Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-12Bitstream added on 2014-06-13T20:05:23Z : No. of bitstreams: 1 bastos_as_dr_arafo.pdf: 971405 bytes, checksum: a74b6a8b306a24bb6ac6bb99a6d39a6f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve por objetivo avaliar os níveis locais e sistêmicos de peroxidação lipídica (LPO) e sua correlação com o perfil de marcadores inflamatórios, locais e sistêmicos em com Diabetes mellitus (DM) tipo 2, dislipidemia e periodontite crônica, comparando-os a indivíduos sem diabetes. Além disso, buscou-se propor um método validado para avaliar o malondiadeído (MDA) no fluido sulcular gengival de sítios saudáveis e doentes. A amostra foi constituída de 120 pacientes com doença periodontal crônica divididos em 4 grupos: Grupo1 (DM descompensado); Grupo2 (DM compensado); Grupo3 (sem diabetes com dislipidemia); Grupo 4 (sistemicamente saudável). Toda a amostra foi submetida a exame periodontal completo, exame físico e avaliação laboratorial para verificação da glicemia de jejum, hemoglobina glicada (HbA1c), insulina, proteína C-reativa e perfil lipídico. O exame periodontal consistiu na avaliação do índice de placa visível, do índice de sangramento marginal, da posição da margem gengival, da profundidade de sondagem, do sangramento à sondagem e do nível clínico de inserção. Para todos os grupos foram coletadas amostras de fluido sulcular gengival (FSG) (4 sítios sem periodontite e 4 sítios com periodontite) e de sangue para obtenção do plasma sanguíneo. Os níveis de peroxidação lipídica representados pelo MDA, avaliado por HPLC, e pelo LDL oxidado (LDLox), avaliado por ELISA, foram quantificados no fluido sulcular gengival e no plasma. Foram avaliadas ainda as citocinas (IL)-1, -2, - 4, -5, -6, -7, -8, -10, -12, -13 e fator de necrose tumoral α (TNF-α) no FSG e no plasma. Foi possível determinar e validar o método de avaliação no fluido sulcular gengival, com alta precisão, sendo que os coeficientes... / The aim of this study is to evaluate the levels of the lipid peroxidation and its correlation with systemic and local inflammatory markers profile in patients with type 2 diabetes mellitus (DM2) dyslipidemia and chronic periodontitis compared to systemically healthy patients. We also aimed to quantify a specific product of the lipid peroxidation process, malondialdehyde (MDA), in gingival crevicular fluid and to describe the validation of this method in this matrix using HPLC. The study sample comprised 120 patients divided into four groups with 30 patients in each group: group 1- diabetes with poor metabolic control with dyslipidemia, group 2- diabetes with good metabolic control, group 3- without diabetes with dyslipidemia and group 4- systemically healthy. All the subjects will go through a complete periodontal examination and physical and laboratory evaluation in order to verify fasting plasma glucose, glycated hemoglobin (HbA1c), lipid profile, insulin and high sensitivity C-reactive protein. Periodontal examination will consist of visible plaque index, gingival bleeding index, bleeding on probing, probing depth (PD) and clinical attachment levels (CAL). Plasma and samples of gingival crevicular fluid (GCF) will be collected in 4 sites without periodontal disease and 4 sites with periodontal disease. The lipid peroxidation levels, evaluated by oxidized LDL (ox LDL) and MDA were measured in GCF and in plasma. Inflammatory cytokines, (IL)-1, -2, -4, -5, -6, -7, -8, -10, -12, -13 and tumor necrosis factor-alpha α (TNF-α) were also evaluated in plasma and GCF. It was possible to validate a HPLC-based method to identify and quantify the MDA in GCF with sensitivity, precision, and accuracy even in small concentrations as observed in healthy... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:42Z : No. of bitstreams: 1 000835672.pdf: 1242062 bytes, checksum: 223abe457a764a4900582df310660530 (MD5) / Com o objetivo de avaliar a função miocárdica e autonômica de cães com sepse, foram estudadas 17 cadelas com diagnóstico de piometra e critérios de positividade para síndrome da resposta inflamatória sistêmica. Esses animais foram submetidos à avaliação ecocardiográfica e variabilidade da frequência cardíaca, além de avaliação hematológica, bioquímica sérica, dosagem das concentrações de TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e proteína C reativa, no momento do diagnóstico (T-0) e 15 (T-15) e 30 (T-30) dias após a histerectomia. Dentre os parâmetros ecocardiográficos, foi observada diminuição do tempo de desaceleração da onde E do fluxo mitral em T-0 em relação ao T-30 (68,0 ± 49,1 e 111,0 ± 63,8; p=0,035) e tempo de relaxamento isovolumétrico também em T-0 em relação ao T-30 (61,5 ± 15,6 e 70,0 ± 13,6; p=0,0002). Foi observada também correlação negativa significativa entre os índices de função sistólica, fração de encurtamento e fração de ejeção, e a concentração sérica de proteína C reativa (r=-0,324, p=0,02 e r=-0,332, p=0,01, respectivamente). Em relação à avaliação do sistema autonômico, foi observada redução de todos os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca em T-0 em relação aos demais momentos, com p<0,0001 para todos os índices. Assim, nas condições do presente estudo foi possível concluir que fêmeas caninas com sepse de ocorrência natural apresentam disfunção autonômica, refletido pela diminuição de todos os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca e que a proteína C reativa pode desempenhar um papel na patogênese da progressão do comprometimento cardíaco / In order to assess myocardial and autonomic function in dogs with sepsis were studied 17 bitches diagnosed with pyometra and positive criteria for systemic inflammatory response syndrome. These animals underwent echocardiographic and heart rate variability tests, and also hematological evaluation, serum biochemistry, and serum TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and C-reactive protein, at diagnosis (T-0) and 15 (T-15) and 30 (T-30) days after hysterectomy. Among the echocardiographic parameters were observed decrease in E mitral flow deceleration time in T-0 relative to the T-30 (68.0 ± 49.1 and 111.0 ± 63.8; p = 0.035) and isovolumetric relaxation time in relation to T-0 and T-30 (61.5 ± 15.6 and 70.0 ± 13.6, p = 0.0002). It was also observed a significant negative correlation between indexes of systolic function, fractional shortening and ejection fraction, and the serum concentration of C-reactive protein (r = -0.324, p = 0.02 and r = -0.332, p = 0.01, respectively). Regarding the assessment of the autonomic system, there was a reduction of all parameters of heart rate variability in T-0 compared to other moments, with p <0.0001 for all indexes. Thus, under the circumstances of the present study, it was possible to conclude that female dogs with naturally occurring sepsis present autonomic dysfunction, reflected by the reduction of all parameters of heart rate variability, and C-reactive protein may play a pathogenic role in the progression of cardiac involvement

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-02Bitstream added on 2014-11-10T11:58:26Z : No. of bitstreams: 1 000736350.pdf: 1151932 bytes, checksum: 4d60dd50232ef660af2db1b6ab836487 (MD5) / A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis (Pb), endêmica na América Latina. A resposta imune inata do hospedeiro contra o fungo já foi bem caracterizada e vários estudos demonstraram claramente a importância do papel desempenhado pelas células fagocíticas. O nosso laboratório têm estudado a relação entre os neutrófilos humanos (PMNs)/Pb, concentrando objetivos nos mecanismos efetores destas células contra o fungo. No entanto, nos últimos anos, os estudos demonstraram que, em adição às suas funções fagocíticas e “killing”, os PMNs podem modular e instruir a resposta imune, uma vez que estas células têm sido mostradas liberando e produzindo várias citocinas. Assim, avaliamos se PMNs estimulados com Pb podem modular a resposta imune para um padrão de resposta do tipo Th1, através da produção de IFN- (IFN-gama), bem como o papel dos receptores de reconhecimento de estruturas moleculares padrões” (PRRs), tais como o TLR2, TLR4 e Dectina-1 nesta produção. Além disso, foi perguntado se a ativação das células com as citocinas IL-12, IL-15 e IL-18 poderiam resultar em níveis aumentados dessa citocina. Os PMNs foram obtidos do sangue periférico de 20 dadores saudáveis e foram ativados ou não com IL-12, IL-15 ou IL-18 em diferentes concentrações e desafiados com a cepa (Pb18) durante 2h, 4h, 12h, 24h e 48h e avaliados para a produção de IFN-, por meio de ELISA. Em outros experimentos, os PMNs foram tratados com anticorpos monoclonais anti-TLR2, TLR4 e Dectina-1, estimulados com Pb e avaliados para a produção de IFN-. Descobrimos que o Pb induz PMNs humanos para produção de IFN-, provavelmente por ligação aos receptores TLR4 e Dectina-1 expressos por estas células. Além disso, os níveis de IFN- foram significativamente aumentado, quando as células foram ativadas com cada uma das citocinas testadas, ou uma combinação ... / Paracoccidiodomycosis is a systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), which is endemic in Latin America. The host innate immune response against the fungus has been well characterized and several studies have clearly shown the important role played by phagocytic cells. Our laboratory has studied the relationship between human neutrophils (PMNs)/ Pb, focusing the effector mechanisms of these cells against the fungus. However, in last years, studies have shown that in addition to their phagocytic and killer functions, PMNs can modulate and instruct the immune response, since these cells have been shown to produce and release several cytokines. Thus, we evaluated whether PMNs stimulated with Pb can modulate the immune response to a Th1 phenotype through the production of IFN-γ (IFN-gamma), as well as the role of “pattern-recognition receptors” (PRRs) such as TLR2, TLR4 and Dectin-1 in this production. Furthermore, we asked whether activation of the cells with the cytokines IL-12, IL-15 and IL-18 could result in increased levels of this cytokine. Peripheral blood PMNs obtained from 20 healthy donors were nonactivated or activated with IL-12, IL-15 or IL-18 in different concentrations and challenged with strain 18 Pb (Pb18) for 2h, 4h, 12h, 24h and 48h and evaluated for IFN- production, by ELISA. In other experiments, PMNs were treated with monoclonal antibodies anti-TLR2, TLR4 and Dectin-1, challenged with Pb and evaluated for IFN- production. We found that Pb induces human PMNs to produce IFN-, probably by binding to TLR4 and Dectin-1 receptors expressed by these cells. Moreover, IFN-γ levels were significantly increased when cells were activated with each of the tested cytokines or a combination of two of them, being the association IL-12 plus IL-15 the most effective. The results support our hypothesis that during infection by Pb, human PMNs via the of IFN-γ production modulate ...

Orientadora: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Rosimeire de Oliveira Vasconcelos / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Hiro Goto / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Resumo: A leishmaniose visceral canina é causada pela Leishmania (Leishmania) chagasi que é transmitida por flebotomíneos. A evolução clínica desta parasitose depende de uma complexa interação entre o parasita e a resposta imune do hospedeiro. Os cães infectados, que constituem o principal reservatório doméstico desse parasita, podem permanecer assintomáticos ou tornarem-se sintomáticos. O objetivo deste estudo foi quantificar as citocinas TNF- IL-4 e IL-10, em extratos de baço e fígado, de cães naturalmente infectados por L. (L.) chagasi e investigar a ocorrência de associação com a densidade parasitária nestes órgãos. Quarenta cães provenientes da cidade de Araçatuba, estado de São Paulo, área endêmica para leishmaniose visceral canina, soropositivos para L. (L.) chagasi, de acordo com ELISA indireto, foram divididos em dois grupos com 20 cães assintomáticos e 20 sintomáticos, com pelo menos três sinais da doença. Um grupo de 12 cães saudáveis, provenientes de área não endêmica, soronegativos para Leishmania spp., testados por ELISA indireto e que não apresentaram amplificação do DNA para L. (L.) chagasi, fizeram parte do grupo controle negativo. Após eutanásia dos cães, os fragmentos de baço e fígado foram coletados para a quantificação das citocinas, através de ELISA de captura, e determinação da densidade parasitária por PCR em tempo real. Nos animais infectados, os níveis de TNF- , IL-4 e IL-10, no baço e no fígado, foram superiores aos dos animais do grupo controle. A comparação entre os dois órgãos, nos cães infectados, mostrou que o fígado foi o principal produtor dessas citocinas. O nível de TNF- e a densidade de parasitas, no fígado, foram mais elevados nos cães sintomáticos, quando comparado com os cães... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Canine visceral leishmaniasis is caused by Leishmania (Leishmania) chagasi that is transmitted by phlebotominae. The clinical evolution of this parasitosis depends on a complex interaction between the parasite and the immune response in the host. Infected dogs, the main domestic reservoir of this parasite, may remain asymptomatic or may become symptomatic. The aim of this study was to quantify the TNF-, IL-4, and IL-10 cytokines in spleen and liver extracts from asymptomatic and symptomatic dogs naturally infected with L. (L.) chagasi and to investigate the association with the parasite density in these organs. A total of 40 dogs from the city of Araçatuba, São Paulo state (an endemic area for canine visceral leishmaniasis), all L. (L.) chagasi positive according to indirect ELISA, were divided into two groups, each containing of 20 asymptomatic dogs and 20 symptomatic dogs presenting at least three signs of the disease. A group of 12 healthy dogs from the non endemic area and negative for Leishmania spp, as indicated by indirect ELISA, and PCR negative for L. (L.) chagasi, were used as negative controls. After euthanasia, fragments from the spleen or liver were collected to quantify the cytokines, with ELISA capture assay, and to check parasite density by real time PCR. In infected dogs, the levels of TNF- , IL-4, and IL-10 were higher than in control animals, for the two organs. Cytokine levels in the spleen and liver of infected dogs revealed the liver as the main cytokine-producing organ during infection. The level of TNF- was higher in the liver of symptomatic dogs, where parasite density was higher than in asymptomatic dogs. The levels of IL-4 and IL-10 did not differ between symptomatic and asymptomatic dogs. A weak association between parasite density and IL-10 production was seen in the liver of asymptomatic... (Summary complete electronic access click below) / Doutor

Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Luciane Alarcão Dias-Melicio / Banca: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Dulce Constantino / Banca: Wafa Hanna Koury Cabrera / Banca: Ramon Kaneno / Resumo: A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis (Pb), endêmica na América Latina. A resposta imune inata do hospedeiro contra o fungo já foi bem caracterizada e vários estudos demonstraram claramente a importância do papel desempenhado pelas células fagocíticas. O nosso laboratório têm estudado a relação entre os neutrófilos humanos (PMNs)/Pb, concentrando objetivos nos mecanismos efetores destas células contra o fungo. No entanto, nos últimos anos, os estudos demonstraram que, em adição às suas funções fagocíticas e "killing", os PMNs podem modular e instruir a resposta imune, uma vez que estas células têm sido mostradas liberando e produzindo várias citocinas. Assim, avaliamos se PMNs estimulados com Pb podem modular a resposta imune para um padrão de resposta do tipo Th1, através da produção de IFN- (IFN-gama), bem como o papel dos "receptores de reconhecimento de estruturas moleculares padrões" (PRRs), tais como o TLR2, TLR4 e Dectina-1 nesta produção. Além disso, foi perguntado se a ativação das células com as citocinas IL-12, IL-15 e IL-18 poderiam resultar em níveis aumentados dessa citocina. Os PMNs foram obtidos do sangue periférico de 20 dadores saudáveis e foram ativados ou não com IL-12, IL-15 ou IL-18 em diferentes concentrações e desafiados com a cepa (Pb18) durante 2h, 4h, 12h, 24h e 48h e avaliados para a produção de IFN-, por meio de ELISA. Em outros experimentos, os PMNs foram tratados com anticorpos monoclonais anti-TLR2, TLR4 e Dectina-1, estimulados com Pb e avaliados para a produção de IFN-. Descobrimos que o Pb induz PMNs humanos para produção de IFN-, provavelmente por ligação aos receptores TLR4 e Dectina-1 expressos por estas células. Além disso, os níveis de IFN- foram significativamente aumentado, quando as células foram ativadas com cada uma das citocinas testadas, ou uma combinação ... / Abstract: Paracoccidiodomycosis is a systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), which is endemic in Latin America. The host innate immune response against the fungus has been well characterized and several studies have clearly shown the important role played by phagocytic cells. Our laboratory has studied the relationship between human neutrophils (PMNs)/ Pb, focusing the effector mechanisms of these cells against the fungus. However, in last years, studies have shown that in addition to their phagocytic and killer functions, PMNs can modulate and instruct the immune response, since these cells have been shown to produce and release several cytokines. Thus, we evaluated whether PMNs stimulated with Pb can modulate the immune response to a Th1 phenotype through the production of IFN-γ (IFN-gamma), as well as the role of "pattern-recognition receptors" (PRRs) such as TLR2, TLR4 and Dectin-1 in this production. Furthermore, we asked whether activation of the cells with the cytokines IL-12, IL-15 and IL-18 could result in increased levels of this cytokine. Peripheral blood PMNs obtained from 20 healthy donors were nonactivated or activated with IL-12, IL-15 or IL-18 in different concentrations and challenged with strain 18 Pb (Pb18) for 2h, 4h, 12h, 24h and 48h and evaluated for IFN- production, by ELISA. In other experiments, PMNs were treated with monoclonal antibodies anti-TLR2, TLR4 and Dectin-1, challenged with Pb and evaluated for IFN- production. We found that Pb induces human PMNs to produce IFN-, probably by binding to TLR4 and Dectin-1 receptors expressed by these cells. Moreover, IFN-γ levels were significantly increased when cells were activated with each of the tested cytokines or a combination of two of them, being the association IL-12 plus IL-15 the most effective. The results support our hypothesis that during infection by Pb, human PMNs via the of IFN-γ production modulate ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:56:56Z : No. of bitstreams: 1 leda_aro_me_botfm.pdf: 436850 bytes, checksum: e631607fe6c1cbb57e01981982378a57 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A história natural de infecção pelo HIV e a progressão para a aids podem variar entre diferentes indivíduos, possivelmente devido a fatores genéticos, entre eles os polimorfismos de nucleotídeo simples (SNPs). SNPs localizados em regiões promotoras de genes que codificam citocinas podem afetar a síntese e a regulação dessas moléculas, resultando em alterações nas respostas imunitárias. O presente estudo buscou avaliar as frequências e os possíveis efeitos de SNPs nas posições -589 e -1098 da região promotora do gene da IL-4 e SNPs nas posições -238 e -862 da região promotora do gene do TNF-α em pacientes portadores do HIV. Amostras de DNA de 157 pacientes foram obtidas através de células mononucleares de sangue periférico e a genotipagem dos SNPs foi realizada pela técnica de High Resolution Melting (HRM). Foi observado que pacientes portadores de TT em SNP/pIL-4 -589 apresentaram contagem de linfócitos T CD8 + menor em relação aos portadores de CC (p=0.0104). Além disso, portadores de TT em SNP/pIL-4 -1098 apresentaram contagem de linfócitos T CD8 + maior em comparação aos portadores de GT (p=0.0053). Em relação a SNP/pTNF-α -238, as proporções de pacientes portadores de GG e GA diferiu entre os pacientes sem HAART e pacientes com HAART e sem falha terapêutica (p=0.0205). Assim, os resultados obtidos no presente estudo fortalecem a hipótese de que SNPs em genes de citocinas podem alterar a história natural da infecção pelo HIV e o curso clínico da doença, principalmente devido a alterações no balanço da produção de citocinas pro- e antiinflamatórias. / The natural history of HIV infection and its progression towards aids may vary considerably among different individuals, possibly due to genetic factors, such as single nucleotide polymorphisms (SNPs). In cytokines genes promoters, SNPs may affect protein synthesis and regulation, resulting in more or less efficient immune responses against HIV. The present study evaluated the frequencies and possible effects of SNPs in the IL-4 gene promoter at positions -589 and -1098 and in the TNF-α gene promoter at positions -238 and -862 in HIV-infected patients from Brazil. DNA samples from 157 patients were obtained from peripheral blood mononuclear cells, and SNPs genotyping was performed by High Resolution Melting analysis (HRM). Patients carrying TT at SNP/pIL-4 -589 had lower circulating T CD8 + cells compared to CC carriers (p=0.0104). Moreover, carriers of TT at SNP/pIL-4 -1098 had more circulating T CD8 + cells compared to GT carriers (p=0.0053). Regarding SNP/pTNF-α -238, GG and GA proportions were significantly different between patients without HAART and patients on HAART without therapeutic failure (p=0.0205). In conclusion, these results provide compelling evidence that the presence of SNPs in cytokine-coding genes do modify the natural history of HIV infection, mainly due to changes in the balance between pro- and anti-inflammatory cytokines.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-28Bitstream added on 2014-06-13T20:36:36Z : No. of bitstreams: 1 marcolino_ld_me_botfm.pdf: 338414 bytes, checksum: 40e16603836e81203318aa6441533bf6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A infecção por Papilomavírus Humano (HPV) oncogênico é o fator de risco mais importante para desenvolvimento de lesões intraepiteliais bem como para o carcinoma epidermóide invasor. A resposta imune tem um papel importante na história natural da infecção pelo HPV na cérvice uterina estando envolvida na persistência viral e na progressão das lesões. As citocinas são moléculas reguladoras da transcrição do HPV, sendo que o padrão Th1 contribui para o desenvolvimento da imunidade celular contra a neoplasia e infecção pelo HPV, e está relacionado com clearance dessa infecção. O padrão Th2 está associado com a persistência da infecção viral e com a progressão das lesões. Avaliar a concentração de IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-g e TNF-a na secreção cervical e no soro de mulheres portadoras de lesão intraepitelial de baixo grau (LIEBG), lesão intraepitelial de alto grau (LIEAG) e carcinoma epidermóide invasor (CE). Foram incluídas no estudo 109 mulheres com diagnóstico histopatológico de LIEBG (n=16), LIEAG (n=40), CE (n=13) e 40 mulheres com suspeita de doença HPV induzida, mas sem alterações histopatológicas na biópsia do colo do útero (grupo controle), atendidas no Ambulatório de Colposcopia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP) e no Ambulatório de Ginecologia Preventiva do Hospital Amaral Carvalho, Jaú, SP. Durante o exame especular foi coletada a secreção cervical com cytobrush para determinação do perfil de citocinas. O sangue periférico das mulheres incluídas no estudo foi colhido por punção venosa, em volume de 10mL e os padrões de citocinas no soro e na secreção cervical foram avaliados por ensaio imunoenzimático (ELISA). A pesquisa de HPV nas biópsias foi realizada empregando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os primers específicos (MY9/11 e GP5+/GP6+) e a genotipagem foi realizada... / Infection with oncogenic types of human papillomavirus (HPV) is the most important factor for development of intraepithelial lesions and invasive squamous cell carcinoma. The immune response has an important role in the natural history of HPV infection in uterine cervix is involved in viral persistence and progression of lesions. Cytokines are molecules that regulate the transcription of HPV; the Th1 cytokine profile contributes to the development of cellular immunity against HPV infection and neoplasia, and is related to clearance of infection. The Th2 cytokine profile is associated with persistence of viral infection and the progression of lesions. Objectve: To evaluate the concentration of IL-2, IL-4, IL-6, IL- 10, IL-12, IFN-g and TNF-a in cervical secretion and serum of women with low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), high-grade intraepithelial lesion (HSIL) and invasive squamous cell carcinoma (EC). The study included 109 women with histological diagnosis of LSIL (n = 16), HSIL (n = 40), EC (n = 13) and 40 women with suspected of HPVinduced disease, but no pathological changes on cervix biopsy (control group) attending in the Colposcopy Clinic of the Botucatu Medical School (UNESP) and in the Preventive Gynecology, Hospital Amaral Carvalho, Jaú, SP. During speculum examination cervical secretion was collected with cytobrush to determining the profile of cytokines. The peripheral blood of women enrolled in the study was collected by venipuncture in 10 mL volume and patterns of cytokines in serum and cervical secretion were assessed by enzyme immunoassay (ELISA). The search for HPV in the fragments of the biopsies were performed using the technique of polymerase chain reaction (PCR) using specific primers (MY9/11 and GP5+/GP6+) and genotyping was performed using the technique of PCR primers specific and confirmed by the analysis of restriction fragment polymorphism... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:51:38Z : No. of bitstreams: 1 cezario_gag_me_botfm.pdf: 488938 bytes, checksum: 0f674e5f7e12d7ce0a1eabedb5c6a4bb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Toll-like receptors (TLRs) present in innate immune cells recognize pathogen molecules and influence on immunity to control the host-parasite interaction. Our objective was to evaluate the mRNA expression of TLR-2 and 4, expression and production of IL-12, IFN-γ, TNF-α, IL-17, IL-10 and TGF-β and NO production during infection with Leishmania chagasi and correlate TLR2 and 4 expressions with cytokines production and NO. Infection resulted in increased TLR2, TLR4, IL-17, TNF-α and TGF-β expression at the beginning of infection, with a decrease at the final phase in according the parasitic load; IFN- γ and IL-12 decreased at the peak of parasitemia and increased at the final phase; IL-10 increased during the whole period under analysis. With respect to cytokines and NO production, TGF-β, TNF-α and IL-17 showed high rates at the initial phase, and IFN-γ and IL-12 showed high rates at the final phase; IL-10 and NO showed increasing production during the infection period evaluated. There was a positive correlation of TLR2 and 4 with TNF-α, IL-17, NO, IL-10 and TGF-β at the beginning of infection, and with TNF-α, IL-17 and TGF-β at the end. Our data suggest that L. chagasi was in contact with host’s cells via TLR2 and 4, which resulted in cytokine modulation. This interaction could be considered as pathogenic mechanism in visceral leishmaniasis

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Gil Benard / Banca: Andréa de Faria Fernandes Belone / Resumo: Células gigantes multinucleadas (CGM) são células características, presentes em lesões granulomatosas, induzidas por agentes infecciosos e, sua formação pode ser modulada por citocinas produzidas por células da resposta imune. No presente trabalho avaliou-se o efeito modulador de citocinas pró-inflamatórias (IFN-γ e TNF-α) e anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-β1) na formação de CGM in vitro, a partir de monócitos humanos, estimulados com antígenos de Paracoccidioides brasiliensis (AgPb) e sobre a atividade fungicida dessas células desafiadas com a cepa Pb18 de P.brasiliensis. Monócitos do sangue periférico de indivíduos saudáveis foram cultivados na ausência de estímulo (controle), com AgPb (100ug/mL) ou com associações de AgPb e GM-CSF (100 U/ml) com as citocinas: IFN-γ (300UI/mL), IL-10 (50U/mL), TGF- β1 (250pg/mL) ou TNF-α (50U/mL). A formação de CGM foi avaliada após três dias de cultivo, estabelecendo-se o índice de fusão (IF) e a percentagem de CGM após fixação e coloração das células com May-Grunwald-Giemsa. Além disso, a atividade fungicida dessas células foi avaliada após 4 h de co-cultivo das CGM com 4 x 104 células leveduriformes viáveis da cepa Pb18 de P. brasiliensis, por plaqueamento das co-culturas em meio BHI-ágar e determinação da recuperação de fungos viáveis. O método estatístico empregado para comparação dos resultados foi análise de variância, com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a incubação de monócitos com AgPb+GM-CSF+IFN-γ induziu IF significativamente mais elevados em relação a todas as demais culturas: controle, apenas estimulados com AgPb ou AgPb adicionado das demais citocinas. A adição de TNF- α+AgPb+GM-CSF não resultou em IF maiores do que os obtidos na cultura estimulada apenas com o AgPb, enquanto as citocinas IL-10 e TGF-β1 apresentaram efeito supressor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Multinucleated giant cells (MGC) are characteristics cells present in granulomatous lesions induced by infectious agents and also may be modulated by cytokines produced by cells of the immune response. The present study evaluated the modulatory effect of interferon-gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) pro-inflammatory cytokines, and interleukin-10 (IL-10) and transforming growth factor beta (TGF-β1) anti-inflammatory cytokines on in vitro formation of MGC derived from human monocytes, stimulated with Paracoccidioides brasiliensis antigen (PbAg) and on fungicidal activity of these cells challenged with the Pb18 strain of P.brasiliensis. Peripheral blood monocytes obtained from healthy individuals were cultured for three days without stimulus (control) or with PbAg (100 ug/mL) or with association of PbAg and granulocyte macrophage colony stimulator factor (GMCSF (100 U/mL) with the following cytokines: IFN-γ (300 UI/mL), IL-10 (50 UI/mL), TGF-β1 (250 pg/mL) or TNF-α (50 UI/mL). The generation of MGC was evaluated by fusion index (FI) and the percentage of MGC formation after cell fixing and May-Grumwald-Giensa staining. Fungicidal activity of monocytederived MGC was evaluated 4h after co-culture of MGC with 4 x 104 viable yeast cells of Pb18 strain, by plating the cultures in BHI-agar and determination of viable fungi recovery. The statistical method employed for the comparison of the results was analysis of variance with the significance set at p< 0.05. The results showed that the incubation of monocytes with PbAg+GM-CSF+IFN-γ induced FI significantly higher than those observed in all the other cultures, such as control cultures, cultures stimulated with PbAg only or cultures stimulated with PbAg associated with the other cytokines. Stimulation with PbAg+TNF+GM-CSF did not result in FI higher than those obtained in the culture stimulated with PbAg only... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Domingos Alves Meira / Banca: Rogério de Jesus Pedro / Banca: David Salomão Lewi / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Resumo: Iniciativas como a "WHO/UNAIDS '3 by 5' permitiram que se atingisse, no ano de 2007, a marca de 3 milhões de pessoas com acesso à terapia antiretroviral (TARV) em países de baixa e média renda. O aumento da cobertura nestes países demanda custos importantes com anti-retrovirais, porém também levanta outro problema, que é o monitoramento da terapia em localidades de poucos recursos. Há consenso no fato de que devem ser pesquisados marcadores de eficácia da TARV mais acessíveis. Considerando o comportamento da β-2 microglobulina sérica e das citocinas séricas TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-10 com relação à atividade inflamatória induzida pela replicação do HIV-1, o objetivo deste estudo foi o de verificar o comportamento destas substâncias como indicadores da presença, ou não, de falha terapêutica à HAART. Entre agosto de 2004 e novembro de 2005, 89 indivíduos infectados pelo HIV-1, atendidos pela Área de Doenças Tropicais da Faculdade de Medicina de Botucatu-UNESP, e 20 indivíduos normais, doadores de sangue do Hemocentro de Botucatu [43 mulheres e 66 homens; idade média = 39,7 anos (22 - 66 anos)] foram divididos em 4 grupos: G1- 15 indivíduos infectados pelo HIV-1, virgens de tratamento ou sem HAART há pelo menos seis meses e com contagens de linfócitos T CD4 + menores que 350 células/mm3; G2- 31 indivíduos infectados pelo HIV-1, em uso de HAART e sem falha terapêutica virológica (FT); G3- formado por 43 indivíduos infectados pelo HIV-1, em uso de HAART e com FT, e GC- formado por 20 indivíduos normais, não infectados pelo HIV-1, que serviram de controles para as citocinas séricas. Foram revisados os dados demográficos, clínicos e de HAART e realizados os exames β-2 microglobulina sérica, citocinas séricas (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-10), genotipagem do HIV-1, carga viral plasmática (CV) e linfócitos T CD4 + e T CD8 +. Para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Initiatives such as WHO/UNAIDS '3 by 5' made it possible to achieve the figure of 3 million people with access to antiretroviral therapy (ART) in middle- and low-income countries in 2007. The increase in these countries' coverage leads to important expenditure on antiretroviral drugs; however, it also raises another problem, which is therapy monitoring in low-income locations. There is agreement on the fact that more accessible ART efficacy markers must be studied. By considering the behavior of serum β-2 microglobulin and serum cytokines TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-10 in relation to inflammatory activity induced by HIV-1 replication, the objective of this study was to assess the behavior of such substances as indicators of the presence, or not, of antiretroviral therapeutic failure (TF). From August 2004 to November 2005, 89 HIV-1-infected individuals assisted by the Tropical Diseases Sector of the Botucatu School of Medicine - UNESP and 20 normal blood donors at the Blood Transfusion Center of Botucatu [43 female and 66 male; mean age = 39.7 years (22 - 66 years)] were divided into 4 groups: G1- 15 HIV-1-infected individuals, previously untreated or without HAART for at least six months and CD4 + < 350 cells/mm3; G2- 31 HIV-1-infected individuals undergoing HAART without virological therapeutic failure (TF), G3- 43 HIV-1-infected individuals undergoing HAART with TF, and CG- 20 normal individuals who served as controls for serum cytokines. Demographic, clinical and HAART data were reviewed, and serum β-2 microglobulin, serum cytokines (TNFα, IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-10), HIV-1 genotyping, plasma viral load (VL) and T CD4 + and T CD8 + lymphocytes tests were performed. The Mann-Whitney test for independent samples was used for between-group comparison in the case of numeric variables, and Fisher's exact test was applied for category variables. Statistical difference... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor