Infections with parasitic helminths are counted as neglected tropical diseases; they infect millions of people worldwide, causing high morbidity and economic loss. Many parasites establish long lasting infections in the host by blocking immune recognition, activation and effector pathways. To allow in depth research on their modes of immune evasion, several mouse models for parasitic helminth infections have been established. Heligmosomoides polygyrus for example is a gastrointestinal nematode of rodents exhibiting a wide spectrum of immunomodulatory effects, mediated in part by soluble molecules released by adult worms in vitro, the excretory/secretory products (HES). HES is a potent inhibitor of dendritic cell (DC) activation by Toll-like receptor (TLR) ligands, completely abolishing LPS induced IL-12 production and reducing the upregulation of cell surface activation markers. As of now, neither the modulatory molecule nor its mechanism of action are known. Here, the effect of HES on TLR ligand induced DC maturation was characterized in considerably more detail compared to previous publications. It could be shown to inhibit DC maturation induced by various TLR ligands, on both protein and mRNA levels. These effects were comparable in both C57BL/6 and BALB/c derived cells; in contrast to this HES differentially affected alternative activation of BMDC from these two mouse strains. Although for most of the experiments GM-CSF differentiated BMDC were used, HES also inhibited LPS induced activation of splenic CD11c+ cells as well as the activation of all three populations described in Flt3-L differentiated BMDC - pDCs, CD11b+ cDCs and CD24+ cDCs. Furthermore, it could be shown here that HES also inhibits LPS induced maturation in human monocyte derived DCs. In the search for the component in HES responsible for its inhibition of TLR ligand induced DC maturation, exosome depleted HES rather than exosomes was inhibitory, and the effect was heat labile. This lead to the conclusion that the modulatory molecule has a protein component which is indispensable for its effect; following this reasoning HES was subjected to fractionation, with subsequent analysis of the fraction protein contents by mass spectrometry. The top nine candidate proteins were expressed recombinantly; however, the recombinants were not able to inhibit LPS induced DC activation. In parallel, experiments to elucidate the mechanism by which HES inhibits TLR ligand induced DC maturation were performed. This led to the conclusion that HES induces changes in the cells that, while not affecting the induction of signalling downstream of TLRs, do impair its maintenance. As a complement to these experiments, the transcriptomes of LPS and LPS+HES treated cells eight hours after LPS stimulation were compared. This revealed that transcripts encoding a number of transcription factors inducing the expression of activation markers after TLR ligation were reduced upon treatment of cells with HES, as were the transcript levels of IRAK2, a kinase necessary for persistent signalling. In addition, HES increased the transcript levels for several factors known to negatively regulate DC maturation, including ATF3. Furthermore, this analysis revealed changes in transcript levels of factors like HIF-1a, indicating an even greater reliance on aerobic glycolysis if cells were treated with HES, in addition to hints at increased ER and oxidative stress. In conclusion, this work narrows down the list of potential DC modulators in HES, gives a first insight into changes in DC metabolism induced by HES and sheds light on the role of a number of signalling pathways with important roles in DC activation as targets of DC inhibition by HES.

Homeostasis within the neuro-glial unit is essential to the longevity of neurons. Conversely, loss of homeostasis, particularly of Ca2+ levels, of redox balance and of ATP, contribute to neuronal loss and dysfunction in many neurodegenerative and neurological disorders. This thesis is centred on better understanding the vulnerability of neurons to stress, as well as adaptive responses to these stresses. Since neurodegenerative conditions associated with Ca2+, redox and bioenergetic dyshomeostasis are often characterised by early dendritic pathology, I first studied dendritic vs. somatic responses of primary cortical neurons to these types of challenges in real-time. Using a wide range of genetically-encoded probes to measure Ca2+, ATP, NADH, glutathione and glutamate, I show that dendrites are selectively vulnerable to oxidative stress, excitotoxicity as well as to metabolic demand induced by action potential (AP) burst activity. However, I provide evidence that neurons undergoing energetically demanding AP burst activity can adjust their metabolic output by increasing mitochondrial NADH production in a manner dependent on the mitochondrial calcium uniporter (MCU), as well as increase their capacity to buffer their intracellular redox balance. Finally, I have studied transcriptional programs in astrocytes triggered by neurons and neuronal activity to better understand adaptive signaling between different cell types in the neuro-glial unit. I developed a novel system combining neurons and astrocytes from closely-related species, followed by RNA-seq and in silico read sorting. I uncovered a program of neuron-induced astrocytic gene expression which drives and maintains astrocytic maturity and neurotransmitter uptake function. In addition I identified a novel form of synapse-to-nucleus signaling, mediated by glutamatergic activity and acutely regulating diverse astrocytic genes involved in astrocyte-neuron metabolic coupling. Of note, neuronal activity co-ordinately induced astrocytic genes involved in astrocyte-to-neuron thyroid hormone signaling, extracellular antioxidant defences, and the astrocyte-neuron lactate shuttle, suggesting that this non cell-autonomous signaling may form part of the homeostatic machinery within the neuro-glial unit.

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica e potencialmente fatal causada, no Brasil, pelo protozoário Leishmania infantum. A resistência à LV é relacionada ao desenvolvimento de uma resposta imune celular eficiente. Para isso, células dendríticas (DCs) reconhecem produtos antigênicos do parasito, através dos Toll-like Receptors (TLRs), e, após ativação, produzem fatores, que irão orquestrar o recrutamento celular e desenvolvimento da resposta imune protetora. Dentre os vários TLRs, tem sido demonstrado que o TLR9 está relacionado com a resistência à infecção em modelo de leishmaniose cutânea. No presente estudo, nosso objetivo foi determinar o papel do TLR9 durante a infecção por L. infantum. Nossos resultados demonstram que a expressão de TLR9 é modulada positivamente durante a infecção in vivo e in vitro pela L. infantum. O TLR9 é essencial para o controle da infecção contra L. infantum, uma vez que camundongos TLR9-/- são mais susceptíveis à infecção, apresentando maior número de parasitos no baço e fígado na 4ª e 6ª semana pós-infecção. A fenotipagem de leucócitos presente no baço demonstrou que camundongos TLR9-/- possuem menor número de neutrófilos. De maneira semelhante, a análise imuno-histoquímica mostrou uma reduzida marcação de células 7/4+ (específica para neutrófilos) no fígado de animais TLR9-/-. A falha na migração de neutrófilos observada em animais TLR9-/- não está associada a uma incapacidade de ativação dos polimorfonucleares, mas sim a deficiências na produção de fatores quimiotáticos, como CXCL1 (KC) e CXCL2 (MIP-2) nos órgãos-alvo. Investigando o mecanismo de ação, as células dendríticas oriundas de animais TLR9-/- falham em seu processo de ativação frente à infecção in vitro e in vivo com L. infantum, apresentando um fenótipo semi-maduro, com redução de expressão de MHC-II e moléculas coestimuladoras. Interessante que essas células apresentaram deficiência na produção de mediadores quimiotáticos de neutrófilos como KC e MIP-2, e consequentemente, induzindo o menor recrutamento de neutrófilos in vitro. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o TLR9 é essencial para o controle da infecção por L. infantum, através de um mecanismo dependente do recrutamento de neutrófilos para o sítio inflamatório mediado pela ativação apropriada de fatores quimiotáticos de neutrófilos pelas DCs. / Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic and potentially fatal disease caused by protozoan Leishmania infantum, in Brazil. The resistance against VL is related to the development of cellular immune response. During infection, the dendritic cells (DCs) recognize antigenic products through Toll-like Receptors (TLRs) and then orchestrate the cellular recruitment and immune response development. Among several TLRs, it has been showed that TLR9 is related to resistance to cutaneous leishmaniasis. In the present study, our aim was to determinate the role of TLR9 during L. infantum infection. Our results demonstrated that TLR9 is up regulated during in vitro and in vivo L. infantum infection. TLR9 is critical for protective immunity against L. infantum, since TLR9-/- mice infected were more susceptible to infection, displaying high amounts of parasites in spleen and liver, at 4th and 6th weeks post-infection. Phenotyping the leukocytes into the spleen, TLR9-/- mice presented reduced neutrophils when compared to WT. Likewise, imunohistochemistry analyses showed the reduced of 7/4+ cells (specific to neutrophils) staining into the TLR-9-/- liver. The failure of neutrophil migration is not associated to their stage of activation impaired, but due the reduced levels of CXCL1 (KC) and CXCL2 (MIP-2) (neutrophil chemoatracttant) produced into into the spleen cells culture from infected TLR9-/-. Furthermore, DCs from TLR9-/- presented a semi-mature stage during in vitro and in vivo L. infantum infection, showing reduced expression of MHC-II and co-stimulatory molecule. Interestingly, the ability of DC to produce the neutrophil chemotact mediators (KC and MIP-2) was completely reduced by that derived from TLR9-/- mice, affecting neutrophil migration into Boyden chamber. Altogether, we demonstrated that TLR9 presents a critical role in the protective response against L.infantu through the mechanism dependent of crosstalk between neutrophil recruitment and DC activation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-10Bitstream added on 2014-06-13T21:01:53Z : No. of bitstreams: 1 botari_cme_me_botfm.pdf: 1339344 bytes, checksum: f4a978b0ca0056da6a691563d873a9ac (MD5) / Fundação Amaral Carvalho / The graft versus host disease (GVHD) or graft-versus-host-disease(GVHD) is a major cause of morbidity and mortality in patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). It is a syndrome with various clinical, pathological and immunological. Aiming to contribute to clarifying the role of Myeloid dendritic cells, plasmacytoid cells and NK (natural killer) in chronic graft versus host disease (GVHD) and to clarify the mechanisms involved were examined microscopic sections of the oral mucosa of 26 patients with leukemia Acute Myeloid (AML) who underwent allogeneic hematopoietic stem cell in the Hospital Amaral Carvalho, Jau - SP, where 13 patients develop GVHDc oral mucosa and 13 did not develop GVHD. Microscopic sections were submitted to immunohistochemistry staining using monoclonal antibodies anti-CD1a, anti-CD56 and anti- CD123. The number of immunostained cells in the chorion (CD1a, CD123 and CD56) per square millimeter was calculated by dividing the mean of dendritic cells present in the 10 fields examined area covered by each specimen. The data were evaluated by Mann-Whitney. Results showed a statistically significant increase of myeloid dendritic cells CD1a (p = 0.02) and NK cells CD56 (p = 0.04) in patients with GVHDc compared with those without GVHDc. Analysis of CD123 immunostaining of no statistical difference between groups. It is concluded from this study that the development of chronic GVHD is participation of myeloid dendritic cells and NK cells in the chorion of oral mucosa

Orientador: José Maurício Sforcin / Banca: Marjorie de Assis Golim / Banca: Maria Angélica Ehara Waranabe / Banca: Ângela M. V. Campos Soares / Banca: Robson Francisco Carvalho / Resumo: Células dendríticas (DCs) são essenciais para o reconhecimento de patógenos e apresentação de seus antígenos aos linfócitos T, desempenhando papel fundamental no elo entre as respostas imunes inata e adaptativa. A própolis é um produto resinoso, elaborado pelas abelhas a partir de diversas partes das plantas, e tem despertado a atenção dos pesquisadores em virtude de suas inúmeras propriedades biológicas, destacando sua ação imunomoduladora. Assim, o presente projeto de pesquisa teve como objetivo investigar o efeito da própolis sobre a maturação e função de DCs humanas. Foi analisado o efeito da própolis na ativação do NF-кB, expressão de micro-RNAs e marcadores de superfície celular (TLR-4, MHC-II, CD80, CD86 e CD40), produção de citocinas (TNF-, IL-6, IL-10 e IL-12), e atividade bactericida das DCs humanas contra Streptococcus mutans. Tomados em conjunto, os dados sugerem o perfil ativador da própolis em DCs, visto que este produto apícola manteve a ação induzida por LPS tanto na ativação do fator de transcrição NF-кB como na produção de TNF-α, IL-6 e IL-10. Ademais, a inibição na expressão de hsa-miR-148a e hsa-miR-148b aboliu o efeito inibitório dos mesmos sobre a expressão de HLA-DR e também pode ter favorecido a produção de citocinas pró-inflamatórias. O aumento na expressão de hsa-miR-155 pode estar correlacionado ao aumento na expressão de TLR-4 e CD86, além de manter a ativação induzida pelo LPS de HLA-DR e CD40. Estes parâmetros podem estar envolvidos com o aumento na atividade bactericida de DCs contra Streptococcus mutans. Estes dados sugerem que a própolis pode modular positivamente a maturação e função de DCs / Abstract: Dendritic cells (DCs) represent a heterogeneous population of professional antigen presenting cells (APCs) and are essential for recognition and presentation of pathogens to T cells. Propolis, a resinous material produced by bees from various plant sources, exhibits numerous biological properties, highlighting its immunomodulatory action. Here, we assayed the effects of propolis on the maturation and fuction of human DCs, assessing the activation of the transcription factor NF-kB, micro-RNAs and cell markers expression (TLR-4, HLA-DR, CD80, CD86, CD40), cytokines production (TNF-α, IL-6, IL-10, IL-12), and the bactericidal activity against Streptococcus mutans. DCs were generated from monocytes treated with IL-4 and GM-CSF and incubated with propolis and LPS. NF-κB in nuclear extract and cytokines were determined by ELISA. microRNAs expression was analysed by RT-qPCR and cell markers by flow cytometry. Colony-forming units were counted to assess the bactericidal activity of propolis-treated DCs. Propolis activated human DCs, inducing the NF-kB signaling pathway and TNF-, IL-6 and IL-10 production. The inhibition of hsa-miR-148a and hsa-miR-148b abolished the inhibitory effects on HLA-DR and pro-inflammatory cytokines. The increased expression of hsa-miR-155 may be correlated to the increase in TLR-4 e CD86 expression, maintaining LPS-induced expression of HLA-DR and CD40. Such parameters may be involved in the increased bactericidal activity of DCs against Streptococcus mutans. These studies are particularly important to develop DC-based modulation strategies for the identification of promising sources for drug discovery / Doutor

INTRODUÇÃO: O papilomavírus humano (HPV) é o agente mais frequentemente encontrado em doenças sexualmente transmissíveis e é responsável por cerca de 40% dos cânceres vulvo-vaginais. Esse trabalho abordou a resposta imune em lesões vulvares, considerando-se as células dendríticas CD1a+, FXIIIa+ e S-100+, citocinas TNF-, IFN- e IL-10 e a molécula de adesão E-caderina. MÉTODOS: Foram utilizadas 49 lesões de vulva pelo HPV (condiloma acuminado, NIV-I, NIV-II e NIV-III) e 11 bióspias com diagnóstico de vulvite crônica inespecífica. Foram constituídos quatro grupos: lesões de baixo grau (condiloma e NIV I), lesões de alto grau (NIV II e III), vulvites inespecíficas e pele normal. A detecção das células, citocinas e E-caderina foi feita através de método imuno-histoquímico. RESULTADOS: As células de Langerhans (CD1a+) estavam distribuídas em todo o epitélio, sobretudo nas camadas suprabasal e espinhosa. Não diferiram entre os grupos de lesões HPV+, mas estavam diminuídas em número e tamanho quando comparadas à pele normal (p<0.0001). As células S-100+ ou FXIIIa+ estavam localizadas em toda a extensão do estroma, sem diferença estatística entre as lesões pelo HPV. Embora os DDFXIIIa+ estivessem aumentados em tamanho nas lesões de vulva, seu número não diferiu da pele normal. Não se observou diferenças numéricas das células S-100+ entre os grupos de lesão e pele normal. Foi possível detectar maior número de DDFXIIIa+ sobre as células S-100+ no grupo de lesões de baixo grau (p = 0,0008) e de alto grau (p = 0,0031). As citocinas foram detectadas em pequenas quantidades nos grupos de lesões, porém sem diferença estatística. Para a análise da expressão de e-caderina, o grupo de vulvites crônicas inespecíficas foi utilizado como controle. Em 91.0% das vulvites inespecíficas foi observado padrão homogêneo e difuso da expressão de e-caderina na camada espinhosa baixa e média. Ambos os grupos de lesões HPV+ exibiram padrões semelhantes de expressão de e-caderina, com marcação difusa ou focal na camada espinhosa baixa e média. Não houve imuno-reatividade nas áreas de displasias. Como resultado da reação de dupla-marcação, feita através da utilização da hibridização in situ para detecção do DNA do HPV e imunohistoquímica para DDFXIIIa+, foi possível identificar antígenos virais no citoplasma dessas células. CONCLUSÕES: o HPV interfere na expressão das células de Langerhans, pois estas estavam diminuídas, com morfologia alterada em relação à pele normal; os DDFXIIIa+ apresentam-se aumentados em número sobre as células S-100+, o que poderia refletir um mecanismo local compensatório contra o HPV; as lesões de baixo e alto grau não apresentam diferenças significativas quanto à densidade de células expressando TNF-, IFN- e IL-10, embora TNF- predomine entre as três citocinas; há uma correlação positiva entre os DDFXIIIa+ e a expressão de TNF-, o que poderia ser explicado por sua capacidade em produzir tal citocina a partir de um provável estímulo desencadeado pelo HPV; o HPV influencia na expressão de E-caderina na vulva, com destaque para a ausência de expressão nas áreas de displasia; o DNA do HPV encontrado no interior dos DDFXIIIa+ aliado às alterações na morfologia celular, a sobreposição destas sobre as células S-100+ e a relação encontrada com a citocina TNF-, nos permitem sugerir que os DDFXIIIa+ têm um papel importante como células apresentadoras de antígeno frente à infecção pelo HPV. / INTRODUCTION: The human papillomavirus (HPV) is the most frequent agent in sexually transmitted diseases and is responsible for almost 40% of vulvovaginal cancer. We studied the immune response in vulvar lesions, considering the CD1a+, FXIIIa+ and S-100+ dendritic cells, TNF-, IFN- and IL-10 cytokines and the adhesion molecule E-cadherin. METHODS: We used 49 vulvar lesions mediated by HPV (condylomata acuminata, VIN-I, VIN-II e VIN-III) and 11 biopsies diagnosed as chronic non-specific vulvitis. Four groups were formed: low-grade lesions (condylomata and VIN-I), high-grade lesions (VIN-II and III), non-specific vulvitis and normal skin. The detection of cells, cytokines and e-cadherin was performed by immunohistochemistry reaction. RESULTS: Langerhans cells (CD1a+) were distributed through epithelia, mainly in suprabasal and spinous layer. They did not differ between HPV groups, but were decreased in number and size when compared to normal skin (p<0.0001). The S-100+ ou FXIIIa+ cells were distributed through stroma and did not differ between HPV lesions. Although the FXIIIa+DD were increased in size in vulvar lesions, their number did not differ from normal skin. The S-100+ cells did not differ in number between the groups of lesions and normal skin. We detected an increased number of FXIIIa+DD over S-100+ cells in the group of low-grade (p = 0.0008) and high-grade lesions (p = 0.0031). The cytokines were detected in small quantities in both the lesions groups, with no statistical difference. The group of chronic non-specific vulvitis was used as control group to analyse the expression of e-cadherin. 91.0% of non-specific vulvitis presented a homogeneous and diffuse pattern of expression in spinous layer Both the HPV+ groups of lesions presented similar patterns of e-cadherin expression, with a focal or diffuse localization in spinous layer. The dysplastic epithelium did not present immunoreactivity. As a result of the double-staining, using in situ hibridization to detect DNA of HPV and immunohistochemistry to FXIIIa+DD, it was possible to observe viral antigens in the cytoplasm of such cells. CONCLUSIONS: The HPV interfere with the expression of Langerhans cells, since they were decreased when compared to the normal skin; the FXIIIa+DD were increased in number over S-100+ cells, suggesting a local compensatory mechanism against the HPV; the low and high grade lesions did not differ in the number of cells expressing TNF-, IFN- and IL-10, although TNF- predominate among the three cytokines; there is a positive correlation between the FXIIIa+DD and the expression of TNF- that could be explained by their role as TNF-producing cells following a stimulus of HPV; the HPV changes the expression of E-cadherin in vulvar lesions, mainly in dysplastic epithelium; HPV DNA visualized in the cytoplasm of FXIIIa+DD and the cellular morphological changes, the increased number over S-100+ cells and the correlation with TNF-, allow us to suggest that FXIIIa+DD play an important role as antigen presenting cells in the infection by HPV.

Os cães são afetados por doenças inflamatórias e neoplásicas que compartilham diversas similaridades com as desordens em humanos, assim seu estudo representa um importante modelo animal para as condições humanas. As células dendríticas (DCs) representam a população mais potente de células apresentadoras de antígenos. As DCs representam também um novo alvo promissor de imunoterapia em cães; no entanto o uso terapêutico de DC caninas é restrito, dentre outros fatores, devido a falta de padronização nas técnicas de isolamento e limitado numero de informações específicas da espécie a esse respeito. Este projeto tem por finalidade avaliar a geração de células dendríticas caninas geradas in vitro e ativadas por diferentes estímulos biológicos na presença e ausência de extrato tumoral de melanoma canino. Os resultados demonstraram que as DCs caninas geradas na presença de extrato tumoral em grandes concentrações apresentavam atividade funcional semelhante as DCs maduras / Dogs are affected by inflammatory and neoplastic diseases that share many similarities with the disorders in humans, so their study is an important animal model for the human condition. Dendritic cells (DCs) are the most potent population of antigen presenting cells. DCs also represent a promising new target for immunotherapy in dogs; However, the therapeutic use of canine DC is restricted among others factors due to lack of standardization in isolation techniques and limited number of species-specific information in this regard. This project aims to assess the generation of canine dendritic cells generated in vitro and activated by different biological stimuli in the presence and absence of tumor extract of canine melanoma. The results showed that the canine DCs generated in the presence of high concentrations tumor extract showed similar functional activity of mature DCs

Introdução: Doenças pulmonares ou infecções que ocorrem no início da vida podem ter permanente impacto na vida adulta. Pouco se sabe sobre o perfil de células do sistema imunológico em pulmões de crianças lactentes. Objetivo: Descrever o perfil de células do sistema imunológico no pulmão de lactentes sem doença pulmonar. Métodos: Amostras de pulmões histologicamente normais, obtidas através de autópsia de dez crianças que morreram de causas acidentais ou de doenças não pulmonares, foram marcadas por anticorpos contra linfócitos B e T, macrófagos, células NK (natural Killer), células citotóxicas, células dendríticas e mastócitos. As células foram quantificadas no epitélio, na camada interna, na camada externa das vias aéreas e nos septos alveolares. Membrana basal e septos alveolares foram medidos através de análise de imagem. Resultados expressos em células/mm de membrana basal epitelial brônquica ou alveolar. Resultados: A mediana das idades foi 2,5 meses (1-730 dias). Os resultados mostraram que a camada interna apresentou pequena densidade celular. No epitélio da via aérea e no parênquima houve predominância de células que estão relacionadas com a imunidade inata, tais como: CD56+, Granzyme + e CD68+. A camada externa e o parênquima alveolar apresentaram a maior densidade celular. Poucas células T CD4+ e células dendríticas foram encontradas na maioria dos compartimentos do pulmão. Conclusão: Há uma compartimentalização de células relacionadas com o sistema imunológico ao longo da via aérea e parênquima dos pulmões das crianças estudadas. Esta configuração pode estar relacionada com o desenvolvimento dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunidade adquirida. Este conhecimento é importante para entender os mecanismos da imunocompetência pós-natal dos pulmões / Introduction: Pulmonary diseases or infections occurring early in life may have a permanent impact in adulthood. Little is known about the normal immune cell profile in the lungs of infants. Objective: To describe the immune cell profile of infants without lung disease. Methods: Histologically normal lung samples obtained at autopsy of ten infants that died either due to incidental or inflicted causes or non-pulmonary diseases were stained for antibodies against B and T lymphocytes, macrophages, NK cells, cytotoxic cells, dendritic cells and mast cells. Cells were quantified in the airway epithelial layer, inner layer, outer layer and alveolar septa. Basement membrane or alveolar septa lengths were assessed by image analysis. Results are expressed as cells/mm. Results: The median age of patients was 2.5 months and ranged from 1- 730 days. The inner layer of the airways was the region with the smallest density of cells. There was a predominance of cells related to the innate immunity such as CD56+, Granzyme B+ and CD68+ cells in the epithelial layer and alveolar parenchyma. The outer layer and the lung parenchyma presented the highest cellular density. There were very few CD4+ T cells or dendritic cells in most of the lung compartments. Conclusions: There was a compartmentalization of immune cells along airways and parenchyma in infants, which may be related to the development of innate and acquired lung defense mechanisms. This knowledge is important to understand mechanisms of postnatal immune competence of the lungs

A biodiversidade dos rios brasileiros encontra-se sob severa ameaça, em razão da fragmentação e perda de hábitat que os barramentos representam. Até o presente, os aproveitamentos hidrelétricos têm seu licenciamento ambiental condicionado a análises de impacto locais, sem avaliação dos impactos cumulativos de múltiplas barragens em uma bacia hidrográfica, com relação à conservação da diversidade da ictiofauna. Estudos anteriores para subsídio de licenciamento de múltiplas barragens na bacia Taquari-Antas (RS) propuseram cenários alternativos de conservação (número e posição de barragens), quando ainda não havia métricas de conectividade dendrítica desenvolvidas. Entre os problemas identificados naqueles estudos figuram a quantificação dos efeitos cumulativos das barreiras sobre a conectividade da bacia, o estabelecimento de áreas prioritárias para conservação e a influência do número e da posição das barreiras na conservação da biodiversidade aquática em uma bacia. Avaliamos a aplicação de conectividade para mensuração de impactos cumulativos de fragmentação de bacias hidrográficas através de índices de conectividade dendrítica recentemente propostos. Propomos um método genérico e replicável para analisar quantitativamente os efeitos de sucessivos barramentos em relação à conectividade dos hábitats aquáticos em processos de migração e dispersão de peixes em bacias hidrográficas. Utilizamos simulações de cenários de múltiplos barramentos para a avaliação. Propomos também uma sistematização para a simulação de múltiplos barramentos. Além disso, hierarquizamos áreas para conservação por conectividade, aplicamos as novas métricas de conectividade a estudos anteriores e demonstramos casos de cenários de alta conectividade com outras implicações na conservação. Discutimos o amadurecimento do método para aplicação em licenciamento ambiental e planejamento de conservação, bem como limitações atuais e perspectivas para trabalhos futuros. / Biodiversity of Brazilian rivers is nowadays seriously threatened due to fragmentation and habitat loss that impoundments represent. Up to now, hydroelectric power plants have their environmental licensing processes conditioned to local impact analysis, with no evaluation of cumulative impacts of multiple dams in a watershed landscape on the conservation of the integrity of ichthyofauna. Former studies for supporting environmental licensing processes of multiple hydroelectric dams in the Taquaria-Antas basin (RS, Brasil) proposed alternative conservation scenarios (number and position of barriers), in a time when there were no dendritic connectivity metrics developed. Among the problems identified at that time, we point quantification of cumulative effects of multiple barriers on the drainage connectivity, detecting prioritary areas for conservation and detecting the influence of the number and position of the barriers in the catchment for best conservation of aquatic biodiversity. We evaluated the application of connectivity for quantifying the impacts of fragmentation in hydrographic basins through recently proposed indexes. We proposed a replicable and generic method for quantifying the effects of successive impoundments in relation to aquatic habitat connectivity in ecological processes of migration and dispersal of fishes in hydrographic basins. We used multiple barriers scenarios simulation in order to perform the assessments. We also propose a way of systematizing multiple barriers simulations. Moreover, we rank areas for conservation by connectivity, apply the new connectivity metrics on former studies and demonstrate cases of high connectivity scenarios with other implications on conservation. We discuss maturing the method for application on environmental licensing and conservation planning as well as current limitations and perspectives for future studies.

A melatonina (MLT) é um hormônio responsável pela regulação dos ritmos circadianos, com ampla atuação na fisiologia animal, incluindo os seres humanos. Sua ação moduladora sobre o sistema imune possibilitou estudar seu efeito sobre a estimulação de monócitos na diferenciação em células dendríticas (DCs). Monócitos estimulados com MLT, durante a etapa de adesão de duas horas, apresentaram aumentada presença dos receptores para citocinas GM-CSF, IL-4 e TNF-a, necessários à geração de DCs in vitro. DCs geradas sob estímulo de MLT mostraram um aumento nas moléculas de membrana como CD40, CD80 e CD83. Foram detectadas as citocinas IL-6, IL-8 e IL-10 nos sobrenadantes de DCs imaturas, bem como IL-6, IL-8 e TNF-a para as DCs maduras. Lys estimulados por estas DCs mostraram um elevado índice de proliferação e detectou-se variação nas concentrações das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g, dos sobrenadantes das co-culturas. O uso do inibidor da MLT, Luzindol mostrou tendência a inibição dos efeitos desse hormônio. / Melatonin (MLT) is a hormone responsible for the circadian rhythm regulation, with wide range of actions in animal physiology, including the human beings. Its modulatory action on immune system permited to study its effects on monocyte stimulation to differentiate into dendritic cells (DCs). Monocytes stimulated with MLT, kept for two hours adhesion time, presented enhanced cytokine membrane receptors for GM-CSF, IL-4, TNF-a, needed to in vitro DCs generation. DCs obtained by MLT stimuli show an enhanced presence of membrane molecules, as CD40, CD80 and CD83. The cytokines IL-6, IL-8 e IL-10 were present in the supernatants of imature DCs, as well the IL-6, IL-8 e TNF-a in mature DCs supernatants. Lymphocytes supernatants from DCs co-culture showed an enhanced proliferation index and, were detected a variation for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g cytokines. The MLT inhibitor Luzindole show a tendency to inhibition of this hormone.