Orientador: Claudia Bincoletto Trindade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CarlosRocha_M.pdf: 5526224 bytes, checksum: 3c3784c9d8e9f3433a2a1753622ea8dd (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Neste trabalho avaliamos o potencial farmacológico e toxicológico de um novo composto organometálico contendo paládio como metal de transição e estabilizado com ligantes bifosfínico e aminoácido, denominado neste estudo Paladaciclo ferroceno 1 :2. Portanto, para avaliar o potencial antitumoral in vivo, analisamos o crescimento e diferenciação de células precursoras hematopoiéticas para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) num modelo experimental de implantação tumoral, com células do tumor ascítico de Erhlich. Nesta análise, verificamos que o Paladaciclo ferroceno 1:2 não foi capaz de reverter a mielossupressoão induzi da pelo T AE e também não preveniu a hematopoiése extramedular (esplênica), que é uma característica marcante do desenvolvimento tumoral. A hematopoiése esplênica não foi observada nos animais que receberam apenas o Paladaciclo ferroceno 1:2, sugerindo. uma baixa toxicidade sistêmica para este composto. Os estudos in vitro, utilizando a técnica de cultura clonal de precursores hematopoiéticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM), demonstraram .uma mielotoxicidade dose-dependente, sendo que a menor concentração testada nesta metodologia (1,18 flM) não alterou o número de CFU-GM em relação ao controle. Essa mesma concentração (1,18 flM), quando adicionada ao meio de cultura líquida de longa duração, para avaliar os efeitos do composto em estudo 1: sobre o estroma medular, demonstrou um efeito hematoprotetor do Paladaciclo ferroceno 1:2 sobre a medula óssea. Nesta cultura observamos um aumento significativo no número de células aderentes do estroma medular quando as células foram incubadas com o Paladaciclo ferroceno 1:2 em relação ao controle sem tratamento. Este aumento no número de células aderentes nas culturas tratadas com o composto foi acompanhado por um maior número de áreas denominadas cobblestone, locais de alojamento de células jovens em culturas de longa duração. A avaliação da citotoxicidade deste composto pelos testes de exclusão do Azul de Trypan e redução do MTT demonstraram um IC de 2,5 flM e 5,3 !-1M, respectivamente. A diferença obtida nas concentrações inibitórias descritas acima poderia ser explicada, pelo menos em parte, através dos diferentes princípios dos métodos, pois o teste de redução do MTT avalia a capacidade da enzima succinato desidrogenase mitocondrial de reduzir o MTT a cristais de formazan enquanto que o teste de exclusão do azul de Trypan avalia a integridade da membrana plasmática pela sua capacidade da excretar o corante tóxico para a célula. Ao avaliarmos a expressão da proteína Bc1-2, que está intimamente ligada ao controle da morte celular programada e/ou à resistência das células malignas aos quimioterápicos, verificamos que a expressão desta proteína não se alterou na presença de diferentes concentrações do Paladacic10 Ferroceno 1:2. Esta ausência de efeitos sobre a expressão deste gene foi" verificada pela metodologia de imunocitoquímica, (método de fosfatase alcalina, anti-fosfatase alcalina- AP AAP) e pela técnica de R T-PC R, sugerindo que o processo apoptótico em células HL60 tratadas com o composto em questão envolve outras vias de indução da apoptose celular. Levando todos os nossos dados em consideração, podemos sugerir que este composto, em baixas concentrações, possui um potencial modulador da resposta hematopoiética e também apresenta uma maior citotoxicidade as células leucêmicas HL60 (células de leucemia mielóide aguda). Estudos in vivo estão em andamento para melhor caracterizarmos o mecanismo de ação desta droga sobre a resposta hematopoiética / Abstract: In this work we have investigated the pharmacological and toxicological potential of a new organometallic compound containing palladium as transition metal, wich was called in this study by Palladacycle ferrocene 1:2. Thus, to evaluate the antitumoral activity in vivo, we have analysed the growth and differentiation of granulocyte-macrophage progenitor cells (GM-CFU) in the well established Ehrlich ascites tumor (EAT) experimental model. Our results have demonstrated that the Palladacycle ferrocene 1:2, administered for four consecutive days at a dose of 1 mgkg (se), was not able to revert the myelosuppression induced by the EA T development. Similar results were obtained when we studied the splenic hematopoiesis, since this pathological condition that is induced by the tumor, was not inhibited by the administration of Palladacycle ferrocene 1:2. This .characteristic was not observed in normal mice that received the same treatment schedule suggesting a low sistemic toxicity for this drug. The in vitro studies, using the c10nal culture technique, have demonstrated a dose-dependent reduction in the number of granulocyte-macrophage progenitor cells (GM-CFU) of cultures treated with Palladacycle ferrocene 1:2. However, the smallest concentration (1,18J,tM) analyzed in this assay, showed no toxicity to the bone marrow progenitor cells. This same concentration (1,18 J,tM), when added to the long-term bone marrow culture, significant1y increased the number of adherent stromal cells in relation to the control non-treated cultures. This effect was accompanied by a larger number of cobblestone areas, site of lodging of the young cells in the long-term cultures, in these cultures. The citotoxicity of this compound, analyzed by the Trypan Blue exclusion test and the MTT colorimetric assay, showed an IC of 2,5 J,tM and 5,3 J,tM, respectively. The difference obtained for the ihibitory concentrations described above could be explained, at least in part, by the different methods used. The MTT test evaluates the capacity of the mitochondrial enzyme succinato desidrogenase to reduce the MTT to formazan crystals and the Trypan Blue exclusion test evaluates the cell integrity of the membrane. The Bcl-2 expression, which controls the programmed cell death and/or the resistance of the malignant cells to chemotherapeutic agents, was unaltered in the presence of different Palladacycle ferrocene 1:2 concentrations. This absence of effects on the expression of this gene was verifyied by immunocytochemistry (method of alkaline phosphatase, anti-alkaline phosphatase-AP AAP) and by R T -PCR techniques. These results suggest that other mechanisms are involved in the induction of apoptosis by this compound (which was verified in studies that are in progress in our laboratory using Feulgen reaction). Finally, we suggest that this compound, in low concentrations, modulates the hematopoietic response and it also presents citotoxicity in HL60 cell line. Studies in vivo are in progress in our laboratory to characterize the molecular events involved in the hematopoietic response to this drug / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Claudia Brincoletto Trindade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:34:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dieamant_GustavodeCampos_M.pdf: 13079941 bytes, checksum: 707f968d3cec2bc7423a09f1d5259293 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Avaliamos, neste trabalho, os efeitos da Geléia Real (GR) sobre o crescimento e diferenciação dos precursores hematopoiéticos da medula óssea e baço em animais infectados com Listeria monocytogenes. Além disso, a atividade estimuladora de colônias do soro, as alterações no peso do baço e a resistência dos animais frente a infecção também foram avaliados. Para tanto, camundongos BALB/c foram tratados profilaticamente, por um período de 7 dias consecutivos, com GR nas doses de 12S, 2S0, SOOe 7SO mg/Kg, por gavagem. Posteriormente, os animais foram infectados intraperitonealmente com uma dose subletal (1,Sx103 bactérias/animal) de Listeria monocytogenes. Para avaliarmos a resistência dos animais frente à infecção, realizamos uma curva de sobrevida utilizando uma dose letal desta bactéria (1,Sx105 bactérias/animal). Nossos resultados demonstraram um decréscimo significativo no número de precursores hematopoiéticos da medula óssea nos animais infectados com Listeria monocytogenes, além de uma significativa hematopoiése extramedular. No entanto, quando os animais foram tratados profilaticamente com GR, independentemente da dose administrada, houve uma reversão da mielossupressão induzida pela infecção, resultando em níveis normais de CFUGM. Outro aspecto importante é com relação à produção de fatores estimuladores de colônias de células hematopoiéticas. Neste sentido, observamos que os animais infectados apresentaram uma maior atividade estimuladora de colônias no soro. A administração prévia de GR, nas quatro doses avaliadas, nos animais infectados, aumentou significativamente a atividade estimuladora do soro, resultando em um aumento no número de CFU-GM em relação aos grupos apenas infectados. Além disso, observamos também, um aumento do peso do baço dos animais infectados, enquanto que valores normais foram obtidos quando os animais receberam GR antes da infecção, em todas as doses administradas. o tratamento com GR aumentou a resistência dos animais frente à listeriose, sendo que a probabilidade de sobrevida para as doses de 125, 250, 500 e 750 mg/Kg foi de 37,5, 37,5, 25 e 12,5%, respectivamente, não havendo diferenças estatisticamente significativas entre si. Nossos resultados sugerem que a GR possui uma potente atividade imunomoduladora, corroborando com resultados existentes na literatura e anteriormente obtidos em nosso laboratório. A ampla faixa terapêutica do composto frente à listeriose foi comprovada, visto que não houve uma alteração significativa entre as respostas imuno-hematopoiéticas nas doses avaliadas, sugerindo que mesmo em baixas concentrações, a GR é capaz de restaurar o sistema imunológico frente à infecção / Abstract: We evaluated in this work the effects of Royal Jelly (RJ) on growth and differentiation of bone marrow and spleen hematopoietics progenitors in Listeria monocytogenes (LM) infected mice. We also evaluated serum colonystimulating activity, alterations in spleen weight and animal resistance front to the infection. In such way, BALB/c mice were profilacticly treated with RJ by gavage for 7 consecutive days with doses at 125, 250, 500 and 750 mg/Kg. Three hours after the last treating day the animais were infected intraperitoneally with a sublethal dose of the bacteria (1x103 LM/animal). To evaluate animal resistance front to the infection we carried out a survival analysis with a lethal dose of the bacteria (1x105 LM/animal). Our results demonstrated significant decrease on the hematopoietic progenitor numbers in LM bearing mice and significant extramedullar hematopoiesis as consequence. In the other hand, myelossupression induced by listeriosis was reverted when bearing mice were treated profilacticly with ali doses of RJ, resulting in normal levels of CFU-GM. Another important aspect regards colony-stimulating factor production by hematopoietic cells. In this direction, we observed that the infected animais presented higher serum colony-stimulating activity. Previous administration of RJ at ali doses in infected mice significantly increased serum stimulatory activity as well as CFU-GM number when compared to non-treated bearing groups. We also observed spleen weight increase in the non-treated infected group at ali doses, which contrasted with normal values obtained in previously treated bearing mice. In addition, the administration of RJ at 125, 250, 500 and 750 mg/Kg increased animal resistance front to listeriosis to 37,5%, 37,5%, 25% and 12,5%, respectively. Our results have demonstrated that RJ has a stimulating effect on the modulation of the immuno-hematopoietic response in mice infected with LM. Moreover, the treatment with RJ increased survival rate in infected mice with lethal dose of the bacteria. We demonstrated that RJ presents extensive therapeutic dose range since the adminisitration of ali evaluated doses (125, 250, 500 and 750 mg/Kg) presented similar results / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Mary L. S. Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:31:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miglinski_Debora_M.pdf: 5300105 bytes, checksum: 1b7205ddbf0c8568448b9cbfb1cce059 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Neste trabalho avaliamos o efeito imunomoduIador do extrato seco do Agaricus blazei Murill (ABM) sobre o crescimento e diferenciação dos precursores hematopoéticos de granulócrtos-macrófagos (CFU-GM) na medula óssea e no baço de camundongos BALB/c infectados com Listeria monocytogenes. Além disso a atividade estimuladora de colônias do soro, as alterações no peso do baço e a resistência dos animais frente à infecção também foram avaliados. Para a realização deste estudo, camundongos BALB/c foram tratados previamente à infecção com três diferentes doses de ABM nas concentrações de 500, 1000 e 1500mg/Kg, administradas por gavagem, por sete dias consecutivos. Posteriormente, os animais foram infectados intraperitoneaImente com uma dose subletal (1x 10 3 bactérias/animal) de Listeria monocytogenes para avaliação dos parâmetros hematopoéticos e com uma dose letal (6x 10 4 bactérias/animal) para avaliação da resistência dos animais frente à infecção, através da realização de uma curva de sobrevida. Nossos resultados demonstraram um decréscimo significativo no número de precursores hematopoéticos da medula óssea um aumento significativo na hematopoese extramedular e conseqüente esplenomegalia e um aumento na produção de fatores estimuIadores de colônias, em animais apenas infectados com Listeria monocytogenes. No entanto, quando os animais foram tratados profilaticamente com o ABM, nas doses de 1000 e 1500mg/kg, observamos uma reversão significativa da mielossupressão induzida pela infecção, resultando em níveis normais de CFU-GM. A inibição do desenvolvimento da esplenomegalia e da hematopoese extramedular, nos grupos de animais infectados e pré-tratados nas três doses estudadas também foram observados. Além disso, um aumento significativo na atividade estimuladora do soro, nos animais infectados e prétratados nas três doses estudadas, foram demonstrados em nossos experimentos, sendo que, com as doses de 1000 e 1500mg/K. um aumento adicional no período de 48h após a infecção foi observado. O tratamento com ABM aumentou a resistência dos animais frente à listeriose, sendo que, a probabilidade de sobrevida para as doses de 1000 e 1500mg/Kg foram de 50% e 80%, respectivamente. Nossos resultados sugerem que o ABM possui uma potente atividade imunomoduladora, capaz de aumentar a sobrevida dos animais infectados com uma dose letal de Lisleria monocylogenes, possivelmente devida a capacidade desse extrato de restabelecer a hematopoese medular e esplênica / Abstract: This work anaIyzed tbe immunomodulating effect of Agaricus blazei Murrill (ABM) dried extract on growth and differentiation of hematopoietic precursors of granulocyte-macrophage (CFU-GM) in the bone marrow and spIeen of BALB/c mice infected witb Lisleria monocylogenes. We aIso evaluated the colony stimulating activity of the serum, changes in spleen weigh, and the animals resistance to infection. To conduct the research, BALB/c mice were treated prior to the infection with three difeerent doses of ABM (500, 1000 and 1500mg/Kg), via gavage during seven consecutive days. After that the animals were infected intraperitoneally with a subletha1 dose (1x10 3 bacterial animaI) of Listeria monocytogenes to evaIuate tbe hematopoietic parameters. The animaIs were likely infected with a lethal dose (6x ] 04bacteria/animaI) 10 evaIuate their resistance 10 infection in a survivaI curve. The results showed a significant decrease in the hematopoietc precursors of the bone marrow, a significant increase in extramedular hematopoiesis and consequent spleenmegaly, and an increase in the production of colony stimulating factors in the non-treates infected animaIs. When the animaIs were previously treated with 1000 and 1500mg1Kg of ABM we observed a significant reversion of infection-induced mielosupression, to normal levels, spleenmegaly inhibition and extramedular hematopoiesis in the infected and pretreated groups with all the doses. A significant increase in the serum stimulating activity was also observed in the pretreated infected animais with na adicional increase in a period of 48hs after the infection with 1000 and 1500mg/Kg of the extract. The treatment with ABM increased animal resistance to listeriosis, and the probability of survival for the 1000 and 1500mg/Kg doses was 50% and 80% respectively. These results suggested that ABM is a powerful immunomodulator capable of increasing the survival of animals mfected with a lethal dose of Listeria monocytogenes, possibly due to this extract capacity of restoring marrow and splenic hematopoesis / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Nilce Correa Meirelles / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_MarizaBoscacci_D.pdf: 4746403 bytes, checksum: 6507f9398ad607826d307e4a388b7746 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Enzimas presentes em retículo endoplasmático de hepatócitos são responsáveis pela biotransformação da maioria dos compostos exógenos, podendo gerar metabólitos mais ou menos tóxicos que a droga mãe. O complexo enzimático citocromo P 450 desempenha papel relevante esta função, ao possuir inúmeros substratos, dentre os quais vários atuam como indutores de isoformas específicas, caracterizando um potente mecanismo fisiológico de defesa e importante ferramenta para o estudo das adaptações celulares à exposição a agentes químicos. O processo de biotransformação catalisado pelo complexo P 450 é uma das fontes endógenas de espécies reativas de oxigênio, envolvidas em mecanismos destrutivos de lipoperoxidação de membranas biológicas. Dipiridamol (DIP) é um vasodilatador de uso clássico que potencializa efeitos de algumas drogas terapêuticas com atividade anti-trombótica, citotóxica, radioprotetora, entre outras, além de apresentar importante ação antioxidante, cujo mecanismo de ação ainda não foi devidamente esclarecido. Este estudo demonstrou que suspensões microssomais hepáticas são parcialmente responsáveis pela biotransformação de DIP. Em condições metabólicas in vitro, resultados espectrofotométricos demonstraram oxidação completa de NADPH com posterior oxidação de citocromo B5, confirmando que NADPH fornece o primeiro elétron enquanto citocromo b5 pode ceder o segundo elétron ao conjunto de reações catalisadas pelo citocromo P 450.Microssomas obtidos de animais tratados com fenobarbital e 3-metilcolantreno, indutores de citocromo P450, consumiram mais rapidamente NADPH e cito cromo b5, sugerindo que alguma dasisoformas induzi das apresenta maior especificidade por DIP. Na presença de CO foi verificada uma inibição parcial da metabolização de DIP. Estes resultados foram confirmados pelo decaimento da emissão de fluorescência de DIP quando em condições ideais à biotransformação, mecanismo que também sofreu relativa inibição por CO. DIP nas condições descritas mantém certa atividade antioxidante, prevenindo a membrana microssomal da lipoperoxidação induzida por NADPH e Fe-ADP endógenos / Abstract / Abstract / Abstract: Enzimas presentes em retículo endoplasmático de hepatócitos são responsáveis pela biotransformação da maioria dos compostos exógenos, podendo gerar metabólitos mais ou menos tóxicos que a droga mãe. O complexo enzimático citocromo P 450 desempenha papel relevante esta função, ao possuir inúmeros substratos, dentre os quais vários atuam como indutores de isoformas específicas, caracterizando um potente mecanismo fisiológico de defesa e importante ferramenta para o estudo das adaptações celulares à exposição a agentes químicos. O processo de biotransformação catalisado pelo complexo P 450 é uma das fontes endógenas de espécies reativas de oxigênio, envolvidas em mecanismos destrutivos de lipoperoxidação de membranas biológicas. Dipiridamol (DIP) é um vasodilatador de uso clássico que potencializa efeitos de algumas drogas terapêuticas com atividade anti-trombótica, citotóxica, radioprotetora, entre outras, além de apresentar importante ação antioxidante, cujo mecanismo de ação ainda não foi devidamente esclarecido. Este estudo demonstrou que suspensões microssomais hepáticas são parcialmente responsáveis pela biotransformação de DIP. Em condições metabólicas in vitro, resultados espectrofotométricos demonstraram oxidação completa de NADPH com posterior oxidação de citocromo B5, confirmando que NADPH fornece o primeiro elétron enquanto citocromo b5 pode ceder o segundo elétron ao conjunto de reações catalisadas pelo citocromo P 450.Microssomas obtidos de animais tratados com fenobarbital e 3-metilcolantreno, indutores de citocromo P450, consumiram mais rapidamente NADPH e cito cromo b5, sugerindo que alguma dasisoformas induzi das apresenta maior especificidade por DIP. Na presença de CO foi verificada uma inibição parcial da metabolização de DIP. Estes resultados foram confirmados pelo decaimento da emissão de fluorescência de DIP quando em condições ideais à biotransformação, mecanismo que também sofreu relativa inibição por CO. DIP nas condições descritas mantém certa atividade antioxidante, prevenindo a membrana microssomal da lipoperoxidação induzida por NADPH e Fe-ADP endógenos / Abstract: Enzymes present in hepatocytes endoplasmatic reticulum are responsible for the xenobiotics biotransformation and can generate metabolites more toxic than the drug. The enzymatic complex cytochrome P 450 plays an important role on this function, since it has many substrates that can act as inductors of specific isoforms, characterizing a potent physiologic mechanism of defence and important tool for the study of cellular adaptations to exogenous agents exposure. The biotransformation cytochrome P 450-dependent is one of the endogenous sources of oxygen reactive species, involved in lipoperoxidation mechanisms that destroy biological membranes. Dipiridamol (DIP) is a vasodilator that amplifies some effects of therapeutic drugs such as ntithrombotic, citotoxic or radioprotector activities, among others, besides presenting important antioxidant action, although the mechanism has not been properly understood yet. This study demonstrated that microsomal suspensions liverworts are active in the DIP biotransformation, as demonstrated by the decrease of the characteristic absorbance at 340 nm (the peak of the reduced form of NADPH) and confirmed by the kinetic decrease of the drug fluorescence emission in 496 nm. The P450 enzymatic system involvement was verified by the metabolic process inhibition in the presence of CO. DIP even in biotransformation continues exercising its inibitory action on the NADPH-dependent microssomal membrane lipoperoxidation / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_RaimundoNonatoPereirada_M.pdf: 3164333 bytes, checksum: 78a508da9ba2db4ac569d31a75b1ec47 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Anemia falciforme (AF) é uma doença monogênica, mas com uma apresentação clínica variável, devido a possível associação com outros genes. Especula-se que nesta doença genes envolvidos com a resposta inflamatória tenham efeito epistático. A mieloperoxidase (MPO) é uma enzima com atividade antimicrobicida, sendo encontrada nos grânulos azurofilicos dos neutrófilos. O polimorfismo A-463MPO diminui a expressão desta enzima, podendo este alelo ser possível marcador para eventos infecciosos em pacientes com defesa imune já comprometida. Neste estudo 97 pacientes com AF acompanhado pelo ambulatório de hematologia-Unicamp foram inicialmente divididos em dois grupos, conforme o número de internamentos hospitalares para antibioticoterapia: pacientes que não apresentaram infecção com necessidade de intemação (64 pacientes) e um segundo grupo onde ocorreu pelo menos 1 episódio de hospitalização devido a infecção (33 pacientes). O grupo controle foi composto por 48 indivíduos sadios negros da Babia-BrasiL Pacientes e controles foram genotipados para o polimorfismo G/A-463MPO, através da técnica de "Conformation Sensitive Gel Eletrophoresis" (CSGE) e sequenciamento automatizado. Observou-se que a presença do genótipo AA ou AG está associado a maior número de eventos infecciosos (P=O.005 OR=3.8). Esta correlação também foi observada na análise quanto à presença do alelo A-463MPO (P=0.004 OR=2.7). Este achado sugere que deficiência de MPO em pacientes com AF provavelmente favorece a ocorrência de eventos infecciosos. Vaso oclusão é o principal evento nas crises dolorosas dos pacientes com anemia falciforme (AF) e marcadores genéticos de risco para eventos vaso oclusivos ainda são desconhecidos. Polimorfismos em genes envolvidos na adesão celular PSGL-l (VNTR no exon 2), ICAM-1 G241R e K461E) e CD18 (V441V) foram genotipados em 103 pacientes com AF. Os pacientes foram inicialmente divididos em dois grupos: pacientes em que ocorre acidente vascular cerebral (AF+A VC,16 pacientes) e pacientes sem ocorrência de A VC (AF-A VC, 87 pacientes). Posteriormente, os pacientes foram divididos em outros dois grupos: pacientes em que foi detectado um dos seguintes eventos: A VC, síndrome torácica aguda (STA), necrose asséptica de cólo de fêmur (NACF) e priapismo (AF+FVO, 35 pacientes) e pacientes em que não ocorrem essas complicações (AF-FVO, 70 pacientes). PSGL-l é um receptor nas células mielóides e linfócitos T estimulados de alta afinidade para P-selectinas, tendo fundamental papel na adesão dos leucócitos às plaquetas e ao endotélio. O gene contém 3 variantes alélicas (A, B, C) de um número variável de repetição "in tandem" (VNTR). A análise das freqüências dos genótipos e alelos revelou associação da variante B com o grupo AF+FVO [p=O.04, IC 95% OR=2 (1-4)] e quase significante com os casos de A VC [p=0.09, IC 95% OR=2 (0.8-4.9)], enquanto que o alelo A revelou nível significativo de associação com o grupo AF+FVO [p=O.Ol IC 95% OR=O.5 (0.2 0.9)]. O gene da molécula de adesão leucócitário CD-I8 é a beta-2 subunidade das integrinas a_heterodímeros. O polimorfismo C1323T foi recentemente implicado como fator de risco para fenômenos vaso oc1usivos. O estudo deste polimorfismo em pacientes portadores de anemia falciforme não revelou associação significativa com FVO ou A VC. ICAM-l é uma molécula da superfamília das imunoglobulinas com importante papel na adesão das células endotelial-leucócitos durante a resposta inflamatória. No mínimo dois sítios polimórficos são conhecidos R241E e K469E. Ambos sítios estão envolvidos na ligação aos contrareceptores Mac-I e LF A-I. A análise destes polimorfismos através da técnica de CSGE e seqüenciamento, revelou uma associação significativa do heterozigoto K469E para risco a A VC [P=0.02 IC 95% OR=3.6 (1.1-12.3)]. No entanto, o estudo falhou em demonstrar associação alélica com os casos de A VC ou FVO. Como não se conhece bem a relação funcional deste polimorfismo, maiores estudos são necessários incluindo análise funcional, para se esclarecer o real papel deste polimorfismo ao risco a AVC / Abstract: Not informed / Mestrado / Genetica Medica / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Gilson Hélio Toniollo / Coorientador: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Fabricio Singaretti de Oliveira / Banca: Erika da Silva Carvalho Morani / Banca: Geórgia Modé Magalhães / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: Esta pesquisa teve por justificativa ampliar os estudos acerca da criopreservação de tecido gonadal e células espermáticas de gatos domésticos, podendo servir de modelo experimental para felinos selvagens. Objetivou-se comparar os efeitos da criopreservação sobre diferentes tamanhos de fragmentos testiculares, empregando dois crioprotetores. Utilizaram-se os testículos de 31 gatos domésticos, submetidos à orquiectomia eletiva. Os testículos foram pesados e apenas os que apresentarem pesos entre 1 e 2 g foram empregados. O tecido testicular foi dissecado e cortado em fragmentos de tamanhos pré-determinados (0,3cm3 e 0,5cm3). Uma amostra foi direcionada para as avaliações a fresco: integridade de membrana e do DNA; histopatologia; incidência de apoptoses por imuno-histoquímica; e índice de peroxidação lipídica - TBARS. A criopreservação foi feita em meio Tris-gema Equex STM suplementado com 3% de crioprotetores (glicerol e propanediol) através da técnica congelação rápida. Após a descongelação, foram realizados os mesmos testes iniciais. Os primeiros resultados obtidos com os 12 gatos iniciais apontaram na avaliação histomorfológica e pelo teste de lipoperoxidação lipídica que o glicerol foi mais eficiente que o propanediol na criopreservação de fragmentos testiculares de gatos domésticos de 0,5cm3 (Capítulo 2). No experimento seguinte, avaliaram-se os fragmentos testiculares de outros 31 gatos domésticos, seccionados nos mesmos tamanhos e criopreservados nas mesmas condições d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This research had the justification to broaden the studies about the cryopreservation of gonadal tissue and sperm cells of domestic cats, and could serve as an experimental model for wild cats. The objective of this study was to compare the effects of cryopreservation on different sizes of testicular fragments using two cryoprotectants. The testicles of 31 domestic cats submitted to elective orchiectomy were used. The testes were weighed and only those weighing between 1 and 2 g were used. The testicular tissue was dissected and cut into fragments of predetermined sizes (0.3cm3 and 0.5cm3). A sample was directed to fresh evaluations: membrane integrity and DNA; histopathology; incidence of apoptosis by immunohistochemistry; and lipid peroxidation index - TBARS. Cryopreservation was done on Tris-egg yolk Equex STM medium supplemented with 3% cryoprotectants (glycerol and propanediol) by the rapid freezing technique. After thawing, the same initial tests were performed. The first results obtained with the 12 initial cats showed that glycerol was more efficient than propanediol in the cryopreservation of testicular fragments of domestic cats of 0.5 cm3 (Chapter 2). In the following experiment, the testicular fragments from 31 other domestic cats, sectioned in the same sizes and cryopreserved under the same conditions as in the previous experiment, were evaluated using 3% glycerol or 3% propanediol in the Tris- egg yolk Equex STM medium, using rapid freezing technique, followed b... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T17:36:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azevedo_WellingtonMoraisde_D.pdf: 3412808 bytes, checksum: 37fe74ea6f2a3b91910127765c8e266e (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Transplantes autoplásticos de células-tronco periféricas (CTP) já vêm sendo realizados há algum tempo, tendo mostrado algumas vantagens em relação aos transplantes do mesmo tipo que utilizam medula óssea. Dentre estas vantagens, destaca-se a capacidade das CTP de produzir uma "pega" mais rápida do enxerto, encurtando o período de aplasia de medula óssea que se segue ao condicionamento do paciente. A coleta de CTP por aférese oferece maior conforto ao doador, que não precisa ser submetido à anestesia geral e às numerosas punções da crista ilíaca necessárias à obtenção do número de células suficientes para o transplante. Apesar das evidentes vantagens observadas no cenário autoplástico, a aplicação da mesma técnica aos transplantes alogênicos só se iniciou no começo dos anos 90. Este retardo se deveu ao temor de que os enxertos de CTP alogênicas, mais ricos em células T imunocompetentes, pudessem acarretar aumentos na incidência e gravidade da doença do enxerto-contra-o-hospedeiro (DECH). Outro empecilho à realização desses transplantes é a ecessidade de mobilização das CTP para a circulação sangüínea, que se fez possível nos transplantes autoplásticos, inicialmente, pelo uso de quimioterápicos citotóxicos; tal prática seria eticamente condenável em doadores sadios e, só mais recentemente, os fatores de crescimento hematopoiético humanos, obtidos por tecnologia de recombinação gênica (rhGCSF), ofereceram uma alternativa mais segura para conseguir essa mobilização. Neste estudo, não controlado analisamos os resultados de dezessete transplantes alogênios de CTP, comparando-os com aqueles obtidos em um grupo-controle que recebeu, contemporaneamente, transplantes alogênicos convencionais de medula óssea. O objetivo foi o de se estudar, comparativamente, o perfil de "pega" dos enxertos de CTP, assim como a morbidade associada ao procedimento. Para tanto, foram comparados vários parâmetros entre os dois grupos, que incluíram: tempo de "pega" do enxerto, tempo de permanência no hospital após o transplante, necessidade de transfusões, número de dias em uso de antimicrobianos ou nutrição parenteral, níveis séricos máximos de creatinina e bilirrubina, incidência e gravidade de DECH aguda, entre outros. Procuramos avaliar ainda os eventuais efeitos colaterais a curto prazo do rhG-CSF nos doadores. Os resultados mostraram que a incidência e gravidade da DECH aguda foram comparáveis entre os dois grupos, assim como a morbidade geral relacionada ao transplante. De fato, os transplantes com CTP apresentaram "pega" mais rápida e permitiram alta hospitalar mais precoce. A mobilização de CTP pelo uso de rhG-CSF e sua obtenção por sessões únicas de aférese mostraram-se, no período estudado, livres de efeitos colaterais ou complicações clínicas sérias para os doadores. O número de células foi suficiente para garantir a "pega" e estabilidade do enxerto em todos os pacientes, não se observando rejeições ou "falhas de pega". Aparentemente, as vantagens oferecidas pelas CTP em transplantes autoplástiéos também se aplicam aos transplantes alogênicos. Os resultados sugerem ser a técnica viável, porém devem ser interpretados com cautela devido às limitações metodológicas do estudo, que incluem o curto tempo de seguimento dos pacientes e a realização de análise de dados de grupos de pacientes distribuídos sem "randomização" / Abstract: Autologous blood stem celI (BSC) transplantation is already a welI established medical procedure, which has shown some advantages over the use of bone marrow for the same purpose. A faster engraftment rate is observed in these transplants, consequently shortening the period of marrow aplasia that folIows the conditioning phase. Besides, BSC colIection by apheresis offers more cornfort to the donors, avoiding the need for general anesthesia and marrow aspiration in order to obtain sufficient numbers of stem celIs for engraftment. Despite alI these advantages, the use of allogeneic BSC for transplantation did not start until the beginning of the Nineties. The application of the technique had always been hampered by the fear. that BSC grafts, which contain a larger amount of immunocompetent T -celIs, could result in intolerable increases of graft-versus-host disease (GVHD) incidence and severity. ColIection ofBSC by apheresis requires that these celIs first be mobilized to the circulation, a task acomplished initially by the use of antinoeplastic cytotoxic drugs. The administration of such agents to healthy donors would be a clearly unnacceptable practice, and, only Tecently, recombinant human hematopoietic growth factors (rhG-CSF) have offered a reasonable alternative for this purpose. In thi~ study, we retrospectively analyze the results of seventeen allogeneic BSC transplants, comparing them to those obtained in a control group of patients who received conventional allogeneic marrow transplants contemporarily fashion. The objective was to study the engraftment profile of the BSC grafts, as welI as the general transplant-associated morbidity. For this purpose, several parameters were assessed and compared between the two groups, including: time to engraftment, transfusion needs, number of days under antimicrobial treatment and parenteral nutrition, maximal serum levels of creatinine and bilirubin, incidence and severity of acute GVHD, among others. We also analyzed the eventual short-term deleterious effects of rhG-CSF upon donors. The results have pointed to a comparable incidence and severity of acute GVHD in the two populations, as well as similar transplant-associated morbidity profiles. Indeed, BSC grafts produced significantly faster engraftment and shorter hospital stays. Donor stem cell mobilization by rhG-CSF and their collection by single apheresis sessions have been devoid of significant side-effects or clinical complications in the study period. The numbers of cells collected have always proven sufficient to promote good engraftment, with no documentated of rejection or any other kind of graft failure. It seems apparent that the advantages offered by autologous BSC transplants can be shared by their allogeneic counterparts. The results suggest that allogeneic BSC transplantation is a feasible procedure, but one must not forget that this was not a randomized, prospective study, and that our follow-up time was not long enough to permit safe conclusions about the issue. More studies are necessary until we can replace alogeneic BSC transplantation for conventional bone marrow transplants / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Edir Nepomuceno da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-20T03:20:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_VeraLuciaNobregada_M.pdf: 4366240 bytes, checksum: 7ae22a2a3b6005fac0c55950cf6ffdf5 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Esta pesquisa teve por objetivo estudar a patogenicidade de cepas de L. monocytogenes cultivadas a 4, 22 e 37°C em células Vero, macrófagos e embriões de galinha. Foram utilizados dois grupos de cepas: um isolado de listeriose humana e outro isolado de alimentos, tendo sido incluído uma cepa padrão patogênica "Scott A" e uma cepa de L. innocua, avirulenta. Primeiramente, determinamos algumas características morfológicas, bioquímicas e sorológicas das cepas. Todas apresentaram as características próprias da espécie, sendo que as amostras isoladas de casos clínicos humanos eram pertencentes ao sorotipo 4b. As que foram isoladas de alimentos eram pertencentes ao sorotipo 1/2a e 1/2b. Em outra fase estudamos a cinética de invasão e multiplicação de L. monocytogenes em cultivo de células Vero e macrófagos e o efeito da temperatura de cultivo da bactéria neste processo. Em macrófagos, a invasão e multiplicação foi mais efetiva do que em células Vero, e dependente do tempo após a inoculação e temperatura de cultivo das cepas. As cepas clínicas apresentaram maior capacidade de multiplicação a 4 e 37°C do que as isoladas de alimentos. A cepa 132 procedente de alimento foi mais invasiva em macrófagos do que as outras duas da mesma origem. A inoculação de L monocytogenes em células Vero não serviu para diferenciar as cepas clínicas das alimentares, nem mostrou diferença entre cepas cultivadas em diferentes temperaturas. Na última etapa da pesquisa, determinamos a dose letal 50% (DL50) para embriões de galinha. Embriões de galinha serviram como bom modelo para o estudo da patogenicidade de cepas cultivadas e mantidas em diferentes temperaturas. Cepas cultivadas e mantidas a 4°C se mostraram mais patogênicas do que cepas cultivadas e mantidas em temperaturas mais elevadas / Abstract: We studied pathogenicity of L. monocytogenes strains grown at 4, 22 and 37°C on Vero cells, macrophages and chicken embryos. Two groups of strains were used: one isolated from human listeriosis and another isolated from food, including one standard pathogenic "Scott A" strain and one avirulent L. innocua For all strains, it was established morphologically, some biochemical characteristics and serogrouping. All have shown its own species characteristics. Samples isolated from human listeriosis belonged to serovar 4b and the ones isolated from food belonged to serovar 1/2a and 1/2b. The kinetics of invasion and multiplication at L. monocytogenes on Vero and macrophage cell cultures and the effect of the growth temperature on the bacteria in this process was studied. With macrophages, the invasion and multiplication were more effective than with Vero cells, and was dependant on inoculation time and cultivation temperature of the strains. The clinical strains showed a better ability for multiplication at 4 and 37°C than the ones isolated from food. One strain from food was more invasive for macrophages than the other two ones from the same origin. The inoculation of L. monocytogenes on Vero cells was not useful to differentiate the clinical from the food strains. One did not even show any difference between strains growth at different temperatures. The lethal dose 50% (LD50)for chicken embryos was established for all strains and its appear a good model to the study pathogenicity of cultured strains kept at different temperatures. Strains cultured and kept at 4°C showed more pathogenicity than the ones cultured and kept at higher temperatures / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Maria Angélica Spadella / Banca: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Resumo: O transplante de células germinativas é uma recente abordagem experimental que envolve a remoção de células germinativas indiferenciadas das gônadas de um animal doador, e transplante nas gônadas de um receptor originando espermatozoides com características genéticas do doador. Apesar de ser promissora em estudos que envolvem a biologia das células germinativas iniciais, preservação de espécies ameaçadas, biologia da reprodução e muitas outras abordagens biotecnológicas, a aplicação desta metodologia em peixes ainda é limitada. Deste modo, o transplante de células espermatogoniais de duas espécies filogeneticamente relacionadas, a piracanjuba Brycon orbignyanus em lambaris Astyanax altiparanae foi estudada. Para isto, a espermatogênese e a papila urogenital (via do transplante) da espécie receptora foram histologicamente analisadas, evidenciando a presença de nove gerações espermatogoniais e que a cada célula de Sertoli suporta o desenvolvimento de cerca de 140 espermátides. Além disso, a papila urogenital difere entre os sexos. Para o transplante, os testículos das piracanjuba foram enzimaticamente digeridos e as espermatogônias foram purificadas por um gradiente de densidade (Percoll), marcadas com PKH26, e injetadas, via papila urogenital, nos testículos dos lambaris, cuja espermatogênese endógena foi previamente suprimida por administração de busulfan (Myleran) associado com água quente (35°C) ou por sua manutenção nesta temperatura por um período maior. Cerca de 66,7% e 84,6% dos receptores tratados com busulfan + temperatura e somente temperatura, respectivamente, apresentaram cistos de células germinativas doadoras em seu epitélio. O transplante espermatogonial envolvendo B. orbignyanus e A. altiparanae foi realizado com sucesso e pode ser aplicado em pisciculturas auxiliando no aumento da produção e preservação da piracanjuba (criticamente ameaçada... / Abstract: Germ cell transplantation is a recent approach which involves removal of undifferentiated germ cells from the donor gonads and transplantation into the gonads of a host, giving origin to sperm with genetic characteristics from the donor. Despite this methodology promising in studies involving initial germ cell biology, preservation of threatened species, reproductive biology and many other biotechnological approaches, the application of such a methodology in fish is still limited. Thus, the transplantation of spermatogonial cells from two phylogenetically related species "piracanjuba" Brycon orbignyanus into "lambaris" Astyanax altiparanae testis was histologically studied. Host spermatogenesis and urogenital papilla (transplantation via) were analyzed, highlighting nine spermatogonial generations and that each Sertoli cell supports the development of about 140 spermatids. Moreover, urogenital papilla is different between the sexes. For transplantation, piracanjuba's testes were enzymatic digested and spermatogonia were purified by a density gradient (Percoll), labeled with PKH26 and injected, through urogenital papilla, into "lambaris" testes, whose endogenous spermatogenesis had been previously suppressed by administration ofbusulfan (Myleran) associated with warm water (35°C) or by their maintenance at this temperature for longer time. About 66.67% and 84.6% of the host animals treated with busulfan + temperature and only temperature, respectively, presented cysts of donor germ cells into their epithelium. Spermatogonial transplantation involving B. orbignyanus and A. altiparanae was successfully performed and it can be applied in fish farms helping production increase and preservation of donor species "piracanjuba" (critically endangered), since donor spermatozoon can be obtained up to three weeks after transplantation process / Doutor

Orientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Eunice Oba / Banca: Mateus José Sudano / Resumo: O sistema de cultivo in vitro de embriões apresenta menor eficiência em relação ao in vivo, sendo caracterizado por menores taxas de desenvolvimento e de adesão, além de uma menor tolerância à certas alterações que provocam estresse, como agentes físicos, químicos, térmicos, osmóticos, oxidativos, radioativos, entre outros. De acordo com a intensidade do estresse, pode-se estimular uma resposta celular favorecendo o desenvolvimento embrionário, adquirindo maior tolerância através de aceleração no metabolismo, proliferação e crescimento celular. O objetivo do presente trabalho foi analisar o efeito do estresse óptico em diferentes momentos ao longo do cultivo e conhecer as possíveis aplicações, a partir do estresse subletal e da bioestimulação promovida pela irradiação com diodo emissor de luz (LED). Com isto, os resultados demonstraram que em alguns estágios do desenvolvimento embrionário, tal como em blastocistos, o uso do estresse óptico pode ser benéfico ao embrião, protegendo-o de eventos como a apoptose. Os principais resultados demonstram que na produção de blastocistos houve aumento na produção dos mesmos nos grupos irradiados, apesar de não haver diferença estatística (Controle 23,2; IRD3inf 31,3; IRD6Infra 33,3). O estímulo por LED prévio à vitrificação mostrou que a irradiação por infravermelho em D3 pode estimular o aumento, em média, do numero de células (Controle: 91,9; IRD3inf: 112,8). Em relação às células apoptóticas, grupos irradiados com luz infravermelha mostraram menos número de células envolvidas neste processo (Controle: 11,6; IRD6inf: 6,6; IRFIVinf: 7,8), e a irradiação por luz vermelha pareceu aumentar a apoptose (IRD3verm: 15,6; IRD6verm: 16,1). Em relação à taxa de reexpansão, o a irradiação por luz vermelha teve efeito sobre o grupo irradiado em D3, mostrando uma diminuição significativa para o mesmo (Controle: 70,5 IRD3 verm; 39,3). De ... / Abstract: The in vitro embryo culture system has lower efficiency compared to in vivo, because the in vitro system is characterized by lower rates of development, deployment, and a lower tolerance to certain changes that cause stress, such as physical, chemical, thermal, osmotic, oxidative and radioactive among others. According to the stress intensity it is possible to stimulate a cellular response promoting embryonic development and acquiring greater tolerance by the acceleration of metabolism, cell proliferation and growth. The objective of this study was to analyze the effect of the optical stress at different periods throughout the embryo development and understand the possible applications for this stimulation, from sublethal stress and biostimulation promoted by irradiation with lasers. Therefore, the results showed that optical stress can be beneficial to the embryos at certain stages of their development, such as blastocysts stage, protecting them from apoptosis. The main results show that an increase in blastocysts production for infrared irradiated groups, although there was no statistical difference (control 23.2; IRD3inf 31.3; IRD6Inf 33.3). The infrared LED stimulus prior to vitrification showed a higher number of cells for embryos in D3 (control: 91.9; IRD3inf: 112.8). Also, infrared irradiation appeared to decrease the number of apoptotics cells, when compared to controls (control: 11.6; IRD6inf: 6.6; IRFIVinf: 7.8), and red light irradiation appeared to increase apoptosis (IRD3verm: 15.6; IRD6verm: 16.1). Regarding re-expansion rate, the red light irradiation in D3 is related a significant decrease in the rate (control: 70.5; IRD3verm: 39.3). According to the results, irradiation with infrared light effect is shown in blastocyst production, which is economically important to embryos IVP. Moreover, the apoptosis analysis showed that the association between the techniques applied in this study are important for the in ... / Mestre