O fator IX (FIX) da coagulação sanguínea é uma proteína dependente de vitamina K de grande valor farmacêutico no tratamento da Hemofilia B, o qual é baseado na administração do fator de coagulação derivado de plasma humano ou da proteína recombinante produzida em células murinas. A terapia baseada nestas abordagens apresenta alto custo e está associada às contaminações com vírus e príons, além do desenvolvimento de inibidores de FIX. Esses efeitos aumentam o risco de morbidade e mortalidade relacionadas às hemorragias. Neste trabalho, clonamos o cDNA do FIX em um vetor lentiviral e avaliamos a expressão da proteína recombinante em duas linhagens celulares humanas. A clonagem do cDNA do FIXh no vetor de expressão lentiviral 1054 foi confirmada através da análise com enzimas de restrição específicas obtendo-se as bandas esperadas de 1407 pb e 10054 pb visualizadas em gel de agarose. As linhagens celulares 293T e SK-Hep-1 foram transduzidas com o vetor lentiviral 1054-FIX gerado em nosso laboratório e as células que apresentaram maior expressão de EGFP foram selecionadas e separadas por citometria de fluxo. A quantificação da expressão de FIXrh foi realizada por ensaios de ELISA e cromogênico. A quantificação de FIXrh total foi de 500 ng/106 células para a linhagem 293T e 803 ng/106 células para a linhagem SK-Hep-1. A atividade biológica específica de FIXh nas células 293T e SK-Hep-1 foi 0,047 UI/106 células e 0,186 UI/106 células, respectivamente. Com o intuito de avaliar o perfil de produção de FIXrh ativo ao longo do tempo, foi realizado um acompanhamento de 180 dias, no qual foi observado que a linhagem SK-Hep-1 cessou a expressão de FIX, enquanto as células 293T mantiveram a expressão durante o período. O FIXrh foi caracterizado por western blot confirmando a presença de uma banda imunoreativa esperada de 57 kDa. As linhagens 293T e SK-Hep-1 apresentaram 7,67 e 17 cópias do vetor inserido/célula, respectivamente. Considerando a importância do processo de ?-carboxilação, foi realizada uma análise da expressão gênica dos genes envolvidos neste processo, tais como o VKORC1, ?-carboxilase e o inibidor calumenina, nas linhagens celulares. Os resultados demonstraram razões elevadas entre os genes VKORC1 e calumenina e VKORC1 e ?-carboxilase nas duas linhagens. A cinética de crescimento das células foi realizada por um período de 7 dias apresentando diferenças significativas entre as células SK-Hep-1 transduzidas e não transduzidas, enquanto que as células 293T não presentaram diferenças estatísticas no crescimento celular. A suplementação do meio de cultura com íons Ca+2 e Mg+2 foi testada para avaliar sua influência na expressão de FIXrh ativo. As células 293T apresentaram melhor desempenho nas concentrações de 0,5 mmol/L de Ca+2 e 1,0 mmol/L de Mg+2 e as células SK-Hep-1 no meio de cultura não suplementado. Nossos dados indicam que a linhagem hepática SK-Hep-1 é a melhor produtora de FIXrh funcional e as comparações realizadas entre os dois tipos celulares são importantes na caracterização do comportamento de linhagens geneticamente modificadas voltadas para a expressão de proteínas recombinantes heterólogas e abre novos caminhos para futuros estudos que visam o melhoramento da produção desse tipo de proteína. / Blood coagulation factor IX is a vitamin K-dependent protein, and it has become a valuable pharmaceutical in the treatment of Hemophilia B which is based on the plasma-derived coagulation factors or recombinant protein produced in murine cells. Coagulation therapy based on these approaches has high costs and is closely associated with prion and virus contamination besides the FIX inhibitors development. These effects increase the risk for bleeding-related morbidity and mortality. The purpose of this study was to clone hFIX into a lentiviral vector and evaluate the expression of the recombinant protein in two human cell lines. The cloning of the hFIX cDNA into 1054 lentiviral expression vector was confirmed by enzymatic restriction obtaining the expected 1407 bp and 10054 bp bands in agarose gel. The 293T and SK-Hep-1 cell lines have been stable transduced with 1054-FIX lentiviral vector generated in our laboratory and the cells with higher expression of EGFP were selected and separated by flow cytometry. The quantification of the expression of rhFIX was performed by ELISA and chromogenic assays. The concentration of total rhFIX was 500 ng/106 cells in 293T cell line and 803 ng/106 cells in SK-Hep-1 cell line. The biological activity of FIX secreted by 293T and SK-Hep-1 was 0,047 UI/106 cells and 0,186 UI/106 cells, respectively. In order to evaluate the active rhFIX production profile over time, we conducted a monitoring of 180 days, which was noted that the SK-Hep-1 cell line ceased FIX expression, while 293T cells maintained the expression during this period. rhFIX was characterized by western blot analysis confirming the presence of a expected 57 kDa immunereactive band. The 293T and SK-Hep-1 cell lines showed 7.67 and 17 integrated vector copies/cell, respectively. Considering the importance of the ?-carboxylation process, we performed a gene expression analysis of genes involved in this process, such as VKORC1, ?-carboxylase and calumenin, in cell lines. The results showed high ratios among the genes VKORC1 and calumenin and among VKORC1 and ?-carboxylase in both cell lines. The cell growth kinetics was performed by a 7-day period, showed significant differences between SK-Hep-1 transduced cells and non-transduced cells, whereas 293T cells showed no difference in cell growth. Enrichment of culture medium with Ca +2 and Mg +2 ions was tested to evaluate its influence on the expression of active FIX. 293T cells showed better performance in 0.5 mmol/L Ca+2 and 1.0 mmol/L Mg +2 concentrations and SK-Hep-1 cells in culture medium control. Our data indicate that transduced SK-Hep-1 cells are the best producer of functional rhFIX, and comparisons between these two cell lines are important in characterizing the behavior of genetically modified cell lines focused on the heterologous expression of recombinant proteins and opens new avenues for future studies aimed at improving the production of this type of protein.

Os cânceres de próstata e de mama estão entre as neoplasias mais comuns diagnosticadas na população ocidental. No Brasil, estes dois tipos de neoplasia são as principais causas de morte cuja incidência continua crescendo anualmente, sendo mais comum na população acima de 40 anos. As terapias utilizadas para os tratamentos de ambas as neoplasias estão baseadas principalmente nos receptores de hormônio (andrógeno e estrógeno). Embora muitos fármacos tenham sido desenvolvidos para os tratamentos destas patologias ao longo do tempo, eles perdem eficácia em caso de neoplasias resistentes, que apresentam mutações nas macromoléculas alvo. Assim, novas substâncias bioativas estão sendo investigadas a partir dos alvos biológicos consolidados e também para novos alvos. Neste trabalho, ensaios in vitro foram utilizados para avaliar as atividades farmacológicas e citotóxica de novas substâncias bioativas desenvolvidas no Grupo de Química Medicinal (NEQUIMED), a partir de duas linhagens celulares hormônio-dependentes para o estudo do câncer de próstata (LNCaP) e de mama (MCF-7). A partir das triagens realizadas, duas substâncias foram as mais potentes (Neq0502 e Neq0504) que levaram a morte das linhagens LNCaP e MCF-7 com IC50 na ordem de 20 a 30 µmol/L, respectivamente. No ensaio de ciclo celular, Neq0502 apresentou um perfil semelhante a enzalutamida (fármaco usado como referência), sem perturbações substanciais no ciclo. No entanto, Neq0504 teve um perfil bem distinto do raloxifeno (fármaco usado como referência) para a perturbação do ciclo celular. Finalmente, o índice de seletividade estabelecido a partir dos ensaios com as células de fibroblasto (Balb/C 3T3 clone A31) demonstrou que Neq0502 foi uma substância com a maior seletividade e baixa citotoxicidade em relação à célula não tumoral dentre toda a série estudada. A partir destes dados as novas substâncias poderão ser otimizadas usando Neq0502 como matriz em estudos futuros. / Prostate and breast cancers are among the most common cancers diagnosed in the western population. In Brazil, these two types of cancer are the leading causes of death whose incidence continues to increase annually and is more common in older population than 40 years. The therapies used for the treatment of both cancers are mainly based on the hormone receptors (androgen and estrogen). Although many drugs have been developed for the treatment of these pathologies over time, lose efficacy in case of resistant cancers which have mutations on the target macromolecules. Thus, new bioactive substances are being investigated based on stable biological targets and for new targets. In this study, in vitro assays were used to evaluate the pharmacological and cytotoxic activities of new bioactive substances developed in Medicinal Chemistry Group (NEQUIMED) from two hormone-dependent cell lines for the study of prostate (LNCaP) and breast (MCF-7) cancer. From trials screenings carried out, two compounds were found the most potent (Neq0502 and Neq0504) leading to death of LNCaP and MCF-7 lines with IC50 in the range of 20 to 30 µmol/L, respectively. In the cell cycle assay, Neq0502 made a similar profile to enzalutamide (drug used as a reference), without substantial disruption in the cycle. On the other hand, Neq0504 had a very different profile from raloxifene (a drug used as a reference) to the perturbation of the cell cycle. Finally, the selectivity index established from tests with fibroblast cells (Balb/C 3T3 clone A31) demonstrated that Neq0502 was a substance with high selectivity and low cytotoxicity in order to non-tumor cell from all the substances on the screening. From these data, new substances can be optimized using Neq0502 as a template in future studies.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Arbori Nogueira.pdf: 904606 bytes, checksum: 186b7d2c9f1c91d2dc019d673ecdf983 (MD5) Previous issue date: 2013-12-12 / Cellular automata are models where, out of the application of a local rule to the cells of their regular lattice, global behaviour emerges. Depending on the rule applied, the emergent behaviour may be interpreted as a computation, or used to simulate various types of phenomena, such as physical, biological or social. Cellular automata can be used to simulate population growth, spread of disease, tumor growth, decontamination, among other applications. This paper seeks to expand the theoretical limits on the process of decontamination of a two-dimensional lattice using cellular automata, as established by Daadaa (2012). Here we relax premises assumed therein and seek a better understanding of the characteristics of the rules involved as well as of the behaviour of the immunity time of the decontaminated cells. In order to do so, but since the initial conditions correspond to a very large space, massively parallel programming was employed using GPU, which allowed to evaluate a large number of possibilities. It was possible to identify two decontamination rules linked to each type of neighborhood studied (von Neumann and Moore), that generalise previous rules defined in the work we relied upon. In experiments made with the new rules, their superior efficacy became apparent for random initial conditions; it was also possible to assertain their effectiveness for uniform distribution of states. The general rules allow we developed allowed for a better understanding of the immunity time required to decontaminate a lattice. It was observed that the ratio between the immunity time and the lattice size is not linear, as suggested by Daadaa. / Autômatos celulares são modelos onde, a partir da aplicação de regras locais às células de seu reticulado, emerge um comportamento global. Dependendo da regra aplicada o comportamento emergente pode ser entendido como uma computação, ou utilizado para simular fenômenos físicos, biológicos, sociais, etc. Pode-se usar autômatos celulares para simular crescimento populacional, propagação de doenças, crescimento de tumores, descontaminação, entre outras aplicações. O presente trabalho procura expandir limites teóricos a respeito do processo de descontaminação de reticulados bidimensionais por autômatos celulares, apresentado por Daadaa (2012). Flexibiliza-se aqui premissas lá assumidas e procura-se uma melhor compreensão sobre as características das regras envolvidas bem como do comportamento do tempo de imunidade de células recuperadas. Para tanto, uma vez que as possíveis condições iniciais configuram um espaço muito grande, foi empregada programação massivamente paralela utilizando GPU, permitindo avaliar um grande número de possibilidades. Foi possível identificar duas regras de descontaminação, específicas para cada tipo de vizinhança estudada (vizinhanças de von Neumann e de Moore), que generalizam as regras anteriormente definidas no mesmo contexto do trabalho aqui tratado. Nos experimentos realizados, foi possível comparar a eficácia das regras propostas com as que lhes deram origem, e ficou evidente a eficácia superior das novas regras para condições iniciais aleatória; também foi possível constatar a eficácia das regras para distribuições uniformes de estados. As regras gerais desenvolvidas permitiram melhor compreensão do tempo de imunidade necessário para descontaminar um reticulado. Foi possível observar que a relação do tempo de imunidade com o tamanho do reticulado não é linear como sugerido no trabalho de Daadaa.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:38:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Candido de Oliveira Junior.pdf: 2556176 bytes, checksum: 36a40324dff941d6e999652066c9fd7b (MD5) Previous issue date: 2006-03-07 / Wolfram Research, Inc. / The computational ability of cellular automata (CAs) has been investigated in many research initiatives in the literature. Among them, one possibility is their use as spatial pattern recognizers. Here, we attempt to use CAs to recognize handwritten numerical characters, by looking for CA rules which, running on different initial configurations that represent the same handwritten digit, would lead the temporal evolution to equivalent final configurations (defining the same spectral fixed point. The work uses a metric that allows the comparison between images based on their spectral similarity, drawn from a previous work, as well as a proposal therein on the way elementary CA rules are applied (in a crossed fashion) so as to allow the reduction in the size of the rule space involved. Conceptual structures are defined to support the recognition experiments, namely, the notions of spectral fixed point, spectral prototype, and a measure of a rule potential to perform well in the recognition task. The latter entailed from various studies on the attributes a good rule should account for, and, once defined, made it possible an evolutionary search in that space. Here we show some rules that yielded positive results in the recognition of the image used for training (i.e., those used in the definition of the recognition prototypes), and further results on the attempt to carry out real recognition experiments, with images not used for training, whose results are not yet satisfactory. / A habilidade computacional dos autômatos celulares (ACs) tem sido investigada em várias iniciativas na literatura, entre as quais no reconhecimento e tratamento de padrões espaciais. Nessa linha, ACs são utilizados aqui como reconhecedores de caracteres numéricos manuscritos, através de regras que, quando aplicadas a diferentes condições iniciais, representando o mesmo dígito manuscrito, devem levar a estados finais equivalentes (definindo um mesmo protótipo espectral). O trabalho parte da utilização de uma métrica de comparação de imagens baseada na similaridade espectral, proposta em um trabalho anterior, bem como se utiliza de uma proposta anterior de aplicação de regras elementares de uma forma cruzada, com o objetivo de reduzir o espaço de busca envolvido no reconhecimento. Várias estruturas conceituais foram definidas para o processo de reconhecimento, entre elas, a noção de ponto fixo espectral, protótipo espectral e uma função de avaliação com potencial de qualificar as regras na tarefa de reconhecimento. Esta última decorreu de uma série de estudos sobre os atributos que uma boa regra deve conter, e sua definição foi a base de uma busca evolutiva no espaço de regras em que o trabalho está envolvido. Esta pesquisa apresenta algumas regras com resultados positivos no reconhecimento de imagens que foram usadas como treinamento (i.e., as usadas para gerar os protótipos usados para o reconhecimento), e também apresenta resultados de experimentos reais de reconhecimento, com imagens não usadas para treinamento, cuja qualidade ainda não é satisfatória.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:38:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabio Tokio Miki.pdf: 3084755 bytes, checksum: a9dcafd5096585d0dd40b1b9985073fe (MD5) Previous issue date: 2006-10-09 / Fundo Mackenzie de Pesquisa / Cellular automata are dynamical and computational systems, totally discrete in time, space and their state variables. It is known that, for elementary cellular automata, the set of all possible configurations that can appear at any finite number of time steps in their temporal evolution constitutes a regular language. As a consequence, such a set of strings can be represented by a minimal deterministic finite automaton, and the quantity of states and transitions among them may be considered a measure of the (regular language) complexity of the rule at issue; performing such a process may be computationally intensive, but it is well solved in the literature. However, when the target is the limit finite automaton, that is, the one after an infinite number of time steps, the machine may not exist for some rules, and the currently existing method fails to automatically generate it for some rules for which it is known otherwise that a solution does exist. This work aims at helping the solution of the latter problem, although the actual derivation of the algorithm to automatically generate the limit finite automaton has not yet been possible. However, it goes further the currently existing method, by means of a new algorithm for automatically yielding the growth expressions of the finite automaton representative of each time step, including some cases not reported so far, therefore shedding light over the issue, and opening perspectives for a subsequent automatic derivation of the limit finite automaton. / Autômatos celulares são sistemas dinâmicos e computacionais totalmente discretos no tempo, no espaço e em suas variáveis de estado. Sabe-se que, para um autômato celular elementar, o conjunto de todas as configurações possíveis de se obter decorrida uma quantidade finita de passos de tempo de sua evolução temporal constitui uma linguagem regular. Com isso, esse conjunto de cadeias pode ser representado por um autômato finito determinístico mínimo, e a quantidade de estados e transições entre eles pode ser considerada uma medida da complexidade (em linguagem regular) da regra elementar em questão; tal processo, apesar de eventualmente custoso computacionalmente, está bem resolvido na literatura. No entanto, quando se deseja obter a representação do autômato finito limite, isto é, para uma quantidade infinita de passos de tempo, essa máquina pode não existir para algumas regras, e, mesmo em alguns casos em que se sabe que ela existe, não há ainda um método que a gere automaticamente. O presente trabalho caminha na direção de ajudar a solucionar este último problema, apesar de que ainda não foi possível derivar o algoritmo de comportamento limite. No entanto, avança-se aqui com relação ao método atualmente existente, no sentido de, através de um novo algoritmo, derivar automaticamente expressões de crescimento do autômato finito representativo de cada passo de tempo, inclusive em casos ainda não reportados, o que lança luz sobre a questão original, abrindo perspectivas para que a obtenção automática do autômato finito limite possa ser obtida posteriormente.

Submitted by Rosa Assis (rosa_assis@yahoo.com.br) on 2017-03-22T12:33:01Z No. of bitstreams: 2 EURICO LUIZ PROSPERO RUIVO.pdf: 3912806 bytes, checksum: ee84d2f571b4e34203c8e6f37dede9b3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Paola Damato (repositorio@mackenzie.br) on 2017-03-22T15:40:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 EURICO LUIZ PROSPERO RUIVO.pdf: 3912806 bytes, checksum: ee84d2f571b4e34203c8e6f37dede9b3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T15:40:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 EURICO LUIZ PROSPERO RUIVO.pdf: 3912806 bytes, checksum: ee84d2f571b4e34203c8e6f37dede9b3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-09-28 / Fundo Mackenzie de Pesquisa / Cellular automata are locally de ned dynamical systems which are discrete in space, time and in the state variables, and capable of presenting arbitrarily complex global emergent behaviour. One core question in the study of cellular automata refers to their limit behaviour, that is, to the global dynamical features in a in nite time evolution. Previous works have shown that for nite time evolutions, one-dimensional cellular automata present dynamics which can be described by regular languages and, therefore, by nite automata. Also, such studies have shown the existence of growth patterns in the evolution of such nite automata for some cellular automata rules; however these results were obtained manually by directly inspecting the structures that arise during the time evolution. In this work we present the formalisation of an automatic method to compute such structures. Based on this, the rules of the elementary cellular automata rule space were classi ed according to the existence of a growth pattern in their nite automata. Also, we present new methods to infer the limit graph of some elementary cellular automata rules by analysing the regular expressions describing their behaviour in nite-time and the attractors of each rule, as well as an application of these graphs in computing the Fourier spectra of the rules. / Autômatos celulares são sistemas dinâmicos localmente definidos, discretos no espaço, no tempo e nas variáveis de estado, e capazes de apresentar comportamento emergente global arbitrariamente complexo. Uma das questões centrais no estudo de autômatos celulares refere-se ao comportamento limite, isto e, ás características da dinâmica global, ao considerar-se o limite de uma evolucão temporal infinita. Trabalhos anteriores mostraram que para evoluções temporais nitas de autômatos celulares unidimensionais, suas dinâmicas podem ser sempre descritas por linguagens regulares e, portanto, por autômatos finitos. Além disso, esses estudos indicaram a existência de padrões para a evolução desses autômatos finitos para algumas regras; entretanto tais resultados foram obtidos manualmente através da inspeção direta das estruturas que neles surgem ao longo do tempo. Neste trabalho apresenta-se a formalização de um método automático para o cálculo de tais estruturas. Com base nisso, as regras do espaço de autômatos celulares elementares são classificadas de acordo com a existência de um padrão de crescimento de seus autômatos finitos. Além disso, este trabalho apresenta novos métodos para a inferência do grafo-limite de alguns autômatos celulares elementares, por meio da análise das expressões regulares que descrevem seus comportamentos em tempo finito e do estudo da evolução dos atratores de cada regra, bem como uma aplicação desses grafos-limite para o cálculo de espectros de Fourier das regras.

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) é um dos patógenos mais importantes do trato respiratório. Analisamos as interações das proteínas virais nucleoproteína (N), fosfoproteína (P) e matriz (M) em células HEK-293T. N interage com as proteínas celulares Hsp70, PRMT5 e WDR77; P com Hsp70 e Tropomiosina; e M com Nucleofosmina e Tropomiosina. Cada gene celular foi co-expresso em bactérias com um gene viral possibilitando a co-precipitação das proteínas. Analisamos a interação entre Hsp70 e N ou P, confirmando sua ocorrência em bactérias. Com um conjunto de proteínas mutantes, definimos que as interações são através dos amino terminais de N e P, ou do carboxi terminal de P, e do domínio amino terminal de Hsp70. Superexpressão de Hsp70 por transfecção provocou efeito de estímulo sobre a replicação de HRSV. Imunizações em camundongos com vacinas de DNA para N e P mostraram a indução de resposta celular e humoral. Ensaios de desafio resultaram em redução da carga viral após imunização com N, indicando potencial para sua aplicação em formulação vacinal. / Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important pathogens of the respiratory tract. We analyzed the interactions of viral nucleoprotein (N), phosphoprotein (P) and matrix (M) in HEK-293T. N interacts with the cellular proteins Hsp70, PRMT5 and WDR77; P interacts with Hsp70 and Tropomyosin; and M with Nucleophosmin and Tropomyosin. Each cellular gene was co-expressed with a viral gene in bacteria allowing co-precipitation of proteins. Hsp70 co-expression with N or P proteins confirmed that these interactions also occur in bacteria. Using a set of mutants we found that the N and P amino terminus, P carboxy terminus, and Hsp70 amino terminal domain participate in the interactions. The overexpression of Hsp70 by transfection resulted in stimulation of HRSV replication. Mice immunization with N and P showed that DNA vaccines were capable of inducing humoral and cellular response. In challenge assays it was possible to detect significant virus titer reduction in animals immunized with N, indicating its potential for a vaccine formulation.

INTRODUÇÃO: A urticária crônica é caracterizada pelo aparecimento de placas eritêmato-edematosas, pruriginosas que perduram por mais de seis semanas. A investigação da imunidade inata é de grande importância para a compreensão da imunopatologia de doenças dermatológicas crônicas como a Urticária Crônica Idiopática (UCI). Entre os componentes da resposta inata, a avaliação das células dendríticas plasmocitóides (pDCs) e sua capacidade de ativação por agonistas de Toll Like receptor 9 (TLR9) pode contribuir para avaliar o desequilíbrio imunológico encontrado na UCI. OBJETIVOS: Investigar a imunidade inata em pacientes com UCI e os mecanismos envolvidos na modulação da produção de IFN- por pDCs induzida pela ativação do TLR9. MÉTODOS: A secreção de IFN- e IL-10 por leucócitos de pacientes UCI (n=26) e indivíduos normais (Co, n=50) induzida pelo agonista de TLR9, CpGA (1.0 e 2.0M), ou IL12p40 induzida pelo ODN inibitório (ODN S) foi realizado por ensaio imunoenzimático. Quantificação de pDCs em sangue periférico, expressão de moléculas coestimulatórias, expressão intracelular de IFN- por pDCs e fosforilação de STAT (1 e 4) foram analisados por citometria de fluxo. Expressão do mRNA de TLR9 e fator regulador de interferon-7 foi realizado por real time PCR. A presença da pDC (CD123+) em lesões de pele de pacientes UCI foi avaliada por imunoistoquímica. RESULTADOS: Os resultados mostraram uma diminuição na produção de IFN- e IL-10 por leucócitos de pacientes UCI após estímulo com CpGA. O estímulo com ODN S induziu a produção de IL12p40 e suprimiu ainda mais a produção de IL-10 e IFN- induzida pelo CpGA, até 98% de inibição. O número de pDCs no sangue periférico e a capacidade de ativação da pDC nos pacientes, avaliada pela expressão de moléculas co-estimuladoras foi semelhante aos indivíduos normais. Além disto, foram detectadas raras pDCs nas lesões de pele dos pacientes. Um aumento constitutivo da fosforilação de STAT1 foi detectado em linfócitos não estimulados de pacientes UCI associado a uma diminuição da expressão de mRNA de TLR9 após estímulo com CpGA e alterada expressão de mRNA de IRF-7, que podem contribuir para a baixa produção de IFN-. CONCLUSÃO: Os achados mostram uma inibição na produção de IFN- via TLR9, tendo como alvo a pDC e sua participação na resposta inata na Urticária Crônica / INTRODUCTION: Chronic urticaria is a skin disorder characterized by recurrent and transitory itchy weals occurring regularly more than 6 weeks. The investigation of the innate immunity is an important parameter to understand the immunopathology of chronic dermatological diseases, such as Chronic Idiopathic Urticaria (CIU). Among the innate immune components, such as plasmacytoid dendritic cells (pDC) and their functional study activation thorough TLR-9 ligand could contribute to evaluate the immunologic disequilibrium founded in the CIU. OBJECTIVES: We decided to investigate innate immunity in CIU and the mechanisms implicated in the modulation of IFN- production by pDCs upon TLR9 activation. METHODS: The secretion of IFN- and IL-10 secretion by leucocytes of patients with CIU (n=26) and healthy control (HC, n=50) induced by TLR9 ligand, CpG type A (1.0 and 2.0M), or IL12p40 secretion induced by inhibitory ODN (ODN S) was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay. Enumeration of pDC, coestimulatory molecules expression, intracellular IFN- expression, and STAT (1 and 4) phosphorylation were assessed by flow cytometry. TLR9 and interferon regulatory factor-7 mRNA transcripts were evaluated by real-time PCR. The presence of pDCs (CD123+) in the skin lesion of patients with CIU were assessed by means of immunohistochemistry staining. RESULTS: The findings showed a decreased IFN- and IL-10 secretion by leucocytes of CIU patients induced by CpGA. Inhibitory ODN was able to induce IL12p40 and further inhibited the IFN- secretion in both HC and patients achieving up 98% inhibition. A normal pDC percentage and degree of activation by costimulatory molecules expression was observed in CIU in patients was similar to control group. Moreover, rare presence of pDCs was detected in the skin lesion of patients. An increased constitutive STAT1 phosphorylation on non-stimulated lymphocytes and CpGA activation induced a down-regulation of TLR9 mRNA transcripts associated with altered IRF-7 along the time of CpG activation which may contribute to the decreased IFN- secretion. CONCLUSIONS: Altogether, the findings showed an impaired IFN- secretion via TLR-9, implicating innate immunity through pDCs as target in Chronic Urticaria

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-10T11:22:40Z No. of bitstreams: 1 cintiadeoliveirarezende.pdf: 819221 bytes, checksum: 339dce17ba20eb705cadcbe3177dd19d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-10T14:33:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cintiadeoliveirarezende.pdf: 819221 bytes, checksum: 339dce17ba20eb705cadcbe3177dd19d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-10T14:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cintiadeoliveirarezende.pdf: 819221 bytes, checksum: 339dce17ba20eb705cadcbe3177dd19d (MD5) Previous issue date: 2016-12-19 / O uso de telefones móveis tem aumentado e junto a isso a preocupação dos seus possíveis efeitos à saúde tem aumentado também. Nosso laboratório tem desenvolvido estudos mostrando que a radiação emitida por aparelhos celulares pode afetar parâmetros reprodutivos e apresenta efeito programador na prole alterando o conteúdo de catecolaminas adrenal e glicose sérica, o que poderia influenciar no metabolismo energético desses animais. Pouco se sabe ainda sobre o efeito programador desse tipo de radiação no metabolismo energético. Mas tem sido mostrado que a radiação é capaz de afetar as células da tireoide aumentado a apoptose e levando ao hipotiroidismo, o que de certa forma também poderia influenciar no metabolismo. Sendo assim, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de ondas eletromagnéticas irradiadas por aparelhos celulares sobre o metabolismo da prole adulta submetida durante o período intra-uterino. Para isso ratas prenhes foram expostas à radiofrequência emitida por telefones celulares (1,8 GHz) durante o período gestacional. Ao atingir a idade adulta a prole foi analisada para os possíveis efeitos programadores no metabolismo energético desses animais através da dosagem de hormônios tireoidianos: Hormônio Estimulante da Tireóide (TSH), Triiodotironina (T3) e Tetraiodotironina (T4) e hormônios relacionados ao metabolismo como: insulina, adiponectina e leptina. Não foram encontradas diferenças significativas nos hormônios analisados nem na prole adulta de fêmeas e nem de machos. Sugerindo assim que no modelo estudado a radiação não altera os hormônios analisados relacionados ao metabolismo energético. / The use of mobile phones has increased and along with it the concern of the possible health effects has increased as well. Our laboratory has developed studies showing that radiation from mobile phones can affect reproductive parameters and features programmer effect on offspring by changing the adrenal catecholamine content and serum glucose, which could influence the energy metabolism of these animals. Little is yet known about the programmer effect of this radiation in energy metabolism. But it has been shown that radiation can affect the thyroid cells increased apoptosis and leading to hypothyroidism, which in a way could also influence the metabolism. Thus, this study aimed to evaluate the effect of electromagnetic waves radiated by cell phones on the metabolism of the adult offspring submitted during the intrauterine period. For that pregnant rats were exposed to radio frequency emitted by mobile phones (1.8 GHz) during pregnancy. Upon reaching adulthood offspring was analyzed for potential programmers effects on energy metabolism of these animals by the dosage of thyroid hormones: Hormone Stimulant Thyroid (TSH), triiodothyronine (T3) and Tetraiodothyronine (T4) and hormones related to metabolism as: insulin, adiponectin and leptin. No significatives differences were observed on hormones evaluated either on male and female offspring. Suggesting that the model studied the radiation does not alter the hormones analyzed related to energy metabolism.

[pt] Neste trabalho, foi desenvolvido um algoritmo para a solução de uma equação integral que possa ser aplicado de forma eficiente na previsão da cobertura de sistemas celulares. Este algoritmo compara-se com o algoritmo proposto originalmente e com a mesma aplicação baseada na técnica de traçado de raios. A técnica de traçado de raios utiliza o método das imagens no traçado dos raios pertencentes a trinta diferentes classes, caracterizadas pela multiplicidade e pelos tipos e ordens das interações com o terreno. Os coeficientes de reflexão e de difração são calculados pelas equações clássicas de Fresnel e pelas equações da Teoria Uniforme da Difração, respectivamente, modificadas para considerar a rugosidade do terreno. Ambos os algoritmos foram aplicados para calcular a intensidade de campo ao longo de um perfil de terreno e em uma região montanhosa do sul do Estado de Minas Gerais. Os resultados são comparados entre si e com os resultados de medidas, quando disponíveis. Esta comparação considera tanto os resultados obtidos quanto os tempos de processamento necessários em ambos os casos. / [en] In this work an algorithm for the solution of an integral equation, which can efficiently be applied to estimate the coverage areaof a cellular system, has been developed. This algorithm is compared with the original proposed algorithm and also woth Ray tracing Techiniques for the same applications. The Ray Tracing Tecniques uses the image Tecnique to trace thirty different classes of rays, which are characterised by multiplicity of the paths and also the nature of graund. The coefficients of reflection and diffraction have been calculeted by using the classical Fresnel and the Uniform Theory of Diffraction equations respectively, and have been modified to include the roufhness of the ground. Both algorithms have been used to calculate the fiels intensity along a land profile and also a mountainous region South comparison takes into consideration the quality of the results as well as the processing time of both algorithms.