Atualmente, os estudos Ômicos, principalmente no campo da metabolômica, têm tido grandes avanços contribuindo para a descoberta de novos biomarcadores e consequentemente aumentando a eficiência do tratamento do câncer. A lipidômica é um novo ramo da metabolômica que visa o estudo abrangente dos lipídeos presentes em um determinado organismo dando ênfase ao metabolismo dos lipídeos e como estão relacionados à progressão da doença. A utilização da espectrometria de massas aliada a abordagens bionalíticas tem progredido rapidamente nos últimos anos, possibilitando a análise e compreensão de pequenas moléculas no contexto biológico e de desenvolvimento do câncer. Dessa forma, para a obtenção de uma boa cobertura lipídica, o preparo de amostra, os parâmetros cromatográficos e o processamento de dados são de suma importância. Nesse trabalho foi avaliado o perfil lipídico de amostras de plasma advindas do modelo animal de Ehrlich, um adenocarcinoma mamário em camundongos fêmeas. Na primeira parte do estudo foi utilizado o método de extração de lipídeos por Bligh-Dyer e realizadas comparações entre plasma de camundongo com tumor de Ehrlich induzido e plasma de camundongo controle, além da comparação entre plasma de camundongo com tumor de Ehrlich e fluido tumoral ascítico de Ehrlich. Através dos modelos obtidos foi observado que no modo negativo de ionização foram obtidos ácidos graxos significativamente diferentes entre os grupos, através do modelo de PLS-DA, dando ênfase ao perfil de ácidos graxos saturados, que mostraram-se em maior quantidade no plasma de Ehrlich. No modo positivo, alterações nos níveis de fosfatidilcolinas (PCs) foram obtidos, indicando a fosfocolina como potencial biomarcador para o câncer de mama, destacando-se as vias metabólicas mais afetadas: metabolismo do ácido linoléico e dos glicerofosfolipídeos. Já a comparação entre fluido tumoral e plasma de Ehrlich foi obtido, através dos dados no modo negativo de ionização e pelo modelo de PLS-DA, que informações lipídicas do tumor podem ser refletidas no plasma, em especial para o conteúdo de ácidos graxos, fosfotidilcolinas e fosfatidiletanolaminas (PEs). Uma segunda abordagem utilizada nessa tese foi a utilização da amostragem in vivo por microextração em fase sólida (SPME) para avaliação metabólica. Os principais parâmetros de SPME que podem afetar a eficiência da extração foram avaliados: tempo de extração e tempo de dessorção. Por meio de um planejamento experimental foram obtidos 10 min e 20 min, respectivamente, para cada variável. Após processamento dos dados foram obtidos 142 e 78 features no modo positivo e negativo, respectivamente. Através dos dados obtidos no modo negativo, e do modelo de PLS-DA construído foi possível avaliar possíveis biomarcadores responsáveis pela diferenciação do fluido tumoral e do fluido presente no camundongo controle, destacando ácidos graxos saturados, o ácido lisofosfatídico (LPA 18:0), fosfatidilinositol (PI 36:0) e derivados de colesterol. O presente estudo apresentou resultados que devem ser melhor explorados e correlacionados com dados a partir de amostras de humanos, podendo ser um indicador para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos para câncer de mama. / Currently, the \"omics\" studies mainly in the field of metabolomics, have increasinly contributed to the discovery of new biomarkers and consequently increasing the efficiency of cancer therapy. Lipidomics is a new approach of the metabolomics that aims the comprehensive study of the lipids present in a given organism, emphasizing the metabolism of lipids and how they are associated to the progression of the disease. Mass spectrometry coupled to bionalytical tools has progressed rapidly in recent years, making it possible to analyze and to understand small molecules in the biological context in the development of cancer. Thus, to obtain a good lipid coverage, sample preparation, chromatographic parameters, and the data processing are important. In this work, the lipid profile of plasma samples from the Ehrlich animal model, a mammary adenocarcinoma in female mice, was evaluated. In the first part of the study the method of lipid extraction by Bligh-Dyer was used and comparisons were performed between mouse plasma with induced Ehrlich tumor and control mouse plasma. In addition, comparison between mouse plasma with Ehrlich tumor and Ehrlich ascitic tumor fluid was performed. Through multivariate models PLS-DA was observed that in the negative ionization mode fatty acids were significantly different between the groups, emphasizing the profile of saturated fatty acids in higher levels in the plasma of Ehrlich. In the positive mode of ionization changes in phosphatidylcholine (PCs) levels were obtained, indicating the phosphocholine group as potential biomarker for breast cancer, with metabolic pathways of the linoleic acid and glycerophospholipids metabolism the most affected. The comparison between tumor fluid and Ehrlich plasma was obtained through the negative mode dataset using the PLS-DA model, showing that the lipid information of tumor can be reflected in the plasma, especially for the fatty acid, phosphotidylcholine and phosphatidylethanolamine (PE). A second approach used in this thesis was the using of the in vivo sampling by solid phase microextraction (SPME). Times of extraction and desorption were the main parameters of SPME assessed using experimental design since they can affect the efficiency of extraction, where 10 and 20 min were the better times of extraction and desorption obtained, respectively. After processing the dataset, 142 and 78 features were obtained in the positive and negative modes of ionization, respectively. Through the data obtained in the negative mode, PLS-DA model was able to evaluate possible biomarkers responsible for the differentiation between tumor fluid and that fluid present in the control mouses, highlighting saturated fatty acids, lysophosphatidic acid (LPA 18:0), phosphatidylinositol (PI 36:0) and cholesterol derivatives. The present study showed results that should be better explored and correlated with data from human samples, and may be an indicator for the development of new therapeutic agents for breast cancer.

Introdução: O câncer de mama é a maior causa de morte em mulheres pela doença em todo o mundo. O rastreamento pela mamografia e o exame clinico anual das mamas são estratégias recomendadas para o seu controle. Um dos motivos pouca adesão das mulheres aos programas de prevenção é a dor associada à mamografia. Objetivo: Avaliar a eficácia do exercício físico orientado realizado antes da realização do exame de mamografia, na redução da dor percebida após o exame. Métodos: Trata-se de um ensaio clínico aberto, randomizado, controlado, cuja intervenção foi uma sequencia de exercícios físicos de aquecimento e alongamento em membros superiores e inferiores em mulheres atendidas pelo Departamento de Prevenção do Hospital de Câncer de Barretos. As mulheres foram divididas em três grupos, grupo com intervenção em membros superiores (grupo 1), grupo com intervenção em membros inferiores (grupo 2) e grupo sem intervenção (Grupo 0). Foram realizadas comparações entre variáveis quantitativas intra e intergrupos através de ANOVA e teste t de Student com nível de significância de 5%, bem como, realizado cálculo de risco relativo e medidas dele derivadas. Resultados: 198 mulheres foram avaliadas (66 mulheres em cada grupo), os dados sóciodemográficos, assim como o nível de atividade física não foram associados à percepção de dor após o exame de mamografia, no entanto a intervenção com exercícios físicos levou à menor percepção da dor após o exame, quando comparado aos grupos 2 e 0. Conclusão: Os exercícios físicos de aquecimento e alongamento pré-exame, foram eficazes diminuindo a percepção e sensação à dor entre mulheres que tiveram a intervenção em membros superiores, no entanto, observou-se ainda que as mulheres sob intervenção em membros inferiores também apresentaram resultados de menor percepção à dor quando comparado com o grupo controle. / Introduction: Breast cancer is the leading cause of death by disease in women worldwide. Screening by mammography and annual clinical breast exams are recommended for their control strategies. One of the reasons for poor adherence of women to prevention programs is the pain associated with mammography. Objective: To evaluate the efficacy of exercise conducted prior to the mammogram in the reduction of perceived pain after the procedure. Methods: This was an open, randomized, controlled clinical trial, whose intervention was a sequence of exercises for warming up and stretching in the upper and lower in women attending the Prevention Department of Barretos Cancer Hospital/Brazil. The women were divided into three groups, the intervention group in the upper limbs (group 1), the intervention group in the lower limbs (group 2) and without intervention group (Group 0). Comparisons between intra and inter quantitative variables using ANOVA and Student\'s t test with significance level of 5% was taken and held calculating relative risk and measures derived from it. Results: 198 women were evaluated (66 women in each group), the sociodemographic data, as well as, the level of physical activity were not associated with perception of pain after mammography, however, the exercise intervention led to lower perceived pain after the procedure, compared to groups 2 and 0. Conclusion: The physical warm-up exercises and stretching pre-examination were effective in decreasing pain perception and sensation among women who had the intervention of the upper limbs, however, observed also that women in to the legs also presented results from decreased perception of pain compared with the control group.

Introdução: Estudos mostram que os efeitos das desigualdades nos perfis de mortalidade em diferentes grupos sociais estão associados a fatores sociais, culturais e econômicos. A análise desses perfis, relativos aos cânceres de mama e de colo do útero em mulheres residentes no Município de São Paulo, por local de domicílio, permitirá estimar o risco de morrer por estes cânceres nesses grupos sociais. Tal saber trará subsídios para ações específicas dos serviços públicos no controle dos fatores de risco e na organização dos serviços de saúde. Objetivo: Descrever padrões de mortalidade pelos cânceres de mama e de colo do útero de mulheres com idade mínima de 15 anos, residentes no Município de São Paulo, segundo variações geográficas, temporais e socioeconômicas, de 1996 a 2006. Método: Estudo ecológico temporal por meio dos óbitos provenientes do Sistema de Informações Sobre Mortalidade SIM, que, no Município de São Paulo é processado pelo Programa de Aprimoramento da Informação de Mortalidade PRO-AIM, da Secretaria Municipal de São Paulo. Na análise espacial, os 96 distritos do Município foram agrupados em oito Regiões, conforme divisão administrativa elaborada pela Fundação Sistema Estadual de Análise de Dados (FSEADE) e pela Secretaria Municipal de Assistência e Desenvolvimento Social de São Paulo (SMADS). A série temporal observou o período de 1996 a 2006, em três cortes, triênios 1996/1997/1998, 1999/2000/2001 e 2004/2005/2006. Tal arranjo visou compensar possíveis flutuações de um único ano. Para comparar os coeficientes de mortalidade pelas duas localizações anatômicas do tumor, nas regiões e no tempo, os coeficientes foram padronizados por idade, pelo método direto, tendo como população padrão a do Município de São Paulo em 2000. Na análise das condições socioeconômicas adotou-se o Índice de Inclusão/Exclusão (IEX) como proxy para acesso e utilização dos serviços públicos de saúde. Na avaliação da dependência espacial entre as variáveis foram utilizados os Índices de Moran Global e Local. Realizaram-se mapas temáticos (coropléticos) de São Paulo, através dos softwares TerraView 3.3.0 e Philcarto versão 5.0. Resultados: Embora os coeficientes de mortalidade pelos cânceres de mama e de colo do útero tenham se mantido quase estacionários em São Paulo, nos triênios enfocados, ao serem eliminadas as diferenças nas estruturas etárias das populações, os níveis de crescimento foram sempre superiores à do Estado, mesmo nas regiões com menor risco de ambos os cânceres. A análise espacial mostrou concordância entre as regiões mais centrais (maiores valores do IEX) e áreas de maior risco para o câncer de mama. Da mesma forma, as regiões mais periféricas (valores mais baixos do IEX) foram as áreas de maior risco para o câncer de colo do útero. Conclusão: Considerando-se as limitações apresentadas, pode-se concluir que os padrões de mortalidade por cânceres de mama e de colo do útero, no Município de São Paulo, retratam a existência de problemas de saúde tanto nas regiões com baixo IEX (com maior disponibilidade de recursos e equipamentos de saúde) como nas regiões com altos IEX, que necessitam aperfeiçoamentos nos programas de screening e na oferta de serviços especializados. Espera-se que a presença destas associações possa contribuir na implementação de políticas de atenção à saúde das mulheres, favorecendo intervenções setoriais prementes a cada grupo populacional. / Introduction: Several studies have shown that effects of inequalities in the mortality profiles and in different social groups are associated with social, cultural and economic factors. The analysis of the mortality due to breast cancer and cervix in women living in São Paulo, by local of residence, permitted to estimate the risk of dying from these cancers in different social groups. This knowledge would provide motivation for specific actions of public services in the control of risk factors and the organization of health services. Objective: To describe patterns of mortality due to breast cancer and cancer of the cervix in women aged 15 years and over, living in São Paulo, according to geographical, temporal and socioeconomic profile variations, from 1996 to 2006. Methods: Ecological study using time of death from the Mortality Information System - SIM, which, in São Paulo is processed by the Information Program of Improvement of Mortality - PRO-AIM from the Municipal Secretariat of São Paulo. For spatial analysis, the 96 districts of the city of São Paulo were grouped into eight Regions of administrative division, adopted by the State Foundation of the System of Data Analysis and Municipal Secretary of Social Assistance and Development of São Paulo. The time series comprehends 1996 to 2006, in three sections, 1996/1997/1998, 1999/2000/2001, 2004/2005/2006. This arrangement aims to reduce possible fluctuations occurring in a given year. To ensure the comparability of mortality rates of the two anatomic locations of tumors between the regions and in time, the coefficients were adjusted by age, by the direct method, considering as the standard population, persons living in São Paulo in 2000. For the analysis of socioeconomic conditions was used as a \"proxy\", the Index of Inclusion/Exclusion (IEX), for the possibilities of access and use of public health services. To evaluate the spatial dependence between variables were used indices of Global and Local Moran. Thematic maps were assembled (coropletic), through the software TerraView Philcarto version 3.3.0 and 5.0. Results: Although mortality rates for breast cancer and the cervix have remained almost stationary for the city of São Paulo, looking the adjusted rates, it was detected that levels were always higher than the state, even in regions with lower risk of both cancers. The spatial analysis showed a concordance between the most central regions (with highest values of IEX) and areas with the greatest risks for breast cancer. Similarly, there was a coincidence between the more periferical regions and the areas with the lowest rates of IEX, identified as areas of greatest risk for cancer of the cervix. Conclusion: Taking into account the limitations of this study, we can conclude that the pattern of mortality from breast cancer and cervix uteri, in São Paulo, shows the existence of health problems in both regions, with a low IEX (greater resources and availability of health equipment) or an high IEX (there is a need for improvements in screening programs and provision of specialist services). The knowledge of these associations may help the implementation of health care policies for women, promoting measures for sectional interventions targeting to each population group.

Cerca de 10% dos casos de câncer de mama e/ou ovário são caracterizados como hereditários, onde a presença de mutações germinativas no gene de suscetibilidade BRCA1 aumenta o risco de desenvolver esses cânceres durante a vida da mulher. O BRCA1 é um gene supressor tumoral envolvido na resposta de danos ao DNA, controle do ciclo celular, na remodelação da cromatina, ubiquitinação e regulação da transcrição. O presente estudo tem como objetivo central caracterizar as mutações do gene BRCA1 associadas a Síndrome Hereditária do Câncer de Mama e/ou Ovário (HBOC) em pacientes atendidos no Serviço de Aconselhamento Genético do Câncer do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (HCFMRP/USP). Os vinte e dois éxons codificantes do BRCA1 foram analisados utilizando o método de High Resolution Melting (HRM) para triagem de mutações pontuais, seguido pelo sequenciamento de DNA dos casos selecionados para validação. A técnica de MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) também foi usada para detectar grandes deleções e duplicações. Uma vez confirmada a mutação, membros da família considerados de alto risco, serão investigados para a mutação específica, a fim de proporcionar-lhes um aconselhamento genético apropriado para a detecção precoce do câncer. No presente estudo, foram investigados 41 pacientes que preencheram os critérios para o teste genético de acordo com NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology v.1.2010. Um total de 21 mutações foram identificadas, duas das quais são patogênicas: a deleção dos éxons 17-18 e a deleção dos éxon 19. Ambas estão localizadas no domínio BRCT do gene BRCA1, essencial para a ligação de fosfoproteínas críticas para a ativação do complexo de reparo do DNA. Outra mutação, a S616del, foi tratada como patogênica, mas apresenta informações controversas em diferentes estudos. O trabalho também identificou uma nova mutação, Val1117Ile. Um estudo de haplótipos das mutações identificadas nos pacientes foi realizado e revelou que um dos haplótipos, denominado de 6, contendo quatro resíduos mutados (871Leu, 1038Gly, 1183Arg e 1613Gly) estava presente em 50% das pacientes. O estudo de associação com 82 indivíduos saudáveis, mostrou diferença significativa (p=0,026) nos pacientes, sugerindo assim um risco aumentado de HBOC. Adicionalmente, foi analisada a mutação germinativa R337H no gene p53 para os casos suspeitos de Síndrome de Li-Fraumeni. Em síntese, o presente estudo contribui com a identificação de uma nova mutação não-sinônina no gene BRCA1 e sugere que o haplótipo 871Leu-1038Gly-1183Arg-1613Gly possa conferir risco aumentado do câncer de mama e/ou ovário em pacientes diagnosticados com HBOC. / About 10% of cases of breast and/or ovary cancer are characterized as hereditary, where the presence of germline mutations in susceptibility BRCA1 gene increases the risk of developing these cancers during womans lifetime. BRCA1 is a tumor suppressor gene involved in DNA damage response, cell cycle control, chromatin remodeling, ubiquitination and transcriptional regulation. The present study aims to characterize BRCA1 gene mutations associated with Hereditary Breast/Ovary Cancer Syndrome (HBOC) in patients from the Cancer Genetic Counseling Service of the General Hospital of the Medical School of Ribeirão Preto, University of São Paulo (HCFMRP-USP). The twenty two coding exons of BRCA1 were analyzed using High Resolution Melting (HRM) method for the screening of point mutations, followed by DNA sequencing of the cases selected to validation. MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) technique was also used to detect gross deletions and duplications. Once confirmed the mutation, family members most at risk will be analyzed for the specific mutation in order to provide them with an appropriate genetic counseling for early detection of cancer. In the present study, we investigated 41 patients that fulfilled the criteria for genetic testing according to NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology v.1.2010. A total of 21 mutations were identified, two of them are pathogenic: a deletion of exons 17-18 and a deletion of exon 19. Both of them are located in the BRCT domain of BRCA1 gene, impairing the binding of essential phosphoproteins critical to the activation of DNA repair complex. Another mutation, S616del, shows controversial information about its pathogenesis in different studies.The present study also describes a new mutation, Val1117Ile. A study of haplotypes of the mutations identified in patients was performed and revealed that one of the haplotypes, called 6, containing four mutated residues (871Leu, 1038Gly, and 1183Arg 1613Gly) was present in 50% of patients. The association study with 82 healthy subjects showed a significant difference (p = 0.026) in patients, thus suggesting an increased risk for HBOC. Additionally, the germline mutation R337H on p53 gene was also analyzed in the present study for suspected cases of Li-Fraumeni Syndrome. In summary, this study contributes to the identification of a new missense mutation in the BRCA1 gene and suggests that the haplotype-871Leu-1038Gly 1183Arg-1613Gly may confer increased risk of breast cancer and / or ovarian cancer in patients diagnosed with HBOC.

Introdução: o câncer de mama que apresenta amplificação/superexpressão do HER2 apresenta-se com pior prognóstico e seu amplicon se localiza no locus 17q12-q21. O gene WIPF2, relacionado a motilidade celular, localiza-se no mesmo locus e também se encontra presente no amplicon do HER2. Objetivo: avaliar a superexpressão simultânea do HER2 e WIPF2 através de marcação imunohistoquímica. Métodos: foram selecionados 94 casos de carcinoma ductal invasor de mama, sendo possível a obtenção de material em 87. Foi realizada técnica de microarranjo tecidual e as lâminas foram analisadas. Informações clínicas foram obtidas de prontuário médico. Resultados: após microscopia óptica das lâminas de TMA obtidas e comparação com lâminas convencionais arquivadas, validou-se o método, com bom índice de correlação kappa (0,83 para receptores de estrógeno e 0,84 para receptores de progesterona). Houve associação entre a superexpressão do WIPF2 com casos Ki-67 positivos e em pacientes nuligestas. O grupo HER2 apresentou maior porcentagem de casos WIPF2 positivos em relação ao grupo triplo-negativo à microscopia óptica (66,7% vs. 22,7%, respectivamente; p=0,03). Na análise digital, o perfil molecular HER2 apresentou maior expressão do WIPF2 em relação ao perfil luminal A e ao triplo negativo (23,9 ± 9,0% vs. 14,6 ± 9,0% e 14,2 ± 9,0%, respectivamente; p=0,01). Conclusão: O WIPF2 é mais expresso por tumores com o perfil HER2, assim como se associa a tumores com maior proliferação e tumores em pacientes nulíparas. / Introduction: the breast cancer with amplification/overexpression of HER2 shows worse prognosis and its amplicon is located in the 17q12-21 locus. The gene WIPF2, related to cellular mobility, is located in the same locus and is also present in the HER2 amplicon. Objective: to evaluate HER2 and WIPF2 simultaneous overexpression using immunohistochemistry technique. Methods: we selected 94 invasive ductal carcinoma samples and it was possible to evaluate 87. Tissue microarray has been done and slides analyzed. Clinical informations were obtained from clinical files. Results: after optical microscopy of TMA slides and comparison with conventional slides, the method was validated with a high correlation kappa index (0.83 for estrogen receptors and 0.84 for progesterone receprtors). The WIPF2 overexpression was associated with positive Ki-67 tumors and nuliparous women. The HER2 group presented greater percentage of WIPF2 positive cases when compared with triple-negative group using optical microscopy (66.7% vs. 22.7%, respectively, p=0.03). With the digital analysis, the HER2 group presented greater expression of WIPF2 when compared with luminal A and triple-negative groups (23.9 ± 9.0% vs. 14.6 ± 9.0% e 14.2 ± 9.0%, respectively; p=0.01). Conclusion: WIPF2 is more expressed in the HER2 group tumors. It is also related to high proliferation index and nuliparous women´s tumors.

O câncer de mama apresenta-se como um dos maiores problemas de saúde pública no mundo por ser, entre as mulheres, o primeiro em incidência e o segundo em número de óbitos. Este tipo de câncer apresenta alto grau de recorrência devido a falha no tratamento do tumor primário e o aparecimento de metástases da doença é a principal causa de mortalidade. As estratégias de tratamento nesse estágio não são específicas e comprometem a qualidade de vida das pacientes. A terapia fotodinâmica (PDT) aparece como uma alternativa terapêutica promissora. No entanto, a eficácia da PDT para o tratamento de tumores da mama, bem como os mecanismos que conduzem à morte celular permanecem obscuros. Para este propósito, neste estudo, nos propusemos a investigar mais profundamente os mecanismos moleculares envolvidos na morte celular induzida MB-PDT. Observou-se que a MB-PDT induz massiva morte celular em células tumorais preferencialmente. As células não-tumorigênicas foram significativamente mais resistentes à terapia em comparação com as células malignas. Análises morfológicas e bioquímicas das células em processo de morte apontou para mecanismos alternativos à apoptose clássica. A autofagia induzida por MB-PDT resultou em citoproteção ou citotoxicidade, dependendo do modelo de célula utilizado. No entanto, o comprometimento de uma destas vias não impediu o destino fatal das células tratadas com MB-PDT. Ao analisar os mecanismos de necrose regulada, observamos que a necroptose desempenhou um papel importante na morte celular induzida por MB-PDT. Adicionalmente, nossos resultados mostraram uma localização preferencial do MB nos lisossomos, o que nos levou a analisar o comprometimento destas organelas. Nós demonstramos por meio da atividade de catepsinas no citosol das células tratadas com MB-PDT, evidências de que a permeabilização da membrana lisossomal é outro mecanismo de necrose regulada responsável pelos efeitos citotóxicos da MB-PDT. Além de resistência à morte celular, as células tumorais também desenvolvem mecanismos de evasão do sistema imune. Neste estudo, também demonstramos que a MB-PDT tem o potencial de aumentar o número de células de linfócitos T CD4+. Por fim, também mostramos a eficácia da terapia em induzir morte celular seletiva às células tumorais em um modelo que recapitula a morfologia do epitélio glandular. Em resumo, demonstramos que vários mecanismos de morte celular são ativados por MB-PDT, uma vez que o comprometimento de uma via de morte celular não impediu o destino fatal das células tratadas com MB-PDT. No geral, os resultados obtidos nesta tese apontam a MB-PDT como uma terapia alternativa e eficaz para o tratamento do câncer de mama, exibindo uma ação de amplo espectro em células com diferentes mecanismos de resistência a vias de morte celular clássica, uma propriedade fundamental para uma terapia contra o câncer. Finalmente, as nossas observações destacam o potencial de MB-PDT como uma estratégia altamente eficaz para tratar o câncer de mama com segurança e possivelmente outros tipos de tumores. / Breast cancer is the main cause of mortality among women presenting high recurrence due to primary treatment failure. Photodynamic therapy (PDT) appears as a promising therapeutic alternative. However, the efficacy of PDT to treat breast tumors as well as the mechanisms that lead to tumorigenic cell death remain unclear. For this purpose, in this study, we set out to deeper investigate the molecular mechanisms involved in MB-PDT induced cell death. We observed that MB-PDT differentially induces massive cell death of tumor cells. Non-malignant cells were significantly more resistant to the therapy compared to malignant cells. Morphological and biochemical analysis of dying cells pointed to alternative mechanisms rather than classical apoptosis. MB-PDT-induced autophagy resulted in either cytoprotection or cytotoxicity depending on the cell model used. However, impairment of one of these pathways did not prevent the fatal destination of MB-PDT treated cells. When analyzing regulated necrosis mechanisms, we observed that necroptosis played an important role in MB-PDT-induced cell death. Additionaly, our results have shown preferential lysosomal MB localization. Furthermore, we have also presented evidences that the lysosome membrane permeabilization is another regulated necrosis mechanism responsible for MB-PDT cytotoxic effects. It is known that in addition to resistance to tumor cell killing therapies, malignant cells develop molecular mechanisms in order to evade the immune system. In this study, we have also been able to show that the MB-PDT has the potential to increase the number of T lymphocytes CD4+. Additionally, when using a physiological 3D culture model that recapitulates relevant features of normal and tumor breast tissue morphology, we found that MB-PDT differential action in killing tumor cell was even higher than what was detected in 2D cultures. In summary, we demonstrated that different cell death mechanisms are being activated upon MB-PDT induction, since impairment of only one cell death pathway did not prevent the fatal destination of MB-PDT treated cells. Overall, our observations point MB-PDT as an alternative and effective therapy for breast cancer treatment, displaying a broad-spectrum action on tumors with different resistance mechanisms to classic cell death pathways, a desired property for improving an anticancer therapy. Finally, our observations underscore the potential of MB-PDT as a highly efficient strategy to safely treat breast cancer and possibly other types of tumors.

Em animais, a prevalência do câncer tem aumentado de forma significativa com o passar dos anos. As neoplasias mamárias representam o tipo mais frequente de câncer em cadelas, chegando a 52% da população de fêmeas, e entre os animais afetados, 50% das neoplasias se apresentam sob a forma maligna. O desenvolvimento e caracterização de modelos animais para o estudo de neoplasias humanas é de extrema relevância para a melhoria no diagnóstico e tratamento do câncer. Os tumores sólidos apresentam uma hierarquia entre as células que determina o desenvolvimento e o comportamento da neoplasia. Recentemente, tem-se estudado um pequeno grupo de células que apresentam diversas características das células-tronco normais encontradas nos tecidos. Estas células, denominadas Células Iniciadoras de Tumor (CITs), são descritas como sendo as principais responsáveis pelas falhas na quimioterapia e no aparecimento de recidivas tumorais, devido ao grande potencial de renovação e diferenciação que elas possuem. Desta maneira, nosso objetivo foi caracterizar linhagens celulares provenientes de neoplasia de glândula mamária de cadelas que pudessem ser utilizadas futuramente na pesquisa básica e aplicada em oncologia comparada. Além das alterações citogenéticas e imunocitoquímicas, verificamos que os cultivos celulares apresentaram quantidades distintas de populações positivas e negativas quanto à expressão de CD24 e CD44 bem como da atividade de aldeído-desidrogenase, porém, todos exibiram potencial tumorigênico in vitro através do ensaio de formação de tumoresferas / The prevalence of cancer in animals has increased significantly over the years. Mammary tumors are the most common cancer in dogs, reaching 52% of female population, and among affected animals, 50% of tumors are presented in the malignant form. The development and characterization of animal models for the study of human cancers is extremely important for improving the diagnosis and treatment of cancer. Solid tumors have a hierarchy of cells that determines the development and behavior of cancer. Recently, there has been studied a small group of cells with different characteristics from those normal stem cells found in tissues. These cells, known as tumor initiating cells (TICs), are described as being primarily responsible for the failures in chemotherapy and the appearance of recurrences, because of their potential for renewal and differentiation. Thus, our objective was to characterize cell lines derived from mammary gland neoplasia of dogs that could be further used for basic and applied research in comparative oncology. In addition to the cytogenetic and immunocytochemical changes, we found that cell cultures had different amounts of positive and negative populations of CD24 and CD44 expression and aldehyde dehydrogenase activity, however, all exhibited tumorigenic potential in vitro through tumorspheres formation

Introdução - O câncer de mama é dos tipos de câncer mais frequente no mundo e o mais comum entre as mulheres. Sabe-se que durante o desenvolvimento do câncer de mama diversos mecanismos regulatórios estão em desequilíbrio, enquanto processos como a inflamação crônica e as reações pró-oxidativas se encontram estimuladas. Nessa perspectiva, alguns estudos propõem que alguns fatores de risco ambientais possam ser modificados. Desses, grande destaque tem sido direcionado à dieta e, particularmente, ao perfil de gorduras consumidas. Objetivo - Avaliar a associação do índice -3, estresse oxidativo e composição corporal em mulheres com câncer de mama. Métodos - Foram selecionadas 101 mulheres com recém-diagnóstico de câncer de mama, com estadiamento tumoral I a IV. Essas pacientes foram selecionadas do serviço de Mastologia do Hospital Geral de Fortaleza, Ceará. Foram avaliados parâmetros antropométricos (peso, altura, IMC e circunferência da cintura) e de composição corporal por impedância bioelétrica. Após jejum de 12h foram obtidas amostras de sangue e a partir plasma foram analisados os marcadores do estresse oxidativo [LDL eletronegativa LDL(-) e seus auto anticorpos, 8-Oxo-2\'-deoxiguanosina - 8OHdG por meio de imunoensaios, vitaminas lipossolúveis por HPLC e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico -TBARS por teste colorimétrico]. O perfil de ácidos graxos nos eritrócitos foi determinado por cromatografia a gás e a partir do percentual de ácidos graxos eiocosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA) calculou-se o índice -3. Os resultados obtidos foram analisados por meio de testes comparação de médias, correlações e modelos de regressão linear (SPSS 20.0). Resultados Não houve relação significativa entre ácidos graxos EPA, DHA e índice -3 e biomarcadores de estresse oxidativo, antropométricos e de composição corporal (p>0,05). Entretanto, os antioxidantes lipossolúveis foram maiores em mulheres na pós-menopausa, com tumor em estágio inicial e linfonodos negativos. O conteúdo de TBARS associou-se com o estadiamento clínico. A adiposidade foi associada com concentrações de retinol e 8-OHdG, enquanto LDL(-), 8-OHdG e TBARS foram correlacionadas com antioxidantes lipossolúveis após o ajuste para fatores de confusão. Conclusão - O índice -3 não está 5 correlacionado com estresse oxidativo e composição corporal. Entretanto, marcadores do estresse oxidativo estiveram associados ao perfil clínico e a composição corporal nestas pacientes. / Introduction - Breast cancer is the most frequent types of cancer worldwide and the most common among women. It is known that during the development of breast cancer several regulatory mechanisms are in imbalance, while processes such as chronic inflammation and pro-oxidative reactions are stimulated. In this perspective, some studies suggest that some environmental risk factors can be modified. These, great emphasis has been directed to the diet and particularly to the profile of the fats consumed. Aim - Assess the association between -3 index, oxidative stress and body composition in women with breast cancer. Methods - 101 women with newly diagnosed breast cancer with tumor stages I to IV were selected. These patients were selected of the Service of Mastology of General Hospital of Fortaleza, Ceará. Anthropometric parameters (weight, height, BMI and waist circumference) and body composition by bioelectrical impedance were evaluated. After 12h fasting blood samples were obtained and, from the plasma, markers of oxidative stress were analyzed [electronegative LDL LDL(-) and their autoantibodies, 8-oxo-2\'-deoxyguanosine - 8OHdG by immunoassays, liposoluble vitamins by HPLC and thiobarbituric acid reactive substances - TBARS by colorimetric test]. The profile of fatty acids in erythrocytes was determined by gas chromatography and, from the percentage of eiocosapentaenoico (EPA) and docosahexaenoic (DHA) fatty acids, the -3 index was calculated. The results were analyzed by comparison of means tests, correlations and linear regression models (SPSS 20.0). Results - There was no significant relation between EPA, DHA and -3 index and biomarkers of oxidative stress, anthropometric and body composition (p>0.05). However, the liposoluble antioxidants were higher in postmenopausal women with early-stage tumors and negative lymph nodes. The content of TBARS was associated with clinical staging. Body fat was associated with retinol concentrations and 8-OHdG, while LDL(-), 8-OHdG and TBARS were correlated with liposoluble antioxidants after adjustment for confounding factors. Conclusion - The -3 7 index is not correlated with oxidative stress and body composition. However, markers of oxidative stress were associated with the clinical profile and body composition in these patients.

Introdução: A neoplasia maligna da mama é a mais frequentes entre as mulheres, respondendo, no Brasil, por 26,3 por cento de todos os cânceres no sexo feminino e por 14 por cento dos óbitos. Sabe-se que a obesidade é também uma doença crônica, que apresenta um panorama epidemiológico crescente, capaz de modificar as concentrações de hormônios esteroides, hormônios do crescimento, que envolve processos inflamatórios crônicos e de baixa intensidade os quais favorecem a proliferação celular e redução da apoptose. Portanto, é plausível que mulheres com câncer de mama que tenham excesso de peso e adiposidade apresentem maior risco para um prognóstico clínico menos favorável. Objetivo: Avaliar o papel da adiposidade sobre a oxidação e as adipocitocinas na neoplasia mamária. Material e Métodos: Estudo observacional do tipo caso-controle, com 101 mulheres com tumor de mama (Caso) e 100 mulheres sem câncer (Controle), selecionadas no Hospital Geral de Fortaleza (Fortaleza-CE), nos anos de 2011 e 2012. Realizou-se avaliações socioeconômicas, clínica (estado de menopausa, uso de terapia de reposição hormonal-TRH, história reprodutiva, amamentação, tabagismo, sedentarismo e história familiar de câncer; estadiamento clínico (EC), tamanho do tumor e presença de linfonodos comprometidos), antropométrica (peso, índice de massa corporal -IMC, circunferência da cintura - CC) e de composição corporal ( por cento Massa Gorda - por cento MG; por cento Massa Magra - por cento MM; Ângulo de fase - AF) por impedância bioelétrica. Após jejum de 12h obteve-se alíquotas de sangue e a partir do plasma analisou-se marcadores de estresse oxidativo [TBARS; LDL(-); anti-LDL(-); 8-OHdG; vitaminas antioxidantes] e adipocitocinas (leptina e adiponectina). Comparação entre os grupos Caso e Controle total e segundo excesso de peso e obesidade foram realizadas por meio dos testes t-Student e Man-Whitney. Modelos de regressão linear simples e múltipla, assim como analises logísticas foram testadas entre variáveis brutas e ajustadas visando identificar associações entre adiposidade e marcadores bioquímicos de estresse oxidativo e adipocitocinas. Todos os testes estatísticos foram realizados no programa estatístico SPSS versão 20.0, onde considerou-se p < 0,05, como nível de significância. Resultados: Os grupos Caso e Controle se mostraram semelhantes em relação aos aspectos socioeconômicos e clínicos. Entre as variáveis antropométricas e de composição corporal apenas a CC (p=0,002) foi maior nas mulheres com tumor de mama. Com relação aos marcadores oxidativos e adipocitocinas, independente da adiposidade e do excesso de peso, o grupo Caso apresentou perfil menos favorável com maiores concentrações plasmáticas de TBARS (p<0,001), LDL(-) (p=0,026), auto-anticorpo anti-LDL(-) (p<0,001) e 8OHdG (p=0,021) e adiponectina (p<0,001) em menores concentrações. Entre as pacientes com tumor de mama, as com excesso de peso mostraram menores concentrações de adiponectina (p=0,018) e maiores de 8OHdG (p=0,02) e leptina (p=0,01), sendo essa adipocitocina 9 associada de modo positivo com CC (p=0,012) e por cento MG (p=0,001). Os nutrientes antioxidantes não se alteraram em função da presença do tumor e tão pouco pelo peso e adiposidade. Entretanto no câncer de mama, retinol e ß-caroteno, estiveram inversamente associados com linfonodos comprometidos (p=0,034) e EC III e IV (p=0,014), respectivamente. O risco de câncer de mama foi maior nos maiores tercis de CC, (OR=2,69; IC=1,33-5,47) TBARS (OR=6,99; IC=2,99-16,32) e Anti-LDL(-) (OR=10,28; IC=4,11-25,75) e nos menores tercis de adiponectina (OR=0,44; IC=0,22-0,91). Conclusão: A adiposidade intensificou as alterações oxidativas e de adipocitocinas promovidas pela neoplasia da mama. A obesidade abdominal aumentou o risco de câncer de mama, bem como as maiores concentrações plasmáticas de marcadores oxidativos, sugerindo prognóstico menos favorável. / Introduction: Breast malignant neoplasm is more frequent among women. In Brazil, it corresponds to 26, 3 per cent of all cancers in the female gender and to 14 per cent of the causes of death. It is well known that obesity is also a chronic disease, which presents an increasing epidemiological panorama, capable of modifying the concentrations of steroids hormones, the growth hormones, which involves chronic and low-intensity inflammatory processes, enabling cellular proliferation and the reduction of apoptosis. Therefore, it is plausible that women with breast cancer who are overweight and have adiposity present a higher risk of a less favorable clinical prognosis. Objective: To evaluate the role of adiposity over oxidation and the adipokines on breast neoplasia. Material and Methods: It was an observational study of the case-control type, with 101 women with a breast tumor (Case) and 100 women without cancer (Control), selected at Hospital Geral de Fortaleza (Fortaleza-CE), in the years of 2011 and 2012. Socio-economic evaluations were accomplished, clinic (menopause, use of Hormone Replacement Therapy (HRT), reproductive history, breastfeeding, smoking, sedentarism and family-history of cancer; clinic staging (CS), size of the tumor and presence of affected lymph nodes), anthropometrics (weight, body mass index BMI, waist circumference - WC) and of body composition ( per cent Fat Mass - per cent FM; per cent Lean Mass - per cent LM; Phase Angle - PA) by bioelectrical impedance. After a 12-hour-fasting, blood aliquots were obtained and markers of oxidative stress were analyzed from the plasma [TBARS; LDL(-); ANTI-LDL (-); 8-OHdG, antioxidant vitamins] and adipokines (leptin and adiponectin). The comparison between the groups Case and total Control and according to overweight and obesity were accomplished through the tests t-Student and Man-Whitney. Models of simple and multiple linear regression, as well as logistical analyses were tested among gross and adjusted variables aiming at identifying association between adiposity and biochemical markers of oxidative stress and adipokines. All the statistic tests were accomplished on the statistic program SPSS version 20.0, in which p<0,05 was considered as a level of significance. Results: The groups Case and Control were similar with relation to the socioeconomic and clinic aspects. Among the anthropometric and body composition variables, only CC (p=0,002) was higher in women with breast tumor. With relation to oxidative markers and adipokines, independently from adiposity and overweight, the Case group presented a less favorable profile, with higher plasmatic concentrations of TBARS (p<0,001), LDL (-) (p=0,026), auto-antibody, anti-LDL(-) (p<0,001) and 8OHdG (p=0,021) and adiponectin (p<0,001) in lower concentrations. Among the patients with breast tumor, the overweight ones showed lower concentrations of adiponectin (p=0,018) and higher of 8OHdG (p=0,02) and leptin (p=0,01). This adipokine was associated in a positive way to CC (p=0,012) and FM (p=0,001). The antioxidant nutrients did not alter due to the presence of the tumor or due to weight and 11 adiposity. However, in breast cancer, retinol and beta carotene were inversely associated to affected lymph nodes (p=0,034) and CS III and IV (p=0,014), respectively. The risk of breast cancer was higher in the bigger WC tertiles, (OR=2,69; IC=1,33-5,47) TBARS (OR=6,99; IC=2,99-16,32) and Anti-LDL(-) (OR=10,28; IC=4,11-25,75) and in the smaller adiponectin tertiles (OR=0,44; IC=0,22-0,91). Conclusion: Adiposity intensified oxidative and adipokines alterations promoted by breast neoplasia. Abdominal obesity increased the risk of breast cancer, as well as higher plasmatic concentrations of oxidative markers, suggesting a less favorable prognosis.

Os programas de rastreamento mamográfico (PRM) organizados atingem redução de mortalidade por câncer de mama em até 35%, principalmente quando submetidos a controle de qualidade efetivo. O PRM realizado pelo Hospital de Câncer de Barretos (HCB) é oferecido através de Unidades Móveis e Fixa desde 2003, para mulheres entre 40 e 69 anos, pertencentes à V Regional de Saúde do Estado de São Paulo Barretos (DRS). Trata-se de um projeto pioneiro no Brasil que necessita enquadrar-se em critérios de controle de qualidade para que atinja resultados comparáveis aos da literatura. Objetivo: Este estudo visa avaliar os indicadores de qualidade de detecção e tratamento das pacientes portadoras de câncer de mama diagnosticadas pelo PRM-HCB na DRS-V de São Paulo, entre 2003 e 2010. Métodos: Foram revisados os prontuários de todas as pacientes com câncer de mama, detectados pelo PRM-HCB no período. Os indicadores de controle de qualidade incluíram dados de: estadiamento, diagnóstico, tratamento, laudo patológico, intervalos de tempo, e dados descritivos. As pacientes sintomáticas tiveram os indicadores analisados em separado das assintomáticas. As variáveis contínuas e categóricas foram comparadas aos parâmetros estabelecidos pela European Breast Cancer Network (EBCN), utilizando-se o programa SPSS 15. Resultados: Foram incluídas 257 mulheres. Os estádios clínicos 0 e I compreenderam 68,3% (125/183) dentre as assintomáticas e 33,8% (24/71) das sintomáticas, com 3 casos sem informação (nível desejável >70%). O tamanho médio do tumor foi de 1,96cm entre as assintomáticas e de 3,2cm dentre as sintomáticas (p=0,000). A cirurgia foi conservadora em 85,2% das assintomáticas e em 62,5% das sintomáticas. Dentre os 25 indicadores adequadamente avaliados, 18 encontravam-se em níveis desejáveis, sendo 7 deles a respeito da adequação do tratamento cirúrgico. Um dos indicadores de tempo esteve em nível aceitável (tempo entre a indicação de cirurgia e o procedimento cirúrgico médio de 17,9 dias úteis, nível aceitável = 15du), enquanto outros 2 estiveram insuficientes. Os intervalos de tempo para o laudo anátomo-patológico (AP) estiveram em níveis satisfatórios (82,1% dos laudos AP de diagnóstico em 10du ou menos, nível desejável 80%). As principais deficiências relacionadas ao tempo foram da mamografia de rastreamento até a matrícula (média de 32du, nível aceitável = 5du) e da matrícula aos demais exames diagnósticos (média de 27du; nível aceitável = 5du). Conclusões: Os indicadores de estádio dentre as mulheres assintomáticas estiveram em níveis aceitáveis, entretanto, as mulheres sintomáticas apresentaram tumores maiores e em estádios mais avançados. A abordagem multidisciplinar como Unidade de Mama possibilitou atingir níveis adequados e comparáveis aos europeus quanto aos métodos diagnósticos e terapêuticos. Deficiências quanto aos intervalos de tempo e barreiras que dificultam a adesão da população demandam intervenções futuras. A análise de indicadores de qualidade foi factível e permitiu diagnosticar uma adequação parcial dos processos de diagnóstico e tratamento das pacientes com câncer de mama detectado pelo PRM-HCB, segundo os critérios estabelecidos pela EBCN / In order to achieve a reduction of 35% in breast cancer mortality, organized mammographic screening (MMGS) programs demand quality assurance. BCH has been offering MMGS for 40 to 69-year-old women, since 2003, by means of three mobile units and a standardized breast unit, through the public health system. It is a pioneer Brazilian project, in a São Paulo State nonmetropolitan setting, that has to attend quality assurance to achieve results comparable to those presented in the actual literature. Objective: This study aims to analyze the quality performance indicators regarding diagnosis methods and treatment offered to women whose breast cancer was detected by the BCH MMGS program, between 2003 and 2010. Methods: We reviewed the medical records of breast cancer patients whose disease was detected by the BCH MMGS program during the period. Quality indicators included data about: stage, diagnosis, treatment, pathology, time intervals, and descriptive information. Symptomatic women at the moment of the first evaluation had their data evaluated separately from the asymptomatic. The data gathered were analyzed using SPSS 15. The results were compared to the European Breast Cancer Network Guidelines for quality assurance. Results: 257 patients were included in this study. Stages 0 and I corresponded to 68.3% (125/183) of the asymptomatic cases, and 33.8% (24/71) of the symptomatic group (desirable level >70%), with 3 missing cases. The mean tumor size was 1.96cm for the asymptomatic patients, and 3.2cm for the symptomatic (p=0.000). Breast conserving surgery was possible in 85.2% of the asymptomatic patients, and in 62.5% of the symptomatic. Among the 25 quality indicators adequately evaluated, 18 were in desirable levels. Seven of them were related to the surgical approach. One of the time interval indicators was considered acceptable (mean time interval between decision to operate and date of surgery = 17.9 working days, acceptable level = 15wd), but 2 were in insufficient levels. Time intervals for pathology reports were sufficient (82.1% of the diagnostic pathology reports were performed in 10wd or less, desirable level80%). Main deficiencies were related to time interval between the mammogram and the first evaluation (mean=32wd, acceptable level=5wd) and the evaluation and the results of the additional exams (mean=27wd, acceptable level=5wd). Conclusions: Stage quality indicators were adequate for the asymptomatic group. Symptomatic women had larger tumors, with more advanced stages. The multidisciplinary approach was important to achieve acceptable and desirable levels regarding diagnostic methods and treatment. Deficiencies concerning time intervals and possible barriers that represent delays demand a future action plan. The analysis of quality indicators was feasible and allowed to diagnose a partial adjustment in the diagnostic and treatment process of the cancer patients detected by the BCH MMGS based on the EBCN Guidelines criteria