Orientador: Daniel Carvalho Pimenta / Resumo: O veneno de Crotalus durissus terrificus (Cdt), baseado no critério do perfil da cromatografia de exclusão molecular, pode ser descrito como sendo composto de quatro principais toxinas: Giroxina, Crotamina, Crotoxina e Convulxina. A crotoxina é uma neutoroxina, é um heterodímero não covalente, composta por duas subunidades: fosfolipase A2 (PLA2) e crotapotina (Ctp). A crotapotina constitui o componente da crotoxina que apresenta atividade anti-inflamatória além de ser chaperona de PLA2. Esta molécula é constituída por três cadeias peptídicas ligadas por pontes dissulfeto. Além disso, já foram descritas isoformas para a crotapotina. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método cromatográfico para isolar a crotapotina, separar suas cadeias e analisá-las por LC/MS e LC-MS/MS para análise proteômica e/ou seqüenciamento de novo e avaliação da possível existência de um padrão de variação nas substituições de aminoácidos. O método C8-RP-HPLC foi capaz de separar os componentes do veneno de Cdt que puderam ser identificados por espectrometria de massas, de acordo com a sua massa molecular. A crotapotina foi isolada, reduzida e alquilada e submetida à outra separação cromatográfica RP-HPLC (C18) para isolamento das subunidades alquiladas. Conforme descrito na literatura, a cadeia α da crotapotina é composta por 40 resíduos de aminoácidos, enquanto que a cadeia β possui 35 resíduos e a cadeia γ 14, pelo que as subunidades podem ser identificadas pelas suas massas moleculares. As a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Crotalus durissus terrificus venom (Cdt), based on molecular size chromatography, can be described as being composed of four main toxins: Giroxin, Crotamine, Crotoxin and Convulxin. Crotoxin is a neutoroxin, a non-covalent heterodimer composed of two subunits: phospholipase A2 (PLA2) and crotapotin (Ctp). Crotapotin is the component of crotaxin that has anti-inflammatory activity besides being a PLA2 chaperone. This molecule consists of three peptide chains linked by disulfide bonds. In addition, isoforms for crotapotin have been described. The objective of this study was to develop a chromatographic methodology to isolate a crotapotin, separate its chains and analyze by LC/MS and LC-MS/MS for proteomic analysis and/or de novo sequencing and evaluation of the possibility of a variation pattern amino acid substitutions. The C8-RPHPLC method was able to separate the Cdt venom components that could be identified by mass spectrometry, according to their molecular mass. The crotapotin was isolated, reduced and alkylated and subjected to another RP-HPLC (C18) chromatographic separation for isolation of the alkylated subunits. As described in the literature, the α chain of crotapotin is composed of 40 amino acid residues, while the β chain has 35 residues and the γ chain, 14, and thus the subunits can be identified by their molecular masses. The analyzes of isolated chains of crotapotin showed the presence of more than one molecule per fraction, indicating the presence of isofor... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Rui Ferreira Seabra Junior / Resumo: Os acidentes ofídicos constituem um relevante problema de saúde pública, a qual deve receber cuidados rápidos e eficientes. Em relação ao ofidismo, no Brasil, somente há poucos anos foi definida uma política abrangente que enfocasse as múltiplas questões relacionadas aos acidentes humanos provocados por animais peçonhentos. Os venenos de serpentes apresentam uma mistura de compostos inorgânicos (íons metálicos) e orgânicos, sendo ricos em moléculas biologicamente ativas. Dentre essas moléculas, peptídeos, proteínas e compostos de baixa massa molecular são frequentemente estudados por apresentarem grande potencial terapêutico. Essas moléculas, se bem conhecidas, podem ser utilizadas na investigação de mecanismo moleculares e celulares. Além disso, estabelecem interessantes modelos moleculares para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas aplicáveis na criação de ferramentas experimentais e/ou agentes terapêuticos para a pesquisa básica e aplicada. Diante disso, a elucidação dos peptídeos hipotensores presentes no veneno crotálico da subespécie Crotalus durissus terrificus é o objetivo do presente trabalho. Este estudo poderá promover a identificação de outras moléculas hipotensoras podendo conter princípios ativos mais eficientes para o tratamento de quadros clínicos de hipertensão, doença esta que acomete milhares de pessoas no mundo todo. No presente trabalho, a porção peptídica do veneno da serpente C.d.t., apresentou rendimento médio de 12,8% em relação ao veneno b... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The snakebites are an important public health problem, which must receive quick and efficient care. Regarding the ophidism, in Brazil, only a few years ago a comprehensive policy was defined that emphasized multiple issues related to human accidents caused by venomous animals. The snake venoms present a mixture of inorganic and organic compounds, being rich in biologically active molecules. Among these molecules, peptides, proteins and low molecular weight compounds are often studied by their ability therapeutic. Those molecules, when well known, may be used in the investigation of cellular and molecular mechanism. In addition, it provides interesting molecular models for the development of biotechnological strategies applicable in the creation of experimental tools and / or therapeutic agents for basic and applied research. Therefore, the elucidation of hypotensive peptides present in the venom of Crotalus durissus terrificus subspecies is the aim of this study, once this study may promote the identification of other hypotensive molecules may contain more effective active ingredients for the treatment of clinical conditions hypertension, this disease affecting millions of people in the world. In this study, the peptide portion of the venom of the snake Cdt, performed with an average yield of 12.8% compared to the venom under total protein precipitation conditions in the presence of trifluoro acetic acid to 0.1% (v / v) and, when subjected to purification strategy for reverse... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Patrícia da Rocha Mendes (prmbio@gmail.com) on 2018-08-15T16:34:30Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL 2.pdf: 1912543 bytes, checksum: 5c638621228b797d59f7811694025a8c (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-08-15T19:06:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mendes_pr_dr_bot.pdf: 1912543 bytes, checksum: 5c638621228b797d59f7811694025a8c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T19:06:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mendes_pr_dr_bot.pdf: 1912543 bytes, checksum: 5c638621228b797d59f7811694025a8c (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os acidentes ofídicos constituem um relevante problema de saúde pública, a qual deve receber cuidados rápidos e eficientes. Em relação ao ofidismo, no Brasil, somente há poucos anos foi definida uma política abrangente que enfocasse as múltiplas questões relacionadas aos acidentes humanos provocados por animais peçonhentos. Os venenos de serpentes apresentam uma mistura de compostos inorgânicos (íons metálicos) e orgânicos, sendo ricos em moléculas biologicamente ativas. Dentre essas moléculas, peptídeos, proteínas e compostos de baixa massa molecular são frequentemente estudados por apresentarem grande potencial terapêutico. Essas moléculas, se bem conhecidas, podem ser utilizadas na investigação de mecanismo moleculares e celulares. Além disso, estabelecem interessantes modelos moleculares para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas aplicáveis na criação de ferramentas experimentais e/ou agentes terapêuticos para a pesquisa básica e aplicada. Diante disso, a elucidação dos peptídeos hipotensores presentes no veneno crotálico da subespécie Crotalus durissus terrificus é o objetivo do presente trabalho. Este estudo poderá promover a identificação de outras moléculas hipotensoras podendo conter princípios ativos mais eficientes para o tratamento de quadros clínicos de hipertensão, doença esta que acomete milhares de pessoas no mundo todo. No presente trabalho, a porção peptídica do veneno da serpente C.d.t., apresentou rendimento médio de 12,8% em relação ao veneno bruto, sob condições de precipitação das proteínas totais na presença de ácido trifluoracético à 0,1% (v/v) e, quando submetida à estratégia de purificação por cromatografia líquida de fase reversa, 13 frações foram separadas. Por meio de ensaios de contratilidade de tecido isolado in vitro de músculo liso (artéria mesentérica), evidenciou-se que a fração I e a fração V apresentaram efeitos hipotensor e hipertensor, respectivamente. A fração I foi identificada com a sequência QHILIYVGVHD e massa molecular 1274,67 Da. Atualmente, esta molécula hipotensora identificada no presente trabalho foi submetida à síntese peptídica para posteriormente, avaliar-se este peptídeo hipotensor na sua forma sintética, seu efeito hipotensor por meio do ensaio de contratilidade de tecido isolado in vitro de músculo liso em relação ao fármaco Captopril. / The snakebites are an important public health problem, which must receive quick and efficient care. Regarding the ophidism, in Brazil, only a few years ago a comprehensive policy was defined that emphasized multiple issues related to human accidents caused by venomous animals. The snake venoms present a mixture of inorganic and organic compounds, being rich in biologically active molecules. Among these molecules, peptides, proteins and low molecular weight compounds are often studied by their ability therapeutic. Those molecules, when well known, may be used in the investigation of cellular and molecular mechanism. In addition, it provides interesting molecular models for the development of biotechnological strategies applicable in the creation of experimental tools and / or therapeutic agents for basic and applied research. Therefore, the elucidation of hypotensive peptides present in the venom of Crotalus durissus terrificus subspecies is the aim of this study, once this study may promote the identification of other hypotensive molecules may contain more effective active ingredients for the treatment of clinical conditions hypertension, this disease affecting millions of people in the world. In this study, the peptide portion of the venom of the snake Cdt, performed with an average yield of 12.8% compared to the venom under total protein precipitation conditions in the presence of trifluoro acetic acid to 0.1% (v / v) and, when subjected to purification strategy for reversed-phase liquid chromatography, 13 fractions were separated. Using isolated tissue contractility in vitro smooth muscle (mesenteric artery), was evidenced that the fraction I and fraction V showed hypotensive and hypertensive effects, respectively. Fraction I was identified with the QHILIYVGVHD sequence and molecular mass 1274.67 Da. Currently, this hypotensive molecule identified in this study was submitted to the peptide synthesis to subsequently evaluate this hypotensive peptide in its synthetic form, its hypotensive effect through tissue contractility assay isolated in vitro smooth muscle compared to Captopril medicine.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-12Bitstream added on 2014-06-13T19:51:38Z : No. of bitstreams: 1 martinez_mg_me_botfm.pdf: 823731 bytes, checksum: 14318dd910b1fde35bc83924fa448a33 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As serpentes Crotalus durissus terrificus possuem cabeça triangular, olhos pequenos com pupila em fenda, fosseta loreal e guizo na cauda. O veneno é uma mistura complexa constituído de cátions metálicos, enzimas, peptídeos e toxinas. Os acidentes em seres humanos e em animais no Estado de São Paulo, Brasil estão em ascensão. Apesar da devastação ambiental, o número de serpentes que são capturadas e doadas aos Institutos de pesquisa também está aumentando. A questão é: Como estes animais conseguiram se adaptar e procriar apesar destas novas condições ambientais adversas? Para responder esta questão avaliou-se o nível de Carbono 13 (13C), por meio de técnica de espectrometria de massa, nos segmentos dos guizos de serpentes Crotalus durissus terrificus (Cdt) adultas e filhotes, bem como no alimento oferecido. Esta pesquisa foi baseada no conhecimento de que as plantas existentes na terra apresentam rotas bioquímicas diversas, absorvendo isótopos estáveis nas suas moléculas principalmente o Carbono (12C, 13C), o Hidrogênio (1H, 2H), o Oxigênio (16O, 17O, 18O), o Nitrogênio (14N, 15N) e o Enxofre (32S, 33S, 34S, 36S). Durante a síntese dos açúcares, quando o primeiro composto orgânico sintetizado for açúcar contendo três átomos de carbono, estas são denominadas de plantas do ciclo fotossintético C3. Quando os primeiros açúcares formados apresentam quatro átomos de carbono, estas são denominadas de plantas do ciclo fotossintético C4. No grupo C3 encontram-se aproximadamente 86% das espécies vegetais, tais como, as madeiras de lei, as leguminosas e as árvores frutíferas. No grupo C4, destacam-se principalmente as gramíneas, milho e cana-de-açúcar. A análise dos resultados em seu conjunto permitiu tecer as seguintes considerações: as serpentes Crotalus durissus terrificus se alimentam de animais provenientes tanto do ambiente C3 quanto... / The Crotalus durissus terrificus serpents possess triangular head, small eyes with pupil in crack, little loreal pit and rattle in its tail. The poison is a complex mixture constituted of metallic cations, enzymes, peptides and toxins. The accidents with human beings and animals in Sao Paulo State, Brazil are in ascension. Although the environment devastation, the number of serpents captured and donated to the research institutes is also increasing. The question is: How these animals had managed to adapt themselves and to procreate in spite of these new adverse environmental conditions? To answer this question it was evaluated the Carbon 13 level (13C), through of mass spectrometry technique, in the segments of the rattles of adults and nestlings Crotalus durissus terrificus serpents (Cdt), as well as in the offered food. This research was based on the knowledge of that the existing plants in the world present diverse biochemists routes, absorbing stables isotopes in its molecules mainly the Carbon (12C, 13C), the Hydrogen (1H, 2H), the Oxygen (16O, 17O, 18O), the Nitrogen (14N, 15N) and the Sulphur (32S, 33S, 34S, 36S). During the sugars synthesis, when the first synthesized organic composition was sugar contained three carbon atoms, these are called of plants of the C3 photosynthetic cycle. When the first formed sugars present four carbon atoms, these are called of plants of the C4 photosynthetic cycle. About 86% of the vegetal species are found in the C3 group, such as, the hardwoods, the vegetables species and fruitful trees. In the C4 group, the grass species, maize and sugar cane are mainly distinguished. The analysis of the results allowed the following considerations: the Crotalus durissus terrificus serpents eat animals proceeding from the C3 and C4 ambient; the complete turnover tax of the nestlings born in captivity until reaching the balance level varied between... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-12Bitstream added on 2014-06-13T19:10:41Z : No. of bitstreams: 1 anderlini_rp_me_botfm.pdf: 335403 bytes, checksum: 9368ef42c305b23ce4f7419eafcd9557 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A administração de soros heterólogos de origem eqüina constitui o único tratamento para os acidentes ofídicos, porém estes são capazes de induzir reações de hipersensibilidade. Novos processos de hiperimunização em animais alternativos vêm sendo desenvolvidos, juntamente à ferramentas de destoxificação dos venenos e novas alternativas de adjuvantes. No presente trabalho, foi utilizado veneno de Crotalus durissus terrificus nativo (VN) e irradiado com Co60 (VIr), em quatro diferentes protocolos de hiperimunização, para uma avaliação quinzenal do perfil imunológico dos grupos de ovinos pela técnica de ELISA. Os animais foram avaliados clinicamente todos os dias e pesados a cada 14 dias. Ao final, foram inspecionados em frigorífico para aprovação de consumo e os rins, analisados histologicamente. Os soros obtidos foram avaliados quanto à capacidade de neutralização por meio de testes “in vitro”. O momento quatro (M4) apresentou o maior nível de titulação nos quatro grupos, porém o G1, inoculado com VN associado ao adjuvante incompleto de Freund (AIF), apresentou o maior nível quando comparados com os demais grupos, inoculados com VN associado à sílica nanoestruturada SBA-15 (G2), VIrr associado ao AIF (G3) e VIrr associado a SBA-15. Não houve diferença estatística entre os grupos em relação ao ganho de peso. Apenas um animal apresentou lesão no local de aplicação. Todos as carcaças obtiveram um carimbo de aprovação para consumo do Serviço de Inpeção Federa (SIF)l. Não houve alterações histológicas renais características de envenenamento crotálico. Os soros produzidos pelos quatro grupos foram capazes de neutralizar o efeito letal do veneno de Crotalus durissus terrificus, observados pelos testes de neutralização. O protocolo convencional de imunização utilizado no grupo um (G1) mostrou-se mais eficiente na neutralização do efeito letal quando comparados com os demais protocolos. / The administration of heterologous antivenoms raised in horses is considered the only treatment for envenoming by venomous animals. However, it causes hypersensitivity reactions. New hyperimmunization processes in alternatives animals have been developed, associated to detoxication of venoms an new alternatives of adjuvants. In the present study it was used the natural (NV) and Co- 60-irradiated (IrrV) Crotalus durissus terrificus venom, in four differents protocols for a evaluation every fifteen days of the immunological response of the four ovine groups by the ELISA test. The clinical evaluation of the animals was performed and the weigth obteined every fourteen days, submited to a frigorific inspection and histological kidneys analysis. The neutralization capacity of the serum produced was evaluated in “in vitro” test. The fourth moment presented the major titles for all groups. However, the first group (G1), inoculated with NV associated with Freund’s incomplet adjuvant (FIA) and aluminiun hidroxide presented the major titles when compared with the other ones, inoculated with NV associated to SBA-15 (G2), IrrV associated with FIA (G3) and IrrV associated with SBA-15 (G4). There was no estatistic difference between the groups concerning the weigth analysis. Only one animal presented lesion at the inoculation site. All the carcass obtained the consume aprovation stamp of the Federal Inspection Service (FIS). There was no kidney lesions on histological analysis. The four serum produced were able to neutralize the letal effect of Crotalus durissus terrificus venom, showed by the neutralization test. The convencional immunization protocol used for the first group (G1) showed more efficient neutralization capacity when compared with the others groups.

Submitted by LAUDICÉIA ALVES DE OLIVEIRA null (laudiceias2me@hotmail.com) on 2017-08-24T14:12:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Laudicéia Alves de Oliveira CEVAP_UNESP.pdf: 2169254 bytes, checksum: 473bc1036ce9b9cddf2749344ac2b4c6 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-25T14:32:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_la_me_bot.pdf: 2169254 bytes, checksum: 473bc1036ce9b9cddf2749344ac2b4c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T14:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_la_me_bot.pdf: 2169254 bytes, checksum: 473bc1036ce9b9cddf2749344ac2b4c6 (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O veneno de Crotalus durissus terrificus (Cdt), baseado no critério do perfil da cromatografia de exclusão molecular, pode ser descrito como sendo composto de quatro principais toxinas: Giroxina, Crotamina, Crotoxina e Convulxina. A crotoxina é uma neutoroxina, é um heterodímero não covalente, composta por duas subunidades: fosfolipase A2 (PLA2) e crotapotina (Ctp). A crotapotina constitui o componente da crotoxina que apresenta atividade anti-inflamatória além de ser chaperona de PLA2. Esta molécula é constituída por três cadeias peptídicas ligadas por pontes dissulfeto. Além disso, já foram descritas isoformas para a crotapotina. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método cromatográfico para isolar a crotapotina, separar suas cadeias e analisá-las por LC/MS e LC-MS/MS para análise proteômica e/ou seqüenciamento de novo e avaliação da possível existência de um padrão de variação nas substituições de aminoácidos. O método C8-RP-HPLC foi capaz de separar os componentes do veneno de Cdt que puderam ser identificados por espectrometria de massas, de acordo com a sua massa molecular. A crotapotina foi isolada, reduzida e alquilada e submetida à outra separação cromatográfica RP-HPLC (C18) para isolamento das subunidades alquiladas. Conforme descrito na literatura, a cadeia α da crotapotina é composta por 40 resíduos de aminoácidos, enquanto que a cadeia β possui 35 resíduos e a cadeia γ 14, pelo que as subunidades podem ser identificadas pelas suas massas moleculares. As análises das cadeias isoladas de crotapotina mostraram a presença de mais de uma molécula por fração, indicando a presença de isoformas no veneno. Análises proteômicas e sequenciamento de novo por LC-MS/MS elucidaram a existência de variações de resíduos de aminoácidos em tais cadeias. Estudos de atividade biológica poderão elucidar as diferenças que tais isoformas apresentam em suas características intrínsecas. / The Crotalus durissus terrificus venom (Cdt), based on molecular size chromatography, can be described as being composed of four main toxins: Giroxin, Crotamine, Crotoxin and Convulxin. Crotoxin is a neutoroxin, a non-covalent heterodimer composed of two subunits: phospholipase A2 (PLA2) and crotapotin (Ctp). Crotapotin is the component of crotaxin that has anti-inflammatory activity besides being a PLA2 chaperone. This molecule consists of three peptide chains linked by disulfide bonds. In addition, isoforms for crotapotin have been described. The objective of this study was to develop a chromatographic methodology to isolate a crotapotin, separate its chains and analyze by LC/MS and LC-MS/MS for proteomic analysis and/or de novo sequencing and evaluation of the possibility of a variation pattern amino acid substitutions. The C8-RPHPLC method was able to separate the Cdt venom components that could be identified by mass spectrometry, according to their molecular mass. The crotapotin was isolated, reduced and alkylated and subjected to another RP-HPLC (C18) chromatographic separation for isolation of the alkylated subunits. As described in the literature, the α chain of crotapotin is composed of 40 amino acid residues, while the β chain has 35 residues and the γ chain, 14, and thus the subunits can be identified by their molecular masses. The analyzes of isolated chains of crotapotin showed the presence of more than one molecule per fraction, indicating the presence of isoforms in the venom. Protein analyzes and de novo sequencing by LC-MS / MS elucidated a existence of variations of amino acid residues in such chains. Studies of biological activity are to elucidate how the differences that such isoforms present in their intrinsic characteristics.

Resumo: A administração de soros heterólogos de origem eqüina constitui o único tratamento para os acidentes ofídicos, porém estes são capazes de induzir reações de hipersensibilidade. Novos processos de hiperimunização em animais alternativos vêm sendo desenvolvidos, juntamente à ferramentas de destoxificação dos venenos e novas alternativas de adjuvantes. No presente trabalho, foi utilizado veneno de Crotalus durissus terrificus nativo (VN) e irradiado com Co60 (VIr), em quatro diferentes protocolos de hiperimunização, para uma avaliação quinzenal do perfil imunológico dos grupos de ovinos pela técnica de ELISA. Os animais foram avaliados clinicamente todos os dias e pesados a cada 14 dias. Ao final, foram inspecionados em frigorífico para aprovação de consumo e os rins, analisados histologicamente. Os soros obtidos foram avaliados quanto à capacidade de neutralização por meio de testes "in vitro". O momento quatro (M4) apresentou o maior nível de titulação nos quatro grupos, porém o G1, inoculado com VN associado ao adjuvante incompleto de Freund (AIF), apresentou o maior nível quando comparados com os demais grupos, inoculados com VN associado à sílica nanoestruturada SBA-15 (G2), VIrr associado ao AIF (G3) e VIrr associado a SBA-15. Não houve diferença estatística entre os grupos em relação ao ganho de peso. Apenas um animal apresentou lesão no local de aplicação. Todos as carcaças obtiveram um carimbo de aprovação para consumo do Serviço de Inpeção Federa (SIF)l. Não houve alterações histológicas renais características de envenenamento crotálico. Os soros produzidos pelos quatro grupos foram capazes de neutralizar o efeito letal do veneno de Crotalus durissus terrificus, observados pelos testes de neutralização. O protocolo convencional de imunização utilizado no grupo um (G1) mostrou-se mais eficiente na neutralização do efeito letal quando comparados com os demais protocolos. / Abstract: The administration of heterologous antivenoms raised in horses is considered the only treatment for envenoming by venomous animals. However, it causes hypersensitivity reactions. New hyperimmunization processes in alternatives animals have been developed, associated to detoxication of venoms an new alternatives of adjuvants. In the present study it was used the natural (NV) and Co- 60-irradiated (IrrV) Crotalus durissus terrificus venom, in four differents protocols for a evaluation every fifteen days of the immunological response of the four ovine groups by the ELISA test. The clinical evaluation of the animals was performed and the weigth obteined every fourteen days, submited to a frigorific inspection and histological kidneys analysis. The neutralization capacity of the serum produced was evaluated in "in vitro" test. The fourth moment presented the major titles for all groups. However, the first group (G1), inoculated with NV associated with Freund's incomplet adjuvant (FIA) and aluminiun hidroxide presented the major titles when compared with the other ones, inoculated with NV associated to SBA-15 (G2), IrrV associated with FIA (G3) and IrrV associated with SBA-15 (G4). There was no estatistic difference between the groups concerning the weigth analysis. Only one animal presented lesion at the inoculation site. All the carcass obtained the consume aprovation stamp of the Federal Inspection Service (FIS). There was no kidney lesions on histological analysis. The four serum produced were able to neutralize the letal effect of Crotalus durissus terrificus venom, showed by the neutralization test. The convencional immunization protocol used for the first group (G1) showed more efficient neutralization capacity when compared with the others groups. / Orientador: Benedito Barravieira / Coorientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Nancy do Nascimento / Mestre

Resumo: As serpentes Crotalus durissus terrificus possuem cabeça triangular, olhos pequenos com pupila em fenda, fosseta loreal e guizo na cauda. O veneno é uma mistura complexa constituído de cátions metálicos, enzimas, peptídeos e toxinas. Os acidentes em seres humanos e em animais no Estado de São Paulo, Brasil estão em ascensão. Apesar da devastação ambiental, o número de serpentes que são capturadas e doadas aos Institutos de pesquisa também está aumentando. A questão é: Como estes animais conseguiram se adaptar e procriar apesar destas novas condições ambientais adversas? Para responder esta questão avaliou-se o nível de Carbono 13 (13C), por meio de técnica de espectrometria de massa, nos segmentos dos guizos de serpentes Crotalus durissus terrificus (Cdt) adultas e filhotes, bem como no alimento oferecido. Esta pesquisa foi baseada no conhecimento de que as plantas existentes na terra apresentam rotas bioquímicas diversas, absorvendo isótopos estáveis nas suas moléculas principalmente o Carbono (12C, 13C), o Hidrogênio (1H, 2H), o Oxigênio (16O, 17O, 18O), o Nitrogênio (14N, 15N) e o Enxofre (32S, 33S, 34S, 36S). Durante a síntese dos açúcares, quando o primeiro composto orgânico sintetizado for açúcar contendo três átomos de carbono, estas são denominadas de plantas do ciclo fotossintético C3. Quando os primeiros açúcares formados apresentam quatro átomos de carbono, estas são denominadas de plantas do ciclo fotossintético C4. No grupo C3 encontram-se aproximadamente 86% das espécies vegetais, tais como, as madeiras de lei, as leguminosas e as árvores frutíferas. No grupo C4, destacam-se principalmente as gramíneas, milho e cana-de-açúcar. A análise dos resultados em seu conjunto permitiu tecer as seguintes considerações: as serpentes Crotalus durissus terrificus se alimentam de animais provenientes tanto do ambiente C3 quanto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Crotalus durissus terrificus serpents possess triangular head, small eyes with pupil in crack, little loreal pit and rattle in its tail. The poison is a complex mixture constituted of metallic cations, enzymes, peptides and toxins. The accidents with human beings and animals in Sao Paulo State, Brazil are in ascension. Although the environment devastation, the number of serpents captured and donated to the research institutes is also increasing. The question is: How these animals had managed to adapt themselves and to procreate in spite of these new adverse environmental conditions? To answer this question it was evaluated the Carbon 13 level (13C), through of mass spectrometry technique, in the segments of the rattles of adults and nestlings Crotalus durissus terrificus serpents (Cdt), as well as in the offered food. This research was based on the knowledge of that the existing plants in the world present diverse biochemists routes, absorbing stables isotopes in its molecules mainly the Carbon (12C, 13C), the Hydrogen (1H, 2H), the Oxygen (16O, 17O, 18O), the Nitrogen (14N, 15N) and the Sulphur (32S, 33S, 34S, 36S). During the sugars synthesis, when the first synthesized organic composition was sugar contained three carbon atoms, these are called of plants of the C3 photosynthetic cycle. When the first formed sugars present four carbon atoms, these are called of plants of the C4 photosynthetic cycle. About 86% of the vegetal species are found in the C3 group, such as, the hardwoods, the vegetables species and fruitful trees. In the C4 group, the grass species, maize and sugar cane are mainly distinguished. The analysis of the results allowed the following considerations: the Crotalus durissus terrificus serpents eat animals proceeding from the C3 and C4 ambient; the complete turnover tax of the nestlings born in captivity until reaching the balance level varied between... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Benedito Barravieira / Coorientador: Carlos Ducatti / Banca: Marcelo Zacarias / Banca: Jorge Jim / Mestre

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2018-07-27T16:43:08Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Alves Moreira - 2017.pdf: 1637184 bytes, checksum: f22c13c5c8bfa0acda4db5c61b821da1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-30T14:03:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Alves Moreira - 2017.pdf: 1637184 bytes, checksum: f22c13c5c8bfa0acda4db5c61b821da1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-30T14:03:46Z (GMT). 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Objective: To determine acute oral toxicity of crotamine isolated from snake venom C. d. collilineatus was evaluated and its effects in experimental models of pain and inflammation in mice was investigated. Methodology: To evaluate acute oral toxicity, the up and down procedure and hippocratic screening was performed. For the nociceptive and inflammation assays, acetic acid-induced abdominal writhing, formalin-induced pain, ear edema induced by croton oil and pleurisy induced by carrageenan were performed. Results and Discussion: Crotamine did not cause lethality or signs of intoxication in the dose range of 0.34 to 10.88 mg/kg. In the abdominal writhing test, treatments at doses of 0.08, 0.16 and 0.32 mg/kg p.o. reduced the number of writhings in relation to the control by 34, 57 and 74 %, respectively, showing a dose-dependent trend. In the formalin-induced pain test it was observed that crotamine (0.16 mg/kg p.o.) reduced reactivity to pain in the neurogenic phase in 44.8% and in the inflammatory phase in 59.7%, suggesting antinociceptive activity. In addition, crotamine (0.16 mg/kg p.o.) was able to reduce ear edema induced by croton oil by 77 %, showing antidematogenic activity and reduced in 52.3 % the number of total leukocytes in the pleurisy test, reducing both neutrophil and mononuclear cells migration, thus exhibiting antimigratory activity. Conclusion: Crotamine did not induce a toxic or lethal effect at the doses tested. The reductions in writhings, reactivity to pain, ear edema and leukocytes migration with administration of crotamine were significant, suggesting that it has antinociceptive and anti-inflammatory activities. / Introdução: A crotamina é um polipeptídeo catiônico de baixo peso molecular (ca.4,8 kDa), extraído da peçonha das cascavéis. A presença desta toxina na peçonha de serpentes Crotalus durissus collilineatus foi responsável por apresentar atividade anti-edematogênica, sugerindo atividade anti-inflamatória da mesma. A dor e a inflamação são mecanismos presentes em diversas patologias, sendo importante a busca por novos compostos candidatos a fármacos eficazes e com menos efeitos adversos do que os existentes no mercado para tais tratamentos. Objetivo: Determinar a toxicidade aguda oral da crotamina isolada da peçonha de serpentes C. d. collilineatus e investigar seus efeitos em modelos experimentais de dor e inflamação em camundongos. Metodologia: Para avaliação da toxicidade aguda oral foi realizado o método up and down, de acordo com o Guia OECD 425 e a realização do screening hipocrático. Para os ensaios antinociceptivo e anti-inflamatório foram realizados testes de contorções abdominais induzidas por ácido acético, dor induzida por formalina, edema de orelha induzido por óleo de cróton e pleurisia induzida por carragenina. Resultados e Discussão: A crotamina não causou letalidade ou sinais de intoxicação na faixa de dose de 0,34 a 10,88 mg/kg. No teste de contorções abdominais, os tratamentos com as doses de 0,08, 0,16 e 0,32 mg/kg p.o. reduziram em 34, 57 e 74 %, respectivamente, o número de contorções em relação ao controle, apresentando tendência dose-dependente. Com o teste de dor induzida por formalina, observou-se que a crotamina (0,16 mg/kg p.o.) reduziu a reatividade à dor na fase neurogênica em 44,8 % e, na fase inflamatória, em 59,7 %, sugerindo uma atividade antinociceptiva. Além disso, a crotamina (0,16 mg/kg p.o.) foi capaz de reduzir em 77 % o edema de orelha induzido por óleo de cróton, apresentando atividade anti-edematogênica e reduziu em 52,3 % o número de leucócitos totais no teste de pleurisia, reduzindo a migração de neutrófilos e células mononucleares, exibindo assim actividade antimigratória. Conclusões: A crotamina não induziu efeito tóxico ou letal nas doses testadas. As reduções no número das contorções, na reatividade à dor, no edema de orelha e na migração de leucócitos, com administração da crotamina foram significativas, sugerindo que a mesma apresente atividades antinociceptiva e anti-inflamatória.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1195_1.pdf: 502946 bytes, checksum: 05de27e9cfcaa96d9a0be29bebb8ff1d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Cascavéis mantidas em cativeiro sob estresse térmico apresentam redução na velocidade da digestão, alterações quantitativa e qualitativa da peçonha, o que sugere a modulação de genes relacionados à aclimatação a baixas temperaturas. O presente trabalho visou clonar uma fosfolipase e avaliar a expressão de genes relacionados a estresse em glândulas de peçonha de cascavéis da espécie Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) submetidas a estresse térmico. Para tanto, a clonagem do cDNA de uma nova PLA2 foi realizada a partir da biblioteca de cDNA da glândula de peçonha de Cdcasca. A seqüência de aminoácidos deduzida dessa PLA2 indica que essa se enquadra no grupo das PLA2s ácidas, da classe II, cujos membros apresentam atividade enzimática. A fim de verificar o padrão de expressão após estresse térmico, os cDNA de glândulas de três cascavéis, provenientes da mesma ninhada, submetidas a extração da peçonha e, posteriormente, a temperaturas de 18°C (frio), 28 °C (controle) e 40° C (calor), por três dias, foram preparados e os transcritos de PLA2 e de proteínas de choque térmico (HSP70, HSP90, e HSF1) quantificados por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que os níveis de transcritos de PLA2 foram 5,24 vezes mais altos nas glândulas de peçonha da serpente mantida no frio em relação ao controle, enquanto os transcritos de PLA2 das glândulas da serpente mantida no calor não apresentaram diferenças significativas. Os níveis de transcritos das HSPs e seu fator de transcrição (HSF1) não variaram de maneira apreciável na amostras. Os resultados provaram, pela primeira vez, influência da baixa temperatura na expressão de uma toxina na glândula de peçonha de C. d. cascavella, sugerindo que essas serpentes podem adaptar a composição da peçonha à condição de estresse térmico