Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-07Bitstream added on 2014-06-13T18:09:19Z : No. of bitstreams: 1 andrade_mmc_me_araca.pdf: 823802 bytes, checksum: 6cf21b33090676e4d550365d7a74f8ea (MD5) / Leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo parasita intracelular do gênero Leishmania, que acomete o homem e várias espécies animais. O cão é um dos principais reservatórios urbanos do parasita, e desempenha um papel central no ciclo de transmissão aos seres humanos pelos flebotomíneos. Estudos sobre a resposta imune em cães com Leishmaniose Visceral têm demonstrado que a imunidade protetora está associada à resposta imune do tipo celular, enquanto que a progressão da doença está associada à resposta humoral e à produção de IL-10 e TGF-β. Essas citocinas induzem a desativação de macrófagos e têm potencial para incapacitar a defesa do hospedeiro contra Leishmania spp., levando à visceralização da infecção. O objetivo do estudo foi avaliar a produção de IL-10 e de TGF-β por células T regulatórias (Treg) em amostras de sangue e de baço de cães naturalmente infectados por Leishmania spp., e correlacionar à carga parasitária e aos achados histopatológicos. Cinco cães saudáveis e vinte e nove cães com manifestações clínicas de leishmaniose visceral e sorologia positiva para anticorpos anti-Leishmania foram incluídos no grupo de estudo. A PCR em tempo real foi utilizada para a quantificação da carga parasitária e para confirmação da infecção por Leishmania spp. Realizou-se, por citometria de fluxo, a quantificação das células T CD4 regulatórias produtoras de IL-10 e TGF-β. O teste t não pareado foi utilizado para comparar o percentual de células Treg produtoras de IL-10 e TGF-β entre os cães infectados e os saudáveis, e utilizou-se o teste de Mann-Whitney para comparar o percentual de IL-10 e TGF-β no sangue e no baço de cães com LV... / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the intracellular parasite of the Leishmania genus that affects humans and several animal species. The dog is one of the main urban reservoirs of the parasite once it plays a central role in the transmission cycle to humans by sandflies. Studies about the immune response in dogs with visceral leishmaniasis have demonstrated that protective immunity is associated with the immune response of the cellular type, while disease progression is associated with the humoral response and IL-10 and TGF-β production. These cytokines induce the macrophages deactivation and have the potential to disable the host defense against Leishmania spp. leading to infection visceralization. The aim of this study was to evaluate the regulatory T cells (Treg) producing IL-10 and TGF-β in blood and spleen samples from dogs naturally infected by Leishmania spp. and correlate to the parasite load and histopathology. Five healthy dogs and twenty-nine dogs with clinical visceral leishmaniasis manifestations, and seropositivity for anti-Leishmania antibodies were included in the study group. The real-time PCR was used to quantify the parasite load and infection confirmation with Leishmania spp. The regulatory CD4 T cells producing IL-10 and TGF-β quantification was performed by flow cytometry. The unpaired t test was used to compare the percentage of Treg cells producing... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:30:45Z : No. of bitstreams: 1 costa_ss_me_jabo.pdf: 431915 bytes, checksum: 2bb4d7b793f721ee888c11f23b760d49 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo apresenta uma análise comparativa da taxa de proliferação celular e da expressão da enzima cicloxigenase-2 na pele de cães saudáveis e acometidos por ceratose actínica e carcinoma de células escamosas cutâneo (CCE). O objetivo foi avaliar o prognóstico destes cães utilizando-se a imunorreatividade a COX-2 e o índice de proliferação celular. Foram analisados 20 amostras de pele de cães, sendo 10 casos de ceratose actínica (G1) e 10 de CCE cutâneo (G2). Os dados epidemiológicos e as características clínicas e histopatológicas foram estudados. A taxa de proliferação celular foi avaliada por meio de índice mitótico (IM) e imunomarcação para MIB-1. A expressão da enzima cicloxigenase foi pesquisada por exame imunoistoquímico. Os cães da raça Pit Bull foram os mais acometidos em G1 e G2 e a média de idade foi 4,3 (±0,8) anos e 5,6 (±1,7) anos, respectivamente. Os valores médios do índice mitótico foram 0,4; 4,6 (±3,6) e 4,9 (±2,6) em G0, G1 e G2, respectivamente. Não houve diferença estatística entre G1 e G2, mas sim em relação ao G0. Houve imunomarcação para COX-2 em G1 e G2, a média dos escores foi 8,16 (±3,51) e 8,56 (±1,03), respectivamente. Não houve imunomarcação nas amostras de G0 e não houve diferença estatística entre G1 e G2, mas sim em relação ao G0 (p>0,05). A média da porcentagem de células imunomarcadas para Ki-67 em G0, G1 e G2 foi 0,4; 15,77 (± 8,81) e 17,71 (± 12,21), respectivamente. Não houve diferença entre G1 e G2, mas sim destes em relação ao G0 (p>0,05). A ceratose actínica se comportou como o CCE cutâneo, revelando não ser uma lesão pré-neoplásica, mas sim o estágio inicial da neoplasia propriamente dita. / This research presents a comparative analysis of cell proliferation index and cyclooxigenase-2 expression in skin of healthy and with actinic keratosis and cutaneous squamous cell carcinoma (SCC) dogs. The goal was to evaluate the prognosis of these dogs by COX-2 immunorreactivity and cell proliferation index. Skin sections from 20 dogs were evaluated, which 10 were actinic keratosis (G1) and 10 cutaneous SCC (G2). Epidemiological information, clinical and histopathological aspects were evaluated. Cell proliferation index hás been stimated by mitotic index (MI) and MIB-1 staining. Cyclooxigenase-2 expression has been analyzed by immunohistochemistry study. Pit Bull dogs were the main affected in G1 and G2 and the mean age was 4,3 (±0,8) years old and 5,6 (±1,7) years old, relatively. MI mean values were 0,4; 4,6 (±3,6) and 4,9 (±2,6) in G0, G1 and G2, relatively. There was no statistical difference between G1 and G2, but it did with G0. There was positive staining for COX-2 in G1 and G2, the score mean value was 8,16 (±3,51) and 8,56 (±1,03), relatively. There was no positive staining in G0 samples and neither statistical difference between G1 and G2, but it did with G0 (p>0,05). The positive cells for Ki-67 mean percentage in G0, G1 and G2 was 0,4; 15,77 (± 8,81) and 17,71 (± 12,21), relatively. There was no difference between G1 and G2, but it did with G0 (p>0,05). Actinic keratosis behavior was similar to cutaneous SSC, demonstrating that it is not a pre-neoplastic disease, but, in fact, the initial of neoplasm.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-19Bitstream added on 2014-06-13T20:11:37Z : No. of bitstreams: 1 assuncao_pcf_me_botfmvz_parcial.pdf: 85672 bytes, checksum: b2768cf7237b3ea1289fafe37d1af5d3 (MD5) / O exercício de alta intensidade em animais está associado à lesão de células musculares e à indução da resposta de fase aguda (RFA). Uma das alterações provocada por esta RFA é o estimulo da síntese de proteínas de fase aguda pelo fígado e por órgãos extra-hepáticos. Esta RFA é rápida e não específica. Foram utilizados dez equinos das raças Puro sangue Árabe (n=5) e Crioula (n=5), submetidos a testes de exercício de rápida aceleração e curta duração predominantemente anaérobico (TRA) e exercícios de baixa intensidade e longa duração (TLD) predominantemente aeróbico em esteira. Amostras de sangue venoso foram colhidas antes do inicio do exercíco (T0) e em diferentes momentos após o exercício: imediatamente após (T1), 30 minutos (T2), 03h (T3), 12h (T4), 24h (T5) e 48h (T6) após o exercício. A avaliação dos protocolos de exercício baseou-se na avaliação da atividade sérica de creatina quinase (CK) e na dosagem de fibrinogênio e proteínas de fase aguda por SDS-PAGE. Observou-se diminuição nas concentrações de haptoglobina (p˂0,05) no TRA, entre os momentos T1 e T2 e entre T1 e T4 após a prática do mesmo. As concentrações de albumina apresentaram aumento (p<0,05) no T2, no protocolo TLD. Os valores de α-1 glicoproteína ácida apresentaram aumento significativo (p<0,05) quando comparados os protocolos TRA E TLD no T2 / The high intensity exercise in animals is associated with muscle cell lesions and an acute phase response (APR). One of the changes promoted by this APR is the stimulus to produce acute phase proteins by the liver and extrahepatic organs. This APR is fast and non-specific. Ten horses were used: five Arabian breed and five Creole breed. These animals were submitted to rapid acceleration and short duration exercises (TRA) and low intensity and long duration exercises on treadmill. Blood samples were obtained before (T0) and in different moments after exercise: immediately after (T1), 30 minutes(T2), 3 hours(T3), 12 hours(T4), 24 hours (T4)and 48 hours(T5) after the exercises. To evaluate the different exercise protocols, the creatine kinase serum activity and fibrinogen concentration were determined. Serum electrophoresis was also performed by means of SDS-PAGE. Observed a decrease in the concentrations of haptoglobin (p ˂ 0.05) in TRA, between T1 and T2 and between T1 and T4 after practice the same. Albumin concentrations showed an increase (p <0.05) in T2, the protocol TLD. The values of α 1-acid glycoprotein showed a significant increase (p <0.05) when compared protocols TRA AND TLD in T2

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:31:48Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_amm_me_sjc.pdf: 332962 bytes, checksum: f4c47a3efef5e5b260cbd7ef4a2f1c60 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A proposta deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio liberado por agentes clareadores, utilizados para clareamento de dentes tratados endodonticamente, sobre cultura de fibroblastos provenientes do tecido gengival humano (FMM1). As células foram cultivadas em DMEM e quando apresentaram-se em quantidade suficiente e entre a quinta e décima passagens foram plaqueadas em placas de 96 poços onde receberam os meios de cultura condicionados de acordo com os grupos experimentais (n=12): G1- Perborato de Sódio + água; G2- Perborato de sódio + Peróxido de Carbamida 20%; G3- Peróxido de Carbamida 20%; G4- Perborato de Sódio + Peróxido de Hidrogênio 35%; G5- Peróxido de Hidrogênio 35%. O grupo controle (n=12) correspondeu à curva de crescimento e viabilidade celular, onde as células não receberam tratamento. O ensaio com MTT foi realizado nos períodos de 24 e 48 horas para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, mediu-se em espectrofotômetro a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado nas condições experimentais. Os dados foram analisados através dos testes de ANOVA e Tukey. Todos os grupos experimentais apresentaram diferença significativa em relação ao controle. O tempo de avaliação mostrou diferença estatística, exceto para o G1 (PS + H2O). Concluiu-se que: todos os agentes clareadores testados foram citotóxicos, diminuindo significantemente o metabolismo e viabilidade celular; a associação do perborato de sódio com água destilada foi o agente clareador mais tóxico e o peróxido de carbamida 20% o menos tóxico. / The propose of this study was to evaluate the cytotoxicity from five bleaching agents, used for the technique of intracanal bleaching, on human gingival fibroblasts (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and when they were presented in enough amount and between the fifth and tenth passages they were placed in plates of 96 wells; where they received the conditional culture according to the experimental groups (n=12): G1- SP + H2O; G2- SP + CP20%; G3- CP20%; G4- SP + HP35%; G5- HP35%. The control group (n=12) corresponded to the curve of cell growth and viability, where the cells didn’t receive any treatment. The MTT assay was carried through in the periods of 24 and 48 hours to evaluate the cellular viability. The amount of set free hydrogen peroxide in the experimental conditions was also measured in a spectrophotometer. The data were submitted to statistical analysis of variance and Turkey’s test. All the experimental groups presented significant difference in comparison to the control. The evaluation time showed statistical difference, except for the G1 (SP + H2O). Conclusion: all the bleaching agents had showed cytotoxicity effects, reducing significantly the cell metabolism and viability; the association of sodium perborate with distilled water was the most toxic bleaching agent and carbamide peroxide 20% the least.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-14. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:47Z : No. of bitstreams: 1 000868427.pdf: 2229753 bytes, checksum: 9e6c100a68b4e114a933894c9bd961ed (MD5) / A próstata é uma glândula anexa do sistema genital masculino, encontrada apenas em mamíferos, cuja principal função é produzir parte do fluido seminal. As lesões prostáticas surgem mais comumente em homens de meia idade e o câncer prostático (CaP) é o mais diagnosticado e a segunda causa de mortes por câncer entre os homens na América e nos países da Europa Ocidental. O microambiente extracelular trata-se de uma complexa rede que compreende a matriz extracelular (MEC) e moléculas reguladoras. A MEC possui papel fundamental na regulação de numerosos eventos celulares, tais como adesão, proliferação, diferenciação, entre outros. Um fino equilíbrio é mantido entre a síntese e degeneração de seus componentes, e quando desregulado pode causar dano tecidual e câncer. Na próstata, as interações entre o tecido epitelial e seu estroma são responsáveis em manter a função fisiológica normal, por meio de restrições proliferativas e migratórias. Quando o câncer se desenvolve, células transformadas perdem essas restrições, enquanto o estroma se adapta para sustentar a função do tumor. Sabe-se que as células tumorais com potencial invasivo adquirem fenótipo migratório associado ao aumento na expressão de genes envolvidos na motilidade celular, permitindo a essas células responder a sinais oriundos do microambiente tumoral. Assim, o nosso estudo teve como objetivo estudar a ação da fibronectina, uma molécula de adesão da MEC, sobre a migração de células tumorais prostáticas e a expressão de moléculas envolvidas nesse processo. Para isso, realizamos a exposição das células LNCaP e PC-3 à fibronectina na concentração de 25 μg/mL e analisamos viabilidade celular, morfologia, número total de nucléolos, atividade e localização das metaloproteinases de matriz -2 e -9 e o processo de migração celular. A exposição à fibronectina não alterou viabilidade celular e morfologia, mas aumentou... / The prostate is a gland attached to the male genital system, found only in mammals, whose main function is to produce part of the seminal fluid. Prostatic lesions appear most commonly in middle-aged men and prostate cancer (PCa) is the most commonly cancer diagnosed and the second leading cause of cancer deaths among men in America and in Western European countries. The extracellular microenvironment is a complex network comprising extracellular matrix (ECM) and regulatory molecules. The ECM has a fundamental role in the regulation of many cellular events, such as adhesion, proliferation, differentiation, among others. A fine balance is maintained between the synthesis and degeneration of its components, and when unregulated can cause tissue damage and cancer. In the prostate, the interactions between the epithelial tissue and its stroma are responsible for maintaining normal physiological function through proliferative and migratory restrictions. When cancer develops, transformed cells lose these restrictions, while the stroma is adapted to support the function of the tumor. It is known that tumor cells with invasive potential acquire migratory phenotype associated with increased expression of genes involved in cell motility, allowing these cells to respond to signals from the tumor microenvironment. Thus, our study aimed to study the action of fibronectin, an ECM adhesion molecule, on migration of prostate cancer cells and the expression of molecules involved in this process. To achieve this goal, we performed the exposure of LNCaP and PC-3 cells to fibronectin in the concentration of 25 mg / mL and analyzed cell viability, morphology, total number of nucleoli, location and activity of matrix metalloproteinases -2 and -9 and the process of cell migration. Exposure to fibronectin did not alter cell viability and morphology, but increased the amount of nucleoli, as well as marking and the activity of MMP -2 and -9 and decreased migration...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:59:31Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_ba_me_botfmvz.pdf: 1690076 bytes, checksum: 2290265393e1a80a119df41bc5967502 (MD5) / Células-tronco embrionárias (CTEs) são células pluripotentes derivadas da massa celular interna, obtidas de blastocistos pré-implantados. Devido à sua pluripotência podem se diferenciar nos derivados das três camadas germinativas, endoderma, ectoderma e mesoderma, tanto in vitro como in vivo. O objetivo deste trabalho foi isolar e cultivar células da MCI de blastocistos equinos frescos e refrigerados, e caracterizar o cultivo destas células por meio da expressão dos marcadores Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Para tal foram utilizadas 10 éguas, das quais foram obtidos 40 embriões, divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 de embriões frescos, totalizando 26 embriões, e o Grupo 2 de embriões refrigerados, totalizando 14 embriões. No grupo 1 de embriões frescos, 73,1% das MCIs aderiram à monocamada dois dias após o cultivo, 65,4% mantiveram-se aderidas 4 dias após o cultivo, 19,2% foram submetidas à primeira passagem e nenhuma foi submetida à segunda passagem. Já no Grupo 2 de embriões refrigerados, 85,7% das MCIs aderiram á monocamada 2 dias após o cultivo, 85,7% das células permaneceram aderidas à monocamada 4 dias após o cultivo, 21,4% foram submetidas à primeira passagem, e 7,1% à segunda passagem. As colônias de CTEs equinas obtidas de embriões frescos foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Já as colônias de CTEs obtidas de embriões refrigerados foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 e SSEA-4. As células da MCI quando isoladas dos blastocistos equinos frescos e refrigerados, foram capazes de formar colônias semelhantes à colônias de CTEs. Quando cultivadas sobre monocamada de fibroblastos equinos e inativadas com Mitomicina C, apresentaram crescimento celular e foram capazes de formar colônias de CTEs... / Embryonic stem cells are pluripotent cells, derived from inner cell mass, obtained from pre-implanted blastocysts. Because of their pluripotency, they can differentiate into derivatives of three germ layers, endoderm, ectoderm and mesoderm, both in vitro as in vivo. The aim of this study was to isolate and culture inner cell mass (ICM) cells from fresh and cooled equine blastocysts and characterize stem cells culture obtained from fresh and cooled equine embryos, by the expression of pluripotency markers as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. For this, 10 mares were used, from which were obtained 40 embryos, divided into two different groups, Group 1 from fresh embryos, with a total of 26 embryos, and Group 2 from cooled embryos, with a total of 14 embryos. In Group 1 of fresh equine embryos, 73,1% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 65,4% maintained adhered four days after culture, 19,2% were submitted to first passage and none were submitted to second passage. Whereas in the Group 2 of cooled embryos, 85,7% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 85,7% maintained adhred to the monolayer 4 days after culture, 21,4% were submitted to first passage and 7,1% to second passage. The equine embryonic like-stem cells obtained from fresh embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. While the embryonic like-stem cells obtained from cooled embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 and SSEA-4. The ICM cells when isolated from fresh and cooled equine blastocysts were capable to form embryonic stem cells-like colonies. When they were cultured under an equine fibroblasts monolayer and inactivated with Mitomycin C, showed cellular development and were able to form colonies. Equine embryonic... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Marcos Jun Watanabe / Resumo: O exercício de alta intensidade em animais está associado à lesão de células musculares e à indução da resposta de fase aguda (RFA). Uma das alterações provocada por esta RFA é o estimulo da síntese de proteínas de fase aguda pelo fígado e por órgãos extra-hepáticos. Esta RFA é rápida e não específica. Foram utilizados dez equinos das raças Puro sangue Árabe (n=5) e Crioula (n=5), submetidos a testes de exercício de rápida aceleração e curta duração predominantemente anaérobico (TRA) e exercícios de baixa intensidade e longa duração (TLD) predominantemente aeróbico em esteira. Amostras de sangue venoso foram colhidas antes do inicio do exercíco (T0) e em diferentes momentos após o exercício: imediatamente após (T1), 30 minutos (T2), 03h (T3), 12h (T4), 24h (T5) e 48h (T6) após o exercício. A avaliação dos protocolos de exercício baseou-se na avaliação da atividade sérica de creatina quinase (CK) e na dosagem de fibrinogênio e proteínas de fase aguda por SDS-PAGE. Observou-se diminuição nas concentrações de haptoglobina (p˂0,05) no TRA, entre os momentos T1 e T2 e entre T1 e T4 após a prática do mesmo. As concentrações de albumina apresentaram aumento (p<0,05) no T2, no protocolo TLD. Os valores de α-1 glicoproteína ácida apresentaram aumento significativo (p<0,05) quando comparados os protocolos TRA E TLD no T2 / Abstract: The high intensity exercise in animals is associated with muscle cell lesions and an acute phase response (APR). One of the changes promoted by this APR is the stimulus to produce acute phase proteins by the liver and extrahepatic organs. This APR is fast and non-specific. Ten horses were used: five Arabian breed and five Creole breed. These animals were submitted to rapid acceleration and short duration exercises (TRA) and low intensity and long duration exercises on treadmill. Blood samples were obtained before (T0) and in different moments after exercise: immediately after (T1), 30 minutes(T2), 3 hours(T3), 12 hours(T4), 24 hours (T4)and 48 hours(T5) after the exercises. To evaluate the different exercise protocols, the creatine kinase serum activity and fibrinogen concentration were determined. Serum electrophoresis was also performed by means of SDS-PAGE. Observed a decrease in the concentrations of haptoglobin (p ˂ 0.05) in TRA, between T1 and T2 and between T1 and T4 after practice the same. Albumin concentrations showed an increase (p <0.05) in T2, the protocol TLD. The values of α 1-acid glycoprotein showed a significant increase (p <0.05) when compared protocols TRA AND TLD in T2 / Mestre

Orientador: Henrique Ferreira / Coorientador: Alexandre Morais do Amaral / Banca: Maurício Bacci Junior / Banca: Maria Teresa Marques Novo Mansur / Banca: José Belasque Júnior / Banca: André Rodrigues / Resumo: A citricultura é uma das atividades mais importantes do setor agrícola brasileiro. Ainda assim, a incidência de doenças como o cancro cítrico afeta sobremaneira a produtividade dos pomares. Seu agente etiológico, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é capaz de infectar todas as espécies cultivadas, não havendo cura para plantas afetadas. Assim, dados a respeito de seus processos biológicos básicos poderiam auxiliar a vislumbrar soluções para esta enfermidade. Assim, visamos com este trabalho obter informações sobre a formação do septo em Xac, processo do qual participa a proteína ZapA e cujas perturbações têm alto potencial de interferência na multiplicação da bactéria e, portanto, em seu controle. Três estratégias foram utilizadas para esta determinação: 1) estudo de interactantes de ZapA através de ensaio de duplo-híbrido em leveduras; 2) análise do perfil de expressão global de um mutante produzindo cópias extras de ZapA, com a identificação de vias possivelmente por ela influenciadas; e 3) disrupção de ZapA e XAC3407, para averiguar sua interferência no estabelecimento de infecção in planta, sendo XAC3407 um possível novo componente septal a ser descrito em Xanthomonas spp. Embora aparentemente os resultados não apontem para um envolvimento direto entre ZapA e a expressão do fenótipo virulento de Xac, os processos celulares nos quais esta proteína parece atuar diretamente são bastante variados, incluindo aqueles relativos à percepção de estresse, regulação da montagem do flagelo, citoesqueleto e biossíntese de componentes do envelope celular. Todos estes elementos são discutidos caso a caso neste trabalho, na tentativa de que possam lançar luz no conhecimento acerca da biologia básica de Xac / Abstract: Citriculture is one of the most important activities of Brazilian agricultural sector. Even though, the incidence of diseases such as citrus canker affects drastically the orchards productivity. Its etiologic agent, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is able to infect all citric cultivars, without any treatment to the diseased plants until now. That's the reason why new data concerning the basic biological processes of Xac can be enormously useful to provide insight on its control. What we sought with this work was to assess new information on Xac's septum formation, a process where the protein ZapA is involved and which impairment has a high potential for disturbing the bacterium growth and, consequently, be useful for control purposes. Three approaches were used for us to reach these goals: 1) the study of ZapA interactants by an yeast-two-hybrid assay; 2) analysis of the expression profile of a mutant strain with extra copies of ZapA, allowing the identification of biochemical pathways possibly influenced by this protein; and 3) depletion of ZapA as well as of XAC3407, to assess its interference during infection establishment in planta, being XAC3407 a possible new septal component to be described in Xanthomonas spp. Although our data seems not to support any involvement of ZapA in the virulent phenotype of Xac, the protein-protein interactions and pathways in which it is enrolled are as broad as stress perception, flagellum assembly regulation, cytoskeleton and cell envelope biosynthesis. All these elements are discussed in this work in the hope that it may shed light on the current knowledge of Xac's basic biology / Doutor

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Marimélia Porcionatto / Banca: Patrícia Fidelis de Oliveira Gregolini / Banca: Marjorie de Assis Golim / Banca: Regina Kiomi Takahira / Resumo: O laser de baixa potência (LBP) é muito utilizado em diferentes ramos da medicina regenerativa e odontologia, onde é aplicado para melhorar o processo de cura e é benéfico em uma variedade de processos patológicos, no qual pode aumentar a taxa de proliferação de várias linhagens celulares. No entanto, poucos são os trabalhos que avaliaram os efeitos do LBP em células-tronco mesenquimais (CTM) caninas. Desta forma, os objetivos do presente trabalho são: caracterizar as células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) e da medula óssea (CTM-MO) caninas, estudar o efeito do laser de baixa potência fosfeto de índio-gálio-alumínio nas densidades de 1,1 e 8,7 J/cm2 sobre o cultivo das mesmas quanto à proliferação e viabilidade celular, à imunogenicidade por meio da expressão do MHC-II e avaliar o cariótipo das células irradiadas e não irradiadas a fim de comprovar a ausência de alterações cromossômicas com a utilização do LBP. O estudo revelou que o LBP não alterou a viabilidade, proliferação celular, expressão de MHC-II e o cariótipo das amostras analisadas entre os grupos. Desta forma, pode-se concluir que o LBP não causa efeitos biológicos às CTM-TA e CTM-MO caninas nas dosagens utilizadas de 1,1 e 8,7 J/cm2. Portanto, outras dosagens devem ser investigadas para estimular a proliferação das CTM caninas sem causar alterações celulares deletérias / Abstract: Low power laser (LPL) is widely used in different fields of regenerative medicine and dentistry, where it is used to improve the healing process and is beneficial in a variety of disease processes, which can increase the rate of proliferation of various cell lineages. However, there are few studies evaluating the effects of LPL on canine mesenchymal stem cells (MSC). Thus, the aims of this study are: to characterize canine mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AT-MSC) and bone marrow (BM-MSC), to investigate the effect of low power laser aluminium gallium indium phosphide at densities of 1.1 and 8.7 J/cm2 on cellular viability and proliferation, immunogenicity by MHC-II expression and evaluate the karyotype of the irradiated and non-irradiated cells in order to identify the absence of chromosomal abnormalities with the use of LPL. The study revealed that LPL did not affect cell viability and proliferation, MHC-II expression and karyotype of the samples analyzed between groups. Thus, we can conclude that LPL cause no biological effects to canine AT-MSC and BM-MSC with the 1.1 and 8.7 J/cm2 dosages used. Therefore, other dosages to stimulate proliferation without causing deleterious cellular changes of canine MSC must be investigated / Doutor

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Banca: Ian Martin / Resumo: Células-tronco embrionárias (CTEs) são células pluripotentes derivadas da massa celular interna, obtidas de blastocistos pré-implantados. Devido à sua pluripotência podem se diferenciar nos derivados das três camadas germinativas, endoderma, ectoderma e mesoderma, tanto in vitro como in vivo. O objetivo deste trabalho foi isolar e cultivar células da MCI de blastocistos equinos frescos e refrigerados, e caracterizar o cultivo destas células por meio da expressão dos marcadores Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Para tal foram utilizadas 10 éguas, das quais foram obtidos 40 embriões, divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 de embriões frescos, totalizando 26 embriões, e o Grupo 2 de embriões refrigerados, totalizando 14 embriões. No grupo 1 de embriões frescos, 73,1% das MCIs aderiram à monocamada dois dias após o cultivo, 65,4% mantiveram-se aderidas 4 dias após o cultivo, 19,2% foram submetidas à primeira passagem e nenhuma foi submetida à segunda passagem. Já no Grupo 2 de embriões refrigerados, 85,7% das MCIs aderiram á monocamada 2 dias após o cultivo, 85,7% das células permaneceram aderidas à monocamada 4 dias após o cultivo, 21,4% foram submetidas à primeira passagem, e 7,1% à segunda passagem. As colônias de CTEs equinas obtidas de embriões frescos foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Já as colônias de CTEs obtidas de embriões refrigerados foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 e SSEA-4. As células da MCI quando isoladas dos blastocistos equinos frescos e refrigerados, foram capazes de formar colônias semelhantes à colônias de CTEs. Quando cultivadas sobre monocamada de fibroblastos equinos e inativadas com Mitomicina C, apresentaram crescimento celular e foram capazes de formar colônias de CTEs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryonic stem cells are pluripotent cells, derived from inner cell mass, obtained from pre-implanted blastocysts. Because of their pluripotency, they can differentiate into derivatives of three germ layers, endoderm, ectoderm and mesoderm, both in vitro as in vivo. The aim of this study was to isolate and culture inner cell mass (ICM) cells from fresh and cooled equine blastocysts and characterize stem cells culture obtained from fresh and cooled equine embryos, by the expression of pluripotency markers as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. For this, 10 mares were used, from which were obtained 40 embryos, divided into two different groups, Group 1 from fresh embryos, with a total of 26 embryos, and Group 2 from cooled embryos, with a total of 14 embryos. In Group 1 of fresh equine embryos, 73,1% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 65,4% maintained adhered four days after culture, 19,2% were submitted to first passage and none were submitted to second passage. Whereas in the Group 2 of cooled embryos, 85,7% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 85,7% maintained adhred to the monolayer 4 days after culture, 21,4% were submitted to first passage and 7,1% to second passage. The equine embryonic like-stem cells obtained from fresh embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. While the embryonic like-stem cells obtained from cooled embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 and SSEA-4. The ICM cells when isolated from fresh and cooled equine blastocysts were capable to form embryonic stem cells-like colonies. When they were cultured under an equine fibroblasts monolayer and inactivated with Mitomycin C, showed cellular development and were able to form colonies. Equine embryonic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre