Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-07-07T12:13:56Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_JoãoVictorLeiteDias.pdf: 6357155 bytes, checksum: 49e964fd560fe7feb582301c409eab99 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-07-07T12:14:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_JoãoVictorLeiteDias.pdf: 6357155 bytes, checksum: 49e964fd560fe7feb582301c409eab99 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-07T12:14:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_JoãoVictorLeiteDias.pdf: 6357155 bytes, checksum: 49e964fd560fe7feb582301c409eab99 (MD5) Previous issue date: 2015 / Made available in DSpace on 2016-07-08T18:48:04Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_DIP_Jo?oVictorLeiteDias.pdf.txt: 355863 bytes, checksum: d476e278a3e7e647d0e295e1c759d53d (MD5) Tese_DIP_Jo?oVictorLeiteDias.pdf: 6357155 bytes, checksum: 49e964fd560fe7feb582301c409eab99 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A região do Vale do Jequitinhonha foi uma área de intensa transmissão vetorial da infecção chagásica no século passado, tendo sido uma das primeiras áreas do Brasil a realizar ações de combate a populações de triatomíneos domiciliados. Com os níveis de controle alcançados e a virtual eliminação do Triatoma infestans no país, outras espécies continuam como alvo das atividades de vigilância. Esse estudo teve por objetivo analisar a ocorrência e distribuição de triatomíneos nas áreas urbana e rural do município de Diamantina, Vale do Jequitinhonha, Minas Gerais, além de analisar a infecção por Trypanosoma cruzi em vetores e eventuais reservatórios da infecção. Os triatomíneos foram coletados durante as ações de vigilância entomológica entre setembro de 2011 e agosto de 2014. Os insetos positivos para tripanossomatídeos tiveram o conteúdo intestinal submetido a ensaio para determinação da linhagem de T. cruzi. A distribuição dos triatomíneos na área urbana foi analisada por meio de estatística espacial cotejando com dados de vegetação. A distribuição dos insetos na área rural foi analisada por meio de Modelos Lineares Generalizados empregando dados obtidos de sensores remotos. Avaliaram-se os conhecimentos a respeito de triatomíneos e doença de Chagas por meio de questionário entre moradores de localidades com diferentes níveis históricos de infestação triatomínica domiciliar. Mamíferos silvestres e sinantrópicos foram capturados e examinados quanto à infecção por T. cruzi. Foi realizada análise morfométrica de asas e análise molecular por meio de sequenciamento de gene do citocromo B para esclarecer relações de espécies de triatomíneos morfologicamente semelhantes ao Triatoma maculata. Foram capturados 975 triatomíneos pertencentes a oito espécies. Panstrongylus megistus foi a principal espécie capturada, sobretudo em colônias detectadas durante atividades de atendimento às notificações. Triatoma vitticeps foi a espécie mais notificada no município. A infecção por tripanossomatídeos foi observada em 7,4% dos insetos examinados, com destaque para Panstrongylus geniculatus (38,1%) e T. vitticeps (17,6%). Foram detectadas as linhagens TcI, TcII e TcIII do T. cruzi entre triatomíneos. As espécies distribuíram-se em distintas áreas de ocorrência ao longo do município. Os Modelos Lineares Generalizados não mostraram bom poder preditivo para descrever a ocorrência de P. megistus, T. arthurneivai e T. vitticeps. Na área urbana foi observada ocorrência de 140 exemplares de quatro espécies (P. geniculatus, P. megistus, Triatoma arthurneivai e T. vitticeps). A distribuição de imóveis infestados foi agregada para todas as espécies, exceto P. megistus, estando T. vitticeps e P. geniculatus próximos a áreas mais vegetadas e cobertas por campo rupestre. A população reconheceu os triatomíneos independentemente da localidade de residência, porém os moradores de áreas mais infestadas conheciam melhor os serviços de controle e as condutas a se adotar em relação aos insetos. Não foram detectados mamíferos infectados por T. cruzi. Na morfometria geométrica T. maculata e Triatoma pseudomaculata formaram um clado enquanto na análise molecular T. pseudomaculata com Triatoma wygodzinskyi foram agrupados em um clado, sendo T. maculata e T. arthurneivai espécies mais distantes. Os resultados mostram diferenças nos espaços geográficos ocupados pelos triatomíneos no município, além da interação com diferentes linhagens de T. cruzi, contribuindo para um melhor entendimento da ecoepidemiologia das espécies encontradas em Diamantina e indicando a necessária manutenção da vigilância entomológica. / Jequitinhonha Valley region represented an area with intense vector-borne transmission of Chagas disease infection in the past century, and also was one of the first areas in Brazil to carry out activities against domiciliated triatomines. Because of the controlled transmission and elimination of Triatoma infestans in Brazil, other triatomine species remain as target of surveillance. This study aimed to analyze the occurrence and distribution of triatomines in the urban and rural areas of the municipality of Diamantina, Jequitinhonha Valley, Minas Gerais, and to evaluate infection by Trypanosoma cruzi among vectors and possible reservoirs. Triatomines were collected during entomological surveillance between September 2011 and August 2014. Intestinal content of the insects with trypanosomes was evaluated for diagnosis of T. cruzi lineage. Distribution of triatomines in an urban area was analyzed by means of spatial statistics associated to vegetation cover data. Distribution of insects in the rural areas was analyzed by means of Generalized Linear Models with remote sensed data. Knowledge related to triatomines and Chagas disease was evaluated by using a questionnaire among residents in localities with different historical levels of triatomine infestation. Sylvatic and synanthropic mammals were examined about T. cruzi infection. Wing morphometry and sequencing of cytochrome B gene were used to clarify relationships of species morphologically similar to Triatoma maculata. A total of 975 triatomines of eight species were captured. Panstrongylus megistus was the most captured species, especially in colonies detected during searches by health agents in response to previous notification. Triatoma vitticeps was the most notified triatomine. Infection by trypanosomes was observed in 7.4% of examined insects, and Panstrongylus geniculatus (38,1%) and T. vitticeps (17,6%) were most infected species. T. cruzi lineages TcI, TcII and TcIII were detected among triatomines. Triatomine species occurred in distinct areas along the municipality. Generalized Linear Models did not present good predictive power in describing P. megistus, Triatoma arthurneivai and T. vitticeps distribution. In urban area 140 triatomines of four species were captured (P. geniculatus, P. megistus, T. arthurneivai and T. vitticeps). Spatial distribution of infested buildings was clustered for all species, except for P. megistus. T. vitticeps and P. geniculatus were found in more vegetated areas covered by rocky fields. People from all localities were able to recognize triatomines, but the residents in areas with more infestation knew better the existence of triatomine control service and reported desirable attitudes about the detection of insects. T. cruzi-infected mammals were not detected. At geometric morphometrics T. maculata and Triatoma pseudomaculata were grouped into a clade, whereas in molecular analysis T. pseudomaculata and Triatoma wygodzinskyi were grouped into a clade and T. maculata and T. arthurneivai remained more distant to them. Results presented differences in geographic space occupied by triatomines in the municipality, with interaction with distinct lineages of T. cruzi, contributing to improved understanding of ecoepidemiology of the triatomines species found in Diamantina, and indicating the necessity of a sustained entomological surveillance.

Em diferentes diretrizes para doença de Chagas crônica há diferentes algoritmos de execução de testes sorológicos. No entanto, há poucas referências quanto aos pacientes que devem ser submetidos à investigação sorológica, além dos indícios de que os testes ELISA possuem limitações e que o uso da PCR é controverso. Este trabalho contém resultados de dois estudos; o primeiro teve como objetivo rever a literatura sobre diagnóstico de doença de Chagas crônica e sumarizar a performance dos testes ELISA e PCR, e o segundo desenvolver um modelo de predição clínica para doença de Chagas crônica. O primeiro estudo foi uma revisão sistemática. Resumos relevantes foram procurados em bases remotas (MEDLINE, LILACS, EMBASE, SCOPUS, ISIWeb) e em bibliografia de textos completos. As investigações originais foram consideradas elegíveis para este trabalho quando estimassem sensibilidade e especificidade, ou confiabilidade (ou permitissem sua estimação) de testes ELISA ou PCR para o diagnóstico de doença de Chagas crônica. A heterogeneidade mostrou-se elevada em cada teste (ELISA e PCR) e o efeito de ponto de corte foi detectado em subgrupos. A sensibilidade e a especificidade sumárias do teste ELISA foram 97,7% [96,7%-98,5%] e 96,3% [94,6%-97,6%] respectivamente. O teste ELISA com antígenos recombinantes apresentou medidas sumárias de sensibilidade e especificidade de 99,3% [97,9%-99,9%] e 97,5% [88,5%-99,5%], respectivamente. A heterogeneidade da PCR não foi explicada, porém foi detectado um efeito de ponto de corte. A sensibilidade sumária da PCR foi de 50% a 90%, e sua especificidade sumária foi de aproximadamente 100%. Há testes comerciais cujos relatórios técnicos não são acessíveis e por isso não foram incluídos nesta revisão. O segundo trabalho foi um estudo transversal com pacientes recrutados sequencialmente por estarem sob suspeita de serem portadores de doença de Chagas. Neste estudo foram incluídos 352 pacientes e a prevalência da doença de Chagas foi de 20,74%. Os preditores que compuseram o modelo final foram: referenciamento por banco de sangue, número de irmãos com doença de Chagas, presença de BRD 3 grau ao ECG, presença de EV isolada ao ECG, relato de ter residido em área rural no passado, presença de BDAS ao ECG, radiografia com sinal de cardiomegalia, ausência de hipertensão arterial, número de parentes com AVE, relato de ter habitado em vivenda de estuque/taipa no passado. Esse modelo apresentou uma área sob a curva ROC de 0,90. Um nomograma foi elaborado para estimativa individual de probabilidades de ser portador de doença de Chagas crônica.

Benznidazol (BZ) é uma das duas drogas usadas no tratamento da doença de Chagas. Falhas terapêuticas são observadas em muitos pacientes, que foram atribuídas, principalmente, às diferenças na suscetibilidade de cepas do Trypanosoma cruzi a essa droga. Alguns genes foram implicados na resistência induzida a BZ, mas não na resistência natural. O objetivo geral deste estudo foi investigar diferenças de expressão gênica em cepas de T. cruzi naturalmente resistentes e suscetíveis a BZ, utilizando microarranjos de DNA. Quantificamos a sensibilidade à droga em cepas de laboratório e isolados obtidos de pacientes crônicos submetidos a quimioterapia com BZ. Concluímos que os valores de CI50 não são preditivos cura. Os experimentos de microarranjos e ensaios de RT-PCR mostram que a abundância de transcritos do gene TcABCG1, foi maior em cepas naturalmente resistentes a BZ. Não observamos variação na abundância de transcritos de alguns genes implicados no fenótipo de resistência induzida. Nossos dados sugerem o envolvimento do transportador TcABCG1 na resistência a BZ. / Benznidazole (BZ) is one of the two drugs used to treat Chagas disease. Therapeutic failures were reported in many chronic patients, which were mostly attributed to different susceptibilities of Trypanosoma cruzi strains to BZ. A few genes have been implicated in the induced resistance to BZ, but none in the natural resistance. The general goal of this study was to investigate differences in gene expression between susceptible and naturally resistant T. cruzi strains employing DNA microarray technology. We have quantified the drug activity for laboratory strains and for isolates retrieved from chronic patients submitted to BZ therapy. Our results indicate that the IC50 values are not predictive of cure. The microarray and RT-PCR experiments showed the higher abundance of transcript of TcABCG1 gene in naturally resistant strains as compared to sensitive strains. We observed no variation in the transcripts levels of the genes implicated in the induced drug resistance. Our data suggest that TcABCG1 transporter may be involved in natural drug resistance in T. cruzi.

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-09-26T19:33:26Z No. of bitstreams: 1 DissJPPS.pdf: 2939420 bytes, checksum: 44366c4d259a65ba75e54d36b01b8483 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-27T19:57:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissJPPS.pdf: 2939420 bytes, checksum: 44366c4d259a65ba75e54d36b01b8483 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-27T19:57:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissJPPS.pdf: 2939420 bytes, checksum: 44366c4d259a65ba75e54d36b01b8483 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T19:57:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissJPPS.pdf: 2939420 bytes, checksum: 44366c4d259a65ba75e54d36b01b8483 (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Knowledge about horizontal gene transfer has been proposed even before the determination of the molecular structure of DNA. It has been experimentally shown that micro-homologies rich in adenine and cytosine mediates the integration of Trypanosoma cruzi’s kDNA minicircle, in the vertebrate genome. After human genome sequencing, the genome characterization of different organisms has been one of the main driving forces of science, providing a quantity of biological data for modern biomedical research, unprecedented in the history of science. However, even though traditional DNA mapping algorithms are highly accurate, they operate at a much lower rate than that needed for the next generation sequencers to accumulate new data. This great asymmetry between data generation and analysis capability requires the rapid evolution of mapping and reading algorithms so that this large volume of information can be worked through targeted searches. Thus, this work proposes an efficient, fast and easy way to search and locate multiple signatures of indicators that allow exogenous kDNA integration in the human genome, by creating a set of scripts for in silico analysis adapted to large files sequences. Three scripts based in R language were developed: to permute the elements (nucleic acids or amino acids codes); for search, grouping and plotting matches in genome; and for counting total matches and chromosomal window. All adenine and cytosine signatures were properly identified in the human genome, but no point more susceptible to T. cruzi kDNA integration was identified. With the obtained data, a genetic map was created, listing all matchings in each cytogenetic band, but it was not possible to identify which chromosome was more prone to mutations, since the bigger the chromosome is, the higher the quantity of matches are. / Com o sequenciamento do genoma humano e tantas outras espécies, abre-se agora uma nova janela de oportunidades analíticas. Podemos pensar em fazer buscas orientadas dentro dessa massa enorme de dados publicados em bancos de dados biológicos. Tendo isso em foco, buscamos estruturar uma forma automatizada de busca dentro do genoma humano, pela qual pudéssemos inferir sobre os sítios mais prováveis de integração de DNA exógeno. Para isso utilizamos como modelo os trabalhos que indicam que a doença de Chagas é produzida pela introgressão do kDNA de Trypanosoma cruzi no genoma hospedeiro, por meio de herança genética horizontal. Já foi demonstrado experimentalmente que micro-homologias ricas em adenina e citosina medeiam as integrações de minicírculos de kDNA do T. cruzi, no genoma de vertebrados. Deste modo, o presente trabalho propõe uma maneira eficiente, fácil e rápida para a busca e localização de múltiplas assinaturas dos sinalizadores que propiciam a introgressão do kDNA exógeno no genoma humano, através da criação de um conjunto de scripts para análises in silico, adaptados a grandes arquivos de sequências. Foram desenvolvidos três scripts, baseados na linguagem R: para permutação de elementos (ácidos nucleicos ou aminoácidos); para busca, agrupamento e plotagem das correspondências em genoma; e para contagem total de correspondências e contagem por janela cromossômica. Todas as assinaturas compostas por adenina e citosina (motivos CA’s) foram devidamente identificadas no genoma humano, porém não foi identificado nenhum ponto mais suscetível à integração do kDNA de T. cruzi. Com os dados obtidos, um mapa genético foi criado, listando as correspondências em cada banda citogenética, porém não foi possível identificar qual cromossomo possui maior propensão à mutações, já que quanto maior o cromossomo, maior é a quantidade de correspondências presentes.

Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2017-01-03T12:37:26Z No. of bitstreams: 1 DissARFKM.pdf: 5277245 bytes, checksum: eb3373a6818032ff6003ee650addae1a (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-16T17:13:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissARFKM.pdf: 5277245 bytes, checksum: eb3373a6818032ff6003ee650addae1a (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-16T17:13:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissARFKM.pdf: 5277245 bytes, checksum: eb3373a6818032ff6003ee650addae1a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T17:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissARFKM.pdf: 5277245 bytes, checksum: eb3373a6818032ff6003ee650addae1a (MD5) Previous issue date: 2016-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Chagas Disease is a sickness that affects the population present of Latin America and it is classified by the World Health Organization as a Neglected Tropical Diseases. Chagas disease is caused by the flagellated parasite Trypanosoma cruzi, which belong to the same family as Trypanosoma brucei and Leishmania sp., and has a complex life cycle, going from an invertebrate host to a vertebrate one. In order to survive and proliferate in these host changes, T. cruzi must adapt itself to osmotic and oxidative stresses, changes in the environmental ion composition and shifts in energy sources. To perform this adaptation, the amino acid Lproline has presented an important and essential participation that affects the protozoan life cycle, such as support of the mitochondrial metabolism, the host-cell invasion and metacyclogenesis. T. cruzi 1-Delta-Pyrroline-5-Carboxylate Dehydrogenase (TcP5CDH) is involved in the catabolism of proline holding a major role in its conversion by transforming pyrroline-5-carboxylate into L-glutamate (the second step of the catabolic path) and, thus, seeming to be a promising molecular target for new drug development. The amino acids sequence of PP5CDH was used for conservation analysis, secondary structure prediction, identification of functional domains, and building of tertiary structure computer models with the techniques of Molecular Modeling and Molecular Docking. The TcP5CDH (MW: 60 kDa) was expressed in a heterologous fashion in Escherichia coli, and purified with affinity and size exclusion chromatography, resulting in approximately 2 mg/L of expression. The Dynamic Light Scattering assays where carried out with the recombinant P5CDH in the concentrations of 0.5, 1.0, 1.5 e 2.0 mg/mL, and presented an apparent molecular weight of 223,4 kDa (Rh: 12,01 nm), 246,4 kDa (Rh: 12,53 nm), 310,5 kDa (Rh: 13,83 nm) e 312,0 kDa (Rh: 12,13,86 nm), respespectively. The Circular Dichroism spectroscopy was performed with 0.2 mg/mL of TcP5CDH in the presence and absence of 100 μM of NAD+, L-Glu, and its inhibitor Disulfiram, presenting a Tm of Tm 60,01 ºC, 59,76 ºC, 57,76 ºC e 58,18 ºC, showing that TcP5CDH has a more thermic stability without ligands. Also, a deconvolution was made showing that TcP5CDH has 23% of alfa-helix, 12,3% of antiparallel beta-sheetst and 12,4% parallel beta-sheets, 18,3% of turns 41,7% of disorganized structures. These results will contribute to the understanding of the pathway of L- proline in T. cruzi and the possible future development of new drugs. / A Doença de Chagas é uma enfermidade que afeta a população presente nos países da América Latina e é classificado pela Organização Mundial da Saúde como uma Doença Tropical Negligenciada. A Doença de Chagas é causada pelo parasita flagelado Trypanosoma cruzi, pertencente à mesma família dos parasitas Trypanosoma brucei e a Leishmania sp., organismo que possui um complexo ciclo de vida, passando de um hospedeiro invertebrado para um vertebrado. Para sobreviver e proliferar nessa mudança de hospedeiro, o T. cruzi precisa se adaptar a estresses oxido-redutivos e osmóticos, mudanças da composição iônica do ambiente e mudanças na fonte de energia. Para realizar essas mudanças, o aminoácido Lprolina apresenta uma importante participação que afeta o ciclo de vida do parasita como suporte no metabolismo mitocondrial, invasão de células hospedeiras e na metaciclogênese. A 1-Delta-Pyrrolina-5-Carboxilato Desidrogenase de T. cruzi (TcP5CDH) está envolvida no catabolismo da prolina tendo um papel importante na sua conversão através da transformação da pirroline-5-carboxilato em L-glutamato (a segunda etapa da via) e, assim, parece ser um alvo molecular promissor para desenvolvimento de novos fármacos. A sequência de aminoácidos da P5CDH foi utilizada para análises de conservação, predição de estruturas secundárias, identificação de domínios funcionais e modelos computacionais da estrutura terciária através da técnicas de Modelagem por Homologia e Ancoramento Molecular. A TcP5CDH (MW: 60 kDa) foi expressa de forma heteróloga em Eschericia coli, purificada por cromatografia de afinidade e cromatografia de exclusão molecular e, em seguida, concentrada, resultando em aproximadamente 2 mg/L de expressão. Os experimentos de Espalhamento Dinâmico da Luz foram realizados com a P5CDH recombinante nas concentrações de 0.5, 1.0, 1.5 e 2.0 mg/mL e apresentaram uma massa molecular aparente de 223,4 kDa (Rh: 12,01 nm), 246,4 kDa (Rh: 12,53 nm), 310,5 kDa (Rh: 13,83 nm) e 312,0 kDa (Rh: 12,13,86 nm), respectivamente. A Espectroscopia de Dicroísmo Circular foi realizado utilizando 0,2 mg/mL da TcP5CDH e com a proteína na presença de 100 μM de NAD+, L-Glu e do inibidor Dissulfiram, apresentando uma Tm 60,01 ºC, 59,76 ºC, 57,76 ºC e 58,18 ºC, respectivamente. Além disso, uma deconvolução foi realizada mostrando que a TcP5CDH possui 23% de alfa-hélices, 12,3% de folhas-beta antiparalelas, 12.4% de folhas-beta paralelas, 18,3% de voltas e 41,7% de regiões desorganizadas Estes resultados irão contribuir no entendimento da via da L-prolina em T. cruzi e no possível desenvolvimento futuro de novos fármacos.

Submitted by Carlos Augusto Rolim da Silva Junior (carlos_jrolim@hotmail.com) on 2016-03-08T16:31:38Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3636595 bytes, checksum: 9bfe0585b173a3a85bd2f365a0090726 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-08T16:31:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3636595 bytes, checksum: 9bfe0585b173a3a85bd2f365a0090726 (MD5) Previous issue date: 2015-10-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / First, this study evaluated the risk imposed by Triatoma triatoma in the Chagasic epidemiology in distinct rural sites in Paraíba (PB; Cajazeiras, São José de Espinharas, Condado, Santa Teresinha and São Mamede) and Rio Grande do Norte (RN; Caicó and Currais Novos) with the use of entomological indicators. The rate of natural infection by T. cruzi and the parasite diversity, according to the two major lineages (TCI e TCII) were also evaluated via molecular techniques. With the field information, the compositional age structure of natural T. brasiliensis populations was also characterized. A total of 3,021 triatomines were captured, with a notable prevalence of T. brasiliensis (80%), followed by T. pseudomaculata (16%) and T. petrochii (4%). Overall, the domestic colonization was low and most of collected insects were peridomestic, which minimizes the risks of T. cruzi transmission. Even though Condado had exhibited the highest indexes of domiciliary infestation (50%) and colonization (40%), these indexes were followed by null natural infection by T. cruzi and low triatomine density (10.1 insects/house). Contrarialy, for Currais Novos there were hight triatomine density (37%) and colonization (37%), as well as natural infection by T. cruzi (mean 24.4%), suggesting it is the most exposed municipality to T. cruzi human infection. The observed variation in natural infection by T. cruzi in domiciliary unities is probably associated to ecotope structures, as in PB municipalities insects are found in chicken crops whereas in Currais Novos (RN) rock, cobblestone and branch piles are infested as much by T. brasiliensis as they are by sylvatic Caviidae mammals (Galea spixx and Kerodon rupestris). The lower (mean 3.4%) natural infection prevalence for T. cruzi in wild natural populations of T. brasiliensis in spots of PB if compared to those sampled in RN (mean 51.8%) is probably associated with environmental degradation of natural habitats observed in the first. Molecular techniques pointed out the two major parasite lineages of T. cruzi co-occurring in peridomiciles and also in sylvatic environments. From September to December it is observed a higher incidence of adults in the sylvatic environments, if compared to field work of March and studies surveyed from literature. It alerts for the possibility of a higher incidence of domiciliary invasions of winged forms of T. brasiliensis during the last months of the year. / Em uma primeira etapa, este estudo avaliou os riscos impostos por Triatoma brasiliensis na epidemiologia Chagásica em distintos pontos rurais de municípios da Paraíba (PB; Cajazeiras, São José de Espinharas, Condado, Santa Teresinha e São Mamede) e Rio Grande do Norte (RN; Caicó e Currais Novos) com a aplicação de indicadores entomológicos. O índice de infecção natural e a diversidade do parasita Trypanosoma cruzi de acordo com as duas principais linhagens (TCI e TCII) foram também avaliados por técnicas moleculares. Com as informações de campo, a estrutura composicional etária de populações de T. brasiliensis foi caracterizada. Um total de 3.021 triatomíneos foi capturado, com uma destacada prevalência de T. brasiliensis (80%), seguido por T. pseudomaculata (16%) e T. petrochii (4%). A colonização domiciliar foi baixa em todos os pontos investigados, sendo os insetos predominantemente peridomiciliares, o que minimiza os riscos de transmissão de T. cruzi. Embora Condado tenha apresentado os mais altos índices de infestação (50%) e colonização (40%) domiciliar, estes foram acompanhados por índices nulos de infeção natural e de baixa densidade triatomínica (10,1 insetos/casa). Já em Currais Novos houve a mais alta densidade triatomínica (41,1 insetos/casa) e valores também altos de infestação (37%) e colonização domiciliar (37%), bem como de infecção natural (média de 24,4%), indicando que este município apresenta o mais alto risco de transmissão de T. cruzi a humanos. A variação nos índices de infecção natural por T. cruzi em unidades domiciliares está possivelmente associada à estrutura ecotípica, pois nos municípios da PB os insetos peridomiciliares são encontrados principalmente em galinheiros ao passo que em Currais Novos (RN) os amontoados de pedras, paralelepípedos e galhos no peridomicílio estão infestados tanto por T. brasiliensis, quanto por roedores silvestres da família Caviidae (Galea spixx e Kerodon rupestris). A mais baixa prevalência de infecção por T. cruzi em populações silvestres de T. brasiliensis nos pontos de PB (média de 3,4%) se comparado aos pontos amostrados do RN (média de 51,8%) está possivelmente associada à degradação ambiental observada na Paraíba. Técnicas moleculares apontaram a presença das duas linhagens do parasita coabitando tanto no peridomicílio quanto no ambiente silvestre. De setembro a dezembro foi observada maior incidência de adultos nos ambientes silvestres, em relação às coletas de março e aos trabalhos encontrados na literatura. Estes resultados alertam para a possibilidade de uma maior incidência de invasões domiciliares pelas formas alares de T. brasiliensis nos últimos meses do ano.

Submitted by ERIKA ALESSANDRA PELLISON NUNES DA COSTA null (eapellison@uol.com.br) on 2016-06-10T17:43:40Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Erika Corrigida definitiva..pdf: 896537 bytes, checksum: 3c11d0bcea7fce8a55fe750790e0c7c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-15T17:37:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 costa_eapn_me_bot.pdf: 896537 bytes, checksum: 3c11d0bcea7fce8a55fe750790e0c7c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T17:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 costa_eapn_me_bot.pdf: 896537 bytes, checksum: 3c11d0bcea7fce8a55fe750790e0c7c0 (MD5) Previous issue date: 2016-04-29 / A Hipertensão Arterial Pulmonar (HAP) é caracterizada pela elevação sustentada da pressão arterial nos capilares pulmonares, com vasoconstrição e remodelação vascular local. A HAP é definida hemodinamicamente através de valores da pressão arterial pulmonar média em repouso ≥ 25 mmHg, com pressão arterial capilar ≤ 15mmHg e resistência vascular pulmonar > 3 unidades de wood. A HAP é considerada como doença rara, cujos estudos epidemiológicos europeus descrevem a incidência de 1 a 2 casos e prevalência de 15 casos de HAP por milhão de habitantes, com predomínio do sexo feminino, na razão de 1,7: 1,0 e média de idade de 37 anos. Objetivo: Determinar a prevalência de Hipertensão Arterial Pulmonar e o possível impacto clínico em pacientes com a forma crônica indeterminada da Doença de Chagas. Estudo transversal e observacional, onde foram incluídos 99 pacientes com a Forma Crônica Indeterminada da Doença de Chagas e 08 controles com ausência da doença. Houve exclusão de doenças prévias que pudessem ocasionar HP. Três grupos foram formados: G1 (controle), G2 (Chagas) e G3 (Chagas com suspeita de HP), através de critérios clínicos e da realização de ecocardiograma.Os indivíduos foram classificados de acordo com a Classe Funcional(NYHA) modificada para HP e submetidos à Espirometria, Teste de Caminhada de Seis Minutos, Dosagem de Óxido Nítrico (NO) .Predominaram gênero masculino, com idade de 55,62 ± 8,71 anos, Classe Funcional de NYHA :I-II (93,45%) e Espirometrias normais: 88 (82,24%). A dosagem de NO foi estatisticamente significante p<0,05 ao compararmos os indivíduos com Chagas ao Grupo Controle. Pacientes com suspeita de Hipertensão Pulmonar (HP) detectada no ecocardiograma com Pressão Sistólica Artéria Pulmonar (PSAP)>40mmHg, foram submetidos ao Cateterismo Cardíaco Direito e resultou em prevalência de HAP: 1,01% . O indivíduo com HAP tem 48 anos e sexo feminino, compatível com a literatura. A biodisponibilidade elevada dos níveis de NO esteve presente nos pacientes com Chagas com ou sem sintomas de HP. Os dados presentes no estudo reforçam a hipótese de que pacientes com a Forma Crônica Indeterminada da Doença de Chagas sofrem com sobrecarga de volume intravascular associada a processo inflamatório intenso com provável evolução para comprometimento cardíaco. / Pulmonary Arterial hypertension (PAH) is characterized by sustained elevation of arterial pressure in pulmonary capillaries, with vasoconstriction and local vascular remodeling. PAH is defined hemodynamically by mean values of Pulmonary Arterial Pressure in repose ≥ 25 mmHg, capillary arterial pressure ≤ 15mmHg and pulmonary vascular resistance (PVR) >240 dynes/sec/cm-5. PAH is considered a rare disease, with European incidence of 1 to 2 cases and prevalence of 15 cases per million inhabitants, with predominance of females, at a 1.7-to-1.0 ratio, and mean age of 37 years. Objective: determine the prevalence of PAH and its clinical impact on patients with the indeterminate chronic form of Chagas Disease. Observational and transversal study of 99 patients with indeterminate chronic form of Chagas Disease (CD) and 08 control individuals without the disease. Patients with previous pathologies that could provoke Pulmonary Hypertension (PH) were excluded. After realization of echocardiographic exams three groups were formed: G1: control, G2: Chagas and G3: Chagas with suspicion of PH. The individuals were classified according to the Functional Class of the New York Heart Association (NYHA), and submitted to Spirometry, Six-Minute Walking Test and Serum Dosing of Nitric Oxide (NO). This was a predominantly male (54.20%), middle-aged (mean 55.62 ± 8.71 years) cohort of NYHA Functional Class I-II (93.45%) and normal Spirometries (82.24%). During echocardiograph, patients that presented Pulmonary Artery Systolic Pressure (PASP)>40mmHg were considered to have suspicion of PH and submitted to right cardiac catheterization, resulting in PAH prevalence of 1.01%. The patient with PAH is female, aged 48 years, and presents studied variables compatible with the literature. Elevated NO bioavailability was present in patients with Chagas with or without PH symptoms. The findings of the present study reinforce the hypothesis that patients with the indeterminate chronic form of CD suffer from an overload of intravascular volume associated with an intense inflammatory process with probable evolution to cardiac impairment.

Em diferentes diretrizes para doença de Chagas crônica há diferentes algoritmos de execução de testes sorológicos. No entanto, há poucas referências quanto aos pacientes que devem ser submetidos à investigação sorológica, além dos indícios de que os testes ELISA possuem limitações e que o uso da PCR é controverso. Este trabalho contém resultados de dois estudos; o primeiro teve como objetivo rever a literatura sobre diagnóstico de doença de Chagas crônica e sumarizar a performance dos testes ELISA e PCR, e o segundo desenvolver um modelo de predição clínica para doença de Chagas crônica. O primeiro estudo foi uma revisão sistemática. Resumos relevantes foram procurados em bases remotas (MEDLINE, LILACS, EMBASE, SCOPUS, ISIWeb) e em bibliografia de textos completos. As investigações originais foram consideradas elegíveis para este trabalho quando estimassem sensibilidade e especificidade, ou confiabilidade (ou permitissem sua estimação) de testes ELISA ou PCR para o diagnóstico de doença de Chagas crônica. A heterogeneidade mostrou-se elevada em cada teste (ELISA e PCR) e o efeito de ponto de corte foi detectado em subgrupos. A sensibilidade e a especificidade sumárias do teste ELISA foram 97,7% [96,7%-98,5%] e 96,3% [94,6%-97,6%] respectivamente. O teste ELISA com antígenos recombinantes apresentou medidas sumárias de sensibilidade e especificidade de 99,3% [97,9%-99,9%] e 97,5% [88,5%-99,5%], respectivamente. A heterogeneidade da PCR não foi explicada, porém foi detectado um efeito de ponto de corte. A sensibilidade sumária da PCR foi de 50% a 90%, e sua especificidade sumária foi de aproximadamente 100%. Há testes comerciais cujos relatórios técnicos não são acessíveis e por isso não foram incluídos nesta revisão. O segundo trabalho foi um estudo transversal com pacientes recrutados sequencialmente por estarem sob suspeita de serem portadores de doença de Chagas. Neste estudo foram incluídos 352 pacientes e a prevalência da doença de Chagas foi de 20,74%. Os preditores que compuseram o modelo final foram: referenciamento por banco de sangue, número de irmãos com doença de Chagas, presença de BRD 3 grau ao ECG, presença de EV isolada ao ECG, relato de ter residido em área rural no passado, presença de BDAS ao ECG, radiografia com sinal de cardiomegalia, ausência de hipertensão arterial, número de parentes com AVE, relato de ter habitado em vivenda de estuque/taipa no passado. Esse modelo apresentou uma área sob a curva ROC de 0,90. Um nomograma foi elaborado para estimativa individual de probabilidades de ser portador de doença de Chagas crônica.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A forma digestiva decorrente da doença de Chagas é uma das principais causas de morbidade e mortalidade na fase crônica da doença. Pacientes portadores da forma digestiva apresentam uma série de sintomas relacionados à obstrução do órgão. No megacólon, os órgãos exibem grande aumento do lúmen e hipertrofia da camada muscular. Análises histológicas dos órgãos afetados têm demonstrado lesões inflamatórias do sistema nervoso entérico (SNE), associadas com uma grande redução no número de neurônios. Embora o mecanismo de lesão neuronal continue obscuro, a frequente observação de ganglionite e periganglionite em pacientes com megacólon aponta para a participação de células do sistema imune nesse processo. Indivíduos não portadores de megacólon também apresentaram processos de denervação e inflamação, porém menos intensas em relação aos portadores de megacólon. Conhecendo que a inter-relação entre o SNE e o sistema imune é muito rica, é de extrema importância compreender os mecanismos que atuam em comum entre estes dois sistemas, o que pode elucidar e mostrar novos caminhos para o controle efetivo de doenças que afligem o trato gastrintestinal. Dados preliminares de nossos estudos utilizando a proteína GAP-43, marcador de regeneração neuronal, sugerem que esse processo de plasticidade neuronal esteja ocorrendo no cólon de pacientes portadores da infecção crônica. A hipótese é que o desenvolvimento do megacólon chagásico esteja intimamente relacionado com a expressão de neurotrofinas, substâncias capazes de estimular o processo de regeneração neuronal. A partir desses dados uma nova linha investigativa abriu-se no estudo da patologia do megacólon chagásico. Para a compreensão do desenvolvimento dessa patologia, avaliamos o grau de destruição das diferentes classes neuronais, a taxa de regeneração e as substâncias envolvidas com as mesmas, sendo essa a hipótese norteadora da dissertação aqui apresentada. / Patients with the digestive form of Chagas' disease exhibit a number of symptoms related to obstruction of the organ. Histological analysis of affected organs have demonstrated inflammatory lesions of the enteric nervous system (ENS), associated with a large reduction in the number of neurons caused, mainly, by inflammatory process. However, previous studies presented that some substances, like neurotrophins, may restrict neuronal destruction levels. The objective of this study is to characterize the neurotrophins expression in tissues from chagasic patients with chagasic megacolon and verify its involvement in megacolon development. For this, we used samples from chagasic patients with megacolon (n=8) and non-infected individuals (n=8) that, after preparation, were submitted to confocal fluorescence immunohistochemistry. To identify the sources and expression level of neurotrophins (NGF, GDNF and NT3), we performed a co-localization with Peripherin (neuronal marker) and S-100 (glial cell marker). Our results presented that, in the colon, the glial cells are the main sources of neurotrophins in all analyzed groups. Besides, chagasic patients with megacolon presented high expression of all investigated neurotrophins when compared with non-infected individuals. Our data point that neurotrophins might perform a protective role in the enteric nervous system and that prevent the megacolon installation. By the other side, chagasic patients that do not express an adequate level of neurotrophins may progress to megacolon form. We believe that this data can suggest new treatment protocols, like drugs administration qualified to elevate neurotrophins levels, what could prevent the megacolon installation and maintain the normal function of the gastrointestinal tract. / Dissertação (Mestrado)

A insuficiência cardíaca é uma síndrome clínica de alta morbimortalidade e em uma parcela expressiva de casos, sem etiologia definida, o papel de agentes infecciosos tem sido considerado. No entanto, muitas dúvidas existem neste contexto, além de incipiente participação da população nacional em estudos sobre o tema. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de agentes infecciosos pré-estabelecidos e de inflamação, em fragmentos de biopsia endomiocárdica de pacientes com miocardiopatia dilatada idiopática e miocardiopatias de outras etiologias específicas, em comparação a grupo controle sem evidência de cardiopatia. Entre julho de 2008 e agosto de 2011 foram estudados fragmentos de biopsia endomiocárdica de pacientes internados com miocardiopatia dilatada idiopática em avaliação para transplante cardíaco, doadores e corações explantados de diferentes miocardiopatias. Foram definidos 2 grupos: doadores (29 casos) e miocardiopatas (55 casos, incluindo, 32 idiopáticos, 9 chagásicos, 6 isquêmicos e 8 de outras etiologias específicas). Observamos que a inflamação por linfócitos T foi mais intensa nos miocardiopatas em relação aos doadores, não havendo diferença em relação à presença de macrófagos, expressão de HLA de classe II e de ICAM-I. Quando se comparou por etiologia, a inflamação na doença de Chagas foi preponderante. A pesquisa de microorganismos por imunohistoquímica demonstrou uma maior expressão de antígenos de enterovírus nos doadores, de borrelia e das hepatites B e C nos miocardiopatas. Por biologia molecular, em todos os grupos, a positividade para os microorganismos foi elevada, incluindo co-infecções, havendo uma maior positividade de adenovírus e HHV6 nos doadores em relação aos miocardiopatas. Os parâmetros de inflamação não se correlacionaram à presença de microorganismos, quer seja por imunohistoquímica ou por biologia molecular. Que seja do nosso conhecimento, este estudo foi pioneiro ao demonstrar a presença de vírus em tecido cardíaco de miocardiopatia chagásica e aumento da expressão de HLA de classe II, ICAM-I e do número de macrófagos em fragmentos de biopsia endomiocárdica de doadores, tal como nas miocardiopatias. Assim, podemos concluir que a presença de agentes infecciosos e inflamação no miocárdio de pacientes com miocardiopatia dilatada idiopática é frequente, e da mesma forma, em doadores de transplante cardíaco e miocardiopatias de outras etiologias. Com base em nosso estudo, a relação causal entre a presença de agentes infecciosos no tecido cardíaco e o desenvolvimento de miocardiopatia é controversa. Novos estudos envolvendo a quantificação de cópias de microorganismos, utilização de diferentes técnicas simultaneamente, sequenciamento de cepas patogênicas, simbiose entre agentes e o hospedeiro, produção de autoanticorpos mediada por microorganismos e predisposição genética do hospedeiro devem ser realizados visando estabelecer o real papel de agentes infecciosos no desenvolvimento das miocardiopatias / Heart failure is a clinical syndrome with high morbidity and mortality. In a significant portion of cases of unknown etiology, the role of infectious agents has been considered. However, there are many pitfalls in this context and incipient studies including national population. The aim of this study was to determine the frequency of predetermined infectious agents and inflammation in endomyocardial biopsy specimens from patients with idiopathic dilated cardiomyopathy and other specific etiologies, compared to the control group without heart disease. Between July 2008 and August 2011 were studied endomyocardial biopsy specimens from hospitalized patients with idiopathic dilated cardiomyopathy undergoing evaluation for heart transplantation, donors and explanted hearts from different cardiomyopathies. 2 groups were defined: donors (29 cases) and cardiomyopathy (55 cases, including 32 idiopathic, 9 chagasic, 6 ischemic and 8 other specific etiologies). We observed that inflammation by T lymphocytes was more intense in cardiomyopathy in relation to donors and no difference regarding the presence of macrophages, expression of class II HLA and ICAM-I. When comparing by etiology, inflammation in Chagas\' disease was predominant. The search of microorganisms by immunohistochemistry showed a higher expression of antigens of enteroviruses in donors, borrelia, hepatitis B and C in cardiomyopathy. In molecular biology, in all groups, the positivity was elevated to microorganisms, including co-infection, with a higher positivity to adenovirus and HHV6 in donors towards cardiomyopathy. The parameters of inflammation did not correlate with the presence of microorganisms, either by immunohistochemistry or by molecular biology. To our knowledge, this study was pioneer demonstrating the presence of virus in the heart tissue of chagasic cardiomyopathy and increased expression of class II HLA, ICAM-I and macrophages in endomyocardial biopsy specimens from donors, as in cardiomyopathies. Thus, we can conclude that the presence of infectious agents and inflammation in the myocardium of patients with idiopathic dilated cardiomyopathy is frequent, and similarly in heart transplant donors and cardiomyopathies of other etiologies. Based on our study, the causal relationship between the presence of infectious agents in cardiac tissue and the development of cardiomyopathy is controversial. Further studies involving the quantification of copies of microorganisms, simultaneous use of different techniques, sequencing of pathogenic strains, symbiosis between agents and the host, mediated autoantibody production by microorganisms and genetic predisposition of the host must be performed in order to determine the real role of infectious agents in the pathogenesis of cardiomyopathies