Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-22T14:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 262529.pdf: 852715 bytes, checksum: 01a1da534cb54bd4e31bc8668c84604c (MD5) / As Bleomicinas (BLMs) constituem uma família de antibióticos glicopeptídicos antitumorais, descoberta por Umezawa em culturas do Streptomyces verticillus e foi o primeiro agente anti-tumoral a mostrar especificidade na distribuição e metabolismo tecido/órgão, tendo um efeito terapêutico principal único, em particular, câncer. Associadas com outros quimioterápicos são clinicamente utilizadas no tratamento de linfomas de Hodgkin's, carcinomas de pele, cabeça e pescoço, tumores de testículos e ovários. As BLMs apresentam também propriedades antivirais, inibindo a replicação do HIV-1, e em combinação com outros agentes antivirais são utilizadas no tratamento da AIDS. A importância das BLMs na medicina despertou, nas últimas três décadas, grande interesse na síntese de análogos simplificados, tais como os sistemas PYML, HPH e HPH-Pep. De maneira geral, esses sistemas contem ligações amídicas, as quais se assemelham as ligações peptídicas presentes nas BLMs. Assim, este trabalho se fundamentou no desenvolvimento de uma metodologia simples e eficiente na elaboração de modelos relacionados à BLM e outras metaloenzimas utilizando o método do cloreto de ácido na formação da ligação amídica. Para efeito de comparação, esta metodologia foi aplicada na síntese do composto HPH-Pep (1), previamente preparado por Otsuka (74% de rendimento), reagindo o dicloreto de picolila (8) com histidinato de metila (9). Este procedimento se mostrou um método alternativo, menos laborioso e com rendimento satisfatório (70%). Esta metodologia foi aplicada, com sucesso, nas construções dos compostos, ainda inéditos, HFH-Pep-COOMe-OMe (3) e HFH-Pep-COOMe-OBn (4). O tratamento dos compostos 1 e 4 com NaOH em MeOH forneceu derivados ácidos HPH-Pep-COOH (2) e HFH-Pep-COOH-OBn (6) em bons rendimentos. A reação de hidrogenólise do composto 6 levou ao produto desejado HFH-Pep-COOH-OH (7) quantitativamente.

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Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / En la práctica clínica se han observado grandes variaciones interindividuales, tanto en la respuesta como en la toxicidad asociadas con las terapias anticancerígenas. El presente trabajo tiene por objetivo estudiar la asociación entre polimorfismos genéticos en enzimas de biotransformación y la toxicidad del esquema cisplatino-etopósido-bleomicina (PEB) en pacientes con cáncer testicular y evaluar la influencia del polimorfismo genético en GSTM1 en la farmacocinética de cisplatino. Para el cumplimiento de los objetivos se realizó la genotipificación de los polimorfismos CYP3A4*1B, GSTM1 nulo, GSTT1nulo y BLMH (A1450G) realizadas mediante PCR-RFLP a partir del ADN genómico total obtenido de sangre periférica de sesenta y tres (63) pacientes con cáncer testicular. Adicionalmente, a ocho (8) pacientes reclutados se les realizó un estudio farmacocinético en donde recibieron una infusión intravenosa por 2 horas de cisplatino (100 mg/m2). Los niveles plasmáticos de cisplatino fueron medidos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados muestran que los pacientes con el genotipo GSTM1 presente experimentan más leucopenia grado 3-4 (OR=0,2058; 95% IC 0,0405-1,0459, p=0,041chi2, p=0,052 Fisher). Linfocitopenia severa fue más frecuente en pacientes con el genotipo GSTT1 nulo (OR=29, 95% IC 1,29-650,0, p=0,002chi2, p=0,095 Fisher). Los pacientes con el genotipo BLMH A/G experimentaron más toxicidad hematológica grado 3-4 (OR=7,67, 95% IC 2,14-27,35-, p=0,001chi2, p=0,002 Fisher) y leucopenia grado 3-4 (OR=29, 95% IC 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 Fisher). Los datos farmacocinéticos se ajustaron a un modelo de dos compartimentos, el promedio poblacional estimado para el aclaramiento (CL) fue de 9,97 L/hr y el volumen de distribución en el compartimento central (V1) fue 6,48 L. Ninguna covariable mejoró la variabilidad intersujeto asociada con los parámetros farmacocinéticos. No se observó ninguna asociación significativa entre la farmacocinética y GSTM1. En conclusión, los polimorfismos GSTM1 nulo, GSTT1 nulo y BMLH (A1450G) están relacionados con la toxicidad luego del esquema de quimioterapia en pacientes con cáncer testicular. En el estudio farmacocinético preliminar de cisplatino, ningún parámetro se ve influenciado por el genotipo GSTM1 / In the clinical practice were observed large interindividual variations both the response and the toxicity in the anticancer therapy. The present work aimed to study the association among the genetics polymorphisms in the biotransformation enzymes and toxicity in cisplatin-etoposide-bleomycin (PEB) chemotherapy in testicular cancer patients and to evaluate the influence of genetic polymorphism in GSTM1 on the pharmacokinetics of cisplatin. Genotyping of CYP3A4*1B, GSTM1 null, GSTT1 null and BLMH (A1450G) polymorphisms was performed by PCR – RFLP of genomic DNA obtained from the peripheral blood of sixty three (63) testicular cancer patients. Additionally, the eight (8) patients recruited to the pharmacokinetics study received a 2 hours intravenous infusion of cisplatin (100 mg/m2). Plasma levels of cisplatin were measured by high-performance liquid chromatography (HPLC). Results showed that the patients GSTM1 present genotype experienced more grade 3-4 leucopenia (OR=0,2058; 95% CI 0,0405-1,0459, p=0,041chi2, p=0,052 fisher). Severe linfocitopenia was more frequent in patients GSTT1 null genotype (OR=29, 95% CI 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 fisher). Patients BLMH A/G genotype experienced more grade 3-4 hematological toxicity (OR=7,67, 95% CI 2,14-27,35-, p=0,001chi2, p=0,002 fisher) and grade 3-4 leucopenia (OR=29, 95% CI 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 fisher). Dates pharmacokinetics were adjusted to a linear two-compartment model, the mean population estimates for clearence (CL) were 9,97 L/hr and central distribution volume (V1) were 6,48 L. No covariate improved the intersubject variability associated with pharmacokinetics parameters. No association among pharmacokinetics parameters and GSTM1 genotype were significant. In conclusion, GSTM1 null, GSTT1 null and BLMH A1450G polymorphisms were related with toxicity from chemotherapy testicular cancer. In the pharmacokinetics preliminary study of cisplatin, no parameters were influenced for GSTM1 genotype. Key words: Pharmacogenetics, polymorphisms, testicular cancer

Neoplasias são proliferações anormais do tecido. O melanoma é uma neoplasia maligna de grande pleomorfismo e apresenta baixa taxa de resposta à quimioterapia. A aplicação de pulsos elétricos aumenta a permeabilidade da membrana celular, facilitando a passagem de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta do melanoma murino ao tratamento com uma e duas aplicações de eletroquimioterapia. Utilizou-se células de melanoma B16F10 em camundongos e realizou-se acompanhamento diário. Avaliou-se a histologia tumoral, o número de mitoses, a contagem de microvasos e o número de mastócitos. Nos animais tratados a sobrevida foi 2,3 vezes maior. Nos animais tratados com duas aplicações de eletroquimioterapia ocorreu remissão total do tumor em 60% dos casos e parcial nos demais, e apresentaram sobrevida 4,5 vezes maior. O número de mitoses nos grupos tratados com uma e duas aplicações de eletroquimioterapia e do número de mastócitos nos grupos tratados com duas aplicações de eletroporação e eletroquimioterapia foi menor que os controles. / Neoplasms are abnormal growths of tissue. Melanoma is a malignant neoplasm of large pleomorphic and has a low response rate to chemotherapy. The application of electrical pulses increases cell membrane permeability and facilitate passage of chemotherapeutic drugs. The aim of this study was to evaluate the response to treatment of murine melanoma with one and two applications of Electrochemotherapy. We used them B16F10 melanoma cells and mice held monitoring diary. We evaluated the histology of the tumor, the number of mitoses, microvessel count and the number of mast cells. In animals treated, the survival was 2.3 times higher. In animals treated with two applications of Electrochemotherapy complete tumor remission occurred in 60% of cases and partial in the other. This group had a survival 4.5 times higher. The number of mitoses in the groups treated with one or two applications of Electrochemotherapy and the number of mast cells in the groups treated with two applications of electroporation and Electrochemotherapy was lower than controls.

Neoplasias são proliferações anormais do tecido. O melanoma é uma neoplasia maligna de grande pleomorfismo e apresenta baixa taxa de resposta à quimioterapia. A aplicação de pulsos elétricos aumenta a permeabilidade da membrana celular, facilitando a passagem de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta do melanoma murino ao tratamento com uma e duas aplicações de eletroquimioterapia. Utilizou-se células de melanoma B16F10 em camundongos e realizou-se acompanhamento diário. Avaliou-se a histologia tumoral, o número de mitoses, a contagem de microvasos e o número de mastócitos. Nos animais tratados a sobrevida foi 2,3 vezes maior. Nos animais tratados com duas aplicações de eletroquimioterapia ocorreu remissão total do tumor em 60% dos casos e parcial nos demais, e apresentaram sobrevida 4,5 vezes maior. O número de mitoses nos grupos tratados com uma e duas aplicações de eletroquimioterapia e do número de mastócitos nos grupos tratados com duas aplicações de eletroporação e eletroquimioterapia foi menor que os controles. / Neoplasms are abnormal growths of tissue. Melanoma is a malignant neoplasm of large pleomorphic and has a low response rate to chemotherapy. The application of electrical pulses increases cell membrane permeability and facilitate passage of chemotherapeutic drugs. The aim of this study was to evaluate the response to treatment of murine melanoma with one and two applications of Electrochemotherapy. We used them B16F10 melanoma cells and mice held monitoring diary. We evaluated the histology of the tumor, the number of mitoses, microvessel count and the number of mast cells. In animals treated, the survival was 2.3 times higher. In animals treated with two applications of Electrochemotherapy complete tumor remission occurred in 60% of cases and partial in the other. This group had a survival 4.5 times higher. The number of mitoses in the groups treated with one or two applications of Electrochemotherapy and the number of mast cells in the groups treated with two applications of electroporation and Electrochemotherapy was lower than controls.

Introdução: as verrugas ungueais são consideradas o tumor benigno que mais acomete o complexo ungueal, sendo causadas pelo papiloma vírus humano. A maioria das alternativas terapêuticas é considerada ineficaz, com altas taxas de recidiva, além do potencial risco de distrofia ungueal. A bleomicina é a opção de tratamento que apresenta bom perfil de segurança e altas taxas de cura. A eletroquimioterapia é uma técnica que combina a eletroporação com a prévia administração de uma droga citotóxica de baixa permeabilidade, aumentando assim a penetração da droga no interior das células, o que amplia a eficácia do tratamento. A bleomicina é o agente quimioterápico mais utilizado na eletroquimioterapia, por ser um excelente exemplo de droga citotóxica não permeável à membrana celular (hidrofílica). Objetivos: avaliar a eficácia da eletroquimioterapia com bleomicina intralesional no tratamento das verrugas ungueais, comparando este método, com o uso isolado da bleomicina intralesional, além de descrever os efeitos adversos relacionados com o emprego das duas técnicas. Metodologia: Ensaio clínico randomizado duplo-cego e controlado. Incluíramse 44 pacientes de ambos gêneros, com idade variando entre 18 e 60 anos, e diagnóstico clínico e histológico de verruga ungueal de quirodáctilos. O estudo foi submetido e aceito pelo comitê de ética, e todos os pacientes assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Vinte e dois pacientes foram tratados apenas com bleomicina intralesional e 21 com eletroquimioterapia associada à bleomicina intralesional. Após uma única aplicação, os pacientes foram acompanhados por 180 dias. A comparação da cura entre os grupos foi avaliada pelo teste exato de Fisher para tabelas 2 x 2. O software utilizado foi o XLSTAT 2018. Resultados: dos 44 pacientes que participaram da pesquisa, um paciente do grupo da bleomicina intralesional isolada deixou o estudo antes da realização da técnica. A maioria das lesões se localizava na região periungueal (77,3%), enquanto que, os 22,7% das lesões restantes se localizaram na região subungueal. A média de idade dos pacientes foi de 37 anos para o grupo da eletroquimioterapia associada à bleomicina, e de 36 anos para o grupo da bleomicina. A maioria dos pacientes foi do gênero feminino (68%). Dos 22 pacientes finalizados para o grupo da bleomicina 11 (50,0%) apresentaram cura, enquanto que, dos 21 pacientes finalizados do grupo da eletroquimioterapia associada à bleomicina, 18 pacientes (85,7%) apresentaram cura. Foi observada associação significativa entre os pacientes com ou sem cura e os tratamentos do grupo bleomicina e do grupo eletroquimioterapia associada à bleomicina (teste exato de Fisher; p = 0,022). Nenhum dos pacientes, tanto do grupo da bleomicina, quanto do grupo da eletroquimioterapia associada à bleomicina, apresentou efeitos colaterais sistêmicos. Notou-se que os efeitos colaterais como a necrose hemorrágica e dor moderada ocorreram em maior proporção para os participantes do grupo da eletroquimioterapia associada à bleomicina, com quase 70% do total de 21 pacientes observados. Independentemente da técnica empregada, todos os participantes consideraram os efeitos adversos toleráveis. Conclusão: o uso intralesional da bleomicina associada à eletroporação (eletroquimioterapia), no tratamento das verrugas ungueais (periungueais e subungueais), apresentou cura estatisticamente superior quando comparada ao uso isolado da bleomicina intralesional. Os efeitos colaterais foram mais frequentes no grupo da eletroquimioterapia associada à bleomicina, em relação ao grupo de monoterapia com a bleomicina / Introduction: ungual warts are considered a benign tumor most commonly affecting the nail complex and caused by the human papillomavirus. Most therapeutic options are considered ineffective, with high relapse rates and a potential risk of ungual dystrophy. Bleomycin is a therapeutic option showing good safety profile, and high cure rates. Electrochemotherapy is a technique combining electroporation with the previous injection of a low permeability cytotoxic drug, which increases drug penetration into the cells, and therefore,enhances treatment efficacy. Bleomycin is the most commonly used chemotherapeutic agent in electrochemotherapy because it is an excellent example of cell-membrane non-permeable cytotoxic drug (hydrophilic). Objectives: evaluate the efficacy of electrochemotherapy plus intralesional bleomycin in the treatment of ungual warts in comparison with intralesional bleomycin alone, as well as describe the adverse effects of both techniques. Methodology: the research was a randomized, double-blind, controlled clinical trial. Forty-four 18-60-year-old female and male patients clinically and histologically diagnosed with ungual wart on fingers were included. The study was submitted to and accepted by the Ethics Committee, and all patients signed the Informed Consent Form. Twenty-two patients were treated with intralesional bleomycin alone and 21 with electrochemotherapy associated with intralesional bleomycin. After a single application, patients were followed for 180 days. Cure rate between groups was evaluated by using the Fisher\'s exact test for tables 2 x 2. The software used was XLSTAT 2018. Results: of the 44 included patients, 22 were randomized to the bleomycin group and 21 to the electrochemotherapy plus bleomycin group. One patient of the bleomycin group did not complete the study. Most lesions were located in the periungual region (77.3%), while the remaining 22.7% of lesions were located in the subungual region. Patient\'s mean age was 37 years for the electrochemotherapy plus bleomycin group and 36 years for the bleomycin group. Most patients were females (68%). Of 22 patients in the bleomycin group completing the study, 11 (50%) achieved the cure, while 18 (85.7%) of 21 patients completing the study in the electrochemotherapy plus bleomycin group showed cure. A significant association of patients with or without cure with the treatments received in the bleomycin group and the electrochemotherapy plus bleomycin group (Fisher\'s exact test; p = 0.022). None of the patients in either group had systemic side effects. Local side effects such as hemorrhagic necrosis and moderate pain were observed to occur in a higher proportion for electrochemotherapy plus bleomycin group, with almost 70% of total (21) patients. Regardless the technique used, all participants considered the adverse effects tolerable. Conclusion: the intralesional use of bleomycin associated with electroporation (electrochemotherapy) for the treatment of ungual warts (both periungual and subungual) showed high cure rate when compared with intralesional bleomycin alone. Side effects were more frequently seen in the electrochemotherapy plus bleomycin group than in the bleomycin monotherapy group

A eletroquimioterapia (EQT) é uma modalidade de tratamento recente que se baseia na associação de quimioterápicos potencializados pela eletroporação. Possui indicação para neoplasias sólidas de origens histológicas distintas, apresentando baixa morbidade e elevada eficiência. A ação da EQT ocorre em múltiplos sítios, tanto envolvendo a quebra da molécula de DNA, quanto exercendo efeito sobre a vasculatura tumoral. No presente estudo buscou-se maior compreensão dos eventos vasculares, avaliando-se qualitativamente e quantitativamente, com auxílio de marcação imunológica, com fator VIII e VEGF-A, a vascularização do tumor de Ehrlich implantado na forma sólida em camundongos, não tratados e submetidos à EQT com bleomicina, após sete dias de tratamento. No intuito de melhor elucidar os fenômenos vasculares, também foi investigado o efeito do resveratrol associado à EQT. O resveratrol, presente em vegetais como as uvas, possui efeitos de inibição do HIF1-α, reconhecida proteina que estimula a angiogênese em condições de hipoxia tumoral. Os animais submetidos à quimioterapia com bleomicina não apresentaram redução de volume tumoral, ao contrário dos que sofreram EQT com o mesmo fármaco. Evidenciou-se maior densidade microvascular tumoral em animais tratados com quimioterapia, quando comparados aos não tratados e aos submetidos à EQT. O tratamento com resveratrol diminuiu a expressão de VEGF-A e obteve efeito mais pronunciado quando associado à EQT com bleomicina. Através dos fenômenos pesquisados pôde-se evidenciar que a EQT com bleomicina foi efetiva na redução do volume do tumor de Ehrlich e que houve redução da atividade proliferativa assim como da densidade microvascular tumoral. Também observou-se que o resveratrol, ainda mais quando associado à EQT com bleomicina, reduz a proliferação tumoral e a expressão de VEGF-A / The electrochemotherapy (EQT) is a new treatment modality based on the association of chemotherapy potentiated by electroporation. Has indication for solid neoplasms of histological distinct origins, presenting low morbidity and high efficiency. The action of the EQT occurs in multiple sites, both involving the breakage of the DNA molecule, as having an effect on the tumor vasculature. The present study aimed at better understanding of vascular events, evaluating qualitatively and quantitatively, using immune labeling, with factor VIII and VEGF-A, the vascularization of the Ehrlich tumor implanted in solid form in mice, untreated and submitted to EQT with bleomycin, after seven days of treatment. In order to better elucidate the vascular phenomena, was also investigated the effect of resveratrol associated with EQT. The resveratrol present in plants such as grapes, has inhibitory effects of HIF1-α, a protein that is recognized to stimulates angiogenesis in tumor hypoxia. The animals submitted to chemotherapy with bleomycin showed no reduction of tumor volume, unlike those who suffered EQT with the same drug. It was evidenced increased microvessel density tumor in animals treated with chemotherapy, when compared to untreated and those submitted to EQT. The treatment with resveratrol decreased the expression of VEGF-A and obtained effect was more pronounced when associated to the EQT with bleomycin. This research can prove that the EQT with bleomycin was effective in reducing the volume of Ehrlich tumor and that there was a reduction of proliferative activity as well as of microvascular density tumor. Also it was observed that the resveratrol, even more when associated with EQT with bleomycin, reduces the tumor proliferation and the expression of VEGF-A

A fibrose pulmonar é uma via comum de várias doenças agudas e crônicas do interstício pulmonar que pode resultar na cicatrização anormal do pulmão. Há acúmulo excessivo das proteínas da matriz extracelular levando a desestruturação das paredes alveolares, e consequente perda das trocas gasosas pelos pulmões. As células NKT são grande fonte de citocinas e podem ser cruciais na polarização de macrófagos para o fenótipo M2. O projeto tem a hipótese de que as células NKT podem influenciar o desenvolvimento da fibrose pulmonar via modulação de macrófagos. Para isso, animais selvagens e knockout para células NKT invariante (Ja18-/-) foram submetidos ao protocolo de indução de fibrose pulmonar pela bleomicina. Os resultados indicam que o grupo Ja18-/- assim como os grupos experimentais que receberam agonistas para células NKT apresentaram uma proteção contra a fibrose pulmonar uma vez que houve menor síntese de hidroxiprolina, deposição de colágeno, citocinas pró-fibróticas e a manutenção de macrófagos M1 no tecido pulmonar. / Pulmonary fibrosis is a common pathway of various acute and chronic interstitial lung diseases that may result in abnormal healing of the lung. There is excessive accumulation of extracellular matrix proteins, leading to disruption of the alveolar walls and the consequent loss of gas exchange through the lungs. NKT cells are a big source of cytokines and may be crucial in the polarization of macrophages to the M2 phenotype. This project has hypothesized that NKT cells can influence the development of pulmonary fibrosis through modulation of macrophages. For this, wild and knockout invariant NKT cells (Ja18-/-) mice were subjected to the protocol of bleomycin induced pulmonary fibrosis. The results indicate that the group Ja18-/- as well as the experimental groups receiving agonists for NKT cells showed protection against lung fibrosis since there was less synthesis of hydroxyproline, collagen deposition, pro-fibrotic cytokines and maintenance of macrophages M1 in lung tissue.