Orientador: Luíz Henrique de Araújo Machado / Banca: Viciany Erique Fabris / Banca: Marconi Rodrigues Faria / Resumo: A dermatite atópica canina é uma dermatopatia de origem genética, cujo principal sintoma é o prurido. Uma de suas principais características é o comprometimento da barreira epidérmica cutânea, causado por deficiência na quantidade de lipídios na epiderme destes cães. Não obstante, na literatura consultada não há uma padronização de técnica de coloração histoquímica para avaliação destes lipídios epidérmicos em cães. Este trabalho objetivou padronizar uma técnica digital de mensuração de lipídios da epiderme de cães normais utilizando-se colorações histoquímicas específicas e, por meio da coloração padronizada, mensurar a quantidade de lipídios epidérmicos de cães atópicos antes e após o tratamento com reposição tópica de lipídios, além de comparar a quantidade de lipídios da epiderme de cães atópicos com a de cães saudáveis. Para a padronização da técnica de coloração histoquímica foram utilizados vinte e cinco animais saudáveis, sendo as amostras submetidas a três colorações: hematoxilina & eosina, Sudan Red e Oil Red O. Em seguida, as amostras passaram por avaliação entre patologistas e pelo programa de análise de imagem digital, confrontando as duas técnicas. Após padronização, comparou-se a quantidade de lipídios da barreira epidérmica entre 15 cães atópicos e 30 cães saudáveis, comparando a quantidade de lipídios da epiderme da região cervical com a região axilar. Os resultados mostraram concordância entre a avaliação dos patologistas e o programa de análise digital, que ambas as colorações se prestam a este fim, mas que Sudan Red é a coloração que melhor permite a mensuração dos lipídios da barreira epidérmica e, quando comparada a camada lipídica da epiderme de cães saudáveis e cães atópicos, nota-se que estes possuem uma quantidade lipídica reduzida e, após o tratamento com reposição tópica de lipídios, os cães atópicos apresentam ... / Abstract: Canine atopic dermatitis is a multifactorial skin disease with genetic origin, that causes itching as the main symptom. One of the disease's main characteristics (and a major causative factor) is the impairment of the epidermal skin barrier. This is caused, primarily, by a deficiency in the quantity of lipids in the epidermis of atopic dogs. However, no standardized histochemical technique for the evaluation of epidermal lipids in dogs exists in the literature. The objectives of this study were firstly, to standardize the measurement of lipids of the epidermis of normal dogs using specific histochemical staining. Secondly, using this standardized staining technique, ascertain the amount of epidermal lipids in atopic patients before and after treatment with topical replacement of lipids and compare with measurements from healthy dogs. For standardization of staining, epidermal samples from 25 healthy animals were taken and subjected to hematoxylin and eosin, Sudan Red and Oil Red O staining. The samples were processed using visual semi-quantitative assessment and by the digital image analysis program. After standardization, we compared the quantity of lipids in the epidermal barrier of 15 atopic dogs and 30 healthy dogs. Samples were taken from neck and axillae in all participating animals to assess any differences in lipid content between body regions. The results showed that Sudan Red provides the most accurate measurement of skin barrier lipids when comparing the lipid layer of the epidermis of healthy dogs with atopic dogs. It was found that atopic dogs exhibit a reduced quantity of lipids in the epidermal barrier prior to treatment and show a significant increase after topical replacement of lipids. Comparisons between individuals within the atopic group of animals showed that lipids from the neck occurred in smaller quantities than the axillary region. These results show that topical replacement of lipids in dogs with ... / Mestre

INTRODUÇÃO: A dermatite atópica (DA) é uma doença inflamatória crônica, comum, da pele que afeta a vida das crianças. No tratamento desta doença tem-se, cada vez mais, demonstrado a importância e a necessidade de desenvolver ações educacionais/ terapêuticos, multidisciplinares focadas em informações sobre o manejo da doença para os pacientes desenvolverem um melhor curso da doença e, consequentemente, melhor prognóstico. OBJETIVOS: Este estudo tem como objetivo apresentar os resultados de um jogo educativo/terapêutico, especialmente desenvolvido, para crianças dos 7 aos 12 anos de idade, com intenção de possibilitar o acesso a informações e aumentar a adesão ao tratamento de pacientes jovens com dermatite atópica de uma forma lúdica e eficiente. MÉTODOS: O jogo foi estruturado em cinco grandes grupos para emular as situações vividas pelas crianças: família, escola, consultório médico, amigos e sentimentos. O planejamento foi realizado a partir de um script anterior, que foi contextualizado em situações de jogo, através dele procurou-se adaptar o conteúdo e argumentos, narrativa, procurando associar o jogo, as intenções pedagógicas, características cognitivas das crianças dessa faixa etária, bem como a desejada abordagem psicológica para lidar com a doença. O jogo estava disponível através do formato swf2 permitindo usar em casa ou no escritório do médico. Para testar o jogo foi feito um estudo experimental "antes-depois", incluindo crianças de 7-12 anos de idade, com dermatite atópica. Trinta e três crianças brincavam individualmente. O desfecho analisado foi o grau de conhecimento e habilidades de gerenciamento de sintomas da dermatite atópica após o uso do jogo por 30 dias, avaliado por um questionário de conhecimentos sobre a doença. Todas as crianças e seus pais expressaram suas opiniões sobre o jogo através de um outro questionário de opinião. A coleta de dados foi realizada no período entre 2009 e 2010, e a análise foi realizada utilizando SPSS 17,0 entre 2010 e 2011. RESULTADOS: As trinta e três crianças utilizaram o jogo uma vez e responderam ao questionário antes de jogar, e, deste total, 15 responderam ao questionário pela segunda vez. Verificou-se que as crianças que usaram o jogo aumentaram seu conhecimento sobre a doença em 5 pontos (questionário sobre DA), IC 95%: 3,5-6,1. CONCLUSÃO: A ampliação do uso do território virtual, tais como os jogos e internet, podem desenvolver novas oportunidades para tratamento médico e psicológico permitindo a projeção de sentimentos, desejos, frustrações e outras manifestações de usuários, sejam eles crianças ou adultos jovens, e permitir a aquisição de informações sobre o manejo da doença de uma forma lúdica e agradável para pacientesjovens. / INTRODUCTION: Atopic dermatitis (AD) is a common chronic inflammatory skin disease that affects children’s life. The treatment of AD has increasingly shown the importance and need to develop educational/therapeutic, multidisciplinary actions focused on information about the management of the disease for the patients to have a better disease course and prognosis. OBJECTIVES: This study aims to present the results of an educational/therapeutic game for children from 7 to 12 years old, developed to disseminate information and increase adherence to treatment of young patients with atopic dermatitis in a playful and efficient way. METHODS: The game was structured into five major groups to emulate the situations experienced by children: family, school, doctor’s office, friends and feelings. The planning was carried out from a previous script which was contextualized in game situations, through a script that sought to adapt the content and narrative arguments, seeking to associate game play, pedagogical intentions, cognitive characteristics of children in this age group as well as the desired psychological approach for coping with the disease, in that situation. The game was available through the swf2 format enabling to use either at home or at the doctor’s office. To test the game was made an experimental “before-after” study, including 7-12 years- old children with atopic dermatitis. Thirty three children played individually. The analyzed outcome was the degree of knowledge and management abilities of atopic dermatitis symptoms after using the game for thirty days, verified by a questionnaire of knowledge about the disease. All children and their parents expressed their opinions about the game through an opinion questionnaire. Data collection was performed in the period between 2009 and 2010, and the analysis was performed using SPSS 17.0 between 2010 and 2011. RESULTS: A total of 33 children used the game once and answered the questionnaire before playing, and, from this total, 15 answered the questionnaire for a second time. It was found that children who used the game increased their knowledge about the disease in 5 points (questionnaire on AD), 95% CI: 3.5 to 6.1. CONCLUSION: The expanded use of virtual territories, such as the games and the internet, to develop new opportunities for medical and psychological treatment enable the projection of feelings, desires, frustrations and other manifestations of users, whether they are children or young adults, and enable the acquisition of information on the disease management in a playful and enjoyable way for young patients.

A Qualidade de Vida Relacionada à Saúde é definida como um indicador de saúde, que compreende fatores físicos, mentais e sociais e os impactos que uma determinada condição de saúde pode trazer à vida do indivíduo. Instrumentos válidos e fidedignos são ferramentas de grande valia para a mensuração deste construto. A Dermatite Atópica é uma condição crônica dermatológica associada a inúmeros prejuízos nos diversos aspectos da vida de uma pessoa, especialmente em crianças e adolescentes. O objetivo deste estudo foi validar para o Brasil o instrumento DISABKIDS®- Módulo Dermatite Atópica, para mensuração da Qualidade de Vida Relacionada à Saúde de crianças e adolescentes, com Dermatite Atópica, em idade escolar. O Instrumento compreende 12 itens e duas dimensões, Impacto e Estigma, e duas versões, self e proxy. A amostra foi composta por 200 sujeitos, 100 crianças e adolescentes brasileiros com Dermatite Atópica, entre 8 a 18 anos de idade, e seus pais ou cuidadores, recrutados no Serviço de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, na cidade de São Paulo, em dois momentos, entre os meses de abril e setembro de 2009 e julho de 2012 a junho de 2013. A fidedignidade do instrumento foi satisfatória tanto em relação à sua consistência interna, mensurada segundo o Coeficiente Alfa de Cronbach (self: ?Cronbach = 0,855; 0,853 e proxy: ?Cronbach = 0,905; 0,858, dimensões Impacto e Estigma, respectivamente), quanto à sua reprodutibilidade, mensurada segundo Coeficiente de Correlação Intra-Classe (self: ICC = 0,952; 0,971 e proxy; ICC = 0,960; 0,972, dimensões Impacto e Estigma, respectivamente). A análise Multitraço-multimétodo para teste de validade convergente mostrou valores de coeficientes de correlação lineares de Pearson entre cada item e sua dimensão maiores que 0,40. Quanto à validade discriminante, a análise revelou resultados igualmente satisfatórios, com índices de ajuste iguais a 87,5% e 100% para a versão self e a 75% e 100% para a versão proxy, dimensões Impacto e Estigma, respectivamente. Houve concordância entre as versões self e proxy, com valores para Coeficiente de Correlação Intra-Classe iguais à 0,610 para a dimensão Impacto e 0,595 para a dimensão Estigma. A Análise Fatorial Confirmatória mostrou que o instrumento adaptado para o Brasil manteve a estrutura assumida para o construto no instrumento original (self: RMSEA=0,083; CIF=0,932 e proxy: RMSEA=0,098; CIF=0,936). Considera-se que o instrumento DISABKIDS®- Módulo Dermatite Atópica encontra-se validado para crianças e adolescentes brasileiros em idade escolar com diagnóstico de Dermatite Atópica apresentando características de boa fidedignidade de consistência interna e reprodutibilidade, boa validade de construto convergente e discriminante, boa correlação e entre as versões self e proxy, e com a estrutura fatorial do construto inalterada em relação à inicialmente assumida no instrumento europeu. / The Health-related Quality of Life is defined as an indicator of health, including physical, mental and social factors and the impacts that a certain health condition can bring to an individual\'s life. Valid and reliable instruments are valuable tools for the measurement of this construct. Atopic Dermatitis is a chronic dermatological condition associated with numerous losses in various aspects of a person\'s life, especially in children and adolescents. The objective of this study was to validate for Brazil the DISABKIDS® - Atopic Dermatitis Module, for measurement of Health- related Quality of Life of children and adolescents, with atopic dermatitis, school aged. The instrument comprises 12 items and two dimensions, Impact and Stigma and two versions, self and proxy. The sample was composed of 200 people, 100 Brazilian children and adolescents with atopic dermatitis, between 8 to 18 years of age, and their parents or caregivers, recruited at the Dermatology Service of the Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da Universidade de Sao Paulo, in the city of Sao Paulo, in two moments, between the months of April and September 2009 and July 2012 to June 2013. The reliability of the instrument was satisfactory in relation to its internal consistency, measured according to Cronbach\'s alpha Coefficient (self: ?Cronbach = 0,855; 0,853 e proxy: ?Cronbach = 0,905; 0,858, dimensions Impact and Stigma, respectively), as to its reproducibility, measured according to Intra-class Correlation Coefficient (self: ICC = 0,952; 0,971 e proxy; ICC = 0,960; 0,972, Impact and Stigma dimensions, respectively). Multitraço- Multimethods Analysis to convergent validity test showed values of Pearson Linear Correlation Coefficients between each item and its size greater than 0.40. As to the validity, discriminant analysis showed also satisfactory results with adjustment indexes equal 87,5 and 100 for self and 75 and 100 for the proxy version, dimensions, Impact and Stigma, respectively. There was agreement among self answers and proxy, with values for Intra-class Correlation Coefficient equal to 0,610 Impact dimension and 0,595 Stigma. The Confirmatory Factor Analysis showed that the instrument adapted to Brazil kept the structure assumed for the original instrument (self: RMSEA=0,083; CIF=0,932 e proxy: RMSEA=0,098; CIF=0,936). It is considered that the DISABKIDS® - Atopic Dermatitis Module is validated for Brazilian children and adolescents of school age with a diagnosis of Atopic Dermatitis presenting features of good internal consistency for reliability and reproducibility, good discriminant and convergent construct validity, good correlation and between self and proxy versions, and with the factorial structure of the construct unchanged in relation to the initially assumed in the European instrument

Teste intradérmico avalia reação de hipersensibilidade a diversos agentes que possam apresentar poder reacional alérgico e são comumente utilizados para complementar o diagnóstico da dermatite atópica canina (DAC). Ainda não existe consenso sobre as concentrações de histamina e extratos alergênicos a serem utilizadas. Para determinar a concentração ideal de histamina, como controle positivo, e do limiar irritativo de extratos alergênicos em teste intradérmico é necessário que diversas concentrações sejam avaliadas em uma população bem numerosa de cães hígidos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar em 160 cães sadios submetidos a teste intradérmico, quais seriam as concentrações de histamina e de extratos alergênicos consideradas ideais. A solução contendo 0,1 mg/mL de histamina foi considerada como parâmetro ideal, provocando reações cutâneas com diâmetro médio, mediana e desvio padrão, de 15,18 mm, 14,97 mm e 2,07 mm, respectivamente. A partir do estabelecimento da concentração de histamina, foram determinadas as concentrações ótimas dos extratos alergênicos, expressas em PNU/mL: 1.000 para Dermatophagoides pteronyssinus, 500 para D. farinae, 125 para Blomia tropicalis e 2.000 para Malassezia pachydermatis. Futuros estudos devem ser conduzidos em cães atópicos para verificação da acurácia dos testes intradérmicos realizados com essas concentrações. / Intradermal testing evaluates hipersensitivity reaction to different agents that can present allergic reactivity power. It is commonly used to complement canine atopic dermatitis diagnosis. There is still no consensus about histamine concentrations and allergen extracts to be used. The determination of the histamine ideal concentration as positive control and the irritant threshold of allergen extracts for intradermal testing, requires evaluation of different concentrations on a large population of healthy dogs. The purpose of this research was to evaluate the ideal histamine and allergen extracts concentrations on 160 healthy dogs submitted to intradermal testing. A histamine solution 0,1 mg/mL was considered the ideal parameter. It caused cutaneous reactions with average diameter, median measure and standard deviation of 15.18 mm, 14.97 mm and 2.07 mm, respectively. From the histamine concentration establishment, the optimum allergen extracts concentrations were determined, expressed by PNU/mL: 1.000 for Dermatophagoides pteronyssinus, 500 for D. farinae, 125 for Blomia tropicalis and 2.000 for Malassezia pachydermatis. Future studies have to be conducted on atopic dogs to verify the accuracy of the intradermal testing with these concentrations.

Introdução: A dermatite atópica (DA) é uma doença inflamatória crônica da pele que apresenta um impacto significativo na qualidade de vida dos pacientes, em conseqüência de episódios recorrentes durante a vida. Considerando estudos recentes que descrevem a associação entre aspectos psicológicos e a dermatite atópica, acredita-se que a investigação da existência de um possível perfil comportamental destas crianças possa auxiliar o desenvolvimento de intervenções psicoterápicas específicas, assim como aumentar o conhecimento sobre a doença. Método: Este trabalho tem como objetivo realizar uma avaliação do perfil sóciocomportamental de crianças portadoras de DA e comparando-as com crianças sem a doença. Neste estudo, do tipo caso-controle, foram incluídos dois grupos com idades entre 4 e 18 anos: o grupo estudo, com pacientes portadores de dermatite atópica que consultam no ambulatório do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) e o grupo controle, composto por crianças e adolescentes sem doença dermatológica, matriculados em escola da rede pública de Porto Alegre. O tamanho estimado da amostra foi de 25 indivíduos em cada grupo. A coleta dos dados realizou-se através do CBCL (Child Behavior Checklist), validado no Brasil com o nome de Inventário de Comportamento da Infância e Adolescência. Resultados: Foram encontradas diferenças estatisticamente significativas nas duas dimensões globais (internalização e externalização), sendo que as crianças portadoras de dermatite atópica mostraram mais sintomas relacionados com ansiedade, depressão, alterações de pensamento e comportamento agressivo quando comparadas com crianças sem a doença. Conclusão: Os resultados indicam a necessidade de abordagens interdisciplinares no tratamento da criança com DA, valorizando não só as lesões dermatológicas, como também os aspectos emocionais dos indivíduos. / Introduction: Atopic dermatitis (AD) is a chronic inflammatory skin disease which causes a significant impact on the quality of life of the patients as a consequence of recurrent episodes during their lives. Considering recent studies describing the association between psychological aspects and atopic dermatitis, it can be suggested that the search of a possible behavioral profile of children presenting AD may be of help in the development of specific psychotherapeutic interventions as well as increasing the knowledge about the disease. Methodology: This research aims to accomplish an evaluation of the social-behavior profile of children with AD compared with others without the disease. In this case-control study two groups, aged 4 to 18 years old, have been included,; the study-group including patients with atopic dermatitis who have been assisted at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) and the control-group of children and adolescents without AD enrolled at public schools in Porto Alegre. The estimated sample size was 25 individuals in each group. Data collection was accomplished utilizing the Child Behavior Cheklist (CBCL), instrument valited in Brazil as Inventário de Comportamento da Infância e Adolescência. Results: Significant statistic differences were demonstrated in both global dimensions (internalizing and externalizing), having the children with AD more symptoms related to anxiety, depression, alteration of thoughts alterations and aggressive behavior when compared to the children without the disease. Conclusion: The results emphasizes the need of interdisciplinary approaches in treating children with AD, contemplating not only the dermatological aspects, but also the emotional aspects of the disease.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-07T15:40:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DAYANNE MOTA VELOSO BRUSCKY DISSERTAÇÃO 2015.pdf: 1467970 bytes, checksum: fee0da8b1c22b7ab32211b2ce92d54d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T15:40:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DAYANNE MOTA VELOSO BRUSCKY DISSERTAÇÃO 2015.pdf: 1467970 bytes, checksum: fee0da8b1c22b7ab32211b2ce92d54d9 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / CNPq / A dermatite atópica acomete em torno de 10% da população pediátrica no mundo e causa importante interferência negativa na qualidade de vida relacionada à saúde dos pacientes e seus familiares principalmente relacionada ao prurido. É recomendada a utilização de pelo menos dois instrumentos para medir adequadamente este sintoma e, no Brasil, dispomos atualmente apenas da escala visual analógica. O objetivo deste estudo foi realizar a adaptação transcultural e validação para português (cultura brasileira) da Itch Severity Scale, instrumento para medir a gravidade de prurido. Trata-se de estudo metodológico de validação de instrumento. Baseado nos protocolos propostos por Beaton et al. (2010) e Reichenheim e Moraes (2007) para obter as equivalências conceitual, de itens, semântica, operacional e de mensuração. Participaram do estudo 7 alergologistas, 3 professores de inglês, 1 professor de linguística, 1 professor com experiência em validação de instrumento, 42 responsáveis por portadores de dermatite atópica entre 02 a 18 anos incompletos de idade e 42 responsáveis por crianças de mesma faixa etária sem doença cutânea pruriginosa. Resultados da escala foram comparados com gravidade da dermatite atópica e controle da doença, e entre os dois grupos. Da população selecionada, 98,8% participaram e 100% das questões da escala foram respondidas. Houve clareza das questões maior que 90%. A Escala de Gravidade de Prurido mostrou forte correlação positiva com a gravidade da dermatite atópica (índice de Pearson 0,74 p<0,001) e boa correlação com o controle da dermatite (coeficiente de correlação ponto-bisserial 0,65 p<0,001). Foi demonstrada ótima consistência interna (alfa de Cronbach 0,96) e adequada reprodutibilidade pela concordância do teste e reteste (coeficiente de correlação intraclasse variando de 0,89 a 0,99 com IC95% e p<0,001. A Escala de Gravidade de Prurido (ISS-Ped) apresentou-se viável, válida e confiável, podendo ser utilizada no Brasil para avaliar a gravidade do prurido em crianças e adolescentes com dermatite atópica, permitindo comparações na prática clínica e entre pesquisas de diferentes centros. / Atopic dermatitis affects around 10% of the pediatric population in the world and has important negative impacts the quality of life related to health of patients and their families particularly related to the itch. It is recommended to use at least two instruments to properly measure this symptom, and in Brazil, we currently only visual analogue scale. The aim of this study was to adapt cross-culturally and validate an instrument to measure the severity of itching, the Itch Severity Scale, into Brazilian Portuguese. It is a methodological instrument validation study. Based on the protocols proposed by Beaton et al. (2010) and Reichenheim and Moraes (2007) was obtained the conceptual, item, semantic, operational and measurement equivalences. Seven allergists, 3 English teachers, one professor of linguistics, one teacher with experience in instrument validation, 42 parents of children with atopic dermatitis between 02-18 years of age-old and 42 parents of children of the same age group without itchy skin disease. Scale results were compared with severity of atopic dermatitis and disease control, and between the two groups. In the sample, 98.8% participated and 100% of the scale of the questions were answered. There was clear understanding > 90% of the questions. The Pruritus Severity Scale showed a strong positive correlation with the severity of atopic dermatitis (Pearson index 0.74 p <0.001) and good correlation with the control dermatitis (correlation coefficient 0.65 bisserial point p <0.001). Excellent internal consistency was demonstrated (Cronbach's alpha 0.96) and adequate reproducibility for the test and retest agreement (intraclass correlation coefficients ranging from .89 to 0.99 with 95% CI p <0.001. The Escala de Gravidade de Prurido (ISS-Ped) proved to be feasible, valid and reliable and can be used in Brazil to assess the severity of itching in children and adolescents with atopic dermatitis, allowing comparisons in clinical practice and research between different centers.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Liliani Mathias Brum.pdf: 1503888 bytes, checksum: ad2eacb7dc98b3e5fbf2604c9ae82084 (MD5) Liliani Mathias Brum.pdf.jpg: 3065 bytes, checksum: 9adf1c37fd40ed3180ec5d7ac9fc8754 (MD5) Previous issue date: 2008-09-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Since the extracellular nucleotides represent an important means of modulating the activity of lymphocytes, it is essential the presence of an enzymatic mechanism to keep constant the concentration of those in the extracellular space. The activity of NTPDase has been recognized as a marker of activation necessary for the function of effector lymphocytes, participate in the processes of recognition of antigen. Contact dermatitis occurs in a delayed hypersensitivity reaction of type IV, mediated by cells through a mechanism that sensitizes the immune T lymphocyte to an antigen protein or a hapten linked to a protein. Among the mediators able to modulate the actions of lymphocytes stand out from the nucleoside and nucleotide adenine, in particular the extracellular ATP that is able to regulate the cell-cell interactions are important processes of activation, differentiation, development, proliferation, cell death and responses of effector lymphocytes. This study sought to determine first of the hydrolysis of adenine nucleotides, the NTPDase (EC 3.6.1.5, nucleoside triphosphate difosfoidrolase, CD39) in lymphocytes from mice with dermatitis induced by nickel sulphate to 5%, before and after treatment with dexamethasone and dexamethasone nanostructured free to try to check the possible changes in the activity of this enzyme front of an inflammatory reaction of type IV hypersensitivity and immunosuppressive therapy. Moreover, it was possible to verify the relationship of submission of the drug in the formulation free and nanostructures with the hydrolysis of adenine nucleotides. The average enzymatic activity of the group with contact dermatitis was significantly higher in the control group by the test of hypotheses to averages T. The results are in line with work done earlier that showed an increase of enzyme activity by the activation of lymphocytes. The hydrolysis of ATP and ADP in the group treated with dexamethasone free and in the group treated with dexamethasone nanostructured was significantly higher in the control group by analysis of variance for a way (ANOVA) followed by Kruskal-Wallis test (P < 0001). The results are in line with work done earlier that showed an increase of enzyme activity by the activation of lymphocytes. Was observed greater hydrolysis of ATP and ADP in the group treated with dexamethasone nanostructures in relation to the group treated with dexamethasone free. However, this difference was not statistically significant. Work previously shown an increase of enzyme activity during treatment with dexamethasone as a possible compensatory effect of the decrease in the number of lymphocytes. The results of this study suggest that dexamethasone nanostructures possess a immunosuppressive effects greatest, which may be the beginning of the evaluation of a more effective and safe treatment for contact dermatitis. From these results we can conclude that the determination of the activity of NTPDase in lymphocytes could be used as an indicator of the efficiency of the treatment of contact dermatitis / Uma vez que os nucleotídeos extracelulares representam uma importante via de modulação da atividade dos linfócitos, é indispensável a presença de um mecanismo enzimático capaz de manter constante a concentração desses no espaço extracelular. A atividade da NTPDase tem sido reconhecida como um marcador de ativação necessário para a função efetora dos linfócitos, participando também dos processos de reconhecimento do antígeno. Na dermatite de contato ocorre uma reação de hipersensibilidade retardada tipo IV, mediada por células, através de um mecanismo imunológico que sensibiliza os linfócitos T frente a um antígeno protéico ou a um hapteno ligado a uma proteína. Dentre os mediadores capazes de modular as ações dos linfócitos destacam-se os nucleosídeos e nucleotídeos da adenina, em especial o ATP extracelular que é capaz de regular as interações célula-célula sendo importante nos processos de ativação, diferenciação, desenvolvimento, proliferação, morte celular e respostas efetoras dos linfócitos. Este estudo procurou determinar primeiramente a hidrólise de nucleotídeos da adenina, pela NTPDase (EC 3.6.1.5, nucleosídeo trifosfato difosfoidrolase, CD39) em linfócitos de ratos com dermatite induzida por sulfato de níquel, antes e após tratamento com dexametasona livre e dexametasona nanoestruturada, para tentar verificar as possíveis alterações na atividade desta enzima frente a uma reação inflamatória de hipersensibilidade tipo IV e na terapia imunossupressora. Além disso, procurou-se verificar a possível relação da apresentação do fármaco na formulação livre e nanoestruturada com a hidrólise de nucleotídeos da adenina. A atividade enzimática média do grupo com dermatite de contato foi significativamente maior em relação ao grupo controle pelo teste de hipóteses para médias T. Os resultados encontrados estão de acordo com trabalhos realizados anteriormente que demonstram um aumento da atividade enzimática pela ativação dos linfócitos. A hidrólise do ATP e do ADP no grupo tratado com dexametasona livre e no grupo tratado com dexametasona nanoestruturada foi significativamente maior em relação ao grupo controle pelo teste de análise de variância de uma via (ANOVA) seguido pelo teste de Kruskal-Wallis (P< 0,001). Observou-se uma maior hidrólise de ADP e ATP, no grupo tratado com dexametasona nanoestruturada em relação ao grupo tratado com dexametasona livre. No entanto, esta diferença não foi estatisticamente significativa. Trabalhos anteriores já demonstraram um aumento de atividade enzimática durante tratamento com dexametasona como um possível efeito compensatório à diminuição do número de linfócitos. Os resultados deste estudo sugerem que a dexametasona nanoestruturada possui um efeito imunossupressor maior, o que pode ser o início da avaliação de um tratamento mais eficaz e seguro para a dermatite de contato. A partir destes resultados podemos concluir que a determinação da atividade da NTPDase em linfócitos poderia ser utilizada como um indicador da eficiência da terapêutica da dermatite de contato.

Orientadores: Carmen Verissima Ferreira, Silvia Mika Shishido / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T19:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_Daisy_M.pdf: 1450123 bytes, checksum: e8dc961f855a7ea88daa10bb8ee00685 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A riboflavina (RF) é uma vitamina hidrossolúvel pertencente ao complexo vitamínico B2 e precursora das coenzimas FMN e FAD. Além da função biológica como componente de coenzimas, a RF apresenta atividade antitumoral e fotossensibilizante. A proposta principal desse estudo se baseou na avaliação da fototoxicidade da RF, bem como na determinação de marcadores moleculares da inflamação, senescência e morte celular, ações deletérias normalmente desencadeadas pela radiação UVA. Os resultados obtidos indicam que a RF tem potencial aplicação na terapia fotodinâmica, levando se em conta os modelos celulares utilizados, fibroblastos (BALB/c 3T3) e queratinócitos humanos (HaCaT). As células BALB/c 3T3 tratadas com RF 6,0 mM e dose de 5 J/cm² de radiação UVA, apresentaram indução de apoptose principalmente pela via intrínseca. A indução de senescência foi evidenciada pelo aumento da p-caveolina e aumento da atividade da MMP-2 (principal protease responsável pela degradação de colágeno). De acordo com os níveis de NFkB e p- IKKa/b, a RF não alterou significativamente o processo de inflamação desencadeado pela radiação UVA. Nas células HaCaT, o tratamento com 5,0 mM de RF e dose de 5 J/cm² de radiação UVA levou a ativação da apoptose induzida tanto pela via extrínseca como pela intrínseca. O aumento nos níveis de p-caveolina, p21 e da atividade das MMPs-2 e -9 sugerem à indução de processo de senescência precoce também nos queratinócitos. Além disto, a diminuição da expressão do NF?B indica que o mesmo esteja se translocando para o núcleo e, portanto, regulando a resposta inflamatória. Outro aspecto avaliado foi a influência do copolímero F-127 na fototoxicidade da RF. A irradiação do hidrogel contendo F-127 e riboflavina manteve a propriedade fototóxica da mesma. Nossos dados sugerem que a RF apresenta potencial para uso em terapia fotodinâmica, uma vez que a mesma se mostrou fototóxica quando irradiada com doses subtóxicas de radiação UVA. / Abstract: Riboflavin (RF) is a water soluble vitamin which belongs to vitamin B2 complex, an essential precursor of FMN and FAD coenzymes. Besides being a component of coenzymes, RF displays antitumoral and photossensitizing activities. The main proposal of this study was to evaluate the RF phototoxicity, as well as to determine molecular markers of inflammation, senescence and cellular death, deleterious actions normally triggered by the UVA radiation. Taking into consideration both cell lines used as models, fibroblasts (BALB/c 3T3) and human keratinocytes (HaCaT), the results obtained indicate that RF has potential application in photodynamic therapy. BALB/c 3T3 cells treated with 6.0 µM RF associate with UVA radiation (5 J/cm²) showed apoptosis induction mainly via intrinsic pathway. An increase of p-caveolin and MMP-2 activity (major protease responsible for degradating collagen) evidenced senescence induction. According to NF?B and p-IKKa/ß levels, RF did not significantly change the process of inflammation triggered by UVA radiation, in fibroblast cells. In HaCaT cells 5.0 µM RF associated with UVA radiation (5 J/cm ²) was observed apoptosis induction thorough extrinsic and intrinsic pathways. Senescence process was also observed in keratinocytes as indicated by an increase of pcaveolin, p21 and MMPs-2 and -9 activities. Besides, the decrease of NF?B expression indicates that this transcription factor translocates into the nucleus and in turn, regulates inflammatory response. Other aspect evaluated in this work was the influence of the F-127 in the RF phototoxicity. The irradiation of hydrogel containing F-127 and RF remained RF phototoxicity property. Our findings suggest that RF displays potential for use in photodynamic therapy, once it was phototoxic when irradiated with subtoxic UVA dose / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jose Inacio de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T19:21:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_FelipeRovereDiniz_M.pdf: 3469626 bytes, checksum: 9ef6c34f776f70e4620230f3b66bd0f4 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Diversos estudos descrevem o perfil clínico-epidemiológico e os resultados dos testes de contato das populações atendidas com suspeitas de dermatite alérgica de contato. Alguns evidenciam a provável relação causal com o trabalho; outros alertam para a necessidade de repetição do teste quando ocorrem múltiplas reações, principalmente nas demandas trabalhistas. O objetivo foi analisar o perfil clínico-epidemiológico e os resultados dos testes de contato dos pacientes com suspeita de dermatite alérgica de contato ocupacional atendidos no Ambulatório de Medicina do Trabalho da Universidade Estadual de Campinas. Foi realizado um estudo descritivo transversal retrospectivo com pacientes atendidos entre 1 de janeiro de 1999 e 31 de dezembro de 2008, envolvendo as seguintes variáveis: idade, cor, sexo, ocupação, tempo na ocupação, agente referido como sensibilizante, local inicial do eczema, origem do encaminhamento, resultados dos testes de contato e nexo causal. Foram analisados 180 prontuários e os resultados mostraram que o perfil clínicoepidemiológico foi semelhante àqueles referidos na literatura, mas os índices desensibilização foram proporcionalmente maiores: 85% dos pacientes tiveram pelo menos uma reação positiva no primeiro teste de contato, a média de reações positivas por teste foi 3,38 e 68% dos testes positivos apresentaram mais de duas reações positivas. Os elevados índices de sensibilização e a existência simultânea de múltiplas reações na maioria dos pacientes podem ser explicados por condições predisponentes para polissensibilização - dermatite nas mãos cronificadas por repetidas exposições ocupacionais - e/ou pela interpretação de reações irritativas como reações positivas. Foi sugerida, então, uma Ficha de Coleta de Dados, a ser preenchida durante as avaliações clínicas e a repetição dos testes de contato quando ocorrerem mais de 2 reações positivas relevantes a substâncias não correlacionada / Abstract: Several studies describe the clinical and epidemiological profile and the results of patch tests of the targeted population with suspected allergic contact dermatitis. Some evidence the probable causal relationship to work; others warn of the need to repeat tests when multiple reactions occur, especially in the lawsuits. The objetive was to analyze the clinical and epidemiological profile and the results of patch tests of patients with suspected allergic contact dermatitis treated at the Campinas State University's Occupational Medicine Clinic. We conducted a retrospective cross-sectional study with patients treated between January 1, 1999 and December 31, 2008 involving the following variables: age, race, sex, occupation, time in occupation, sensitizing agent, eczema locus, referral source, results of patch tests and causal relationship. We analyzed 180 medical records and the results show that clinical and epidemiological profile was similar to those reported in the literature, but the rates of awareness were proportionally larger: 85% of patients had at least one positive reaction in the first patch test, the average of positive reactions per test was 3.38 and 68% dos positive tests had more than two positive reactions. High levels of sensitization and the simultaneous existence of multiple reactions in most patients can be explained by predisposing factors to polysensization - cronic dermatitis on the hands caused by repeated occupational exposure - and/or by the interpretation of irritant reactions as positive reactions. It has been suggested then a sheet data collection to use in the clinic evaluation that includes the repetition of tests when more than 2 relevant positive reactions occurred to substances not correlated / Mestrado / Epidemiologia / Mestre em Saude Coletiva

O desenvolvimento de novos modelos de pele e novas metodologias in vitro segue uma tendência mundial na busca pela redução ou substituição de testes em animais. Nesse contexto, kits de epiderme humana reconstruída (RHE) apresentam-se como uma plataforma promissoras para essa proposta e, alguns modelos encontram-se validados para ensaios de irritação e corrosão cutânea in vitro. Entretanto, em países como o Brasil, enfrentam-se questões alfandegárias e perda do material por perecibilidade, dificultando e até impedindo, a importação desses kits para utilização por parte das indústrias e laboratórios nacionais. Em contrapartida, o desenvolvimento de um modelo de RHE apresenta-se como um avanço tecnológico e ganho de autonomia para esses países. Assim, no capítulo 1 explorou-se o desenvolvimento de um modelo nacional de RHE (USP-RHE) que atendesse às exigências internacionais descritas no guia OECD 439. O modelo desenvolvido apresentou uma epiderme bem diferenciada e atendeu aos parâmetros de qualidade (histologia, viabilidade e função barreira) bem como da funcionalidade, a qual é expressa na capacidade de distinção entre irritantes e não irritantes, apresentando 85,7% de especificidade, 100% sensibilidade e 92,3% de acurácia quando comparada com a classificação in vivo obtida pelo ensaio do linfonodo local (LLNA). No capítulo 2, células monocíticas THP-1 em monocamada foram capazes de distinguir entre agentes sensibilizantes e não sensibilizantes por meio da expressão de CD86, CD54 e liberação de IL-8. Após a obtenção de RHE e THP-1 funcionais, um cross-talking foi estabelecido gerando uma RHE imunocompetente. A RHEI distinguiu satisfatoriamente entre agentes sensibilizantes e não sensibilizantes por meio da expressão de CD86 e CD54 na membrana das células THP-1. A liberação de IL-8 também foi avaliada na RHEI, mas, não demonstrou ser um bom indicador para a avaliação de sensibilização, ao contrário de IL-1&#945;, que distinguiu satisfatoriamente agentes sensibilizantes de não-sensibilizantes, mas não foi capaz de hierarquizá-los. No capítulo 3, avaliou-se o papel de interleucinas do tipo Th2 e da depleção de colesterol na membrana plasmática no desenvolvimento de características morfológicas e moleculares da dermatite atópica (DA) in vitro em um modelo de RHE. Os resultados demonstram que o uso de IL-4, IL-13 e IL-25 em combinação com a depleção de colesterol na membrana plasmática mimetiza in vitro, as principais características da DA. No capítulo 4, buscou-se avaliar os efeitos imunossupressores da radiação ultravioleta na RHEI. Os ensaios foram realizados em diferentes períodos de exposição, entretanto, não foi possível observar tais efeitos. Os resultados justificam-se pela ausência da liberação de IL-10 pelo RHE imunocompetente, por exemplo, e demonstram uma limitação do RHE imunocompetente para avaliações de inativação da reposta imune. Neste trabalho, concluímos que foi possível obter uma RHE competitiva, similar aos modelos internacionais validados e que pode ser utilizada como plataforma para ensaios de irritação e sensibilização cutânea, além de ser uma plataforma para estudos da dermatite atópica. No modelo é possível estudar a ativação do sistema imune, o que o torna promissor como uma plataforma para avaliação de resposta imunológica in vitro. Conclui-se, portanto, que os objetivos foram amplamente atendidos além de oferecermos um protocolo de livre acesso para reprodução por outros laboratórios e um modelo para validação futura. / The development of new in vitro skin models and new methodologies follows a global trend in search for reductions or replacement of animal testing. In this context, Reconstructed Human Epidermis kits (RHE) are presented as a promising platform in the search for alternative methods to animal use, and some models are validated for skin irritation and corrosion in vitro tests. However, in countries such as Brazil, who face customs issues and loss of material due to perishability, making it challenging and even compromising the importation of these kits for use by industries and laboratories. In contrast, the development of an RHE model is presented as a technological breakthrough and gain of autonomy for these countries. Thus, in Chapter 1 we explored the development of a national model of RHE (USP-RHE) that meet international requirements described in OECD TG 439. The developed model presented a well-differentiated epidermis and met the quality parameters, for instance, histology, viability, and barrier function as well as the functionality expressed in the capacity of screening between irritants and nonirritants, with 85.7 % of specificity, 100 % of sensitivity and 91.7% of accuracy in comparision to in vivo UN GHS classification from Local limph node assay (LLNA). In chapter 2, monocytic THP-1 cell line, as monolayers, were able to distinguish between sensitizers and non-sensitizers by expression of CD86, CD54, and IL-8 release. In this model, functional RHE and THP-1 were used in a cross-talking, and thus an immunocompetent RHE (RHEI) was generated. The RHEI has distinguished satisfactorily between sensitizers and non-sensitizers through CD86 and CD54 expression that was larger and more sensitive in this model. The release of IL-8 was also evaluated in RHEI, however, did not demonstrate to be a good parameter for this evaluation, unlike IL-1&#945;, which satisfactorily distinguished sensitizers from non-sensitizers, but was not able to hierarchize them. In chapter 3, we evaluated the role of Th2-related cytokines and plasma membrane cholesterol depletion (CD) in the development of atopic dermatitis (AD) morphological and molecular characteristics in an in vitro model of RHE. The results showed that combination of IL-4, IL-13 and IL-25 in combination with CD can reproduce the major features of AD in vitro. In Chapter 4, we sought to evaluate the ultraviolet radiation-induced immunosuppressive effects in RHE. The tests were performed at different times. However, it was not possible to observe such effects. The results are justified by the absence of IL-10 release by RHEI, for example, and show a limitation of RHEI for rating inactivation of the immune response. In this work, we conclude that it was possible to obtain a competitive RHE similar to the validated international models that can be used as a platform for irritation and skin sensitization tests, besides being a platform for the study of atopic dermatitis. Using this model is possible to explore the activation of immune system, which makes it promising as a platform for the evaluation of immune response in vitro. We conclude, therefore, that the objectives have been met as well as it is offering an open source protocol for breeding by other laboratories, thus offering the RHE model developed here for future validation tests.