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Evolução das estratégias reprodutivas de Bothrops jararaca (Serpentes: Viperidae) / Evolution of reproductive strategies of Bothrops jararaca (Serpentes: Viperidae)Karina Nunes Kasperoviczus Braz 13 August 2013 (has links)
Esse trabalho teve como objetivo estudar aspectos importantes das estratégias reprodutivas de machos e fêmeas de Bothrops jararaca do clado norte (CN) e sul (CS) e das ilhas de Búzios (SP), Ilhabela (SP) e ilha dos Franceses (ES). Para isso, foram analisados exemplares de B. jararaca preservadas de diversas coleções zoológicas. Machos e fêmea de B. jararaca do CN foram significativamente maiores que os machos e fêmeas CS, no entanto tiveram cabeças relativamente menores e foram menos robustos. Fêmeas do CN têm em média maior fecundidade e filhotes maiores do que fêmeas do CS. O ciclo reprodutivo de machos e fêmeas de ambas as populações é sazonal e não variou entre as estações do ano. Fêmeas do CN e do CS tem cópula outonal. A vitelogênese tem início no final do verão e fêmeas grávidas são observadas a partir do final do inverno. Nascimentos de B. jararaca de ambos os clados podem ser observados principalmente no verão e podem se estender até o início do outono. A estocagem de espermatozoides no útero e no infundíbulo foi observada principalmente no outono e inverno. Ciclos reprodutivos de machos de ambos os clados são considerados do tipo pós-nupcial ou do tipo I. O início da produção de espermatozoides é na primavera e a fase ativa pode ser observada no verão. No outono e no inverno, os testículos estão inativos. Estocagem de espermatozoides nos ductos deferentes foi observada durante todos os meses do ano e o segmento sexual renal (SSR) apresentou a fase mais ativa (fase secretora) na primavera e verão (sincronizado com a espermatogênese nos testículos) e fase não secretora no outono e no inverno. Esse padrão dos ciclos dos machos foi observado em ambos os clados. Dessa forma, foram observadas variações geográficas nas características de histórias de vida entre as populações do CN e CS, porém, não foram observadas diferenças entre os padrões de ciclos reprodutivos. Assim, o ciclo reprodutivo de machos e fêmeas de B. jararaca do CN e do CS são conservativo na espécie. / This research aimed to study important aspects of reproductive strategies in male and female of Bothrops jararaca from north clade (CN), south clade (CS) including the islands of Búzios (SP), Ilhabela (SP), and Franceses (ES). We analyzed specimens of B. jararaca preserved on several zoological collections. Male and female of B. jararaca from CN were significantly longer than male and female from CS, however they had relatively smaller heads and were less robust. Male and female of B. jararaca from CN were significantly larger than individuals from CS, had relatively smaller heads and were less robust. Females from CN had on average higher fecundity and larger offspring than females of CS. The reproductive cycle of males and females from both populations was seasonal and the timing of events was also similar between clades. Females of CN and CS have autumn mating season. The vitellogenesis starts in the end of the summer and pregnant females are observed from late winter. Births of B. jararaca occurred from early summer to the beginning of autumn. Sperm storage in the uterus and infundibulum was mainly observed during autumn and winter. Reproductive cycles of male of both clades are type postnuptial or a type I. The beginning of the sperm production occurs in spring and the active phase was observed in the summer. During autumn and winter, the testicles are inactive. Sperm storage in the different ducts was observed throughout the year and the sexual segment of the kidney (SSK) shows a more active phase during spring and summer and non-secretory phase on autumn and winter. This pattern of cycles of male was observed in both clades. In conclusion, there is geographical variation in life-history characteristics between CN and CS populations. However, differences among the reproductive cycle pattern were not evident. Then, the reproductive cycles of male and female of CN and CS are conservative in the species.
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Mediação química da hiperagesia induzida pelos venenos de serpentes Bothrops jararaca e Bothrops asper e por uma miotoxina com atividade de fosfolipase A2 isolada do veneno de Bothrops asper / Chemical mediation of hyperalgesia induced by Bothrops jararaca and Bothrops asper snake venoms and by a phospholipase A2 miotoxin isolated from Bothrops asper venom.Marucia Chacur 01 December 2000 (has links)
Os venenos do gênero Bothrops induzem efeitos locais caracterizados por hemorragia, necrose, edema e dor intensa. Apesar da importância clínica do fenômeno de dor, os estudos sobre os mecanismos envolvidos na gênese deste fenômeno são ainda escassos. Além disso, não existem dados sobre a capacidade do antiveneno em neutralizar este fenômeno. Neste trabalho foi investigada, a capacidade dos venenos de Bothrops jararaca, Bothrops asper e da miotoxina III (Fosfolipase A2, variante Asp 49), uma toxina isolada do veneno de Bothrops asper, em induzir hiperalgesia em ratos, a mediação química deste fenômeno e a capacidade dos antivenenos em neutralizar esta ação dos venenos. A possível correlação entre a hiperalgesia e a resposta edematogênica causada pelos venenos ou miotoxina foi também avaliada. O limiar de dor foi determinado antes e em diferentes tempos após a administração dos venenos ou toxina, empregando o teste de pressão de pata de rato. Para o estudo da resposta edematogênica, o aumento do volume das patas posteriores foi determinado por pletismografia. Os venenos e a toxina, administrados por via intraplantar, nas doses de 5µg (VBj), 15µg (VBa) ou 10µg (MIII), induziram hiperalgesia e edema, com respostas máxima na 1a (VBj, MIII) ou 2a (VBa) hora, não sendo mais detectadas na 24a hora. Para o estudo da neutralização, foram utilizados o antiveneno botrópico produzido no Instituto Butantan e o antiveneno polivalente produzido no Instituto Clodomiro Picado da Costa Rica, administrados por via endovenosa, 15 min. ou imediatamente antes ou 15 min. após a injeção dos venenos. O AVIB, quando injetado 15 min. antes do VBj, foi capaz de reverter a hiperalgesia induzida pelo veneno. Em relação ao edema, esta inibição foi observada quando o antiveneno foi administrado 15 min. ou imediatamente antes do VBj. Por outro lado, o AVCP não interferiu com a dor e o edema acarretados pelo VBa. Quando o VBj e o VBa foram incubados, in vitro, por 30 min., a 370C com os AV correspondentes, a hiperalgesia e o edema foram abolidos. Estes resultados indicam que a incapacidade do AVCP, quando administrado in vivo, de bloquear a hiperalgesia e o edema induzidos pelo VBa, não é consequência da ausência de anticorpos específicos no antiveneno, uma vez que estes efeitos foram inibidos quando o veneno foi pré-incubado com o antiveneno. Para avaliação da mediação química da hiperalgesia e do edema, os animais foram submetidos a tratamentos com inibidores de síntese, antagonistas de receptores, anticorpos ou drogas depletoras destes mediadores. Os resultados mostraram que o Hoe-140, dexametasona e NDGA inibem a hiperalgesia induzida pelo VBa, enquanto que apenas a prometazina interferiu com o edema causado pelo veneno. A hiperalgesia induzida pela MIII foi revertida pelo tratamento com prometazina, metisergida, Hoe-140, dexametasona e por NDGA, enquanto que o edema foi inibido apenas por prometazina e dexametasona. Estes dados sugerem que: a) a MIII é um importante componente do veneno para a geração de hiperalgesia, b) a bradicinina e os derivados da lipoxigenase são mediadores da dor acarretada pelo VBa e pela MIII, c) histamina e serotonina participam também da hiperalgesia induzida pela miotoxina e d) a histamina é mediador do edema induzido pelo VBa e pela MIII. Com relação à hiperalgesia induzida pelo VBj, somente o tratamento com Hoe-140 diminuiu este fenômeno, indicando a participação da bradicinina. Por outro lado, este tratamento não foi capaz de interferir com o edema induzido por este veneno. Cabe ressaltar que TEIXEIRA et al. (1994) demonstraram a participação de eicosanóides e PAF na hiperalgesia induzida pelo VBj. Os dados em conjunto sugerem ainda, dissociação entre os fenômenos de dor e edema acarretados por ambos os venenos e pela miotoxina. / Bothrops venoms cause pronounced local tissue-damage characterized by hemorrhage, myonecrosis, edema and pain. Venom-induced pain has been poorly investigated, despite its clinical relevance. Furthermore, the ability of antivenom to neutralize hyperalgesia induced by these venoms is not known. In the present study the hyperalgesia and edema induced by Bothrops jararaca (BjV) and Bothrops asper (BaV) venom and by myotoxin III-MIII (Asp49- phospholipase A2), a toxin isolated from BaV, were investigated. The chemical mediators involved in these phenomena and the ability of the antivenom to neutralize the hyperalgesia and edema induced by these venoms were also investigated. Pain threshold was assessed before and at several intervals after venom injection, using the rat paw pressure test. Edema of paw was measured phethysmographically at the same periods of time. The intraplantar injection of BjV (5µg/paw), BaV (15µg/paw) or MIII (10µg/paw) caused hyperalgesia and edema, whose peak were observed at the 1st (BjV, MIII) or 2nd (BaV) hours after venom/toxin administration, decreasing thereafter. For neutralization studies, the antivenoms produced either at Instituto Butantan from Brazil (AVIB) or Instituto Clodomiro Picado from Costa Rica (AVCP) were administered intravenously 15 min prior to, or immediately before, or 15 min after venoms injection. When the antivenom from Instituto Butantan was injected 15 min. before BjV, the hyperalgesia and edema were abolished. Furthermore, partial inhibition of edema was also observed when the antivenom was injected together with BjV. On the other hand, hyperalgesia and edema induced by BaV were not modified by AVCP. Incubation of BjV and BaV, for 30 min. at 37oC, with the antivenoms in vitro, abolished the hyperalgesia and edema. The inability of the in vivo treatment with antivenom in abolishing hyperalgesia and edema induced by BaV seems not to be related to the lack of neutralizing antibodies in antivenom, because neutralization was achieved in pre-incubation experiments. In order to investigate the chemical mediation of hyperalgesia and edema induced by the venoms or toxin, animals were treated with several drugs. Pretreatment with Hoe-140, dexamethasone and NDGA blocked the hyperalgesia induced by BaV, whereas only promethazine reduced the edema induced by this venom. The MIII-induced hyperalgesia was blocked by promethazine, methysergide, Hoe-140, dexamethasone and NDGA, whereas the edema was reduced only by promethazine and dexamethasone. These results suggest that: a) MIII may contribute to the BaV-induced hyperalgesia, b) bradykinin and leukotrienes mediate the BaV- and MIII-induced pain and MIII; c) histamine and serotonin also participate in the myotoxin-induced hyperalgesia and d) the edema induced by BaV and MIII is mediated by histamine. Pre-treatment of the animals with Hoe-140 abolished BjV-induced hyperalgesia, suggesting that bradykinin may mediate the venom-induced hyperalgesia. However, this treatment did not modify the BjV-induced edema. It is important to stress that previous studies have shown that BjV-induced hyperalgesia is mediated, at least partially, by eicosanoids and PAF (TEIXEIRA et al.,1994). The data presented herein also suggest that distinct mechanisms may be involved in the development of hyperalgesia and edema induced by both venoms and myotoxin III.
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Alterações hemostáticas e de estado redox no envenenamento por Bothrops jararaca: modulação pelo antioxidante natural rutina (quercetina-3-rutinosídeo) / Hemostatic and redox status alterations during Bothrops jararaca envenomation: modulation by the natural antioxidant rutin (quercetin-3-rutinoside)Ana Teresa Azevedo Sachetto 05 April 2018 (has links)
Os acidentes ofídicos são considerados um grande problema de saúde pública e no Estado de São Paulo a serpente Bothrops jararaca é o agente considerado mais relevante epidemiologicamente. O antiveneno é o único medicamento oficialmente aprovado para o tratamento de picadas de serpentes e, apesar de ser eficaz em diversos aspectos, mostra-se ineficaz em relação a complicações secundárias do envenenamento, como o estresse oxidativo/nitrosativo, caracterizado por um desequilíbrio no estado redox, que pode ser extremamente deletério aos pacientes. Portanto, vê-se necessária a busca por terapias complementares que possam combater o estresse oxidativo/nitrosativo. Ademais, distúrbios da hemostasia observados em envenenamentos pela B. jararaca, tais como a plaquetopenia, a hipofibrinogenemia e o aumento da atividade do fator tissular (TF) plasmático podem ter também como causa indireta o estresse oxidativo/nitrosativo, induzido por componentes do veneno de B. jararaca (BjV). Recentemente, demonstrou-se que a regulação da atividade biológica do TF, a proteína responsável pela iniciação da cascata de coagulação in vivo, pode ser controlada pela isomerase de dissulfeto proteico (PDI) e que a atividade da PDI é inibida in vivo pela quercetina-3-rutinosídeo (rutina), um antioxidante natural encontrado em plantas e alimentos. Considerando essas premissas, o presente trabalho objetivou investigar em camundongos injetados com o veneno de B. jararaca (BjV): (a) a ocorrência de distúrbios do estado redox; (b) as alterações hematológicas e hemostáticas (em plasma e tecidos) associadas ao desequilíbrio do estado redox; (c) a atividade da rutina como agente modulador sobre essas alterações. Para isso, camundongos Swiss (30-35 g) foram divididos em 4 grupos experimentais: controle salina (salina, controle negativo), controle rutina (rutina+salina), BjV+salina (BjV+salina, controle positivo) e BjV+rutina (BjV+rutina, tratamento). Após 3, 6 e 24 h da administração dos tratamentos (via s.c.), foram coletados sangue e fragmentos de tecidos para posteriores análises. O envenenamento induziu um aumento de espécies reativas, diminuição da capacidade antioxidante total, alterações hematológicas (plaquetopenia, neutrofilia e diminuição de eritrócitos), distúrbios hemostáticos (hipofibrinogenemia, prolongamento do tempo de protrombina e aumento da atividade de TF no plasma), além de diminuir a expressão proteica de PDI no coração. A rutina não inibiu in vitro a atividade biológica de proteínas presentes no BjV (metaloproteinases, serinaproteases, fosfolipases A2 e L-aminoácido oxidases) e nem mesmo a agregação plaquetária induzida pelo veneno. No entanto, a administração do veneno incubado com rutina foi capaz de reduzir os níveis de espécies reativas, impedir a queda de eritrócitos, normalizar os níveis de fibrinogênio e o tempo de protrombina e alterar a atividade de TF e expressão proteica de TF e PDI em tecidos. Desse modo, concluímos que a rutina foi capaz de favoravelmente modular importantes alterações hemostáticas e de estado redox no envenenamento por B. jararaca, o que indica seu grande potencial como agente terapêutico complementar em envenenamentos / Snakebites are a major public health issue and in São Paulo State, and Bothrops jararaca snakes are considered the most important agents epidemiologically. Antivenom is the only officially approved treatment for snakebites and although effective in many aspects, it is ineffective in combating secondary complications induced by envenomation, e.g. oxidative/nitrosative stress (ONS), which can be extremely deleterious to patients. Therefore, it is necessary to search for new complementary therapies that could attenuate ONS. Furthermore, the hemostatic disturbances in B. jararaca envenomation - characterized by the presence of thrombocytopenia, hypofibrinogenemia and increased tissue factor (TF) activity in plasma - could be indirectly evoked by ONS induced by B. jararaca venom (BjV) components. Recently, the biological activity of TF - the protein responsible for initiating the extrinsic pathway of the coagulation cascade - was demonstrated to be regulated by protein disulfide isomerase (PDI), which in turn, can be inhibited in vivo by quercetin-3-rutinose (rutin), a natural antioxidant found in plants and diet. Based on that, the present study aimed to investigate in mice injected with BjV: (a) the alterations in redox status in plasma and tissues; (b) the hematological/hemostatic disturbances (in plasma and tissues) associated with the imbalance in redox status; (c) the activity of rutin as a modulatory agent on those alterations. Swiss mice (30-35 g) were divided in four experimental groups: saline control (saline, negative control), rutin control (rutin+saline), BjV+saline (BjV+saline, positive control) and BjV+rutin (BjV+rutin, treatment) and after 3, 6 and 24 h of the injection of treatments (s.c. route), blood and tissues were collected to further analyses. Envenomation induced an increase in reactive species, a decrease in total antioxidant capacity, hematological alterations (thrombocytopenia, neutrophilia and a decrease in red blood cell counts), hemostatic disturbances (hypofibrinogenemia, prolonged prothrombin time and an increase in the TF activity in plasma), and a decrease in protein expression of PDI in the heart. In vitro, rutin failed to inhibit the biological activity of the main BjV enzymes (metalloproteinases, serine proteases, phospholipases A2 and L-amino acid oxidases) and BjV-induced platelet aggregation. However, when the venom was incubated with rutin, there were reduced reactive species levels, less intense red blood cell drops, recovery of fibrinogen levels and prothrombin time, and alteration of TF activity and protein expression of TF and PDI in tissues. Therefore, we conclude that rutin favorably modulated important hemostatic and redox status alterations in B. jararaca envenomation, indicating its great potential as a complementary therapeutic agent for snakebites
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Estudo comparativo do veneno botrópico de referência em relação ao veneno das serpentes Bothrops jararaca nascidas em cativeiro no Laboratório de Herpetologia do Instituto Butantan. / Comparative study between Bothropic reference venom and venom from Brazilian Bothrops jararaca snake born in captivity in the Herpetology Laboratory of Butantan Institute.Iasmim Baptista de Farias 29 September 2016 (has links)
Em 1987 o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde iniciou o uso do Veneno Botrópico de Referência Nacional (VBRN), que é a primeira extração das serpentes B. jararaca recém-chegadas da natureza. Em 10 anos notou-se uma queda de 67,65% na recepção de serpentes ao Instituto Butantan (IB), e na distribuição geográfica, resultando em uma maior heterogeneidade na composição do VBRN. Assim, comparamos os venenos das serpentes nascidas em cativeiro (VP) do Laboratório de Herpetologia do IB com o VBRN, para verificar a possibilidade de incorporar o VP na preparação dos lotes do VBRN. O VP mostrou-se estatisticamente semelhante ao VBRN nos testes de dosagem de proteínas, SDS-PAGE, 2DE, cromatografia, atividade fosfolipásica, ELISA, Western blotting, dose mínima coagulante (plasma) e hemorrágica, enquanto para as atividades de L-aminoácido oxidase, caseinolítica, zimografia e dose mínima coagulante (fibrinogênio) o VP mostrou-se diferente do VBRN. Para as doses letais e efetiva dos venenos o pool do VP com VBRN foi mais eficaz do que os VP e o VBRN sozinhos. / In 1987, The National Institute of Quality Control in Health in Brazil (INCQS) established the Brazilian Reference Bothrops Venoms (BRBV), which should be composed of the first extractions of newcomers wild snakes. In 10 years there has been a decrease of 67.65% in the reception snakes to Butantan Institute (IB), and geographic distribution, resulting in a higher heterogeneity in BRBV composition. So, we compared the venom samples of snakes born in captivity (SVP) of IB Herpetology Laboratory with BRBV to check the possibility of incorporating the SVP in the preparation of batches of BRBV. SVP was statistically similar to BRBV the proteins dosage, SDS-PAGE, 2DE, chromatography, phospholipase, ELISA, Western blotting, minimum coagulant dose (plasma) and hemorrhage dose, while for L-amino acid oxidase activity, caseinolytic, zymography and minimum coagulant dose (fibrinogen) SVP was shown to be different from BRBV. For effective and lethal doses of pool with SVP and BRBV it was more effective than SVP and BRBV alone.
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Efeitos toxicológicos dos componentes presentes no veneno da serpente B. jararaca sobre o testículo de camundongosSantos, Rodrigo Bonfim Simão dos January 2016 (has links)
Orientadora: Profa Dra Carlos Alberto Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2016. / No Brasil a especie com maior numero de registros de acidentes ofidicos e a serpente
Bothrops jararaca (Bj). Os efeitos causados pelo envenenamento amplamente caracterizados
sao inflamacao no local, edema, necrose tecidual no local da picada e, acoes sistemicas, como
hemorragia, coagulopatia e hipotensao arterial. Os efeitos observados ocorrem em funcao da
presenca de metaloproteinases, fosfolipase, disintegrinas e peptideos biologicamente ativos
presentes no veneno. Apesar disso, nao ha relatos na literatura sobre os eventuais efeitos do
envenenamento no sistema reprodutor masculino de pacientes acidentados. Assim, em linhas
gerais, o presente estudo visa avaliar os efeitos de componentes presentes no veneno de Bj
sobre o testiculo de camundongos. Animais machos (n=6 por grupo) com 2 meses de idade,
com peso entre 30 e 35 g foram separados em dois grupos. No primeiro grupo, estao os
animais tratados com fracao peptidica (FP), solucao contendo componentes presentes no
veneno de Bj com peso molecular inferior a 10 KDa, via intratesticular (i.t) na dose de 5¿Êg
diluida em 20 ¿ÊL de solucao salina em dose unica, enquanto que o outro grupo recebeu FP
com concentracao de 5¿Êg diluida em 20 ¿ÊL de solucao salina durante 15 dias via
intraperitoneal (i.p). Apos o periodo de tratamento, os animais foram eutanasiados e tiveram
os testiculos fixados e submetidos a analises morfologica e morfotmetrica. Posteriormente,
um outro grupo de animais (n=6) foi tratado via intramuscular, e fragmentos de musculo e
testiculo foram submetidos a analise por FT-Raman. Os resultados mostraram que a FP,
quando injetada via i.p ou via i.t, provocam intensas alteracoes no epitelio seminifero. Ainda,
a FP promoveu o aumento na quantidade de alguns tipos celulares (Espermatocito paquiteno;
Espermatide circular; e Figuras meioticas) com papel importante na espermatogenese quando
tratados via i.p, e diminuicao no numero de celulas germinativas (Esermatocito paquiteno;
Espermatide circular; Espermatogonia tipo B; e Espermatocito zigoteno) durante os estadios
de espermiogenese quando tratados via i.t., sendo que os valores de celulas obtidas
apresentam diferencas estatisticas com valor de p<0,05. Para avaliar os efeitos toxicologicos
do veneno sobre o testiculo, foi empregada a tecnica FT-Raman, que se mostrou efetiva na
caracterizacao do envenenamento analisando fragmentos de musculo estriado esqueletico,
assim como, pelas analises morfologica do musculo e niveis sericos de creatino quinase.
Entretanto, quando aplicada a tecnica FT-Raman na analise de testiculo, nao foi possivel
identificar alteracoes que evidenciaram a acao toxicologica do veneno sobre este orgao.
Apesar disso, analise dos espectros pelo estudo dos componentes principais, verificou-se
diferencas no grupo tratado com veneno botropico em relacao ao controle. Assim, os dados
obervados abrem possibilidades de estudo utilizando outras tecnicas para avaliar niveis de
expressao de proteinas importantes que indicam eventuais comprometimentos da
espermatogenese. / The Bothrops jararaca snake shows the highest number of accidents recorded by the health
ministry in Brazil. The effects caused by envenomation can be characterized by edema, tissue
necrosis in the local bite and, systemic actions, such as bleeding, coagulopathy and
hypotension. These effects are caused by metalloproteinases, phospholipase, disintegrins andbiologically active peptides present in the venom. However, there are no reports in the
literature. In the present study, we evaluated if the envenomation effects induced via i.m cause changes on the testis functionality. Male animals at 2 months of age and weighing between 30g and 35g, were divided into 2 groups. The first one received peptide fraction (FP), solution containing components present in Bj venom with a molecular weight below 10 kDa, with dose about 5ìg diluted in 20ìL of saline solution, via intratestis (i.t) in single dose, while the second group received FP 5ìg diluted in 20ìL of saline solution via intraperitoneal (i.p) once a day, during 15 days. Subsequently another group of animals was poisoned, so induced via intramuscular, and testis and muscle were collected after 24h of treatment, and the fragments were subjected to analysis by FT-Raman. FP affected the seminiferous epithelium structure in the groups treated via i.p. and via i.t. Quantitative analysis of seminiferous epithelium showed an increase of some cell types (Spermatocyte pachytene; Spermatid circular; and Meiotic figures) with an important role in spermatogenesis when treated via i.p., and decrease in the number of germ cells (Spermatocyte pachytene; Spermatid circular; Spermatogonia type B, and Spermatocyte zygotene) during the stages of spermatogenesis when treated via i.t. The differences of number of germ cells obtained between the groups show statistical diference with p value <0.05. To evaluate the toxicological effects of the poison on the testis, we used the FT-Raman. The technique was effective in muscle fragments analyses. confirming morphology analysis and the level of creatine kinase, however, when applied the FT-Raman technique in testicular analysis was not possible to identify changes that can complete toxicological poison action on this body as to derail matured germ cells, although further analysis of the spectra, which uses key components, showed differences, opening possibilities to invest time in different analyzes that can prove or disprove this hypothesis.
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Atividade antiof?dica do decocto das folhas de jatropha gossypiifolia l. frente o veneno de bothrops jararacaSilva, Juliana Felix da 25 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-25 / Os acidentes of?dicos s?o um grave problema de sa?de p?blica. Cerca de 90 % dos casos na Am?rica Latina s?o associados a serpentes do g?nero Bothrops. Atualmente, a principal forma de tratamento dispon?vel ? a soroterapia antiveneno, que apresenta algumas desvantagens, tais como inefici?ncia quanto a efeitos locais, riscos de rea??es imunol?gicas, custo elevado e dif?cil acesso em algumas regi?es. Nesse contexto, a busca por novas alternativas para o tratamento de picadas de serpentes se faz relevante. Jatropha gossypiifolia L., esp?cie vegetal popularmente conhecida no Brasil como ?pinh?o-roxo?, ? bastante utilizada na medicina popular como antiof?dica. Portanto, o objetivo do presente estudo ? avaliar a atividade antiof?dica desta esp?cie frente ?s atividades enzim?ticas e biol?gicas do veneno da serpente Bothrops jararaca. O extrato aquoso das folhas foi preparado por decoc??o. Os estudos de inibi??o foram realizados in vitro, pr?-incubando-se quantidade fixa de veneno com diferentes quantidades do extrato por 60 min a 37?C, e in vivo, atrav?s do tratamento oral ou intraperitoneal dos animais, em diferentes doses, 60 min antes da inje??o do veneno. A atividade proteol?tica sobre a azocase?na foi eficientemente inibida, o que indica a??o inibit?ria frente metaloproteases (SVMPs) e/ou serinoproteases (SVSPs). O extrato inibiu a atividade fibrinogenol?tica, o que tamb?m foi confirmado por meio de zimografia, onde foi poss?vel visualizar que o extrato inibe preferencialmente enzimas fibrinogenol?ticas de 26 e 28 kDa. As atividades coagulante sobre o fibrinog?nio e sobre o plasma foram significativamente inibidas, sugerindo uma a??o inibit?ria sobre enzimas semelhantes ? trombina (SVTLEs), bem como sobre toxinas ativadoras de fatores da coagula??o. O extrato prolongou o tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa), o que sugere que o extrato inibe tanto SVTLEs quanto a trombina end?gena. A atividade defibrinogenante in vivo foi inibida eficientemente pelo extrato pela via oral, confirmando os resultados anteriores. A hemorragia local tamb?m foi inibida significativamente pela via oral, indicando uma a??o inibit?ria frente SVMPs hemorr?gicas. A atividade fosfolip?sica n?o foi inibida. Mesmo assim, as atividades edematog?nica e miot?xica foram eficientemente inibidas, por via oral e intraperitoneal, o que pode indicar a??o inibit?ria do extrato frente fosfolipases (PLA2) do tipo Lys49 e/ou SVMPs, ou ainda uma a??o anti-inflamat?ria contra os mediadores qu?micos end?genos. Com rela??o ao poss?vel mecanismo de a??o, observou-se que o extrato n?o apresenta atividade proteol?tica, por?m apresenta capacidade de precipitar prote?nas. Adicionalmente, o extrato apresentou significativa atividade antioxidante em diferentes modelos, o que pode justificar ao menos parcialmente a atividade antiof?dica apresentada. A atividade quelante de metais apresentada pelo extrato pode ser correlacionada ? inibi??o de SVMPs, uma vez que estas s?o enzimas dependentes de metais. A an?lise fitoqu?mica revelou a presen?a de a??cares, alcaloides, flavonoides, taninos, terpenos e/ou esteroides e prote?nas, dos quais os flavonoides podem ser apontados como compostos majorit?rios, tendo em vista o perfil cromatogr?fico obtido por cromatografia em camada delgada (CCD). Em conclus?o, os resultados demonstram que o decocto das folhas de J. gossypiifolia apresenta potencial atividade antiof?dica, inclusive atuando sobre os efeitos locais da picada, sugerindo que esta esp?cie pode ser utilizada como uma nova fonte de mol?culas bioativas contra venenos botr?picos. / Antiophidic activity from decoct of Jatropha gossypiifolia L. leaves against Bothrops
jararaca venom. Snakebites are a serious worldwide public health problem. In Latin
America, about 90 % of accidents are attributed to snakes from Bothrops genus. Currently, the
main available treatment is the antivenom serum therapy, which has some disadvantages such
as inability to neutralize local effects, risk of immunological reactions, high cost and difficult
access in some regions. In this context, the search for alternative therapies to treat snakebites
is relevant. Jatropha gossypiifolia L., a medicinal plant popularly known in Brazil as
?pinh?o-roxo?, is very used in folk medicine as antiophidic. So, the aim of this study is to
evaluate the antiophidic properties of this species against enzymatic and biological activities
from Bothrops jararaca snake venom. The aqueous leaf extract of J. gossypiifolia was
prepared by decoction. The inhibition studies were performed in vitro, by pre-incubation of a
fixed amount of venom with different amounts of extract from J. gossypiifolia for 60 min at
37 ?C, and in vivo, through oral or intraperitoneal treatment of animals, in different doses, 60
min before venom injection. The proteolytic activity upon azocasein was efficiently inhibited,
indicating inhibitory action upon metalloproteinases (SVMPs) and/or serine proteases
(SVSPs). The extract inhibited the fibrinogenolytic activity, which was also confirmed by
zymography, where it was possible to observe that the extract preferentially inhibits
fibrinogenolytic enzymes of 26 and 28 kDa. The coagulant activity upon fibrinogen and
plasma were significantly inhibited, suggesting an inhibitory action upon thrombin-like
enzymes (SVTLEs), as well as upon clotting factor activators toxins. The extract prolonged
the activated partial thromboplastin time (aPTT), suggesting an inhibitory action toward not
only to SVTLEs, but also against endogenous thrombin. The defibrinogenating activity in
vivo was efficiently inhibited by the extract on oral route, confirming the previous results. The
local hemorrhagic activity was also significantly inhibited by oral route, indicating an
inhibitory action upon SVMPs. The phospholipase activity in vitro was not inhibited.
Nevertheless, the edematogenic and myotoxic activities were efficiently inhibited, by oral and
intraperitoneal route, which may indicate an inhibitory effect of the extract upon Lys49
phospholipase (PLA2) and/ or SVMPs, or also an anti-inflammatory action against
endogenous chemical mediators. Regarding the possible action mechanism, was observed that
the extract did not presented proteolytic activity, however, presented protein precipitating
action. In addition, the extract showed significant antioxidant activity in different models,
which could justify, at least partially, the antiophidic activity presented. The metal chelating
action presented by extract could be correlated with SVMPs inhibition, once these enzymes
are metal-dependent. The phytochemical analysis revealed the presence of sugars, alkaloids,
flavonoids, tannins, terpenes and/or steroids and proteins, from which the flavonoids could be
pointed as major compounds, based on chromatographic profile obtained by thin layer
chromatography (TLC). In conclusion, the results demonstrate that the J. gossypiifolia leaves
decoct present potential antiophidic activity, including action upon snakebite local effects,
suggesting that this species may be used as a new source of bioactive molecules against
bothropic venom.
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An?lise fitoqu?mica e avalia??o das atividades anti-inflamat?ria, antipe?onhenta e citot?xica de extratos aquosos de Aspidosperma pyrifolium e Ipomoea asarifoliaLima, Maira Concei??o Jer?nimo de Souza 17 April 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-04-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Envenenamentos causados por animais pe?onhentos s?o um grave problema de
sa?de p?blica, enquadrando-se nesse cen?rio, principalmente, os escorpi?es e as
serpentes. Tityus serrulatus ? considerado o escorpi?o mais venenoso da America
do Sul, devido ? alta toxicidade do seu veneno, respons?vel por causar acidentes
graves, principalmente em crian?as. A esp?cie Bothrops jararaca ? uma serpente
que possui no seu veneno uma mistura complexa de enzimas, pept?deos e outras
mol?culas. As toxinas do veneno de B. jararaca induzem respostas inflamat?rias
locais e sist?micas. O tratamento de escolha para os casos graves de
envenenamento ? a administra??o intravenosa do antiveneno especifico. Por?m,
nem sempre esse tratamento est? acess?vel para os moradores de zonas rurais, que
fazem uso de extratos de plantas medicinais. Nesse contexto, extratos aquosos,
fra??es e compostos isolados de Aspidosperma pyrifolium (pereiro) e Ipomoea
asarifolia (salsa), usadas na medicina popular, foram objeto de estudo deste trabalho
para avaliar a atividade anti-inflamat?ria nos modelos de peritonite induzida por
carragenina e peritonite induzida pelo veneno de T. serrulatus (VTs), e nos no
modelo de edema local e infiltrado inflamat?rio induzido pelo veneno de B. jararaca,
administrados pela via intravenosa. Os resultados dos ensaios de citotoxidade
utilizando o ensaio MTT demonstraram que os extratos aquosos das esp?cies
vegetais apresentaram baixa toxicidade para c?lulas provenientes de fibroblasto de
embri?o de camundongo (3T3). A an?lise qu?mica dos extratos por Cromatografia
L?quida de Alta Efici?ncia revelou a presen?a do flavon?ide rutina, na A. pyrifolium, e
rutina, ?cido clorog?nico e ?cido caf?ico, na I. asarifolia. Quanto ? avalia??o
farmacol?gica, os resultados demonstraram que o pr?-tratamento com extratos
aquosos e fra??es reduziram a migra??o de leuc?citos totais para a cavidade
abdominal no modelo de peritonite causada por carragenina e no modelo de
peritonite induzida por veneno de T. serrulatus. Ainda, esses grupos apresentaram
atividade antiedematog?nica, no modelo de edema local causado pelo veneno de B.
jararaca, e reduziram o infiltrado inflamat?rio para o m?sculo. Os soros (antiaracn?dico
e anti-botr?pico) espec?ficos para cada veneno atuaram inibindo a a??o
inflamat?ria dos venenos e foram utilizados como controles. Os compostos
identificados nos extratos, rutina, ?cido clorog?nico e ?cido caf?ico, tamb?m foram
testados e, assim como os extratos das plantas, exibiram efeitos anti-inflamat?rios
significativos, nas doses testadas. Dessa forma, esses resultados d?o evid?ncias, ?s
plantas estudadas, de potencial atividade anti-inflamat?ria. Esse ? o primeiro estudo
que avaliou os poss?veis efeitos terap?uticos de A. pyrifolium e I. asarifolia,
mostrando o potencial terap?utico que essas esp?cies possuem. / Envenomation caused by venomous animals, mainly scorpions and snakes, are a
serious matter of public health. Tityus serrulatus is considered the most venomous
scorpion in South America because of the high level of toxicity of its venom. It is
responsible for causing serious accidents, mainly with kids. The species Bothrops
jararaca is a serpent that has in its venom a complex mixture of enzyme, peptides
and other molecules. The toxins of the venom of B. jararaca induce local and
systemic inflammatory responses. The treatment chosen to serious cases of
envenomation is the intravenous administration of the specific antivenom. However,
the treatment is not always accessible to those residents in rural areas, so that they
use medicinal plant extracts as the treatment. In this context, aqueous extracts,
fractions and isolated compounds of Aspidosperma pyrifolium (pereiro) and Ipomoea
asarifolia (salsa, salsa-brava), used in popular medicine, were studied in this
research to evaluate the anti-inflammatory activity in the peritonitis models induced
by carrageenan and peritonitis induced by the venom of the T. serrulatus (VTs), and
in the local oedema model and inflammatory infiltrate induced by the venom of the B.
jararaca, administrated intravenously. The results of the assays of cytotoxicity, using
the MTT, showed that the aqueous extracts from the plant species presented low
toxicity to the cells that came from the fibroblast of the mouse embryo (3T3).The
chemical analysis of the extracts by High Performance Liquid Chromatography
revealed the presence of the rutin flavonoid, in A. pyrifoliu, and rutin, clorogenic acid
and caffeic acid, in I. asarifolia. Concerning the pharmacological evaluation, the
results showed that the pre-treatment using aqueous extracts and fractions reduced
the total leukocyte migration to the abdominal cavity in the peritonitis model caused
by the carrageenan and in the peritonitis model induced by the T. serulatus venom.
Yet, these groups presented anti-oedematous activity, in the local oedema model
caused by the venom of the B. jararaca, and reduced the inflammatory infiltrate to the
muscle. The serum (anti-arachnid and anti-bothropic) specific to each venom acted
inhibiting the inflammatory action of the venoms and were used as control. The
compounds identified in the extracts were also tested and, similar to the plant
extracts, showed meaningful anti-inflammatory effects, in the tested doses. Thus,
these results are indicating the potential anti-inflammatory activity of the plants
studied. This is the first research that evaluated the possible biological effects of the
A. pyrifolium and I. asarifolia, showing the biological potential that these species
have.
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Avaliação dos extratos vegetais de clusia fluminensis planch & triana na neutralização de atividades biológicas provocadas pelo veneno de Bothrops jararacaOliveira, Eduardo Coriolano de 03 April 2017 (has links)
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Oliveira, Eduardo Coriolano de [Dissertação, 2011].pdf: 1135569 bytes, checksum: 8920e224ba454e60a5daa5d299a3e9bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T16:56:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Oliveira, Eduardo Coriolano de [Dissertação, 2011].pdf: 1135569 bytes, checksum: 8920e224ba454e60a5daa5d299a3e9bb (MD5) / O envenenamento ofídico, dentre os acidentes com animais peçonhentos é o mais
importante deles, pela sua frequência e gravidade. No Brasil, as serpentes do
gênero Bothrops são responsáveis por 90 % dos acidentes ofídicos. Os extratos
vegetais apresentam uma diversidade de moléculas com diversas ações
farmacológicas. As espécies de Clusia são de grande interesse paisagístico, porém
duas espécies deste gênero, C. torresii Standl. e C. palmana Standl. apresentam
propriedades antiofídicas contra o veneno de B. asper. O objetivo do nosso trabalho
foi avaliar as propriedades antiofídicas da espécie Clusia fluminensis Planch &
Triana, utilizando diferentes partes vegetais e solventes de diferentes polaridades
para o preparo dos extratos, assim como uma benzofenona isolada do extrato
hexânico da flor, frente atividades biológicas do veneno de B. jararaca. Ensaios in
vitro mostraram que os extratos hexânicos e metanólicos das folhas e frutos, na
proporção de 1:50 (veneno:extrato) foram capazes de inibir 100 % a atividade
proteolítica do veneno de B. jararaca (9 μg/mL), usando-se azocaseína como
substrato; com exceção do extrato hexânico do caule e da benzofenona que inibiram
cerca de 50 %. Na atividade hemolítica do veneno de B. jararaca (88 μg/mL), a
inibição foi de 40 %, nas proporções de 1:10 e 1:20. Por outro lado, os extratos
nestas mesmas proporções não foram capazes de neutralizar a coagulação do
plasma induzida pelo veneno de B. jararaca (22 μg/mL), de forma significativa. Em
ensaios in vivo (atividade hemorrágica) apenas o extrato acetônico do fruto, na
proporção de 1:20, foi capaz de reverter totalmente a hemorragia causada pelo
veneno de B. jararaca (16,7 μg/g). Sendo assim, nossos resultados mostram que a
planta C. fluminensis pode ser uma fonte de moléculas com propriedades
antiofídicas, especificamente contra o veneno de B. jararaca, e que este efeito
neutralizante está diretamente relacionado a parte do vegetal e a polaridade do
solvente utilizado na extração, Além disso podemos concluir que a benzofenona não
é responsável, isoladamente, pelos resultados obtidos / Snake venom poisoning, among accidents with venomous animals is the most
important of them, by their frequency and severity. In Brazil, Bothrops are
responsible for 90 % of snake bites. The plant extracts have a variety of molecules
with several pharmacological actions. Clusia species are of great landscape interest,
but two species of this genus, C. torresii Standl. and C. palmana Standl. have
properties against snake venom B. asper. The aim of our study was to evaluate the
antivenom properties the species Clusia fluminensis Triana & Planch, using different
plant parts and solvents of different polarities for the preparation of extracts, as well
as a benzophenone isolated from the hexane extract of the flower, against biological
activity of the venom of B. jararaca. In vitro assays showed that the hexane and
methanolic extracts of leaves and fruits at a ratio of 1:50 (venom: extract) were able
to inhibit 100 % proteolytic activity of the venom of B.jararaca (9μg/mL), using
azocaseíne as substrate, with the exception of hexanic extract from stem and
benzophenone which inhibited about 50 %. In the hemolytic activity of the venom of
B. jararaca (88 μg/mL), inhibition was 40 %, the proportions of 1:10 and 1:20. On the
other hand, the same proportions in these extracts were not able to neutralize the
plasma coagulation induced by the venom of B. jararaca (22 μg/mL) significantly. In
vivo assays (hemorrhagic activity) only the acetone extract of the fruit was able to
totally reverse bleeding caused by the venom of B. jararaca (16,7 μg/g). Thus, our
results show that the plant C. fluminensis can be a source of molecules with
neutralizing properties of snake venom, specifically against the venom of B. jararaca,
and that the neutralizing effect is directly related to part of the plant and the polarity of
the solvent used in extraction, we can also conclude that benzophenone is not
responsible alone for the results
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Isolamento e caracterização funcional de uma fosfolipase A2 de Bothrops jararaca: avaliação do potencial antitumoral e inflamatório / Isolation and functional characterization of a phospholipase A2 from Bothrops jararaca snake venom: evaluation of its antitumor and inflammatory potentialAraújo, Rafhaella Carolina Cedro 02 December 2014 (has links)
As fosfolipases A2 (PLA2s) catalisam a hidrólise de ácidos graxos na posição sn-2 das membranas fosfolipídicas e liberam, como subprodutos, ácidos graxos livres. As PLA2s do grupo IIA são encontradas em peçonhas de serpentes da família Viperidae e desempenham diversas atividades apresentando potencial miotóxico, neurotóxico, hemolítico, edematogênico, citotóxico, hipotensivo, anticoagulante, inibição/ativação da agregação plaquetária, bactericida e pró-inflamatório. Esse trabalho teve como objetivo o isolamento e a caracterização funcional de uma PLA2 isolada da peçonha de Bothrops jararaca. Para a purificação dessa proteína, denominada BJ-PLA2-I, foram necessários três passos cromatográficos consecutivos: cromatografia de exclusão molecular em Sephacryl S-200, cromatografia de troca iônica em Source TM 15Q/50mL e cromatografia de troca iônica em MonoQ TM 5/50 GL. A BJ-PLA2-I apresentou elevado grau de pureza por SDS-PAGE e por cromatografia de fase reversa C18, em HPLC. Apresentou ainda, características ácidas, com pI em torno de 4,4 e teve a sua massa molecular determinada por dois métodos, obtendo-se valores bem próximos de 14,8 kDa (SDS-PAGE) e 14,2 kDa (MALDI-TOF). Esse fato é comum considerando que a espectrometria de massas é um método mais preciso e determina de maneira mais exata a massa molecular. O sequenciamento N-terminal da BJ-PLA2-I resultou em 60 resíduos de aminoácidos. O alinhamento múltiplo com outras fosfolipases A2 de serpentes do mesmo gênero mostrou similaridade entre elas, mostrando identidade de 100% com a BJ-PLA2, fosfolipase A2 Asp-49, também isolada da Bothrops jararaca. Esse dado levanta a hipótese de que a BJ-PLA2-I purificada neste trabalho e a BJ-PLA2 se tratam da mesma proteína, entretanto essa hipótese só poderá ser confirmada quando a sequência completa da BJ-PLA2-I for obtida. Outros dados encontrados neste trabalho reforçam essa hipótese, isso porque, avaliando a atividade fosfolipásica, o efeito sobre as plaquetas e o pI, tanto a BJ-PLA2-I quanto a BJ-PLA2 apresentaram características semelhantes. A BJ-PLA2-I, sendo uma Asp-49, mostrou alta atividade catalítica e efeito inibidor da agregação plaquetária induzida por ADP (20,5 ?g/mL inibiu 50 % da agregação plaquetária). Ela também foi capaz de induzir a migração leucocitária após a administração de diferentes concentrações (5, 10 e 20 ?g/mL) da BJ-PLA2-I. Esse dado também foi encontrado no ensaio em que a concentração de 10 ?g/mL foi fixada e variou-se o tempo de 2, 4 e 24 horas, observando-se principalmente a migração de neutrófilos. Além disso, verificou-se a liberação das citocinas IL-6 e IL-1?, de proteínas totais e de prostaglandina E2 na reação inflamatória induzida pela BJ-PLA2-I. No entanto, não foi observado a produção de TNF-?, IL-10 e leucotrieno B4. A BJ-PLA2-I caracterizou-se como uma PLA2 pró-inflamatória, produzindo inflamação local aguda. A BJ-PLA2-I foi avaliada quanto ao seu potencial antitumoral em três linhagens celulares distintas (PBMC, HL-60 e HepG2). Observou-se que a enzima em questão possui baixo potencial antitumoral para a linhagem HL-60, reduzindo o número de células tumorais em apenas cerca de 20% nas concentrações testadas. Verificou-se pequena alteração na viabilidade celular das células de PMBC, nas maiores concentrações testadas (160 e 80 ?g/mL) e, na linhagem HepG2 não foi encontrada nenhuma alteração. Concluindo, as informações adquiridas neste trabalho são de suma importância para a melhor compreensão dos mecanismos envolvidos nas atividades biológicas desempenhadas pelas PLA2s. Além disso, a BJ-PLA2-I pode servir como modelo molecular para a formulação de fármacos mais eficazes a serem utilizados no tratamento de várias doenças. / Phospholipases A2 (PLA2s) catalyze the hydrolysis of fatty acids in the sn-2 position of membrane phospholipids, releasing free fatty acids as by-products. PLA2s of group IIA are found in snake venoms of the Viperidae family and perform various activities, including myotoxic, neurotoxic, hemolytic, edematogenic, cytotoxic, hypotensive, anticoagulant, inhibition/activation of platelet aggregation, bactericidal and proinflammatory effects. This work aimed at the isolation and functional characterization of a PLA2 isolated from Bothrops jararaca venom. For the purification of this protein, called BJ-PLA2-I, three consecutive chromatographic steps were used (size exclusion chromatography on Sephacryl S-200, ion exchange chromatography on Source 15Q/50 mL, ion exchange chromatography on MonoQ 5/50 GL). Confirmation of the purity of BJ-PLA2-I was evaluated by SDS-PAGE and reverse phase HPLC using a C18 column. BJ-PLA2-I has acidic characteristics, with pI around 4.4, and its molecular mass was determined by two methods, obtaining values close to 14.8 kDa (SDS-PAGE) and 14.2 kDa (MALDI-TOF). The N-terminal sequencing of BJ-PLA2-I resulted in 60 amino acid residues. Multiple alignment with other phospholipases A2 of snakes of the same genus showed high similarity between them, showing 100% identity with BJ-PLA2, an Asp-49 phospholipase A2 previously isolated from Bothrops jararaca venom. This finding raises the possibility that the PLA2 purified in this work is the same protein previously described (BJ-PLA2), however, this assumption can only be confirmed when the complete sequence of BJ-PLA2-I is obtained. Other data obtained in this study support this hypothesis, considering that the phospholipase activity, the effect on platelets and pI of both BJ-PLA2-I and BJ-PLA2 showed to be similar. BJ-PLA2-I, being an Asp-49 PLA2, showed high catalytic activity and inhibitory effect on the platelet aggregation induced by ADP (20.5 ?g/mL inhibited 50% of the platelet aggregation). It was also able to induce leukocyte migration after the administration of different concentrations (5, 10 and 20 ?g/mL) of BJ-PLA2-I. This fact was also found when the concentration of 10 ?g/mL was fixed and response times were varied (2, 4 and 24 hours), observing especially neutrophil migration. Furthermore, there was a release of IL-6 and IL-1?, total proteins and prostaglandin E2 in the inflammatory reaction induced by BJ-PLA2-I, however, the production of TNF-?, IL-10 and leukotriene B4 was not observed. BJ-PLA2-I was characterized as a proinflammatory PLA2 producing acute local inflammation. BJ-PLA2-I was evaluated for its antitumor potential on three different cell lines (PBMC, HL-60 and HepG2). It was observed that this enzyme showed a low antitumor potential on HL-60 tumor cell line, reducing the number of tumor cells in only about 20% at the concentrations tested. There was little change in cell viability of PBMC cells in the higher concentrations tested (80 and 160 ?g/mL), but no change was found on HepG2 tumor cell line. In conclusion, the information obtained in this work are of utmost importance for better understanding the mechanisms involved in the biological activities induced by PLA2s. Furthermore, BJ-PLA2-I may serve as a molecular model for the formulation of more effective drugs to be used in the treatment of various diseases.
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Interação leucócito-endotélio induzida pelo veneno de Bothrops jararaca>: papel de proteases, mediação farmacológica e soroneutralização / Leukocyte-endothelium interaction induced by Bothrops jararaca venom: role of proteases, pharmacological mediation and serum neutralizationZychar, Bianca Cestari 24 January 2008 (has links)
Toxinas classificadas como serinoproteases, metaloproteases e fosfolipases A2, isoladas de venenos botrópicos, podem induzir reações inflamatórias que contribuem na gravidade dos sintomas locais observados nestes envenenamentos. Entretanto, a contribuição efetiva de cada uma destas toxinas no efeito inflamatório induzido pelo veneno não é bem compreendida. Neste estudo, o veneno de Bothrops jararaca (VBj) foi tratado com Fluoreto de fenil-metil-sulfonila (PMSF), 1,10- fenantrolina (OF) ou Brometo de p-bromafenacila (p-BPB) para inibição destas enzimas. Observou-se parâmetros de leucócitos em rolling, aderidos e migrados na interação leucócito-endotélio, após a injeção de 1g dos veneno tratados no subcutâneo da bolsa escrotal de camundongos. Os resultados foram comparados aos obtidos com o veneno bruto, sem tratamento. Os animais injetados com VBj bruto apresentaram um aumento marcante de adesão celular em todos os tempos estudados, sendo o pico dessa interação entre a 2ª e 4ª hora após a injeção. Os grupos injetados com VBj também apresentaram o maior número de células migradas na 4ª h, permanecendo esse número alto na 24ª hora e diminuindo significativamente na 48ªh após a injeção do VBj. Baseando-se nesta cinética, todos os outros estudos foram verificados na 2ª e 24ª hora. Os resultados mostraram que o tratamento do VBj com OF resultou diferenças significantes nas alterações da interação leucócito-endotélio. Nos venenos tratados para inibição de serinoproteases e FLA2 verificou-se que o tratamento não resultou em diferenças nos parâmetros de interação leucócito-endotélio, quando comparados ao grupo injetado com o veneno bruto, nos dois tempos estudados. Tratamentos farmacológicos indicam que os eicosanóides originados da via da ciclooxigenase, TNF- e NO participam da mediação da interação leucócito endotélio induzidos pelo VBj. Mas aparentemente não os eicosanóides originados pela via das lipoxigenase, histamina ou serotonina,. O efeito do soro antibotrópico (SAB) na interação leucócito-endotélio induzido por VBj também foi avaliado. O SAB induziu, per se, uma interação leucócito-endotélio semelhante ao observado em animais injetados com VBj, efeito este aparentemente devido ao fenol utilizado como conservante no antiveneno. Utilizando-se um soro antibotrópico sem fenol, estas reações não foram observadas e verificou-se que o soro sem fenol evita as alterações na interação leucócito-endotélio induzidas pelo VBj. Em conclusão, conjuntamente nossos dados indicam que: 1) as metaloproteases tem maior importância, e que as fosfolipases e serinoproteases tem um papel secundário nas alterações na interação leucócito-endotélio induzida pelo VBj; 2) que os eicosanóides são os principais mediadores nestes parâmetros inflamatórios e 3) que o SAB possui anticorpos contra as toxinas do veneno que induzem alterações na interação, mas o fenol presente no soro é responsável pelas reações pró-inflamatórios indesejadas. Finalmente, os resultados sugerem que a associação de antiinflamatórios à soroterapia para o tratamento das reações inflamatórias locais induzidas pelo VBj deve ser considerada e estudada mais aprofundadamente. / Toxins classified as serineproteases, metalloproteases or phospholipases A2, isolated from venoms of Bothrops snakes can induce inflammatory reactions that contribute to the severity of local symptoms observed in envenomation. Nevertheless, the real contribution of each one of these classes of toxins to the inflammatory effect of whole venom is poorly understood. In this study, Bothrops jararaca venom (BjV) was treated with phenyl-methyl-sulfonyl-fluoride (PMSF), 1,10-phenantroline (sPhe) or p-bromophenacyl bromide (pBPB), to inhibit those classes of enzymes. Inflammatory parameters of leukocyte-endothelial interaction (LEI), namely leukocytes rolling, adhesion or migration, observed after injecting of 1mg of treated venoms into the subcutaneous tissue of the scrotal bag of mice, were evaluated and compared to those observed after the injection of non-treated venom. Animals injected with BjV presented an a marked expressive increase in cellular adhesion in all periods of time studied, but peaking between 2 and 4h after BjV injection. The venom-injected groups also presented the highest number of migrated cells hour 4, wich remained up to hour 24, and decreasing significantly 48h after the BjV injection. Based on this kinetics, all other studied were performed evaluating LEI parameters on 2nd and 24th hour after venom injection. Results showed that sPhe -treated venom presented significant differences in LEI. LEI parameters induced by pBPB- and PMSF-treated venom were similar to those observed with non-treated venom. Pharmacological treatments indicate that eicosanoids from the cyclooxygenase pathway, TNF- and NO participate on the mediation of the alterations of leukocyte-endothelium interaction induced by venom. Eicosanoids from the lipoxygenase pathway, histamine and serotonin apparently do not mediate these alterations. The effect of the Bothrops antivenom in blocking the disturbances of leukocyte-endothelial interaction induced by BjV was also evaluated. Surprisingly, the antivenom per se induced alterations in LEI similar to those induced by the venom. Conversely, a phenol-free antivenom did not induce LEI alterations and avoid those induced by the BjV. In conclusion, our findings indicated that: 1) the major importance of metalloproteases, and a secondary role for phospholipases and serineproteases in alterations of leukocyte-endothelial interactions induced by Bothrops jararaca venom; 2) eicosanoids are the main mediators of these alterations; 3) the Bothrops antivenom has antibodies against toxins that induce LEI alteration, but the phenol used in antivenom as a preservative can cause some undesired pro-inflammatory reactions. Finally, present results indicate that the use of anti-inflammatory drugs associated with serum therapy for the treatment of local inflammatory reactions induced by Bothrops snake venoms should be considered and further studied.
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