sua expressão diferencial confirmada, IRF-1 e PTK7, não foram , até o momento, descritos como coadjuvantes no aparecimento e progressão tumoral nas paratireóides. Nossos achados associaram o gene supressor tumoral IRF-1 ao aparecimento de alterações morfológicas e funcionais nas paratireóides, uma vez que sua expressão nos tecidos acometidos por hiperplasia, adenoma ou carcinoma é sensivelmente menor que aquela encontrada nos tecidos normais, sugerindo que este gene tenha importante papel nos eventos iniciais de tumorigênese desta glândula. Por outro lado, expressão aumentada de PTK7 já foi descrita em tumores malignos de diversos tecidos. Embora seus mecanismos de ativação e ação permaneçam desconhecidos, nossos achados corroboram os da literatura e sugerem que este gene participe dos mecanismos moleculares de transformação celular nas paratireóides / INTRODUCTION: The molecular mechanisms to the development of primary hyperparathyroidism (pHPT) are still unknown. Otherwise, several genes as PRAD1 and MEN-1 seem to play a role in parathyroid oncogenesis and are highly expressed in adenomas of pHPT patients when compared to normal glands. Another important data is the increased expression of HRPT2 in familiar and non-familiar parathyroid carcinomas. The distinction among hyperplasia, adenoma and carcinoma is a difficult task because there are limits in histopathologic parathyroid analysis in our days. This study has as main goal to identify genes that might help to distinguish hyperplasias from adenomas and both from carcinomas in pHPT patients. METHODS: Three techniques were employed: 1) clones from Human Cancer Genome Project (HCGP) fixed in membranes and hybridized with adenomas or carcinoma probes; 2) commercially available membranes (Atlas© cDNA Expression Array Human Oncogene/Tumor Suppressor, Human Cancer 1.2. BD Biosciences Clontech. Palo Alto, USA) which contain 190 and 1176 identified genes that were employed as substrate to hybridization with adenomas (n = 2) and carcinoma (n = 1) probes; 3) RDA technique (Representational Difference Analysis) in order to obtain differentially expressed cDNA fragments what in other steps were cloned and sequenced for further analysis. The genes, obtained from the three methods, that were differentially expressed between adenomas and carcinomas had their expression evaluated by RT-PCR in parathyroid tissues from patients bearing pHPT caused by hyperplasias, adenomas or carcinomas. RESULTS: genes chosen for PCR analysis: IRF-1, RAF, TIMP-3, NOTCH-2 and bFGF, whose expressions in the membrane were increased in adenomas and the genes IGF-1-R, PTK7 and RET, whose expression in the membrane were increased in carcinomas. Two genes had their differential expression confirmed. The IRF-1 had a decreased expression in the three situations of pHPT (hyperplasia, adenoma and carcinoma) when compared to its expression in the normal gland. The gene PTK7 confirmed its increased expression in samples obtained from carcinomas when compared to hyperplasias or to adenomas. DISCUSSION: The two genes whose differential expressions were confirmed, IRF-1 and PTK7, have not been described till this moment as coadjutants in the beginning or progression of parathyroid tumors. Our results associate the tumor suppressor gene IRF-1 to the origin of morphological and functional disturbs in parathyroid, because its expression in hyperplasia, adenoma or carcinoma of this gland were clearly lower in these conditions when compared to normal tissues, thus suggesting an important role of this gene in early steps of parathyroid oncogenesis. On the other hand, increased expression of PTK7 has already been described in malignant tumors of several tissues. Although their mechanisms of activation and action remain unknown, our results reinforce the literature data and suggest that this gene shares the molecular mechanisms of cell transformation in parathyroids

Compostos butílicos de estanho (BTs) estão na lista dos contaminantes impactantes relacionados ao ambiente marinho. Sua ampla distribuição associada à elevada toxicidade faz com que o monitoramento desses compostos no ambiente costeiro seja de fundamental importância. A ocorrência de BTs foi verificada em sedimentos superficiais, material particulado em suspensão e nos tecidos (fígado e brânquias) de três espécies de bagres estuarinos: Cathorops spixii, Aspistor luniscutis e Genidens genidens; amostrados em 8 estuários da região sul e sudeste brasileira. As análises foram realizadas através de GC-PFPD, seguindo padrões de controle de qualidade analítico e onde foi constatada a ocorrência de efeito matriz sobre o sistema analítico a partir da quantificação das amostras de tecido. Dentre os estuários amostrados, verificou-se um maior impacto dos BTs sobre os sistemas estuarinos de Paranaguá e Itajaí, em decorrência da presença destes compostos em todos os compartimentos ambientais analisados. As três espécies investigadas puderam ser consideradas como biomonitoras da presença de BTs no ambiente, uma vez que são passíveis de assimilação destes compostos, mesmo em organismos amostrados em regiões distantes de potencias fontes de entrada. Os efeitos sobre a fisiologia de C. spixii amostrado em Paranaguá também foi investigada a partir do uso de biomarcadores no fígado desses organismos, constatando um impacto associado à presença destes contaminantes no sistema. / Butyltin compounds (BTs) are in the list of related contaminants striking marine environment. Their widespread distribution associated with high toxicity causes the monitoring of fundamental importance. The occurrence of BTs were checked through superficial sediments, suspended particulate matter and tissues (liver and gill) analysis on three estuarine catfishes: Cathorops spixii, Aspistor luniscutis e Genidens genidens; sampled in eight estuaries from Brazilian south and southeast coast. Analysis were carried by GC-PFPD, following quality control procedures, where was verified the presence of matrix effect over the system from tissues quantification. Among estuaries, the major impact was found in Paranaguá-PR and Itajaí-SC, due the presence of these compounds in all investigated compartments. These three catfish species have shown good biomonitors of BTs presence once were liable of uptake, even in groups sampled far from potential BTs sources. The effects over C. spixii physiology were also checked in Paranaguá from the use of biomarkers on liver of these organisms, noting the impact related with the presence of these compounds on the system.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / IntroduÃÃo: As lesÃes renais na hansenÃase tem grande importÃncia, pois podem evoluir para uma doenÃa renal de etiologia glomerular (glomerulonefrites, amiloidose) ou tubulointersticial. Objetivo: Investigar disfunÃÃes renais em pacientes com hansenÃase utilizando marcadores tradicionais de funÃÃo renal e a ProteÃna QuimiotÃtica de MonÃcitos-1 (MCP-1) urinÃria. PopulaÃÃo e Metodologia: Foi realizado estudo transversal e prospectivo de 44 pacientes com hansenÃase em todas as formas clÃnicas, antes do inÃcio do tratamento, sem estado reacional e sem outras nefropatias. Os pacientes foram acompanhados em centros pÃblicos de saÃde em Fortaleza, CearÃ, Brasil entre agosto de 2012 e agosto de 2013. O estudo foi aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa do Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio da Universidade Federal do Cearà (No: 267.426). Os pacientes foram comparados com um grupo controle composto por 15 indivÃduos sadios. Foi calculada a fraÃÃo de excreÃÃo de eletrÃlitos, estimada a taxa de filtraÃÃo glomerular (TFG), proteinÃria e microalbuminÃria. O estresse oxidativo urinÃrio foi quantificado pelo MalonaldeÃdo (MDA) urinÃrio e o MCP-1 urinÃrio foi quantificado atravÃs da tÃcnica do ELISA sanduÃche. Os valores foram normalizados pela creatinina urinÃria. Resultados: NÃo houve diferenÃa significativa entre a idade, sexo, peso corporal e pressÃo arterial entre os grupos. A idade mÃdia dos pacientes foi de 36Â10 anos, sendo 61 % do gÃnero masculino. O tempo de doenÃa variou de um mÃs a 8 anos, com mÃdia de 17 meses. A baciloscopia foi positiva em 26 pacientes (59,1%) e negativa em 18 (40,9%). Quanto à classificaÃÃo: 14 pacientes (31,8%) eram do pÃlo tuberculÃide (TT/DT), 19 (43,2%) eram dimorfos (DD) e 11 (25%) eram do pÃlo virchowiano (DV/VV). As provas de funÃÃo renal nÃo diferiram (p>0,05), com exceÃÃo da proteinÃria. Os pacientes com hansenÃase tiveram nÃveis elevados de proteinÃria (97,6Â69,2 vs 6,5Â4,3 mg/g-Cr, p<0,001) do MDA urinÃrio (1,77Â1,31 vs 1,27Â0,66 mmol/g-Cr, p=0,0372) e do MCP-1 urinÃrio (101Â79,8 vs 34,5Â14,9 mg/g-Cr, p=0,006) em relaÃÃo ao grupo controle respectivamente. O MCP-1 urinÃrio esteve maior nos pacientes multibacilares em relaÃÃo aos paucibacilares (122,1Â91,9 vs 72Â46,1 mg/g-Cr, p=0,023), respectivamente e se correlacionou positivamente com a baciloscopia (r=0,104; p=0,035), com a albuminÃria (r=0,171; p=0,006) e com o MDA urinÃrio (r=0,205; p=0,002). ConclusÃo: Em pacientes com hansenÃase sem doenÃa renal clÃnica, o MCP-1 urinÃrio esteve aumentado sobretudo no pÃlo virchowiano, e se associou com marcadores de progressÃo de lesÃo renal, apresentando grande utilidade como preditor de disfunÃÃo renal. / Introduction: Leprosy patients can present with kidney disease from glomerular (glomerulonephritis, amyloidosis) or tubule-intertitial etiology. Aims: To evaluate renal abnormalities in leprosy patients through traditional markers of renal disease and Monocyte Chemotactic Protein-1 (MCP-1). Methods: This is a cross-sectional study of 44 patients with clinical and laboratory diagnosis of leprosy and with no previous anti-mycobacterium treatment and reaction episode. Patients were recruited in public health centres in Fortaleza, Ceara, Brazil between August 2012 and August 2013. The protocol of this study was approved by the Ethical Comitee of the Walter Cantidio University Hospital, Federal University of Ceara, Brazil (N 267.426). Also, a group of 15 healthy subjects were included as a control group. Glomerular filtration rate (GFR), protein excretion, microalbuminuria and Urinary oxidative stress (malondialdehyde-MDA) were estimated. Urinary MCP-1 was determined by sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. All urine measurements were normalized by urinary creatinine concentration. Results: Age and gender were similar between leprosy patients and control groups. Patientsâ average age was 36Â10 years, and 61% were male. Time from symptoms to leprosy diagnosis varied from one month to 8 years, with a median time of 17 months. Twenty-six patients had skin smear-positive test (59,1%) and 18 were negative (40,1%). Clinically, there were 14 (31,8%) tuberculoid polar form (TT/BT), 19 (43,2%) boderline (BB) and 11 (25%) lepromatous polar form (LL/BL). Regarding renal function, no patient had chronic kidney disease. Leprosy patients had a higher urine protein excretion (97,6Â69,2 vs 6,5Â4,3 mg/g-Cr, p<0,001), urinary MDA (1,77Â1,31 vs 1,27Â0,66 mmol/g-Cr, p=0,0372) and urinary MCP-1 (101Â79,8 vs 34,5Â14,9 mg/g-Cr, p=0,006) than healthy controls. Urinary MCP-1 was higher in multibacillary than in paucibacillary patients (122,1Â91,9 vs 72Â46,1 mg/g-Cr, p=0,023). There was a positive correlation between urinary MCP-1 and bacteriological index in skin smear (r=0,104; p=0,035), urinary MCP-1 and albumin excretion rate (r=0,171; p=0,006) and urinary MCP1 and urinary MDA (r=0,205; p=0,002). Conclusion: Leprosy patients with no clinical kidney disease have increased urinary MCP-1 and its levels are even higher according patients approximates to lepromatous polar form. Moreover, urinary MCP-1 was associated with urinary oxidative stress and urine albumin excretion, suggesting these patients are at increased risk of developing clinical kidney disease in the future.