Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dayane Molin.pdf: 2944692 bytes, checksum: a8d299024aefbd42062cb84bd7720a9d (MD5) Previous issue date: 2012-02-23 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / The wide variability in corn is due to the numerous landraces, important genotypes for breeding programs, because they constitute a source of genetic variability in the exploration of new genes of economic interest. The objectives were to analyze the genetic diversity between landraces from Rio Grande do Sul and Paraná through the analysis of polymorphism generated by RAPD, microsatellite (SSR) and AFLP markers; cluster these genotypes through estimates of genetic similarity and establish possible relationships between genetic similarity and the sampling sites of the landraces. PCR reactions for each marker were optimized through specific protocols being used: 30 RAPD primers, 47 SSR primers pairs and 25 combinations of primers for the EcoRI + MseI for the AFLP marker. The amplified fragments (RAPD and SSR) were visualized in agarose gel at 2 and 3 %, respectively, through horizontal electrophoresis run for approximately 4 h at 80 V. The AFLP amplification products were resolved on a polyacrylamide gel (6 %) submitted to a vertical electrophoresis run for 3 h 30 min at 80 W (1500 V). Genotyping of the varieties of corn with the RAPD marker amplified 409 fragments with a polymorphism average rate of 81.9 %. The SSR generated 134 fragments with 78.3 % of polymorphism. On the other hand, the AFLP amplified 1889 fragments with a polymorphism average rate of only 40.3 %. The polymorphic fragments were submitted to analysis of genetic similarity using the Jaccard coefficient and UPGMA clustering method individually and jointly for all markers. The coefficient mean of similarity was 57 % for RAPD, 56 % for SSR, 74 % for the AFLP and 69 % for the joint analysis. The dendrograms obtained from RAPD and SSR showed 8 different groups, while the dendrogram obtained from AFLP and the joint analysis formed six and seven groups, respectively. In general, the correlations between the similarity matrices were low, but between the AFLP and combined analysis was 96 %. Results revealed a wide genetic variability among landraces. The RAPD and SSR had the highest average rates of polymorphism and AFLP showed the highest rates of genetic similarity among landraces. In general, the markers used were effective tools for sampling the genetic diversity and cluster varieties according to the sampling sites, although they have differential capacity to reveal polymorphism as well as to cluster the landraces. / A ampla variabilidade existente em milho deve-se às inúmeras variedades crioulas, genótipos importantes para o melhoramento, pois constituem fonte de variabilidade genética na prospecção de novos genes de interesse econômico. Os objetivos deste trabalho foram analisar a diversidade genética existente entre acessos de milho crioulo oriundos do Rio Grande do Sul e do Paraná a partir da análise do polimorfismo gerado pelos marcadores RAPD, microssatélite (SSR) e AFLP; realizar o agrupamento destes genótipos através das estimativas da similaridade genética e estabelecer possíveis relações entre a similaridade genética e os locais de coleta das variedades crioulas. As reações de PCR para cada marcador foram otimizadas através de protocolos específicos, sendo utilizados: 30 primers RAPD, 47 pares de primers SSR e 25 combinações de primers EcoRI + MseI para o marcador AFLP. Os fragmentos amplificados (RAPD e SSR) foram visualizados em gel de agarose a 2 e 3 %, respectivamente, através de corrida eletroforética horizontal por aproximadamente 4 h a 80 V. Os produtos da amplificação do AFLP foram resolvidos em gel de poliacrilamida (6 %) submetidos à corrida eletroforética vertical por 3 h e 30 minutos a 80 W (1500 V). A genotipagem das variedades de milho com o marcador RAPD amplificou 409 fragmentos com índice médio de polimorfismo de 81,9 %. O SSR gerou 134 fragmentos com 78,3 % de polimorfismo. Por outro lado, o AFLP amplificou 1889 fragmentos com índice médio de polimorfismo de apenas 40,3 %. Os fragmentos polimórficos foram submetidos às análises de similaridade genética através do coeficiente de Jaccard e de agrupamento pelo método UPGMA individualmente e conjuntamente para os marcadores. O coeficiente médio de similaridade foi de 57 % para o RAPD; 56 % para o SSR; 74 % para o AFLP e 69 % para a análise conjunta. Os dendogramas obtidos a partir do RAPD e SSR mostraram 8 grupos distintos, enquanto que o dendograma obtido a partir do AFLP e da análise conjunta formaram 6 e 7 grupos, respectivamente. De maneira geral, as correlações entre as matrizes de similaridade foram baixas, porém entre o AFLP e a análise conjunta foi de 96 %. Os resultados revelaram ampla variabilidade genética entre os acessos de milho crioulo. Os marcadores RAPD e SSR apresentaram os maiores índices médios de polimorfismo e o AFLP demonstrou maiores índices de similaridade genética entre os acessos crioulos. De maneira geral, os marcadores utilizados foram ferramentas eficientes para amostrar a diversidade genética e agrupar as variedades de acordo com os locais de coleta, embora possuam capacidade diferencial de revelar polimorfismo bem como para agrupar os acessos crioulos de milho.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo Oliveira Brito.pdf: 1923139 bytes, checksum: 08b643e5706fe65ed2608e5a4ed4e1e9 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The order Thysanoptera comprises small insects known as thrips, which present different life histories and habits; they reproduce by haplodiploidy, and reached the status of prague by their feeding damage to plants. Their systematics, taxonomy and phylogenetic relationships are complicated, due to the small morphological variation among the taxa. Thus, this study aimed to analyze three species of the family Phlaeothripidae: Gynaikothrips uzeli, Liothrips sp. and Pseudophilothrips gandolfoi through conventional and molecular cytogenetics giving emphasis to the evolutionary processes that have occurred during the differentiation karyotype in the group, reinforcing the importance of cytogenetic studies as a tool for taxonomy of order, in addition to estimate genetic population parameters of G. uzeli. To that end, we analyzed the diploid number, the chromosome morphology, the distribution pattern of the heterochromatic regions, the chromosomes bearing Ag-NORs and performed mapping physical for cístrons of rDNA 18S. In addition, it was estimated the genetic variability and population structure of G. uzeli through the RAPD marker. The results obtained with the probe of 18S rDNA revealed a pair chromosomal bearer of RON in the three species, however, in G. uzeli only one of the elements of chromosomal 13 pair was marked. In addition, the results of cytogenetic analysis indicate that the genera Pseudophilothrips and Liothrips display strong similarities in their chromosomal complements. The low genetic variability, observed with the RAPD marker for G. uzeli, and result of the system of sexual determination haplodiploidy and ecological features. The cytogenetic analysis revealed differences that are difficult to observe the morphological level, demonstrating the importance of this methodology for systematic and taxonomy and clarification of complex evolutionary patterns presented in the order. / A ordem Thysanoptera compreende pequenos insetos conhecidos como tripes, os quais apresentam diversas histórias de vida e hábitos, se reproduzem por haplodiploidia, e alcançaram o status de praga por sua alimentação danificar as plantas. Sua sistemática, taxonomia e relações filogenéticas são complicadas, devido à pequena variação morfológica entre os taxa. Assim, este trabalho teve como objetivo analisar três espécies da família Phlaeothripidae: Gynaikothrips uzeli, Liothrips sp. e Pseudophilothrips gandolfoi através de citogenética convencional e molecular dando ênfase aos processos evolutivos que ocorreram durante a diferenciação cariotípica do grupo, reforçando a importância da citogenética como ferramenta para taxonomia da ordem, além de estimar parâmetros genético populacionais de G. uzeli. Para tal, foi analisado o número diplóide, a morfologia cromossômica, o padrão de distribuição das regiões heterocromáticas, os cromossomos portadores de Ag-RONs e realizado o mapeamento físico dos cístrons de rDNA 18S. Além disso, foi estimada a variabilidade genética e a estrutura populacional de G. uzeli através do marcador RAPD. Os resultados obtidos com a sonda de rDNA 18S revelaram um par cromossômico portador da RON nas três espécies, no entanto, em G. uzeli somente um dos elementos cromossômicos do 13º par foi marcado. Em adição, os resultados da análise citogenética indicam que os gêneros Pseudophilothrips e Liothrips apresentam grandes semelhanças em seus complementos cromossômicos. A Baixa variabilidade genética, observada com o marcador RAPD, para G. uzeli, é resultado do sistema de determinação sexual haplodiplóide e de características ecológicas. As análises citogenéticas revelaram diferenças que são difíceis de observar no nível morfológico, demonstrando a importância desta metodologia para a sistemática e a taxonomia e no esclarecimento dos complexos padrões evolutivos apresentado pela ordem.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PALLOMA HOCAYEN.pdf: 1571020 bytes, checksum: 2b66eed389dee29aecb38d9310ca585e (MD5) Previous issue date: 2012-05-09 / In recent years diabetes has been gaining huge proportions, due to changes in the habits of life, poor diet and physical inactivity are key factors in disease development. To this end, various species of plants have been used etnofarmacologicamente or in clinical trials or to treat and combat the symptoms of Diabetes Mellitus. The present study used the methanol extract of the plant Bracharis dracunculifolia (rosemary field) belonging to the Asteraceae family, with the objective of evaluating the effect of his administration on hypothalamic obesity in animal model of MSG. The methodology was based on the preparation of the extract metabolic B. dracunculifolia by means of drying processes, spraying, orbital agitation of the extract in methanol, filtration and addition of rotaevaporação toxicity test of the extract in the brine shrimp. To obtain MSG animals, were used in newborn animals still injection of monosodium glutamate (MSG) for five consecutive days at a dose of 4 mg / g body weight to induce obesity. Treatment with methanol extract was carried out on animals at 180 days of life, for 30 days. Weight was evaluated, consumption of water and feed throughout the experiment. And after the animals have been sacrificed held in the isolation of pancreatic islets which were incubated with increasing concentrations of glucose (5.6 mM, 8.3 mM, 16.7 mM). The results obtained in the study demonstrated low toxicity of the extract of B. dracunculifolia. The MSG animals had proven by induction of obesity increased Lee index, and higher levels of visceral and subcutaneous fat compared to controls. The MSG animals weighed less, consumed less water and less food and had impaired glucose tolerance. The biochemical parameters did not obtain significant differences, except for triglycerides which showed to be higher in MSG animals, not having succeeded in restoring the extract this parameter. In the isolation of pancreatic islets, MSG animals that received the extract of B. dracunculifolia showed a significant secretion of insulin by the islets isolated, noting that the concentration of 8.3 mM and 16.7 mM was obtained increased secretion of insulin. It is concluded that the methanol extract of B. dracunculifolia obtained significant effect on insulin secretion in pancreatic islet cell isolation, noting the results obtained in the group MSG (MP), which were hyperinsulinemia because of a possible enhancement of oxidative stress, especially the high antioxidant content present in the extract B. dracunculifolia used in the study. / Nos últimos anos o Diabetes vem ganhando grandes proporções, devido a mudanças nos hábitos de vida das pessoas, má alimentação e sedentarismo, que são fatores centrais no desenvolvimento da doença. Para tanto, várias espécies de plantas vêm sendo utilizadas etnofarmacologicamente ou em ensaios clínicos para tratar e ou combater os sintomas do Diabetes Mellitus. O presente estudo utilizou o extrato metanólico da planta Bracharis dracunculifolia (alecrim do campo), pertencente a família Asteraceae, com o objetivo de avaliar o efeito de sua administração na obesidade hipotalâmica em modelo de animais MSG. A metodologia se baseou na preparação do extrato metabólico de B. dracunculifolia, por meio de processos de secagem, pulverização, agitação orbital do extrato em metanol, filtragem e rotaevaporação além do teste de toxicidade do extrato frente a Artemia salina. Para a obtenção de animais MSG, foram aplicados nos animais ainda neonatos injeção de glutamato monossódico (MSG), durante cinco dias consecutivos, na dose de 4mg/g de peso corporal, para indução da obesidade. O tratamento com o extrato metanólico foi realizado nos animais aos 180 dias de vida, durante 30 dias. Foi avaliado o peso, consumo de água e ração durante todo o experimento. E após os animais terem sido sacrificados realizou-se o isolamento de ilhotas pancreáticas, que foram incubadas em concentrações crescentes de glicose (5,6mM; 8,3mM; 16,7mM). Os resultados obtidos no estudo demonstraram baixa toxicidade do extrato de B. dracunculifolia. Os animais MSG obtiveram indução da obesidade comprovada pelo aumento do Índice de Lee, e maior teor de gorduras viscerais e subcutânea em relação aos controles. Os animais MSG apresentaram menor peso, consumiram menos água e menos ração e apresentaram intolerância a glicose. Os parâmetros bioquímicos não obtiveram diferenças significativas, com exceção dos triglicerídeos que apresentou-se maior nos animais MSG, não tendo o extrato conseguido restaurar este parâmetro. No isolamento de ilhotas pancreáticas, os animais MSG que receberam o extrato de B. dracunculifolia apresentaram uma secreção significativa de insulina pelas ilhotas isoladas, ressaltando que na concentração de 8,3mM e 16,7mM foi obtida maior secreção de insulina. Conclui-se que o extrato metanólico de B. dracunculifolia obteve efeito significativo da secreção de insulina, no isolamento de ilhotas pancreáticas, ressaltando os resultados obtidos no grupo MSG (MP), que se apresentaram hiperinsulinêmicos, devido a uma possível melhora do stress oxidativo, destacando-se o alto teor antioxidante presente no extrato de B. dracunculifolia utilizado no estudo.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Josimar Borille.pdf: 3226589 bytes, checksum: cb8561fb2eb7f3379035bac6be315d0d (MD5) Previous issue date: 2011-04-29 / Resveratrol is a phytoalexin found in several plants, like grapes (Vitis vinifera), synthesized in response to injury, attack by fungior, mechanical action and also by ultraviolet radiation Currently this bioactive compound has been the subject of interesting research, due to some properties that have already been assigned such as antioxidant and phytoestrogen. Its antioxidant activity is wellknown and is conferred by its ability to capture free radicals produced by cells or to interfere with signaling pathways of free radical production and detoxification. Furthermore, it is known that resveratrol exhibits characteristics of phytoestrogens, being molecularly similar to oestrogen. The intake of bioactive compounds in the diet is important because they exert effects on immune responses. Macrophages are cells in our immune system that are constituents of the mononuclear phagocytic system, which is our first line of defense against infectious agents. Several authors have reported that these cells express receptors for oestrogen hormones, and are regulated by these. So this study aimed to investigate the effect of resveratrol on the functionality of rat´s peritoneal macrophages, making a comparative study between males and females. Macrophages were obtained median laparotomy from the peritoneal cavity of Wistar rats divided into 3 groups (males, females in diestrus and proestrus females). Macrophages in culture medium RPMI 1640 supplemented with fetal calf serum (10%) were seeded in culture plates and incubated in an incubator with humid atmosphere of 5% CO2 for 2 hours. After complete adhesion, the cells were treated for a period of 24 hours with 5 and 10 M resveratrol, quercetin 5 and 10M (control of antioxidant activity) and 17-estradiol 0.01M and 10M (control of estrogenic activity). Afterwards the production of reactive oxygen and nitrogen were evaluated as well as the phagocytic capacity of macrophages treated. Resveratrol 10M significantly inhibited the: production of nitric oxide (NO) measured using the Griess reagent and production hydrogen peroxide (H2O2) determined by use of reagent xylenol orange. However the resveratrol didn’t change the phagocytic capacity under opsonized and nonopsonized particles assessed by optical microscopy. The inhibition of NO and H2O2 production by resveratrol was homogeneous among the groups. This inhibitory effect on NO production and H2O2 was also observed for quercetin.The treatment with 17-estradiol reduced production of NO and H2O2 induced by LPS only for macrophages in rats males. The immunosuppressive effects of resveratrol corroborate the described anti-inflammatory and antioxidant potential of this phenolic compound. Resveratrol in this study, compared to 17-estradiol and quercetin, shown to have antioxidant effects stronger than phytoestrogens. It was observed yet that its effect may vary between groups, and males and females in diestrus respond similarly to treatment with resveratrol and females in proestrus, the answer is different, thereby displaying a pre-modulation by 17-estradiol which these groups were exposed. However, in future, these results will need to be confirmed. / O resveratrol é uma fitoalexina encontrada em várias plantas, como por exemplo, na uva (Vitis vinifera),sintetizado em resposta a injúrias por ataques fúngicos ou mecânicos e ainda pela ação da radiação ultravioleta. Atualmente este composto tem sido alvo de interessantes pesquisas, devido às propriedades que já lhe foram atribuídas, tais como antioxidante, antiinflamatória, antitumoral e mais recentemente fitoestrogênica. Sua ação antioxidante já é bem conhecida e lhe é conferida por sua capacidade de captar radicais livres produzidos pelas células ou mesmo interferir em vias de sinalização que culminam na produção de radicais livres ou de sua detoxificação através de enzimas antioxidantes. Além disso, é sabido que o resveratrol apresenta atividade fitoestrogênica, por ser uma molécula similar ao hormônio estrogênio. A ingestão de compostos bioativos pela dieta é importante, pois estes exercem efeitos moduladores em geral, inclusive sobre as respostas imunes. Os macrófagos são células do sistema imune que fazem parte do sistema mononuclear fagocitário, que constitui a primeira linha de defesa frente a agentes infecciosos. Diversos autores já relataram que os macrófagos expressam receptores para estrogênio e, por conseguinte, são reguladas por este hormônio. Assim este estudo teve por objetivo investigar o efeito de resveratrol na funcionalidade de macrófagos peritoneais de ratos, fazendo um estudo comparativo entre machos e fêmeas. Os macrófagos foram obtidos por laparatomia mediana da cavidade peritoneal de ratos Wistar distribuídos em três grupos: 1) machos, 2) fêmeas em diestro e 3) fêmeas em proestro, sendo as fêmeas previamente identificadas quanto a fase do ciclo estral por análise de microscopia do material vaginal. Os macrófagos em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com soro fetal bovino (10%) foram semeados em placas de cultivo e incubados em estufa de atmosfera úmida com 5% de CO2 por 2 horas. Após completa adesão, as células foram tratadas pelo período de 24 horas com resveratrol 5 e 10M, quercetina 5 e 10 M (controle de atividade antioxidante) e 17- estradiol 0,01 e 10M (controle de atividade estrênoigca). Na seqüência avaliou -se a produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, bem como a capacidade fagocítica dos macrófagos tratados. O resveratrol nas concentrações de 5 e 10M inibiu significativamente a produção de óxido nítrico (NO) avaliada utilizando-se o reagente de Griess e a produção peróxido de hidrogênio (H2O2) determinada pelo emprego do reagente xylenol orange. Todavia o resveratrol não alterou a capacidade fagocítica dos macrófagos às partículas de zimosan opsonizadas e não opsonizadas que foi avaliada por microscopia óptica. A inibição da produção de NO e H2O2 pelo resveratrol foi similar entre os grupos. Esse efeito inibitório na produção de NO e H2O2 foi também observado para a quercetina. Já os tratamentos com 17-estradiol reduziram a produção de NO e H2O2 induzida por LPS apenas dos macrófagos de ratos machos. Comparado com a quercetina e com o 17-estradiol, o resveratrol demonstrou ter efeito antioxidante mais acentuado do que fitoestrogênico. De fato, os efeitos imunossupressores do resveratrol, observados neste estudo, corroboram com o descrito potencial antioxidante e antiinflamatório deste composto. Todavia observou-se que o efeito do resveratrol pode ser diferente entre os grupos, sendo que machos e fêmeas em diestro respondem de maneira similares aos tratamentos com resveratrol, que por sua vez diferem da resposta das fêmeas em proestro, inferindo-se assim a existência de uma pré-modulação pelo 17-estradiol a qual esses grupos estavam expostos. Entretanto outros estudos se fazem necessários para comprovar esta observação.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anelice Calixto Ruh.pdf: 1623886 bytes, checksum: 5599040fa0079070320589375717c125 (MD5) Previous issue date: 2013-12-03 / Pressure sores (PS) are wounds found mainly on bone surfaces where the tissue under pressure suffers ischemia which leads to cellular lesion. The causes of such lesion are several and its healing process depends on several factors, intrinsic and extrinsic to the individual. The objective of this study was to analyze the tissue expression of growth factors, IL6, TNF, VEGF, TGF, which take part in the tissue healing process under the effect of low-level laser InGaAIP. The study was approved by the Ethics Committee at UEPG and the individuals informed and made aware of the aims of the study. The group under study comprised 8 volunteers aged 30 to 75 years old, admitted at the Santa Casa de Misericórdia de Ponta Grossa (SCMPG) hospital, who presented sacroiliac PS, ranked as degree II, III or IV according to NPUAP (2009), both sexes. The PSs were photographed for classification and gross analysis of the lesion area through the program Image Pro Plus 6.0®. Samples of periulcerated tissue were obtained through biopsy before and after laser therapy. The biopsies were destined to the qRT-PCR (Quantitative Real Time PCR). Results revealed that in the gross evaluation of the wound there was improvement of the appearance and size of the lesion area, with increase in the granulation tissue. For the qRT-PCR tests, results point out a non-significant expression of differential growth factors between pre and post laser therapy condition. Based on these results it was possible to conclude that the laser therapy helps the healing process, but the expression of growth factors suffers influence of aspects that interfere in the healing process such as age, underlying pathology, medication, patient’s general condition, nutrition, and skin condition. / Úlceras por pressão (UPP) são feridas encontradas principalmente em superfícies ósseas aonde o tecido sob pressão sofre isquemia levando a lesão celular. As causas desta lesão são muitas e seu processo de cicatrização sofre influência de vários fatores, intrínsecos e extrínsecos do indivíduo. O objetivo desta pesquisa foi analisar a expressão tecidual dos fatores de crescimento, IL6, TNF, VEGF, TGF, que participam do processo de cicatrização tecidual sob os efeitos do laser de baixa potência InGaAIP. O trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética da UEPG e os indivíduos foram informados e esclarecidos sobre os objetivos da pesquisa. O grupo estudado foi composto de 8 voluntários com idade entre 30 a 75 anos, internados na Santa Casa de Misericórdia de Ponta Grossa (SCMPG), que apresentassem UPP sacroíliaca, classificadas em grau II, III ou IV segundo a NPUAP (2009), ambos os sexos. As UPP foram fotografadas para classificação e análise macroscópica da área da lesão através do programa Image Pro Plus 6.0®. Foram obtidas amostras do tecido peri-ulcerado através de biópsia antes e após aplicações de laserterapia. Estas biópsias foram destinadas aos ensaios de qRT-PCR (Quantitative Real Time PCR). Os resultados demonstram que na avaliação macroscópica da ferida houve melhora no aspecto e tamanho da área da lesão, com aumento do tecido de granulação. Para ensaios de qRT-PCR os resultados apontam uma expressão dos fatores de crescimento diferencial não significativa entre o estado pré e pós laserterapia. Com estes resultados foi possível concluir que a laserterapia ajuda no processo de cicatrização, mas que a expressão dos fatores de crescimento sofrem influência de aspectos que interferem no processo de cicatrização como, idade, patologias de base, medicamentos, estado geral paciente, nutrição, estado da pele.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diana Cornelio.pdf: 3420425 bytes, checksum: ff1f9eef75ccbe98d2e754cd2215c5c5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-08 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / Astyanax scabripinnis is a species found in the neotropics, this species forms demes isolated populations in headwater streams. It is taxonomically unresolved, but is presented as an interesting model to study the presence of chromosomal B. The occurrence of these chromosomes in A. scabripinnis may be associated with various environmental factors and population, although little savvy about maintaining parasitic or possible heterotic effects of these chromosomes. The reproductive biology related to the presence of B chromosomes in A. scabripinnis never been addressed. Thus, the object of this study was to investigate whether aspects of the reproductive process, fundamental to the adaptive value may be related to the presence of B chromosomes in A. scabripinnis. Samples were collected quarterly between the years 2012 and 2013 in Campos do Jordao, Sao Paulo, Brazil (22 ° 40 '49.5 "S, 45 ° 23` 31.9 "W) at Stream Farm Lavrinha basin of the Paraíba do Sul. The gonads were classified macroscopically and microscopically second stages of development. Settled seasonally sex ratio of the population in the different samples. We calculated the gonadosomatic ratio (GSR) and the relationship hepatossomática (RHS) separately for females with and without chromosome B. The presence of B chromosomes was confirmed by classical cytogenetic and molecular with the use of chromosome specific probe B constructed by chromosome microdissection and amplification Degenerated Oligonucleotids Primers (DOP-PCR) and subsequent in situ hybridization (FISH). Geometric morphometric analysis were performed separately for males and females with and without the presence of chromosomes B. The results indicate that the sex ratio varied seasonally having an increased number of males compared to females. Hermaphrodite individuals were found at a frequency of 7.7%. The reproductive period is characterized by an atypical reproductive peak during the winter period, beyond the period observed pattern from the spring in September. The presence of B chromosomes has been linked to possible reproductive strategies in different populations studied, especially in relation to energy intake and stages of gonadal development. There morphometric differences both between individuals female and male subjects with and without chromosome B. / Astyanax scabripinnis é uma espécie encontrada na Região Neotropical, essa espécie forma demes populacionais isolados em cabeceiras de riachos. Ela é taxonomicamente mal resolvida, mas se apresenta como interessante modelo para o estudo da presença de cromossomos B. A ocorrência desses cromossomos em A. scabripinnis pode estar associada a diversos fatores ambientais e populacionais, embora seja pouco esclarecido sobre a manutenção parasítica ou possíveis efeitos heteróticos desses cromossomos. A biologia reprodutiva relacionada à presença de cromossomo B em A. scabripinnis nunca foi abordada. Assim, foi objeto deste trabalho investigar se aspectos do processo reprodutivo, fundamental para o valor adaptativo, podem estar relacionados à presença de cromossomos B em A. scabripinnis. As coletas foram realizadas trimestralmente entre os anos de 2012 e 2013 na região de Campos do Jordão, São Paulo, Brasil (22°40`49,5”S, 45°23`31,9” W), no Córrego da Fazenda Lavrinha, bacia do rio Paraíba do Sul. As gônadas foram classificadas macro e microscopicamente segundo estádios de desenvolvimento. Estabeleceu-se sazonalmente a proporção sexual da população nas diferentes amostragens. Foi calculada a relação gonadossomática (RGS) e a relação hepatossomática (RHS) separadamente para fêmeas com e sem cromossomo B. A presença de cromossomos B foi confirmada por meio da citogenética clássica e molecular com o emprego de sonda específica do cromossomo B construída por microdissecção cromossômica e amplificação por Degenerated Oligonucleotids Primers (DOP-PCR) e posterior hibridação fluorescente in situ (FISH). Análises de morfometria geométrica foram realizadas separadamente para fêmeas e machos com e sem a presença de cromossomos B. Os resultados indicam que a proporção sexual variou sazonalmente havendo um aumento do número dos machos em relação às fêmeas. Foram encontrados indivíduos hermafroditas na frequência de 7,7%. O período reprodutivo é caracterizado por um pico de reprodução atípico no período do inverno, além do período padrão observado a partir da primavera no mês de setembro. A presença de cromossomos B foi relacionada a possíveis estratégias reprodutivas distintas na população estudada, especialmente em relação ao aporte energético e estádios de desenvolvimento gonadal. Há diferenças morfométrica tanto entre indivíduos fêmeas e machos como entre indivíduos com e sem cromossomo B.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Denis Leandro Freitas.pdf: 2460536 bytes, checksum: 9c33d2a38cc2aba90b9f27c476e8d2c5 (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / The urinary tract infections (UTI) have high incidence in the population, mainly affecting women, the elderly and pregnant women. In most cases an UTI is caused by Enterobacteriaceae, especially Escherichia coli. The main antimicrobials used in the treatment of UTIs, are the quinolones and fluoroquinolones. Since its discovery in the 60s, such antimicrobials were improved and increasing its spectrum of activity, but also the micro-organisms has evolved to develop resistance to these drugs. The resistance comes down to two mechanisms: changes in targets of quinolones or decreased concentration of the drug within the cell. Quinolones are antimicrobial agents that target two enzymes involved in transcription and replication of bacterial DNA, DNA Gyrase, consisting of two subunits GyrA and two GyrB products of the genes gyrA and gyrB respectively and Topoisomerase IV, also composed of two ParC and two ParE subunits, encoded from genes parC and parE. Mutations in these genes can confer high-level resistance to these antimicrobials. Other mechanisms involve genes carried in plasmids such as qnr's, responsible for the production of proteins that protect the target enzymes of quinolones. The gene aac (6 ')-Ib-cr also present in plasmids can alter the chemical structure of certain fluoroquinolones interfering efficiency. The association of resistance to quinolones and β-lactams due to the presence of Extended Spectrum β-lactamases (ESBL) has been widely reported in the literature. The main objective of this study was to evaluate the patterns of resistance to quinolones and fluoroquinolones in 55 samples of uropathogenic E. coli collected in Curitiba, PR, Brazil. The resistance to nalidixic acid, norfloxacin, ciprofloxacin and ofloxacin was observed in 69.1% of the samples. Molecular analysis of the resistant strains showed mutations in gyrA (codons 83 and 87) and parC (codon 80). Also investigated was the presence of genes qnr's and aac (6 ')-Ib-cr and their association with ESBLs. Two of the 55 samples were positive for aac (6 ')-Ib-cr. The presence of this gene in Brazil was first reported in 2012 in Belo Horizonte, MG. No samples were positive for the qnr's genes. These results show a high incidence of resistance to quinolones and the ability to horizontally spread of acquired resistance between the bacterial strains. / As infecções do trato urinário (ITU) apresentam grande ocorrência na população, afetando principalmente mulheres, idosos e gestantes. Na maioria dos casos uma ITU é causada por enterobactérias, especialmente Escherichia coli. A principal escolha no tratamento das ITUs são as quinolonas e fluorquinolonas. Desde sua descoberta na década de 60, tais antimicrobianos foram aperfeiçoados aumentando seu espectro de ação, porém os micro-organismos também evoluíram desenvolvendo resistência a tais fármacos. A resistência se resume a alterações nos alvos das quinolonas e ou a diminuição da concentração da droga no interior da célula. Quinolonas são antimicrobianos que têm como alvo duas enzimas envolvidas na replicação e transcrição do DNA bacteriano, a DNA Girase, formada por duas subunidades GyrA e duas GyrB, produtos dos genes gyrA e gyrB respectivamente e a Topoisomerase IV, também composta de duas subunidades ParC e duas ParE, codificadas a partir dos genes parC e parE. Mutações nesses genes podem conferir alto nível de resistência a estes antimicrobianos. Outros mecanismos envolvem genes transportados em plasmídeos, como os qnr’s, responsáveis pela produção de proteínas capazes de proteger as enzimas alvo das quinolonas. O gene aac(6’)-ib-cr, também presente em plasmídeos, é capaz de alterar a estrutura química de certas fluorquinolonas interferindo na sua eficiência. A associação de resistência a quinolonas e β-lactâmicos devido à presença de β-lactamases de espectro ampliado (ESBLs), tem sido amplamente relatada na literatura. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar os padrões de resistência a quinolonas e fluorquinolonas em 55 amostras de E. coli uropatogênica coletadas em Curitiba, PR. A resistência ao ácido nalidíxico, a norfloxacina, ciprofloxacina e ofloxacina, foi observada em 69,1% das amostras. A análise molecular das cepas resistentes revelou mutações em gyrA (códons 83 e 87) e em parC (códon 80). Também foi pesquisada a presença dos genes qnr’s e aac(6’)-ib-cr e a associação destes com ESBLs. Duas das 55 amostras foram positivas para aac(6’)-ib-cr. A presença desse gene no Brasil foi relatada pela primeira vez em 2012, em Belo Horizonte, MG. Nenhuma amostra foi positiva para os genes qnr’s. Estes resultados mostram uma elevada incidência de resistência às quinolonas e a capacidade de transferência horizontal de resistência adquirida entre as cepas bacterianas.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Koza Kowalski.pdf: 7473163 bytes, checksum: e334f61830fc0aaa07f65c69c01b13fd (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bromeliaceae Juss. is essentially neotropical, represented by 58 genera and about 3.172 species, being Brazil its largest center of diversity, with 42 genera, 17 are endemics, and 1.200 species, occurring in all biomes, with the highest species richness locates on the coast east, the Atlantic Forest. Evolutionary aspects as the capture and storage of water by leaves arranged in a rosette, forming a tank, and the absorption of water and nutrients through the trichomes, possible life in extreme environments and diverse, contributing to the wide distribution of this family, and generate conditions necessary for the survival of many organisms from their leaves. The family is subdivided into eight subfamilies: Brocchinioideae Givinish, Lindmanioideae Givinish, Tillandsioideae (Dumortier) Harms, Hechtioideae Givinish, Navioideae Hams, Pitcairnioideae (Meisner) Harms, Puyoideae Givinish and Bromelioideae. Vriesea Lindl. belongs to the Tillandsioideae, with 261 species, distributed predominantly in South America. The genus has groups of species, difficult delimitation among them, the complex Vriesea platynema Gaudich. with 41 species. This occurs from Central America to Argentina, with a strong polymorphism, leading the erroneous identification of taxa. Based on material in vivo and herbarium collections, a taxonomic study was conducted in the state of Paraná. Three taxa were recognized: Vriesea platynema Gaudich. var. platynema, widely distributed taxon classified as not threatened (LC) according to the criteria established by IUCN, Vriesea platynema var. variegata (Guillon) Reitz, endemic to the Paraná and classified as Endangered (EN), by its reduced extent of occurrence, and Vriesea tijucana E. Pereira, as endangered (EN), being restricted to FOD, present few points of occurrence, which are located in protected areas or in urban development. Descriptions, comments, key identification, geographical distribution, conservation status and illustrations are presented. In parallel, an anatomical study of the vegetative organs was performed, where we tried to identify anatomical features with taxonomic value, and check the adaptations to the habitat of each taxon. The three taxa analyzed have absorptive and grampiformes roots, tank well developed and specialized trichomes, mainly C3 metabolism and the epiphytic habit. / Bromeliaceae é essencialmente neotropical, atualmente com 58 gêneros e aproximadamente 3.172 espécies, sendo o Brasil, seu maior centro de diversidade, com aproximadamente 43 gêneros (17 endêmicos) e 1.200 espécies ocorrendo em todos os biomas, sendo a maior riqueza específica, localizada na costa leste, na Floresta Atlântica. Aspectos evolutivos como a captação e o armazenamento de água pelas folhas dispostas em roseta, formando um tanque, e a absorção de água e nutrientes através dos tricomas, possibilitaram a vida em ambientes diversos e extremos, contribuindo para a ampla distribuição desta família, além de gerar condições necessárias para a sobrevivência de muitos organismos entre suas folhas. A família está subdividida em oito subfamílias: Brocchinioideae Givinish, Lindmanioideae Givinish, Tillandsioideae (Dumortier) Harms, Hechtioideae Givinish, Navioideae Hams, Pitcairnioideae (Meisner) Harms, Puyoideae Givinish e Bromelioideae. O gênero Vriesea Lindl. pertence a subfamília Tillandsioideae, com 261 espécies, distribuídas predominantemente na América do Sul. Este gênero possui grupos de espécies, de difícil delimitação, entre eles, o complexo Vriesea platynema Gaudich. com 41 espécies. Este, ocorre desde a América Central até a Argentina, com um acentuado polimorfismo, propiciando a identificação errônea dos táxons. Baseado em material in vivo e em coleções de herbários, um estudo taxonômico foi realizado no Estado do Paraná. Foram reconhecidos três táxons: Vriesea platynema Gaudich. var. platynema, táxon amplamente distribuído classificado como não ameaçado (LC) de acordo com os critérios estabelecidos pelo IUCN, Vriesea platynema var. variegata (Guillon) Reitz, endêmica para o Paraná e classificada em perigo (EN), devido a extensão de ocorrência reduzida, e Vriesea tijucana E. Pereira, enquadrada como em perigo (EN), por ser restrita a Floresta Ombrofila Densa em terras baixas e apresentar poucos pontos de ocorrência, sendo estes localizados em áreas de proteção ambiental ou áreas urbanas em desenvolvimento. Para cada táxon, são apresentadas descrições, comentários, chave de identificação, distribuição geográfica, ilustrações e o status de conservação. Paralelamente, um estudo anatômico dos órgãos vegetativos foi realizado, onde procurou-se identificar características anatômicas com valor taxonômico, além de verificar as adaptações ao hábitat de cada táxon. Os três táxons analisados apresentam raízes absortivas e grampiformes, com tanque bem desenvolvido e tricomas especializados, metabolismo principalmente C3 e hábito epifítico.

Made available in DSpace on 2017-07-21T20:00:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patricia Barbosa.pdf: 1571215 bytes, checksum: daac7b661ca93cbfd05ca0e7cda85213 (MD5) Previous issue date: 2013-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The most part of the eukaryote genomes is constituted for repetitive DNA or multiple copies DNA, which has already been considered as “junk”, may be associated to the heterochromatin. In this study three Astyanax scabripinnis populations from Pindamonhangaba and Guaratinguetá (SP, Brazil) rivers and stream and one population from Maringá (PR, Brazil) were analyzed about the nucleolar organizing region (NORs), As51 satellite DNA, 18S and 5S rDNA location. Moreover, repetitive sequences were isolated and mapped through Cot-1 technique, which showed homology with UnaL2, a LINE type retrotransposon. The fluorescent in situ hybridization (FISH), with the isolated built retrotransposon probe, evidenced disperse labeled and stronger in centromeric and telomeric chromosomes regions, co-located and interspersed with the 18S DNAr and As51, proven by the fiber-FISH technique. The B chromosome of those populations showed very conspicuous labeled with the LINE probe, also co-located with the As51 sequences. The NORs were actives in a single site of a homologue pair in all three populations, with no evidence that the transposable elements and repetitive DNA have influence in its regulation at the performed analyzes level. / A maior parte do genoma dos eucariotos é constituída por DNA repetitivo ou DNA de múltiplas cópias, o qual já foi considerado “lixo”, podendo estar associado à heterocromatina. Neste estudo foram analisadas três populações de Astyanax scabripinnis provenientes de rios e córregos de Pindamonhangaba e Guaratinguetá (SP, Brasil) e uma população da cidade de Maringá (PR, Brasil) quanto a localização das regiões organizadoras de nucléolo (RONs), DNA satélite As51, DNA ribossomal (DNAr) 18S e DNAr 5S. Ainda, foram isoladas e mapeadas sequências repetitivas por meio da técnica de Cot-1, que mostrou homologia com UnaL2, retrotransposon do tipo LINE. A hibridação in situ fluorescente (FISH), com sonda construída para o retrotransposon isolado, evidenciou marcações dispersas e mais concentradas em regiões centroméricas e teloméricas dos cromossomos, co-localizadas e interespaçadas com DNAr 18S e As51, comprovada pela técnica de fiber-FISH. O cromossomo B das populações mostrou marcações bastante conspícuas com a sonda LINE, também co-localizada com sequências As51. As RONs apresentaram-se ativas em sítios únicos de um par homólogo nas três populações, não havendo indícios de que elementos transponíveis e DNA repetitivo tenham influência na sua regulação ao nível das análises realizadas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431137.pdf: 15580738 bytes, checksum: 8de463b0a32f5623e6e47a0d1d0edad2 (MD5) Previous issue date: 2011-03-10 / A epilepsia ? uma desordem neuronal caracterizada pela ocorr?ncia de convuls?es espont?neas e recorrentes. Essa patologia e seu tratamento interferem em diversos mecanismos neurol?gicos. O sistema purin?rgico ? uma importante rota de sinaliza??o celular que emprega nucleot?deos e nucleos?deos extracelulares como mol?culas sinalizadoras. O neurotransmissor ATP atua atrav?s de receptores do tipo P2Y, acoplados ? prote?na G e receptores P2X, que s?o ionotr?picos. A degrada??o do ATP extracelular e a conseq?ente produ??o de adenosina ? realizada por uma fam?lia de enzimas de superf?cie celular conhecidas como ectonucleotidases, que inclui as NTPDases (nucleos?deo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5?-nucleotidase. A adenosina ? um neuromodulador que atua atrav?s da ativa??o de receptores metabotr?picos do tipo P1 (A1, A2A, A2B, A3). Esse nucleos?deo pode agir como um anticonvulsivante end?geno, principalmente via receptores A1. As NTPDases hidrolisam nucleot?deos tri- e difosfatados originando a adenosina, que ? hidrolisada pela adenosina deaminase (ADA). Assim, as NTPDases, ecto-5 -nucleotidase e ADA controlam os n?veis de nucleot?deos e nucleos?deos, modulando o sistema purin?rgico. No sistema colin?rgico, a acetilcolina (ACh) atua atrav?s de receptores muscar?nicos (metabotr?picos) e nicot?nicos (ionotr?picos). Sua a??o ? encerrada atrav?s de sua hidr?lise catalisada pela acetilcolinesterase (AChE). O peixe zebra ? um pequeno tele?steo de ?gua doce que vem sendo amplamente utilizado como modelo experimental em pesquisa. Estudos mostram que o peixe zebra pode ser uma ferramenta importante para o entendimento da epilepsia, bem como para o screening de f?rmacos antiepil?pticos. Considerando que as sinaliza??es purin?rgica e colin?rgica t?m importante participa??o no sistema nervoso e que essas vias de neurotransmiss?o est?o identificadas e caracterizadas em peixe zebra, o objetivo desse estudo foi avaliar nesse tele?steo o efeito de convuls?es induzidas por pentilenotetrazol (PTZ), bem como de f?rmacos antiepil?pticos na atividade das ectonucleotidases, ADA e AChE, enzimas essenciais na modula??o destas vias de sinaliza??o. Foram avaliados os efeitos in vitro da carbamazepina, fenito?na e gabapentina na atividade das ectonucleotidases e AChE. A carbamazepina diminuiu a hidr?lise de ATP e tamb?m de ACh. A fenito?na aumentou a hidr?lise de AMP e a gabapentina n?o provocou altera??es enzim?ticas. Foi analisado tamb?m o efeito de crises convulsivas induzidas por PTZ na atividade das ectonucleotidases e da ADA. Os resultados n?o mostraram altera??es nas ectonucleotidases e ADA nas fra??es extracelular e intracelular, respectivamente. No entanto, a atividade extracelular da ADA foi inibida em animais expostos ao PTZ. As an?lises mostraram que os f?rmacos antiepil?pticos podem influenciar a atividade das enzimas envolvidas na degrada??o extracelular de nucleot?deos, bem como na hidr?lise de ACh. Al?m disso, a diminui??o na degrada??o de adenosina observada em nosso modelo de estudo pode sugerir a participa??o da ADA na modula??o nos n?veis de adenosina durante as crises convulsivas em peixe zebra