Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000444782-Texto+Completo-0.pdf: 1327290 bytes, checksum: 51c0bcf62b76809d6ed98fd7aca7d6b9 (MD5) Previous issue date: 2011 / The Wilms Tumors (WT) is the most frequent renal tumors of children, and although curable, fatal outcomes may occur. A number a genetic alterations have been suggested as associated factors but still, the exact pathogenesis of WT remains to be fully characterized. Tissue factor (TF) is a glycoprotein which happens to be a key receptor for factor VII/VIIa and is the primary initiator of blood coagulation. Also important, TF has been associated with processes that lead to angiogenesis. It is widely expressed among cells and tissues and recent evidences pointed out an important role for TF in cancer progression and metastasis. Recent evidences suggested that TF may have a role in WT since its immunodetection was associated with poor prognosis. In the present investigation the differential expression of TF was assessed in WT using real-time PCR of RNA retrieved from paraffin sections using microdissection. Different histological components of WT - (blastema, epithelial and stromal) were analysed and the results revealed that TF in blastema and epithelial components was upregulated (14. 38 and 16. 02-fold respectively, P<0. 001). Stroma and control non neoplasic tissues expressed similar levels of expression (P>0. 05). TF expression in metastatic lesions from WT was also singificantly upregulated compared to non metastatic lesions. Microvessel density was positively correlated with TF expression (r=0. 721). As described for other tumors, TF seems to play a role in malignancy or WT. Further investigations are warranted to better understand the pathways by which TF exerts its effects on tumor progression. Noteworthy, pharmacological strategies that aim at controlling angiogenesis through regulation of TF may be very promising. / Esta pesquisa teve como objetivo demonstrar a expressão diferencial do fator tecidual (FT) em tumor de Wilms (TW), através de um estudo do tipo transversal. O TW é a neoplasia renal maligna mais comum na infância. Os estudos sobre angiogênese em neoplasias malignas pediátricas apresentam possíveis vias de terapias antiangiogênicas, com menor agressividade e melhor especificidade tumoral. E, entre os fatores angiogênicos possíveis, foi estudo o Fator Tecidual (FT), proteína transmebrana com sua principal função no processo de hemostasia, mas que demonstra ter importante papel nos processos patológicos de tumorigênese, angiogênese e microambiente tumoral favorável à disseminação neoplásica. Sua expressão vem sendo associada às metástases e piora no prognóstico. Contuto, só a partir da pesquisa de Maciel et al (1) que a associação do FT com TW foi observada, onde se encontrou, utilizando imunoistoquímica, a correlação positiva entre a expressão do FT, recidiva tumoral e óbito. Então, a partir desses dados iniciais, a presente pesquisa analisou uma amostra com 27 espécimes fixadas em parafina de TW e 26 controles (área sem TW), para demonstrar a expressão diferencial do FT em TW, através da técnica de quantificação de ácidos nucléicos (RNAm) por Reação Cadeia de DNA Polimerase em Tempo Real (RT-PCR), avaliar a expressão do FT em diferentes componentes tumorais, com a densidade microvascular (DMV) do TW e a ocorrência de metástases. Foi observado aumento da expressão diferencial do FT no TW, sua maior variação do FT foi encontrada nos componentes blastematoso e epitelial, enquanto no componente estromal apresentou variação mínima em relação ao tecido não tumoral, em lesões metastáticas o FT se mostrou significativamente mais elevado, sugerindo um papel importante para essa proteína no processo de disseminação dessas células malignas, o aumento da DMV apresentou associação positiva com a expressão do FT. Os resultados apresentados corroboram os achados de Maciel et al (1) de forma mais concisa e quantitativa, enfatizando a importância do FT na biologia do TW.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000432089-Texto+Completo-0.pdf: 1649266 bytes, checksum: 3e3046dcd0a44006a99c0bdc29d77364 (MD5) Previous issue date: 2011 / Diagnostic methods of TB, nowadays, are prone to delay in diagnosis, increased false negative results and are not sensitive to many forms of paucibacillary disease. The aforementioned are critical since the infected individuals remain untreated in the community, increasing the likelihood of disease transmission and epidemic aggravation, which urges the need of new diagnostic methods. In this context, the aims of this study were to implement a quantitative nucleic acid-based diagnostic test for paucibacillary tuberculosis, enabling the identification and quantification of viable Mycobaterium tuberculosis (Mt) bacilli by fluorescence-assisted PCR, i. e., Real-Time PCR (RT PCR). The intergenic region of the inhA-mabA gene, which is single copy gene, was chosen as the target region to design specific primers and probes conjugated with fluorophores (TaqMan), because of its importance in the biosynthesis of mycolic acids. The construction of synthetic DNA flanking the target region served as standards for absolute quantification of nucleic acids. The DNA can remain intact after cell death, thus molecular diagnostic methods may overestimate the real number of viable cells in a sample. Cultures of Mt H37Rv were treated with different concentrations of EMA and PMA, DNA intercalating dyes that bind to the DNA of dead cells, rendering it insoluble, thus hampering its isolation. The concentration of 100μM PMA was chosen to treat sputum samples from patients with TB. Our method of diagnosis showed a broad sensitivity (96. 1%) when compared to samples of smear-positive sputum and it proved to be 47% more sensitive than Ziehl-Neelsen staining for smearnegative samples. / Nos tempos atuais, os métodos mais utilizados no diagnóstico da Tuberculose (TB) promovem um atraso inaceitável na liberação dos resultados, um elevado número de resultados falso-negativo e muitos não são sensíveis para formas paucibacilares da doença. Este fato se torna crítico uma vez que pacientes infectados continuam não tratados na comunidade aumentando a probabilidade de transmissão da doença e agravo da epidemia, o que corrobora a necessidade de aprimoramento ou desenvolvimento de novas metodologias. Diante deste fato, propusemos implementar um diagnóstico de DNA quantitativo para tuberculose paucibacilar, permitindo uma rápida identificação e quantificação de bacilos viáveis do Mycobacterium tuberculsosis (Mt) em amostras biológicas com o auxílio da PCR em Tempo Real (R-T PCR). A região intergênica do gene inhA-mabA, possui cópia única no genoma do Mt e devido à sua importância na biossíntese de ácidos micólicos, foi escolhida como região alvo para o desenho de primers e sondas específicos acoplados a fluoróforos (TaqMan). A construção de padrões de DNA sintéticos do Mt serviram como referência para a quantificação absoluta dos ácidos nucleicos, com alvo na região intergênica descrita acima. Eles foram amplificados do DNA genômico do Mt utilizando primers específicos, clonados e o DNA plasmidial foi purificado e quantificado para o desenvolvimento de uma curva padrão. Após a morte celular o DNA pode permanecer íntegro; assim, métodos de diagnóstico molecular podem superestimar o número real de células viáveis em uma amostra. Culturas de Mt H37Rv foram tratadas com diferentes concentrações de EMA e PMA, intercalantes de DNA que se ligam no DNA de células mortas tornan-do o insolúvel e desta forma impedindo a sua amplificação. A concentração de 100OM de PMA foi escolhida para tratar amostras de escarro de pacientes em tratamento, ou com suspeita de TB. Nosso método de diagnóstico mostrou uma alta sensibilidade (96,1%) quando comparado a amostras de escarro com baciloscopia positiva e se mostrou 47% mais sensível que a coloração Ziehl-Neelsen para amostras com baciloscopia negativa.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000417689-Texto+Completo-0.pdf: 446640 bytes, checksum: ad192136c1369a936420f7ce2238c5eb (MD5) Previous issue date: 2009 / Tuberculosis is one of the main causes of death around of the world, a disease caused by the pathogen Mycobacterium tuberculosis. The severity of this global epidemic is exacerbated by the co-infection with the HIV, that drastically modified the epidemiology of the same one, causing an increase in the transmission dynamics, morbididy and mortality of infectaded subjects and the emergence of M. tuberculosis multidrug-resistant strains. In Brazil, practically one million of people is infected. With the advance of molecular biology and genetics, a diverse type of methods have been developed to allow fast diagnosis and a better understanding of the pathogenicity of infectious illnesses of several microorganisms. This study focuses on the implementation of a test to detect and quantify Micobacterium sp. using the polimerase chain reaction (PCR) associated with fluorescence. To this purpose, the gene of the enoil-ACP redutase NADHdependent (inhA) was selected as the identification gene and primers/probe marked with fluorophores (TaqMan®) were designed and synthesized. Standards for absolute quantification were produced through cloning of the inhA sequence in plasmids and further used as standards in assays for quantification of DNA samples isolated from sputum from patients diagnosed with tuberculosis. In parallel, M. tuberculosis cultures were used to assess the variability of the PCR assay compared with spectrophotometry, a standard method for cell number determination. The results showed that the system using inhA as identification gene in the implemented conditions was capable to amplify 106 the 101 cells of M. tuberculosis in culture. Compared to the method of the spectrophotometry, the real-time assay was more sensible, presenting less variation in absolute numbers. Samples DNA samples isolated from sputum of TB patients (n=13) classified as ++ and +++ according to the baciloscopy method showed a wide range of Mycobacterium numbers, that reached three orders of magnitude. Importantly, DNA samples isolated from sputum of otherwise healthy individuals did not show any increase in fluorescence, which attested the specificity and reliability of the test. / A tuberculose é uma das principais causas de morte ao redor do mundo envolvendo um único agente infeccioso, o Mycobacterium tuberculosis. A severidade desta epidemia global é exacerbada pela co-infecção com o HIV, que alterou drasticamente a epidemiologia da mesma, causando um aumento na dinâmica de transmissão, morbidade e mortalidade dos infectados, e com o surgimento de cepas multi-resistentes a drogas. No Brasil, praticamente um milhão de pessoas está infectado. Com o avanço da genética e biologia molecular, diversos tipos de métodos laboratoriais vêm sendo utilizados para o rápido diagnóstico e estudo da patogenicidade de doenças infecciosas de diversos microorganismos. A disponibilidade de seqüências genômicas de um grande número de microrganismos patogênicos proverá uma melhor compreensão de sua genética evolutiva, virulência e interações com o hospedeiro. O presente estudo tratou da implementacão de um teste para deteccão e quantificação absoluta de Micobacterium sp. a partir do emprego da reação em cadeia da polimerase associada a fluorescência. Para tanto, o gene da enoil-ACP redutase NADHdependente (inhA) foi selecionado como gene identificador e primers e sonda marcada com fluoróforo (TaqMan®) foram desenhados. Padrões para quantificação absoluta foram produzidos a partir da clonagem da sequencia identificadora em plasmídios, sendo posteriormente empregados em ensaios para quantificacão de amostras de DNA isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose e células de M. tuberculosis em cultura. Os resultados mostraram que o sistema utilizando a inhA como gene identificador nas condições implementadas foi capaz de amplificar de 106 a 101 células de M. tuberculosis em cultura. Comparativamente ao método da espectrofotometria, o ensaio em tempo real empregando o gene da inhA foi mais sensível, apresentando menor variação em número absolutos. Amostras de DNA (n=13) isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose de ++ e +++ foram submetidas ao ensaio e foram postivamente detectadas com variação de três ordens de magnitude. Amostras de indivíduos controle saudáveis não apresentaram sinal positivo, atestando a especificidade do sistema.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000448547-Texto+Completo-0.pdf: 664963 bytes, checksum: 65aa603337ed5626e1f7e96bf42a9364 (MD5) Previous issue date: 2013 / Abdominal angiostrongyliasis is a zoonotic infection caused by Angiostrongylus costaricensis, a nematode with intravascular location in the mesentery. Humans become accidentally infected by ingesting food or water contaminated with third stage larvae present in mucus secreted by intermediate hosts, terrestrial mollusks. The confirmed diagnosis of human infection is made only through histopathology of biopsies or mesenteric tissues removed during surgical treatment. There are many cases in which the pathology is very suggestive however there is no evidence of parasite structures in the sections. Thus, the goal of this study was to standardize the extraction of DNA from formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissues from mice experimentally infected with Angiostrongylus costaricensis for DNA detection and future study of human angiostrongyliasis suspected cases. Materials and methods: 45 samples of each tissue of liver, lung, intestine and mesentery, totalizing 180 samples from 15 infected mice with A. costaricensis. Worms of Angiostrongylus cantonensis were separately embedded in paraffin as controls. From embedded tissues, histological sections of 3 μm were performed and stained with HE to confirm the presence of parasite structures under the microscope. Approximately 24 to 31 sections of 10 μm were used for DNA extraction. Worms were embedded in paraffin under different conditions such as fixative chemicals, time of fixation and types of paraffin. Specific DNA of Angiostrongylus was detected by Polymerase Chain Reaction (PCR) to amplify a sequence of 232bp, previously designed for detection in human serum assays. There was a positive amplification in 33 samples from liver, 12 from lung, 45 from mesentery and 36 from intestine wall. For different conditions of embedment, the amplification of the DNA with the buffered formalin fixative was more efficient compared to the unbuffered one; the time of fixation and the commercial brand of wax did not affect the detection of nucleic acids, however, the ratio of paraffin to tissue appears to influence the performance of the method since samples with residual paraffin no amplification was obtained. The 232bp segment also was not visualized in samples where there was no evidence of presence of parasite structures, suggesting that histopathology findings should guide the choice of the samples for DNA extraction, and those most likely to have parasite structures surrounding the lesion, even if degraded. The description of the performance of PCR in paraffin embedded tissues as a diagnostic tool in human abdominal angiostrongyliasis depends on the detailed evaluation criteria in histopathology and their association with a positive amplification of the specific probe. / Angiostrongilíase abdominal é uma infecção zoonótica causada por Angiostrongylus costaricensis, um nematódeo com localização intravascular no mesentério. O homem se infecta acidentalmente ao ingerir alimentos ou água contaminados com larvas de terceiro estágio presentes no muco secretado por moluscos terrestres, hospedeiros intermediários. O diagnóstico confirmado da infecção humana é feito pelo exame histopatológico de biópsias ou segmentos ressecados durante o tratamento cirúrgico de casos complicados. Há muitos casos em que a histopatologia é muito sugestiva, porém sem evidenciarem-se estruturas do parasito nos cortes. Desse modo, o objetivo foi padronizar a extração de DNA em tecidos embebidos em parafina em modelo murino visando à detecção de ácidos nucléicos e posterior utilização no estudo de casos suspeitos a partir do exame histopatológico em humanos. Materiais e Métodos: 45 amostras de cada tecido de fígado, pulmão, mesentério e intestino, totalizando 180 amostras de 15 camundongos infectados com Angiostrongylus costaricensis; e vermes de Angiostrongylus cantonensis foram embebidos separadamente em parafina e nesses blocos contendo os tecidos foram realizados cortes histológicos de 3 μm para coloração por Hematoxilina-Eosina, e confirmado a presença de estruturas parasitárias, foram coletados de 24 a 31 cortes de 10 μm em um microtubo para a extração de DNA. Para a padronização do método, vermes foram embebidos em parafina em diferentes condições tais como o tipo de fixador, tempo de fixação e marcas comerciais de parafina. A partir dos cortes foram realizadas as extrações de DNA com o Kit Quiagen DNEasy tissue. Para a detecção de DNA específico de Angiostrongylus foi utilizado a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), para amplificação de uma sequência de 232pb, previamente desenhada para ensaios de detecção em soro humano. Em 33 amostras de fígado, 12 de pulmão, 45 de mesentério e 36 da parede intestinal houve amplificação do segmento de 232pb. Para as diferentes condições de emblocamento, as amplificações do DNA das amostras a partir do fixador formalina tamponada foram mais frequentes quando comparado com a formalina não tamponada; o tempo de fixação e o tipo de parafina não interferiram na detecção de ácidos nucléicos, entretanto, a quantidade de parafina no tecido parece influenciar no desempenho do método, pois nas amostras onde havia excesso de parafina não houve amplificação. O segmento de 232pb também não foi visualizado nas amostras onde não foi evidenciada a presença de estruturas parasitárias, sugerindo que a informação provinda da histopatologia deve orientar a retirada da amostra para extração de DNA, como aquelas de maior probabilidade de possuir estruturas parasitárias nas proximidades da lesão, mesmo que degradadas. A descrição do desempenho da PCR como recurso diagnóstico da infecção humana, em material embebido em parafina, depende da avaliação detalhada dos critérios de suspeita na histopatologia correlacionada com a frequência e reprodutibilidade do resultado da extração de DNA e sua amplificação.

A região de Lages/SC tem no agronegócio florestal sua principal atividade econômica. Decorrente dessa atividade, significativos volumes de resíduos são gerados, vislumbrando-se a sua utilização para a produção de energia. Diversos segmentos produtivos passaram a utilizar a biomassa como fonte de geração de energia, provocando significativas alterações nesse mercado. Assim, o objetivo central da pesquisa foi caracterizar a cadeia produtiva de energia, a partir de biomassa de origem florestal, na região de Lages/SC, visando identificar e prospectar o comportamento futuro dos fatores críticos, bem como as demandas de capacitação e de pesquisas que visem o melhor desempenho competitivo desta. Utilizou-se como metodologia o modelo de análise proposto por Castro et al (1998) e Castro (2002), e para a prospecção utilizouse a abordagem do foresight, desenvolvido através da projeção de especialistas com base no seu próprio conhecimento, mediante a aplicação de um questionário Delphi. As principais conclusões foram: a) verificou-se que o segmento da produção florestal está centrado na produção de madeiras da espécie pinus, com alta integração vertical, elevado nível tecnológico e sua maior preocupação deve-se à pequena produção não integrada à indústria, às restrições em função da legislação ambiental e à evolução da área plantada; b) o segmento da indústria, com exceção da celulose e papel, apresenta deficiências no que se refere à tecnologia, gestão de processos e qualificação dos recursos humanos e não possui ações de planejamento coletivo visando uma reestruturação para a melhoria de suas condições de competitividade; c) para o segmento de geração de energia de biomassa, verificou-se uma tendência de aumento dos investimentos, visando o aproveitamento dos resíduos florestais e das indústrias de base florestal para a geração de energia térmica e elétrica, sendo que, um dos fatores determinantes é a identificação da disponibilidade e do potencial de geração de resíduos na região; d) o tratamento não adequado dispensado aos resíduos florestais e industriais é uma das dificuldades atuais que limitam seu aproveitamento como matéria-prima para a geração de energia; e) existem várias organizações presentes na região que fornecem informações, suporte científico e tecnológico e representação setorial à cadeia, entretanto, vinculadas, principalmente, às empresas de maior porte; f) existe um ambiente institucional favorável à utilização dos resíduos de origem florestal para a produção de energia, sobretudo em função da escassez dos combustíveis fósseis e pela crescente busca por recursos renováveis; e g) a análise diagnóstica e prospectiva dos fatores críticos ao desempenho da cadeia produtiva permitiu identificar necessidades de pesquisas, de capacitação e de ações coletivas, as quais poderão subsidiar gestores públicos e privados na elaboração de ações de planejamento estratégico.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-23Bitstream added on 2014-06-13T19:03:34Z : No. of bitstreams: 1 antunes_jmap_dr_botfmvz.pdf: 459822 bytes, checksum: 49113c35cf13816409ac1cccdd0ec4f8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Mundialmente a brucelose continua sendo um problema econômico e de saúde pública. A brucelose ovina é reconhecida como a mais importante causa de epididimite, sendo uma das principais causadoras de infertilidade em ovinos. Os mecanismos imunes envolvidos na defesa e eventualmente na persistência e manutenção do agente são desconhecidos. Brucellas spp. geram somente uma resposta inflamatória moderada e os estudos da patogenia da brucelose ovina são escassos. Recentes avanços demonstram que a resposta inflamatória induzida pelas Brucellas spp. representam provavelmente o resultado de uma tentativa de evasão e supressão da resposta imune hospedeira. Utilizando as tecnologias de RT-PCR em tempo real (q) e microarranjos este trabalho avaliou a expressão gênica da resposta imune e inflamatória na brucelose experimental ovina. O estudo apresenta a primeira análise do perfil de expressão gênica de citocinas através de RT-qPCR em tecidos reprodutivos e não reprodutivos de carneiros experimentalmente infectados com cepa de B. ovis PA até 240 dias pós infecção (dpi). O estudo também demonstra a primeira análise geral da expressão gênica por meio de microarranjos em tecidos reprodutivos e pool de linfonodos de carneiros experimentalmente infectados com cepa de B. ovis PA até 240 dpi. Neste trabalho demonstrou a persistência da B. ovis e o perfil inflamatório da resposta imune gerado pela infecção. Com este estudo espera-se aumentar o conhecimento da patogênese da B. ovis em carneiros infectados / Globally, brucellosis remains an economic problem and public health threat. The ovine brucellosis is recognized as the most important cause of epididymitis, one of the main causes of infertility in sheep. The mechanisms involved in immune defense and possibly the persistence and maintenance of the agent are unknown. Brucellas spp. generate only a moderate inflammatory response, and studies of the pathogenesis of ovine brucellosis are scarce. Recent developments have shown that Brucella spp. induces a moderate inflammatory response probably the result of an attempt to escape and to suppress the host immune response. Through real time (q) RT-PCR and microarrays the purpose this study evaluated the gene expression of immune and inflammatory response in experimental ovine brucellosis. The study demonstrated for the first time the gene expression profile of cytokines by RT-qPCR in reproductive and non reproductive tissues of rams experimentally infected with B. ovis PA strain up to 240 days post infection (dpi). The research also showed the first overall analysis of gene expression using microarrays in reproductive tissues and pool of lymph nodes of rams experimentally infected with B. ovis PA strain up to 240 dpi. The study demonstrated the persistence of B. ovis and the inflammatory profile of immune response occasioned due the infection. These results are expected to increase the knowledge of the pathogenesis of B. ovis in sheep

Resumo:A leishmaniose representa um dos principais problemas de saúde pública do mundo. O protozoário do gênero Leishmania tem distribuição mundial e a epidemiologia da doença depende das características dos parasitas. As leishmanioses se dividem em leishmaniose visceral e tegumentar. O cão desempenha um papel fundamental na transmissão de L. infantum aos humanos e na epidemiologia da doença. Devido à adaptação da Leishmania a novos vetores ou hospedeiros é importante conhecer o agente etiológico circulante nos cães. As técnicas moleculares têm sido utilizadas para o diagnóstico das leishmanioses. A PCR-RFLP detecta e distingue as diferentes espécies do parasita. O objetivo do presente trabalho foi identificar as espécies de Leishmania encontradas em 103 amostras de sangue periférico de cães naturalmente infectados por esse protozoário, do município de Bauru - SP. Para o diagnóstico da leishmaniose foi realizado o exame parasitológico, ELISA e PCR. A determinação das espécies de Leishmania foi realizada pelo método de PCR-RFLP. Para a identificação das espécies, o DNA amplificado da região intergênica ITS1 foi digerido com a enzima de restrição HaeIII. As amostras positivas para Leishmania ssp, mostraram um perfil de restrição idêntico a L. amazonensis em 77/103 amostras, em 17/103 foram semelhantes a L. infantum, e em 09/103 apresentaram perfil misto. Em conclusão, identificamos L. amazonensis infectando maior número de cães do que a L. infantum em cães no município de Bauru, SP / Abstract:Leishmaniasis is a major public health problem in the world. The protozoa of the genus Leishmania has worldwide distribution and epidemiology of the disease depends on the characteristics of the parasites. Leishmaniasis are divided into visceral leishmaniasis and cutaneous. The dog plays a key role in the transmission of L. infantum to humans and in the epidemiology of the disease. Due to the adaptation of Leishmania to new hosts or vectors is important to know the current etiologic agent in dogs. Molecular techniques have been used for the diagnosis of leishmaniosis. The PCR-RFLP detects and distinguishes the different species of the parasite. The objective of this study was to identify the Leishmania species found in 103 samples of peripheral blood of dogs naturally infected with this protozoan, the city of Bauru - SP. For the diagnosis of leishmaniosis was determined by parasitological examination, indirect ELISA and PCR was performed. The determination of Leishmania species the DNA amplified intergenic region ITS1 was digested with the restriction enzyme HaeIII. Positive samples for Leishmania ssp. showed an identical restriction profile of L. amazonensis in 77/103 samples, 17/103 were similar to L. infantum, and 09/103 were mixed profile. In conclusion, we identified L. amazonensis greater number of dogs than L.infantum in Bauru city, SP / Orientador:Valéria Marçal Félix de Lima / Banca:Alex Akira Nakamura / Banca:José Eduardo Tolezano / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientador: Lindsay Unno Gimenes / Coorientador: Fuller Warren Bazer / Banca: Maria Emília Franco Oliveira / Banca: Marcelo Emílio Beletti / Banca: Benner Geraldo Alves / Banca: Amélia Katiane de Almeida / Resumo: A arginina é um aminoácido nutricionalmente essencial, importante na gestação de mamíferos, pois aumenta a sobrevivência, crescimento e desenvolvimento de embriões, fetos e neonatos. A arginina pode ser utilizada na síntese de poliaminas por uma via metabólica clássica, porém estudos recentes revelaram uma importante via alternativa. Todavia, ambas foram pouco investigadas. Nesse contexto, estudos são necessários a fim de identificar a ocorrência das vias metabólicas da arginina nos tecidos reprodutivos durante a gestação de ovelhas. Assim o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a expressão de genes das vias metabólicas da arginina em conceptos durante o período de peri-implantação em ovelhas; b) identificar a localização das proteínas das vias metabólicas da arginina em conceptos e no endométrio durante o período de peri-implantação em ovelhas; e c) identificar a localização das proteínas das vias metabólicas da arginina em placentomas em ovelhas. Para tanto, ovelhas da raça Rambouillet (n=72) foram sincronizadas e após detecção do estro por machos vasectomizados, foram cobertas por machos da raça Suffolk com fertilidade comprovada. No experimento 1, as ovelhas (n=20) foram histerectomizadas aos 13, 14, 15 ou 16 dias de gestação, e os fragmentos de conceptos coletados foram congelados em nitrogênio líquido a fim de se estudar a expressão gênica. No experimento 2, ovelhas (n=28) também foram histerectomizadas aos 13, 14, 15 ou 16 dias de gestação e, secções de conce... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Arginine is a nutritionally essential amino acid, important for pregnancy in mammalian, to increase the survival, growth and development of embryos, fetuses and neonates. Arginine can be used in the synthesis of polyamines by a classical metabolic pathway, though recent studies revealed an important alternative pathway, however, both have been poorly investigated. In this context, studies are necessary in order to identify an occurrence of arginine metabolic pathways in the reproductive tissues during a pregnancy in ewes. The present study had as objectives: a) evaluate the gene expression in the metabolic pathways of arginine, in concepts during the pre-implantation period of pregnancy in ewes; b) to identify the localization of proteins, from the metabolic pathways of arginine, in concepts and uterine endometrium during the pre-implantation period of pregnancy in ewes; and c) to identify the localization of proteins, from the metabolic pathway of arginine, in placentomes during the pre-implantation period of pregnancy in ewes. Rambouillet ewes (n=72) were synchronized and after estrus detection by vasectomized males, ewes were mated by Suffolk males with proven fertility. In experiment 1, ewes (n=20) were hysterectomized at days 13, 14, 15 or 16 of pregnancy, and the sections of concepts collected were frozen in liquid nitrogen in order to study gene expression. In the experiment 2, ewes (n=28) were also hysterectomized at days 13, 14, 15 or 16 of pregnancy, sections of conceptuses and uterine endometrium were fixed in order to identify the protein localization by immunohistochemical analysis. In experiment 3, ewes (n=24) were hysterectomized on days 40, 60, 80, 100, 120 or 140 days of pregnancy, placentomes were collected and fixed for immunohistochemical analysis. Data analysis of ge... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Centro de Desenvolvimento Sustentável, 2008. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-09-23T20:08:42Z No. of bitstreams: 1 2008_ValeriaGentilAlmeida.pdf: 3399880 bytes, checksum: e282056642e5fc42b501c95db637c3b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-05-24T16:51:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_ValeriaGentilAlmeida.pdf: 3399880 bytes, checksum: e282056642e5fc42b501c95db637c3b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-24T16:51:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_ValeriaGentilAlmeida.pdf: 3399880 bytes, checksum: e282056642e5fc42b501c95db637c3b7 (MD5) Previous issue date: 2008-02 / Esta dissertação analisa o desenvolvimento mercadológico dos resíduos sólidos urbanos do Distrito Federal (DF). A integração dos atores sociais envolvidos, o apoio à formação de cooperativas e associações de catadores de lixo, denominados de “pessoas residuais”, e o incentivo à implementação de sistemas com coleta seletiva dos resíduos sólidos urbanos (RSU) são iniciativas para estruturar e organizar essa cadeia. Entretanto, a omissão do poder público e a inexistência de políticas públicas adequadas de órbitas jurídico-administrativa, político-institucional e econômico-financeira retardam um modelo ótimo de gestão. A pesquisa também sinaliza algumas ações que o governo pode desenvolver para reduzir o impacto do desemprego, gerar renda e controlar a quantidade de resíduos gerados e dispostos de maneira inadequada no aterro, lixões e áreas clandestinas do DF. Conclui-se que investimentos em tecnologias apropriadas, além de fomentar o “negócio” do lixo, proporcionam, na maioria dos casos, uma economia de custos considerável. Com a destinação e o aproveitamento dos resíduos atende-se ao princípio dos “3 Rs” – reduzir, reciclar e reaproveitar, – minimizando o passivo ambiental e melhorando a qualidade de vida da população, ou seja, o seu bem-estar. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This dissertation analyzes the marketing development of the Federal District’s (DF) urban solid waste. The integration of the involved stakeholders, the support to the foundation of cooperatives and associations of garbage pickers (called “residual persons”), and the incentive to the implementation of urban solid waste (USW) selective collection systems are initiatives aimed at restructuring and organizing this chain. Nevertheless, the omission of the public power and the absence of suited public policies in the juridical-managing, political-institutional and economical-financial spheres, are factors that hinder an optimal managing model. The research also presents some actions that the government can develop to reduce the impact of unemployment, to generate income and to control the amount of waste inadequately disposed in open dumps, embankments and clandestine areas of the DF. As a conclusion, investments in appropriate technologies, besides stimulating the garbage “business”, can provide in most of the cases a considerable cost saving. Appropriately destining and reutilizing the residues is fulfilling the “3 R’s” principle – Reducing, Recycling and Reusing – thus minimizing the environmental passive and improving the population’s life quality and well-besing. __________________________________________________________________________________ RESUMÉ / Cette tèse analyse le développement du marché des résidus solides urbains du District Fédéral (DF). L’integration des acteurs sociaux engagés, l’appui à la formation des cooperatives et associations des clochards nommés “personnes residuelles”, et l’iniciation à la mise em pratique des systèmes de la collecte sélective des résidus solides urbains (RSU) sont initiatives de construction et organisation de cette chaîne. Cependant, les omissions des autorités publiques et l’inexistence des politiques adequates dans les sphères juridique et administrative, politique et institutionnelle, économique e financière retardent um excellent modele de gestion. La recherche indique, elle aussi, plusieurs actions que le gouvernement pourrait entreprendre afin de réduire l’influence du chômage, produire des rentes et les décharges et les espaces clandestins du DF. On conclut que les investissements dans les technologies appropriées et la fomentation du “commerce” des ordures promouvoient, le plus souvent, une économie de dépens considérable. Avec la destination et l’utilisation des résidus, le principe de 3 R’s – réduire, recycler et réutiliser – est accompli, en minimisant le passif environnemental et améliorant la qualité de vie de la population, c’est-à-dire, son bien-être.

O papel dualístico exercido por Enterococcus na natureza estimula a pesquisa dos fatores que determinam sua virulência. O objetivo desse estudo foi investigar a distribuição de genes envolvidos com fatores de virulência entre isolados de Enterococcus e sua correlação com a capacidade de formação de biofilme e confirmar a identificação de E. casseliflavus e E. gallinarum por PCRRFLP. Foram analisados 66 isolados clínicos e 70 alimentares quanto a presença dos genes gelE, esp, agg, ace e cylA por PCR e atividade de gelatinase e citolisina. Isolados clínicos apresentaram maior incidência de fatores de virulência quando comparados com alimentares, exceto para os genes gelE e ace. Em ambas amostragens houve a ocorrência de isolados positivos para os genes gelE e cylA, porém sem atividade enzimática, indicando a presença de genes silenciosos. A maioria dos isolados apresentou capacidade de formação de biofilme, entretanto não houve uma correlação entre os genes analisados e o fenótipo de formação de biofilme, porém é possível que o gene ace e gelE atuem como potencializadores na formação de biofilmes em Enterococcus. Para testar a técnica de PCR-RFLP, 32 e 20 isolados de E. gallinarum e E. casseliflavus, respectivamente, identifcados bioquimicamente foram avaliados. O fragmento de 661 bp correspondente a uma região conservada do 16S rDNA foi clivado com HinfI e 47% E. gallinarum e 25% E. casseliflavus apresentaram fragmentos de 589bp e 72bp, padrão esperado para o PCR-RFLP. Assim sendo, a PCR-RFLP mostrou ser uma ferramenta molecular útil na confirmação das espécies E. casseliflavus e E. gallinarum. / The dualistic role played by enterococci in the nature, encourages the study of virulence factors. The aim of this study was to investigate the distribution of genes involved in virulence among Enterococcus isolates and to correlate with biofilm formation ability and to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples by PCR-RFLP. Sixty six clinical and 70 food isolates were analyzed for the presence of gelE, esp, agg, ace and cylA genes by PCR and the gelatinase and cytolysin activities. Clinical isolates showed a higher incidence of virulence factors when compared to food isolates, except for gelE and ace genes. In both samples was observed the occurrence of isolates positive for gelE and cylA genes, but with no enzymatic activities, indicating the presence of silent genes. Most isolates showed ability to form biofilm, although there was no correlation between the presence of the genes and the phenotype of biofilm formation, but it is possible that ace and gelE genes perform as enhancers in biofilm formation in Enterococcus. To test the PCR-RFLP tecnhique, 32 and 20 strains identified by conventional biochemical exams as E. casseliflavus E. gallinarum, respectively, were were submitted to PCR amplification and digested with HinfI.. The DNA fragment of 661 bp corresponding to a conserved region of 16S rDNA was cleaved with HinfI and 47% and 25% of E. gallinarum and E. casseliflavus showed DNA fragments of 589 bp and 72 bp, expected for PCR-RFLP. Thus, PCR-RFLP proved to be a useful molecular tool for confirmation the E. casseliflavus and E. gallinarum species.