Orientador: Paula Rahal / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Erika Cristina Pavarino Bertelli / Banca: Erico Tosoni Costa / Banca: Raphael Bessa Parmigiani / Resumo: O carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) é uma doença heterogênea que afeta o epitélio da cavidade oral, laringe e faringe. A maioria dos pacientes é diagnosticada em estágios avançados da doença e ainda não existe nenhum marcador sensível e específico para o comportamento agressivo deste tumor. Portanto, uma detecção precoce e biomarcadores de prognóstico são altamente necessárias para uma administração mais racional da doença. A hipermetilação de ilhas CpGs é um dos mecanismos epigenéticos mais importantes que levam a um silenciamento gênico em tumores e tem sido extensivamente utilizados para a identificação de biomarcadores. Neste estudo foram combinados as análises de Rapid Substractive Hybridization (RaSH) e microarray de uma maneira hierárquica para selecionar genes que, supostamente, são reativados pelo agente desmetilante 5'Aza'2'deoxicitidina (5Aza'dC) em linhagens celulares derivados de carcinoma de cabeça e pescoço (FaDu, UM' SCC'14A, UM'SCC'17A e UM'SCC'38). Esta análise combinada identificou 78 genes dos quais 35 foram reativados em, pelo menos, 2 linhagens celulares e apresentavam ilha CpG nas suas regiões 5'. A reativação de três destes 35 genes (CRABP2, MX1 e SLC15A3) foi confirmada por PCR em tempo real (Fold change ≥ 3). O seqüenciamento de bissulfito de sódio das suas ilhas CpGs revelou que eles estão, de fato, diferencialmente metilados em linhagens celulares derivadas de carcinoma de cabeça e pescoço. Foram detectadas uma maior freqüência de hipermetilação dos genes CRABP2 (58.1% para a região 1) e MX1 (46.3%) em amostras primárias de câncer de cabeça e pescoço quando comparados a linfócitos de indivíduos saudáveis utilizando o PCR de metilação específica (MSP). Finalmente a ausência da proteína CRABP2 foi associada com... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a heterogeneous disease affecting the epithelium of the oral cavity, pharynx and larynx. Most patients are diagnosed at late stages of the disease and no sensitive and specific predictors of aggressive behavior have been identified yet. Therefore, early detection and prognostic biomarkers are highly desirable for a more rational management of the disease. Hypermethylation of CpG islands is one of the most important epigenetic mechanisms that leads to gene silencing in tumors and has been extensively used for the identification of biomarkers. In this study, we combined Rapid Subtractive Hybridization (RaSH) and microarray analysis in a hierarchical manner to select genes that are putatively reactivated by the demethylating agent 5'aza'2'deoxycytidine (5Aza'dC) in HNSCC cell lines (FaDu, UM'SCC'14A, UMSCC'17A, UM'SCC'38A). This combined analysis identified 78 genes of which 35 were reactivated in at least 2 cell lines and harbored a CpG island at their 5' region. Reactivation of three out of these 35 genes (CRABP2, MX1 and SLC15A3) was confirmed by qRT'PCR (fold change ≥ 3). Bisulfite sequencing of their CpG islands revealed that they are indeed differentially methylated in the HNSCC cell lines. Using Methylation Specific PCR (MSP), we detected a higher frequency of CRABP2 (58.1% for region 1) and MX1 (46.3%) hypermethylation in primary HNSCC, when compared to lymphocytes from healthy individuals. Finally, absence of the CRABP2 protein was associated with decreased disease'free survival rates, supporting a potential use of CRABP2 expression as a prognostic biomarker for HNSCC patients / Doutor

Submitted by Maiara Damasceno (maiaramerico@gmail.com) on 2017-02-26T18:29:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado.pdf: 1718307 bytes, checksum: ab4e786d599438328199ff1f8e4830f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Auxiliadora da Silva Lopes (silopes@ufba.br) on 2017-03-02T15:17:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado.pdf: 1718307 bytes, checksum: ab4e786d599438328199ff1f8e4830f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-02T15:17:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado.pdf: 1718307 bytes, checksum: ab4e786d599438328199ff1f8e4830f5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A pesquisa em questão descreve os processos nativos de aprendizagem entre os Kariri-Xocó, população indígena localizada em uma área urbana da cidade de Porto Real do Colégio, no estado de Alagoas. Neste trabalho, o corpo é tratado como principal ferramenta para entender como se constitui a pessoa Kariri-Xocó, seu modo de pensar a si e os outros, e seus modos de aprender. O interesse do estudo emergiu da necessidade de refletir sobre os “processos próprios de aprendizagem” indígenas, aspecto presente em alguns textos de ordem legal ao reportar-se a Educação Escolar Indígena, bem como em função das lacunas existentes em abordagens sobre essa temática. Para tanto, lança-se mão da etnografia e das técnicas de observação participante, conversação e entrevistas abertas, além do diálogo com os campos da Etnologia Indígena e da Antropologia da Educação. Foi possível perceber, que os Kariri-Xocó possuem formas próprias de aprender, que se configuram através do acesso e participação nas práticas. A aprendizagem que é possível através do fumo, dos sonhos, do silêncio, dos sinais dos animais, dificilmente poderia adentrar ao espaço escolar e atender os objetivos de uma educação diferenciada que “respeite os processos próprios de aprendizagem”. Esta, porém, não é uma demanda dos Kariri-Xocó. Eles não estão preocupados que essas formas de aprendizagens façam parte do seu currículo escolar, desejam, no entanto, assegurar que suas formas próprias de aprender continuem a existir, o que significa assegurar também a existência da sua origem. A noção de origem enquanto coisa de raiz, aquilo que vem de dentro, surge como elemento central para refletir sobre os processos nativos de aprendizagem e suas implicações com o que vem de fora. / ABSTRACT This research describes native processes of learning among the Kariri-Xocó, indigenous population located in an urban area of Porto Real do Colégio, city located in the state of Alagoas. In this work, the body is treated as the main tool to understand how is the person Kariri-Xocó, its way of thinking about itself and the others, and its learning ways. The interest in this study came from the need of reflecting about the indigenous “processes of learning”, aspect present in some texts of legal nature to refer intself to indigenous school education, as well as on the gaps in approaches to this theme. Therefore, we worked with the ethnography and participant observation techniques, conversation e open interviews, beyond dialog with the fields of indigenous ethnology and anthropology of education. It was possible to realize that the Kariri-Xocó people have their own ways of learning, which are set through the access and participation in practices. The learning that is possible through the smoke, dreams, silence and animals‟ signs, could be hardly used in school and fulfill the objectives of a different education that “respects its own processes of learning”. However, this is not a Kariri-Xocó‟s demand. They are not concerned about these learning ways being part of their school curriculum, however, they want to assure that their own learning ways continue to exist, what means to assure the existence of their own origin. The notion of origin as root thing, which comes from within, appears as central element to reflect about the native processes of learning and their implications with what comes from outside

BENEVIDES, B. S. Avaliação da alteração do perfil de colágeno de dentes extraídos de pacientes submetidos a radioterapia de cabeça e pescoço. 2016. 71 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-30T12:38:21Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_bsbenevides.pdf: 2914070 bytes, checksum: 512dde631ba2f8e91175ab0dbc320949 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-30T12:38:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_bsbenevides.pdf: 2914070 bytes, checksum: 512dde631ba2f8e91175ab0dbc320949 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T12:38:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_bsbenevides.pdf: 2914070 bytes, checksum: 512dde631ba2f8e91175ab0dbc320949 (MD5) Previous issue date: 2016-05-11 / Compromised dental health by incidence of radiation is taken as a result of the reduction in salivary flow as well as possible direct radiogenic damage to tooth structure. The exact nature of the latter remains to be elucidated. The aim of this paper is to investigate the anatomical predominance of collagen type I and type III in the dentin and periodontal ligament and the amount of these collagens in the periodontal ligament of extracted teeth within the radiation fields of patients who have underwent radiotherapy (RT) for treatment of malignant head and neck tumors. The sample consisted of 20 teeth, 8 carious teeth of patients who underwent total dose of less radiation than 60 Gy (experimental group I - EG I), 6 carious teeth of patients who underwent total radiation dose equal to or greater than 60 Gy (experimental group II - EG II) and 6 healthy erupted teeth not subjected to radiation (control group - CG). A histomorphometrical study was conducted using the staining technique Picrosirius Red with polarized light. Qualitative analysis of dentin noticed the predominance of type III collagen in the surrounding regions to carious lesions in EG I, general predominance of type III collagen throughout the dentin of EG II and general predominance of type I collagen in the dentin of the CG. Qualitative analysis of the periodontal ligament noticed that the CG and EG I there was a predominance of type I collagen in the cervical third and type III in the apical third. In the EG II, the fibers were more disorganized and there was no more the previous dominance pattern. Quantitative analysis of the periodontal ligament noticed that the total of collagen type I showed significantly reduced in EG I (48.8 ± 6.1%) or EG II (49.1 ± 5.0%) in relation to the periodontal ligament of the CG (69.7 ± 6.3%) (p = 0.047). Total collagen type III showed significantly higher in EG I (51.2 ± 6.1%) or in EG II (50.9 ± 5.0%) in relation to the periodontal ligament of the CG (24.8 ± 5.1%) (p = 0.006). Conclusion: ionizing radiation promotes collagen changes in the dentin and periodontal ligament of teeth within the radiation fields of patients who have underwent head and neck RT. / O comprometimento da saúde dental pela incidência de radiação é tido como resultado da redução do fluxo salivar bem como de possíveis danos radiogênicos diretos à estrutura dental. A natureza exata destes últimos ainda está por ser elucidada. A partir deste contexto, o presente estudo objetiva analisar a predominância anatômica de colágeno tipo I e colágeno tipo III da dentina e do ligamento periodontal assim como a quantidade de colágenos tipos I e III do ligamento periodontal de dentes contidos nos campos de radiação extraídos de pacientes submetidos a radioterapia (RT) para tratamento de neoplasias malignas de cabeça e pescoço. A amostra foi constituída de 20 dentes, sendo oito dentes cariados submetidos à dose total de radiação menor que 60 Gy (grupo experimental I - GE I), seis dentes cariados submetidos à dose total de radiação igual ou maior que 60 Gy (grupo experimental II - GE II) e seis dentes hígidos erupcionados não submetidos a radiação (grupo controle - GC). Foi realizado estudo histomorfométrico através da técnica de coloração Picrosirius Red com luz polarizada. Análise qualitativa: em relação à dentina, percebeu-se predominância de colágeno tipo III nas regiões circunjacentes às lesões cariosas no GE I, predominância geral de colágeno tipo III em toda a dentina no GE II e predominância geral de colágeno tipo I na dentina do GC. Em relação ao ligamento periodontal, percebeu-se que, no grupo controle, houve predominância de colágeno tipo I no terço cervical e tipo III no terço apical. Esse comportamento foi similar no GE I, mas no GE II as fibras se mostraram mais desorganizadas e não havia mais o padrão de predominância anterior. Análise quantitativa: o total de colágeno tipo I se mostrou significantemente reduzido no GE I (48.8±6.1%) ou 60 Gy ou GE II (49.1±5.0%) em relação ao ligamento periodontal do GC (69.7±6.3%) (p=0.047). O total de colágeno tipo III se mostrou significantemente maior nos grupos experimentais I (51.2±6.1%) ou II (50.9±5.0%) em relação ao ligamento periodontal do GC (24.8±5.1%) (p=0.006). A partir desses achados, conclui-se que a radiação ionizante promove alterações do colágeno da dentina e do ligamento periodontal em dentes de pacientes que foram submetidos a RT de cabeça e pescoço.

O carcinoma espinocelular (CEC) de cabeça e pescoço é uma neoplasia maligna de prognóstico desfavorável e baixa taxa de sobrevida. Entender os processos biológicos envolvidos na carcinogênese poderá ser de extrema importância para o desenvolvimento de novas tecnologias de tratamento e melhora do prognóstico em pacientes acometidos pela doença. A maior causa de insucessos clínicos em termos de terapia e prognóstico em pacientes com câncer é a invasão tecidual e o desenvolvimento de potencial metastático. A migração celular é indispensável para a progressão tumoral e as células apresentam motores moleculares desempenhados especialmente pela família da Miosina II não muscular (MNMII). Codificadas por diferentes genes, existem três isoformas conhecidas em células de mamíferos (MNMIIA, MNMIIB, MNMIIC). As MNMIIs estão envolvidas em funções celulares como migração, adesão e citocinese. Sendo o entendimento da migração, adesão celular e citocinese fatores chave na progressão tumoral, e que o a invasão tecidual e o desenvolvimento de potencial metastático são essenciais na definição do prognóstico dos pacientes, o objetivo deste estudo foi descrever o perfil e exposição à fatores de risco como álcool e fumo dos pacientes diagnosticados com CEC de cabeça e pescoço, graduação histológica, parâmetros clínicos tumorais (TNM), padrão de expressão das isoformas de MNMII (MNMIIA, MNMIIB, MNMIIC) no centro do tumor, zona de invasão e tecido epitelial não neoplásico adjacente ao tumor, relacionando a expressão e localização dessas proteínas com os dados descritos bem como evolução dos pacientes após 5 anos de acompanhamento. De acordo com os resultados sugere-se que a MNMIIB expressa no EA possa indicar o potencial de metástase regional do CEC e a MNMIIC presente na zona de invasão tumoral (ZI) seja um fator predictor de prognóstico ruim da doença. Sendo assim, é possível propor que a avaliação de imunorreatividade da MNMIIB no EA e MNMIIC na ZI seja utilizada na análise das peças operatórias, como complemento à análise morfológica de rotina. / Squamous cell carcinoma (SCC) of the head and neck is a malignant neoplasm of poor prognosis and low survival rate. Understand the biological processes involved in carcinogenesis can be extremely important for the development of new treatment technologies and improved prognosis in patients affected by the disease. The major cause of clinical failure in terms of therapy and prognosis in cancer patients is the development of tissue invasion and metastatic potential. Cell migration is essential for tumor progression and the cells have molecular motors especially formed from non-muscular myosin II family (NMMII). Encoded by different genes, there are three known isoforms in mammalian cells (NMMIIA, NMMIIB, NMMIIC). The NMMIIs are involved in cellular functions such as migration, adhesion, and cytokinesis. As the understanding of migration, cell adhesion and cytokinesis key factors in tumor progression, and that the tissue invasion and metastatic potential for development are essential in defining the prognosis of patients, the objective of this study was to describe the profile and exposure to risk factors such as alcohol and tobacco of patients diagnosed with head and neck SCC, histological grading, tumor clinical parameters (TNM), pattern of expression of isoforms NMMII (NMMIIA, NMMIIB, NMMIIC) in the center of the tumor (CT), tumor invasion zone area and not neoplastic adjacent to the tumor (AE), relating the expression and localization of these proteins with the data described and outcome of patients after 5 years of follow-up. According to the results it is suggested that the NMMIIB expressed in AE may indicate the potential regional metastasis of SCC and NMMIIC present in the tumor invasion zone (IZ) is a predictor factor of poor prognosis of the disease. Therefore, it is possible to propose that immunoreactivity assessment of NMMIIB in EA and NMMIIC in IZ could be used in the analysis of operative parts, as a complement to routine morphological analysis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Enfermagem, Programa de Pós-graduação em Enfermagem, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2015-12-04T11:52:08Z No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaOliveiradeAlmeidaMarquesdaCruz.pdf: 4002154 bytes, checksum: ce218ead98fc68dcda64c950a9e4e764 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-12-04T12:54:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaOliveiradeAlmeidaMarquesdaCruz.pdf: 4002154 bytes, checksum: ce218ead98fc68dcda64c950a9e4e764 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-04T12:54:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaOliveiradeAlmeidaMarquesdaCruz.pdf: 4002154 bytes, checksum: ce218ead98fc68dcda64c950a9e4e764 (MD5) / Um instrumento educativo em forma de manual impresso pode ser considerado uma importante estratégia de suporte para atividades terapêuticas, uma vez que ajuda o indivíduo a assimilar e a compreender a quantidade de informações que lhe é transmitida. Considerando-se a importância de se garantir a validade de um material antes da sua utilização, o objetivo deste estudo foi validar o conteúdo e a aparência de manual educativo direcionado aos pacientes com câncer de cabeça e pescoço submetidos à radioterapia. Trata-se de pesquisa metodológica, de caráter descritivo, com abordagem quantitativa, em que se optou por utilizar a Teoria da Psicometria proposta por Pasquali como referencial teórico-metodológico para o processo de validação. Para isso, foi considerado o Índice de Concordância de, no mínimo, 80%, a fim de se garantir a adequação do material. Para a escolha dos participantes do estudo, fez-se uso da amostragem não probabilística intencional, com base nos critérios adaptados do modelo de Fehring. Os dados foram obtidos por meio de instrumento de avaliação na forma de escala Likert, com 5 níveis de entendimento acerca dos itens, os quais foram distribuídos em 3 blocos de análise. A coleta de dados foi realizada no período de outubro de 2014 a abril de 2015. Compuseram a amostra 15 peritos na área temática do manual educativo e 2 profissionais de Letras e Publicidade. Apenas um item, relacionado ao nível sociocultural do público-alvo, obteve IC < 80%, tendo sido reformulado com base nas sugestões dos juízes. Todos os outros itens abordados no instrumento de avaliação do manual educativo foram considerados adequados e/ou totalmente adequados nos três blocos de análise propostos: objetivos - 92,38%, estrutura e apresentação - 89,74%, e relevância - 94,44%. Portanto, o manual educativo proposto foi considerado válido segundo conteúdo e aparência. Sugere-se que o referido material possa contribuir para a compreensão do processo terapêutico ao qual o paciente com câncer de cabeça e pescoço é submetido ao realizar a radioterapia, além de subsidiar a prática clínica por meio da consulta de enfermagem. / An educational tool in the form of printed manual can be considered an important support strategy for therapeutic activities, as it helps the individual to assimilate and understand the amount of information transmitted to it. Given the importance of ensuring the validity of a material before its use, the objective of this study was to validate the content and appearance of educational manual directed to patients with head and neck cancer undergoing radiotherapy. It is a methodological research, descriptive, with quantitative approach. It was decided to use the Psychometrics Theory proposed by Pasquali as a theoretical and methodological reference for the validation process. It was considered the Concordance Index at least 80% to ensure the suitability of the material. For the choice of study participants, there was no intentional use of probability sampling, based on criteria adapted from Fehring model. The data were obtained through assessment tool in the form of Likert scale with five levels of understanding about the items, which have been distributed in 3 analysis blocks. The data collection was conducted from October 2014 to April 2015. The sample was composed by 15 experts in the subject area of the education manual and 2 letter and advertising professionals. Only one item, related to socio-cultural level of the target audience, obtained IC <80%, having been reformulated based on the suggestions of the judges. All other items discussed in assessment tool of the educational manual were considered adequate and/or totally adequate in the three proposed analysis blocks: goals - 92.38%, structure and presentation - 89.74%, and relevance - 94.44%. Therefore, the educational manual proposed was considered valid according to content and appearance. It is suggested that this material can contribute to the understanding of the therapeutic process to which the patient with head and neck cancer is submitted to perform radiotherapy, in addition to supporting the clinical practice through nursing consultation.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Objetivo: verificar a eficacia do laser de baixa potencia na mitigacao da xerostomia e do hipofluxo salivar em pacientes portadores de cancer de cabeca e pescoco submetidos a radio e quimioterapia (RT-QT). Material e Metodo: estudo prospectivo, com 29 pacientes submetidos a radioterapia (RT) em aparelho de megavoltagem (acelerador linear 6 MV, ou telecobaltoterapia u60Co) em campos cervicofaciais e fossa supraclavicular, fracoes de 2 Gy/dia, com dose minima de 66 Gy, associada a quimioterapia (QT) (derivados da platina). Foram divididos em: Grupo LASER, com 17 pacientes que receberam a laserterapia antes da primeira sessao da RT, 3 dias por semana e grupo CONTROLE com 12 pacientes que receberam tratamento clinico conforme protocolo do Setor. Foi utilizado um InGaAlP laser diodo, com a ponta do emissor de 0,04 cm3. Para a aplicacao intra oral do laser, foi utilizado comprimento de onda de 660 nm e 40 mW de potencia, dose media de 10 J/cm², 10 segundos por ponto, sendo 3 em cada mucosa jugal, 3 em cada mucosa labial, 2 em palato duro, 1 em palato mole, 1 no dorso da lingua, 2 em cada bordo de lingua, 1 em cada pilar amidaliano, 2 em soalho bucal. Para a aplicacao extra-oral, o comprimento de onda utilizado foi de 780 nm e 15 mW de potencia, dose media de 3,7 J/cm², 10 segundos por ponto, sendo 6 em cada parotida e 2 em cada submandibular. Foram avaliados os sintomas da xerostomia pelo sistema simplificado de Eisbruch et al e o fluxo salivar nao estimulado antes da primeira sessao de RT (N0), na 15ª(N15) e na ultima sessao de RT (Nf), 30 (N30) e 90 (N90) dias depois do termino do tratamento. Resultados: 89,66% dos pacientes eram do genero masculino, com media de idade de 57,37 anos e a maior parte da raca branca (72,41%). A maioria dos pacientes apresentou tumores em faringe (65,5%) em estadio IV (75,9%) e foram tratados predominantemente com dose total da RT de 70 Gy (82,8%). Na avaliacao dos sintomas da xerostomia, o grupo LASER apresentou menores graus em todos os tempos de avaliacao que, porem, nao foram estatisticamente significantes quando comparados aos controles. Em relacao as medidas do fluxo salivar em mL/min, o grupo que foi tratado com o laser apresentou medias significantemente maiores quando comparado ao grupo CONTROLE na 15ª sessao (p=0,009), ao final (p=0,027) da RT e 30 dias apos o termino do tratamento (p=0,035). Noventa dias depois do termino do tratamento, a media do fluxo salivar do grupo LASER foi quase o dobro do grupo CONTROLE, porem nao apresentou significancia estatistica. Conclusoes: O uso do laser de baixa potencia em glandulas salivares nos pacientes portadores de cancer de cabeca e pescoco submetidos a RT-QT permitiu niveis de fluxo salivar significantemente maiores em comparacao aos pacientes que somente receberam o tratamento clinico rotineiro. Os resultados sugerem tambem que o laser de baixa potencia possa reduzir os sintomas relacionados a xerostomia. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Os papilomavírus humanos (HPVs) oncogênicos são importantes agentes na gênese do câncer ginecológico e têm sido implicados também nos cânceres da boca. Com objetivo de avaliar a relação entre o HPV e o carcinoma espinocelular (CEC) da língua, foram selecionados 50 pacientes do sexo masculino, da raça branca, fumantes e com diagnóstico histológico de CEC, e um grupo controle composto por 10 pacientes sem evidências clínicas de lesão na língua. A reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi utilizada para detectar a presença do genoma HPV em amostras de tecido fresco, provenientes CEC da margem da língua. Trinta e sete pacientes (74%) apresentaram resultado positivo de PCR para papilomavírus oncogênicos, sendo que no grupo controle apenas uma amostra (10%) foi positiva para os papilomavírus não-oncogênicos. Pôde-se concluir através de análise estatística deste trabalho que o paciente portador de papilomavírus oncogênico na cavidade bucal possui 25,6 vezes mais chance de desenvolver o CEC da língua devendo, portanto ser acompanhado de forma sistemática, através de exames clínico e complementar. / The oncogenic human papillomavirus (HPVs) are important agents in the genesis of gynecological cancer and have been also related to mouth cancer. Aiming to assess the relation between HPV and squamous cell carcinoma (SCC) of the tongue, 50 white male smokers with a histological diagnosis of SCC and a control group composed of 10 subjects with no clinical evidence of lesions in the tongue were selected. Polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the presence of the HPV genome in fresh tissue samples from SCC in the edge of the mouth. Thirty-seven patients (74%) had a positive PCR for oncogenic papillomavirus, and in the control group only one sample (10%) was positive for non-oncogenic papillomavirus. Based on the statistical analysis, we concluded patients with oncogenic papillomavirus in the oral cavity are 25.6-fold more likely to develop SCC of the tongue and must be systematically followed-up by clinical and complementary tests. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

As maiores taxas de câncer de esôfago no Brasil ocorrem no Rio Grande do Sul (18/100.000/ano para homens e 6/100.000/ano para mulheres em 2012), onde o carcinoma de células escamosas é o mais frequente. Além disso, a incidência de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (CCECP) também é significativa nesta região (11/100.000/ano para o câncer da cavidade oral e 10/100.000/ano para o câncer da laringe em homens em 2012). O tabagismo e o consumo de álcool são os principais fatores de risco tanto para o carcinoma de células escamosas do esôfago (CCEE), quanto para o CCECP. O papel do HPV no desenvolvimento de CCEE permanece controverso. Por outro lado, existem evidências de que o CCECP HPV+ é uma entidade distinta em comparação ao CCECP associado ao consumo de tabaco e de álcool. Com o objetivo de investigar a associação da infecção pelo HPV com o CCEE e o CCECP no sul do Brasil, foram avaliados, prospectivamente, as amostras de três grupos. O grupo 1 foi formado por pacientes com CCEE, onde foram avaliadas amostras do tumor e de áreas de mucosa esofágica sem tumor. O grupo 2 foi formado por pacientes com CCECP, onde foram avaliadas biópsias do tumor primário e de áreas da mucosa esofágica, tanto iodo positivas quanto iodo negativas. O grupo 3 foi formado por pacientes dispépticos, não fumantes/não alcoolistas, com mucosa esofágica de aspecto normal pela endoscopia digestiva alta, onde foram realizadas biópsias do esôfago médio. Com extremo cuidado para evitar a contaminação do DNA, foi utilizada a técnica de nested-PCR com os primers gerais MY09/MY11 e GP5/GP6 para pesquisar a presença do HPV em amostras de tecido fixado em formalina e armazenados em parafina. Nós planejamos a realização de genotipagem do produto final da PCR para 73 tipos de HPV. O Grupo 1 incluiu 51 amostras de CCEE e 51 amostras de áreas esofágicas não tumorais. No Grupo 2, haviam 37 pacientes com 35 biópsias do tumor primário, 32 de áreas iodo positivas do esôfago (27 normais e 5 esofagites) e 17 de áreas não coradas do esôfago (15 normais e 2 esofagites). Neste grupo, um paciente apresentou tumores sincrônicos de CCECP e CCEE. O Grupo 3 incluiu 37 pacientes, 35 com mucosa esofágica normal e 2 com esofagite leve. Em um total de 224 amostras, apenas 6 apresentaram material inadequado para análise pela PCR. O DNA do HPV foi negativo em todas as 218 amostras pela técnica de nested-PCR. Portanto, a análise de pacientes com CCEE e CCECP sugere que não há evidências de que o HPV esteja envolvido na carcinogênese do trato aerodigestivo superior no sul do Brasil. / The highest rates of esophageal cancer in Brazil occur in Rio Grande do Sul (18/100,000/year for men and 6/100,000/year for women in 2012), where squamous cell carcinoma is the most common. Furthermore, the incidence of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is significant in this region (11/100,000/year for cancer of the oral cavity and 10/100,000/year for laryngeal cancer in men in 2012). Tobacco smoking and alcohol consumption are the major risk factors for esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and HNSCC. The role of HPV in the development of ESCC remains controversial. Otherwise, there are some evidences that HPV-related HNSCC is a distinct entity compared with HNSCC associated with smoking and alcohol consumption. In order to investigate the association of HPV infection with ESCC and HNSCC in southern Brazil, we evaluated, prospectively, samples from three groups. Group 1 was formed by patients with ESCC where we evaluated esophageal samples from tumor and from nontumoral areas. Group 2 was formed by HNSCC patients. We assessed biopsies from primary tumor and esophageal biopsies from either iodine negative or positive areas. Group 3 was formed by dyspeptic patients, no smokers/non alcoholics, with normal appearing esophageal mucosa in Upper GI Endoscopy, where biopsies were taken from middle esophagus. With extreme care to prevent DNA contamination, we used nested PCR with the general primer sets MY09/MY11 and GP5/GP6 for HPV L1 in formalin fixed paraffin-embedded tissue. We planned to genotype the final PCR product for 73 HPV types. Group 1 included 51 samples from ESCC and 51 samples of esophageal non-tumoral areas. In Group 2, there were 37 patients with 35 biopsies taken from primary tumor, 32 from iodine positive esophageal areas (27 normal and 5 esophagitis) and 17 from unstained esophageal areas (15 normal and 2 esophagitis). In this group, 1 patient had synchronous tumors of HNSCC and ESCC. Group 3 included 37 patients, 35 with normal esophageal mucosa and 2 with mild esophagitis. A total of 224 samples fixed in formalin and stored in paraffin, only 6 samples showed inappropriate material for PCR analysis. HPV DNA was negative in all 218 samples. Therefore, we did not carry out the genotyping. In patients with ESCC and HNSCC from Southern Brazil, there is no evidence that HPV is involved in upper aerodigestive carcinogenesis.

Introdução: O carcinoma espinocelular (CEC) representa 7% de todos os novos casos de câncer no mundo, sendo o carcinoma espinocelular o tipo mais frequente. Tanto o comportamento biológico quanto o crescimento dos tumores devem ser melhores entendidos, uma vez que a sobrevida dos pacientes apresentou discreta melhora nas últimas décadas. Os modelos PDX foram desenvolvidos para estudar a biologia tumoral e principalmente os mecanismos de crescimento e proliferação através da manutenção da arquitetura e microambiente tumoral do tumor original. Os retinóides possuem a capacidade de restaurar o crescimento e a diferenciação de células normais através da ação dos receptores retinóides nucleares (RARs e RXRs) que são os principais mediadores destas ações que ao sofrerem alterações na sua expressão podem levar ao desenvolvimento e manutenção de tumores. No estudo da carcinogênese o modelo PDX é uma importante ferramenta pois mantém a arquitetura e microambiente do tumor original melhorando a compreensão de algumas vias, entre estas o processo de EMT/MET, na diferenciação das células tronco tumorais e quais receptores nucleares podem estar influenciando nestas vias. Objetivos: Analisar os padrões de comportamento biológico - tempo de formação e expansão do tumor e a manutenção dos padrões histológicos e de arquitetura do tumor original - em F0 e F1 no modelo PDX (xenoenxerto derivado de paciente) das amostras de centro de tumor e epitélio adjacente em camundongos Balb C/nude e avaliar a expressão gênica dos receptores retinóides, ALDH1 e marcadores do processo de EMT/MET por RT-PCR em PDX de carcinoma espinocelular oral em comparação com a amostra dos pacientes doadores nas passagens F(0) e F(1). Método: 24 camundongos Balb C/Nude, divididos em 2 grupos TG(I) – tumor graft paciente (I) e TG(II) – tumor graft paciente (II), subdivididos em 4 grupos de 3 animais: (A) – receberam PDX do centro do tumor; (B) – receberam PDX de epitélio adjacente ao tumor (margem de segurança cirúrgica); (C) receberam PDX de um animal do grupo (A); (D) receberam PDX de um animal do grupo (B). E Após estas fases, as amostras coletadas serão avaliadas por RT-PCR para comparação das expressões gênicas entre a amostra original (CT e EA) com os PDX´s nas passagens F(0) e F(1). Resultados: formação de tumores em todos os grupos – tanto do PDX de fragmento de centro do tumor quanto do PDX do epitélio adjacente. E A expressão gênica dos parâmetros observados não diferem no tumor original e passagem F(0) significativamente diferentes em F(1) (p<0,05). Conclusões: A técnida do PDX para o CEC é possível de ser realizada em menor tempo com a implantação de apenas um fragmento do tumor. Os tumores resultantes do PDX apresentaram tamanho suficiente para novas passagens, bem como para seu 6 uso em estudos de comportamento biológico das células neoplásicas. Quanto ao epitélio adjacente ao tumor (margem de segurança cirúrgica) constatou-se a presença de células tumorais com potencial de promover o crescimento de tumores devendo portanto ser melhor observada nas ressecções. O PDX de primeira passagem F(0) é o que mais se assemelha com o tumor original sendo o melhor para testes terapêuticos e estudos da carcinogênese do CEC oral. Keywords: CECP, modelo PDX, xenoenxerto, margem de segurança cirúrgica, , receptores retinóides, microdissecção a laser. / Introduction: Squamous cell carcinoma (SCC) represents 7% of all new cases of cancer in the world, with squamous cell carcinoma being the most frequent type. Both the biological behavior and the growth of the patients should be better understood, since the patients' survival show unobtrusive improvement in the last decades. PDX models were developed to study a tumor biology and especially the mechanisms of growth and proliferation through maintenance of the architecture and tumor microenvironment of the original tumor. Retinoids have a capacity to restore normal cell growth and differentiation through the action of nuclear retinoid receptors (RARs and RXRs) that are the main mediators and maintenance actions of tumors. In the study of carcinogenesis, the PDX model is an important tool because it maintains an architecture and microenvironment of the original tumor, improving an understanding of some pathways, among them in the EMT / MET process, the difference in tumor stem cells and which nuclear receptors may be influencing these routes. Objectives: To analyze changes in methodology and patterns of biological behavior - time of tumor formation and expansion and maintenance of histological and architectural patterns of the original tumor - in F0 and F1 without PDX model (patient derived xenograft) tumor and adjacent epithelium in Balb C / nude mice and to evaluate the gene expression of retinoid receptors, ALDH1 and EMT / MET process markers by RT-PCR in PDX of oral squamous cell carcinoma compared to a sample of donor patients in F ( 0) and F (1). Method: 24 Balb C / Nude mice, divided into 2 groups TG (I) - patient tumor graft (I) and TG (II) - patient tumor graft (II) subdivided into 4 groups of 3 animals: (A) - received PDX from the center of the tumor; (B) - received epithelial PDX adjacent to the tumor (surgical margin of safety); (C) received PDX from one animal of group (A); (D) received PDX from one animal of group (B). E After these phases, as samples collected for RT-PCR evaluation for comparison of gene expressions between an original sample (CT and EA) with F passages of PDX F (0) and F (1). Results: tumor formation in all groups - both the PDX of the tumor center fragment and the PDX of the adjacent epithelium. E The gene expression of the observed parameters did not differ without original tumor and F (0) differential passage in F (1) (p <0.05). Conclusions: The PDX technique for CPB is possible to be performed in a shorter time with a tumor fragment implantation. Tumors resulting from PDX presented the solution for new passages, as well as for their use in studies of the biological behavior of neoplastic cells. As for the epithelium adjacent to the tumor (surgical margin of safety), a presence of tumor cells with the potential to promote the growth of tumors has been observed and should therefore be better observed in the resections. The first pass PDX F (0) is the one that most closely resembles the 8 original tumor being the best for therapeutic tests and studies of oral SCC carcinogenesis.

O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP) é um problema de saúde pública que apresenta alta taxa de mortalidade, frequentemente relacionado à presença de recorrências locais e metástases. A descoberta de um pequeno subconjunto de células tumorais com características semelhantes às células-tronco, conhecidas como células-tronco tumorais (CTTs), tem sido relatadas como as principais responsáveis pelo início, progressão e recidiva do CECP. O processo de metástase nestas neoplasias é bastante complexo e envolve o desprendimento de células epiteliais tumorais do local de aparecimento primário devido à subexpressão ou superexpressão de algumas proteínas específicas nestas células, caracterizando um processo conhecido como transição epitélio-mesenquimal (EMT). A compreensão dos mecanismos envolvidos no processo de EMT têm sido investigados para o desenvolvimento de terapias específicas. O ácido retinoico (AR) vem sendo empregado em diversas terapias devido a sua capacidade de controlar a proliferação e promover diferenciação celular, entretanto, anormalidades na expressão ou função de seus receptores são relatadas em muitos tipos de células do câncer. Este estudo tem por objetivo correlacionar a expressão de marcadores do processo de EMT, marcador de célula tronco tumoral (ALDH1) e receptores do ácido retinoico e de retinoide X (isoformas α e β) em amostras teciduais provenientes de portadores de CECP primários, além, de correlacionar os resultados obtidos com os parâmetros clínicos, características histopatológicas e prognóstico destes pacientes em um período de acompanhamento de 7 anos. / The head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a public health problem that presents high mortality rates in relation to the presence of local recurrences and metastases. A finding of a small subset of tumor cells with stem like-cells characteristics, known as cancer stem cells (CTTs), has been reported as being primarily responsible for the onset, progression and recurrence of CECP. The metastasis process in these neoplasms is quite complex and involves the tumor epithelial cells detachment from the primary site of appearance due to underexpression or overexpression of some specific proteins in these cells, characterizing the epithelial-mesenchymal transition (EMT) process. An understanding of the mechanisms involved in the EMT process has been investigated for the development of specific therapies. Retinoic acid (AR) has been used in several therapies because its ability to control the proliferation and promote cell differentiation, however, abnormalities in the expression and function of its receptors are reported in many types of cancer cells. The aim of this study was to correlate the expression EMT process markers, tumor stem cell marker (ALDH1), retinoic acid and retinoic acid X receptors (α and β isoforms) in tissue samples from primary CECP, in addition, to correlate the results with the clinical parameters, histopathological and prognostic characteristics of these patients in a 7 years follow-up.