Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:04:33Z : No. of bitstreams: 1 000757820.pdf: 10700274 bytes, checksum: 33a8d0ab3adfab16a9b9b24071f36f03 (MD5) / As interações entre fungos e bactérias são abundantes na natureza e tem importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento do desenvolvimento da doença e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações entre Lactobacillus acidophilus e Candida albicans em modelos de estudo in vitro e em modelo experimental de invertebrado. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de L. acidophilus sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de L. acidophilus sobre C. albicans e também os efeitos indiretos, utilizando apenas o sobrenadante da cultura de Lactobacilos. Além disso, foram testados os efeitos de L. acidophilus sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, as cepas de L. acidophilus foram inoculadas juntamente com C. albicans em lagartas de Galleria mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de L. acidophilus sobre a candidose experimental foram avaliados pela análise de curva de sobrevivência de G. mellonella, quantificação de UFC/mL de C. albicans e avaliação histológica da filamentação de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. (P ≤ 0,05). Os resultados in vitro demonstraram que a cultura de 24 h de L. acidophilus foi capaz de inibir a formação de biofilme e a filamentação por C. albicans. Esses efeitos inibitórios também foram observados... / Interactions between fungi and bacteria are abundant in nature and are of medical and environmental importance. The developments of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential to understand diseases and to discover new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Lactobacillus acidophilus and Candida albicans on in vitro study models and experimental models of invertebrates. In the in vitro study, we analyzed the effects of L. acidophilus on C. albicans biofilm formation as well as its filamentation ability. On both tests, the direct effects of L. acidophilus cells and indirect effects of the supernatant culture of L. acidophilus were evaluated , as well as the L. acidophilus effects on C. albicans at different bacterial culture growth stages (4, 6 18 and 24h). To perfom the in vivo study, L. acidophilus and C. albicans strains were inoculated in Galleria mellonella model to induce experimental infection. The L. acidophilus effects on experimental candidosis have been evaluated by the analysis of the survival killing curve of G. mellonella, quantify C. albicans colony forming units per millimeter (CFU/mL) and through histological evaluation of C. albicans filamentation ability on the host tissues. The in vitro test results and the CFU/mL number in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey’s test. The obtained data on G. mellonella killing curves have been analyzed using the long-rank test method. A 5% significance level has been considered on all tests. The in vitro results showed that the L. acidophilus 24 hour culture was able to inhibit the formation of biofilm and filamentation by C. albicans. These inhibitory effects were also observed when the supernatant of the L. acidophilus culture was placed in contact with C. albicans, suggesting that the inhibitory action occurred by the ....

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-12Bitstream added on 2015-03-03T12:06:56Z : No. of bitstreams: 1 000806425_20170312.pdf: 263323 bytes, checksum: 4daef685ed333b05ec684914cb0765b5 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-17T12:38:11Z: 000806425_20170312.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-17T12:39:10Z : No. of bitstreams: 1 000806425.pdf: 2132825 bytes, checksum: 171c310b3265e76efa3377d61b47cbf7 (MD5) / O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (TTO) é um extrato de ação antifúngica e preventiva em escala farmacêutica ou cosmética. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do TTO e Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans. Este estudo foi realizado em três fases: 1- Identificação da CIM (Concentração Inibitória Mínima) e CFM (Concentração Fungicida Mínima) do TTO (0,25 a 2%) e Terpinen-4- ol (0,11 a 0,95%) sobre C. albicans na forma planctônica. 2- Análise das diferentes concentrações do óleo sobre biofilme monoespécie de C. albicans por meio da contagem das UFC/mL e avaliação da atividade metabólica das células pelo método colorimétrico de XTT. 3- Análise da ação inibitória das soluções de TTO e Terpinen-4- ol sobre biofilmes de C.albicans (cepa padrão e isolados clínicos) formados em corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável previamente cobertos com saliva humana, por meio do teste de XTT e por microscopia confocal de varredura à laser (MCVL). A nistatina (Sigma) foi utilizada como controle positivo. Os resultados mostraram que isolados de C. albicans planctônicos foram sensíveis ao TTO 1%, Terpinen-4-ol 0,47% e Nistatina 8 ?g/mL. As menores concentrações fungicidas para os isolados foram TTO 2 %, Terpinen-4-ol 0,95 % e Nistatina 16 ?g/mL. Quando analisado em biofilme através da quantificação (UFC/mL) e teste de XTT as concentrações de TTO 2 % e Terpinen-4-ol 0,95 % foram eficazes quando comparado ao controle, sendo que as amostras da genotipagem A2 e B1 foram as mais resistentes. Os resultados de MCVL mostraram que todos os biofilmes desenvolvidos em corpos de resina acrílica apresentaram-se semelhantes à ação da Nistatina. Os extratos avaliados apresentaram ação antifúngica para os isolados clínicos e podem ser considerados tratamento alternativo para paciente com candidíase. / The essential oil of Melaleuca alternifolia (TTO) is an extract of antifungal action and preventive in pharmaceutical or cosmetic scale. The aim of this study was to evaluate the efficacy of TTO and Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans. This study was conducted in three phases: 1- Identification of MIC (Minimum Inhibitory Concentration) and CFM (Minimum Fungicidal Concentration) of TTO (0.25 to 2%) and Terpinen-4-ol (0.11 to 0.95 %) on C. albicans in planktonic form . 2- Analysis of different concentrations of oil on C. albicans biofilm single species by counting CFU/mL and evaluation of the metabolic activity of cells by XTT colorimetric method. 3- Analysis of the inhibitory action of TTO and Terpinen-4-ol solutions on C. albicans biofilms (standard strain and clinical isolates) formed in specimens of polymerizable resin acrylic microwave previously coated with human saliva , by means of the XTT test and confocal laser scanning microscopy (CLSM) . The nystatin (Sigma) was used as a positive control. The results showed that isolates of C. albicans planktonic were sensitive to TTO 1%, Terpinen-4-ol 0.47% and Nystatin 8 mg/mL. The smaller fungicidal concentrations for the isolates were TTO 2%, Terpinen-4-ol 0.95% and Nystatin 16 mg / mL. When analyzed by quantifying biofilm (CFU / ml) and XTT test, the concentrations TTO 2% and Terpinen-4-ol 0.95% were effective when compared to the control, and genotyping of samples A2 and B1 were more resistant. The CLSM results showed that all biofilms developed in bodies of acrylic resin were similar to the action of Nystatin. The extracts showed antifungal action for the clinical isolates and can be considered an alternative treatment for patients with candidiasis.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Realizou-se estudo coorte prospectivo em 4 hospitais de São Paulo no período de março de 2002 a fevereiro de 2003. Incluiu-se todos os pacientes que apresentaram hemocultura positiva para C. albicans ou C. parapsilosis. As leveduras foram identificadas ao nível de espécie por sistema comercial e submetidas a testes de susceptibilidade através de microdiluição em caldo (NCCLS). Informações clínicas e epidemiológicas foram colhidas através de ficha clínica padrão e armazenadas em banco de dados (EPI-INFO). Fatores de risco para ocorrência de infecção por C. parapsilosis foram definidos por análise univariada e multivariada. Foram documentados 282 episódios de candidemia, sendo 107 por C. albicans (54,2% homens, mediana 50 anos) e 64 por C. parapsilosis (59,4% homens, mediana 27,5 anos). Neutropenia, quimioterapia e CVC de longa permanência (p=0,01) foram condições de risco para fungemia por C. parapsilosis em análise univariada. Na análise multivariada identificou-se a presença de CVC longa permanência (p=0,01) como fator de risco para esta infecção. A mortalidade foi maior em pacientes com fungemia por C. albicans (61,7% versus 45,3%, p=0,03). Todos os isolados testados foram sensíveis a azólicos e 5-fluorocitosina, com apenas um isolado de C. parapsilosis resistente a anfotericina B. / A prospective cohort study was conducted in 4 hospitals of the city of São Paulo in the period from March 2002 to February 2003. The study included all patients who presented positive blood culture for C. albicans or C. parapsilosis. The yeasts were identified on the species level by a commercial system and subjected to susceptibility tests (NCCLS). Clinical and epidemiological data were collected through a standard case report form (CRF) and stored in a database (EPI-INFO). Risk factors for the occurrence of infection by C. parapsilosis were defined by univariate and multivariate analysis. Our study documented 282 candidemic episodes, 107 of them due to C. albicans (54.2% men, median 50 years) and 64 by C. parapsilosis (59.4% men, median 27.5 years). Neutropenia, chemotherapy and long-term central venous catheter (CVC) (p=0.01) were risk conditions for fungemia by C. parapsilosis in univariate analysis. In the multivariate analysis, the presence of long-term CVC (p=0.01) was identified as the only risk factor for that infection. Mortality rate was higher in patients with fungemia by C. albicans (61.7% versus 45.3%, p=0.03). All isolates tested were sensitive to azoles and 5- fluorocitosin, with only one isolate of C. parapsilosis exhibiting low susceptibility to amphotericinB. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T14:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 281335.pdf: 2427402 bytes, checksum: fcd04bec714a61e4eedf82f41ef096c9 (MD5) / Candida glabrata é considerado um importante patógeno fúngico emergente devido principalmente ao incremento de pacientes imunossuprimidos, e ao uso indiscriminado de compostos azólicos, resultando em altas taxas de mortalidade pela resistência inata desta levedura aos antifúngicos normalmente utilizados. Estratégias que objetivam a pronta identificação deste patógeno são extremamente importantes já que permitem a pronta implementação de um tratamento medicamentoso apropriado. A utilização de trealose por C. glabrata é apontada como importante metodologia diagnóstica na pratica laboratorial, já que é característica marcante desta levedura a utilização de apenas glicose e trealose como fontes de carbono. Resultados prévios indicavam que esta levedura cresce em trealose graças à secreção no meio de cultura de uma trealase ácida que prontamente hidrolisa o dissacarídeo, permitindo a rápida fermentação da glicose liberada. No genoma de C. glabrata encontramos a ORF CAGL0K05137g, similar ao gene (ATH1) que codifica para a trealase ácida de S. cerevisiae. No intuito de verificar a identidade do gene postulado no genoma de C. glabrata como sendo da trealase ácida, utilizamos tanto estratégias de deleção da ORF do genoma, como subclonagem e expressão heteróloga dessa sequência gênica em S. cerevisiae. A deleção em C. glabrata confirmou a identidade do gene, não só pela ausência de crescimento em meios de cultura contendo trealose como fonte de carbono, como também pela perda da atividade trealase ácida periplasmática e/ou secretada pelas células. Além disso, nossos resultados indicam o envolvimento deste gene na manutenção da homeostase celular durante o estresse salino. A seqüência de DNA correspondente foi também subclonada de forma a sobrexpressar este gene em S. cerevisiae, confirmando o gene CgATH1 como sendo o responsável pela síntese de uma trealase ácida. A ORF clonada foi seqüenciada e comparada à ORF CAGL0K05137g, mostrando uma identidade de 98% entre as sequências. Acreditamos que a caracterização molecular da trealase ácida em C. glabrata permitirá melhorias no diagnóstico laboratorial, bem como uma melhor compreensão do papel desta enzima, e do metabolismo de trealose, na fisiopatologia deste importante patógeno oportunista e de outros fungos de interesse médico. / Candida glabrata is considered an important and emergent fungal pathogen due mainly to an increase in immunosuppressive patients, and to the indiscriminate use of azolic compounds, resulting in high mortality rates by the innate resistance of this yeast towards the normally used antifungals. Strategies that objectify the fast identification of this pathogen are extremely important, because they will allow the immediate implementation of an appropriate medical treatment. The utilization of trehalose by C. glabrata is pointed out as an important diagnostic methodology in the laboratorial practice, since it is a striking feature of the yeast to use only glucose and trehalose as carbon sources. Previous results indicate that this yeast grows in trehalose thanks to the secretion of an acid trehalase in the culture media that promptly hydrolyses the disaccharide, allowing the fast fermentation of the released glucose. In the genome of C. glabrata we found the ORF CAGL0K05137g, similar to the gene (ATH1) encoding for the acid trehalase of S. cerevisiae. In order to verifying the identity of the postulated gene in the genome of C. glabrata as an acid trehalase, we thus utilized strategies for the deletion of the ORF from the genome, as well as cloning and heterologous expression of this genetic sequence in S. cerevisiae. The deletion in C. glabrata confirmed the identity of the gene, not only because of absence of growth in culture media containing trehalose as a carbon source, but also to the loss of periplasmic and/or secreted acid trehalase activity by the cells. Besides, our results indicate the involvement of this gene in the maintenance of cellular homeostasis during a saline stress. The corresponding DNA sequence was also subcloned so that the gene could be overexpressed in S. cerevisiae, confirming the CgATH1 gene as being responsible for the synthesis of an acid trehalase. The cloned ORF was sequenced and compared to the ORF CAGL0K05137g, showing 98% identity between the sequences. We believe that the molecular characterization of the acid trehalase in C. glabrata will allow improvements in the laboratorial diagnostic, as well as a better understanding of this enzyme#s role, and of trehalose metabolism, in the physiopathology of this important opportunistic pathogen and of other fungi of medical interest.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / El objetivo de este estudio in vitro fue evaluar el grado de adherencia de levaduras tipo Candida albicans a las superficies rugosas de dos materiales de distinta composición química usados en la confección de prótesis removibles, como son el acrílico de termopolimerización y el nylon termoplástico. Para este efecto se realizó un análisis cuantitativo de las células adheridas a dichas superficies. Se esterilizaron los especímenes poliméricos por medio luz U.V. y se incubaron en una suspensión de levaduras a una concentración de 2 x 10 7 cél/ml durante 6 horas a 37ºC. Posteriormente se lavaron los especímenes para desprender las células no adheridas y se tiñeron. Por medio de microfotografías de los especímenes se efectuó el análisis con un programa computacional de análisis morfométrico, el cual realizó un conteo de áreas ocupadas en micrones cuadrados  El análisis estadístico mostró diferencias significativas en la adherencia de Candida albicans a estas superficies. El mayor grado de adherencia lo presentaron las superficies de nylon termoplástico a pesar de que también hubo adherencia en superficies de acrílico de termopolimerización.

CAMPOS, R. S. Atividade antifúngica da palmatina frente a isolados de Candida spp. resistentes a azólicos e sua atividade contra biofilme formado e em formação. 2017. 104 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-22T11:52:05Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-22T11:52:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T11:52:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Currently, the incidence of fungal infections has been increasing and in a prominent position, those caused by species of the genus Candida, which is the most isolated microorganism in hospital sepsis. The most frequently isolated species was Candida albicans, but this scenario has been changing with the increase of non-albicans species, which are more resistant to fluconazole. Due to the resistance problem and the fact that there are few antifungal drugs available on the market, it is necessary to search for new drugs. In this context, there was an interest in studying palmatine, which is an isoquinolinic alkaloid, which has been used in traditional Chinese medicine for several years, presenting several pharmacological properties, including antifungal. The objective of this work was to evaluate the antifungal activity of palmatina against Candida spp. Resistant to azoles. The methodology used to verify the antifungal action was the broth microdilution technique. Flow cytometry tests were performed to elucidate the possible mechanisms of death involved. The anticancer action of palmatine was verified in biofilms formed and in formation in the three main Candida species (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis). Proteomic analysis was also used as a tool to understand the biochemical processes involved in the action of palmatine and the cytotoxicity test was also performed on murine fibroblasts. Palmatina demonstrated antifungal activity with MICs ranging from 32 to 128 μg / mL. It was found that palmatine reduced cell density, caused DNA damage, promoted mitochondrial depolarization, increased phosphatidylserine outgrowth, suggesting cell death by apoptosis. In biofilms formed, palmatine reduced the cellular viability of the biofilm in a concentration of 20x MIC (C. albicans) and 10x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis) by 50%. In biofilms in formation, the same percentage of inhibition was achieved in the MIC concentration (C. albicans) and 2x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis). Proteomic analysis of a strain of C. albicans exposed to palmatine demonstrated the overexpression of proteins related to energy production and synthesis of macromolecules. Palmatine did not demonstrate cytotoxicity when evaluated at the concentration of 100 μg / mL in murine fibroblast L929 cells. The antifungal action of palmatine in Candida spp. Resistant to planktonic and biofilm forming and forming biofilms, as well as being non-cytotoxic to animal cells, point to a promising new molecule or anti-plaque prototype. / Atualmente, a incidência das infecções fúngicas vem aumentando e em posição de destaque, as causadas por espécies do gênero Candida, a qual é o microrganismo mais isolado em sepse hospitalar. A espécie mais frequentemente isolada era Candida albicans, mas esse panorama vem mudando com o aumento de espécies não albicans, as quais apresentam uma maior resistência ao fluconazol. Devido ao problema de resistência e o fato de haver poucos fármacos antifúngicos disponíveis no mercado, faz-se necessário a busca por novos fármacos. Neste contexto, houve interesse em estudar a palmatina que é um alcalóide isoquinolínico, há anos já vem sendo usado na medicina tradicional chinesa apresentando várias propriedades farmacológicas, inclusive antifúngica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica da palmatina frente à cepas de Candida spp. resistentes a azólicos. A metodologia utilizada para verificar a ação antifúngica foi a técnica de microdiluição em caldo. Foi realizados testes de citometria de fluxo para elucidar os possíveis mecanismos de morte envolvidos. A ação anticandida da palmatina foi verificada em biofilmes formados e em formação nas três principais espécies de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis). A análise proteômica também foi utilizada como ferramenta no entendimento dos processos bioquímicos envolvidos na ação da palmatina e também foi realizado o teste de citotoxicidade em fibroblastos murino. Palmatina demonstrou atividade antifúngica com os CIM variando 32 a 128 μg/ mL. Verificou-se que a palmatina reduziu a densidade celular, causou danos ao DNA, promoveu despolarização mitocondrial, aumenta a externalização de fosfatidilserina, sugerindo morte celular por apoptose. Em biofilmes formados, palmatina reduziu em 50% a viabilidade celular do biofilme na concentração de 20x CIM (C. albicans) e 10x CIM (C. tropicalis e C. parapsilosis). Já em biofilmes em formação, a mesma porcentagem de inibição foi alcançada na concentração do CIM (C. albicans) e 2x CIM (C. tropicalis e C. parapsilosis). Análise proteômica de uma cepa de C. albicans exposta a palmatina demonstrou a super expressão de proteínas relacionadas à produção de energia e síntese de macromoléculas. Palmatina não demonstrou citotoxicidade quando avaliada na concentração de 100 μg/ mL em células L929 de fibroblasto murino. A ação antifúngica da palmatina em Candida spp. resistentes a azólicos na forma planctônica e em biofilme formados e em formação, assim como, ao fato de não ser citotóxica para células animais, apontam para uma promissora nova molécula ou protótipo anticandida.

MACIEL, Antônio Auberson Martins. Avaliação da atividade sinérgica entre miconazol e nanopartículas de prata produzidas por síntese verde contra cepas de candida parapsilosis. 2016. 60 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2017-01-13T18:38:21Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_aammaciel.pdf: 2326328 bytes, checksum: d4a77411031e2026a32f9ae412e61e56 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-19T13:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_aammaciel.pdf: 2326328 bytes, checksum: d4a77411031e2026a32f9ae412e61e56 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T13:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_aammaciel.pdf: 2326328 bytes, checksum: d4a77411031e2026a32f9ae412e61e56 (MD5) Previous issue date: 2016 / The study of nanoparticles on biological activity of microorganisms is becoming more popular and important as there is the emergence of resistance as well as the ineffectiveness of some antimicrobials against these microorganisms. In particular, the silver nanoparticles gained expansion in the new field of nanomedicine through their development and incorporation into a range of products and technologies. Candidemia and candidiasis are among the most common infections and which have significant morbidity and mortality. The candidemia corresponds to bloodstream infection and candidiasis refers to infection with Candida yeasts in any body site. The objective of this study was to evaluate the in vitro activity of synergy silver nanoparticles (AgNP) with the antifungal azole class of imidazole, Miconazole, against strains of Candida parapsilosis. The green AgNP were synthesized via synthesis with varying the concentration of the stabilizer, sodium dodecyl sulfate (SDS), 0,5g; 0,25g and 0,1g. The AgNP were characterized by spectroscopy UV / visible, infrared Fourier transform spectroscopy, X-ray diffraction, light scattering and scanning electron microscopy with microanalysis. In assessing the synergistic activity were used 50 strains of Candida parapsilosis. The AgNP with 0,5g of SDS reached an average size of 77,58 nm and zeta potential of -49,2 while NPAg with 0,25 g of SDS reached an average size of 91,22 nm and zeta potential of -47,2. No stabilization AgNP with 0,1g SDS. The AgNP-G-SDS showed high antifungal activity when combined with Miconazole. / O estudo de nanopartículas com atividade biológica em microorganismos vem ganhando espaço devido ao aparecimento da resistência e ineficácia de alguns antimicrobianos. Em especial, as nanopartículas de prata (AgNPs) ganharam expansão no novo campo da nanomedicina através do seu desenvolvimento e incorporação em uma gama de produtos e tecnologias. Candidemia e candidíase estão entre as infecções mais comuns e que apresentam significante morbidade e mortalidade. A candidemia corresponde à infecção da corrente sanguínea e a candidíase refere-se à infecção por leveduras do gênero Candida em qualquer sítio corpóreo. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade in vitro da sinergia de AgNPs com o antifúngico azólico da classe dos imidazólicos, Miconazol, contra cepas de Candida parapsilosis. As AgNPs foram sintetizadas via síntese verde com variação da concentração do estabilizante, Dodecil-Sulfato de Sódio (SDS) 0,5g; 0,25g e 0,1g. As AgNP foram caracterizadas por espectroscopia Ultravioleta/visível, Infravermelho com transformada de Fourier, Difração de raios-X, Espalhamento de luz e Microscopia eletrônica de varredura com a microanálise. Na avaliação da atividade sinérgica foram utilizadas 50 cepas de Candida parapsilosis. As AgNPs com 0,5g de SDS apresentaram tamanho médio de 77,58 nm e potencial zeta de -49,2 enquanto as AgNP com 0,25g de SDS apresentaram tamanho médio de 91,22 nm e potencial zeta de -47,2. Não houve estabilização de AgNP com 0,1g de SDS. As AgNP -G-SDS mostraram elevada atividade antifúngica quando associadas ao Miconazol.

TARGINO, C. S. P. C. Estudo da atividade antifúngica e dos mecanismos de ação do peptídeo Ctn[15-34], um fragmento c- terminal da Crotalicidina, derivado de uma catelicidina expressa nas glândulas de veneno de cascavéis. 2017. 131 f. Tese (Doutorado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by ciências farmacêuticas pgcf (pgcf.ufc@gmail.com) on 2017-06-12T13:41:28Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_cspctargino.pdf: 6282751 bytes, checksum: 5fc1e8e14aea822773a453246b9ae64c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-12T16:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_cspctargino.pdf: 6282751 bytes, checksum: 5fc1e8e14aea822773a453246b9ae64c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T16:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_cspctargino.pdf: 6282751 bytes, checksum: 5fc1e8e14aea822773a453246b9ae64c (MD5) Previous issue date: 2017-04-27 / Crotalicidin (Ctn), a 34-residue cathelicidin from a South American rattlesnake, and its fragment (Ctn[15–34]) have shown anti-infective and cytotoxic activities against Gramnegative bacteria and certain tumor lines, respectively. The extent of such effects has been related to physicochemical characteristics such as helicity and hydrophobicity. We now report the anti-fungal activity of Ctn and its fragments (Ctn[1–14]) and (Ctn[15–34]) And characterize the possible mechanisms of action of peptides against Candida albicans.MIC determination and luminescent cell viability assays were used to evaluate the anti-infective activity of Ctn and its fragments (Ctn[1–14]) and (Ctn[15–34]) as anti-fungal agents against opportunistic yeast and dermatophytes. Cytotoxicity towards healthy eukaryotic cells was assessed in vitro with healthy human kidney-2 (HK-2) cells and erythrocytes. Fragments Ctn[1–14] and Ctn[15–34] lost activity against dermatophytes, but became more active against pathogenic yeasts, including several Candida species and Cryptococcus laurentii, with MICs as low as 5 μM. Interestingly, the two peptide fragments were less cytotoxic to healthy HK-2 cells and less hemolytic to human erythrocytes than the standard-of-care amphotericin B (AMB).The checkerboard technique was performed to estimate the effects of combining either one of the peptides with AMB against C. albicans strains, and it was the synergy between Ctn peptides and AMB, with consequent reduction in MICs of both drug and peptides. In general, the Ctn[15-34] presented the smallest MICs against the different Candida species, and low cytotoxicity against eukaryotic cells. To characterize the anti- Candida activity of Ctn[15-34] were performed the phospholipase activity assay, time killing assay, and flow cytometry techniques.The plasmatic membrane damage was roughly estimated based on the amount of product generated by phospholipase activity after treatment of 4N3OBA lipid (substrate) with Ctn[15-34]; At 10 μM a big increase in phospholipase activity could be noticed compared to non-treated and treated lipids at 5μM. Analysis of the time killing assays of cells treated with Ctn [15-34] and AMB, showed that they did not reduce the number of CFUs in the same fashion, which suggested that Ctn[15-34] and AMB could have different mechanisms of action against C.albicans. Ctn[15-34] alone promoted cell membrane disruption, like other AMPs, in yeasts. Moreover, the C. albicans cell death pathway detected after the peptide treatment was necrosis, which further confirmed cell membrane damage capacity by Ctn[15-34].Together, Ctn and its fragments are promising for the treatment of fungal diseases, and the Ctn [15-34] is a most valuable candidate for further 12 development as an antifungal therapeutic peptide lead, particularly against yeast infections where it could be usedfully applied either alone or in combination with a standard antibiotic such as AMB. / A crotalicidina (Ctn), uma catelicidina de 34-resíduos isolada de cascavel da América do Sul, e o seu fragmento (Ctn[15-34]) demonstraram previamente atividades antimicrobiana contra bactérias Gram negativas e citotóxica contra células tumorais. A extensão de tais efeitos tem sido relacionada com suas características físico-químicas, como a forma helicoidal e hidrofobicidade. O presente trabalho teve o objetivo geral de avaliar a atividade antifúngica do Ctn e seus fragmentos (Ctn[1-14] e Ctn[15-34]) e caracterizar os possíveis mecanismos de ação dos peptídeos contra Candida albicans. Determinação de Concentração inibitória mínima (CIM) e ensaios de viabilidade celular por ensaios de luminescência foram utilizados para avaliar a ação do Ctn e seus fragmentos (Ctn[1-14] e Ctn[15-34]) como agentes antifúngicos contra cepas clínicas de leveduras oportunistas e dermatófitos. A citotoxicidade em relação a células eucarióticas foi avaliada in vitro com células renais da linhagem HK-2 e eritrócitos. Ctn foi o peptídeo mais ativo contra dermatófitos e também o mais tóxico para células eucarióticas saudáveis. Os fragmentos Ctn[1-14] e Ctn [15-34] não demonstraram atividade contra dermatófitos, mas foram ativos contra leveduras patogênicas, incluindo várias espécies de Candida sp. e Cryptococcus laurentii, com CIMs de até 5μm. É interessante notar que os dois fragmentos peptídicos foram menos citotóxicos para as células HK-2 e menos hemolíticos para os eritrócitos humanos do que a Anfotericina B (ANF). A técnica checkerboard foi realizada para estimar os efeitos da combinação dos peptídeos com ANF frente a cepas de C. albicans. Foi observado o efeito sinérgico entre as crotalicidinas e a ANF, com a consequente redução nas CIM de ambos, fármaco e peptídeos. De modo geral, o fragmento Ctn[15-34] apresentou as menores CIMs contra as diferentes espécies de Candida, e baixa citotoxicidade contra células eucariotas. Para caracterizar a atividade anti-Candida do Ctn[15-34] foram realizados ensaios para determinar atividade fosfolipásica, a curva do tempo de morte, e técnicas de citometria de fluxo. O dano à membrana plasmática foi estimado com base na quantidade de produto gerada pela atividade fosfolipásica após tratamento do lípido 4N3OBA (substrato) com Ctn[15-34]; a 10 μM pode ser observado um grande aumento na atividade fosfolipásica em comparação com os lipídeos não tratados, e tratados com 5 μM. A análise das curvas de tempo de morte das células tratadas com Ctn[15-34] e AMB, mostrou que eles não reduziram o número de UFCs da mesma forma, sugerindo que Ctn[15-34] e AMB poderiam ter diferentes mecanismos de ação contra C .albicans. Ctn[15-34] promoveu rompimento da membrana celular, assim como outros peptídeos 10 antimicrobianos (PAMs), em leveduras. Além disso, a via de morte celular da C. albicans detectada por citometria após o tratamento com peptídeo foi a necrose, o que confirmou ainda mais a capacidade de dano da membrana celular por Ctn[15-34]. Juntos, Ctn e seus fragmentos são promissores para o tratamento de doenças fúngicas, e o Ctn[15-34] é um candidato muito valioso para o futuro desenvolvimento de um peptídeo antifúngico, que pode ser aplicado sozinho ou em combinação com um antibiótico padrão como a AMB

Para melhor compreender o papel dos micro-organismos nas doenças da cavidade bucal, é necessário inicialmente avaliar a diversidade microbiana naturalmente existente em indivíduos saudáveis, além de sua distribuição espacial na cavidade bucal. Muitos estudos são conduzidos elucidando o papel do biofilme e das bactérias na saúde bucal, porém poucas pesquisas focaram na atuação das leveduras. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a diversidade e distribuição de leveduras do gênero Candida na microbiota bucal de indivíduos saudáveis. Foram coletadas amostras da boca pacientes adultos saudáveis. Foram obtidas amostras de 9 diferentes habitats da boca: bochechas direita e esquerda, assoalho da boca, palato, língua dorsal, língua ventral, dente molar, vestíbulo labial e saliva. Foram avaliados 100 pacientes com uma média de 28 dentes. Quarenta e nove indivíduos apresentaram leveduras na sua microbiota bucal. Candida albicans foi o micro-organismo mais prevalente (49%), seguido de Candida krusei, Candida parapsilosis, Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii), Candida glabrata, Candida tropicalis e Candida dubliniensis. A associação das leveduras encontradas e os habitats bucais sugeriu que comunidades leveduriformes podem distinguir-se entre os diferentes tecidos da cavidade bucal. A língua (dorsal e ventral) apresentou colonização específica, caracterizada pelas espécies C. tropicalis e C. dubliniensis. De forma semelhante, a microbiota dos habitats revestidos por mucosa foi análoga. A microbiota da língua e dos tecidos duros assemelhou-se entre si em menor intensidade. Estes resultados introduzem a dimensão espacial desta diversidade microbiana que vem sendo estudada, complementando as informações obtidas nos estudos do microbioma humano. / To better understand the role of microorganisms in the diseases of the oral cavity, first it is necessary to evaluate the natural microbial diversity in healthy individuals, as well as their spatial distribution in the oral cavity. Many studies are conducted elucidating the role of biofilms and bacteria in oral health, but few research has focused on the yeast’s performance. In this sense, the objective of this study was to evaluate the diversity and distribution of Candida species in the oral microbiota of healthy individuals. Samples were colleted from the mouth of healthy adults. Samples of 9 different mouth habitats were obtained: right and left cheeks, floor of the mouth, palate, dorsal tongue, ventral tongue, molar tooth, labial vestibule and saliva. We evaluated 100 patients with an average of 28 teeth. Forty-nine subjects had yeasts in their oral microbiota. Candida albicans was the most prevalent microorganism (49%), followed by Candida krusei, Candida parapsilosis, Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii), Candida glabrata, Candida tropicalis and Candida dubliniensis. The association found between the yeasts and oral habitats suggested that communities can be distinguished by the different tissues of the oral cavity. The tongue (dorsal and ventral) presented specific colonization, characterized by the species C. tropicalis, and C. dubliniensis. Similarly, the microbiota of the mucous habitats was similar. The microbiota of the tongue and hard tissue resembled each other in a lesser degree. These results introduce the spatial dimension of the microbial diversity that has been studied, complementing the information obtained in the human microbiome research.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Howard Hughes Medical Institute (HHMI) / Os índices que medem adaptação dos códons são amplamente utilizados para predizer o nível de expressão de um gene. Para verificar se: (i) o índice de adaptação dos códons (CAI) pode ser utilizado para ordenar e caracterizar genes hipotéticos em seqüências de genomas completos; (ii) a variação estocástica da expressão gênica entre as células (ruído) pode ser utilizada como um marcador quantitativo para diferenciar genes essenciais de não essenciais e (iii) qual a correlação existente entre o ruído e o CAI, subdividiu-se esse trabalho em duas partes. Na primeira parte analisei os índices de padrão de uso dos códons como preditores do nível de expressão de genes hipotéticos da levedura Candida albicans. Foram selecionados 744 genes hipotéticos que satisfazem três características simultaneamente sendo elas: (i) ORFs maiores que 500bp; (ii) fases abertas de leitura sem sobreposição com outras ORFs e (iii) ORFs com similaridade ≥ 60% com genes de Saccharomyces cerevisiae e Schizosaccharomyces pombe. O padrão de uso dos códons para os genes hipotéticos apresenta uma grande variedade nos diferentes genes selecionados, porém nota-se uma tendência a um baixo e médio nível de expressão independente do índice analisado. Os valores de CAI variam entre 0,044 e 0,540 com média de 0,170 (± 0,051). ORFs com baixo nível de expressão e potencialmente essenciais são ótimas candidatas para serem alvos para drogas potenciais. Essas características são importantes uma vez que um baixo nível de expressão implicaria numa menor dosagem da droga, e o gene de ser potencialmente essencial uma vez que se deseja a morte do fungo causando a infecção. Baseando-se nessas duas características selecionou-se duas ORFs hipotéticas para estudo de função: CaYdr187c (CAI = 0,084) e CaYlr339c (CAI = 0,088). A ORF CaYdr187c é uma possível proteína do envelope celular, com ontologia de resposta imune; e apresenta tanto peptídeo sinal quanto regiões transmembrana. De acordo com o RT-PCR esse gene é transcrito apenas na fase de levedura do fungo. A ORF CaYlr339c é uma possível proteína relacionada com a tradução, com ontologia de resposta imune; e não apresenta nem peptídeo sinal e nem regiões transmembrana. De acordo com o RT-PCR esse gene é transcrito tanto na fase de levedura quanto na de hifa do fungo. Na segunda parte, analisei a distribuição do ruído transcricional e sua possível utilização como classificador para a essencialidade dos genes. Para se estudar as distribuições estatísticas do ruído temporal no sistema eucariótico modelo Saccharomyces cerevisiae, nós analisamos dados de microarray correspondendo à um ciclo celular para 6.200 genes. Nós descobrimos que o ruído temporal segue uma distribuição log-normal com invariância de escala nos níveis genômico, cromossômico e sub-cromossômico. A correlação do ruído temporal com o índice de adaptação dos códons sugere que pelo menos 70% dos genes codificadores de proteínas são o centro de minimização de ruído do genoma. Nós propusemos um modelo matemático da dinâmica da expressão de um único gene, utilizando a teoria de operadores, o qual revela condições rígidas para a variabilidade do ruído e uma estratégia possível para a minimização / otimização do ruído em nível genômico. Nosso modelo e dados mostram que o ruído mínimo não corresponde a genes obedecendo a uma dinâmica estritamente determinística. A estratégia natural de minimização do ruído consiste em igualar o ruído (η) com a média do valor absoluto da variação relativa do nível de expressão (α). Nós hipotetizamos que o padrão do ruído temporal é uma propriedade emergente do genoma e mostra como a dinâmica da expressão gênica pode estar relacionada com a organização cromossômica. Os índices utilizados neste estudo foram validados como preditores do nível de expressão, caso do CAI para a Candida albicans, e de essencialidade, caso do ruído da expressão gênica. O índice de adaptação dos códons (CAI) é válido como preditor do nível de ruído bem como da dinâmica da expressão gênica. / The indices that measure the codon adaptation are widely used for predicting the expression level of a gene. To verify if: (i) the codon adaptation index (CAI) can be used to characterize hypothetical genes in complete genomes; (ii) the variation of gene expression within cells (noise) can be used as a quantitative marker for essentiality and (iii) what’s the correlation between noise and CAI, this work is divided in two parts. In first section we analyzed the indices that measure the codon adaptation as predictors of the expression level in hypothetical genes in the yeast Candida albicans. We selected 744 hypothetical ORFs that satisfied three characteristic: (i) ORFs longer than 500bp (bp); (ii) open reading frames not superposed with other ORFs and (iii) ORFs with similarity ≥ 60% with Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe genes. The codon usage for the hypothetical genes vary a lot between the selected ORFs, regardless the index. The CAI vary between 0,044 and 0,540 with average 0,170 (±0,051). ORFs with low expression level and that are possibly essential are good candidates to be new drug targets. Based on this two characteristics we selected two hypothetical ORFs for function studies: CaYdr187c (CAI=0,084) and CaYlr339c (CAI=0,088). The ORF CaYdr187c is a possible cell envelope protein, with gene ontology of immune response, and prediction of both signal peptide and transmembrane regions. Based on the RT-PCR this gene is expressed only in the yeast fase. The ORF CaYlr339c is a possible protein involved in translation, with gene ontology of immune response, and no prediction of both signal peptide and transmembrane regions. Based on the RT-PCR this gene is expressed both in the yeast and hypha fases. In the second section, I analyzed the transcription noise and its possible use as a classifier of gene essentiality. The analysis of transcriptional temporal noise could be an interesting means to study gene expression dynamics and stochasticity in eukaryotes. To study the statistical distributions of temporal noise in the eukaryotic model system Saccharomyces cerevisiae, we analyzed microarray data corresponding to one cell cycle for 6,200 genes. We found that the temporal noise follows a lognormal distribution with scale invariance at the genome, chromosomal and sub-chromosomal levels. Correlation of temporal noise with the codon adaptation index suggests that at least 70% of all protein-coding genes are a noise minimization core of the genome. Accordingly, a mathematical model of individual gene expression dynamics was proposed, using an operator theoretical approach, which reveals strict conditions for noise variability and a possible global noise minimization/optimization strategy at the genome level. Our model and data show that minimal noise does not correspond to genes obeying a strictly deterministic dynamics. The natural strategy of minimization consists in equating the mean of the absolute value of the relative variation of the expression level (α) with noise (η). We hypothesize that the temporal noise pattern is an emergent property of the genome and shows how the dynamics of gene expression could be related to chromosomal organization. / BV UNIFESP: Teses e dissertações