Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-05-20T17:14:19Z No. of bitstreams: 1 Adenizar Delgado das Chagas Jr. Avanços... 2014..pdf: 11153892 bytes, checksum: 48154dea65a7a4a32a54408e694c5d30 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-20T17:14:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adenizar Delgado das Chagas Jr. Avanços... 2014..pdf: 11153892 bytes, checksum: 48154dea65a7a4a32a54408e694c5d30 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas pertencentes ao gênero Leptospira. O modelo da doença em camundongos tem vantagens devido à ampla gama de ferramentas genéticas e imunológicas disponíveis para pesquisas básicas. A maior limitação na conduta clínica e na pesquisa experimental da leptospirose é o fraco desempenho dos métodos disponíveis para detecção direta e para quantificação de leptospiras. Foi incluído nesta tese um conjunto de três manuscritos que visam investigar o desfecho da infecção pela cepa virulenta de Leptospira interrogans nas linhagens de camundongos selvagens (A, CBA, BALB/c e C57BL/6), em camundongos óxido nítrico sintase induzível (iNOS) Knockout (KO), camundongos gene ativador de recombinação 1 (RAG1) KO , camundongos CB17 com imunodeficiência combinada grave (SCID), e os seus respectivos controles selvagens C57BL/6 e BALB/c. Investigar a confiabilidade do método de quantificação do imprint (IM), comparando os resultados obtidos com esta técnica aos obtidos com a utilização do PCR em tempo real (qPCR) para detectar e quantificar leptospiras em amostras de rim de ratos e hamsters experimentalmente infectados. Como esperado, nenhuma das linhagens de camundongos selvagens foram suscetíveis à leptospirose letal. A linhagem A e C57BL/6 exibiram altas cargas de Leptospira nas amostras de rim e as linhagens CBA e C57BL/6 desenvolveram lesões inflamatórias graves, enquanto a linhagem BALB/c provou ser a mais resistente apresentando leptospirose subclínica. Os camundongos iNOS KO e selvagem sobreviveram sem sintomas clínicos de leptospirose. A frequência e gravidade das nefrites foram significantemente menores nos camundongos iNOS KO. Todos os animais RAG1 KO e SCID morreram de leptospirose aguda, enquanto que todos os camundongos selvagens sobreviveram. A hemorragia pulmonar foi observada em 57 e 94% dos camundongos RAG 1 KO e em 83 e 100% dos camundongos SCID, usando doses de inóculos de 107 e 106 leptospiras, respectivamente. Não houve evidências de hemorragia pulmonar nos controles selvagens. Nos modelos de infecção agudo e crônico, houve correlação positiva estatisticamente significante (P < 0,05) na quantificação de leptospiras pelos métodos do qPCR e do IM. Como conclusão geral, a linhagem de camundongos A pode ser a linhagem de escolha em estudos na qual se pretende recuperar um grande número de leptospiras de rins colonizados. As linhagens CBA e C57BL/6 desenvolveram, com maior frequência, lesões inflamatórias e podem ser as mais adequadas para estudos de leptospirose associados com nefrite intersticial. A linhagem BALB/c é a mais indicada para estudar mecanismos que envolvam a imunidade inata e/ou a rápida resposta imune adaptativa. A ausência do gene do iNOS no modelo murino resultou em uma diminuição significativa da suscetibilidade para o desenvolvimento da nefrite intersticial. Além disso, a ausência de linfócitos B e T funcionais não impediu a ocorrência de hemorragia pulmonar. Estes dados fornecem fortes evidências de que a hemorragia pulmonar na leptospirose não está relacionada apenas a mecanismos autoimunes. Para a detecção e quantificação de leptospiras o método do imprint foi equivalente ao qPCR. / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochaetes belonging to the genus Leptospira. The mouse disease model is advantagous due to the broad array of immunological and genetic tools available for basic research. A major limitation in the clinical management and experimental research of leptospirosis is the poor performance of the available methods in the direct detection and quantification of leptospires. This thesis includes three manuscripts that investigate the outcome of infection by a virulent strain of Leptospira interrogans in wildtype mice strains: A, CBA, BALB/c and C57BL/6; in iNOS knockout (KO) mice, recombination activating gene 1 (RAG1) KO mice and CB17 severe combined immunodeficiency (SCID) mice. To investigate whether the imprint method (IM) of quantification was reliable we compared it with against real time PCR (qPCR) for the detection and quantification of leptospires in kidney samples from rats and hamsters. As expected, none of the wildtype mice were susceptible to lethal leptospirosis. The A and C57BL/6 strains exhibited high leptospiral loads in the kidney samples and the CBA and C57BL/6 strains developed severe inflammatory lesions, whilst the BALB/c strain proved to be the most resistant to subclinical leptospirosis. The iNOS KO mice survived with no clinical symptoms of leptospirosis. The frequency and severity of nephritis was significantly lower in the iNOS KO mice. All of the RAG 1 KO and SCID animals died of acute leptospirosis, whereas all of the wildtype mice survived. Pulmonary haemorrhage was observed in 57 and 94% of Rag1 KO mice and in 83 and 100% of SCID mice, using inoculum doses of 107 and 106 leptospires, respectively. There was no evidence of pulmonary haemorrhage in the wildtype controls. In both the acute and chronic infection models, the correlation between quantification by qPCR and the IM was found to be positive and statistically significant (P < 0.05). In conclusion, the mouse A strain would be the strain of choice in studies requiring the recovery of a large number of leptospires from colonized kidneys. The CBA and C57BL/6 strains developed more inflammatory lesions and would be the most suitable for studies of leptospirosis associated with interstitial nephritis. The BALB/c strain appeared to be the most suitable for studying mechanisms involving innate immunity and/or rapid adaptive immune response. The absence of the iNOS gene in the murine model resulted in a significant decrease in susceptibility to the development of interstitial nephritis. Furthermore, the absence of functional B and T lymphocytes did not prevent the occurrence of pulmonary hemorrhage. These data provide strong evidence that pulmonary hemorrhage in leptospirosis is not only related to autoimmune mechanisms. For the detection and quantification of leptospires the imprint method was quivalent to that of qPCR. Keywords:

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Centros de Pesquisa, Inovação e Difusão (CEPID) / A pele e o maior orgao do corpo humano, sendo composta principalmente por elastina, colageno e glicosaminoglicanos. Toda a sequencia de eventos responsaveis pela manutencao da integridade da pele pode ser afetada por fatores endogenos e exogenos, como por exemplo, o estresse. Diversos trabalhos na literatura evidenciam que o sono desempenha uma funcao restauradora no funcionamento do organismo. Alteracoes nesses mecanismos podem afetar a producao de colageno. Diversos efeitos da restricao de sono cronica em animais sugerem uma ruptura na funcao de barreira da pele e mucosas. Sendo assim, a reducao do tempo de sono parece afetar de varias maneiras a composicao e a integridade de diversos sistemas. Nesse sentido, a presente dissertacao realizou um levantamento bibliografico publicado no Artigo 1: Stress, immunity and skin collagen integrity: evidence from animal models and clinical conditions, em que foram coletadas evidencias de que por acao dos glicocorticoides e de alteracoes no sistema imunologico o colageno da pele pode ser prejudicado pela privacao de sono em sua quantidade e qualidade. Com o objetivo de inserir na comunidade cientifica a possivel relacao entre o sono e a integridade de pele, o Artigo 2 (Can poor sleep affect skin integrity?) foi elaborado e publicado em uma revista especializada em hipoteses. Com a finalidade de validar a linhagem escolhida para o presente projeto (hairless) foi realizado um estudo preliminar, em que essa linhagem foi submetida a privacao de sono por 72 horas, juntamente com outras duas linhagens muito utilizadas para estudos de privacao de sono (C57BL/6J e Swiss) para uma comparacao dos efeitos genotoxicos em diversos orgaos e sangue periferico (Artigo 3: Sleep loss induces differential response related to genotoxicity in multiple organs of three different mice strains). Nossos resultados mostram que a linhagem Swiss se mostra mais sensivel aos danos ao DNA provocados pela privacao de sono, no sangue periferico e no figado, mostrando assim, que a linhagem Hairless estaria apta a ser submetida a privacao de sono. No Artigo 4: Is lack of sleep capable of inducing damage in aged skin? (submetido) foi verificado se as consequencias da privacao de sono sobre a integridade do DNA da pele se somariam aos efeitos deleterios do envelhecimento em camundongos. Femeas da linhagem Hairless com 15 meses de idade foram submetidos 72 horas de privacao de sono ou 15 dias de restricao de sono. O dano ao DNA da pele foi avaliado pela tecnica do ensaio em gel de celula unica, mostrando que a perda de sono nao se sobrepoe ao dano genetico ja existente na pele desses animais idosos. Em conjunto, as evidencias aqui expostas, indicam uma relacao multidirecional entre o sono, sistema imunologico e a integridade da pele, porem, e necessario observar outros parametros alem da fragmentacao do DNA / FAPESP: 09/04240-0 / CEPID: 98/14303-3 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A funcao do sono ainda nao foi completamente elucidada, porem se sabe que este tem papel homeostatico, e na sua privacao, ocorrem diversas alteracoes fisiologicas e patologicas, como no sistema imunologico e na reacao inflamatoria. A trombina e considerada como um agente pro-inflamatorio por ser capaz de estimular as celulas a liberar mediadores pro-inflamatorios. A familia dos Receptores Ativados por Proteases (PARs) e composta por quatro receptores acoplados a proteina G (GPCRs): PAR1, PAR2, PAR3 e PAR4, que sao ativados unicamente por proteases. O principal papel da ativacao dos PARs durante a progressao de doencas foi relatado em modelos animais de diferentes patologias gastrointestinais, neuroinflamatorias e processos neurodegenerativos. Os PARs estao diretamente envolvidos no funcionamento e desenvolvimento do cerebro. Suas expressoes sao diretamente moduladas por condicoes anormais, como doenca de Parkinson e Alzheimer, esclerose multipla e demencia associada ao HIV. Apesar do reconhecimento da privacao de sono como um importante problema de Saúde na sociedade moderna, nao existem estudos sobre o efeito da privacao de sono sob os receptores PARs. Objetivos: Analisar e quantificar a expressao genica dos PARs e a traducao proteica em regioes selecionadas do sistema nervoso central, em diferentes protocolos de privacao de sono. Metodos: Os animais foram separados em 6 grupos: 1) animais privados de sono paradoxal (PS) por 72h, usando o metodo das plataformas multiplas; 2) PS por 72h e rebote de sono por 24h; 3) animais restritos de sono paradoxal (RS) por 15 dias, permitindo sono de 3h por dia, tambem usando o metodo das plataformas multiplas; 4) RS de sono por 15 dias e rebote de sono por 24h; 5) animais privados de sono total pelo metodo de gentle handling (GH) por 8h; 6) grupo controle. Apos a privacao de sono, os animais tiveram o cortex, hipotalamo, hipocampo e estriado removidos e foram feitas as quantificacoes genicas e proteicas do PAR1, PAR2 e PAR4. Resultados: Foram encontradas alteracoes nas expressoes genicas dos receptores PARs nos tecidos estudados. No cortex, houve alteracao na expressao genica (+ ou- significa aumento ou reducao) no PAR1 (RS-, RRS-, PS-, RPS-) e PAR2 (RS-, RRS-, PS-, RPS-, GH+) mas nao em PAR4. No hipotalamo, foram encontradas alteracoes no PAR1 (RS+, PS+, RPS+) e PAR2 (GH-), nao sendo encontrada nenhuma alteracao no PAR4. Analisando o hipocampo, foram encontradas alteracoes no PAR1 (RS+, GH+), PAR2 (RS-, PS+, RPS+) e PAR4 (RS-, GH-). No estriado, houve alteracoes no PAR1 (RS-, RRS-), PAR2 (RPS+) e PAR4 (RRS+, PS+, RPS+). A quantificacao proteica mostrou alteracoes no PAR2 (PS-) e PAR4 (PS-, RPS) do estriado. No hipocampo, PAR2 (RRS+) e PAR4 (RRS+) mostraram alteracoes significantes. Encontramos alteracoes significantes no PAR1 (RS-, RRS-) no hipotalamo. Conclusao: Diferentes protocolos de privacao de sono podem alterar, de diferentes maneiras, a expressao genica e a traducao proteica dos PARs no sistema nervoso central. Um novo campo de pesquisa em Ciências do sono esta aberto e mais estudos sao necessarios para estabelecer a correlacao entre as alteracoes na expressao dos PARs e inflamacao, reacoes imunes e alteracoes neurais observadas em modelos de privacao de sono / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A falta de sono tem sido associada a diferentes alteracoes metabolicas: niveis elevados de grelina e corticosterona, niveis mais baixos de leptina e triglicerideos, associado a perda de peso corporal, evidenciando um balanco energetico negativo. Atualmente, diferentes protocolos para se estudar a falta de sono vem sendo utilizados, principalmente em modelos animais. Com isso, o objetivo desse trabalho foi comparar tres protocolos de privacao de sono em camundongos e avaliar possiveis alteracoes metabolicas associadas a estes metodos. Para isso foram utilizados camundongos machos suicos, com 3 meses de idade, distribuidos em grupos: (a) privacao de sono (PS) por 72h pelo metodo das plataformas multiplas (b) privacao de sono por 72h pelo metodo das plataformas multiplas seguido de 24h de rebote (REB) (c) restricao de sono por 15 dias pelo metodo das plataformas multiplas e (d) privacao de sono total por 8h pelo metodo do gentle handling (GH). Foram analisados o peso corporal, a porcentagem de gordura periepididimal, glicose, triglicerideos, lactato, glicogenio, corpos cetonicos e acidos graxos livres. Observamos que independente do metodo utilizado ou da duracao do protocolo, o metabolismo dos animais foi afetado. Comparados aos animais controles todos os grupos experimentais perderam peso corporal. O grupo PS apresentou niveis mais baixos de triglicerideos, acidos graxos livres, estoque de glicogenio hepatico e massa gorda, enquanto os niveis de corpos cetonicos estavam elevados. Por outro lado, o grupo REB mostrou-se capaz de recuperar todos os parametros alterados pela privacao de sono, exceto o peso e a massa gorda. O grupo RS apresentou alteracoes em apenas alguns fatores, mostrando-se o grupo que menos sofreu interferencia decorrente da metodologia. Finalmente, o grupo GH mostrou menores concentracoes de triglicerideos e aumento de corpos cetonicos, alem de ser o unico grupo que apresentou menores niveis de lactato. Os dados obtidos sugerem que o grupo GH ativa mecanismos diferentes dos outros protocolos de obtencao de energia suficiente para compensar o deficit energetico, enquanto a privacao de sono pela plataforma apresentou-se como o protocolo mais agressivo. Por outro lado, o grupo RS parece ser a melhor opcao para novos estudos envolvendo a falta de sono e o metabolismo. Nossos resultados sao consistentes com outros trabalhos relatados na literatura, que indicam uma real mudanca no perfil metabolico dos animais apos diferentes periodos e metodologias de supressao de sono aplica / FAPESP: 09/04591-8 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A privacao de sono (PS) e um problema cada vez mais comum na sociedade moderna e esta diretamente relacionada a diversas alteracoes metabolicas, hormonais, neuroquimicas e comportamentais. Tem sido proposto que a falta de sono promove efeitos significativos nos padroes de expressao genica em cerebro em modelos animais. Entretanto, dados de expressao genica em humanos sao ainda incipientes, e o mesmo e valido para estudos em tecidos perifericos de roedores. Nesse sentido, a robusta tecnologia de microarray abriu uma nova janela para os estudos dos processos moleculares envolvidos no ciclo vigilia-sono. Os objetivos principais sao observacao da expressao genica global em tecidos perifericos de humanos (sangue) e camundongos (pulmao e coracao). Parte 1. Humanos: Avaliamos a expressao genica de 9 voluntarios submetidos a privacao de sono total, os quais permaneceram em alerta e ativos durante 60 horas consecutivas. As coletas de sangue para os experimentos de microarray foram realizadas na manha seguinte a noite de sono basal, na manha seguinte apos 48 horas de privacao de sono e, finalmente, na manha seguinte apos uma noite de sono rebote. Os resultados demonstraram a diminuicao da expressao de genes ligados ao sistema imune na PS, como por exemplo, os receptores de Natural killers, as granzimas A e B e os receptores de celulas T, os quais tem um importante papel na defesa do organismo. Um resultado interessante e que corrobora a literatura foi a alteracao da expressao de genes ligados ao reticulo endoplasmatico (RE), como genes codificadores de proteinas chaperonas. Parte 2. Camundongos: Os experimentos foram realizados em camundongos machos (C57BL/6J) com 10 semanas de idade pelo metodo de gentle-handling. Os animais foram eutanasiados por deslocamento cervical e decaptacao seguindo 3, 6, 9, e 12 horas de privacao de sono total (N = 8 ou 9 em cada ponto de tempo). Em paralelo, um grupo de animais em que nao foram realizadas perturbacoes (grupo de animais de sono espontaneo, tambem foi eutanasiado nos mesmos pontos de tempo que os animais privados de sono (N=8 para cada tempo respectivamente). Um grupo de controle adicional (tempo basal 0) (N=10), que estava acordado espontaneamente, foi eutanasiado no tempo zero, isto e, no momento em que as luzes foram acesas, as 7 horas da manha. Os resultados em pulmao e coracao demonstraram que houve alteracao da expressao em genes de chaperonas e do RE endoplasmatico, estresse oxidativo e enxofre no pulmao, e degradacao de proteinas no coracao. Os dados dao suporte a hipotese de que a falta de sono pode levar a alteracoes moleculares que resultam em perturbacoes da imunidade celular, assim como na inducao de inflamacao e equilibrio homeostatico. Assim, o intuito deste estudo foi de contribuir para a identificacao de possiveis marcadores biologicos representativos das alteracoes moleculares ocorridas em tecidos perifericos como: sangue, coracao e pulmao, no sono e na privacao de sono em humanos e camundongos, a partir da caracterizacao dos eventos moleculares envolvidos nos processos homeostaticos do sono nao restritos ao Sistema Nervoso Central / FAPESP: 98/14303-3 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Atualmente cerca de 13% da populacao mundial e afetada por algum grau de doenca renal cronica, com um percentual de 45% de mortes atribuidas a desordens de carater fibrotico. Neste contexto, novas formas terapeuticas de tratamento se tornam imprescindiveis, como por exemplo, uso de terapia celular com celulas-tronco mesenquimais. Essas celulas podem ser obtidas do tecido-adiposo (CTAd) tornando-se possiveis terapias devido a sua facil obtencao e propriedades pro-regenerativas, principalmente as exercidas por acoes paracrinas. Portanto, neste presente trabalho analisamos o papel da CTAd na reducao da progressao da fibrose renal em dois modelos experimentais: 1) de isquemia e reperfusao renal unilateral severa (IR) e 2) de nefrite tubulo-intersticial (NTI). Inicialmente, as CTAd foram isoladas de camundongos C57BL/6j, e foram caracterizadas fenotipicamente e funcionalmente. Apos sua caracterizacao, as CTAds foram administradas por via intraperitoneal (2.105 celulas/animal) em diferentes tempos apos insulto inicial, e os animais foram avaliados 24 horas, 6 e 10 semanas apos a IR e 10 dias apos a inducao da NTI. No modelo de IR, no tempo de 24 horas, os animais tratados com CTAd apresentaram reduzida disfuncao renal e tubular e um aumento do processo regenerativo. Adicionalmente, a expressao renal de transcritos pro-inflamatorios (IL-6 e TNF) foi diminuida, enquanto que o nivel de moleculas antiinflamatorias e citoprotetoras (IL-4, IL-10 e HO-1) foram aumentadas. Apesar da melhora funcional, as CTAd nao foram observadas nos rins dos animais transplantados. Como esperado, apos 6 semanas de IR, os rins dos animais nao tratados retrairam, enquanto os rins dos animais tratados com CTAd permaneceram integros com menor deposicao de fibras de colageno do tipo 1 (Col-1) e menos expressao do marcador de fibrose FSP-1. A protecao renal observada em animais tratados com CTAd foi acompanhada por uma reducao nos niveis sericos de citocinas inflamatorias como TNF-&#945;, KC, RANTES e IL-1a. No modelo de NTI o mesmo padrao foi observado, ou seja, os rins dos animais tratados apresentaram menor disfuncao renal com reduzida expressao de moleculas pro-inflamatorias (TNF-a e IL-6) e diminuicao da area fibrotica observada principalmente pela coloracao de Picrosirius e imunohistoquimica para marcadores pro-fibroticos como FSP-1 e Col-1. Surpreendentemente, quando avaliamos o tratamento das CTAd com 6 semanas de IR, periodo em que os animais ja apresentavam fibrose, foi constatado uma melhora nos parametros funcionais e menos fibrose e reducao da expressao de RNAm de Col-1 e vimentina, alem de menor expressao de FSP-1. Conclusivamente, nossos resultados demonstram que a terapia com CTAd pode afetar a progressao da fibrose renal, pela modulacao da resposta inflamatoria inicial. Acreditamos que essa protecao possa estar relacionada a modulacao dos mecanismos que governam a transicao epitelial/endotelio-mesenquimal. Esperamos que esse trabalho possa contribuir para a identificacao de potenciais vias de lesao ou de regeneracao, facilitando a sua traducao mais simples e rapida para a pratica clinica / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30 / A Mucopolissacaridose tipo I (MPS I) é uma doença de depósito lisossômico autossômica recessiva, causada pela deficiência da enzima alfa-L-iduronidase, responsável pela degradação de dois glicosaminoglicanos: dermatan e heparan sulfatos. Pacientes com MPS I apresentam uma ampla diversidade de manifestações clínicas e, até hoje, não foi possível estabelecer a correlação genótipo-fenótipo. Além disso, somente o acúmulo de glicosaminoglicanos não é suficiente para explicar a heterogeneidade fenotípica. A ampla diversidade de manifestações clínicas é uma característica das doenças de depósito lisossômico, além do acúmulo de metabólitos não diretamente relacionados à deficiência enzimática específica, sugerindo que várias vias bioquímicas e/ou celulares secundárias estejam envolvidas na fisiopatologia destas doenças. Alterações em diversos processos celulares como vias de sinalização, homeostase de Ca2+ intracelular, biossíntese de lipídeos, tráfego intracelular, permeabilização da membrana lisossômica e autofagia já foram identificadas em diferentes doenças de depósito lisossômico. Neste presente estudo, foram avaliados os processos de permeabilização da membrana lisossômica, homeostase de Ca2+ intracelular e autofagia em diferentes tecidos de um modelo animal de MPS I. Em esplenócitos de camundongos com MPS I, foi observada maior quantidade de Ca2+ no retículo endoplasmático e nos lisossomos, e menor quantidade de H+ nos lisossomos, indicando alteração de homeostase iônica nestas células. Foi observada também uma alteração na distribuição de H+ entre os compartimentos celulares, além da presença de cisteíno proteases no citosol, que evidenciam o processo de permeabilização da membrana lisossômica. Além disso, os esplenócitos de camundongos com MPS I apresentaram taxa maior de apoptose, provavelmente ativada pela permeabilização. Em conjunto, essas alterações sugerem que o processo de autofagia também possa estar comprometido neste modelo animal. Em relacao aos marcadores de autofagia, foi observada maior quantidade da proteina Beclina-1 no cerebro dos camundongos com MPS I, indicativo de inducao da autofagia. Nao foram observadas evidencias de acumulo de agregados proteicos pelo bloqueio de autofagia em nenhum dos tecidos estudados (cerebro, figado e baco), pois nao foram encontradas diferencas nas quantidades da proteina p62/SQSTM1. Porem, foi identificada uma isoforma da p62/SQSTM1 de menor tamanho, e a razao entre as isoformas foi diferente entre todos os tecidos, sugerindo que o fluxo de degradacao destas moleculas e tecido-especifico. Alem disso, foram observados baixos niveis de ƒÀ-tubulina nos hepatocitos dos camundongos com MPS I, que provavelmente causam desorganizacao do citoesqueleto e deficiencia no transporte vesicular. Analisados de maneira conjunta, os resultados observados neste presente estudo demonstram que diversas alteracoes bioquimicas e celulares secundarias a deficiencia enzimatica estao envolvidas na fisiopatologia da MPS I, e que essas alteracoes sao tecido-especificas. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-31 / O aumento da neurotrasmissão dopaminérgica tem sido ligado à euforia produzida pela cocaína. Estudos pré-clínicos demonstraram que a modificação da composição de ácidos gráxos poli-insadurados (PUFAs) na dieta pode influenciar o nível de neurotransmissão. O objetivo do estudo foi verificar se a administração de PUFAs provoca alteração na preferência condicionada por lugar por cocaína, correlacionando os dados comportamentais com os níveis plasmáticos de PUFAs. Foram utilizados 5 grupos de camundongos c57BI/6J suplementados com óleo de linhaça ou solução controle por 19 dias e condicionados com cocaína, embora tenham sido observadas alerações significativas dos níveis de ácido eicosapentaenóico (EPA) e ácido linoléico entre os grupos. Doses maiores de PUFAS são necessárias para que ocorra mudança no nível plasmático de EPA em camundongos condicionados com cocaína. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Corianddrum sativum L. é uma herbácea ereta, anual, ramificada, nativa da região Mediterrânea (Europa meridional e Oriente Médio). Seu odor é devido a presença do coriandrol ou d-Linalol. Usado na medicina popular há mais de 3000 anos, é indicado como carminativo (alguns óleos produzem certa anestesia e relaxamento da cárdia e consequentemente a expulsão do ar do trato gastrointestinal), estimulante das atividades gástrica e hepática, anti-helmíntico, antiinflamatório e ingerido como chá ou tintura. No Brasil, é amplamente cultivada no Norte e Nordeste, usada na indústria de licores. da confeitaria, perfumaria e na culinária. Poucos são os estudos científicos mostrando as propriedades farmacológicas do óleo essencial da C.sativum. O óleo essencial de coentro apresenta em sua composição monoterpenos, como linalol, citronelol, mirceno, limoneno, acetato de geranila, cânfora, entre outros, aos quais são atribuídos efeitos no sistema nervoso central. O presente estudo teve por objetivo avaliar o perfil farmacológico do óleo essencial da Coriandrum sativum L (OEC) em camundongos, após administração aguda via intraperitoneal, nas doses 62,5mg/kg, 125mg/kg, 250 mg/kg e 500 mg/kg. Os resultados obtidos mostram que o OEC (125mg/kg e 250mg/kg) induziu uma diminuição da atividade motora, sendo observado para a dose de 250mg/kg um aumento do tempo de sono. O OEC (125mg/kg e 250mg/kg) não alterou a coordenação motora dos animais indicando que as doses empregadas não induziram relaxamento muscular. Uma ação antinociceptiva periférica (contorções abdominais induzidas pelo ácido acético) em resposta ao OEC(125mg/kg e 250mg/kg) e antiinflamatória (teste da formalina) OEC 250mg/kg foi também observada. O OEC não protegeu os animais das convulsões, não tendo sido observado um efeito anticonvulsivante. Durante a triagem farmacológica inicial, foram observados sinais de toxicidade como pelos arrepios, ptose palpebral, diminuição da defecação e aumento da micção. Após 24h da administração do OEC, houve três mortes com os animais com a dose de 500mg/kg. Nossos resultados sugerem que o OEC apresenta um perfil depressor do sistema nervoso central (SNC) com efeitos sedativo, analgésico e antiinflamatório / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações