A leprose é uma das principais doenças na citricultura brasileira devido à sua ocorrência difundida nos pomares e aos altos custos para o controle químico do ácaro vetor. A doença compromete a produção da planta e sua vida útil, manifestando-se através de lesões locais cloróticas ou necróticas em folhas, ramos e frutos, levando à queda prematura destes órgãos e à seca de ramos. O patógeno, Citrus leprosis virus C (CiLV-C), recentemente classificado como espécie tipo de um novo gênero de vírus de planta, Cilevirus, é transmitido pelo ácaro Brevipalpus phoenicis (Geijskes). Apesar de haver consenso de que a doença tem etiologia viral, ainda existem muitas questões pendentes sobre as interações vírus-planta-vetor, cujas soluções contribuirão para o controle integrado da doença. O presente trabalho teve como objetivo obter informações sobre a interação do vírus com células hospedeiras através de ensaios de imunolocalização das proteínas MP (putativa proteína de movimento), helicase (associada à replicação) e p29 (putativa proteína capsidial) do CiLV-C. Para tal, as sequências codificadoras das ORFs mp e hel foram amplificadas via RT-PCR e clonadas em vetor de expressão. Em seguida, promoveu-se a expressão in vitro das respectivas proteínas em células de E. coli e purificação por cromatografia de afinidade e troca iônica. A proteína MP pura foi utilizada para produção de antissoro policlonal específico que foi testado quanto à especificidade por métodos sorológicos. Os resultados do ELISA mostraram que o antissoro apresentou reação positiva com extratos foliares de lesões lepróticas em todos os estágios de desenvolvimento da doença, quando utilizado em altas concentrações. Além disso, lesões maduras reagiram mais intensamente que lesões mais novas. Por Western Blot, detectou-se somente a proteína pura, não sendo possível obter reação positiva em extrato de lesões foliares. Também não foi possível detectar a MP por imunolocalização in situ. Os resultados em conjunto sugerem que ocorre baixo nível de expressão da MP nos tecidos do hospedeiro. Empregando-se anticorpo policlonal contra proteína p29 do CiLV-C, foi possível detectar o CiLV-C em extratos de lesões foliares de leprose por ambos os métodos sorológicos testados e também por Tissue Blotting. Ensaios de imunolocalização in situ permitiram confirmar que as partículas baciliformes presentes em cisternas do retículo endoplasmático de tecidos de lesões lepróticas em plantas representam de fato vírions do CiLV-C. Além disso, também demonstrou-se que o viroplasma que ocorre no citoplasma representa o sítio de acúmulo da proteína p29. Este mesmo ensaio revelou que partículas baciliformes que ocorrem entre membranas de células adjacentes (intestino médio, glândulas prosomais, músculos e epiderme) de B. phoenicis virulíferos são de fato do CiLV-C. A ausência de viroplasma no ácaro sugere que a relação vírus/vetor seria do tipo circulativo, sem replicação. Baseado neste fato discutem-se alternativas para explicar como o vírus trafegaria do lúmen do intestino até o duto salivar para causar infecção numa planta sadia. / Citrus leprosis is one of the most important diseases in the Brazilian citrus production due to the wide occurrence in orchards and also to the high costs involved in the chemical control of the mite vector. The disease affects the plant production and longevity and it is characterized by localized chlorotic and/or necrotic spots on the leaves, stems and fruits. Affected leaves and fruits may drop prematurely and dieback can be observed in stems. The pathogen, Citrus leprosis virus C (CiLV-C), recently considered as the type member of a new genus, Cilevirus, is transmitted by the mite Brevipalpus phoenicis Geijskes. Despite the consensus that citrus leprosis has viral etiology, there are many pending questions regarding the viral interactions with the infected plant and the viruliferous mites. The solution of these questions may contribute to a better disease integrated management. This work aimed to obtain a better understanding about the virus-plant-vector relationship with the host cell by immunolocalization assays of the putative movement protein (MP), helicase (protein involved in the viral replication) and p29 (putative coat protein) of the CiLV-C. ORFs coding sequences of mp and hel was amplified by RT-PCR and cloned in the expression vector. Afterwards, in vitro expression of these proteins in E. coli and its purification by affinity chromatography were realized. The purified MP was used to produce specific polyclonal antibody that was tested for specificity by serological methods. The ELISA results showed that high concentration antibody reacted with the leaves extracts from lesions in all the disease stage of development. Furthermore, the old lesions reacted more intensely than the younger. Western blot (which detected only the pure protein) and in situ immunolocalization assays failed to detect the native MP in lesioned leave extracts. The results as a hole suggest the occurrence of low expression of MP in host tissue. The polyclonal antibody against p29 was able to detect the virus in lesioned plant extracts by PTA-ELISA, Western Blot, and Tissue Blotting. The viral nature of the putative viral particles, present within endoplasmic reticulum cisternae of infected leaf tissue, was confirmed by immunogold label. The labeling also occurred intensely in the viroplasmas, indicating that these structures represent p29 protein accumulation site. Putative virus particles, visualized in viruliferous B. phoenicis, between membranes of adjacent cells (midgut, prosomal glands, epidermis, muscles), was also immunogold labeled indicating that they represent CiLV-C. The absence of viroplasma in the mite tissues suggests that CiLV-C / B. phoenicis relationship is of the circulative type, without replication. Based on this finding, we search for possible alternatives for the viral circulation in the mite body from the midgut lumen to the salivary duct for the infection of a healthy plant to occur.

A Morte Súbita dos Citros (MSC) é uma nova doença que afeta a citricultura paulista, podendo levar à morte de milhões de plantas cítricas enxertadas sobre limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbeck), com um impacto comparável ao do vírus da Tristeza dos Citros durante as décadas de 30 e 40. Técnicas alternativas na propagação dos citros podem contornar os efeitos da MSC, seja diretamente, pela produção de subenxertos tolerantes, ou indiretamente, pelo emprego de estaquia de citros e interenxertia em combinações copa/porta-enxerto incompatíveis, mas sobre porta-enxertos tolerantes à MSC. O presente trabalho visou avaliar diferentes métodos de produção de mudas cítricas em recipientes que proporcionem possível prevenção futura das plantas à MSC em condições de campo, através de três experimentos. 1) desenvolvimento de onze porta-enxertos para fins de subenxertia, em diferentes recipientes. Os recipientes usados foram tubetes de 290 mL, sacolas de 1,7L e porta-enxertos transplantados de tubetes de 75mL para sacolas de 1,7L e 4,5L; 2) viabilização de produção de mudas de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis L. Osbeck) sobre porta-enxertos citrumelo 'Swingle' (Poncirus trifoliata x Citrus paradisi) e limão 'Volkameriano' (Citrus volkameriana Pasquale), através de interenxertos de laranjas 'Valência' e 'Hamlin'(Citrus sinensis L. Osbeck), tangerina 'Sunki' (Citrus sunki Hort. ex Tanaka) e tangerina 'Cleópatra' (Citrus reshni Hort. ex Tanaka); 3) produção de mudas cítricas e subenxertos a partir de estacas enraizadas de citrumelo 'Swingle'. Utilizaram-se estacas herbáceas, semi-lenhosas e lenhosas obtidas de porta-enxertos de seis meses de idade, submetidas a imersão em solução com IBA 0 ou 500mg L-1 e a enxertia antes do enraizamento. Porta-enxertos produzidos diretamente em sacolas de 1,7L atingiram ponto ideal de subenxertia em menor tempo, ou seja, cerca de 100 a 150 dias após a semeadura, além de permitir a obtenção de plantas maiores e com sistema radicular adequado em mesmo espaço de tempo, quando se necessitar de subenxertos mais vigorosos no campo. A interenxertia se mostrou uma técnica promissora para propagação de citros, especialmente no caso de viabilizar o plantio de laranja 'Pêra' sobre citrumelo 'Swingle' em áreas afetadas pela MSC. Contudo, determina um ciclo de produção mais prolongado e com maior percentagem de descarte de mudas, levando-se até 17 meses para a formação da muda a partir da semeadura do porta-enxerto. Estacas herbáceas com um par de folhas são as mais indicadas para enraizamento e multiplicação de citrumelo 'Swingle'. / Citrus Sudden Death (CSD) is a new disease detected in the citrus industry in São Paulo State, Brazil. It affects all citrus varieties budded on ‘Rangpur’ Lime (Citrus limonia Osbeck), causing lost of vigor and leaf brightness, root system destruction, yield reduction, degeneration of rootstock phloem tissue and death of plants in few months. CSD has a great potential to destroy millions of plants such as Citrus Tristeza Virus has caused between 1930 and 1940. Alternative production methods of container-grown citrus nursery trees could prevent some effects of CSD, for instance, by the use of tolerant inarchings, citrus cuttings, or even interstocks in incompatible scion/rootstock combinations. This work evaluated the following alternative production methods of citrus aiming to prevent occurrence of CSD in groves: 1) production of citrus inarchings using eleven rootstocks in four container types: 290mL tubes and 1,7L and 4,5L plastic bags; 2) production of 'Pera' sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) nursery trees on incompatible 'Swingle' citrumelo (Poncirus trifoliata x Citrus paradisi) and 'Volkamer' lemon (Citrus volkameriana Pasquale) with four interstocks: 'Valencia' and 'Hamlin' sweet oranges (Citrus sinensis L. Osbeck), 'Sunki' mandarin (Citrus sunki Hort. ex Tanaka) and 'Cleópatra' mandarin (Citrus reshni Hort. ex Tanaka); 3) production of citrus inarchings and nursery trees using 'Swingle' citrumelo cuttings. Herbaceous, semi-hardwood and hardwood cuttings were used and were submitted to IBA solution (0 or 500mg L-1) and budded before rooting. Production of inarchings directly sowed in 1,7L containers resulted in rootstocks ready for use about 100 to 150 days after sowing with more vigorous plants and well shaped root system. Interstocking is a promising citrus propagation technique especially regarding incompatible combinations, and could allow the use of 'Pera' sweet orange on 'Swingle' citrumelo in areas affected by CSD. On the other hand, the production cycle is longer, up to 17 months from sowing, besides producing a higher percentage of inadequate plants. Twoleaf herbaceous cuttings are indicated for appropriate rooting and multiplication of 'Swingle' citrumelo.

O presente trabalho teve o objetivo de avaliar os efeitos da vegetação intercalar composta por gramíneas e leguminosas perenes e da cobertura morta, obtida pelo manejo mecânico da vegetação intercalar, e herbicidas aplicados em pós-emergência, na linha da cultura, sobre a população de plantas daninhas, características químicas do solo, estado nutricional, desenvolvimento vegetativo e produção de citros. O experimento foi conduzido, durante as safras 2004/2005 e 2005/2006, na Fazenda São Judas, Lucianópolis - SP, em um pomar de laranja Pêra (Citrus sinensis (L.) Osbeck.), plantado em outubro de 2002. O delineamento utilizado foi o de blocos ao acaso, com parcelas subdivididas sendo 7 tratamentos e 2 subtratamentos, com 4 repetições. Os tratamentos foram: 1) vegetação intercalar de Brachiaria ruziziensis R. Germ. & Evrard, sem cobertura morta na linha da cultura; 2) vegetação intercalar de B. ruziziensis, com cobertura morta1 na linha da cultura; 3) vegetação intercalar de B. ruziziensis e Arachis pintoi Krap. & Greg com cobertura morta1 na linha da cultura; 4) vegetação intercalar de B. ruziziensis e Stylosantes spp. com cobertura morta1 na linha da cultura; 5) vegetação intercalar composta por Brachiaria plantagineacom cobertura morta1 na linha da cultura 6) vegetação intercalar de Arachis pintoi com cobertura morta1 na linha da cultura; 7) vegetação intercalar de estilosantes \'mineirão\' (Stylosathes macrocephala (25%), S. capitata (60%) e S. guianensis (15%)) com cobertura morta1 na linha da cultura. Os herbicidas aplicados às subparcelas foram: 1) glyphosate a 1260 g e. a. ha-1 e 2) paraquat a 400 g i. a. ha-1. Pelos dados obtidos pode-se observar que: a vegetação intercalar dos tratamentos 2, 3 e 4 obtiveram as maiores produções de fitomassa e cobertura morta, seguido pelos tratamentos 5 e 7 e a menor produção de fitomassa foi obtida pelo tratamento 6. A cobertura morta de B. ruziziensis proporcionou menor densidade de plantas daninhas por até 90 dias. O teor de matéria orgânica, nas entrelinhas, na camada de 0-0,10 m, nos tratamentos 2 e 4 foi superior em 3,79 e 3,48 g cm-3 em relação ao tratamento 6, enquanto que na camada de 0,20-0,40 m, o teor de matéria orgânica, do tratamento 6, foi superior em 4,6, 5,1 e 3,9 g cm-3 em relação aos tratamentos 1, 3 e 4, respectivamente. Nas linhas da cultura, o tratamento 4 e 3 apresentaram teor de K superior em 1,28 e 0,95 mmolc dm-3, respectivamente, em relação ao tratamento 6, nas camadas de 0-0,10 e 0,10-0,20 m de solo. O estilosantes proporcionou incrementos no teor foliar de N de 2,58 e 2,55 g kg-1, em relação aos tratamentos 1 e 2. O teor foliar de P do tratamento 4 foi superior ao tratamento 1 em 0,31 g kg-1, sendo observada uma correlação entre a densidade do sistema radicular na camada de 0-0,10 m de solo e o teor foliar de P. Não foi verificado efeitos dos tratamentos e herbicidas no desenvolvimento vegetativo, bem como na produção total no período avaliado. / The objective of this research was to evaluate the effects of cover crops from grass and perennial leguminous in the orchard inter-rows, mulch, produced through mechanical management with a lateral rotary mower from inter-row cover crops associated with herbicides applied in pos-emergence, on the rows, on population dynamics of weeds, soil chemical characteristics and development, nutrition and citros production. The experiment was carried out at the São Judas farm, Lucianópolis - SP - Brazil during the harvest of 2004/2005 and 2005/2006 in a citrus orchard of Citrus sinensis L. Osbeck cv. Pera, planted in October, 2002. The experimental design used was of randomized blocks with subdivided plots and 4 replications. The treatments were; 1) Cover crop of Brachiaria ruziziensis R. Germ. & Evrard, without mulch on the row; 2) Cover crop of B. ruziziensis and mulch on the row, produced through mechanical management with a lateral rotary mower (REL) from this cover crop; 3) Cover crop of B. ruziziensis and Arachis pintoi Krap. & Greg and mulch on the row, produced through REL from this cover crop; 4) Cover crop of B. ruziziensis and estilosantes \"mineirão\" (Stylosathes macrocephala (25%), S. capitata (60%) e S. guianensis (15%)) and mulch on the row, produced through REL from this cover crop; 5) Cover crop of Brachiaria plantaginea and mulch on the row, produced through REL from this cover crop; 6) Cover crop of Arachis pintoi and mulch on the row, produced through REL from this cover crop; 7) Cover crop of estilosantes \"mineirão\" and mulch on the row, produced through REL from this cover crop.The herbicides applied into the subplots were: 1) glyphosate at the rate 1260 g a.e. ha-1 and 2) paraquat at the rate 400 a.i. ha-1. In these experiments, it could be observed that: the cover crops from the treatments 2, 3 and 4 got higher wet biomass and mulch than others treatments; B. ruziziensis mulch decrease the weeds density until 90 days after the distribution; in the inter-row, into 0-0,10 m soil layer, the treatments 2 and 4 organic matter, was higher than treatment 6, however, into 0,20-0,40 m soil layer, treatment 6 organic matter was higher than treatments 1, 3 and 4. Into the rows, treatments 4 and 3 achieved K tenor higher than treatment 6 in 1,28 and 0,95 mmolc dm-3, respectively, into 0-0,10 and 0,10-0,20 m soil layers. Estilosantes promoted N foliar increases of 2,58 and 2,55 g kg-1 regarding treatments 1 and 2. Treatment 4 P foliar tenor was higher than treatment 1 in 0,31 g kg-1. It was observed a correlation between root density into superficial layer soil and P foliar tenor. It was not verified any effect of treatment or herbicides on development and total citros production.

As mudanças na produção de mudas cítricas, com o uso de compostos a base de casca de pínus, vem levando a uma interação antagônica entre os citros e algumas espécies de cogumelos, ditos saprófitas. Este trabalho caracterizou esta nova interação, identificando e isolando os basidiomicetos associados ao problema e outros macrofungos presentes neste sistema de produção. O principal fungo encontrado foi Leucocoprinus birnbaumii que forma basidiomas de cor creme a amarelo brilhante, ocorrendo dois tipos morfológicos (LB e NTA). O micélio promove a impermeabilização no substrato dependendo das condições hídricas, o qual explica a variação nas perdas. Os esporos são produzidos após a abertura do píleo, sendo que a recomendação da coleta dos cogumelos fechados está sendo uma prática adotada nos viveiros. In vitro, as colônias são brancas para creme, tendo uma taxa de crescimento em diâmetro de 0,41 a 0,72 cm/dia em meio cenoura-ágar (CA), variando em função do isolado e da sua procedência. O pH não teve grande influência, mesmo variando de 4,5 a 8,0. O crescimento das colônias foi decrescendo nos meios de cultura CA, aveia-ágar, V8, BDA, malte-ágar e completo de Pontecorvo; enquanto que nos de composição definida, o meio Czapek (0,56 cm/dia) foi superior ao meio mínimo (0,48 cm/dia). Entre as fontes de carbono, o amido foi o melhor, seguido da galactose, maltose, glicerol, glicose, ágar, sacarose, ácido succínico e lactose, não houve crescimento em acetato de amônio nem em oxalato de sódio. Entre as fontes de nitrogênio, os compostos nítricos foram semelhantes aos aminoácidos (glutamato, glutamina e glicina) e ligeiramente preferenciais aos amoniacais, enquanto a uréia inibiu o crescimento e o nitrito de sódio teve efeito fungicida. Nos experimentos realizados em viveiro comercial, o de controle químico teve aumento da produção de cogumelos para a maioria dos fungicidas avaliados, com exceção da iprodiona; o qual é explicado pelo efeito sobre os fungos agentes do controle biológico, como foram associados aos basidiomas Aspergillus niger, Aureobasidium pullulans e Penicillium olsoni. No experimento de controle biológico, as espécies de Trichoderma foram muito variáveis na sua eficiência, alguns colonizando até o substrato, mas não os cogumelos. O experimento com produtos alternativos teve melhores resultados de controle principalmente com o nitrito de sódio, o qual vem sendo adotado no controle deste basidiomiceto via aplicação no substrato e o vinagre pelo uso superficial. Outros macrofungos foram observados como o ninhode- passarinho (Cyathus stercorius); o cogumelo branco (Leucocoprinus brebissonii); a falsa trufa (Agaricaceae incertae sedis) e o cogumelo vermelho (Gymnopilus dilepis). A presença do cogumelo branco também causou preocupação nos viveiristas, mas não apresentou efeito nas plantas, nem impermeabilização. Entretanto, o cogumelo vermelho vem causando problemas na produção com fibra de coco por dimuir a capacidade de retenção de água. A falsa trufa também provoca prejuízos diretos diminuindo o desenvolvimento das mudas cítricas, tendo menor número de radicelas, provavelmente associado à maior temperatura na decomposição do substrato. Assim, há uma necessidade de um contínuo levantamento dos novos macrofungos que possam se adaptar às condições de substratos e de manejo nos viveiros de mudas cítricas. / Changes in the production of citrus nursery, using compounds from pine bark, have led to an antagonistic interaction between the citrus and some species of mushrooms, so-called saprophytes. This study characterized this new interaction, by identifying and isolating basidiomycetes associated to the problem and other macrofungi present in this production system. The main basidiomycete found was Leucocoprinus birnbaumii which has cream-colored to bright yellow, occurring two morphological types (LB and NTA). The mycelium promotes the sealing of the substrate depending on water conditions, for which there is much variation in losses. The spores are produced after the opening of the pileus, and the collection of closed cap has been adopted as a practice in citrus nurseries. In vitro, the colonies vary from cream to yellow, with a growth rate in diameter from 0.41 to 0.72 cm / day in the carrot-agar (CA) medium, depending on the isolate and its origin. The pH was not of great influence, even varying from 4.5 to 8.0. The colony growths was decreasingly in the culture medium CA, oatmeal agar, V8, PDA, malt agar and complete Pontecorvo, whereas the composition set, the Czapek medium (0.56 cm / day) was higher than the minimal medium (0.48 cm / day). Among the carbon sources, starch was the best, followed by galactose, maltose, glycerol, glucose, agar, sucrose, succinic acid and lactose, no growth in ammonium acetate or sodium oxalate. Among the sources of nitrogen, nitric compounds were similar to aminoacids (glicine, glutamate and glutamine) and were slightly preferred to ammonium, whereas urea inhibited the growth and sodium nitrite had fungicidal effect. In the experiments in citrus nursery, the chemical control assay, most fungicides has led to an increased production of mushrooms, except for iprodione, which is explained by the effect on fungal-biological control agents, which have been associated as Aspergillus niger, Aureobasidium pullulans and Penicillium olsoni. In the biological control experiment, Trichoderma species were highly variable in their efficiency, some of them colonized the substrate, but not the mushrooms. The experiment with unconvencional products has led to better results, especially with sodium nitrite, which has been adopted to control the substrate and vinegar in surface application. Other macrofungi were observed as the nest-to-bird (Cyathus stercorius), the white mushroom (Leucocoprinus brebissonii), the false truffle (Agaricaceae incertae sedis) and the Red Mushroom (Gymnopilus dilepis). The presence of the white mushroom has also caused concern in the nursery, but had no effect on plants, or sealing. However, the red mushroom is causing problems in the production of coconut fiber, leaving the fibers, which have no function in water retention. The false truffle also causes direct losses decreasing the development of the citrus trees, and fewer fibrous roots, probably associated to higher temperature in the decomposition of the substrate. Thus, there is a need for a new continuous survey of macrofungi that can adapt to the conditions of substrate and management in citrus nurseries

A interação bactéria-planta é um processo complexo que envolve diversos fatores bióticos e abióticos, podendo resultar em interações neutras, benéficas ou patogênicas. O gênero Methylobacterium tem sido descrito como endófito em diferentes plantas hospedeiras, podendo beneficiá-las por meio da promoção de crescimento vegetal e do controle de fitopatógenos. Em citros, este endófito coloniza o mesmo nicho que patógenos, e, assim, muitas espécies desse gênero são interessantes candidatas ao controle simbiótico contra Xylella fastidiosa. É conhecido que o processo de interação Methylobacterium-bactéria é coordenado por genes cuja expressão é regulada pelo sistema Quorum Sensing (QS), o qual utiliza N-acil-homoserina lactonas (AHLs) como moléculas sinalizadoras, importantes, entre outras coisas, para a formação de biofilme, encontrado em muitas plantas como estratégia de colonização bacteriana. No entanto, os mecanismos envolvidos na interação Methylobacterium-planta são ainda pouco compreendidos. Dessa forma, o presente trabalho buscou estudar, de diferentes maneiras, a interação entre Methylobacterium spp. e citros, avaliando os efeitos dessas bactérias sobre o crescimento de plântulas e a variação da expressão gênica. Neste contexto, foi verificado que a especificidade da interação bactéria-planta e a escolha do método de inoculação das bactérias são importantes para a geração de resultados benéficos sobre a germinação de sementes e o desenvolvimento da planta hospedeira. Possivelmente, a produção de AIA e a fixação biológica de nitrogênio foram os mecanismos envolvidos na promoção de crescimento de citros por Methylobacterium spp. neste estudo. Com relação à origem, essas bactérias parecem ser transmitidas horizontalmente em plantas cítricas. Visando empregar Methylobacterium spp. no controle de fitopatógenos em citros, M. extorquens AR1.6/2 foi geneticamente modificada para expressar uma endoglicanase A (EglA). Por meio de microscopia eletrônica de varredura, foi verificado que a bactéria modificada colonizou a superfície e o interior de Catharanthus roseus, planta modelo para experimentos com bactérias endofíticas e X. fastidiosa. Além disso, quando inoculada junto com X. fastidiosa, essas bactérias compartilharam o xilema das plântulas, sugerindo que durante a colonização e estabelecimento no hospedeiro estas bactérias poderiam interagir. Estudando a ação de uma AHL sobre a expressão de genes envolvidos na interação entre M. mesophilicum SR1.6/6-planta, foi observado que a presença dessa molécula foi importante na ativação da expressão dos genes mxaF, relacionado ao estabelecimento e metabolismo metilotrófico da bactéria; pat, relacionado a vantagens adaptativas e competitivas durante a colonização da planta; e acdS, envolvido com o metabolismo bacteriano e modulação de níveis hormonais na planta. A expressão dos genes crtI e sss, envolvidos com respostas a estresse e transporte de compostos, respectivamente, e do gene phoU, relacionado com patogenicidade, não foram alterados na presença da AHL nas condições avaliadas Os resultados obtidos no presente trabalho mostram que Methylobacterium spp. interagem com plântulas de Citrus spp., demonstrando especificidade entre a espécie de planta e da bactéria endofítica. Foi observado também que esta interação ocorre não somente com a planta, mas possivelmente com outras bactérias que habitam o xilema de citros. Além disso, esta interação Methylobacterium-citros-bactérias do xilema pode ser regulada por AHLs. / The bacterium-plant interaction is a complex process that involves several biotic and abiotic factors that may result in neutral, beneficial or harmful interactions. The Methylobacterium genus has been described as endophytic bacterium in different host plants. It could benefit the plants by growth promotion and control of phytopathogens. In citrus, this endophyte colonizes the same pathogen-niche, and therefore many species of this genus are interesting candidates to symbiotic control against X. fastidiosa. It is known that the process of Methylobacterium-bacteria interaction is coordinated by genes whose expression is regulated by the Quorum Sensing (QS), which uses N-acyl homoserine lactones (AHLs) as signaling molecules. Its importance is associated with the biofilm formation, found in many plants as a strategy for bacterial colonization. However, the mechanisms in Methylobacterium-plant interactions are still poorly understood. Thus, this work studied in different ways, the interaction between Methylobacterium spp. and citrus, evaluating the effects of these bacteria on the seedling growth and the variation of gene expression. In this context, it was found that the specificity of bacteria-plant interactions and the bacterial inoculation methods are important to generate beneficial results on seed germination and host plant development. Possibly, IAA production and nitrogen biological fixation were the major involved mechanisms in citrus growth promotion by Methylobacterium spp. These bacteria seem to be transmitted horizontally in citrus plant. Aiming to employ Methylobacterium spp. to control phytopathogens in citrus plant, M. extorquens AR1.6/2 was genetically modified to express an endoglucanase A (EglA) enzyme. Using scanning electron microscopy was observed that the modified bacteria colonized the surface and interior of the Catharanthus roseus, a model plant for experiments with endophytic bacteria and X. fastidiosa. Furthermore, when inoculated with X. fastidiosa, these bacteria shared the seedlings xylem, suggesting that during the colonization and establishment in the host, these bacteria could interact. Studying the action of a AHL on the expression of genes involved in the interaction between M. mesophilicum SR1.6/6- plant it was observed that the presence of this molecule was important in the activation of genes expression mxaF (related to the establishment and methylotrophic metabolism); pat (related to adaptive and competitive advantages during the plant colonization); acdS (involved in bacterial metabolism and modulation of hormone levels in the plant). Expression of crtI and sss, involved in bacterial stress and transport of compounds, respectively, and phoU, related with pathogenicity were not altered in the presence of AHL in the evaluated conditions. The results of this study demonstrated that Methylobacterium spp. interact with seedlings of Citrus spp., showing specificity between plant species and endophytic bacteria. Also, it was observed that this interaction occurs not only with the plant molecular modification levels, but possibly with other bacteria that inhabit the xylem of citrus. Also, this interaction Methylobacteriumcitrus- xylem bacteria may be regulated by AHLs.

O crisopídeo Ceraeochrysa cubana (Hagen, 1861) é um importante predador na cultura dos citros. Apesar da grande importância de C. cubana, pouco se conhece sobre a biologia e o efeito dos inseticidas a este crisopídeo, o que seria fundamental para um programa de Manejo Integrado de Pragas. Com essa pesquisa objetivou-se avaliar o efeito: a) letal e subletal de inseticidas aplicados sobre ovos com 3 idades diferentes; b) letal e subletal de inseticidas sobre larvas de primeiro instar; c) letal e subletal de inseticidas aplicados sobre pupas e adultos; d) do manejo de Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae) na população de crisopídeos; e) de seis temperaturas sobre a biologia de C. cubana. Verificou-se que não houve diferença significativa das variáveis avaliadas entre os tratamentos, dentre os ovos com 24, 72 e 120 horas. O produto Lorsban® 480 BR afetou a viabilidade dos ovos das três idades e foi o inseticida que mais afetou o predador quando aplicado sobre os ovos, classificado como moderadamente nocivo (classe 3). Em larvas, os inseticidas Lorsban® 480 BR e Malathion® 1000 EC tiveram efeito letal, causando 100% de mortalidade 24h após a aplicação e os inseticidas Azamax® e Engeo Pleno® foram os únicos produtos que tiveram efeito subletal sobre as pupas oriundas das larvas tratadas e nenhum dos produtos testados foram classificados como inócuos (classe 1) ao predador. Nenhum dos inseticidas testados teve efeito letal e subletal quando aplicados sobre as pupas, sendo classificados como inócuos, já, quando aplicados sobre adultos, os inseticidas Actara® 250 WG, Ampligo®, Engeo Pleno®, Lorsban® 480 BR e Malathion® 1000 EC causaram 100% de mortalidade e todos os produtos testados sobre os adultos foram nocivos, exceto Evidence® 700 WG, Imidan® 500 WP e Tiger® 100 EC, que foram classificados como moderadamente nocivos. Nas coletas de crisopídeos feitas em campo, a espécie Ceraeochrysa cincta (SCHNEIDER, 1851) foi a mais coletada, observou-se também que na propriedade com manejo menos intensivo de D. citri foi coletado um número maior de indivíduos comparado com a propriedade com manejo rigoroso. Em relação à biologia, verificou-se um aumento na velocidade do desenvolvimento das fases do predador em função da temperatura e a viabilidade da fase de ovo e larva não foi afetada, porém, a temperatura de 18°C afetou a viabilidade da pupa e no ciclo ovoadulto, além dessa temperatura, a de 32°C também afetou a viabilidade. Para o ciclo total de C. cubana foram necessários 354,61 GD e a temperatura base (Tb) foi de 12,72°C. / The lacewing Ceraeochrysa cubana (Hagen, 1861) is an important predator of citrus pests. Still, little is known about the biology and the effect of insecticides on this green lacewing, which is essential for an Integrated Pest Management program. The aim of this study was to evaluate: a) lethal and sublethal effects of insecticides applied on eggs at 3 different ages, b) lethal and sublethal effects of insecticides on the first larval instar c) lethal and sublethal effects of insecticides applied to pupae and adults; d) effects of the management of Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae) in a lacewing population e) effects of six temperatures on the C. cubana biology. We found no significant differences for the variables in the treatments for eggs at 24, 72 and 120 hours. The insecticide Lorsban® 480 BR affected the viability of the eggs at the three ages and most affected the predator when applied on the eggs, classified as moderately harmful (class 3). On the larvae, the insecticides Lorsban® 480 BR and Malathion® 1000 EC had lethal effect, occurring 100% mortality of the larvae 24h after application of insecticides, and Azamax® and Engeo Pleno® were the only products that presented sublethal effects on pupae from treated larvae and none of the products tested were classified as harmless (class 1) to the predator. None of the insecticides tested had lethal and sublethal effect when applied on the pupae, and were classified as harmless. When applied to adults, insecticides Actara® 250 WG, Ampligo®, Engeo Pleno®, Lorsban® 480 BR and Malathion® 1000 EC caused 100% of mortality of the adult predator and all products tested on adults were harmful, except for Evidence® 700 WG, Imidan® 500 WP and Tiger® 100 EC, which were classified as moderately harmful. In the collections of green lacewings in the field, the species Ceraeochrysa cincta was predominant. We also observed that in orchards under less intensive management of D. citri, a larger number of individuals were collected compared to the orchards under a strict management system. Regarding biology, we observed an increase in growth speed in instars of the predator due to temperature, but the viability of eggs and larvae were not affected. However, the temperature of 18°C affected the pupae viability and the eggadult cycle. The temperature of 32°C also affected viability. For total cycle of C. cubana took 354.61 degrees day (DD) and thermal threshold (Tb) was 12.72°C.