Orientador: Lourdes Aparecida Martins dos Santos-Pinto / Banca: Roberta Tarkany Basting Hofling / Banca: Maria Cristina Borsatto / Banca: Angela Cristina Cilense Zuanon / Banca: Rita de Cássia Loiola Cordeiro / Resumo: Dentre os instrumentos de corte alternativos aos rotatórios de baixa e alta rotação que foram introduzidos na Odontologia, o uso do ultra-som associado à ponta de diamante CVD (Chemical Vapor Deposition) vem apresentando desempenho positivo, especialmente em relação à preservação da estrutura dentária e à satisfação dos pacientes. Diante de uma tecnologia ainda pouco explorada, o objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da ponta de diamante CVD em ultra-som, buscando evidências científicas que suportem a sua utilização no tratamento odontológico, por meio de 3 artigos seqüenciais. Estes artigos abordaram as implicações desta nova técnica de preparo cavitário na efetividade de corte de esmalte e dentina, na resistência de união por microtração e microinfiltração de restaurações de resina composta e na resposta do complexo dentino-pulpar de dentes humanos, tendo como grupo controle a ponta diamantada convencional associada à turbina de alta rotação. Os resultados evidenciaram que os preparos cavitários em esmalte e dentina confeccionados com ponta de diamante CVD em ultra-som foram mais conservadores do que os preparos com a ponta diamantada em alta rotação. As restaurações em resina composta confeccionadas após o preparo cavitário com a ponta de diamante CVD em ultrasom apresentaram valores de resistência de união significantemente maiores, no entanto, a microinfiltração nas margens em esmalte e dentina não foram diferentes entre os instrumentos de corte. Além disso, não foram observadas características de inflamação nas respostas pulpares após a utilização de ambos os instrumentos de corte, apenas uma discreta a moderada desorganização celular. / Abstract: The CVD (Chemical Vapor Deposition) diamond tip coupled in ultrasound device by means of a specific connector has been an alternative to conventional diamond bur in high-speed. Besides the few scientific evidences, this new technology has been used in dental offices with good results, especially regarding the preservation of dental tissues and patient's satisfaction. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the CVD diamond tip in ultrasound on dental treatment, through 3 sequential articles. These articles evaluated the implications of this new cavity preparation technique in enamel and dentin cutting effectiveness, in microtensile bond strength and microleakage of composite resin restorations, and in dentin-pulp complex response of human teeth, having the high-speed conventional diamond bur as control group. The results showed that the cavity preparations made by CVD diamond tip in enamel and dentin were more conservative than those prepared by conventional diamond bur. The resin composite restorations placed after cavity preparation with CVD diamond tip in ultrasound showed significantly higher bond strength values, however, the microleakage in enamel and dentin margins were similar for both cutting instruments. Besides, pulp response for both instruments did not show inflammatory characteristics, only a discrete or moderate cellular disorganization. / Doutor

Orientador: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Jaqueline Braga Barbosa / Banca: Célio Percinoto / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidório / Banca: Josimeri Hebling / Resumo: Este trabalho teve como objetivos identificar e quantificar os microrganismos P. gingivalis e E. faecalis no interior dos canais radiculares de dentes decíduos humanos com polpa necrótica, avaliar o efeito do preparo biomecânico dos canais radiculares e da pasta de hidróxido de cálcio com clorexidina usada como curativo intracanal sobre esses microrganismos, bem como, avaliar o sucesso clínico e radiográfico da terapia endodôntica. Foram utilizados 32 dentes com polpa necrótica de 28 pacientes entre 3 e 8 anos de idade. Desses dentes, 12 apresentavam-se sem lesão (Grupo I) e 20 com lesão (Grupo II) na região de furca e/ou periapical vista radiograficamente. Após abertura coronária, foi realizada a primeira coleta microbiológica dos canais radiculares, o preparo biomecânico e a segunda coleta microbiológica. Em seguida, metade dos dentes dos grupos I e II recebeu como curativo intracanal a pasta de hidróxido de cálcio em polietilenoglicol 400 [Ca(OH)2 + PEG] (grupo controle), e a outra metade, a pasta de hidróxido de cálcio com clorexidina gel a 2% [Ca(OH)2+CLX] (grupo experimental). Os dentes foram selados provisoriamente com cimento de ionômero de vidro restaurador. Depois de 30 dias os dentes foram reabertos, o curativo intracanal foi removido e, uma terceira coleta microbiológica foi realizada. Todos os dentes tiveram os canais radiculares obturados com pasta de hidróxido de cálcio em polietilenoglicol 400 e foram restaurados. As amostras microbiológicas foram processadas usando PCR (reação em cadeia da polimerase) em tempo real e os resultados foram avaliados pelos testes de Wilcoxon e de Mann-Whitney (α=0,05). Avaliações clínica e radiográfica foram realizadas nos períodos inicial e de 1, 3 e 6 meses pós-operatório, sendo os resultados comparados pela aplicação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to identify the microorganisms P. gingivalis and E. faecalis in root canals of human deciduous teeth with necrotic pulp, to evaluate the effect of biomechanical preparation of root canals, to evaluate the antibacterial effect of a calcium hydroxide paste prepared with chlorhexidine against these microorganisms, and to evaluate clinical and radiographic success of the endodontic therapy. Thirty two teeth with necrotic pulp of 28 children aged between 3 and 8 years were used. Of these teeth, 12 showed no bone lesions (Group I) and 20 showed radiographic furcation/periapical bone lesions (Group II). After coronal opening and initial microbial root canal sampling, biomechanical preparation and the second microbial sampling were performed. Then, half of the teeth in groups I and II received as intracanal dressing a calcium hydroxide paste in polyethylene glycol 400 [Ca (OH)2 + PEG] (group control), and the other half received calcium hydroxide paste with 2% chlorhexidine gel [Ca (OH)2 + CHX] (experimental group). The teeth were temporarily sealed with a glass ionomer filling material. After 30 days the teeth were reopened, the intracanal dressing was removed and a third microbial sampling was performed. All the teeth had the root canals filled with a calcium hydroxide paste in polyethylene glycol 400 and the final restoration was carried. The microbial samples were processed using real time PCR (polymerase chain reaction) analysis and the results were evaluated by Wilcoxon and Mann-Whitney tests (α=0.05). Clinical and radiographic evaluations were performed at 0, 1, 3 and 6 months postoperatively and the results were compared by the Z statistical test (α=0.05). There was no significant difference between the microbiota present in primary teeth with and without furcation and/or periapical lesions. Biomechanical... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JaquelineGFD.pdf: 331693 bytes, checksum: f314478d15317d8b20c641a1c60f5ff6 (MD5) Previous issue date: 2006-03-14 / The neurovascular system of the pulp and of the periodontium is interconnected and among the possible intercommunications between these two tissues, there is the cavo inter-radicular canal. It is a small canal that goes through any inter-radicular dentine and arises in the furca region of the multi-radicular teeth. Its predominance has been studied in the literature, by several methodologies, with divergent results. The objective of this work was to establish, in vitro, the predominance of the cavo inter-radicular canal, in human lower molars, through the diaphanization technique and dye leakage. For this research, 140 teeth (100 first and second 40 lower molars) were selected, extracted due to different reasons, belonging to a teeth bank of the Endodontics discipline of the Dentistry College at Federal University of Rio Grande do Norte. The teeth were preserved in formol until the moment of use and immersed in physiological solution. Had the endodontic access fulfilled and the whole external surface, except for the furcation, sealed with two layers of nail enamel. The cleaning of the pulpar chamber floor was carried out with sodium hypochlorite solution 5%, being this solution renewed every 5 minutes, during 1 hour. The teeth were immersed in Indian dye and, after drying of the dye, they had their crowns split up in the amelo-cemental junction. Then, they were examined in a stereomicroscope, where marks of the coloring were observed in the furcation and on the pulpar floor. After this recording, the sample was diaphanized and with the transparent teeth, it was possible to observe in the stereomicroscope, the true inter-radicular canals. As a result of this experiment, the presence of these canals was observed in 13 % of the first and 7, 5 % of the second evaluated molars. The study showed that both the presence of the cavo inter-radicular canal is real and the diaphanization and dye leakage is an efficient method for this type of research / O sistema neurovascular da polpa e do periodonto ? interligado e, dentre as poss?veis intercomunica??es entre esses dois tecidos, tem-se o canal cavo inter-radicular. Trata-se de um pequeno canal que percorre toda dentina inter-radicular e se exterioriza na regi?o de furca dos dentes multirradiculares. Sua preval?ncia foi estudada na literatura, por diversas metodologias, com resultados divergentes. O objetivo desse trabalho foi estabelecer, in vitro, a preval?ncia do canal cavo inter-radicular, em molares inferiores humanos, atrav?s da t?cnica de infiltra??o de corante e diafaniza??o. Para a pesquisa foram selecionados 140 dentes (100 primeiros e 40 segundos molares inferiores), extra?dos por raz?es diversas, pertencentes ao estoque de dentes da disciplina de Endodontia da Faculdade de Odontologia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Os dentes anteriormente mantidos em formol foram lavados em ?gua corrente e conservadps em soro fisiol?gico at? o momento de uso. Nesse momento os mesmos tiveram os acessos endod?nticos realizados e toda a superf?cie externa, exceto a furca, impermeabilizada com duas camadas de esmalte de unha. A limpeza do assoalho da c?mara pulpar foi feita com solu??o de hipoclorito de s?dio a 5%, sendo essa solu??o renovada a cada 5 minutos durante 1 hora. Os dentes foram imersos em tinta nanquim e, ap?s secagem do corante, tiveram suas coroas seccionadas na jun??o amelocement?ria. Foram ent?o examinados em um estereomicrosc?pio, onde se observou marcas do corante na furca e ou assoalho pulpar. Feito esse registro, a amostra foi diafanizada e, com os dentes transparentes, p?de-se observar no estereomicrosc?pio, os verdadeiros canais cavo inter-radiculares. Como resultado desse experimento, foi verificada a presen?a desses canais em 13% dos primeiros e 7,5% dos segundos molares avaliados. O estudo demonstrou que a presen?a do canal cavo inter-radicular ? real e a diafaniza??o associada ? infiltra??o de corante um m?todo eficaz para esse tipo de pesquisa

O capeamento pulpar direto busca preservar a vitalidade pulpar. Este trabalho apresenta a resposta tecidual de polpas humanas ao capeamento pulpar direto com o Agregado de Trióxido Mineral (MTA) comparado com o hidróxido de cálcio. Foram utilizados 20 pré-molares de dez pacientes com extração indicada para tratamento ortodôntico. Todos os dentes apresentavam vitalidade pulpar e neles foram feitos capeamentos pulpares diretos com MTA ou com o hidróxido de cálcio. Os dentes foram extraídos num período de 14 dias ou 45 dias, estabelecendo os seguintes grupos experimentais: Ca(OH) 14 dias; Ca(OH) 45 dias; MTA 14 dias e MTA 45 dias. Estes dentes foram analisados microscopicamente por dois examinadores treinados. Os dados obtidos foram tabulados, utilizando-se o teste Kappa para observar o grau de concordância entre os examinadores. Para avaliação comparativa entre as respostas citotóxicas dos materiais testados foi aplicado o teste não paramétrico Kruskal-Wallis e o teste de Dunn para comparações individuais e identificação da significância dos achados. Na análise dos resultados não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos nos períodos experimentais de 14 e 45 dias, e nem na resposta inflamatória pulpar frente ao hidróxido de cálcio quando comparado ao MTA. Quanto à espessura e à organização da barreira dentinária reparatória com o hidróxido de cálcio, quando comparado com o MTA também não apresenta diferença estatisticamente significante. Conclui-se que o MTA satisfaz os requisitos de um material capeador pulpar em dentes de humanos, apresentando propriedades físicas e biológicas que o indicam para este tratamento. / The direct dental pulp capping aims to preserve the pulp vitality. This work shows the tissue response from human pulps to that procedure with the Mineral Trioxide Agregate (MTA) compared to calcium hydroxide - Ca(OH)2. Twenty premolars from 10 patients with extraction indicated to orthodontic treatment were used. All teeth showed pulp vitality and were treated with direct dental pulp capping with MTA or with calcium hydroxide. The teeth have been extracted within 14 or 45 days, stablishing the following experimental groups: Ca(OH)2 14 days; Ca(OH)2 45 days; MTA 14 days; and MTA 45 days. These teeth were analyzed under microscopy by two observers trained. The data obtained were put in table using the Kappa test to note the agreement degree between the observers. For the comparative assessment between the citotoxic response from material tested has been applied the non-paired Kruskal-Wallis test, and the Dunns test for individual comparisons and identifying the significance of findings. In the analysis of results there had no statistically significant difference between the groups in experimental periods of 14 days and 45 days, not even in the pulp inflammatory response to calcium hydroxide when compared to MTA. The thickness and arrangement of the healing dentin barrier faced with calcium hydroxide, when compared to MTA, also showed no statistically significant difference. It may be concluded that the MTA fulfils the requirements of pulp capping material in human teeth showing biological and physical properties that indicate it for this treatment.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo destes estudos "in vitro" e "in vivo" foi avaliar uma técnica de tratamento endodôntico de dentes decíduos, minimamente invasiva, utilizando a pasta CTZ (cloranfenicol, tetraciclina e óxido de zinco/eugenol). No estudo "in vitro" foi analisada a ação antimicrobiana da pasta CTZ, sobre microrganismos-padrão (E.coli, S.aureus, S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa), pelos métodos de difusão em ágar e diluição em caldo, comparativamente com o OZE (óxido de zinco e eugenol) e as pastas L&C (hidróxido de cálcio), 3 Mix (metronidazol, ciprofloxacin e minociclina e propileno glicol) e Guedes-Pinto (iodofórmio, paramonoclorofenol e Rifocort). A difusibilidade da atividade antimicrobiana da CTZ através dos túbulos dentinários de raízes dentes decíduos recém extraídos, sobre S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa também foi analisada. No estudo "in vivo" foi avaliado o desempenho clínico da pasta CTZ no tratamento endodôntico de dentes decíduos em comparação com o OZE. Seis crianças, com idades entre 7 e 8 anos, apresentando um dente decíduo posterior inferior com comprometimento pulpar extenso, foram alocadas aleatoriamente em dois grupos, sendo que em um foi utilizada a técnica da pasta CTZ (grupo teste) e no outro o tratamento endodôntico radical com OZE (grupo controle). O acompanhamento clínico e radiográfico foi realizado em intervalos de 2 semanas, 3 e 6 meses. Os resultados dos experimentos "in vitro" demonstraram que a pasta CTZ possui atividade antimicrobiana da comparável a da pasta 3 Mix e superior aos demais materiais sobre todos os tipos de microrganismos, exceto para a P.aeruginosa onde a CTZ apresentou uma atividade menor do que a da pasta 3 Mix apesar de ainda superior as demais. Além disso, a CTZ demonstrou atividade antimicrobiana por difusibilidade sobre o S.mutans e E.faecalis. Os resultados do experimento clínico demonstraram um desempenho similar entre a pasta CTZ e o OZE, especialmente logo após o tratamento. Esses resultados sugerem que a técnica minimamente invasiva empregando a pasta CTZ pode ser um alternativa ao tratamento endodôntico radical evitando a perda precoce de dentes decíduos, com comprometimento pulpar. Porém, um ensaio clinico com tamanho amostral adequado e acompanhamento de longa duração deve ser realizado para que se possa obter evidência conclusiva sobre a efetividade do tratamento clínico com a pasta CTZ. / The aim of these "in vitro" and "in vivo" studies was to evaluate an endodontic treatment for deciduous teeth, minimally invasive, using the CTZ paste (chloramphenicol, tetracycline and zinc oxide/eugenol). In the "in vitro" study the antimicrobial activity of the CTZ paste on standard microorganisms (E.coli , S.aureus, S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa) was evaluated. The agar diffusion and broth dilution methods were used and the CTZ paste was compared to the ZOE (zinc oxide/eugenol), L&C (calcium hydroxide), 3-Mix (minociclyne, ciprofloxacin, metronidazole e propylene glycol) and Guedes-Pinto (iodoform, paramonoclorophenol e Rifocort) pastes. The antimicrobial activity of the CTZ paste, through the dentinal tubules, were tested on S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa. In the study "in vivo" the clinical performance of CTZ paste was acessed. Six children, aged 7 and 8 years, presenting a decayed lower primary molar decayed with pulp pathology were randomly allocated into the test group (CTZ) and in the control group (ZOE). Clinical and radiographic exams were performed after 2 weeks, 3 and 6 months of follow-up. The results of the "in vitro" experiments demonstrated that CTZ paste had an antimicrobial activity similar to the antimicrobial activity of the 3 Mix paste, with the exception of P.aeruginosa, where CTZ paste presented a worse antimicrobial activity than the 3 Mix paste. The antimicrobial activity of CTZ paste was better than the antimicrobial activity of the other tested materials. Moreover, the CTZ showed an antimicrobial activity through the dentine on S.mutans and E.faecalis. CTZ and ZOE presented a similar clinical performance especially immediately after the treatment. These results suggest that the minimally invasive technique employing the CTZ paste can be an alternative to traditional endodontic treatment and may prevent the early loss of deciduous teeth with pulp pathology. Nevertheless, a clinical trial with an adequate sample size and a longer follow-up period should be performed in order to produce conclusive evidence about the clinical effectiveness of the CTZ paste.

Introdução: Células tronco mesenquimais (CTM) são uma população residente nos tecidos adultos de origem mesodérmica, com funções regenerativas de manutenção da integridade tecidual, com destaque no desempenho imunomodulador. Esse aspecto levou as CTM a tornarem-se ferramentas terapêuticas valiosas da pesquisa à assistência ao paciente em doenças autoimunes e de cunho inflamatório. Além disso, CTM podem ser isoladas de materiais tidos como descarte de procedimentos, como dentes decíduos, filtros de transplante de medula óssea e gordura. Nesse panorama, torna-se necessário estabelecer o efeito que a origem tecidual tem na eficiência imunoreguladora e na possível aplicabilidade clínica destas células. Objetivo: Comparar o potencial imunomodulador de células mesenquimais isoladas a partir de filtros descartados após a infusão de medula óssea, de lipoaspirado e de polpa de dentes decíduos. Métodos: Foi realizada a comparação da capacidade proliferativa de CTMs, cultivadas na presença de lisado plaquetário, das diversas fontes através do cálculo de population doubling das CTM em co-cultura com linfócitos T isolados em coluna magnética e com células mononucleares de sangue periférico, estimuladas com fitohemaglutinina; e determinado por citometria de fluxo o efeito das CTM das diversas fontes sobre as subpopulações linfocitárias. Resultados: CTM das três fontes foram capazes de inibir a proliferação de linfócitos e CTM de tecido adiposo foram mais eficientes em induzir o fenótipo de células T reguladoras e na diminuição de células T citotóxicas. Conclusão: comparadas à CTM isoladas de medula óssea e de polpa dentária, as CTM originadas de tecido adiposo exibem efeito imunomodulador mais acentuado. / Background: Mesenchymla stromal cells (MSC) reside in most adult tissue of mesenchymal origen, with a broad functions envolving cell repopulation and maintenence of tissue homeostasis, trough immunemmodulatory action. MSC are valuable terapêutic instruments applied from research to autoimune and inflamatory diseases. MSC can be isolated from diverse discarted biological matherials, like lipoaspirate, exfoliated deciduous teeeth and boné marrow ransplant filters. There so it´s necessary to stablish how source can impact MSC efficiency and possible clinical aplications. Objective: Compare immunomodulatory potential of adipose MSC and dental pulp MSC to boné marrow MSC. Methods: MSC from three selected sources were cocultured with phytohemaglutinin stimulated and magnetically isolated T cells and peripheral blood mononuclear cells; immunephenotype of cocultivated lymphocytes were also conducted. Results: MSC from all analyzed sources were capable to inhibit lymphocyte proliferation. Adipose MSC were capable to induce Treg phenotype and decrease T CD8+ limphocytes. Conclusion: Cell culture and therapy with MSC present many paradigms and we address to some of those to elucidate the possible most efficient source.

O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) desempenha um papel importante na angiogênese, induzindo a proliferação da célula endotelial, migração e sobrevivência. Com o intuito de promover a formação de novos vasos, e obter uma melhora na circulação colateral, VEGF tem sido utilizado para o tratamento de áreas de isquemia cardíaca, na doença cardiovascular. A manutenção da vitalidade pulpar com VEGF pode melhorar o prognóstico dos dentes que sofreram avulsão, prevenindo a perda precoce do dente. O propósito deste estudo foi desenvolver um modelo para se estudar o processo de revascularização da polpa dentária e avaliar o efeito do VEGF- 165 na angiogênese da polpa humana e na apoptose. Fatias de dente humano foram mantidas in vitro (cultura) com e sem VEGF (50ng/ml) durante 7 dias. Coloração de imuno-histoquímica para o Fator de Von Willebrand (Fator VIII) foi utilizada para quantificar o número de vasos sangüíneos no tecido pulpar. O número de vasos sangüíneos foi significantemente mais alto no grupo do VEGF (média -67.87) comparado ao grupo controle (média- 46.25, p< .05). O teste do Tunel foi usado para determinar o número de células apoptóticas nos grupos com e sem VEGF. Análises da expressão de VEGFR-2 por RT-PCR foram realizadas nas células endoteliais da microvasculatura da derme humana (HDMECs), células pulpares indiferenciadas (OD-21), células tipo odontoblasto de camundongo (MDPC-23) e macrófagos. A expressão de VEGFR-2 foi detectada nas HDMECs, mas não nas outras 3 linhas celulares. Quatro fatias de dente humano por camundongo imunodeprimido foram implantadas na região dorsal, subcutaneamente, pelo período de 7 dias. A vitalidade pulpar foi determinada pelas análises microscópica e imuno-histoquímica. O teste do Tunel foi usado para determinar o número de células apoptóticas. O modelo de angiogênese pulpar utilizando camundongos imunodeprimidos (SCID mouse model of pulp angiogenese) demonstrou ser um modelo viável para se estudar o processo de revascularização da polpa dentária humana. Levando-se em consideração os resultados obtidos neste estudo, sugere-se que o VEGF possa ter um efeito positivo na revascularização de dentes avulsionados. E que o modelo de angiogênese pulpar desenvolvido nesta pesquisa possa ser útil para responder a inúmeras novas questões experimentais na área de Endodontia. / The Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays na important role in angiogenesis by inducing endothelial cell proliferation, migration, and survival. To promote new vessel formation and improve collateral circulation, VEGF has been used to treat ischemic heart areas in cardiovascular disease. Maintenance of pulp vitality with VEGF may improve the outcomes of avulsed teeth, preventing premature tooth loss. The purpose of this study was to develop a model system to study the process of dental pulp revascularization, and assess the effect of VEGF-165 in the human pulp angiogenesis and apoptosis. Human tooth slices were maintained in vitro for 7 days +/- VEGF (50ng/mL). Immunohistochemistry staining for Von Willebrand?s factor (Factor VIII) was used to quantify the number of vessels in pulp tissues. There was a significantly higher number of blood vessels in the VEGF group (67.8 Mean) compared to the control group (46.2 Mean, p<0.05). Tunel Assay was used to determine the number of apoptotic cells in +/- VEGF groups. RTPCR analyses of VEGFR-2 transcripts were used on human dermal microvascular endothelial cells (HDMECs), undifferentiated pulp cells (OD-21), mouse odontoblast-like cells (MDPC-23), and macrophages. VEGFR-2 expression was detected in HDMECs but not in the other 3 cell lines. Four tooth slices per mouse were subcutaneously implanted in the dorsal region for 7 days. Pulp vitality was determined by histological and immunohistochemical analysis. Also, Tunel Assay was used to determine the number of apoptotic cells. SCID mouse model of pulp angiogenesis demonstrated to be a good model system to study revascularization of human dental pulps. Taking into account the findings of this study, it is suggested that VEGF could have a positive effect in the revascularization of avulsed teeth. It is hoped that this pulp angiogenesis model be useful to answer a number of new experimental questions in the area of Endodontics.

Introdução: Células tronco mesenquimais (CTM) são uma população residente nos tecidos adultos de origem mesodérmica, com funções regenerativas de manutenção da integridade tecidual, com destaque no desempenho imunomodulador. Esse aspecto levou as CTM a tornarem-se ferramentas terapêuticas valiosas da pesquisa à assistência ao paciente em doenças autoimunes e de cunho inflamatório. Além disso, CTM podem ser isoladas de materiais tidos como descarte de procedimentos, como dentes decíduos, filtros de transplante de medula óssea e gordura. Nesse panorama, torna-se necessário estabelecer o efeito que a origem tecidual tem na eficiência imunoreguladora e na possível aplicabilidade clínica destas células. Objetivo: Comparar o potencial imunomodulador de células mesenquimais isoladas a partir de filtros descartados após a infusão de medula óssea, de lipoaspirado e de polpa de dentes decíduos. Métodos: Foi realizada a comparação da capacidade proliferativa de CTMs, cultivadas na presença de lisado plaquetário, das diversas fontes através do cálculo de population doubling das CTM em co-cultura com linfócitos T isolados em coluna magnética e com células mononucleares de sangue periférico, estimuladas com fitohemaglutinina; e determinado por citometria de fluxo o efeito das CTM das diversas fontes sobre as subpopulações linfocitárias. Resultados: CTM das três fontes foram capazes de inibir a proliferação de linfócitos e CTM de tecido adiposo foram mais eficientes em induzir o fenótipo de células T reguladoras e na diminuição de células T citotóxicas. Conclusão: comparadas à CTM isoladas de medula óssea e de polpa dentária, as CTM originadas de tecido adiposo exibem efeito imunomodulador mais acentuado. / Background: Mesenchymla stromal cells (MSC) reside in most adult tissue of mesenchymal origen, with a broad functions envolving cell repopulation and maintenence of tissue homeostasis, trough immunemmodulatory action. MSC are valuable terapêutic instruments applied from research to autoimune and inflamatory diseases. MSC can be isolated from diverse discarted biological matherials, like lipoaspirate, exfoliated deciduous teeeth and boné marrow ransplant filters. There so it´s necessary to stablish how source can impact MSC efficiency and possible clinical aplications. Objective: Compare immunomodulatory potential of adipose MSC and dental pulp MSC to boné marrow MSC. Methods: MSC from three selected sources were cocultured with phytohemaglutinin stimulated and magnetically isolated T cells and peripheral blood mononuclear cells; immunephenotype of cocultivated lymphocytes were also conducted. Results: MSC from all analyzed sources were capable to inhibit lymphocyte proliferation. Adipose MSC were capable to induce Treg phenotype and decrease T CD8+ limphocytes. Conclusion: Cell culture and therapy with MSC present many paradigms and we address to some of those to elucidate the possible most efficient source.

Orientador: Marines Nobre dos Santos Uchoa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T14:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steiner-Oliveira_Carolina_M.pdf: 2452614 bytes, checksum: cd8304b4153cd0bfcc7b167b1691f06e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A irradiação do esmalte dentário com laser de CO2, especialmente se associada ao flúor, pode aumentar a resistência deste substrato ao desafio ácido. Esta tese, constituída por 2 artigos, teve por objetivos: estabelecer a menor densidade de energia obtida com um laser de CO2 (À=10,6 flm) pulsado, que quando aplicada sobre o esmalte dentário humano, seja capaz de promover mudanças químicas e morfológicas e de reduzir sua suscetibilidade a ácidos, sem causar danos pulpares; avaliar, in vitro, os efeitos combinados de um laser de C02 pulsado (À=10,6 ).lm) e do dentifrício e enxaguatório fluoretados na redução da progressão de lesão de cárie artificial em esmalte dentário humano. No estudo 1, durante a irradiação de terceiros molares inclusos com densidades de energia de 1,5 a 11,5 J/cm2, foram avaliadas as alterações na temperatura pulpar através de um termopar. As modificações químicas e morfológicas da superfície do esmalte induzidas pelo laser foram determinadas, respectivamente, através de espectroscopia FT-Raman e microscopia eletrônica de varredura. Os dentes foram submetidos à ciclagem de pH e a perda mineral foi determinada através de microdureza em corte longitudinal. Os espectros Raman obtidos foram analisados pelo teste t pareado e os resultados das variáveis alteração de temperatura e microdureza, foram analisados estatisticamente pelos testes ANOV A e Tukey, todos com nível de significância fixado em 5%. No seguJ?-do estudo, espécimes de esmalte obtidos de terceiros molares inclusos foram previamente desmineralizados e em seguida aleatoriamente divididos em nove grupos tratados ou não com laser de CO2, com ou' sem dentifrício fluoretado e com ou sem enxaguatório fluoretado, fazendo todas as associações possíveis entre os tratamentos. Após a ciclagem de pH, as concentrações de flúor das soluções des e remineralizadora foram determinadas e os espécimes foram analisados, qualitativamente, por microscopia de luz polarizada e teste de microdureza em corte longitudinal para quantificar mudanças no conteúdo mineral. Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes ANOVA e Tukey, com nível de significância fixado em 5%. No estudo 1, as mudanças de temperatura intrapulpares não excederam 3°C para todos os grupos irradiados. A espectroscopia FT -Raman e a microscopia eletrônica de varredura indicaram que as densidades de energia iguais ou superiores a 6,0 J/cm2 foram suficientes para promover modificações químicas e morfológicas na superficie do esmalte. A redução da desmineralização do esmalte promovida pelo laser foi observada com as densidades de energia a partir de 10,0 J/cm2. No estudo 2, todos os tratamentos foram capazes de reduzir a perda mineral do esmalte, quando comparados ao grupo controle (p<0,05). Todas as terapias combinadas, exceto a associação de laser e enxaguatório, causaram remineralização do esmalte dentário. Concluindo, os resultados desses estudos indicaram que a densidade de energia do laser de C02, que pode ser aplicada sobre o esmalte dentário capaz de produzir efeito na prevenção da desmineralização sem oferecer danos para à polpa dentária, é 10,0 J/cm2 e que o laser de CO2, combinado ou não com flúor, é capaz de reduzir a progressão da desmineralização do esmalte dentário em situações de alto desafio cariogênico in vitro / Abstract: The irradiation of dental enamel by CO2 laser, especialIy if combined with fluoride, can increase the enamel acid resistance. Thus, this thesis, comprised by 2 manuscripts, aimed: to establish the lowest energy fluency of a pulsed 10.6 Ilm C02 laser that, when applied on enamel surface, is able to cause chemical and morphological changes and reduces its acid resistance reactivity, without causing pulpal harm; to assess, in vitro, the combined effects of a 10.6 Ilm CO2 laser, fluoridated dentifrice and fluoridated mouthrinse in the reduction of lesion progression in human carious dental enamel. In study I, during the irradiation of human teeth with 1.5-11.5J/cm2, intrapulpal thermal effects were evaluated by a thermocouple. Moreover, chemical and morphological modifications were assessed on enamel surface, through FT-Raman and MEV analysis, respectively. The teeth were submitted to a pH-cyc1ing model and the enamel mineralloss was determined by crosssectional microhardness. The.Raman spectra obtained were assessed by the paired t test and thermal and microhardness variables were analyzed by ANOV A and Tukey tests, alI with 5% of statistical significance. In study 2, slabs of previously demineralized dental enamel were randomly assigned to nine groups (n = 10) and treated withlwithout CO2 laser and withlwithout fluoridated dentifrice and withlwithout fluoridated mouthrinse, making all possible associations between these treatments. After pH-cyc1ing, fluoride concentrations were determined in the de and remineraliziRg solutions and qualitative polarized light analysis was performed. In addition, cross-sectional microhardness test was dOJ;1e to quantify changes in mineral content. In the first study, for alI irradiated groups, intrapulpal temperature changes were below 3°C. FT-Raman spectroscopy and scanning electron microscopy indicated that fluencies as low as 6.0 J/cm2 were sufficient to induce chemical and morphological changes in enamel. Laser-induced inhibitory effects on enamel demineralization were observed in fluencies of 10.0 and 11.5 J/cm2. In the second study, alI treatments were able to decrease mineralloss when compared to control group (p < 0.05). AdditionalIy, except for the association of laser with fluoridated mouthrinse, all combined treatments have caused enamel remineralization. In conclusion, the results of these studies suggest that the lowest laser fluency capable of producing chemical and morphological changes to reduce acid reactivity of enamel without exposing pulp vitality to danger is 10.0 J/cmZ and that pulsed COz laser irradiation alone or combined with fluoridated products produced an effective protection against demineralization progression in dental enamel in vitro / Mestrado / Odontopediatria / Mestre em Odontologia

Células-tronco adultas podem ser isoladas de vários tecidos, dentre eles a polpa dentária humana, tecido originado na papila dentária do dente em desenvolvimento. Estas linhagens multipotentes podem ser estudadas sob vários aspectos, como na elucidação da histogênese de tumores. O objetivo deste estudo foi inferir a histogênese do mixoma odontogênico, neoplasia odontogênica benigna, analisando a expressão de proteínas da matriz extracelular (MEC) e de metaloproteinases da matriz (MMPs) em células-tronco adultas de polpa dentária humana. Três linhagens diferentes de células-tronco originadas de polpas dentárias humanas IDPSCs (DL-1, DL-2 e DL4) foram utilizadas. As proteínas analisadas foram as mesmas expressas na neoplasia: vimentina, colágeno tipo I, fibronectina, tenascina, ácido hialurônico e MMPs (MMP-1, MMP-2 e MMP-9). Imunofluorescência e ensaios enzimáticos foram utilizados para analisar a presença de proteínas nas células cultivadas e no meio de cultura condicionado por estas células, respectivamente. Todas as linhagens celulares expressaram a vimentina e nenhuma expressou o ácido hialurônico. A linhagem celular DL-1 expressou todas as outras proteínas da matriz extracelular estudadas, enquanto que na linhagem DL-2 apenas não foi observada a expressão do colágeno tipo I. Fibronectina e tenascina não foram observados na linhagem DL-4. Todas as linhagens expressaram todas as MMPs, sendo que a produção de MMP-2 nas três linhagens foi significantemente maior que a de todas outras MMPs. Baseado nas condições deste estudo, é possível concluir que a expressão de proteínas da MEC e de MMPs em células-tronco de polpa dentária humana apresentaram perfil similar àquela apresentada no mixoma odontogênico, exceto pela ausência de marcação do ácido hialurônico em todas as linhagens. A ausência de secreção de ácido hialurônico pelas IDPSCs poderia indicar que o mixoma odontogênico deriva de uma célula mais diferenciada que as células-tronco. / Adult stem cells can be isolated from different tissues including the human dental pulp, a structure originated from the dental papillae. These cell lineages are of importance in a series of studies, as the analysis of tumors histogenesis. The aim of this study was to infer the histogenesis of odontogenic myxoma, a benign odontogenic neoplasia by analyzing the ECM and MMPs molecules expressed in human dental pulp stem cells. Three different lineages of immature dental pulp stem cells (IDPSCs) (DL-1, DL-2 and DL-4) were used. The proteins searched were those expressed by the tumoral cells: vimentin, type I collagen, fibronectin, tenascin and hialuronic acid (HA) and the matrix metalloproteinases (MMP-1, MMP-2 and MMP-9). Immunofluorecence and enzymatic assays were used for analyzing the presence of the proteins in the cells and in the culture media conditioned by the cells, respectively. All the lineages expressed vimentin; however none expressed HA. DL-1 lineage expressed all the other ECM proteins, and the expression of type I collagen was not observed in the DL-2 lineage. Fibronectin and tenascin were not observed in the DL-4 lineage. All the lineages expressed all the MMPs. The release of MMP-2 from all cell lineages was significantly higher than those of all other MMPs. Based on the conditions of this study its possible to conclude that the overall expression of MEC proteins and MMPs in the lineages of human dental pulp stem cells were similar to those found in the odontogenic myxoma, except for the absence of hyaluronic acid. The absence of HA secretion by the IDPSCs could indicate that the odontogenic myxoma tumoural cells derive from a cell more differentiated than the stem cells.