Os Mollicutes causam doenças em várias espécies animais de importância econômica, inclusive em bovinos. Neste estudo, foi avaliada por concentração inibitória mínima (CIM) e citometria de fluxo, a atividade de oito agentes antibacterianos (enrofloxacina, ciprofloxacina, gentamicina, claritromicina, cloranfenicol, oxitetraclina, tiamulina e tilosina) contra Ureaplasma diversum. Foram analisadas 24 amostras de isolados de campo oriundas da mucosa genital de fêmeas bovinas. As amostras foram confirmadas por crescimento em caldo, placa e por PCR. Os inóculos foram submetidos à analise de suscetibilidade aos antibióticos pelo método da microdiluição em microplaca e posteriormente analisados pelo citômetro de fluxo a fim de avaliar a atividade antimicrobiana nas células. A claritromicina apresentou os maiores índices de inibição in vitro, sendo a gentamicina considerada o antibiótico de menor espectro de ação nesse estudo. De acordo com as análises do citômetro, a gentamicina apresentou o menor número de células viáveis enquanto a tiamulina apresentou o maior número. Embora haja resultados destoantes entre as técnicas utilizadas, o citômetro de fluxo pode ser utilizado como uma boa ferramenta para auxiliar a avaliação da suscetibilidade desses microrganismos a antibióticos. / The Mollicutes cause disease in several economically important species, including cattle. In this study, was evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) and flow cytometry, the activity of eight antibacterial agents (enrofloxacin, ciprofloxacin, gentamicin, clarithromycin, chloramphenicol, oxitetraclina, tiamulin and tylosin) against Ureaplasma diversum. We analyzed 24 samples of field isolates originating from the genital mucosa of cows. The samples were confirmed by growth in broth, plate, and PCR. The inoculations were subjected to analysis of susceptibility to antibiotics by the method of micro-dilution plate and then analyzed by flow cytometry to assess the antimicrobial activity in cells. Clarithromycin showed the highest levels of inhibition in vitro, the antibiotic gentamicin considered lower spectrum of action in this study. According to the analysis of the flow cytometer, gentamicin showed the lowest number of viable cells as tiamulin showed the greatest number. Although there are divergent results between the techniques used, flow cytometry can be used as a good tool even help assess the susceptibility of microorganisms to antibiotics.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6095.pdf: 2718900 bytes, checksum: c4d734a7b2927b9a3c31ecfb042e26bd (MD5) Previous issue date: 2014-04-16 / Many efforts have been dedicated in the searching of natural compounds which are suitable to be applied in food conservation. Among them, the chitosan has presented promising results concerning the antimicrobial activity, structural preservation and delay of fruits senescence. However, the chitosan, as found commercially, is soluble only in acidic medium solutions what is considered a hindrance for fully applications as food conservative. In this sense, chitosan derivations which are able to be solubilized in neutral pH have been developed. The N,N,N Trimethylchitosan (TMC) is one of them, characterized as a hydrosoluble derivative of chitosan, which has been considered as an efficient antimicrobial agent with positive action as fresh food conservative. The aim of the present was the evaluation of the antimicrobial activity of the TMC against Gram-positive and Gram-negative bacteria and filament fungi. The TMC antimicrobial activity was assessed by comparing with the Commercial Chitosan (CC), by means of the determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC), following the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) according to M7-A6 (NCCLS, 2003) and M38-A (NCCLS, 2002) standards, both recognized by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Additionally, the TMC and CC antifungal activity was carried out by recoding the visual fungi growth and estimated from the percentage of infected samples by the fungy on cut faces of grape-tomatoes (Solanum lycopersicum variety cerasiforme), in coated and non-coated conditions, along seven days of incubation. The results concerning antibacterial activity points to a greater action of the TMC when comparing to some analysis performed on CC coating against four of the six strains analyzed: Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Salmonella enterica. Nevetheless the CC antifungal activity was considerable superior to that observed to TMC for three different fungi tested: Penicillium sp., Aspergillus flavus standard and Aspergillus flavus wild. However, both polymers showed high antibacterial and antifungal activity and are therefore considered as natural agents with relevant antimicrobial potential for the fresh food conservation. / Muitos têm sido os esforços pela procura de substâncias naturais que possam ser aplicadas à conservação de alimentos. Dentre as substâncias em estudo, a quitosana tem apresentado resultados promissores tanto com relação à atividade antimicrobiana quanto na manutenção estrutural de alimentos e redução da senescência em frutos. No entanto, a quitosana, em sua forma comercial, é solúvel apenas em soluções ácidas diluídas, o que dificulta sua plena utilização como conservante alimentício. Dessa forma, derivados de quitosana que apresentem capacidade de solubilização em pH neutro têm sido desenvolvidos. Dentre esses derivados a N,N,N-trimetilquitosana (TMQ), um polímero hidrossolúvel derivado da quitosana, tem sido avaliado como promissor agente antimicrobiano e conservador de alimentos frescos. Assim, o presente projeto teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana da N,N,N-trimetilquitosana sobre o crescimento de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e de fungos filamentosos. A atividade antimicrobiana da TMQ foi avaliada mediante comparação com a Quitosana Comercial (QC) pela determinação das Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) a partir de testes padronizados pela Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), segundo suas normas M7-A6 (NCCLS, 2003) e M38-A (NCCLS, 2002), ambas reconhecidas pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Além disso, a avaliação da atividade antifúngica das substâncias foi realizada mediante leitura visual e estimada a partir do percentual de amostras infectadas pelos fungos sobre fatias de tomatecereja (Solanum lycopersicum variedade cerasiforme) revestidas e não revestidas, ao longo de sete dias de incubação. Os resultados indicaram uma maior atividade antibacteriana da TMQ em relação à QC para quatro das seis cepas bacterianas analisadas: Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Salmonella enterica. No entanto, a atividade antifúngica da QC superou a da TMQ para os três fungos testados: Penicillium sp., Aspergillus flavus padrão e Aspergillus flavus selvagem. Entretanto, ambos os polímeros avaliados apresentaram atividade antibacteriana e antifúngica satisfatória sendo, portanto, considerados como agentes naturais com potencial antimicrobiano relevante para a conservação de alimentos frescos.

Bordetella bronchiseptica é um agente respiratório zoonótico comumente encontrado em diversars espécies animais domésticos como cães, gatos, coelhos, suínos, aves e equinos. As infecções em humanos ocorrem ocasionalmente, sendo descritas com maior freqüência em indivíduos imunocomprometidos, mas relatos de casos de doença em adultos saudáveis e crianças têm aumentado. O presente estudo teve como objetivos determinar o perfil de resistência antimicrobiana de cepas de B. bronchiseptica isoladas de cães, gatos, coelhos e suínos, caracterizar as cepas pela eletroforese em campo pulsado (PFGE), e comparar os resultados obtidos com os dados epidemiológicos. Foram avaliadas 145 cepas e estas apresentaram 100% de resistência a ampicilina, penicilina, espectinomicina, clindamicina, tiamulina e tilosina. Taxas de resistência superiores a 95% das cepas foram observadas frente a tilmicosina, danofloxacina e ceftiofur. Os antimicrobianos com menores taxas de resistência foram enrofloxacina (2,1%) e clortetraciclina (11 %). As cepas isoladas de coelhos apresentaram menores taxas de resistência que as de suínos e de animais de companhia. A caracterização das cepas pela PFGE permitiu a separação de acordo com as espécies de origem em diferentes pulsotipos. A caracterização do agente, principalmente no que se refere à resistência a antimicrobianos, será de grande utilidade para os veterinários no controle das infecções pelo mesmo em suínos, animais de companhia e coelhos, visto que os dados sobre este agente etiológico no Brasil são escassos / Bordefella bronchisepfica is a zoonotic respiratory agent commonly found in domestic animais as dogs, cats, rabbit, swine, birds and horses, Infections in humans occur rarely and have been described more frequently in immunocompromised individuais, but reports of cases of illness in healthy adults and children have increased. This study aims to characterize the resistance profile of B. bronchiseptica strains isolated from dogs, cats, rabbits and pigs and evaluate the strains by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), comparing the results with epidemiological data. From 145 strains tested 100% presented resistance to ampicillin, penicillin, spectinomycin, clindamycin, tiamulin and tylosin. Resistance rates higher than 95% were found against tilmicosin, danofloxacin and ceftiofur. The antimicrobials with lower resistance rates were enrofloxacin (2.1 %) and chlortetracycline (11 %). Strains isolated from rabbits presented low resistance rates when compared with swine and pet animais. The PFGE analysis separated the strains according specie of origin in different pulsotypes. The agent characterization, mainly in relation with antimicrobial resistance will be of great help to veterinarians in control of infections in swine, pets and rabbits, since data about this bacteria in Brazil are rare

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2018-03-05T14:21:12Z No. of bitstreams: 2 Juliete_Souza2017.pdf: 1034930 bytes, checksum: b1f11241cc86452c59ec27f91ef18252 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T14:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Juliete_Souza2017.pdf: 1034930 bytes, checksum: b1f11241cc86452c59ec27f91ef18252 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / The genus Zanthoxylum comprises species distributed throughout tropical regions and temperate regions mainly. The plants of this genus are of great ethnobotanical, phytochemical importance. Z. caribaeum species are popularly known as thorn-billed thorns, thorny thorns, black hawthorn, stinky mammals, and stalks, and require further studies on its biological potential. In this study, the chemical composition, antimicrobial, antioxidant and acaricidal activities from different vegetal extracts (aqueous, ethanol, methanol, hexane, acetonide, dichloromethane and ethyl acetate) and from this species essencial oil were investigated. It was also determined the chemical composition of the essential oil of Z. caribaeum leaves through gas chromatography coupled to mass spectrometry (CG/MS), the antimicrobial activity of the extracts and of the essential oil was determined by measuring the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) using broth dilution technique against pathogenic microorganisms such as Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium (ATCC 14028), Salmonella enterica subspecies enterica serovar Enteretidis (ATCC 13076), Escherichia coli (ATCC 25922), Klebsiella pneumoniae ATCC 13883), Proteus mirabilis (ATCC 25933), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Bacillus subtilis subspecies spizizenii (CCCD B005), yeast Candida albicans (ATCC 10231) and against different serotypes of Salmonella enterica, occuring isolated in the western region of Paraná, Brazil. It was also evaluated the antioxidant activity of the essential oil by the DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) free radical capture method, as well as its repellent capacity against Dermanyssus gallinae (Panzer) (Acari: Dermanyssidae), using Y-olfactometer. In general, the GC/MS of the essential oil was dominated by terpenes, the major compounds being Germacrene-D, -Panasinsene, -Selinene, Varidiflorene and -Elemene. Regarding the antimicrobial activity, except for the aqueous extract, all the extracts showed antimicrobial activity, in addition, the essential oil was effective against all the Gram-positive and Gram-negative bacteria tested and some different serotypes of Salmonella enterica. In relation to the antioxidant activity, the essential oil presented high antioxidant capacity, besides a repellent action of 79% against the mite D. gallinae. Thus, it is concluded that the results contribute to the chemical and biological characterization of the species Z. caribaeum, being a promising source of secondary metabolites with biological activities. / O gênero Zanthoxylum compreende espécies distribuídas mundialmente, principalmente em regiões tropicais e regiões temperadas. As plantas deste gênero têm grande importância etnobotânica, fitoquímica e a espécie Z. caribaeum é conhecida popularmente por espinho-de-barrão, espinho cheiroso, espinheiro-preto, mamiqueira-fedorenta, pau-de-barrão e necessita de mais estudos a respeito de seu potencial biológico. Diante disto, esta espécie foi o objeto de estudo, na qual foi investigada a composição química e as atividades biológicas antimicrobiana, antioxidante e acaricida dos diferentes extratos vegetais (aquoso, etanolico, metanolico, hexanico, acetonico, diclorometanico e de acetato de etila) e do óleo essencial. Também foi determinada a composição química do óleo essencial das folhas de Z. caribaeum através de cromatografia gasosa acoplada a espectofometria de massas (CG/EM), a atividade antimicrobiana dos extratos e do óleo essencial foi realizada pela determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) utilizando a técnica de diluição em caldo frente microrganismos patogênicos como Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Typhimurium (ATCC 14028), Salmonella entérica subespécie enterica sorovar Enteretidis (ATCC 13076), Escherichia coli (ATCC 25922), Klebsiella pneumoniae (ATCC 13883), Proteus mirabilis (ATCC 25933), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Bacillus subtilis subespécie spizizenii (CCCD B005), a levedura Candida albicans (ATCC 10231) e frente a diferentes sorotipos de Salmonella enterica, de maior ocorrência e isoladas na região oeste do Paraná, Brasil. Avaliou-se também a atividade antioxidante do óleo essencial pelo método de captura de radicais livres DPPH (2,2difenil-1-picril-hidrazil), bem como, a sua capacidade repelente ao ácaro Dermanyssus gallinae (Panzer) (Acari: Dermanyssidae) pela utilização de olfatômetro em Y. De maneira geral, a CG/EM do óleo essencial verificou-se o predomínio de terpenos, sendo os compostos majoritários o Germacreno-D, -Panasinseno, -Selineno, Varidifloreno e -Elemeno. Em relação a atividade antimicrobiana, com exceção do extrato aquoso, todos os extratos vegetais apresentaram atividade antimicrobiana, além disto, o óleo essencial foi efetivo frente a todas as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas testadas e alguns diferentes sorotipos de Salmonella enterica. Em relação a atividade antioxidante, o óleo essencial apresentou elevada capacidade antioxidante, além de ação repelente de 79% frente ao ácaro D. gallinae. Desta forma, conclui-se que os resultados contribuem para a caracterização química e biológica da espécie Z. caribaeum, sendo uma fonte promissora de metabolitos secundários com atividades biológicas.

Orientador: Patricia da Silva Melo, Priscyla Daniely Marcato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas / Made available in DSpace on 2018-08-26T08:22:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_JulianadeCassia_M.pdf: 2326263 bytes, checksum: 5774dc06c3b8cd0a38cfb05b3dbd8247 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com o objetivo de entender melhor a toxicidade das nanopartículas de prata biogênicas, estas foram preparadas utilizando a rota biotecnológica e extracelular com o fungo Fusarium oxysporum. As nanopartículas de prata biogênicas foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e absorbância na região do UV/Visível. O tamanho das nanopartículas foi determinado pela a técnica de análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) utilizando o equipamento NanoSight, e por espectroscopia de correlação de fótons utilizando o equipamento ZetaSizer. O potencial zeta das partículas também foi avaliado no ZetaSizer. A atividade antimicrobiana, a citotoxicidade e os mecanismos de ação das nanopartículas de prata biogênicas em células V79 também foram investigados. A produção de nanopartículas de prata foi evidenciada pela presença da banda de absorção de plasma ('lâmbda' = 450 nm) e por TEM sendo observadas partículas esféricas com o tamanho de 15-22 nm. A atividade antibacteriana e antifúngica das nanopartículas de prata foi avaliada contra Staphylococcus aureus (MIC 1,47 µg mL-1), Salmonella typhymurium (MIC 0,36 µg mL-1), Escherichia coli (MIC 0,73 µg mL-1), Aspergillus niger (MIC 5,90 µg mL-1) e Trichophytum rubrum (MIC 2,95 µg mL-1). Além disso, a atividade bactericida das nanopartículas de prata foi diminuída na presença de glutationa reduzida, indicando que a eficácia antimicrobiana está provavelmente relacionada com a indução de estresse oxidativo. As nanopartículas de prata exibiram citotoxicidade dose dependente em células V79. Na concentração de 8,49 µg mL-1 as nanopartículas de prata promoveram 51% de morte celular avaliada pela redução do MTT e 37 % em ensaios de DNA. A presença de glutationa (307,3 µg mL-1) aumentou em 17 % a viabilidade celular, atingindo 66% de células viáveis no ensaio MTT e em 25 % no ensaio de DNA, atingindo 88% de células viáveis. Estes resultados podem indicar que os efeitos citotóxicos induzidos pelo tratamento de nanopartículas de prata biogênicas podem estar relacionadas com o estresse oxidativo. Este efeito pode ser muito importante na terapia de câncer e de antibióticos, e também para tratamento de doenças neurodegenerativas entre outras / Abstract: Aiming to understand better the toxicity of biogenic silver nanoparticles, these were prepared using biotechnological extracellular route and fungus Fusarium oxysporum. biogenic silver nanoparticles were then characterized by transmission electron microscopy and UV/Vis. Their size and zeta potential were determined using the nanoparticle tracking analysis software by Nanosight, photon correlation spectroscopy and zeta potential techniques. The antimicrobial activity, cytotoxicity and in vitro mechanism of biogenic silver nanoparticles action in V79 cells were also investigated. The biogenic silver nanoparticles production was evidenced by the presence of the plasmon absorption band ('lâmbda'= 450 nm) and spherical particles with the size of 15-22 nm were obtained. The biogenic silver nanoparticles antimicrobial and antifungal activity against Staphylococcus aureus (MIC 1.47 'mu'g mL-1), Salmonella typhymurium (MIC 0.36 'mu'g mL-1), Escherichia coli (MIC 0.73 ?g mL-1), Aspergillus niger (MIC 5.90 ?g mL-1) and Trichophytum rubrum (MIC 2.95 'mu'g mL-1) were measured. Furthermore, the bactericidal activity of AgNPbio decreased in the presence of reduced glutathione (GSH) indicating that antimicrobial effectiveness is probably related to oxidative stress induction. The biogenic silver nanoparticles exhibited cytotoxicty in some extent regarding V79 cells. At the concentration of 8.49 'mu'g mL-1 biogenic silver nanoparticles provoked 51% cell death in the MTT and 37% in DNA assays. The presence of glutathione (GSH, 307.3 ng mL-1) increased 17% cell viability on MTT and 25% on DNA assays. Obtained results may point out that the cytotoxic effects induced by biogenic silver nanoparticles treatment could be related to the oxidative stress. This effect can be very important in the cancer and antibiotic therapy and also for neurodegenerative and many other diseases treatments / Mestrado / Metabolismo e Biologia Molecular / Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

O uso imprudente de antibióticos para o tratamento da mastite bovina pode levar ao aumento da resistência bacteriana e ao comprometimento da eficácia dos tratamentos atuais. Desta maneira, novas alternativas para o tratamento da mastite devem ser procuradas. As actinobactérias são capazes de produzir extratos brutos que contêm metabólitos secundários ativos, que inibem o crescimento de outras bactérias. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) de extratos brutos de actinobactérias para isolados de Staphylococcus aureus, Staphylococcus chromogenes, Streptococcus dysgalactiae e Streptococcus uberis, provenientes de 23 rebanhos leiteiros. Estes isolados foram identificados pela cultura microbiológica e por espectrometria de massas. Assim, foi realizada uma triagem, pelo bioensaio colorimétrico, de 15 extratos brutos, previamente testados e identificados, provenientes de actinobatérias isoladas de diferentes ambientes e plantas (caatinga, áreas de reflorestamento e do eucalipto) para 10 isolados de cada espécie causadora de mastite. Em seguida, os extratos Caat 1-54 e Caat P5-8 foram selecionados para determinação da CIM, a 50% (CIM50) e a 90% (CIM90). Para determinar a CIM dos extratos brutos, foram utilizados 20 isolados de cada espécie, totalizando 80 isolados. Foi utilizada a análise de sobrevivência para avaliação dos resultados. O extrato Caat 1-54 apresentou os menores valores de CIM50 e CIM90 para S. aureus (0,39 µg/mL e 6,25 µg/mL, respectivamente) e S. chromogenes (CIM50 = CIM90 = 0,78 µg/mL). O ceftiofur apresentou os menores valores de CIM tanto para Strep. dysgalactiae (CIM50 ≤ 0,048 µg/mL; CIM90 = 100 µg/mL), como para Strep. uberis (CIM50 ≤ 0,19 µg/mL; CIM90 = 0,39 µg/mL). Seguido do ceftiofur, o extrato Caat 1-54 foi o que apresentou menores valores CIM, com apenas uma diluição seriada de diferença entre as CIM50 das duas espécies (1,56 e 0,78 µg/mL para Strep. dysgalactiae e Strep. uberis, respectivamente). O extrato Caat P5-8 apresentou os maiores valores de CIM50 e CIM90 para todas as espécies estudadas (CIM ≥ 25 µg/mL). Os resultados obtidos indicam o potencial dos extratos brutos provenientes de actinobactérias para o tratamento da mastite bovina causada por S. aureus, S. chromogenes, Strep. dysgalactiae e Strep. uberis / The reckless use of antibiotics for the treatment of bovine mastitis can increase bacterial resistance and harm the effectiveness of current treatments. Thus, new alternatives for mastitis treatment must be searched. Actinomycetes are capable to produce crude extracts with secondary active metabolites that inhibit the growth of other bacteria. Therefore, the aim of this study was to evaluate the minimum inhibitory concentration (MIC) of crude extracts obtained from actinomycetes for Staphylococcus aureus, Staphylococcus chromogenes, Streptococcus dysgalactiae and Streptococcus uberis isolated from 23 dairy herds. These bacteria were identified by microbiology culture and mass spectrometry. Thus, the colorimetric bioassay was performed. In this screening 15 crude extracts previously tested and identified, obtained from actinomycetes from different Brazilian environments and plants (caatinga, reforestation areas and eucalyptus) were used for 10 isolates of each mastitis pathogens species. Then the Caat 1-54 and Caat P5-8 extracts were selected to the MIC 50% (MIC50) and 90% (MIC90) determination. Twenty mastitis pathogens isolates of each bacteria species were used. Survival analysis was used to evaluate the results. Caat 1-54 extract presented the lowest values of MIC50 e MIC90 for S. aureus (0.39 µg/mL and 6.25 µg/mL, respectively) and S. chromogenes (MIC50 = MIC90 = 0.78 µg/mL). On the other hand, ceftiofur presented the lowest MIC values for both Strep. dysgalactiae (MIC50 ≤ 0.048 µg/mL; MIC90 = 100 µg/mL) and Strep. uberis (MIC50 ≤ 0.19 µg/mL; MIC90 = 0.39 µg/mL). After ceftiofur, Caat 1-54 presented the highest efficiency against Strep. dysgalactiae and Strep. uberis and MIC50 for both species differed by only one serial dilution (1.56 e 0.78 µg/mL for Strep. dysgalactiae and Strep. uberis, respectively). Caat P5-8 extract presented the highest MIC50 and MIC90 values for all pathogens (MIC ≥ 25 µg/mL). Results indicated the potential of crude extracts from actinomycetes to treat bovine mastitis caused by S. aureus, S. schromogenes, Strep. dysgalactiae and Strep. uberis

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2017-06-29T17:45:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2017MareliseTeixeira.pdf: 4634035 bytes, checksum: e19e76c6d910883ee76f2379227a27b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2017-07-04T20:13:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2017MareliseTeixeira.pdf: 4634035 bytes, checksum: e19e76c6d910883ee76f2379227a27b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T20:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2017MareliseTeixeira.pdf: 4634035 bytes, checksum: e19e76c6d910883ee76f2379227a27b7 (MD5) Previous issue date: 2017-06 / Os compostos fenólicos são metabólitos secundários encontrados nas plantas que apresentam efeitos biológicos, incluindo atividades antioxidante e antimicrobiana. A descoberta de novos agentes é de extrema importância para um país como o Brasil que possui imensa biodiversidade. O gênero Rubus tem sido estudado por ser fonte de importantes princípios ativos com atividade antioxidante, antitumoral e anti-inflamatória. Diante do exposto, o objetivo do estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana, antioxidante e determinar o conteúdo de flavonoides e polifenóis nos extratos aquosos, etanólicos e hidroetanólicos de folhas e frutos de Rubus sellowii Cham. & Schltdl., espécie nativa, endêmica do Brasil. Os métodos utilizados foram Folin-Ciocalteu para polifenóis, espectroscopia para flavonoides, capacidade de redução do radical DPPH por espectrofotometria para atividade antioxidante e o método de micro diluição para atividade antimicrobiana. O conteúdo de polifenóis variou de 182 a 5097 mg de EAG/100 g de frutos e folhas, respectivamente. Para o teor de flavonoides totais, a variação foi de 16 a 234 mg de ERU/g, sendo as menores quantidades para os extratos de frutos. Os frutos apresentaram a menor capacidade antioxidante e o extrato etanólico de folhas apresentou a maior atividade antioxidante. Na atividade antimicrobiana, os extratos hidroetanólicos mostraram ação bactericida frente à S. aureus. Os extratos de folhas e frutos tiveram ação bacteriostática sobre E. coli. Já a levedura C. albicans se mostrou resistente a todos os extratos testados. As atividades apresentadas pelos extratos podem estar relacionadas à presença de polifenóis e flavonoides em quantidades consideradas elevadas tanto em frutos quanto em folhas. A utilização da espécie, especialmente dos frutos, deve ser estimulada a fim de reduzir o risco de algumas doenças.

O uso imprudente de antibióticos para o tratamento da mastite bovina pode levar ao aumento da resistência bacteriana e ao comprometimento da eficácia dos tratamentos atuais. Desta maneira, novas alternativas para o tratamento da mastite devem ser procuradas. As actinobactérias são capazes de produzir extratos brutos que contêm metabólitos secundários ativos, que inibem o crescimento de outras bactérias. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) de extratos brutos de actinobactérias para isolados de Staphylococcus aureus, Staphylococcus chromogenes, Streptococcus dysgalactiae e Streptococcus uberis, provenientes de 23 rebanhos leiteiros. Estes isolados foram identificados pela cultura microbiológica e por espectrometria de massas. Assim, foi realizada uma triagem, pelo bioensaio colorimétrico, de 15 extratos brutos, previamente testados e identificados, provenientes de actinobatérias isoladas de diferentes ambientes e plantas (caatinga, áreas de reflorestamento e do eucalipto) para 10 isolados de cada espécie causadora de mastite. Em seguida, os extratos Caat 1-54 e Caat P5-8 foram selecionados para determinação da CIM, a 50% (CIM50) e a 90% (CIM90). Para determinar a CIM dos extratos brutos, foram utilizados 20 isolados de cada espécie, totalizando 80 isolados. Foi utilizada a análise de sobrevivência para avaliação dos resultados. O extrato Caat 1-54 apresentou os menores valores de CIM50 e CIM90 para S. aureus (0,39 µg/mL e 6,25 µg/mL, respectivamente) e S. chromogenes (CIM50 = CIM90 = 0,78 µg/mL). O ceftiofur apresentou os menores valores de CIM tanto para Strep. dysgalactiae (CIM50 ≤ 0,048 µg/mL; CIM90 = 100 µg/mL), como para Strep. uberis (CIM50 ≤ 0,19 µg/mL; CIM90 = 0,39 µg/mL). Seguido do ceftiofur, o extrato Caat 1-54 foi o que apresentou menores valores CIM, com apenas uma diluição seriada de diferença entre as CIM50 das duas espécies (1,56 e 0,78 µg/mL para Strep. dysgalactiae e Strep. uberis, respectivamente). O extrato Caat P5-8 apresentou os maiores valores de CIM50 e CIM90 para todas as espécies estudadas (CIM ≥ 25 µg/mL). Os resultados obtidos indicam o potencial dos extratos brutos provenientes de actinobactérias para o tratamento da mastite bovina causada por S. aureus, S. chromogenes, Strep. dysgalactiae e Strep. uberis / The reckless use of antibiotics for the treatment of bovine mastitis can increase bacterial resistance and harm the effectiveness of current treatments. Thus, new alternatives for mastitis treatment must be searched. Actinomycetes are capable to produce crude extracts with secondary active metabolites that inhibit the growth of other bacteria. Therefore, the aim of this study was to evaluate the minimum inhibitory concentration (MIC) of crude extracts obtained from actinomycetes for Staphylococcus aureus, Staphylococcus chromogenes, Streptococcus dysgalactiae and Streptococcus uberis isolated from 23 dairy herds. These bacteria were identified by microbiology culture and mass spectrometry. Thus, the colorimetric bioassay was performed. In this screening 15 crude extracts previously tested and identified, obtained from actinomycetes from different Brazilian environments and plants (caatinga, reforestation areas and eucalyptus) were used for 10 isolates of each mastitis pathogens species. Then the Caat 1-54 and Caat P5-8 extracts were selected to the MIC 50% (MIC50) and 90% (MIC90) determination. Twenty mastitis pathogens isolates of each bacteria species were used. Survival analysis was used to evaluate the results. Caat 1-54 extract presented the lowest values of MIC50 e MIC90 for S. aureus (0.39 µg/mL and 6.25 µg/mL, respectively) and S. chromogenes (MIC50 = MIC90 = 0.78 µg/mL). On the other hand, ceftiofur presented the lowest MIC values for both Strep. dysgalactiae (MIC50 ≤ 0.048 µg/mL; MIC90 = 100 µg/mL) and Strep. uberis (MIC50 ≤ 0.19 µg/mL; MIC90 = 0.39 µg/mL). After ceftiofur, Caat 1-54 presented the highest efficiency against Strep. dysgalactiae and Strep. uberis and MIC50 for both species differed by only one serial dilution (1.56 e 0.78 µg/mL for Strep. dysgalactiae and Strep. uberis, respectively). Caat P5-8 extract presented the highest MIC50 and MIC90 values for all pathogens (MIC ≥ 25 µg/mL). Results indicated the potential of crude extracts from actinomycetes to treat bovine mastitis caused by S. aureus, S. schromogenes, Strep. dysgalactiae and Strep. uberis

A mastite bovina apresenta alta prevalência nos rebanhos leiteiros e a antibioticoterapia é o procedimento mais utilizado no tratamento da mesma. O Staphylococcus aureus, agente etiológico mais frequentemente isolado em casos de mastite, tem demonstrado em diversos estudos aumento crescente no padrão de resistência aos antimicrobianos. O desenvolvimento de bactérias resistentes e a presença de resíduos de antimicrobianos no leite estimulam o desenvolvimento de novos tratamentos que solucionem estes problemas. O muco dos moluscos Achatina fulica é composto por uma glicoproteína, denominada achacin, com atividade antimicrobiana sobre bactérias Gram positivas. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do muco de A. fulica sobre S. aureus, bem como determinar e avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) do muco de A. fulica purificado sobre S. aureus ATCC 25923 e isolados de S. aureus provenientes de infecções intramamárias bovina. O muco foi purificado mediante cromatografia líquida de alta eficiência e a fração com atividade antimicrobiana foi submetida à quantificação protéica e microdiluição em caldo. A CIM do muco purificado determinada para a cepa ATCC 25923 correspondeu a 50 µg/mL e para os isolados de S. aureus, variou entre 12,5 e 100 µg/mL. Sendo que destes, dois isolados (6,7 %) apresentaram CIM de 12,5 µg/mL, três (10 %) CIM de 25µg/mL, vinte e três (76,6 %) CIM de 50 µg/mL e dois (6,7 %) apresentaram CIM de 100 µg/mL. A CIM50 para os isolados correspondeu a 50 µg/mL e a CIM90 a 100 µg/mL. No presente estudo observou-se que o muco purificado apresentou atividade antimicrobiana com ação bactericida. Estes resultados proporcionam perspectivas para a compreensão e otimização de protocolos microbiológicos deste potencial biofármaco com a finalidade de empregá-lo futuramente na terapêutica veterinária para o controle de infecções intramamárias causadas por S. aureus. / The bovine mastitis is highly prevalent in dairy herds and antibiotic therapy is the procedure most commonly used to treat it. Staphylococcus aureus is the most frequently isolated etiologic agent in cases of mastitis and it has been shown in several studies the pattern of increasing antimicrobial resistance. Due to the development of resistant bacterias and the presence of antimicrobial residues in the milk the development of new treatments to solve those problems are required. The mucus of the molluscs Achatina fulica contains a glycoprotein called achacin that presents antimicrobial activity against Gram positive bacteria. The aim of this study was the evaluation of the in vitro antimicrobial activity of the A. fulica mucus of on S. aureus, as well the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of A. fulica mucus purified on S. aureus ATCC 25923 and isolates of S. aureus from bovine intramammary infections. The mucus was purified by high performance liquid chromatography. The protein content in portion presenting the was quantified and microdiluted. The MIC determined for the purified mucus strain ATCC 25923 was 50 µg/mL and for the isolates of S. aureus ranged between 12,5 and 100 µg/mL. Among these samples, two isolates (6,7 %) showed MIC of 12,5 µg/mL, three (10 %) of MIC 25 µg/mL, twenty-three (76,6 %) MIC of 50 µg/mL and two (6,7 %) had an MIC of 100 µg/mL. The MIC50 for isolates was 50 µg/mL and MIC90 to100 µg/mL. It was found that the purified mucus showed bactericidal activity. The results showed in the present work improved the understanding and optimization of the biopharmaceutical microbiological potential that could be applied in new protocols in future veterinary therapy for the control of intramammary infections caused by S. aureus.

O presente estudo teve o objetivo de avaliar o perfil de sensibilidade in vitro de 171 isolados de Staphylococcus hyicus a nove antimicrobianos utilizados na suinocultura. A coleta das amostras foi realizada através de suabes de pele de leitões das fases de maternidade e creche provenientes de casos de epidermite exsudativa. As amostras foram submetidas ao isolamento e identificação e compreenderam dois grupos, classificadas de acordo com o período em que foram coletadas. O primeiro grupo foi formado por amostras históricas (80 isolados) provenientes de estudos anteriores entre 1975 a 1984 no Rio Grande do Sul, e mantidos liofilizados no laboratório de sanidade do Setor de Suínos (FAVET-UFRGS), e o segundo grupo (91 isolados) coletados no ano de 2012 nos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná e Minas Gerais. A realização do teste de susceptibilidade foi feita utilizando a técnica de diluição em ágar conforme protocolo M31-A3 do CLSI. Através de valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM), foi obtido o perfil quantitativo de resistência em relação a nove antimicrobianos utilizados na suinocultura. A análise estatística possibilitou a avaliação de mudanças entre os dois grupos de amostras isoladas em diferentes épocas. Os resultados obtidos nesse estudo revelaram que para todas as cepas obtidas os beta-lactâmicos (ceftiofur e amoxicilina) foram os antimicrobianos mais ativos, com CIM para 90% dos isolados históricos (CIM90) de 0.5 μg/mL e 2.0 μg/mL para isolados recentes. A lincomicina, sulfametoxazol e tilmicosina foram os antimicrobianos menos ativos, com CIM90 variando de 128 a 256 μg/mL. O aumento na resistência entre o grupo de amostras históricas e recentes foi observado em seis dos nove antimicrobianos testados (amoxicilina, enrofloxacina, florfenicol, lincomicina, tilmicosina e tiamulina), em particular para a enrofloxacina e tiamulina. No caso do sulfametoxazole e tetraciclina, não foram observadas diferenças significativas na resistência, entretanto altos valores de CIM foram observados nos dois grupos avaliados (p<0,05). / This study was performed to evaluate the "in vitro" susceptibility profile of 171 Staphylococcus hyicus isolates from cases of exudative epidermitis to nine antibiotics used in pig production. Sample consisted of skin swabs from weanling and nursery piglets from farms suspected of exudative epidermitis. Samples were processed for bacterial isolation and identification and divided in two groups, according to the time of collection. The first group comprised historical samples (80 isolates) from previous studies (1975-1984) conducted in the state of Rio Grande do Sul, and stocked lyophilized in Swine Health Lab (FAVET-UFRGS), and the other group (91 isolates) formed by isolates collected in 2012 in the states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná and Minas Gerais, Brazil. The test was carried out using agar dilution protocol, according to M31-A3 CLSI. Through Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) data, analysis was performed to get a quantitative profile of resistance to antimicrobials. Statistical analysis was performed to evaluate changes in resistance between the groups studied. Results showed that beta-lactam (ceftiofur and amoxicillin) were the most active antimicrobials for all strains tested, with the lowest MIC for inhibition of 90% of isolates (MIC90) of 0.5 μg/ml for historical isolates and of 2.0 μg/ml for recent isolates. Lincomycin, sulfamethoxazole and tilmicosin were the less active antimicrobials, with MIC90 varying from 128 to 256 μg/ml. Significant increase in resistance between historical and recent strains was observed for six out of nine antimicrobials tested (amoxicillin, enrofloxacin, florfenicol, lincomycin, tilmicosin and tiamulin), in particular for enrofloxacin e tiamulin. For sulfamethoxazole and tetracycline there was no significant differences in resistance between strains collected in different periods, however high MIC values were observed for these drugs.