Atualmente muitas são as técnicas utilizadas na área de citogenética para que os desequilíbrios genéticos potencialmente hereditários sejam identificados ou evitados. Algumas das técnicas são utilizadas apenas para o diagnóstico de enfermidades em humanos, mas seria importante que fossem aplicadas também aos animais domésticos, com a finalidade de se associar uma causa genética ao aparecimento de algumas doenças, como por exemplo, os mastocitomas. Os mastocitomas são formações cutâneas neoplásicas originadas de mastócitos e se apresentam com frequência em cães. Algumas raças apresentam maior susceptibilidade ao aparecimento de mastocitoma, e o Boxer tem a maior incidência nesta espécie. Este trabalho objetivou avaliar comparativamente o cariótipo de cães da raça Boxer e buscar uma possível correlação com o desenvolvimento de mastocitoma. Foram utilizadas técnicas citogenéticas de bandamentos C, G e Ron além de análises em coloração convencional (Giemsa). Para tais análises utilizaram-se células cultivadas de linfócitos periféricos e de mastocitomas de Boxer. O material foi analisado e fotografado em microscópio de imersão da marca Zeiss®, em objetiva de 100x, com filtro verde, equipado com software de análise citogenética Ikaros®. Foram consideradas alterações numéricas e estruturais. Foram analisadas 828 metáfases mitóticas provenientes de linfócitos periféricos e células de mastocitomas. A análise das metáfases provenientes de cultura de células dos linfócitos periféricos não apresentou alterações estruturais e a análise numérica mostrou somente uma metáfase com 2n=77, dentre 476 metáfases analisadas. Na análise das metáfases de células tumorais, entre todas as colorações, observou-se que 70,9% apresentou 2n=78, 17,4% mostraram 2n=77; 9,8% 2n=76. Cinco metáfases (1,3%) apresentaram 2n=79 e duas células apresentaram 2n=75. Todas essas alterações numéricas estão relacionadas com alterações estruturais do tipo fusão cêntrica. Os resultados obtidos mostram que devido ao crescimento descontrolado, as células tumorais promovem rearranjos na tentativa de controlar a divisão celular. Ainda, o aprimoramento das técnicas diagnósticas em citogenética promove o conhecimento da biologia tumoral do mastocitoma canino, e consequentemente, possibilita o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. / Nowadays there are many techniques applyed in cytogenetics in order to identify or avoid potentially hereditary genetic imbalance. Some of the techniques are used only to diagnose human diseases, but it would be important to apply them also to domestic animals, with the purpose of associating a genetic cause with the appearance of some diseases like, for example, mastocytomas. The mastocytomas are neoplasics cutaneous formation originated from mastocitos and frequently appears in dogs. Some breeds show higher susceptibity to the appearance of mastocytoma, and the boxer breed has shown the highest incidence. The objective of this study is to comparatively evaluate the boxer breed chariotype and search for a possible correlation with the mastocytoma development. There has been utilized cytogenetics bandamentos C,G e Ron as well as conventional (Giemsa) coloring analysis. For those analysis there has been utilized cultivated cells from peripheral lynphocites and boxer´s mastocytomas. The material as been analyzed and photographed in a Zeiss immersion microscope, using a 100x objective with green filter, equipped with Ikaros cytogenetic analysis software. It has been considered numerical and structural alterations. There has been analyzed 828 mithotics metaphases from peripheral lynphocites and mastocytomas cells. The analysis of metaphases from the culture of peripheral lynphocites cells did not show structural alterations and the numerical analysis has shown only one metaphase 2n=77, among 476 analyzed metaphases. In the tumoral metaphase cells analysis, among all colorations, it has been observed that 70,9% presented 2n=78, 17,4% shown 2n=77 and 9,8% 2n=76. Five metaphases (1,3%) presented 2n=79 and two cell presented 2n=75. All these numerical alterations are related with structural alterations from the centric fusion type. The obtained results shows that due to the uncontrolled growth, the tumoral cells promote rearrangements in an attempt to control a cellular division. Yet, the improvement of diagnosis technique in cytogenetics promotes the knowledge of canine mastocytoma tumoral biology, and consequently allows the new therapeutic strategy development.

Lam Wai-Chun. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (leaves [64]-[73]). / Abstracts in English and Chinese. / Abstract (in English) --- p.i-ii / Abstract (in Chinese) --- p.iii -iv / Acknowledgements --- p.v / Table of contents --- p.vi -ix / List of Figures --- p.x / List of Tables --- p.x / Abbreviations --- p.xi -xii / Chapter Chapter 1 --- Introduction / Chapter 1.1 --- Hepatocellular Carcinoma (HCC) --- p.1-2 / Chapter 1.2 --- Major risk factors of HCC / Chapter (1) --- Hepatitis B Virus (HBV) --- p.2-4 / Chapter (2) --- Hepatitis C Virus (HCV) --- p.5-6 / Chapter (3) --- Cirrhosis --- p.6 / Chapter (4) --- Dietary alfatoxin B1 (AFB1) --- p.6 -7 / Chapter (5) --- Alcoholic consumption --- p.7 / Chapter (6) --- Iron overload --- p.8 / Chapter 1.3 --- Genetic aberrations in HCC --- p.8-9 / Chapter (1) --- Chromosomal loss --- p.10-13 / Chapter (2) --- Chromosomal gains --- p.13-15 / Chapter 1.4 --- roposed study --- p.15 / Chapter (1) --- Hypomethylation of heterochromatin in chromosome 1q copy number gain. --- p.16 / Chapter (2) --- ositional mapping on 1q21 - q22 by interphase cytogenetics. --- p.16-17 / Chapter Chapter 2 --- Materials and Methods / Chapter 2.1 --- Materials / Chapter 2.1.1 --- Southern Blot Analysis for Satellite DNA Hypomethylation. --- p.18-19 / Chapter 2.1.2 --- ositional Mapping by Interphase Cytogenetics. --- p.19 -24 / Chapter 2.2 --- Methods / Chapter 2.2.1 --- Southern Blot Analysis for Satellite DNA Hypomethylation / Chapter (1) --- Extraction of high molecular weight DNA --- p.25 / Chapter (2) --- DNA digestion with methyl-sensitive restriction enzyme --- p.25 -26 / Chapter (3) --- Control for the complete DNA digestion. --- p.26 / Chapter (4) --- Southern Blotting. --- p.26 -27 / Chapter 2.2.2 --- ositional Mapping by Interphase Cytogenetics / Chapter (1) --- Yeast Artificial Chromosome (YAC) --- p.28 -29 / Chapter (i) --- YAC culturing --- p.29 -30 / Chapter (ii) --- YAC DNA extraction --- p.30 -31 / Chapter (iii) --- Inter-Alu-Polymerase Chain Reaction --- p.32 -33 / Chapter (2) --- -1 derived Bacterial Artificial Chromosome (PAC) --- p.34 / Chapter (i) --- AC culturing and DNA extraction --- p.34 -35 / Chapter (3) --- FISHrobe labeling by nick translation. --- p.35 / Chapter (4) --- FISHrobereparation --- p.36 / Chapter (5) --- Dot-blot analysis. --- p.36 -37 / Chapter (6) --- Verification of the YAC andACrobes by metaphase FISH --- p.37 / Chapter (7) --- Hybridization efficiency test --- p.38 / Chapter Chapter 3 --- Southern Blot Analysis for Satellite DNA Hypomethylation / Chapter 3.1 --- Introduction --- p.39 -40 / Chapter 3.2 --- Materials and Methods / Chapter (1) --- atients --- p.41 / Chapter (2) --- Mathyl-sensitive restriction enzyme digestion. --- p.42 / Chapter (3) --- Classical satellite 2 DNArobe labeling and hybridization. --- p.42 -43 / Chapter (4) --- Membrane washing and signal detection. --- p.43 / Chapter (5) --- Signal detection and reference ratio determination. --- p.43 -44 / Chapter (6) --- Comparative Genomic Hybridization (CGH) --- p.44 -45 / Chapter 3.3 --- Results / Chapter (1) --- Heterochromatin hypomethylation and 1q12 breakpoint. --- p.45 / Chapter (2) --- Heterochromatin hypomethylation in adjacent hepatitis Infected liver tissue. --- p.46 / Chapter 3.4 --- Discussion --- p.47-51 / Chapter Chapter4 --- ositional Mapping of 1q21 - q22 by Interphase Cytogenetics / Chapter 4.1 --- Introduction --- p.52-53 / Chapter 4.2 --- Materials and Methods / Chapter (1) --- atients --- p.53 / Chapter (2) --- YAC clones --- p.53 -54 / Chapter (3) --- AC clones --- p.55 / Chapter (4) --- Formalin-fixedaraffin-embedded tissue sections pretreatment. --- p.55 / Chapter (5) --- Hybridization --- p.56 / Chapter (6) --- Signal detection --- p.56 -57 / Chapter 4.3 --- Results / Chapter (1) --- Relative copy number gain on YAC examined. --- p.57 -59 / Chapter (2) --- AC findings --- p.60 / Chapter 4.4 --- Discussion --- p.60 -63 / References

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thais Dulz.pdf: 2466351 bytes, checksum: 208f40d4e86e959ef9f685c1e5a3cac5 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Characidae is considered the largest family and most complex among the Characiforms. The Astyanax genus is one of the most specious between the characids, comprising 142 valid species distributed in the Neotropical Region. Many of these species are restricted to certain river basins. The fish fauna of the Iguaçu River basin is characterized by having a high endemism, possibly because its isolation of the Paraná River basin, occurred about 22 million years, caused by the emergence of the Iguaçu Falls. Were recently described new species of this genus in the Rio Iguaçu, however its systematic position opposite the other Astyanax is still unknown, reinforcing necessary studies aimed at understanding their diversity and their evolutionary relationships. Therefore, this research aimed was to perform the karyotype characterization of the Astyanax species from the middle Rio Iguaçu: Astyanax altiparanae, A. bifasciatus, A. dissimilis, A. minor, A. ribeirae and A. serratus, using cytogenetics as a tool, in order to contribute to a more consistent scenario about the evolution of this group. The analysis were based on conventional Giemsa staining techniques, detection of nucleolar organizing regions by silver nitrate (Ag-NORs), C-banding and fluorescence in situ hybridization (FISH) to ribosomal genes 18S e 5S probes. All species presented 2n = 50 chromosomes, confirming the conservatism to the genus. The karyotypes comprise all chromosomal types and prevalence of chromosomes with two arms, mainly on the metacentric type except for A. ribeirae with the karyotype formula containing high number of acrocentrics. Despite the diploid number remain constant in these species; there were variations in karyotype formula and consequently the fundamental number, ranging from 66 to 92. The C-banding showed differences in the distribution of heterochromatic blocks between species, occurring polymorphism in A. serratus, which was also observed in other studies involving Astyanax sp. D (A. serratus). The six species showed the presence of NORs located in the telomeric region of the short arm of a chromosome pair of the type subtelocentric, characteristic conserved for the genus. Was identified single NORs in A. altiparanae and A. dissimilis, although the most common being multiple NORs, in almost all cases confirmed by 18S rDNA. All species showed 5S rDNA located in the interstitial segments of the chromosomes. Have been observed simple rDNA 5S in A. altiparanae, A. minor and A. serratus, and multiple in A. bifasciatus, A. dissimilis and A. ribeirae. Highlighted A. ribeirae by presenting a high number of rDNA 18S and 5S sites, which proved to be sintenics and co-located. In addition, this species is considered endemic for Ribeira de Iguape basin; however, was first found in the Iguaçu basin, strengthening fauna sharing hypothesis between rivers of the plateau and coastal regions in southern Brazil. The karyotype diversity evident for all species is mainly due to non-Robertsonian rearrangements. This study presented the first cytogenetic data for the genus Astyanax occurring in the Middle Rio Iguaçu region. / A família Characidae é considerada a maior e mais complexa entre os Characiformes. O gênero Astyanax é um dos mais especiosos entre os caracídeos, compreendendo 142 espécies válidas distribuídas na região Neotropical. Muitas destas espécies encontram-se restritas a determinadas bacias hidrográficas. A ictiofauna da bacia do Rio Iguaçu caracteriza-se por apresentar um elevado grau de endemismo, possivelmente devido o seu isolamento da bacia do Rio Paraná, ocorrido há cerca de 22 milhões de anos, causado pelo surgimento das Cataratas do Iguaçu. Recentemente, foram descritas novas espécies deste gênero no Rio Iguaçu, entretanto seu posicionamento sistemático frente aos demais Astyanax ainda é desconhecido, fazendo-se necessários estudos que visem à compreensão de sua diversidade e de suas relações evolutivas. Sendo assim, objetivou-se realizar a caracterização cariotípica de espécies do gênero Astyanax provenientes do médio Rio Iguaçu: Astyanax altiparanae, A. bifasciatus, A. dissimilis, A. minor, A. ribeirae e A. serratus, utilizando como ferramenta a citogenética, a fim de contribuir com um cenário mais consistente acerca da evolução deste grupo. Utilizou-se técnicas baseadas na coloração convencional por Giemsa, detecção de regiões organizadoras de nucléolo por nitrato de prata (Ag-RONs), bandamento C e hibridação in situ fluorescência (FISH) com sondas de genes ribossomais 18S e 5S. Todas as espécies estudadas apresentaram 2n = 50 cromossomos, confirmando o conservadorismo para o gênero. Observaram-se cariótipos compostos por todos os tipos cromossômicos e predominância de cromossomos com dois braços, principalmente do tipo metacêntrico, exceto para A. ribeirae com fórmula cariotípica composta por elevado número de acrocêntricos. Apesar do número diploide se manter constante nestas espécies, houve variações na fórmula cariotípica e, consequentemente no número fundamental, variando de 66 até 92. O bandamento C evidenciou variações na distribuição dos blocos heterocromáticos entre as espécies, com ocorrência de polimorfismo em A. serratus, o que também foi observado em outros estudos envolvendo Astyanax sp. D (A. serratus). As seis espécies estudadas mostraram a presença de RONs localizadas na região telomérica do braço curto de um par cromossômico do tipo subtelocêntrico, característica conservada para o gênero. Ocorreram RONs simples em A. altiparanae e A. dissimilis, as demais espécies possuem RONs múltiplas, em quase todos os casos confirmadas pela FISH com rDNA 18S. Todas as espécies evidenciaram rDNA 5S localizados nos segmentos intersticiais dos cromossomos. Foram observados rDNA 5S em um único par em A. altiparanae, A. minor e A. serratus, e múltiplos em A. bifasciatus, A. dissimilis e A. ribeirae. Destaca-se A. ribeirae por apresentar um elevado número de sítios rDNA 18S e 5S, os quais mostraram-se sintênicos e co-localizados. Além disso, esta espécie é considerada endêmica para bacia do Ribeira de Iguape; no entanto, foi encontrada pela primeira vez na bacia do Iguaçu, reforçando a hipótese de compartilhamento de fauna entre rios do planalto cristalino e regiões costeiras no sul do Brasil. A diversidade cariotípica evidenciada para todas as espécies devem-se principalmente a rearranjos não Robertsoniano. Neste estudo foram apresentados os primeiros dados citogenéticos para o gênero Astyanax ocorrentes na região do médio Rio Iguaçu.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miguel Soto.pdf: 3392628 bytes, checksum: 62e83dd8713fab1173dd8f45d005072c (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Within the great biodiversity of freshwater fish of South America, the Characidae family has been one of the most controversial groups taxonomically. In the trans-Andean country of Chile, the family is represented only by the Cheirodontinae of the genus Cheirodon and its five species, of which C. pisciculus, C. galusdae, C. kiliani and C. australe are endemic, and C. interruptus is native to the Atlantic basins of Argentina, Uruguay and Brazil. In order to contribute to the description of the evolutionary relationships and taxonomic delimitation of the species of genus Cheirodon present in Chile, the karyotypes of these five species are described for the first time and compared by their diploid number, chromosomic morphology, C bands, Nucleolar Organizer Regions (Ag-NOR) and the rDNA 5S and 18S marking by fluorescence in situ hybridization (FISH). For all the analyzed species the diploid number was 50 chromosomes, varying in the karyotype formula among the metacentric, submetacentric, subtelocentric and acrocentric types. The number of chromosome arms was 68 in C. australe and C. kiliani and 66 in C. galusdae, C. pisciculus and C. interruptus. The presence and distribution of constitutive heterochromatin was similar in the five species, being observed mainly in the centromeres and telomeres. Variation in the number and distribution of the 5S and 18S rDNA regions was observed, being those two clusters on different chromosomes or in syntenia. It was also observed a variation in the activity of RONs, being found in C. kiliani and C. galusdae, the highest level of relative activity. There is a greater karyotype similarity between the two species that living more to the south in relation to those with the most central and north distribution, evidencing a reflection of hydrograph formation and species isolation. / Dentro da grande biodiversidade de peixes de água doce de América do Sul,a família Characidae tem sido um dos grupos mais controversos taxonomicamente. No país transandino Chile, a família é representada apenas pelos Cheirodontinae do gênero Cheirodon e suas cinco espécies, das quais C. pisciculus, C. galusdae, C. kiliani e C. australe são endêmicas. No entanto C. interruptus é originaria das bacias atlânticas da Argentina, Uruguai e Brasil. Para contribuir na descrição das relações evolutivas e delimitação taxonômica das espécies do gênero Cheirodon presentes no Chile, são descritos pela primeira vez os cariótipos destas cinco espécies e comparados segundo seu número diplóide, morfologia cromossômica, bandas C, Regiões Organizadoras do Nucléolo (Ag-RON) e a marcação de DNAr 5S e 18S por hibridação in situ fluorescente (FISH). Para todas as espécies analisadas o número diplóide foi de 50 cromossomos, variando na fórmula cariotípica entre os tipos metacêntricos, submetacêntricos, subtelocêntricos e acrocêntricos. O número de braços cromossômicos foi de 68 em C. australe e C. kiliani e de 66 em C. galusdae, C. pisciculus e C. interruptus. A presença e distribuição da heterocromatina constitutiva foi similar nas cinco espécies, sendo observada principalmente nos centrômeros e telômeros. Foi observada variação no número e distribuição das regiões de DNAr 5S e 18S, podendo esses dois clusters estar em cromossomos diferentes ou em sintenia. Também foi observada variação na atividade das RONs, sendo encontrado em C. kiliani e em C. galusdae, o maior nível de atividade relativa. Existe maior similaridade cariotípica entre as duas espécies ocorrentes mais ao sul do que destas em relação àquelas mais centrais e ao norte, mostrando um reflexo da formação da hidrografia e isolamento das espécies.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Americo Moraes.pdf: 5820633 bytes, checksum: 965e01013ad416e0fcd25ab3ad7ec73d (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / Currently, studies of aspects of evolutionary biology in neotropical fishes diversity are still lacking, despite the strong environmental impact caused by human action that has had a negative effect in native species, many of which probably still unknown to science. The knowledge of genetic variability within and between populations is of utmost importance for planning of both fish breeding and conservation of natural populations. In the present study we have analyzed, especially through molecular cytogenetics techniques, 29 specimens of Pseudoplatystoma reticulatum (Paraguay river, state of Mato Grosso do Sul), 14 specimens of Pimelodus britskii (Igua?u river, state of Paran?), 6 specimens of Sorubim lima (Paraguay river, state of Mato Grosso do Sul) and 10 specimens of Steindachneridion parahybae (Para?ba do Sul river, state of S?o Paulo). Results indicate 2n = 56 chromosomes for all species, a distinct karyotype formula composed mainly of biarmed chromosomes. Other particular features were found, regarding the location for Ag+NORs and fluorescent in situ hybridization with 5S and 18S probes. Except P. britskii, which showed NORs in the terminal region of the long arm, all species showed Ag+NORs in the terminal position of the short arm. Another peculiar feature of this fish was the co-localization of one of the 5S and 18S rDNA sites, which could be considered an apomorphy to the others Pimelodidae studied. The present work aims to contribute to the collection of data on the cytogenetics studies of Siluriformes, considering that much of the here presented information are the first characterization of the karyotype macro-struture of analysed fishes. / Considerando-se a diversidade ictiofaun?stica neotropical, estudos sobre aspectos de biologia evolutiva s?o ainda pouco expressivos. Em contraste, o forte impacto ambiental causado pela a??o humana tem refletido negativamente sobre as esp?cies nativas, muitas ainda desconhecidas da ci?ncia. O conhecimento da variabilidade gen?tica intra e inter populacional ? de extrema import?ncia para o planejamento tanto da piscicultura quanto para a conserva??o das popula??es naturais. No presente trabalho foram analisados citogeneticamente, sobretudo aplicando t?cnicas de citogen?tica molecular, 29 exemplares de Pseudoplatystoma reticulatum (rio Paraguai, MS), 14 esp?cimes de Pimelodus britskii (rio Igua?u, PR), 6 indiv?duos de Sorubim lima (rio Paraguai, MS), e 10 exemplares de Steindachneridion parahybae (rio Para?ba do Sul, SP). Os dados obtidos revelaram 2n = 56 cromossomos para todas as esp?cies analisadas, f?rmulas cariot?picas distintas, compostas basicamente de cromossomos de dois bra?os e caracter?sticas pr?prias em rela??o ? localiza??o das RONs atrav?s da impregna??o pelo ?on Ag+ e pela hibrida??o fluorescente in situ com sondas de DNAr 5S e 18S. Com exce??o de P. britskii, que apresentou RONs na regi?o terminal do bra?o longo, todas as outras esp?cies apresentaram marca??es das Ag+RONs em posi??o terminal no bra?o curto. Outra caracter?stica peculiar de P. britskii foi a localiza??o sint?nica de um dos s?tios de DNAr 5S e o 18S em cromossomos subteloc?ntricos, atributo que pode ser considerado uma apomorfia em rela??o a outros pimelod?deos estudados. O presente estudo visa contribuir com o acervo de dados citogen?ticos a respeito dos Siluriformes em estudo, considerandose que muitas das informa??es correntes tratam-se das primeiras caracteriza??es da macroestrutura cariot?pica das esp?cies de peixes analisadas.

Submitted by Francine Silva (francine.silva@unipampa.edu.br) on 2019-03-28T18:29:35Z No. of bitstreams: 1 Caracterização cromossômica e molecular de bubalinos da traça carabao, do tipo baio e híbridos, mantidos em conservação no Brasil.pdf: 10651952 bytes, checksum: 21aa47651797989917f55aadc9e21c83 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-03-28T18:29:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caracterização cromossômica e molecular de bubalinos da traça carabao, do tipo baio e híbridos, mantidos em conservação no Brasil.pdf: 10651952 bytes, checksum: 21aa47651797989917f55aadc9e21c83 (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Os búfalos do tipo Baio e da raça Carabao encontrados na Ilha de Marajó-Pará/ Brasil constituem duas pequenas populações com número muito reduzido de exemplares, o que os torna extremamente suscetíveis à extinção. De acordo com estudos citogenéticos, estes animais são divididos em dois grupos: os búfalos de rio que apresentam 2n=50, e os búfalos de pântano com 2n=48. O cruzamento entre ambos resulta na formação de híbridos viáveis e férteis com 2n=49, que apresentam na descendência a formação de animais 2n=48, 49 ou 50. Neste estudo foi avaliado um total de 110 animais (45 do tipo Baio, 50 da raça Carabao e 15 descendentes de uma fêmea híbrida), todos pertencentes ao programa brasileiro de conservação dos recursos genéticos. Utilizaram-se técnicas de citogenética clássica e de biologia molecular, para investigar possíveis alterações cromossômicas, a hibridização e aspectos evolutivos entre os búfalos. Para os búfalos do tipo Baio foi observado 2n=50, para a raça Carabao 2n=48, em três exemplares se observou 2n=49 confirmando a ocorrência de hibridização entre os animais do programa. Para alguns descendentes da linhagem híbrida foi observado número diplóide e cariótipo típico de animais da raça Carabao. As análises através de marcadores microssatélites CSSM06, 8, 42, 66 identificaram 13, 14, 6 e dois, o locus Hel9 identificou tres animais respectivamente, como híbridos. Estes resultados foram corroborados com os dados de registro genealógico do programa de conservação. Além disso, caracterizaram-se também as regiões organizadoras do nucléolo- Ag-NORs e FISH 18s, sendo observada uma divergência do número de NORs entre o tipo Baio, presente nos cromossomos 3p, 4p, 6, 21, 23 e 24, e a raça Carabao 4p, 6, 20, 22 e 23, sendo esta resultante da perda do sítio presente no cromossomo 4p ancestral dos búfalos de rio. Para o híbrido F1 foram observados os 11 sítios NORs sendo expressos e em associação, correspondendo as NORs de seus parentais. As análises genéticas realizadas neste trabalho foram implementadas no programa conservação como ferramenta auxiliar para a seleção dos animais. Além disso, estes resultados contribuem com informações sobre aspectos evolutivos entre os búfalos e o fenômeno da hibridização. / The buffaloes type Baio and race Carabao found in island Marajó-Pará/Brazil are two small populations with very few copies, which makes them extremely susceptible to extinction. According to cytogenetic studies, these animals are divided into two groups of buffalo river that have 2n = 50 and swamp buffaloes with 2n = 48, respectively. The cross between both results in formation of hybrids with 2n = 49 viable and fertile, showing the formation in the offspring of animals 2n =48, 49 or 50. This study evaluated a total of 110 animals (45 of type Baio, 50 and 15 Carabao breed offspring of a female hybrid), all belonging to the Brazilian program of conservation genetic resources. We used techniques of classical cytogenetics and molecular biology, to investigate possible chromosomal changes, hybridization and evolutionary aspects of the buffalo. For the buffaloes type Baio was observed 2n = 50 to 2n = Carabao race 48, in tree was observed 2n = 49 confirming the occurrence of hybridization between animals of the program. For some descendants of the hybrid strain was observed number diploid karyotype and typical breed animals Carabao. The analyzes of microsatellite markers by CSSM06, 8, 42, 66 identified 13, 14, 6 and two Hel9 locus identified three animals, respectively, as hybrids. These results were corroborated with data from genealogical record of the conservation program. Moreover, also characterized the nucleolus organizer regions of Ag-NOR and FISH-18s, being observed a divergence in the number of NORs between type Baio, present on chromosomes 3p, 4p, 6, 21, 23 and 24, and race Carabao 4p, 6, 20, 22 and 23, this being due to the loss of this site on chromosome 4p ancestor of the buffalo river. For the F1 hybrid were observed NORs the 11 sites being expressed and in combination, corresponding NORs of their parents. Genetic analyzes performed in this study were implemented in the conservation program as an auxiliary tool for the selection of animals. Furthermore, these results contribute information on evolutionary aspects between the buffalo and the phenomenon of hybridization.

Le syndrome de Bloom (BS) est une maladie génétique rare caractérisée par une forte augmentation du taux d’échanges entre chromatides soeurs, des anomalies de ségrégation des chromosomes et une prédisposition au développement de tous types de cancers. Ce syndrome est la conséquence de mutations dans les deux copies du gène BLM, codant pour une 3’-5’ ADN hélicase de type RecQ. La ou les fonctions de la protéine BLM sont encore mal définies mais les données de la littérature convergent vers un rôle de BLM dans des mécanismes de surveillance et/ou maintien de l’intégrité du génome. La protéine BLM serait impliquée dans le redémarrage de fourches de réplication bloquées pendant la phase S et serait nécessaire à la résolution de ponts anaphasiques en mitose, notamment de ponts particuliers appelées « UltraFine anaphase Bridges » (UFBs). Ces UFBs, qui relient les chromatides soeurs entre elles, ne sont pas détectables par les colorants classiques et leur présence ne peut-être révélée que par la détection des protéines PICH (Plk1-Interacting Checkpoint Helicase) ou BLM. A l’état basal, ces UFBs sont essentiellement d’origine centromérique (cUFBs).Tout l’enjeu de mon projet était de déterminer si BLM était également impliquée dans la prévention de la formation de ces cUFBs et donc si BLM jouait un rôle avant l’anaphase. Nous avons montré que BLM est recrutée aux centromères de la phase G2 jusqu’en mitose. BLM, en coopération avec la protéine PICH, est nécessaire (1) à l’organisation structurale de l’ADN centromérique, (2) à la disjonction complète des centromères, indépendamment de la voie des cohésines, suggérant une implication de ces protéines dans le processus de décaténation des centromères et (3) au recrutement de la topoisomérase IIa (Topo IIa) active aux centromères.Nos résultats révèlent ainsi une nouvelle localisation et une nouvelle fonction de la protéine BLM aux centromères et montrent pour la première fois l’implication des protéines BLM et PICH dans la décaténation centromérique avant l’anaphase. Nous proposons que BLM et PICH, par leurs activités respectives hélicase et de remodelage de la chromatine, modifient la structure des centromères pendant la pré-métaphase, rendant ainsi certaines caténations accessibles à la Topo IIa avant l’anaphase. La défaillance de ce mécanisme entraînerait la persistance de caténations centromériques non résolues avant l’anaphase. Ainsi, dans les cellules BS, la fréquence élevée de cUFBs aurait deux origines différentes : une partie correspondrait à des cUFBs formés du fait d’une décaténation défaillante des centromères avant l’anaphase, et l’autre partie correspondrait à des cUFBs « physiologiques » non résolus en anaphase. Afin de distinguer l’origine des cUFBs, nous avons appelé ceux issus de caténations non résolues avant l’anaphase les UFBs centromériques surnuméraires (SC-UFBs pour Supernumerary Centromeric UFBs). / Bloom syndrome (BS) is a rare genetic disease characterized by a sharp increase in the rate of sister chromatid exchanges, chromosome segregation abnormailities and a predisposition to the development of all types of cancers. This syndrome is caused by mutations in both copies of the BLM gene, which encodes BLM, a RecQ 3'-5 DNA helicase. The specific function(s) of BLM remain unclear, but the data from the literature converge towards a role for BLM in mechanisms monitoring and / or maintaining genome integrity. The BLM protein may be involved in restarting stalled replication forks during S phase and necessary to resolve anaphase bridges in mitosis, including particular bridges called "Ultrafine Anaphase Bridges" (UFBs). These UFBs, which link sister chromatids together, are not detectable by conventional stains and their presence can only be revealed by the detection of the proteins PICH (PLK1-interacting checkpoint helicase) or BLM. In untreated cells, UFBs originate mostly from centromeres (cUFBs).The challenge of my project was to determine whether BLM was also involved in preventing the formation of cUFBs and so, if it played a role before anaphase.We showed that BLM is recruited at centromeres from G2 phase to mitosis. BLM, in cooperation with PICH, is required for (1) structural organization of centromeric DNA, (2) completion of centromere disjunction, independently of the cohesin pathway, suggesting an involvement of these proteins in centromere decatenation process, and (3) recruitment of active topoisomerase IIα (Topo IIα) to centromeres. Thus, we report a new localization and a new function of BLM at centromeres, revealing for the first time a new role for BLM and PICH in a previously unknown centromeric decatenation mechanism, crucial for complete centromere disjunction.We propose that the combined action of BLM and PICH promotes, through their helicase and chromatin remodelling activities, respectively, the organization of centromeric chromatin, thereby rendering some centromeric catenates accessible to Topo IIa before the onset of anaphase. The failure of this mechanism may lead to the persistence of some centromeric catenations not resolved before anaphase. Thus, the increase in the frequency of centromeric UFBs in BLMdeficient cells has two different origins: cUFBs arising from catenations not resolved before anaphase and physiological cUFBs not processed at anaphase onset. Two distinguish the two cUFB origins, we defined the former as supernumerary centromeric UFBs (SC-UFBs).

Orientador: Claudio de Oliveira / Resumo: Embora a ictiofauna Neotropical seja considerada a mais diversa do mundo, apenas 12,2% das espécies de peixes tiveram cariótipos descritos. A dificuldade de se obter preparações cromossômicas de boa qualidade para algumas espécies de peixes Neotropicais ainda é um dos grandes desafios na área de Citogenética, principalmente para peixes de pequeno e grande porte. Uma alternativa é uso de metodologias indiretas, tais como cultura de células, amplamente utilizada e estabelecida em mamíferos, entretanto para peixes ainda é pouco empregada pela dificuldade de padronização da técnica de isolamento e manutenção das culturas celulares. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma metodologia de cultura de células aderentes para obtenção de cromossomos mitóticos em peixes neotropicais, estabelecendo linhagens celulares de diferentes espécies e a determinação de suas características citogenéticas. Seis espécies de peixes Neotropicais da ordem Characiformes foram utilizadas para obtenção das culturas primárias, desenvolvimento e criopreservação das linhagens celulares e analise citogeneticamente. Para obtenção das linhagens, células de tecido muscular foram isoladas usando enzimas proteolíticas. As células isoladas foram cultivadas em frascos ou placas tratadas com um filme à base de gelatina e mantidas à 27,5ºC, 5% CO2 em meio completo (DMEM+soro fetal bovino+antibióticos+antimicóticos). Quando as células cobriram toda a superfície do substrato, elas foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although Neotropical ichthyofauna is considered the most diverse in the world, only 12.2% had karyotypes described. The difficulty of obtaining good quality chromosome preparations for some Neotropical fish species is still one of the major challenges in the area of cytogenetics, especially for small and large fish. An alternative is the use of indirect methodologies, such as cell culture, widely used and established in mammals, however for fish is still little used for the difficulty of standardization of the technique of isolation and maintenance of cell culture. Thus, the present study aimed to develop a methodology for adherent cell culture to obtain mitotic chromosomes in Neotropical fish, establishmenting cell lines of different species and the cytogenetic characteristics of these lines. Six species of Neotropical fish of the order Characiformes were used to obtain primary cell, development and cryopreservation of the cell lines and cytogenetic analysis. To obtain the cell lines, muscle tissue were isolated using proteolytic enzymes. The isolated cells were cultured in flasks or plates treated with a gelatin-based film and maintained at 27.5 °C, 5% CO2 in complete medium (DMEM + fetal bovine serum + antibiotics + antimycotics). When the cells covered almost all surface of the substrate, they were transferred to new flasks to obtain chromosome preparations and cryopreservation. The chromosome preparations of the cell lines were performed in different passages in the spec... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Com a idéia de identificar proteínas envolvidas no processo de enovelamento das proteínas sintetizadas na glândula salivar de Rhynchosciara americana, no início deste projeto adotou-se como estratégia o seqüenciamento de uma biblioteca de cDNA. Esta biblioteca foi construída utilizando-se glândulas salivares de Rhynchosciara americana do período de seu desenvolvimento onde tem início a síntese de seu casulo. Mensagens de proteínas envolvidas no processo de enovelamento, transporte e proteólise foram isoladas, alguns exemplos são hsc70, hsp83, hip, hop, dnaJ, trap1 e prolil isomerase, sec61α/β, sec23, peptidase de sinal, rab7, partícula reconhecedora de sinal (srp), enzima conjugadora de ubiquitina e complexo regulatório proteassomo 26, cop 1 e ubiquitina ligase. A identificação destes genes permitiu o isolamento de clones genômicos através de triagem em banco de fagos e caracterização dos genes hsc70 e hsp83 para verificação de sua organização em Rhynchosciara americana. A expressão dos seus respectivos mRNAs foi avaliada em vários períodos do último estágio larval. A localização por hibridização in situ mostrou que estes genes estão localizados em regiões dos cromossomos politênicos próximas a dois pufes de DNA, C3 e C8. O estudo dos níveis de expressão das proteínas codificadas pelos genes hsc70 e hsp83 mostrou a diferença de comportamento destes genes sob condições de estresse térmico e que a expressão destas proteínas deve ser regulada pelo período de desenvolvimento das larvas de Rhynchosciara americana. Quando evidenciada por imunofluorescência a proteína Hsc70 mostra localização predominantemente no citoplasma. / With the idea of identify some of these proteins involved in the folding process of the proteins synthesized on the Rhynchosciara salivary gland, this project started adopting the shotgun cDNA sequencing strategy. This cDNA library was constructed utilizing salivary glands of Rhynchosciara americana at a developmental period where the cocoon construction begins. Messengers of important proteins involved in the folding, transport and proteolysis process were isolated, some examples are hsc70, hsp83, hip, hop, sec61 α/β, sec23, signal peptidase, rab7, signal recognition particle (srp), ubiquitin conjugating enzyme e 26 proteasome regulatory complex, cop 1 and ubiquitin ligase. Identification of these genes allowed the screening of genomic clones from a phage library; hsc70 and hsp83 characterization was carried out to verify the arrangement of these genes on genome of Rhynchosciara americana. The study of these genes will contribute with phylogenetic information about the specie. The mRNA expression of these genes was analyzed during several periods of the last larval developmental stage. In situ localization showed that these genes are located in polytene chromosomes regions near two DNAs puffs, C3 and C8. The expression levels of the proteins codified by genes hsc70 and hsp83 showed different behaviors of these genes under heat stress conditions and mainly, that the regulation of the proteins Hsc70 and Hsp83 can be related to the period of development of the larvae of Rhynchosciara americana. When revealed by immunofluorescence, Hsc70 protein shows localization predominantly on the cytoplasm.

Atualmente muitas são as técnicas utilizadas na área de citogenética para que os desequilíbrios genéticos potencialmente hereditários sejam identificados ou evitados. Algumas das técnicas são utilizadas apenas para o diagnóstico de enfermidades em humanos, mas seria importante que fossem aplicadas também aos animais domésticos, com a finalidade de se associar uma causa genética ao aparecimento de algumas doenças, como por exemplo, os mastocitomas. Os mastocitomas são formações cutâneas neoplásicas originadas de mastócitos e se apresentam com frequência em cães. Algumas raças apresentam maior susceptibilidade ao aparecimento de mastocitoma, e o Boxer tem a maior incidência nesta espécie. Este trabalho objetivou avaliar comparativamente o cariótipo de cães da raça Boxer e buscar uma possível correlação com o desenvolvimento de mastocitoma. Foram utilizadas técnicas citogenéticas de bandamentos C, G e Ron além de análises em coloração convencional (Giemsa). Para tais análises utilizaram-se células cultivadas de linfócitos periféricos e de mastocitomas de Boxer. O material foi analisado e fotografado em microscópio de imersão da marca Zeiss®, em objetiva de 100x, com filtro verde, equipado com software de análise citogenética Ikaros®. Foram consideradas alterações numéricas e estruturais. Foram analisadas 828 metáfases mitóticas provenientes de linfócitos periféricos e células de mastocitomas. A análise das metáfases provenientes de cultura de células dos linfócitos periféricos não apresentou alterações estruturais e a análise numérica mostrou somente uma metáfase com 2n=77, dentre 476 metáfases analisadas. Na análise das metáfases de células tumorais, entre todas as colorações, observou-se que 70,9% apresentou 2n=78, 17,4% mostraram 2n=77; 9,8% 2n=76. Cinco metáfases (1,3%) apresentaram 2n=79 e duas células apresentaram 2n=75. Todas essas alterações numéricas estão relacionadas com alterações estruturais do tipo fusão cêntrica. Os resultados obtidos mostram que devido ao crescimento descontrolado, as células tumorais promovem rearranjos na tentativa de controlar a divisão celular. Ainda, o aprimoramento das técnicas diagnósticas em citogenética promove o conhecimento da biologia tumoral do mastocitoma canino, e consequentemente, possibilita o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. / Nowadays there are many techniques applyed in cytogenetics in order to identify or avoid potentially hereditary genetic imbalance. Some of the techniques are used only to diagnose human diseases, but it would be important to apply them also to domestic animals, with the purpose of associating a genetic cause with the appearance of some diseases like, for example, mastocytomas. The mastocytomas are neoplasics cutaneous formation originated from mastocitos and frequently appears in dogs. Some breeds show higher susceptibity to the appearance of mastocytoma, and the boxer breed has shown the highest incidence. The objective of this study is to comparatively evaluate the boxer breed chariotype and search for a possible correlation with the mastocytoma development. There has been utilized cytogenetics bandamentos C,G e Ron as well as conventional (Giemsa) coloring analysis. For those analysis there has been utilized cultivated cells from peripheral lynphocites and boxer´s mastocytomas. The material as been analyzed and photographed in a Zeiss immersion microscope, using a 100x objective with green filter, equipped with Ikaros cytogenetic analysis software. It has been considered numerical and structural alterations. There has been analyzed 828 mithotics metaphases from peripheral lynphocites and mastocytomas cells. The analysis of metaphases from the culture of peripheral lynphocites cells did not show structural alterations and the numerical analysis has shown only one metaphase 2n=77, among 476 analyzed metaphases. In the tumoral metaphase cells analysis, among all colorations, it has been observed that 70,9% presented 2n=78, 17,4% shown 2n=77 and 9,8% 2n=76. Five metaphases (1,3%) presented 2n=79 and two cell presented 2n=75. All these numerical alterations are related with structural alterations from the centric fusion type. The obtained results shows that due to the uncontrolled growth, the tumoral cells promote rearrangements in an attempt to control a cellular division. Yet, the improvement of diagnosis technique in cytogenetics promotes the knowledge of canine mastocytoma tumoral biology, and consequently allows the new therapeutic strategy development.