Arterial hypertension is no more considered as a simple increase in blood pressure because it includes other factors which contribute to increased cardiovascular risk, thus incorporating the concept of syndrome. In clinical practice, even today, the most used measurement of blood pressure (BP) is the casually by the indirect method, but much has been asked about the value of these measuresments. It is believed that a significant number of patients presents a very different value of PA when examined by the doctor in his office and outside it by other means. Thus, other methods for assessment of blood pressure have been used as the ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) and home blood pressure monitoring (HBPM). These methods are helping to classify patients in normotensive, hypertensive, white-coat hypertensive) (WCH) and masked hypertensive (MH). The masked hypertension and white coat are phenomena that are between normotension and hypertension and have risk of developing cardiovascular disease in the future. Articles submitted are intended to review and discuss the main studies about this subject, and describe the results obtained after monitoring the nutritional and metabolic profile of individuals with masked hypertension and white coat and comparative analysis with Augmentation Index, so to contribute to a better understanding of nutritional and metabolic profile and detection of subgroups of patients with probability of cardiovascular events. / A hipertensão arterial não é mais considerada um simples aumento da pressão arterial, pois inclui outros fatores que contribuem para o aumento do risco cardiovascular, incorporando assim a conceituação de síndrome. Na prática clínica, ainda hoje, a medida da pressão arterial (PA) mais utilizada é a casual por método indireto, porém muito tem sido questionado sobre o valor de medidas. Acredita-se que uma quantidade significativa de pacientes apresente um valor de PA muito diferente quando examinado pelo médico em seu consultório e fora dele através de outras técnicas. Desta maneira, outros métodos para avaliação da pressão arterial vêm sendo utilizados como a monitorização ambulatorial da pressão arterial (MAPA) e a monitorização residencial da pressão arterial (MRPA). Esses métodos estão ajudando a classificar os pacientes em normotensos, hipertensos, hipertensos do avental branco (HAB) e hipertensos mascarados (HM). A hipertensão mascarada e do avental branco são fenômenos que estão entre a normotensão e a hipertensão e podem aumentar a probabilidade risco de desenvolver doenças ligadas ao sistema cardiovascular no futuro. O presente trabalho tem por objetivo revisar e sistematizar os principais estudos a respeito desse tema, assim como descrever os resultados obtidos após identificar os portadores de hipertensão mascarada e do avental branco, verificar o perfil nutricional e metabólico desses pacientes, realizar ensaios para obtenção do Augmentation Index e fazer comparações entre os vários resultados obtidos de modo a contribuir para uma melhor compreensão do perfil nutricional e metabólico e da detecção de subgrupos de pacientes com probabilidade de eventos cardiovasculares.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:26:14Z : No. of bitstreams: 1 bertipaglia_eca_dr_jabo.pdf: 1381681 bytes, checksum: 745ba23720e8cec6ab76449426629614 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos das características do pelame e da taxa de sudação (TS) sobre o desempenho reprodutivo de vacas da raça Braford e estimar as herdabilidades e correlações genéticas destas características. Dados da TS, espessura da capa (E), refletância da superfície da capa (R), comprimento dos pêlos (C), diâmetro dos pêlos (D) e número de pêlos por unidade de área (N) foram observados. Ainda, foram avaliadas as seguintes variáveis da reprodução: intervalo de partos (IEP); dias para o parto (DPP); idade ao primeiro parto (IPP); taxa de detecção de cio (Dcio); taxa de gestação para a primeira inseminação (G1IA) e taxa de gestação para a estação de monta (GEM). Os dados de desempenho reprodutivo referem-se aos partos dos anos de 2003 e 2004. Foram avaliadas as inseminações referentes às gestações da estação de monta do período de outubro de 2003 a janeiro de 2004. Durante este período, foram observadas temperatura máxima do ar (Ta), pressão parcial de vapor (Pv) e carga térmica radiante (CTR). As variáveis contínuas (todas as características do pelame, TS, IEP, DPP e IPP) foram analisadas pelo método dos quadrados mínimos. Os seguintes efeitos fixos foram considerados no modelo de todas as características do pelame: pais; grupos de contemporâneos; mês da observação; genótipo e idade. O pai da vaca foi importante para todas as características do pelame, exceto para N. Grupos de contemporâneos afetou todas as variáveis, o mês afetou a variação do C e da R. O genótipo foi importante para C, D e R e a idade afetou R. Na análise da TS foram considerados: grupos de contemporâneos; pais; genótipo; E; C; D; N; R; hora da observação; idade; Ta; Pv e CTR. Todos os fatores meteorológicos e grupos de contemporâneos foram significativos... / This study deals with the effects of hair coat characteristics and sweating rate on reproduction of Braford cows and estimation of heritabilities and genetic correlations of these traits. Data on hair length (L), coat thickness (T), hair diameter (D), number of hairs per unit area (N), coat reflectance (R) and sweating rate (SR) were recorded. In addition, calving interval (CI); days to calving (DC); age at first calving (AFC); Estrous detection rate (EDR); conception rate at first insemination (CR1AI) and conception rate at breeding season (CBS) were evaluated. The continuous data were analyzed by least squares methods; considering the following fixed effects on the model for hair coat traits: sires and contemporary groups; month; genotype and age. The effect of sire was important for all hair coat traits, except for N; contemporary groups affected all hair coat traits; the effect of sampling month was important for L and R; genotype affected L, D and R; age was important only for R. The model of SR considered the following fixed effects: contemporary groups; sires; genotype; T, L, D, N, R; time of day, age, air temperature (Ta), partial vapour pressure (Pv) and radiant heat load (RHL). All the meteorological factors and contemporary groups were significant on SR. Age at calving, genotype, sire, R, T, L, N, D and SR were considered as fixed effects on analyses of CI. For the analyses of DC were considered: R, T, L, N, D, SR, genotype, age and sire. Age, genotype and SR were significant on CI and DC. Age at first calving of heifers born from January to March (AFC1) and from July to October (AFC2) were analyzed. Only sire was significant on AFC1; sire, E and D affected the variation of AFC2. The binary traits EDR; CR1AI and CBS were analyzed by logistic regression models...(Complete abstract, acess undermentioned eletronic address)

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-08-04T15:04:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ariadne Pegoraro Mastelaro - 2016.pdf: 2581761 bytes, checksum: 8c68947f1595f8beb96f79d632dd1236 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-05T14:11:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ariadne Pegoraro Mastelaro - 2016.pdf: 2581761 bytes, checksum: 8c68947f1595f8beb96f79d632dd1236 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T14:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ariadne Pegoraro Mastelaro - 2016.pdf: 2581761 bytes, checksum: 8c68947f1595f8beb96f79d632dd1236 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the physiological responses and morphological characteristics of cattle belonging to four different genetic groups with different degrees of heat adaptability, raised in pastures in the Center - West of Brazil. The experiment was conducted in two experimental periods (March and August 2015), at São Carlos Farm, Três Lagoas (MS). 54 calves recently weaned from four genetic groups were used, 14 Nellore, 14 Senepol, 12 ½ Angus x ½ Nelore and 14 ¼ Brahman ¼Nelore x 2/4 Senepol, with age, in the beginning of the experiment, five seven months. The average weight of the animals was 197.0 kg (Nelore), 169 kg (Senepol), 235 kg (½ Angus x ½ Nellore) and 233 kg (¼ Brahman x ¼ Nellore x 2/4 Senepol). The experimental design was completely randomized, with four treatments (breeds), where repetitions are the animals within each genetic group. They measured the temperature (rectal, superficial skin and superficial hair coat), heart rate, respiratory rate and surface skin temperature, surface temperature of fur and sweat rate. Moreover, it was determined some morphologic characteristics of the dorsal region. To characterize the environment, there were collected dry bulb temperature, black globe temperature, dew point temperature, wind speed and relative humidity, the sun and the shade, to determine the following thermal comfort indexes: index temperature and humidity, globe temperature and humidity index, and radiation heat load. Among the adaptive features, only those relating to the present differences between the experimental groups (p <0.05), and the genetic group ½ Angus x ½ Nellore showed the highest values of length, diameter, number of hair, density medium and thickness of the hair coat cover in both evaluation periods (March and August). For physiological variables, there was no statistical difference between the experimental groups (p> 0.05), a fact that was also found in the evaluated periods (p <0.05). It follows, therefore, that the choice of breeds with characteristics consistent with the breeding environment is an important factor in the production system efficiency / Objetivou-se avaliar as respostas fisiológicas e características morfológicas de bovinos pertencentes a quatros diferentes grupos genéticos, com diferentes graus de adaptabilidade ao calor, criados em pastagens no Centro – Oeste brasileiro. O experimento foi realizado em dois períodos experimentais (março e agosto de 2015), na Fazenda São Carlos, município de Três Lagoas (MS). Foram utilizadas 54 bezerras recém-desmamadas, provenientes de quatro grupos genéticos, sendo 14 Nelore, 14 Senepol, 12 ½ Angus x ½ Nelore e 14 ¼ Brahman x ¼ Nelore x 2/4 Senepol, com idade, ao início do experimento, de cinco a sete meses. O peso vivo médio inicial dos animais foi de 197,0 kg (Nelore), 169 kg (Senepol), 235 kg (½ Angus x ½ Nelore), e 233 kg (¼ Brahman x ¼ Nelore x 2/4 Senepol). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos (raças), em que as repetições são os animais dentro de cada grupamento genético. Foram mensuradas a temperatura (retal, superficial da pele e superficial de pelame), frequência cardíaca, frequência respiratória e taxa de sudação. Além disso, foram determinadas algumas características morfológicas do pelo na região dorsal. Para caracterização do ambiente, foram coletadas a temperatura de bulbo seco, temperatura de globo negro, temperatura de ponto de orvalho, velocidade do vento e umidade relativa do ar, ao sol e à sombra, para a determinação dos seguintes índices de conforto térmico: índice de temperatura e umidade, índice de temperatura de globo e umidade, e carga térmica de radiação. Entre as características adaptativas, apenas as que se referem ao pelo apresentaram diferenças entre os grupamentos genéticos (p<0,05), sendo que o grupo genético ½ Angus x ½ Nelore apresentou os maiores valores de comprimento, diâmetro, número de pelos, densidade média e espessura da capa de pelame, em ambos os períodos avaliados (março e agosto). Para as variáveis fisiológicas, não houve diferença estatística entre os grupamentos genéticos (p>0,05), fato que também se verificou nos períodos avaliados (p<0,05). Conclui-se, assim, que a escolha de raças com características compatíveis com o ambiente criatório é fator importante na eficiência do sistema de produção.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_fernando_henning.pdf: 464142 bytes, checksum: dafd04da655722e31d27a17fb98fb36d (MD5) Previous issue date: 2007-04-30 / The use of quality seeds is preponderant to obtain productive success in farming. Several are the factors that influence in the quality of seeds, and among these the flotations can be mentioned in the humidity of seeds and even the use of inadequate techniques in the crop. The coat of soybean seeds is the responsible for the protection of the embryo, therefore, more resistance to you factor that they will take the quality loss, minor will be the damages for the whole productive chain of soybean seeds. The introduction of characters of larger resistance of coat of soybean seed is related to the characteristic of the permeability of coat. Several studies demonstrate to exists soybean genotypes with different permeability characteristics. Based on these information took place the crossing among to cultivate commercial CD202 (yellow and permeable coat) with a lineage TP (black and semi-permeable coat). In the population generated by the crossing, grew this work with the following objectives: i) to Build a genetic map of the coat of soybean seed using markers microssatélites, RAPD and AFLP; ii) to Relate the markers microssatélites used in the construction of the genetic map of the coat of soybean, with the possible proteins codified by the sequences anchored by these markers in the bank of ESTs of the soybean. For the construction of the genetic map of the coat of soybean 600 primers microssatélites, 50 RAPD and 64 AFLP were tested. The markers selected as polimórficos, they were submitted to the analysis of Qui-square and contained in connection groups using the program MapMaker. The alignment among the sequences of the microssatélites with the database of ESTs was made through analyses in silico being used the program BLAST. Of the total of tested markers, they were used in the construction of the map 20 markers microssatélites, 2 RAPD and 11 AFLP, which were efficient in the formation of 13 connection groups. Among the 20 markers selected microssatélites, 4 presented homology with sequences of ESTs deposited in the database of the soybean, and some of these sequences possess indirect relationship with the quality of soybean seeds. / A utilização de sementes de qualidade é preponderante para se obter sucesso produtivo em uma lavoura. Diversos são os fatores que influenciam na qualidade das sementes, sendo que dentre estes podem-se citar as flutuações na umidade das sementes e até mesmo a utilização de técnicas inadequadas na colheita. O tegumento das sementes de soja é o responsável pela proteção do embrião, logo, quanto maior sua resistência a fatores que irão levar a perda de qualidade, menores serão os prejuízos para toda a cadeia produtiva de sementes de soja. A introdução de caracteres de maior resistência do tegumento da semente de soja está relacionada à característica da permeabilidade do tegumento. Diversos estudos demonstram existir genótipos de soja com diferentes características de permeabilidade. Baseado nestas informações realizou-se o cruzamento entre a cultivar comercial CD202 (tegumento amarelo e permeável) com uma linhagem TP (tegumento preto e semi-permeável). Na população gerada pelo cruzamento, desenvolveu-se este trabalho com os seguintes objetivos: i) Construir um mapa genético do tegumento da semente de soja utilizando marcadores microssatélites, RAPD e AFLP; ii) Relacionar os marcadores microssatélites utilizados na construção do mapa genético do tegumento da soja, com as possíveis proteínas codificados pelas seqüências ancoradas por estes marcadores no banco de ESTs da soja. Para a construção do mapa genético do tegumento da soja foram testados 600 primers microssatélites, 50 RAPD e 64 AFLP. Os marcadores selecionados como polimórficos, foram submetidos à análise de Qui-quadrado e agrupados em grupos de ligação utilizando o programa MapMaker. O alinhamento entre as seqüências dos microssatélites com o banco de dados de ESTs foi feito via análises in silico utilizando-se o programa BLAST. Do total de marcadores testados, foram utilizados na construção do mapa 20 marcadores microssatélites, 2 RAPD e 11 AFLP, os quais foram eficientes na formação de 13 grupos de ligação. Dentre os 20 marcadores microssatélites selecionados, 4 apresentaram homologia com seqüências de ESTs depositadas no banco de dados da soja, sendo que algumas destas seqüências possuem relação indireta com a qualidade de sementes de soja.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_helen_miranda.pdf: 927475 bytes, checksum: d105f02684c8c60f51894561bc5a61c7 (MD5) Previous issue date: 2008-07-11 / Soybean is one of the main world commodities and the seed is the key for high yields in this culture. Nevertheless, the soybean seed coat is the main modulator of seed quality, so, in this structure we could find answers for high seed quality production. The study goal is to identify structural contrasting traits, to obtain cDNA and to draw primers related to lignin synthesis and wax deposition in seed coat from two soybean genotypes. Plants were grown in greenhouse, flowers were identified and dated to follow the development after flowering until legumes were harvested (25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 and 60 days). Seed coats were then analyzed in electronic microscopy and used to build a soybean seed coat cDNA library for permeability traits (lignin synthesis and wax deposition). In silico, analyzes were performed to obtain specific primers to detect soybean seed coat lignin and wax biosynthesis genes. According to the seed coat traits, we identified differences in the palisade cell thickness between genotypes. The protocol based on litio chloride was efficient to extract total RNA from both genotypes in all phases. The unidirectional cDNA multiplication was efficient for the generation of enough cDNA quantity for future projects. In silico analyzes allowed the development of 16 primers related to lignin and wax deposition biosynthesis in soybean seed coat. / A soja é uma das principais commodities mundiais e a semente o principal insumo para sua produção. O tegumento das sementes é o principal modulador da qualidade, podendo ser encontrado, nessa estrutura a resposta para a produção de sementes com caracteres superiores para vigor e viabilidade. O estudo teve como objetivo identificar características estruturais contrastantes, obter cDNA e desenhar primers relacionados à síntese de lignina e deposição de cera em tegumentos de sementes de soja de genótipos contrastantes em relação à permeabilidade CD 202 (permeável) e IAC Santa Maria 702 (semipermeável). As plantas foram cultivadas em casa de vegetação e a partir da primeira floração as flores foram marcadas para que o tempo de desenvolvimento de cada legume fosse identificado. Legumes com 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 e 60 dias de desenvolvimento foram coletados e os tegumentos extraídos e armazenados para extração de RNA. Tegumentos com 25, 40, 55 e 70 dias de desenvolvimento dos genótipos de soja CD 202 e IAC Santa Maria 702 também foram submetidos a Microscopia Eletrônica. Após a extração do RNA total, foram obtidos os RNAm, seguido do cDNA. Em paralelo foi realizada análise in silico para desenho de primers específicos de genes envolvidos na rota metabólica da lignina e na deposição de cera nas sementes. Foram detectadas diferenças na espessura da camada paliçádica dos tegumentos de sementes de soja dos genótipos CD 202 e IAC Santa Maria 702. O protocolo a base de cloreto de lítio foi eficiente para extrair RNA total de ambos os genótipos em todas as fases de coleta. A estratégia de multiplicação unidirecional do cDNA foi eficiente para geração de um volume considerável para o desenvolvimento de estudos futuros de expressão diferencial de genes. A análise in silico permitiu o desenvolvimento de 16 primers relacionados aos genes da lignina e da elongase.

The diploma work is focused to evaluation of contemporary state of sealing system solution of high speed turbine engines in the world and, newly suggesting nontraditional design of labyrinth sealing lining for turbine side of small turbojet engine, including the production technology, technical-economic classification and experimental verification.

[ES] Las modificaciones químicas post-transcripcionales implican un nuevo nivel de modulación de la expresión génica. Al comienzo de esta Tesis, algunos componentes del complejo de metilación del nitrógeno en posición 6 de la adenosina (m6A) habían sido caracterizados en plantas. Sin embargo, a diferencia de mamíferos y levadura, ninguno de los 13 homólogos de AlkB (atALKBH1-10B) - potenciales desmetilasas (o erasers) - y las 13 proteínas de la familia YTH (ECT1- 11, AT4G11970 y CPSF30) - potenciales proteínas de reconocimiento de m6A (o readers) - identificadas en el genoma de Arabidopsis se habían caracterizado funcionalmente. Además, varios estudios describen la presencia de m6A en RNAs de virus de mamíferos y las diferentes funciones que desempeña esta modificación en la regulación de esas infecciones. No obstante, no se ha estudiado la posible implicación de este mecanismo molecular en las infecciones virales de plantas. El descubrimiento de la interacción entre la CP del virus del mosaico de la alfalfa (AMV) y una proteína de Arabidopsis (atALKBH9B) con homología a una eraser humana fue el punto de partida de esta Tesis. En este trabajo se confirma esta interacción, y se demuestra que atALKBH9B también puede reconocer los RNAs virales. Los resultados revelan que atALKBH9B tiene la capacidad de desmetilar m6A a partir de moléculas de RNA monocatenario in vitro. Esta proteína se acumula en gránulos citoplasmáticos que se colocalizan con siRNA bodies y se asocian a P-bodies, lo que sugiere que su actividad podría estar relacionada con el silenciamiento y/o degradación de mRNA. Por otro lado, ensayos preliminares muestran que los RNAs del AMV, el virus del mosaico del pepino (CMV), el virus de la arruga del nabo (TCV) y el virus del mosaico de la coliflor (CaMV) se metilan durante la infección en Arabidopsis. Además, para AMV y CMV, los resultados fueron corroborados por UPLC-PDA-Tof-MS y los sitios m6A a lo largo de los RNAs del AMV fueron identificados mediante MeRIP-seq. Los resultados presentados confirman que la relación m6A/A a lo largo de los RNAs virales aumenta en plantas atalkbh9b en comparación con las silvestres, mientras que la traducción y/o replicación se ven afectadas y el movimiento sistémico a los tallos florales está prácticamente bloqueado. A diferencia de la CP de AMV, la de CMV no interacciona con atALKBH9B por Y2H y, como ocurre con el resto de virus analizados (CMV, TCV y CaMV), su ciclo de infección no se ve afectado en plantas atalkbh9b. Además, la secuenciación de mRNA realizada en este trabajo revela que la infección por AMV induce algunos genes de Arabidopsis pertenecientes a la maquinaria m6A, MTA, MTB, VIR y ECT5. De acuerdo con el efecto antiviral dependiente de m6A para el AMV y teniendo en cuenta que ECT2, ECT3 y ECT4 fueron recientemente caracterizadas como readers citoplasmáticas, la supresión del módulo ECT2/ECT3/ECT5 aumenta significativamente los títulos sistémicos de AMV y CMV. El efecto antiviral de ECT2 sobre AMV parece estar modulado por su unión directa a los residuos de m6A presentes en los RNAs virales, ya que un mutante de ECT2 defectuoso en el reconocimiento de m6A pierde la actividad antiviral que sí presenta la proteína original y no es capaz de arrastrar RNAs virales in vivo. Por otro lado, acorde a la localización previamente descrita para ECT2 y ECT4 y la capacidad de ECT2 para experimentar una fase similar al gel in vitro, la expresión transitoria de ECT5 muestra un patrón citoplasmático con formación de agregados. Se propone que, como se ha descrito para las proteínas YTH de mamíferos, la interacción entre las ECTs y el RNA polimetilado (en este caso, RNA viral) promovería la formación de gránulos de estrés y, en consecuencia, reduciría las tasas de traducción y replicación viral. En resumen, en este trabajo se caracteriza la primera m6A eraser de plantas, atALKBH9B, y, por primera vez, se describe la influencia del mecanismo de metilación m6A en las infecciones virales de plantas. / [EN] Post-transcriptional chemical modifications entail a new level of gene expression modulation. At the beginning of this Thesis, some components of the N6-adenosine methylation (m6A) complex had been characterized in plants, whereas 13 homologs of AlkB (atALKBH1-10B) - putative demethylases (or erasers) - and 13 proteins of the YTH family (ECT1-11, AT4G11970 and CPSF30) had been identified in the Arabidopsis genome. However, unlike mammals and yeast, no functional roles had been described for any of these proteins. Besides, several reports have brought to light the presence of m6A residues in viral RNAs from mammalian viruses and the critical roles that this modification plays regulating viral infections. However, the potential relevance of this molecular mechanism on plant viral infections remained fully unexplored. The discovery of the interaction between the AMV CP and an Arabidopsis protein (atALKBH9B) with similarity to a human eraser was the starting point of this Thesis. Here, this interaction is confirmed and it is demonstrated that atALKBH9B can also recognize the viral RNAs. Furthermore, the obtained results prove that atALKBH9B has the capability of demethylating m6A from single-stranded RNA molecules in vitro. This protein was observed to accumulate in cytoplasmic granules that colocalize with siRNA-bodies and associate to P-bodies, suggesting that atALKBH9B activity could be related to mRNA silencing and/or decay processes. On the other hand, preliminary assays show that viral RNAs of AMV, Cucumber mosaic virus (CMV), Turnip crinkle virus (TCV) and Cauliflower mosaic virus (CaMV) become methylated during infection in Arabidopsis. Besides, for AMV and CMV, the results were corroborated by UPLC-PDA-Tof-MS and m6A sites along the RNAs of AMV were identified through MeRIP-seq approach. The results presented here confirm that m6A/A ratio along viral RNAs is increased in atalkbh9b plants compared to wild type, whereas translation and/or replication are impaired and systemic movement to the floral stems is practically blocked. In contrast to AMV, CMV CP does not interact with atALKBH9B by Y2H and, as it occurs with the rest of the assayed viruses (CMV, TCV and CaMV), its infection cycle is not affected in atalkbh9b plants. Furthermore, the mRNA-seq analysis performed in this Thesis reveals that some Arabidopsis factors belonging to the m6A machinery, MTA, MTB, VIR and ECT5 genes, are upregulated upon AMV infection. Consistent with the m6A-dependent antiviral effect for AMV and considering that ECT2, ECT3 and ECT4 were recently characterized as cytoplasmic m6A readers, mutations of ECT2/ECT3/ECT5 Arabidopsis module significantly increase AMV and CMV systemic titers. The antiviral effect of ECT2 on AMV seems to be modulated via its direct binding to the m6A residues presented in the viral RNAs, since an ECT2 mutant defective in m6A recognition loses wild type antiviral activity and is not able to pull down viral RNAs in vivo. On the other hand, according to the previous subcellular localization described for ECT2 and ECT4 and the ability of ECT2 to undergo gel-like phase in vitro, the transitory expression of ECT5 displays a cytoplasmic pattern with the formation of some aggregates. As found for mammal YTH proteins, the interaction between ECTs and poly-methylated RNA (in this case viral RNA) is proposed to promote the formation of stress granules and, consequently, reduce viral translation and replication rates. In summary, in this work, atALKBH9B is reported as the first m6A eraser identified in plants and, for the first time, it is described the influence of m6A methylation mechanism in plant viral infections. / [CA] Les modificacions químiques post-transcripcionals impliquen un nou nivell de modulació de l'expressió gènica. Al començament d'esta Tesi, s'havien caracteritzat alguns components del complex de metilació del nitrogen en posició 6 de la adenosina (m6A) en plantes. No obstant això, a diferència de mamífers i llevat, cap dels 13 homòlegs d'AlkB (atALKBH1-10B) - potencials desmetilases (o erasers) - i les 13 proteïnes de la família YTH (ECT1- 11, AT4G11970 i CPSF30) - potencials proteïnes de reconeixement de m6A (o readers) - identificades en el genoma d'Arabidopsis s'havien caracteritzat funcionalment. A més, diversos estudis han descrit la presència de residus m6A en RNAs de virus de mamífers i les diferents funcions que exercix esta modificació en la regulació de les infeccions virals. No obstant això, no s'ha estudiat la possible implicació d'este mecanisme molecular en les infeccions virals de plantes. El descobriment de la interacció entre la CP del virus del mosaic de l'alfals (AMV) i una proteïna d'Arabidopsis (atALKBH9B) amb homologia a una eraser humana va ser el punt de partida d'esta Tesi. En este treball es confirma esta interacció, i es demostra que atALKBH9B també pot reconéixer els RNAs virals. Els resultats revelen que atALKBH9B té la capacitat de desmetilar m6A a partir de molècules de RNA monocatenari in vitro. Esta proteïna s'acumula en grànuls citoplasmàtics que es colocalitzen amb siRNA bodies i s'associen a P-bodies, la qual cosa suggerix que l'activitat atALKBH9B podria estar relacionada amb els processos de silenciament i/o degradació de mRNA. D'altra banda, assajos preliminars mostren que els RNAs virals de l'AMV, el virus del mosaic del cogombre (CMV), el virus de l'arruga del nap (TCV) i el virus del mosaic de la coliflor (CaMV) es metilen durant la infecció en Arabidopsis. A més, per AMV i CMV els resultats van ser confirmats per UPLC-PDA-Tof-MS i els llocs m6A al llarg dels RNAs d'AMV s'identificaren mitjançant MeRIP-seq. Els resultats presentats confirmen que la relació m6A/A al llarg dels RNAs virals augmenta en les plantes atalkbh9b en comparació amb les silvestres, mentre que la traducció i/o replicació es veuen afectades i el moviment sistèmic a les tiges florals està pràcticament bloquejat. A diferència de la CP d'AMV, la de CMV no interacciona amb atALKBH9B per Y2H i, com ocorre amb la resta dels virus analitzats (CMV, TCV i CaMV), el seu cicle d'infecció no es veu afectat en plantes atalkbh9b. A més, la seqüenciació de mRNA realitzada en este treball revela que la infecció per AMV indueix alguns gens d'Arabidopsis pertanyents a la maquinària m6A, MTA, MTB, VIR i ECT5. D'acord amb l'efecte antiviral dependent de m6A per a l'AMV i tenint en compte que ECT2, ECT3 i ECT4 van ser recentment caracteritzades com readers citoplasmàtiques, la supressió del mòdul ECT2/ECT3/ECT5 augmenta significativament els títols sistèmics d'AMV i CMV. L'efecte antiviral d'ECT2 sobre AMV sembla estar modulat a través de la seua unió directa als nucleòtids m6A presents en els RNAs virals, ja que un mutant de la proteïna ECT2 defectuós en el reconeixement de m6A perd l'activitat antiviral que sí que presenta la proteïna original i no és capaç d'arrossegar RNAs virals in vivo. D'altra banda, d'acord amb la localització subcel·lular descrita prèviament per a ECT2 i ECT4 i la capacitat d'ECT2 per a experimentar una fase similar al gel in vitro, l'expressió transitòria d'ECT5 mostra un patró citoplasmàtic amb la formació d'agregats. Es proposa que, com s'ha descrit per a les proteïnes YTH de mamífers, la interacció entre les ECTs i el RNA polimetilat (en aquest cas, RNA viral) promouria la formació de grànuls d'estrès i, en conseqüència, reduiria les taxes de traducció i replicació viral. En resum, en este treball es caracteritza la primera m6A eraser de plantes, atALKBH9B, i, per primera vegada, es descriu la influència de l'mecanisme de metilació M6A en les infeccions virals de plantes. / Martínez Pérez, M. (2020). Involvement of the host RNA N6-adenosine methylation (m6A) pathway in the infection cycle of Alfalfa mosaic virus [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/155976

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