Orientador : Felix Guillermo Reyes Reyes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-19T07:07:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Areas_MiguelArcanjo_D.pdf: 5201326 bytes, checksum: b649637f85e74abd8ce9750e257152e2 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: A polpa de laranja, obtida como sub-produto na produto industrial do suco, foi caracterizada física e físico-quimicamente apresentando as seguintes características; granulometria de 8,9%, 52,9% e 38,3% para partículas maiores do que 800 µm, entre 200 e 500 µm e menores que 200 µm, respectivamente; densidade aparente de 0,46 g/ml; capacidade de hidratação de 3,61 gramas de água/grama de amostra; teor de fibra detergente neutro (FDH) de 32,2% e teor de substâncias pécticas de 38,9%. Em ensaio biológico, utilizando-se ratos Wistar machos, adultos, normais e diabéticos observou-se redução (p < 0,05) da glicemia durante o teste de tolerância k glicose nos animais normais (60 minutos) e diabéticos (80 e 90 minutos) que receberam 10 mg/ml do material fibroso. Em outro ensaio, ratos foram alimentados, durante 40 dias, com dietas contendo 0% (controle), 10% e 25% da polpa de laranja, respectivamente N, NF10 e NF25 para os grupos normais e D, DF10 e DF25 para os grupos diabéticos. Com relação aos animais normais, verificou-se redução (p< 0,05) da ingestão alimentar no grupo HF25 devido, provavelmente, a diminuição da taxa de esvaziamento gástrico e a um aumento da saciedade em função da distensão estomacal provocada pelo maior tempo de retenção do alimento. Observou-se, ainda para o grupo NF25 em relação ao grupo H, redução (p < 0,05) do ganho de peso corporal como resultado não só da menor ingestão alimentar como também da redução da Digestibilidade aparente da proteína da dieta (Da) e do Quociente de Eficiência Protéica (PER.op) proporcionada pela ingestão do material fibroso. A ingestão da polpa de laranja causou, tanto nos animais normais como nos diabéticos com p < 0,05, redução do tempo de trânsito intestinal, aumento da freqüência de defecação, aumento do peso e volume fecal, alterações estruturais nas vilosidades intestinais e descamação celular da mucosa dos intestinos delgado e grosso. Esses efeitos contribuíram para o aumento da excreção de gordura fecal, tendo como conseqüência direta a redução do teor de colesterol plasmático. Diferentemente dos animais normais, a ingestão da polpa de laranja pelos animais diabéticos induziu ganho de peso corpóreo como resultado do aumento do Balanço de Nitrogênio (BN), do Valor Biológico aparente da proteína (VBa.op), da Utilização Liquida da Proteína (NPU.op) e dos teores de nitrogênio muscular total e não colágeno; foram também verificados aumento do teor de glicogênio hepático e redução dos níveis plasmáticos de glicose e uréia, atenuando os aspectos fisiopatológicos característicos do diabetes, tais como hiperfagia, polidipsia e poliüria. A menor mobilização das reservas energéticas endógenas dos grupo3 DFÍÜ e, principalmente, DF25 permitiu que se verificasse maior peso absoluto dos músculos gastrocnêmicos (não significativo) e da gordura perirrenal (p < 0,05), em relação ao grupo D. Ao final do período experimental os anirnai3 diabéticos também apresentaram redução dos teores plasmáticos de colesterol e triacilgliceròis como reflexo da maior excreção de gordura fecal. Tal fato deveu-se, provavelmente, a redução da biodisponibilidade da gordura da dieta em função dos efeitos da polpa de laranja sobre a morfologia e motilidade intestinal. Em geral, os resultados obtidos indicam que a ingestão da polpa de laranja poderá auxiliar na terapia do diabetes. / Abstract: The chemical composition and some physico-chemical characteristics of orange pulp, a by-product obtained during the industrial production of the orange-juice, were determined. Among these, the particle size distribution was found to be 8.9%, 52.8% and 38.3% for particle sizes larger than 800 µm, between 200 and 500 µm and smaller than 200 µm, respectively; the density 0.46 g/ml; the water binding capacity 3.61 g water/g orange pulp; the neutral detergent fiber (HDF) 32,2% and the proportion of the pectic substances 33.9% Using male Wistar rats, adult, normal and diabetic, a reduction was observed, by the glucose tolerance test, (p < 0.05) in the glycaemia of the normal {80 minutes) and diabetic (60 and 90 minutes) rats that received 10 mg/ml of the orange pulp. Eats were fed during 40 days with diets containing 0% (control), 10% and 25% of the orange pulp, respectively. The three groups of normal rats were designated N, HF1G and MF25, respectively, and the diabetic ones D, DF10 and DF25, As to the normal rats, a reduction (p < 0.05) of food ingestion was observed in the NF25 group probably because of a decrease in gastric emptying rate and an increase in satiety due to the stomach distension caused by the higher stomach retention time of the feed. A reduction (p < 0.05) of body weight gain as result of decrease in food ingestion and lower Apparent Nitrogen Digestibility (AD) and Protein Efficiency Ratio (PER.op) values, was also observed for the NF25 group in relation to the H group, and was probably caused by the ingestion of fibrous material. The orange pulp ingestion induced in both the normal and the diabetic rata, a reduction (p < 0.05) in the intestinal transit time, an increase in the defecation frequency, fecal weight and fecal bulk, and also structural changes in the intestinal villus together with cellular damage of the mucosa of the small and large intestine. These effects increase the excretion of fecal fat thereby reducing the plasma cholesterol level. Orange pulp ingestion by the diabetic rats, unlike ingestion by the normal rata, induced increase body weight as result of higher values for the Nitrogen Balance (HB), Apparent Biological Value (ABV.op), Nitrogen Protein Utilization (NPU.op), Protein Efficiency Ratio (PER.op), total muscular nitrogen and not collagen nitrogen levels. Higher hepatic glycogen and lower post-prandial plasma glucose and urea concentrations were also observed, minimizing the physiopathological aspects such as polyuria, polydipsia and polyphagia of the diabetes, The smaller mobilization of the endogenous energetical reserves of the group DF10, and BF25 in particular, resulted in higher absolute weight of the gastrocnemius muscles (not significant} and peri-kidney fat (p < 0.05) in relation to the D group. At the end of the experimental period the diabetic rata also showed a reduction in plasma triglycerides and plasma cholesterol, as result of higher fecal fat excretion. This effect was probably due to a reduction in the bioavailability of the diet fat as a result of the orange pulp effects on morphology and intestinal motility. To conclude: orange pulp ingestion may be used in the therapy of diabetes. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Sergio Roberto P. Line / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T08:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zaia_AlexandreAugusto_M.pdf: 1476092 bytes, checksum: 3979bca769cc929d5c2a8703d0ec2020 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Durante a atrofia da glândula submandibular de camundongos, produzida por obstrução de seu ducto excretor principal, observou-se aumento progressivo das fibras colágenas tanto nos espaços extra-celulares como intra-lobulares. Fibras elásticas, ausentes nas regiões intra-lobulares de glândulas normais, puderam ser observadas após 8 dias de atrofia circundando estruturas ductiformes que apresentavam acentuada dilatação luminal. Microscopia eletrônica de transmissão mostrou intensa modificação morfológica das células acinares e ductais. As células mioepiteliais apresentaram um "enrugamento" de sua superfície com acúmulo da membrana basal adjacente. Fibras elásticas foram observadas somente em glândulas atróficas localizadas adjacentes às células ductais. O aumento na deposição dos tecidos colágenos e elástico se deve provavelmente a alterações na síntese de hormônios e fatores de crescimento que ocorrem nas células do parênquima glandular durante a atrofia / Abstract: Histochemical detection of collagen and elastic fibers was carried out in duct-ligated submandibular glands of mice. A progressive increase of collagens fibers was observed both in extra-lobular and intra-lobular space. Elastics fibers were not found in the intra-lobular region of normal submandibular glands. This tissue was only found around dilated duct-like strutures, 8 days after ligation. Electron mlcroscopy showed extensive morphologic changes for acinar, ductal cells. Myoepithelial cells showed extensive "wrinkling" of outer plasma membrane leading to a thickening of the associated basement membrane. We belive that changes in the synthesis of growth hormones and other biologically active peptides that occur in'the acinar and ductal cells during atrophy may influence mesenchymal cells to proliferate and to deposit large amounts of extracellular components / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Odontologia

Orientador: Errerias Maciel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T21:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azevedo_JoseRobertoMoreirade_D.pdf: 8560936 bytes, checksum: a16740204335da08a24fe30055b81079 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi determinar concentrações de histamina e glicogênio muscular (gastrocnêmio) e hepático, lactato sanguíneo e ascorbato da adrenal de ratos exercitados, para avaliar com esses parâmetros, respostas adaptativas do organismo frente ao treinamento. Foram usados ratos machos Wistar, pesando inicialmente 250 a 300 g, distribuídos em dois grupos: treinado - TRE (natação com carga* relativa de 8%, 60 min por dia, durante 45 dias) e sedentário - SED. O exercício foi realizado num tanque (100 x 80 x 80 cm) com água a 31±1°C. Foi instituída ainda, uma etapa de 60 min de exercício agudo de natação com sobrecarga* (AGD), para uma parte dos ratos de cada um dos grupos, ficando a outra em repouso (REP). Foram determinados pelos respectivos métodos espectrofotométricosE e fluorimétricosF, os conteúdos de histamina (oftaldialdeídoF), glicogênio (antronaE), lactato (lactímetro) e ascorbato (diclorofenol-indofenolE) , das amostras de ratos sacrificados após o exercício agudo de natação e a partir do repouso. O lactato foi ainda determinado durante o exercício de natação, em sessões intervaladas com sobrecargas fixa* e progressivas. Foram feitas também análises histológicas muscular e da adrenal e análises biométricas referentes aos parâmetros: massa corporal, massa da adrenal, áreas de secção muscular e de secção da adrenal. Diferenças estatísticas significativas (P=O,O5) foram detectadas, quando os resultados dos subgrupos de ratos treinados (TRE) foram comparados com os dos subgrupos de ratos sedentários (SED) , tais como: 1) aumento de histamina muscular no TRE-AGD mais intenso do que nos SED AGD; 2) aumento de glicogênio muscular e hepático nos TRE-REP; 3) depleção de glicogênio muscular e hepático nos TRE-AGD e SED-AGD; 4) aumento de lactato no TRE-AGD mais intenso do que no SED-AGD; 5) grande flutuação de lactato nas comparações pareadas feitas entre os animais reinados e sedentários, embora tenha ocasionalmente havido aumento do mesmo dos últimos; 6) depleção de ascorbato das adrenais no SED-AGD mais acentuada do que no TRE-AGD. As conclusões obtidas desses resultados para cada parâmetro foram: 1) o aumento de histamina observado, após o exercício agudo, reforçou a idéia, de sua participação na homeostasia da microcirculação muscular, durante o exercício a curto prazo; 2) o aumento mais intenso de glicogênio muscular e hepático dos ratos treinados e a sua depleção menos intensa, após o exercício agudo, demonstrou o efeito do treinamento em conservar o glicogênio nesses dois sítios de síntese e degradação; 3) as flutuações de lactato nos dois grupos, em função do tempo e ou da sobrecarga, não refletiram, em todos os testes, o efeito da queda de lactato geralmente esperada pelo treinamento e as diferenças nos níveis de lactato, sugeriu-nos a existência de uma grande variabilidade individual; 4) o estresse físico mais intenso no SED-AGD do que TRE-AGD, pareceu-nos ter sido um determinante da maior depleção de ascorbato; 5) houve efeito do treinamento com respeito aos aumentos da área de secção muscular, da massa relativa e da área de secção da adrenal. Finalmente, a síntese desses resultados, levou-nos a sugerir que a intensidade do exercício imposta aos animais, com o presente protocolo experimental, foi suficiente para produzir a longo prazo, as alterações clássicas relativas ao treinamento / Abstract: The objective of this work was to determine the concentrations of histamine muscular (gastrocnemius) and hepatic glycogen, blood lactate and adrenal ascorbate in rats while they were under the exertion of exercise, in order to evaluate with these parameters, the adaptive response of the organism after being subjected to a period of training. Male wistar rats weighing initially from 250 to 300 g were used. They were distributed into two groups as follows: 1) trained TRE (swimming with a relative lead of 8%, 60 min per day for 45 days) carried out in a tank (100 x 80 x 80 cm) with the water at a temperature of 31± 1°C; and 2) sedentary-SED. In addition, rats from each of the two groups were incorporated in a further stage, a part of which were subjected to a strenuous exercise overload (AGD) consisting of 60 min of swimming and another part which remained at rest (REP). Samples of sacrificed rats from both the group having undergone strenuous swimming exercise and from the group which remained at rest were analysed respectively by spectrophotometryE and fluorimetryF in order to determine the levels of histamine (o-phthaldialdehydeF) glycogen (anthroneE) lactate (lactimetry) and ascorbate (dichlorophenol indophenolE) . The lactate was determined up into a fixed overloads and a progressive one. Also muscular and adrenal histologic analyses and biometric analyses were done in reference to the fallowing parameters: body mass, areas of muscle sections, and areas adrenal sections. Significant statistical differences (P=O.O5) were detected when the resultes of the trained (TRE) subgroup of rats were compared with those of the sedentary (SED) subgroup of rats as follows: 1) more intense increase in muscular histamine in the TRE-AGD than in the TRE-AGD group; 2) increase in the hepatic and muscular glycogen in the TRE-REP group; 3) depletion of hepatic and muscular glycogen in the TRE-AGD and SED-AGD group; 4) more intense increase in lactate in the TRE-AGD than in the SED-AGD group; 5) great fluctuation in the lactate in the paired comparisons between the trained and sedentary animals, although there was an in increase in this lactate level in these latter animals; 6) more accentuated depletion in the ascorbate of the adrenals of the SED-AGD than in the TRE-AGD. The conclusions obtained from these results for each parameter were: 1) the increase in the histamine observed after strenuous exercise reinforced the idea of its participation in the homeostasis of muscular microcirculation during short term exercise; 2) the more intense increase hepatic and muscular glycogen in the trained rats and its less intense depletion after exercise demonstrated the effect of training in conserving the glycogen in the two sites of synthesis and degradation; 3) the fluctuations in lactate in the two groups in function of time and overload, did not reflect in all tests the effect of a drop in lactate level as is generally expected from the training, and the differences in the lactate levels led us to suggest the existence of individual variability 4) the more intense physical stress in the SED-AGD than in the TRE-AGD, appears to have been a determinant in the greater depletion of ascorbate; 5) the training had an effect in relation to the increases of the area or muscular section, of the relative mass and of the are a of the adrenal section. Finally, the synthesis of these results led us to suggest that the intensity of the imposed exercise on the animals, following the present experimental protocol, was sufficient to produce in the long term, the classic alterations relative to the training / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências

Orientador: Maria Alice da Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T21:17:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sverzut_AnaClaudiaMattiello_M.pdf: 17220790 bytes, checksum: bc2809dadaabefe277949e1e63082318 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Os tecidos muscular e nervoso têm sido objetos de estudo da ação de toxinas de vários animais venenosos. O veneno da aranha Phoneutria nigriventer é um exemplo deste fato. PhTx1 e PhTx2 são toxinas isoladas do veneno total da Phoneutria nigriventer. Seus efeitos foram estudados em preparações nervo frênicodiafragma de camundongos incubados em solução aerada de Tyrode à 37°C, contendo 1 ou 5 mg/ml de PhTx1 ou 1mg/ml de PhTx2. Estudos fisiológicos e morfológicos foram realizados com a PhTx1 e somente morfológicos com a PhTx2. As alterações foram analisadas 15, 30, 45 e 60 min após incubação com as toxinas. Os estudos miográficos, através de estimulação indireta, mostraram que a PhTx1 não modificou a tensão das fibras musculares esqueléticas. Além disso, os experimentos eletrofisiológicos não mostraram alteração na frequência e amplitude dos pptms, nem no potencial de repouso da membrana após 60 min da adição da toxina. O microscópio óptico (MO) revelou microvacuolização das fibras musculares na presença de PhTx1, assim como mionecrose, incluindo áreas de hipercontração, perda de miofibrilas, as quais foram instaladas logo após 15 min de contacto entre a toxina e o tecido. A toxina PhTx2 causou mionecrose e heterogeneidade no tamanho e cor da célula que progrediu dos 15 aos 60 minoAtravés de microscópio eletrônico de transmissão (MET) o músculo incubado com PhTx1 demonstrou tumefação do retículo sarcoplasmático, aumento do sarcoplasma celular, desorganização dos sarcômeros, membranas enoveladas e dano mitocondrial. O tecido muscular incubado com PhTx2, mostrou mudanças ultraestruturais similares, mas a mionecrose foi mais extensa e severa aos 60 minoPara ambas as toxinas, os fascículos intra-musculares do nervo frênico mostraram axônios mielinizados com vacúolos dentro da bainha de mielina, assim como, peri- e intra-axoplasmáticos. O citoplasma da célula de Schwann também mostrou vacuolização. Como resultado da vacuolização intramielínica, houve distorção e descompactação da bainha de mielina. As alterações das junções neuromusculares após PhTx1 foram suaves com pouca diminuição de vesículas sinápticas no interior do terminal nervoso o qual tornou-se alongado e fino. A goteira sináptica mostrou-se estreita. Após incubação com a PhTx2, as junções neuromusculares mostraram terminais nervosos depletados de vesículas sinápticas e mitocôndrias tumefeitas e rompidas. O axolema era freqüentemente visto invaginando-se ou seqüestrando porções do axoplasma, ou estava ausente em certas porções da goteira. As dobras pós-sinápticas eram estreitas e dispersas; algumas membranas enoveladas foram vistas entre estas dobras. As alterações morfológicas induzidas pela PhTx2 no músculo e nervo podem ser compatíveis com a ativação dos canais de sódio presentes nestas membranas excitáveis. O influxo de sódio foi provavelmente acompanhado por influxo e um aumento da concentração intracelular de cálcio. O cálcio intracelular (citosólico) pode ter sido liberado pelo retículo sarcoplasmático e/ou pela mitocôndria. A PhTx1 não teve ação despolarizante ou hiperpolarizante na junção neuromuscular, mas foi contudo tóxica para estruturas musculares e nervosas. O sítio de ação da PhTx1 não foi definido sobre as presentes condições experimentais, mas pode envolver o sarcolema e axolema como sugerido pelas anormalidades morfológicas as quais podem ter sido causadas por distúrbios hidroeletrolíticos / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Claudia Thereza Guimarães de Lemos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Estudos de Linguagem / Made available in DSpace on 2018-07-20T03:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_EduardoCalil_D.pdf: 29151778 bytes, checksum: 9f28df9e8ce08c853b73ed2fb138b21a (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: O presente trabalho se propõe a refletir sobre o lugar de autor no processo de aquisição de linguagem escrita, dentro de uma perspectiva não subjetiva do sujeito. Esta discussão foi realizada a partir de dados coletados em situações escolares, registradas em vídeo, nas quais duas crianças, de aproximadamente 6 anos, escreviam conjuntamente "histórias inventadas" a pedido da professora. A análise deste material parte do pressuposto de que há um movimento de mútua constituição na relação criançallinguagem (escrita). Desta forma, procurou-se olhar para este processo através de lugares que pudessem indiciar este movimento, abandonando-se a idéia de que tal relação possa se dar a partir de categorias da língua já constituída. o primeiro ponto a ser discutido procurou mostrar que o processo de produção de texto deve considerar tanto as direções do sujeito sobre o texto, quanto 0S efeitos do escrito (dito) sobre o próprio sujeito, estabelecendo diferentes posições discursivas e indicando a impossibilidade de se prever de antemão os caminhos daquilo que se vai. escrever. Estas movimentações são marcadas por tensões entre sujeito/sentido que colocam em xeque a idéia de linearidade, homogeneidade que o texto final produz. Outro lugar que permitiu dar uma certa visibilidade para a relação criançallinguagem (escrita) e refletir sobre a noção de autor aqui em jogo foi as rasuras (orais e escritas) deixadas neste processo de produção. A análise destas marcas apontou para dois modos de funcionamento da linguagem que afetam o sujeito na sua relação com o texto. Por um lado, as posições discursivas relacionadas ao discurso pedagógico em tomo do "aprendizado" da escrita. Por outro, o movimento de deslocamento do sentido produzido através do equívoco constitutivo da língua. O processo de ressignificação está relacionado a este m.ovimento, na medida em que garante uma certa fixação destes deslocamentos. A reflexão em tomo da noção de autor prossegue através dos processos metafórico e metonímico que regem o funcionamento da linguagem. Esta discussão permitiu estabelecer algumas relações entre o sujeito e o modo como se engancha em determinados textos (marcados pela historicidade) que acabam produzindo efeitos que exigem interpretação. Estes três lugares de reflexão sugerem que a posição de autor está relacionada ao movimento inconcluso que caracteriza o funcionamento da linguagem. Os pontos de ancoramento decorrentes deste processo indica a necessidade de se ir em direção a algo que possa ajudar a entender melhor o que os produzem / Abstract: not informed. / Doutorado / Doutor em Linguística

La edad influye en el empaquetamiento adecuado de la cromatina espermática haciéndola más vulnerable con el transcurrir del tiempo. Las protaminas son las proteínas nucleares más abundantes en el espermatozoide maduro y empaquetan fuertemente el genoma paterno dentro del núcleo espermático, haciéndolo inaccesible a nucleasas o mutágenos, protegiendo de esta manera al ADN espermático. Ratones con sólo una copia de estos genes son infértiles, lo que demuestra que son esenciales para la función espermática normal. El objetivo de esta tesis fue investigar si existe relación entre la edad masculina y la protaminación espermática a nivel fisiológico y molecular. Se usaron ratones (Mus musculus Linnaeus, 1758) macho de la cepa C57BLACK6 (C57BL6) (20 – 25 g), divididos en dos grupos etarios: ratones de 3-4 meses (Grupo joven: G1) y 18-21 meses (Grupo viejo: G2). Se emplearon espermatozoides obtenidos de la cola del epidídimo para los análisis de movilidad espermática, fragmentación del ADN mediante el ensayo cometa bidimensional y estrés oxidativo mediante TBARS. Se utilizó tejido testicular para evaluar la expresión génica de Prm1, Prm2, Tnp1 y Tnp2, mediante PCR en tiempo real (RT-qPCR). Respecto a las velocidades de movimiento espermático se observó que el G1 presentó mayores valores que G2, en cuanto a MOT (50.63 ± 6.60 % vs 30.38 ± 5.16 %, p<0.05) y MR (24.50 ± 3.04 % vs 13.92 ± 3.02 %, p<0.05), mientras que ME fue mayor en G2 que en G1 (69.31 ± 5.31 % vs 48.38 ± 7.39 %, p<0.05). Respecto a los tipos de desplazamiento de los espermatozoides, se observó que G1 presentó mayores valores que G2 respecto a VAP (67.89 ± 5.68 % vs 52.12 ± 3.38 %, p<0.05) y VSL (43.15 ± 3.47 % vs 30.68 ± 2.45 %, p<0.05). El estrés oxidativo medido con TBARS no presentó diferencias entre el G1 y G2 (132.50 ± 9.64 ng MDA/106 spz vs 135.00 ± 10.81 ng MDA/106 spz; p>0.05). Tampoco se observaron diferencias significativas en la proporción de espermatozoides con ADN fragmentado entre los grupos G1 y G2 (20.51 ± 1.41 % vs 20.11 ± 1.29 %, p>0.05), ni en la cantidad de ADN fragmentado por espermatozoide entre ambos grupos (17.36 ± 0.49 % vs 17.76 ± 0.62 %, p>0.05). La comparación de los niveles de expresión de los genes Prm1, Prm2, Tnp1 y Tnp2 demostró que Prm2 y Tnp1 en el G2 se sobreexpresan observándose una diferencia significativa respecto al G1 (p<0.05), sin embargo, Prm1 y Tnp2 no mostraron diferencias significativas (p>0.05). Si bien el aumento de la edad presentó diferencias significativas con los niveles de expresión Prm2 y Tnp1, esto no sería suficiente para ejercer algún impacto sobre la producción de ROS y el aumento de la fragmentación del ADN espermático, debido quizás al papel protagónico de Prm1 en la protaminación espermática reportado en todas las especies estudiadas hasta la fecha y cuyos niveles de expresión no son alterados en el grupo de ratones viejos. Se concluye que el incremento de la edad no altera la protaminación espermática en ratones. / --- Age has an influence in the proper packaging of sperm chromatin, rendering it more vulnerable as time goes on. Protamines are the most abundant nuclear proteins in the mature spermatozoon and they are responsible for packing the paternal genome inside the sperm cell nucleus, making it inaccessible to nucleases or mutagens, thus protecting it. Mice with only one copy of these genes are infertile, which proves that are essential for normal spermatic function. The aim of this study was to look for a correlation between male age and sperm protamination at molecular and physiological levels. Male mice (Mus musculus Linnaeus, 1758) from C57BLACK6 (C57BL6) strain (20-25g) were used and distributed in two age groups: 3-4 month old mice ("Young" group: G1) and 18-21 month old ("Elderly" group: G2). Spermatozoa obtained from the epididymis tail were employed in sperm motility analysis, DNA fragmentation analysis by bidimensional comet assay, and oxidative stress by TBARS assay. Testicular tissue was used for assess the gene expression of Prm1, Prm2, Tnp1 and Tnp2, by real time PCR (RT-qPCR). When analyzing sperm motility, MOT (50.63 ± 6.60% vs 30.38 ± 5.16 %) and MR (24.50 ± 3.04 % vs 13.92 ± 3.02 %) were higher in G1 compared to G2 (p<0.05). However, ME was higher in G2 compared to G1 (69.31 ± 5.31 % vs 48.38 ± 7.39 %, respectively) (p<0.05). Likewise, when analyzing displacement types in the sperm cells, VAP (67.89 ± 5.68 % vs 52.12 ± 3.38 %, p<0.05) and VSL (43.15 ± 3.47 % vs 30.68 ± 2.45 %, p<0.05) were higher in G1 compared to G2. Oxidative stress levels measured by TBARS did not show any differences between G1 and G2 (132.50 ± 9.64 ng MDA/106 spz vs 135.00 ± 10.81 ng MDA/106 spz; p>0.05). The proportion of sperm cells with fragmented DNA were not significantly different (G1 vs G2, 20.51 ± 1.41 % vs 20.11 ± 1.29 % respectively, p>0.05) and there were also no differences in the percentage of fragmented DNA of those subpopulations (17.36 ± 0.49 % vs 17.76 ± 0.62 %, p>0.05). Gene expression levels of Prm2 and Tnp1 were significantly overexpressed in G2 in comparison to G1 (p<0.05); however, Prm1 and Tnp2 did not show significant differences between both groups (p<0.05). Despite of age had an influence in expression levels of Prm2 and Tnp1, it would not be relevant enough to alter ROS production and sperm DNA fragmentation. It was probably due to the central role of Prm1 in sperm protamination, something widely reported in all studied species to date, which levels were not altered in the elderly group. As a conclusion, increase of age does not alter sperm protamination in mice. / Tesis

El presente plan de negocio se orienta a la comercialización de gamitana en supermercados Tottus, Metro y algunos restaurantes de comida selvática en Lima. Existe aún un desconocimiento de esta especie. Durante el transcurso de la investigación fue posible identificar que la promoción es el principal factor para incrementar la demanda de esta especie, consumida en Lima por la población migrante de la selva. La empresa denominada “Gami Selva” tiene como proveedor de gamitana a Amazon Fish, empresa familiar ubicada en el distrito de San Luis de Shuaro, provincia Chanchamayo, en el departamento de Junín. Este proveedor actualmente comercializa gamitana en Lima, a través de Cencosud, tiendas Metro. La ubicación del proveedor es estratégica, pues su cercanía a Lima permite que el pescado llegue fresco y con excelentes características organolépticas. Es considerado como el mejor producto dentro de la relación de proveedores de gamitana de Cencosud. Sin embargo, su interés y conocimiento está en la producción, no en la comercialización. Para ello, se ha considerado mejorar algunos aspectos en la producción, contando con un operario para apoyar en las labores en campo. De esta manera, el plan de negocio es un negocio atractivo, donde el consumidor final es la población migrante de la selva que vive en Lima. La propuesta de valor es contar con un producto sumamente fresco, de buen tamaño, 500 - 700 g en promedio por pescado, y con excelentes características organolépticas. Asimismo, la cercanía a Lima permite que el pescado llegue en un máximo de 10 horas. El entorno es favorable, debido al crecimiento de la población migrante de la selva en Lima, a la calidad del agua en la zona de producción y a los pocos competidores existentes en el mercado. El horizonte de tiempo calculado es de 10 años. El mercado potencial de inicio es de 13.910 kg/gamitana/año, se incrementará 15% de las ventas promedio en supermercados para el periodo comprendido entre los años 2 y 3, y 10% para ese mismo periodo en restaurantes. En el año 3, se incursionará en Plaza Vea. Luego, los crecimientos en venta se darán en 20% para Tottus y Metro, 15% en Plaza Vea y 15% en restaurantes para el periodo de los años 5 y 6. Después, los incrementos en ventas se darán para los años 7, 8 y 9 en 25% para Tottus y Metro y 20% para Plaza Vea y restaurantes. Para el año 10, las ventas se mantendrán iguales al año anterior. El flujo de caja económico tendrá un ingreso por ventas de S/ 213.344 en el año 1, que aumentará a S/ 12.174.56 en el año 10. Los costos de ventas son de S/ 110.400 en el año 1, y se incrementarán a S/ 1.621.284 en el año 10. La compra de materia prima representará el 88% de los costos de ventas. Los gastos de operación serán de S/ 129.996 en el año 1, y disminuirán a S/ 103.176 en el año 10. Esta reducción se debe a los gastos de marketing, los cuales serán mayores al inicio y luego disminuirán. El COK es de 12%, basado en el costo de oportunidad que representa para los socios, con un VANE de S/ 809.357, un TIRE de 32,43%, un VANF de S/ 802.089 y un TIRF de 35,91%.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Una de las principales consecuencias producidas por la diabetes mellitus en personas, es el desarrollo de heridas crónicas. Hoy en día, constituyen un problema de salud pública, debido a que son cada vez más frecuentes y se asocian con altos costos de tratamiento, por lo que se han estudiado diversos agentes terapéuticos. La Calreticulina (CRT) es una proteína chaperona y ligadora de calcio del retículo endoplásmico, ampliamente distribuida en las células eucariotas que se expresa en las células de diferentes mamíferos. Esta proteína, mediante estudios in vivo e in vitro, ha demostrado tener un importante rol en la cicatrización de heridas cutáneas y diversos procesos asociados con la reparación cutánea, mejorando la migración y proliferación celular. La aplicación tópica de CRT produjo un marcado aumento de la tasa y calidad de la cicatrización de heridas en modelos experimentales en porcinos, y una disminución significativa en el tiempo para completar el cierre de heridas en ratones genéticamente diabéticos tratados con CRT humana y de conejo. Por otro lado, la calreticulina de Trypanosoma cruzi (TcCRT), además de ser altamente homóloga a su contraparte humana, ha demostrado ser más eficiente que la calreticulina de humano en la aceleración de la cicatrización de heridas. Sin embargo, no hay información con respecto a la aplicación tópica de TcCRT en heridas de pacientes diabéticos. El objetivo principal de esta memoria de título fue analizar el efecto de la proteína TcCRT en dos concentraciones diferentes en la cicatrización de heridas in vivo en ratas diabéticas. Una concentración baja de 2.5 ng/μl fue más efectiva estimulando el proceso de reepitelización, la formación de tejido de granulación y la maduración de la dermis. Estos resultados reafirman el efecto de TcCRT sobre la cicatrización en un modelo experimental realizado en ratas diabéticas, augurando su potencial uso como agente terapéutico tópico en el tratamiento de heridas crónicas. / One of the main consequences produced by diabetes mellitus in people is the development of chronic wounds. Nowadays, they constitute a public health problem, because they are increasingly frequent and are associated with high cost of treatment, thus several therapeutic alternatives have been studied. Calreticulin (CRT) is a calcium-binding, chaperone protein of the endoplasmic reticulum, widely distributed in eukaryotic cells, and expressed in the cells of different mammals. This protein has shown to play an important role in healing of cutaneous wounds and diverse processes associated with skin repair through in vivo and in vitro studies, improving cell migration and proliferation. The topical application of CRT produced a marked increase in the rate and quality of wound healing in pig experimental models, and a significant decrease in time to complete the closure of wounds in genetically diabetic mice treated with human and rabbit CRT. On the other hand, Trypanosoma cruzi calreticulin (TcCRT), in addition to being highly homologous to its human counterpart, has shown to be more efficient than human calreticulin in accelerating wound healing. However, there is no information regarding the topical application of TcCRT in diabetic wounds. The main aim of this research was to analyze the effect of the TcCRT protein in two different concentrations on the in vivo wound healing process in diabetic rats. A low concentration of 2.5 ng/μl was more effective in stimulating the reepithelialization process, the granulation tissue formation and the dermis maturation. These results reaffirm the effect of TcCRT on the healing process in an experimental model performed in diabetic rats, augurating its potential use as a topical therapeutic agent in the treatment of chronic wounds. / Proyecto FONDECYT 11130257

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En Chile se han reconocido tradicionalmente dos vectores de la enfermedad de Chagas: Triatoma infestans (vector doméstico), que se encuentra prácticamente erradicado de las viviendas humanas; y Mepraia espinolai (vector silvestre), que ha cobrado particular importancia en los últimos años debido al potencial que tiene de invadir y colonizar viviendas humanas. El objetivo de esta memoria fue determinar en terreno la capacidad de M. spinolai para seleccionar hospederos, ocupando como modelo al conejo europeo (Oryctolagus cunuculus) y a roedores silvestres. El diseño experimental consistió en colocar en terreno una jaula con un conejo de pequeño tamaño, otra con un roedor silvestre y una tercera jaula vacía como control. Las jaulas fueron colocadas sobre una bandeja plástica que permitía recolectar las vinchucas atraídas por los diferentes hospederos. Para determinar el efecto de la temperatura radiante superficial de los hospederos, se realizó el mismo diseño anterior, pero las jaulas fueron cubiertas con plumavit de 5 cm. de espesor, lo que permitía mantenerlas aisladas de la temperatura ambiental. Con un equipo datalogger se obtuvo un registro de la temperatura al interior y exterior de las jaulas. En el primer diseño experimental se observó que las vinchucas seleccionaron a los animales y no al control. De un total de 730 vinchucas recolectadas en los 79 experimentos realizados, un 65,38 % fueron capturadas en el conejo, un 35,34 % fueron capturadas en el roedor y sólo un 0,27 % de ellas se encontraron en el control. Estas diferencias fueron significativas con el control, pero no entre animales. Al comparar los promedios de insectos atraídos por cada mamífero no se encontraron diferencias significativas. Las fechas en que se realizó el estudio influyeron significativamente en el promedio de insectos capturados. Al comparar entre meses dentro del año 2004, no se encontraron diferencias significativas en ambos mamíferos, a diferencia de lo que ocurrió en el año 2005. En la serie de experimentos con jaulas cubiertas con plumavit, se observó que de un total de 188 insectos capturados en los 55 experimentos realizados, un 51,6 % fueron recolectados en el conejo, un 45,74 % fueron recolectadas en el roedor y un 2,65 % de ellos se encontraron en el control. Las diferencias fueron significativas con el control, pero no entre mamíferos. Tampoco se obtuvo un resultado significativo al comparar los promedios de insectos atraídos por cada animal. Las fechas no influyeron significativamente en los promedios de insectos capturados. Sin embargo, al comparar la selección de cada animal entre meses, sí se encontraron diferencias significativas. No se encontraron diferencias significativas al comparar la captura de vinchucas entre el conejo c/plumavit y s/plumavit. Lo mismo se observó en el roedor. Con los datos obtenidos se puede concluir que M. spinolai es un insecto oportunista, el cual se alimenta dependiendo de la oferta disponible de mamíferos en el ambiente. Para este triatomino la temperatura ambiental y el calor radiante de los hospederos tienen un importante rol en su actividad y en la atracción hacia una presa animal. / FONDECYT No.1040711

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas, zoonosis ampliamente distribuida en América, es causada por el protozoo Trypanosoma cruzi que es transmitido principalmente a través de las deyecciones de insectos hematófagos de la subfamilia Reduviidae. En Chile existen dos vectores reconocidos de la enfermedad de Chagas: Triatoma infestans (ciclo doméstico) y Mepraia spinolai (ciclo silvestre), denominadas vulgarmente como vinchucas. Estos artrópodos al adaptarse a una alimentación exclusiva de sangre han desarrollado modificaciones anatómicas, fisiológicas y conductuales. Existen diversos factores claves de sus potenciales hospederos que le permiten al insecto realizar con éxito la detección y selección de éstos. Entre los más relevantes se pueden citar la temperatura superficial, CO2, estímulos visuales, olfativos y factores nutricionales de la sangre. El objetivo de esta memoria fue determinar la selección de hospedero por M. spinolai bajo condiciones de laboratorio, ocupando como modelos a dos hospederos habituales de este insecto: Oryctolagus cuniculus (conejo europeo) y Octodon degus (degu). Se estableció la capacidad de M. spinolai de seleccionar entre estos dos hospederos en función de la diferencia de temperatura superficial radiante, del CO2 y olor emitido por estos hospederos, como factores de atracción efectivos para el insecto. En el laboratorio se confrontaron insectos de terreno y laboratorio, frente a conejos (adultos y juveniles) y degus (adultos). Se construyeron tres tipos de dispositivos con el fin de que el insecto, estando expuesto según fuera el caso sólo a la temperatura, sólo al olor (con o sin supresión del CO2) o a todos los factores de atracción emitidos por hospederos, pudiera seleccionar a uno de los mamíferos. Se monitoreó la temperatura ambiental y superficial de los hospederos, el CO2 emitido y la humedad ambiental, además se midió la frecuencia de elección de hospedero y la latencia de elección. Se observó que vinchucas de terreno, enfrentadas a gabinetes con o sin hospedero, seleccionaron significativamente más los que alojaron a un animal adulto (p < 0,02). Cuando los insectos fueron confrontados al par degu adulto/conejo juvenil, demoraron menos tiempo en elegir al degu (p = 0,025). Cuando los insectos estuvieron expuestos sólo a la temperatura superficial, prefirieron al conejo adulto (p < 0,05), excepto los insectos de terreno que prefirieron al roedor cuando 2 este fue confrontado al conejo juvenil (p < 0,05). En el experimento en que a las vinchucas sólo se les permitió percibir el olor de los mamíferos, los insectos prefirieron conejos a los que no se les suprimió su emisión de CO2 (p < 0,001) demorándose menor tiempo las vinchucas de terreno en seleccionar a sus hospederos (p = 0,01). Los resultados de los otros experimentos que evaluaron la importancia del olor y CO2 emitido por los hospederos, no permiten realizar afirmaciones concluyentes respecto a preferencia e importancia de claves olfativas. Con los datos obtenidos se puede concluir que M. spinolai prefiere y selecciona hospederos adultos, sin que pareciese importar el efecto especie. Además el insecto es más atraído por fuentes térmicas cuya magnitud sobrepase la temperatura ambiental, cuando ésta se encuentra dentro de su rango óptimo de preferencia. Cuando a las vinchucas se les permitió estar en contacto sólo con el olor emitido por los potenciales hospederos, hubo una clara preferencia sólo por el conejo al que no se le suprimió su emisión de CO2. Estos resultados nos indican que bajo condiciones de laboratorio, la temperatura superficial y el olor son los estímulos más relevantes en la decisión de selección de hospedero por parte de M. spinolai. Además, se puede suponer que las claves emitidas por los hospederos deben sobrepasar un umbral sobre el cual M. spinolai va a elegir oportunísticamente. / Proyecto FONDECYT No.1040711