Este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do hipotireoidismo experimental induzido mediante utilização da droga propiltiouracil ou por tireoidectomia actínica, utilizando-se Iodo131, sobre o crescimento tumoral local e potencial metastático do melanoma murino, cepa B16F10 em camundongos C57BL6. O trabalho constituiu-se de dois experimentos distintos: 1. Influência do hipotireoidismo sobre o crescimento local e sobrevida, mediante indução do hipotireoidismo com propiltiouracil (PTU) a 0,05% na água de bebida e inoculação de células B16F10 por via subcutânea. 2. Influência do hipotireoidismo sobre o potencial metastático, onde os animais foram submetidos aos seguintes tratamentos: água (CTRL_M); indução do hipotireoidismo com propiltiouracil a 0,05% na água de bebida (PTU_M); indução do hipotireoidismo com iodo131 (I131_M) e do hipertireoidismo com L-tiroxina a 0,00005% na água de bebida (T4_M) e posterior inoculação de células B16F10, por via intravenosa. No experimento 1, os parâmetros avaliados consistiram na medida do volume tumoral e taxa de sobrevida. Os volumes tumorais variaram de 1,8 mm³ a 10.673,1 mm³. Na média diária dos volumes tumorais, o menor valor foi de 1,6 mm³ enquanto o maior volume obtido foi de 8140,9 mm³. A análise estatística das médias dos volumes, mediante teste de T não pareado, não indicou diferença significativa entre os grupos CTRL_L (controle) e PTU_L (tratado), com p = 0,795 para o teste de T e p = 0,5759 para o teste de F, para um intervalo de confiança de 95%. A média da sobrevida foi de 22 dias para o grupo CTRL_L e 21 dias para o grupo PTU_L. A analise estatística dos dados de sobrevida seguiu o Teste de Mantel-Haensze, não havendo diferença significativa na evolução da sobrevida entre os grupos, com p = 0,752 para um intervalo de confiança de 95%. No experimento 2, o parâmetro avaliado consistiu no número de nódulos metastáticos mediante contagem dos nódulos na superfície dos pulmões dos animais, após eutanásia. A distribuição de nódulos tumorais pulmonares apresentou média de 32 nódulos para o grupo CTRL_M; 91 nódulos para o grupo PTU_M; 23 nódulos para o grupo T4_M e 77 nódulos para o grupo I131_M. Houve diferença estatisticamente significativa (p < 0,01) entre os grupos CTRL_M versus PTU_M e I131_M e entre os grupos T4_M versus PTU_M e I131_M. Não houve diferença significativa (p > 0,05) entre os grupos CTRL_M versus T4_M e entre os grupos PTU_M versus I131_M. Os estudos estatísticos foram realizados mediante Teste de Analise de Variância simples (ANOVA) e aplicação de pós-teste de Dunnett, de múltipla comparação. Concluiu-se que o hipotireoidismo não interferiu no crescimento local da cepa B16F10 do melanoma murino em camundongos C57BL6 e significativamente alterou o comportamento metastático da referida cepa nesta linhagem isogênica, favorecendo a formação de nódulos metastáticos nos animais em que este estado patológico foi induzido, quer pela utilização de droga antitireoidiana PTU, quer pela tireoidectomia actínica com I131, no entanto, a administração de L-tiroxina não acarretou o efeito contrário / The aim of this study was to evaluate the effects of hypothyroidism induced by propylthiouracil or by actinic thyroidectomy, using I131, on focal and methastatic tumor growth of murine melanoma, B16F10, in mice C57BL6. The study was consisted of two different assays: 1. the influence of hypothyroidism on the focal growth and survival rate, by hypothyroidism induction with propylthiouracil (PTU) 0.05% in drinking water and subcutaneous inoculation of B16F10 and 2. the influence of hypothyroidism on the methastatic potential, were the animals underwent the followed treatments: drinking water (CTRL_L), hypothyroidism induction by propylthiouracil on 0.05% in drinking water (PTU_M group), hypothyroidism induction by I131 (I131_M group) and hypothyroidism induction by L-tiroxine on 0.00005% in drinking water (T4_M group). B16F10 cells were intravenously inoculated in all groups. On the first assay, the tumor volume was measured and the survival rate was evaluated. The tumor volumes ranged from 1.8 mm&sup3; to 10673.1 mm&sup3;. Regarding the daily mean of tumor volumes, the lowest volume was 1.6 mm&sup3; while the highest one was 8140.9 mm&sup3;. A statistical analysis of the tumor volumes was performed using unpaired T test and it showed no significant difference between group CTRL_L (control) and group PTU_L (treated one) (with p=0.795 on T test and p= 0.5759 on F test, using a confidence interval of 95%). The survival rate mean was 22 days on group CTRL_L and 21 days on group PTU_L. The Mantel-Haenszel (logrank) test was used for statistical analysis of these data, and there was no significant difference on the survival rate between groups CTRL_L and PTU_L (with p=0.752 and confidence interval of 95%). On the second assay, the number of methastatic nodules on the lung surface after euthanasia was evaluated. Regarding the lung nodules distribution, 32 nodules were found on group CTRL_M, 91 nodules were found on group CTRL_M, 23 on group T4_M and 77 on group I131_M. There was a statistically significant difference (p&lt;0.01) between groups CTRL_M and PTU_M / I131_M and between groups T4_M and PTU_M / I131_M. No significant difference was observed (p&gt;0.05) between groups CTRL_M and T4_M and between groups PTU_M and I131_M. ANOVA test was used for statistical analysis, followed by multiple comparison Dunnett?s post test. It was concluded that hypothyroidism did not have any influence on the focal growth of the murine melanoma B16F10 in mice C57BL6 and significantly did alter the methastatic behavior of that clone in this isogenic lineage, enhancing the methastatic nodules formation in the animals who were induced to this pathological condition, either by PTU or by actinic thyroidectomy, using I131; however, the administration of L-tiroxine did not show the opposite effect

As junções comunicantes são estruturas celulares que permitem o trânsito de moléculas entre as células, desempenhando funções de sinalização e transporte intercelular. São formadas por proteínas denominadas conexinas e representam estruturas-chave no funcionamento de tecidos altamente complexos e integrados, como o sistema nervoso central (SNC). O presente estudo avalia os efeitos da deleção da conexina 32 (Cx32) na inflamação e regeneração/cicatrização do SNC após 1, 3, 7, 10 e 20 dias pós-injeção intracerebral de brometo de etídio em camundongos deletados para Cx32 e camundongos normais. Para tanto, quantificou-se a expressão dos genes para fator de necrose tumoral alfa (TNF&alpha;), fator de crescimento transformador beta 1 (TGF&beta;), metaloproteinase 3 (MMP3), metaloproteinase 9 (MMP9) e inibidor tecidual de metaloproteinases 1 (TIMP1), através de PCR em tempo real. Os resultados indicam variáveis diferenças no padrão de expressão, incluindo variação na expressão de todos os genes pesquisados no período de 3 dias pós-injeção, ápice dos mecanismos de inflamação aguda. Estes resultados sugerem que a conexina 32 pode desempenhar funções importantes na sinalização molecular do processo inflamatório e regenerativo/cicatricial do sistema nervoso central. / Gap junctions are cellular structures that allow transit of molecules between cells, performing intercellular signaling and transportation. They are formed by proteins denominated connexins and represent key structures in highly complex and integrated tissues, such as the central nervous system (CNS). The present study evaluates the effects of connexin 32 (Cx32) deletion upon CNS inflammation and egeneration/cicatrization after 1, 3, 7, 10 and 20 days after intracerebral injection of ethidium bromide in Cx32 Knock Out and normal mice. To accomplish so, Real Time PCR gene expression quantification was performed uppon tumour necrosis factor alpha (TNF&alpha;), transforming growth factor beta 1 (TGF&beta;), metalloproteinase 3 (MMP3), metalloproteinase 9 (MMP9) and tissue inhibitor of metalloproteinases 1(TIMP1) genes. Results indicate variable differences in the expression pattern, including difference in expression of all evaluated genes in the 3 days after injection period, apex of the acute inflammation mechanisms. These results suggest that Cx32 may perform important functions on molecular inflammatory and regenerative/cicatrization signalling in the CNS.

As junções GAP são canais intercelulares responsáveis pela comunicação de células vizinhas, por onde passam pequenas moléculas e íons que mantêm a homeostasia celular. A junção GAP é formada seis proteínas, as conexinas. Na célula endotelial encontram-se as conexinas 37, 40 e 43. Nesse estudo, estimulamos a angiogênese em córnea de camundongos, através da cauterização com cristal de nitrato de prata. Foram utilizados camundongos heterozigotos para o gene da conexina 43 (Cx43+/-) e camundongos selvagens (Cx43+/+). As córneas foram analisadas 2 e 6 dias após a cauterização atravéspor meio da morfologia vascular, detecção das Cx37, Cx40, Cx43, PCNA por meio de Western Blot e avaliação ultraestrutural das células endoteliais. Como resultado obtivemos uma menor área de preenchimento vascular nos animais Cx43+/- em 2 e 6 dias após a lesão corneal, porém, em relação a extensão dos vasos não foi observado diferenças entre os grupos. Uma menor proliferação celular foi verificada através da detecção do PCNA, nos animais heterozigotos, somente após 2 dias da lesão corneal. Não houve alteração da Cx37 e Cx40 entres os grupos. A Cx43 parece ser uma conexina importante para a célula endotelial durante o processo de angiogênese. / The GAP junctions are intercellular streams responsible for the communication between close cells, which allow small molecules and ions to pass through them maintaining the cellular homeostasis. The GAP junction is formed of six proteins, the connexin. In the endothelial cell, there are the connexin 37, 40 and 43. In this study, we stimulated the angiogenesis in the mice\'s cornea through its cauterization using silver\'s crystal glass. It was used heterozygote mice to the gene of connexin 43 (Cx43+/-) and wild mice (Cx43+/+). The corneas were analyzed 2 and 6 days after the cauterization through the vascular morphology, detection of Cx37, Cx40, Cx43, PCNA through Western Blot and ultrastructural evaluation of the endothelial cells. As a result, we obtained a smaller area of vascular fillness in the animals Cx43+/- with 2 and 6 days of corneal injury, however, in regard to the extensions of the vessels, it wasn\'t observed any changes between the groups. A smaller proliferation of cells was verified, through the detection of PCNA, in the heterozygote animals only 2 days after the corneal injury. There wasn\'t any modification of the Cx37 and Cx40 between groups. The Cx43 seems to be an important connexin to the endothelial cell during the process of angiogenesis.

O rompimento eritrocítico característico do ciclo de vida do Plasmodium resulta na liberação de ATP, o qual é reconhecido pelo receptor P2X7. Este estudo da malária experimental causada pelo P. chabaudi em camundongos P2X7-/- mostraram que estes animais são mais suscetíveis à infecção. Tanto in vitro, como ex vivo, as populações celulares fagocíticas mostraram-se sensíveis ao ATP extracelular, de uma forma P2X7 dependente, e a infecção pelo P. chabaudi mostrou ser um fator que aumenta esta sensibilidade. Estudos fenotípicos do baço e do fígado dos animais P2X7-/- indicaram que, com exceção da população CD11b+ Ly6G+, estes animais apresentam número inferior de células fagocíticas quando comparados aos animais C57BL/6. Além disso, há uma leve deficiência na ativação dos fagócitos, na produção de IFN-g e no número de células produtoras de IFN-g, TNF-a e IL-10 no baço dos animais P2X7-/- em relação aos C57BL/6. A maior suscetibilidade dos camundongos P2X7-/- à infecção pelo P. chabaudi deve-se, portanto, a uma resposta imunológica deficiente nestes animais. / The erythrocyte rupture is a step of the life cycle of Plasmodium in which ATP is released and is recognized by the P2X7. This study of experimental malaria caused by P. chabaudi in P2X7-/- mice showed that these mice are more susceptible to the infection. Either in vitro or ex vivo, the phagocyte cell populations were sensible to extracellular ATP in a P2X7-dependent way and the P. chabaudi infection acted as a component that increases this sensitivity. Phenotypic analysis of the spleen and liver from P2X7-/- mice showed that, excepted for the CD11b+ Ly6G+ population, these mice have a lower number of phagocyte cells when compared to C57BL/6 mice. Furthermore, there was a slight deficiency in phagocyte activation, IFN-g production and number of cells that produce important cytokines as IFN-g, IL-10 and TNF-a in P2X7-/- mice in comparison with C57BL/6 mice. The increased susceptibility of P2X7-/- mice to the P. chabaudi infection is due to a deficient immune response.

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As ações biológicas e os efeitos farmacológicos da bradicinina (BK) são mediados por dois receptores, um constitutivo (B2R) e outro induzido (B1R). No fígado, nós verificamos que a resposta hipertensiva portal à BK é mediada por receptores B2, mas não por receptores B1, tanto em ratos normais quanto naqueles submetidos a diferentes agentes de agressão hepática. Nesta última situação verificamos que há aumento da expressão de B1R com a progressão para a cirrose. O objetivo deste trabalho é verificar se o B1R está envolvido no processo de fibrogênese. Para tanto 3 modelos experimentais de fibrose foram utilizados em camundongos knockout de B1R (KOB1R) e selvagens: a) com injeções intraperitoniais (ip) de CCl4 (6 semanas); b) injeções ip de soro de porco (10 semanas) e c) ligadura do ducto biliar (BDL). Após uma semana da última injeção, os fígados foram exanguinados, retirados, pesados e processados. A fibrose foi avaliada por análise histológica (coloração com Picrus-Sirius), e quantificada pelo programa AxionVision 4.5 da Carl Zeiss. Avaliação da fibrogênese foi estudada pela expressão de “heat shock protein”-47 (HSP 47) analisada por Western Blotting. A indução da fibrose com CCl4 foi obtida com sucesso nos camundongos selvagens e KOB1R, com o tradicional padrão de formação de septos hexagonais. O modelo BDL apresentou fibrose com padrão característico de colestase em ambos animais. Pela análise morfométrica, a quantidade de colágeno (% da área total) nos animais KOB1R-CCl4 (1,9 ± 0,3, n=5) é significativamente maior (ANOVA, p = 0,006) que nos animais selvagensCCl4 (1,0 ± 0,2, n=7), bem como quando comparado com o respectivo controle (KOB1R–óleo) (0,4 ± 0,3%, n=3). Por outro lado, a quantidade de colágeno nos animais KOB1R-BDL (3,1 ± 1,4, n=5) é significativamente menor que nos selvagens (16,1 ± 3,1, n=6). A expressão de HSP 47 está significativamente (t-test, p = 0,04) aumentada nos animais KOB1R (10,6 ± 1,6 x 106 UA), comparada aos animais selvagens (6,1 ± 1,3 x 106 UA), ambos tratados com CCl4, confirmando o pior padrão de fibrose observado também na quantificação morfométrica. No modelo de BDL, houve também maior expressão de HSP 47 nos animais KOB1R que nos animais selvagens Em conclusão, nossos resultados demonstram a participação do sistema calicreína-cinina na fibrogênese hepática e sugere que a ativação do B1R protege o fígado da fibrose hepática no modelo de CCl4, mas não no modelo BDL. Estes dados são importantes considerando o potencial terapêutico com o uso de agonistas no tratamento e/ou prevenção da fibrose. / The biological and pharmacological effects of bradykinin (BK) are mediated by a constitutive B2 and induced B1R. In the liver, we verified that the portal hypertensive response to BK is mediated by B2R, but not by B1R, in normal rats and those submitted to different kind of hepatic injury. In the latter, we also verified an increased expression of B1R in relation to the progression of the cirrhosis. The aim of this work is to analyze the role of BK in the fibrogenesis in wild and knockout of B1R (KOB1R) mice. Three models of fibrosis were used: a) intraperitoneal (ip) injection of of CCl4 (6 weeks); b) ip injection of porcine serum (10 weeks) and c) bile duct ligation (BDL). After one week of injection, the liver were exsanguinated, removed, weighted and processed. Fibrosis was evaluated by histological analysis (Picrus-Sirius staining) and quantified by AxionVision 4.5 software (Carl Zeiss). Fibrogenesis was evaluated by heat shock protein-47 (HSP 47) expression by Western Blotting. Porcine serum did not induce fibrosis in all animals. CCl4 induced fibrosis in wild and KOB1R in the traditional pattern with hexagonal septa. BDL resulted in fibrosis with the characteristic pattern of colestasis. By morphometric analysis, hepatic collagen (% of total area) of KOB1R-CCl4 (1,9 ± 0,3, n=5) was significantly higher (ANOVA, p = 0,006) than in wild-CCl4 (1,0 ± 0,2, n=7). On the other hand, hepatic collagen in KOB1R-BDL (3,1 ± 1,4, n=5) is lower than in wild mice (16,1 ± 3,1, n=6). The liver HSP 47 expression in CCl4 model is significantly (t-test, p = 0,04) higher in KOB1R (10,6 ± 1,6 x 106 UA), compared to wild mice (6,1 ± 1,3 x 106 UA). Interestingly, hepatic HSP 47 expression in KOB1R was also higher than in wild mice. In conclusion, our results suggested that bradykinin participates in the fibrogenesis, and probably activation of B1R protects liver from hepatic fibrosis in the CCl4 model, but not in BDL model. This data is important considering the potential therapeutic with the use of agonist in the threatment and/or prevention of liver fibrosis. / FAPESP: 02/05260-6 / FAPESP: 06/58533-0 / FAPESP: 08/55928-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Neste estudo observamos os efeitos da ausência de receptores para LDL sobre os níveis plasmáticos de colesterol, pressão arterial, controle reflexo da freqüência cardíaca, nitratos totais e estresse oxidativo em eritrócitos e tecido cardíaco. Para tanto utilizamos camundongos controle (n=13, para avaliações hemodinâmicas e de estresse oxidativo, e n=11, para dosagem de colesterol), e Knockout para receptores de LDL controle (n= 6, para avaliações hemodinâmicas e de estresse oxidativo, e n=5, para dosagem de colesterol). Como análise estatística utilizamos o teste T de Student para amostras não pareadas, considerando-se significativo quando p<0,05. A ausência desses receptores aumentou os níveis plasmáticos de colesterol total em mg/dL (179± 35) no grupo knockout (KO), em relação ao controle (109± 13). Esse resultado foi acompanhado pelo aumento da pressão arterial média (PAM) em mmHg no grupo KO (140±3), quando comparado ao controle (118±6). A freqüência cardíaca basal não foi significativamente diferente entre os grupos, mas o reflexo comandado pelos pressoreceptores estava significativamente atenuado nos animais KO. Tanto em eritrócitos como no tecido cardíaco, a atividade das enzimas antioxidantes apresentou-se significativamente reduzida; e o dano oxidativo, expresso pela dosagem de carbonilas e quimiluminescência, esteve significativamente aumentado no grupo KO. Esses resultados foram acompanhados pela redução dos níveis de nitratos totais, indicando uma redução da biodisponibilidade de óxido nítrico circulante nesses animais. Esses resultados indicam que a ausência de receptores para LDL não só causam aumento dos níveis de colesterol sangüíneo, mas também do estresse oxidativo. Esses aumentos poderiam estar contribuindo tanto para aumentar a degradação do óxido nítrico quanto para reduzir sua síntese, resultando em aumento da PA e prejuízo da sensibilidade barorreflexa, observados nesse estudo.

O estudo de metodologias que possibilitem o acesso de moléculas terapêuticas ao cérebro evitando a barreira hematoencefálica (blood-brain barrier, BBB), é extremamente importante para o tratamento das doenças que afetam o sistema nervoso central. Os estudos se concentram na busca por vias seguras e pouco invasivas. Recentemente a via nasal tem mostrado resultados positivos na administração de fármacos ao sistema nervoso central de maneira segura, sugerindo a utilização desta via para a terapia gênica. Neste trabalho, foi estudada a administração intranasal de um vetor não viral, que codifica o gene da proteína verde fluorescente otimizada (enhanced green fluorescent proten, EGFP), diluído em água ou em solução de sulfato de zinco em camundongos adultos da linhagem BALB/c. Os resultados de RT-PCR mostraram que o vetor atingiu o cérebro em ambos tratamentos, e sua expressão foi mantida até 8 semanas após o tratamento. A expressão da EGPF em diferentes regiões cerebrais foi analisada 1, 2, 4 e 8 semanas após o tratamento, através de imunohistoquímica. Nossos resultados mostraram que um número muito pequeno de células foi transfectado em ambos tratamentos e que a freqüência destas células nas regiões cerebrais estudadas varia muito mesmo entre animais do mesmo grupo. O tratamento com sulfato de zinco não aumentou a eficiência do vetor. Os maiores números de células transfectadas encontradas foram no bulbo olfatório e hipocampos uma semana após o tratamento. Nossos resultados mostram pela primeira vez a expressão prolongada de um gene administrados pela via nasal no cérebro. / The investigation of methods that allow the access of therapeutic molecules to the brain, overcoming the blood-brain barrier (BBB), is of great importance for the treatment of diseases reaching the central nervous system. Studies concentrate mainly on the search for safer and less aggressive routes. Recent studies have suggested that pharmaceutical agents can reach the brain by the nasal route, that may thus be also appropriate for gene therapy. Here, we investigated brain targeting by intranasal administration of a plasmid vector (pREGFP) with the reporter gene EGFP, diluted in water or in a zinc sulfate/water solution, to adult BALB/c mice. Brain regions were examined by RT-PCR or immunohistochemistry 1, 2, 4 or 8 weeks after the treatment. RT-PCR results showed that the plasmid DNA reached the brain similarly with the two types of treatment. Expression of egfp was observed in all groups, and maintained even 8 weeks after treatment. Brain sections submitted to immunohistochemistry (IHC) were analyzed for the detection of EGFP-positive cells, that could be observed in brain samples from mice treated by intranasal administration of pREGFP. The frequency of EGFP-positive cells was very low, and presented great variation even among mice from the same experimental group. The supplementation of the transfection medium with zinc sulfate did not induce higher numbers of EGFP-positive cells. A higher frequency of these cells was observed in the olfactory bulb one week after treatment, and in the hippocampus as compared to other brain regions. Our results show for the first time the long-term expression of a gene carried by a nonviral vector to the central nervous system.

Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2013-04-04T19:59:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação milton galdino 05062012 - DEFINITIVA.pdf: 2594051 bytes, checksum: 1b7dc66215e94866d37e7c0e7c6430df (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-04T19:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação milton galdino 05062012 - DEFINITIVA.pdf: 2594051 bytes, checksum: 1b7dc66215e94866d37e7c0e7c6430df (MD5) Previous issue date: 2011 / A Linfadenite Caseosa, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis, é uma enfermidade de alta prevalência nos rebanhos de pequenos ruminantes da região semi-árida brasileira, trazendo grandes prejuízos particularmente para os pequenos produtores, pois a criação desses animais é a principal atividade de subsistência nesta região. O presente trabalho teve como objetivo avaliar aspectos da resposta imune de camundongos da linhagem C57/Black 6 selvagem e C57/Black 6 Knockout para o óxido nítrico (KO-NO), durante a infecção experimental por C. pseudotuberculosis. A utilização de animais Knockout possibilitou a compreensão da atuação de alguns tipos celulares do sistema imune frente ao patógeno, já que se sabe que o óxido nítrico é um importante agente na eliminação de microrganismos intracelulares. Para tanto, foram utilizados e eutanasiados 28 animais em dois tempos (7 e 14 dias), divididos em quatro grupos, a saber: grupo 1 – controle – com 4 animais selvagens; grupo 2 - infectado por C. pseudotuberculosis – com 10 animais selvagens; grupo 3 – controle – com 4 animais KO-NO; e grupo 4 – infectado por C. pseudotuberculosis – com 10 animais KO-NO. Na metodologia avaliamos a suscetibilidade de camundongos KO-NO, na infecção, verificando que animais C57/Black 6 KO-NO são susceptíveis à infecção por C. pseudotuberculosis com mortalidade observada a partir do 4º dia, o que indica a importância dessa molécula na defesa inata contra essa bactéria. No estudo de células do lavado peritoneal os neutrófilos foram as células encontradas em maior número no infiltrado dos animais KO-NO, o que pode indicar um mecanismo compensatório pela ausência do óxido nítrico. Com o estudo do baço observou-se a presença de linfócitos, com predomínio de TCD8 entre as células esplênicas de ambos os grupos, o que sugere a importância dessa sub-população na resposta imune contra esse microorganismo. A partir da presença de granulomas verificou-se a maior presença nos animais KO-NO infectados com 7 dias, sendo os linfonodos os mais afetados, o que aponta também para uma tentativa compensatória de conter a infecção; constatou-se uma maior recuperação bacteriana de linfonodo mesentério nos camundongos KO-NO, provavelmente devido a sua maior capacidade de escape. Foi realizado também o estudo de anticorpos séricos, através da detecção de IgG total e subclasses, o qual foi observado uma produção 14 dias pós infecção, tanto nos animais selvagens como nos KO-NO, similar aos animais controle, o que indica uma resposta humoral tardia por esse tipo de anticorpo para esse microorganismo. Os resultados obtidos sugerem a importância do óxido nítrico no processo de combate à infecção por este microrganismo, posto que os animais KO-NO para esta substância foram os mais afetados pelo processo infeccioso instalado. / Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-05-09T17:56:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Eduardo Fortes.pdf: 875943 bytes, checksum: 0430a3ef91ff0e67dd54fcf4742107c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-30T00:44:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Eduardo Fortes.pdf: 875943 bytes, checksum: 0430a3ef91ff0e67dd54fcf4742107c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-30T00:44:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Eduardo Fortes.pdf: 875943 bytes, checksum: 0430a3ef91ff0e67dd54fcf4742107c0 (MD5) / CAPES / Introdução: A asma é uma doença inflamatória complexa e os corticóides são a principal classe de medicamentos utilizada no seu tratamento. Estas drogas apresentam diversos efeitos colaterais e o seu uso não foi eficiente em alguns pacientes cuja causa do óbito foi conseqüente à doença. Assim, o efeito terapêutico da quercetina, na concentração de 20 mg/kg, foi investigado num modelo animal de asma brônquica. Materiais e Métodos1: camundongos das linhagens C57Bl/6 e BALB/c foram imunizados subcutaneamente e desafiados com inalação de ovalbumina. Posteriormente, grupos de animais das duas linhagens foram tratados com quercetina, durante cinco dias consecutivos, no período que antecedia a inalação com ovalbumina2. Resultados: o tratamento com quercetina reduziu a eosinofilia no lavado brônquio-alveolar. Nos bronquíolos, diminuiu a infiltração de células inflamatórias apenas na linhagem de camundongos BALB/c. Adicionalmente, nesta linhagem, o nível de produção de muco foi reduzido no grupo de animais tratados com o fitoterápico e a diminuição dos parâmetros inflamatórios foi similar ao grupo controle tratado com dexametasona3. Os marcadores inflamatórios avaliados no grupo de camundongos que usou quercetina na linhagem C57Bl/6 não sofreram alterações significativas com relação ao grupo não tratado. Conclusões: Nas condições do presente trabalho conclui-se que a quercetina atenuou significativamente as características inflamatórias da asma experimental apenas em camundongos da linhagem BALB/c, embora os mecanismos de ação desse fitoterápico não tenham sido efetivamente evidenciados. / Salvador

DUTRA, Brunheld Maia. Efeito imunomodulador de CXCL10 em camundongos BALB/C infectados com cepa de Leishmania braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. 2015. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:34:02Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Leishmania braziliensis from antimony-resistant patient is able to induce high levels of IL-4 and Arginase in mice, contributing to the increased virulence of the strain and the severity of the disease. CXCL10 is a chemokine that recruits and activates Th1 cells, NK, macrophages, dendritic cells and lymphocytes B. The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of CXCL10 in the infection by strain of L. braziliensis refractory to treatment with antimony. BALB/c mice (n=64) were infected intradermally in the right ear 107 promastigotes (20 µl), and after appearance of lesions (5ª week), the animals were divided into four groups (16/group): 1. Control untreated; 2.Glucantime (100mg/kg/day, I.M.); 3.CXCL10 (100 ng/10μL, I.M.); 4.Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL+100mg/kg/day, I.M.). The animals were treated for 7 days, followed by weekly measurements of lesions, and were euthanized in the first and fourth week post-treatment (w.p.t) for the evaluation of some parameters: parasite burden (lesions, and draining lymph node-LN), production of the cytokines IFN-γ, IL-4, IL-10 and TGF-β (LN) and histological changes (lesions). The results showed CXCL10 and Glucantime induced, early as the first s.p.t., non-ulcerated lesions that regressed significantly (0.35 ± 0.07, 0.047 ± 0.27, p <0.05) compared to controls (0.63 ± 0.12) and Glucantime (0.56 ± 0.12). This was associated with a significant decrease in parasite load observed in CXCL10 and CXCL10 + Glucantime groups, in the lymph node (1.17x103 ± 0.85x103, 2.05x103 ± 1.50x103, respectively) compared to control (3.2x104 ± 1.97x104) and Glucantime (1.18x105 ± 1.12x105). Regarding to cytokines, CXCL10 treated animals showed high levels of IFN-γ, IL-10 and TGF-β, and low IL-4 production. In contrast, was observed in the control and Glucantime groups increased production of IL-4. These data also corroborate the histopathological findings showing that animals treated with CXCL10, with or without Glucantime, showed a non-exacerbated inflammation, with absence of necrosis, lower parasitism, granulomas and cellular infiltrate with more activated macrophages, many lymphocytes and few plasma cells, compared to control and Glucantime. In conclusion, CXCL10 and the association CXCL10+Glucantime induced minor injuries, lesions non-ulcerated, with decreased earlier parasite load, leading to the resolution of the disease through an immune response with high IFN-γ and low IL-4 production, and with the control of inflammation mediated by IL-10 and TGF-β. / Leishmania braziliensis proveniente de paciente resistente ao antimônio é capaz de induzir altos níveis de IL-4 e de Arginase em camundongos, contribuindo para a maior virulência da cepa e gravidade da doença. CXCL10 é uma quimiocina que recruta e ativa células Th1, NK, macrófagos, células dendríticas e linfócitos B. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vivo o efeito de CXCL10 na infecção por cepa de L. braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. Camundongos BALB/c (n=64) foram infectados por via intradérmica na orelha direita, 107 promastigotas (20µL) e após o aparecimento das lesões (5a sem), os animais foram divididos em quatro grupos (16 animais/grupo): 1. Controle não tratado; 2. Glucantime (100mg/kg/dia, I.M); 3. CXCL10 (100ng/10µL, I.M.); 4. Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL + 100mg/kg/dia, I.M.). Os animais foram tratados por 7 dias, acompanhados com medidas semanais das lesões e eutanasiados na 1ª e 3ª semanas pós-tratamento (s.p.t.) para a avaliação de alguns parâmetros: carga parasitária (lesões e linfonodo de drenagem-LN), produção das citocinas IFN-γ, IL-4, IL-10 e TGF-β (linfonodo) e alterações histológicas (lesões). Os resultados mostraram que CXCL10 e CXCL10+Glucantime induziram, já a partir da 1a s.p.t, lesões não ulceradas e que regrediram significativamente (0,35±0,07; 0,047±0,27; p<0,05), quando comparado ao Controle (0,63±0,12) e ao Glucantime (0,56±0,12). Isso foi relacionado com a importante diminuição da carga parasitária observada nos grupos CXCL10 e CXCL10+Glucantime, no LN (1,17x103 ± 0,85 x 103; 2,05x103 ± 1,50x103, respectivamente) quando comparado ao Controle (3,2x104 ± 1,97x104) e ao Glucantime (1,18x105 ± 1,12x105). Em relação às citocinas, o tratamento com CXCL10 mostrou altas concentrações de IFN-γ, IL-10 e TGF-β, e baixa produção de IL-4. Em contrapartida, nos grupos Controle e Glucantime, foi observada maior produção de IL-4. Esses dados corroboram também com os achados histopatológicos que mostraram que os animais tratados com CXCL10, associado ou não ao Glucantime, apresentaram uma inflamação não exacerbada, com ausência de necrose, menor parasitismo, presença de granulomas e infiltrado celular com mais macrófagos ativados, muitos linfócitos e poucos plasmócitos, em relação ao Controle e ao Glucantime. Em suma, CXCL10 e a associação CXCL10+Glucantime induziram lesões menores, não ulceradas, com diminuição da carga parasitária mais precocemente, conduzindo à resolução da doença através de uma resposta imunológica com alta produção de IFN-γ e baixa produção de IL-4, e controle da inflamação modulado por IL-10 e TGF-