Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: George Shigueki Yasui / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Banca: José Augusto Senhorini / Resumo: O objetivo deste trabalho foi estudar aspectos básicos dos gametas e o desenvolvimento inicial de Astyanax altiparanae, para futura aplicação na área de biotecnologia, incluindo manipulação cromossômica de embriões. No Capítulo I, os ovócitos foram analisados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e a dose inseminante foi determinada. O sêmen também foi coletado e analisado com sistema de análise computadorizada (CASA). A dose inseminante reduzida encontrada para a espécie foi explicada pela morfologia dos ovócitos através de análise em MEV, que revelou vilosidades que cercam a micrópila relacionadas à orientação do esperma para a fecundação. No capítulo II, vários parâmetros relacionados com a fertilização foram descritos, incluindo a extrusão do segundo corpúsculo polar, a fusão dos pronúcleos e a formação do cone de fertilização. Além disso, o efeito de três temperaturas (22°C, 26°C e 30°C) sobre os estádios de desenvolvimento foi determinado. A extrusão do segundo corpúsculo polar ocorreu em 4-6 minutos pós-fertilização (mpf), e os pronúcleos fundiram-se com 8-10 mpf. O espermatozoide apresentou uma cabeça esférica, peça intermediária e flagelo. Como esperado, as temperaturas mais elevadas deram origem a um desenvolvimento e incubação mais rápidos. As informações obtidas neste estudo irão abrir novas possibilidades no campo da manipulação cromossômica de embriões, incluindo poliploidia, quimerismo, transgenia e outras técnicas / Abstract: The aim of this study was to study basic aspects of gametes and early development of yellowtail tetra Astyanax altiparanae, for future application in biotechnology including chromosome and embryo manipulation. In Chapter I, the oocytes were analyzed by Scanning Electron Microscopy (SEM) and the insemination dose was determined. Semen was also collected and analyzed using a Computer Assisted Sperm Analysis (CASA). Such a reduced inseminating dose was explained by oocyte morphology because SEM analysis revealed villosities surrounding the micropyle that is related to the sperm guidance for fertilization. In addition, the duration of sperm motility was longer in comparison to most teleosts, what may improve fertilization ability. In Chapter II, several parameters related with fertilization were described, including the second polar body extrusion, fusion of the pronuclei and the formation of the fertilization cone. Moreover, the effect of three temperatures (22°C, 26°C and 30°C) on developmental stages was determined. 2nd polar body was extruded at 4-6 minutes post fertilization (mpf), and the pronuclei were formed at 8-10 mpf. The sperm showed a spherical head, midpiece and flagellum. As expected, higher temperatures gave rise to faster development and hatching. The information obtained in this study will open new possibilities in the field of chromosome and embryo manipulation including poliploidy, chimerism, transgenesis and other techniques / Mestre

Orientador: Nelson Sabino Bittencourt Júnior / Banca: Neusa Taroda Ranga / Banca: Diana Salles Sampaio / Resumo: Caracteres embriológicos possuem valor sistemático e sua utilidade foi demonstrada por diversos autores para elucidar o posicionamento filogenético de certas famílias de angiospermas. Este estudo visa analisar a ontogenia das estruturas reprodutivas de Cybistax antisyphilitica, com o propósito de acrescentar dados embriológicos relevantes ao delineamento filogenético da família, ou de categorias taxonômicas infrafamiliares. As características embriológicas observadas demonstraram similaridade com espécies pertencentes à ―Tabebuia alliance‖ cuja embriologia já foi investigada. Observou-se durante a ontogenia do óvulo de C. antisyphilitica que apenas o ginósporo calazal se desenvolve e, durante sua diferenciação em célula-mãe do saco embrionário, a face micropilar de sua parede celular assume uma conformação côncava, na qual há grande deposição de calose. No estádio octonuclear, há acúmulo de uma substância fibrogranular entre o endotélio e a parede do ginófito fazendo com que o saco embrionário apresente um característico afunilamento mediano. Em relação a ontogenia da antera da espécie estudada, verificou-se que as camadas tapetais são dimórficas, embora ao final do estádio pré-meiótico se tornem similares; embora, após a meiose, o dimorfismo se acentua novamente nas camadas tapetais. Os amiloplastos das células-mãe dos andrósporos são herdados pelos andrósporos e grãos de pólen deles resultantes. Os amiloplastos dos grãos de pólen gradualmente aumentam em número e tamanho em um único ciclo de amilogênese/amilólise. Com base nos dados obtidos conclui-se que a configuração da parede distal do ginósporo calazal e o acúmulo de secreção na porção mediana do saco embrionário são características não relatadas para outras espécies da família e podem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryological characters have systematic value and its usefulness has been demonstrated by several authors to elucidate the phylogenetic position of certain angiosperms families. This study aims to analyze the ontogeny of reproductive structures of Cybistax antisyphilitica, with the purpose of adding relevant embryological data to the phylogenetic design of the family or, infra-familiar taxonomic categories. The embryological features observed was similar to species belonging to ―Tabebuia alliance‖ whose embryology has been investigated. During the ontogey of C. antisyphilitica ovule, only the chalazal megaspore develops, and in the course of its differentiation in the embryo sac mother cell, the micropylar side of its cell wall assumes a concave conformation in which there is an expressive deposition of callose. In the octonuclear stage, there is an accumulation of a fibrogranular substance between the endothelium and megagametophyte wall causing a bottleneck in the middle portion of embryo sac. For anther ontogeny of the species studied, the tapetal layers are dimorphic, although becoming similar at the late pre-meiotic stage. After meiosis, the dimorphism is accentuated between the two tapetal layers. The microspore mother cell amyloplasts are inherited by the microspores and the resulting pollen grains. The pollen grain amyloplasts gradually increasing in number and size in a single amylogenesis/amylolyse cycle. Based on the obtained data we concluded that the configuration of the distal wall of the chalazal megaspore and the accumulation of secretion in the median portion of embryo sac are characters not reported for other species of the family, and may possibly be autapomorphic characters. Regarding the ontogeny of the anther, Cybistax antisyphilitic showed a multistratified fibrous endothecium... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

CAPES / As fruteiras nativas vêm ganhando atenção pelos produtores e consumidores, já que são consideradas como alimento funcional. No caso da pitangueira, é uma das únicas fruteiras nativas com plantio comercial, sendo atualmente, explorada pela indústria de sucos e de cosméticos. Para a indústria, em geral, é importante que os frutos da pitangueira apresentem o máximo rendimento de polpa. Entretanto, os frutos desta fruteira não possuem tal característica, por produzirem geralmente sementes grandes comparativamente, ao tamanho dos frutos. Contudo, foi identificado na coleção de fruteiras nativas da UTFPR - Câmpus Dois Vizinhos um genótipo produtor de pitangas sem sementes, o que pode revolucionar o mercado, atraindo mais fruticultores interessados em seu plantio. Porém, as causas desta característica devem ser elucidadas para que se possa futuramente, lançar no mercado, genótipos produtores de frutos com qualidade superior e sem sementes. O objetivo deste trabalho foi buscar elucidar as possíveis causas da apirenia em pitangueira (Eugenia uniflora L) e caracterizar comparativamente a qualidade do fruto produzido pela mesma . Os trabalhos foram realizados nos Laboratórios de Microscopia e de Fisiologia Vegetal e, na área da coleção de frutas nativas da UTFPR – Câmpus Dois Vizinhos – Paraná e, na Estação experimental de Aula Dei (Zaragoza, Espanha). Foram utilizados genótipos de pitangueira (E. uniflora L.) que produzem frutos com e sem sementes (pirênicos e apirênicos, respectivamente), pertencentes à coleção da referida Instituição. Foram realizados experimentos envolvendo a biologia floral e reprodutiva da pitangueira; feitos cortes histológicos para descrição da embriogênese e ontogênese; níveis de ploidia e avaliação da qualidade de frutos. Pode-se constatar que o acesso apirênico, em muitas características não se diferenciou do acesso pirênico, mas foi verificado que este último tem maior período de floração e frutificação, maior número de polén por flor, comparado ao acesso apirênico. O acesso apirênico encontrado poderá servir de base para cruzamentos dirigidos no melhoramento genético da cultura, buscando-se novos híbridos, com essa característica, pois seus frutos apresentaram qualidades que permitem enquadrá-las para dupla finalidade. / The native fruit trees have gained attention by producers and consumers, already that it is consider as functional food. In the case of Surinan Cherry tree, it is one of native fruit trees with commercial cultive, it being currently exploited by the juice and cosmetics industry. For the industry, in general, it is important that the Surinan Cherry fruit to present the maximum pulp content. However, the fruits of this specie do not have this characteristic, because they generally produce large seeds comparatively to the fruit size. Nevertheless, there is a genotype that produces fruit withou seed from UTFPR - Câmpus Dois Vizinhos, Paraná State, Brazil, what to change the market, and itcan attracted more fruit growers interested its cultive. But, the causes of this characteristic have to be elucidated for in the future for it be posible have in the market genotypes producing fruit quality superior and without seed. The aim of this work was to elucidate the causes of fruit without seed in the Surinan Cherry (Eugenia uniflora L) and its fruit quality was comparated with of the other Surinan Cherry trees. The works were carried out at the Microscopy and Plant Physiology Laboratories and at the native fruit collection area from UTFPR - Câmpus Dois Vizinhos - Paraná State, Brazil. In addition, to have works at Aula Dei Experimental Station (Zaragoza, Spain). Genotypes of Surinan cherry (Eugeia uniflora L.), which produce fruits with and without seeds (pirenics and apirenic, respectively) it was studied. Experiments were carried out involving floral and reproductive biology of Surinan cherry tree; it was realized histological sections for description of embryogenesis and ontogenesis; levels of ploidy and evaluation of the fruit quality. It can to be observed that the apirenic genotype in many characteristics was not different to pirenic genotype. It was verified that the pirenic genotype presented a longer period of flowering and fruiting and, presented a higher number of pollen by flower compared to apirenic genotype. The apirenic genotype can to serve as a basis for crosses directed in the fruit breeding of Surinan cherry, to try obtaining new hybrids, with this characteristic, already that, this fruit present quality to in nature or industry market.

O presente trabalho analisou as etapas de formação de rudimentos seminais e grãos de pólen de Passiflora elegans e P. haematostigma. As espécies foram analisadas fazendo-se o uso de microscopia fotônica e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O gineceu apresenta um estigma com emergências estigmáticas, estilete sólido e ovário tricarpelar e unilocular. O ovário apresenta inúmeros rudimentos seminais que formam-se a partir de divisões periclinais da camada central. Os rudimentos são crassinucelados e os tegumentos têm origem dérmica. A célula arquesporial divide-se mitoticamente antes da meiose. A meiose resulta em uma tétrade linear, com ginósporo calazal viável. A ginogametogênese é do tipo Poligonum e, durante a diferenciação do ginófito, os estratos parietais do nucelo são parcialmente consumidos e a epiderme nucelar divide-se periclinalmente na porção apical. As antípodas são efêmeras e o ginófito maduro apresenta duas sinérgides com aparelho fibrilar desenvolvido, oosfera e núcleo secundário no pólo micropilar. O rudimento seminal é anátropo, arilado, bitegumentado e com micrópila em “zig-zag”. O androceu é constituído por cinco anteras tetrasporangiadas. Os estratos parietais desenvolvem-se do tipo Dicotiledôneo e as camadas médias são persistentes na antera madura de P. haematostigma. As células do tapete são poliplóides e colapsam liberando os conteúdos no interior do lóculo. A citocinese é do tipo simultânea e as tétrades são tetraédricas na maioria. O pólen é liberado na fase bicelular, apresenta número de colpos variável em P. elegans e seis colporos em P. haematostigma. A esporoderme não apresenta camada basal em P. elegans e é mais espessa do que em P. haematostigma. Plastídios e mitocôndrias são englobados durante a formação da célula generativa e persistem até a fase de pólen maduro. / The present work analyzed the different developmental stages of the ovule and of the pollen grain in Passiflora elegans and P. haematostigma. The species were analyzed using photonic microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The gynoecium has a stigma with stigmatic outgrowths, solid style and tricarpelar and unilocular ovary. The ovary has several seminal rudiments that are originated from the periclinal divisions of the central layer. The ovule is crassinucelate and the dermal layer originates the integuments. The arquesporial cell divides mitotically before meiosis. The meiosis results into a linear tetrad and only the chalazal gynospore is viable. The gynogametogenesis is of the Poligonum type, the nucellus parietal layers are partially degraded during the gynophyte differentiation, and nuclear epidermis divides periclinally in the apical portion. The antipodal cells are ephemeral and the mature gynophyte has two synergids with a developed filiform apparatus, egg cell and secondary nuclei in the micropilar pole. The ovule is anatropous, arillate, bitegmic and with zig-zag micropile. The androecium is constituted of five tetrasporangiate anthers. The parietal layers develop like the Dicotiledoneous type and middle layers are persistent in the mature anther of P. haematostigma. The tapetal cells are polyploids and collapse releasing their contents to the locus. The cytokinesis is of the simultaneous type and most of the tetrads are tetrahedral. The pollen is released during the bicellular stage, has a variable number of colpus in P. elegans and six colporus in P. haematostigma. The sporoderm does not have a basal layer in P. elegans and is thicker than in P. haematostigma. Plastids and mitochondria are enclosed during the generative cell formation and persist until the mature pollen stage.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:00:32Z No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:01:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-17T18:01:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / A criopreservação de embriões ovinos tem sido amplamente difundida, porém seus índices de sobrevivência e prenhez têm mostrado grande variação. Neste estudo, embriões produzidos in vivo foram congelados ou vitrificados e reaquecidos para avaliação ultraestrutural e determinação do padrão de atividade mitocondrial e integridade do citoesqueleto. Os embriões foram colhidos de ovelhas superovuladas, classificados e selecionados para criopreservação. Embriões submetidos à congelação lenta (n=22) foram exposto à solução de 0,75M de etilenoglicol (EG) por 10 minutos, 1,5M de EG por 10 minutos, acondicionados em palhetas de 0,25mL e submetidos a curva de congelação programável (-1°C/min, seeding a -7°C, 0,3°C/min até -35°C) com posterior imersão em nitrogênio líquido. Embriões vitrificados (n=24) foram submetidos à solução de 10% de EG+10% de DMSO por 1 minuto e 30 segundos, passando para a solução de 20% de EG+20% de DMSO com 0,5M de sacarose por 30 segundos acondicionados em OPS e mergulhados em nitrogênio líquido. Os embriões descongelados/reaquecidos foram cultivados por 1 hora, reclassificados em estereomicroscópio e subdivididos para avaliação. Os embriões criopreservados mostraram variável grau de desorganização de citoesqueleto e ausência de marcação para atividade mitocondrial. Foi possível correlacionar os achados anteriores com a ultraestrutura e distribuição das organelas pelo citoplasma. Embriões congelados mostraram características ultraestruturais semelhantes a embriões frescos de mesma qualidade. Embriões vitrificados apresentaram maior frequência de grandes vesículas de digestão. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryopreservation of sheep embryos has been widespread, but their survival rate and pregnancy have shown great variation. After in vivo production sheep embryos were frozen or vitrified and processed for ultrastructural evaluation and determining the pattern of mitochondrial activity and integrity of the cytoskeleton. Embryos were collected from superovulated ewes, classified and selected for cryopreservation. Embryos subjected to slow freezing (n = 22) were exposed to 0.75 M ethylene glycol (EG) for 10 minutes, 1.5M EG for 10 minutes, packed in 0.25mL straws and subjected to programmable freezing (-1 ° C / min, seeding at -7 ° C, 0.3 ° C / min to -35 ° C) followed by immersion in liquid nitrogen. Vitrified embryos (n = 24) were placed in 10% EG +10% DMSO solution for 1 minute and 30 seconds, then in 20% EG +20% DMSO solution with 0,5M sucrose for 30 seconds packed in OPS and dipped in liquid nitrogen. The cryopreserved embryos were warmed, cultured for 1 hour, reclassified and subdivided for evaluation. Cryopreserved embryos showed variable degree of cytoskeleton disorganization and no marker for mitochondrial activity. It was possible to correlate these findings with the ultrastructure and distribution of the organelles. Frozen embryos showed ultrastructural features similar to fresh embryos of the same quality. Vitrified embryos showed a higher frequency of large digestion vesicles.

Células germinativas embrionárias são células pluripotentes derivadas das células germinativas primordiais que surgem no período do desenvolvimento embrionário. Sendo precursoras na maturação dos gametas sendo para a proliferação e formação de novas gerações de células germinativas. Estudos em modelos animais com células troncos embrionárias pluripotentes têm sido realizados com sucesso no tratamento de muitas doenças genéticas, principalmente em modelos caninos devido a homologia com humanos. Portanto, objetivamos estabelecer um estudo da biologia das células erminativas caninas para futuras pesquisas, visando sua viabilidade terapêutica. Foram utilizadas fêmeas de cães sem raça definida (SRD), foram submetidas à ovario-salpinge-histerectomia, oriundas de campanhas de castração realizadas por associações e/ou organizações não governamentais na cidade de Pirassununga. Os embriões coletados foram analisados através de um cronograma histológico e também mensurados através da medida Crown-Rump(CR), em seguida em condições ésteres micro-dissecados na região paramesonéfrica próximo a região dos somitos. Os fragmentos foram isolados e colocados em cultivo com meio apropriado para o desenvolvimento e propagação das células germinativas primordiais (PGCs). Obteve-se sucesso nos cultivos com embriões em idades gestacionais próximas a 24 á 32 dias de gestação, nos quais demonstraram uma morfologia arredondada, pequena. Na microscopia eletrônica de varredura e transmissão observamos tamanhos variados entre as células aderidas umas as outras, mostrando um núcleo bem evidente e em seu citoplasma observou-se diversos tipos de organelas celulares, principalmente mitocôndrias. A análise imunohistoquímica revelou a presença de marcadores Oct4, sugerindo a presença de células pluripotentes e germinativas. Imunofenotípicamente as células através da citometria de fluxo revelou baixa expressão para o marcadore Oct4 enquanto que para os marcadores CD 34, C-Kit houve expressão.RT-PCR mostrou expressão do marcador para pluripotencialidade Oct4 e Sox2 e pela técnica de Western Blotting identificou a expressão da proteína específica para Oct4. Portanto estes achados sugerem com sucesso o estabelecimento de cultivo e proliferação e desenvolvimento das células germinativas primordiais caninas. / Embryonic germ cells are pluripotent cells derived from primordial germ cells which arise during embryonic development. These cells are precursors in the maturation of gametes and for proliferation and formation of new generations of germ cells. Studies using animal models for pluripotent embryonic stem cells have been conducted successfully in the treatment of many genetic diseases, especially using canine models, due the homology between canine and humans. Therefore, we aimed to establish a study of canine biology of germ cells for future research, aiming viability therapy. For this study, we used female mongrel dogs (SRD), which underwent ovary- salpingo- hysterectomy, arising from castration campaigns run by associations and/or NGOs in Pirassununga city. The embryos collected were analyzed using histology methods following the timeline and measure by measuring Crown-Rump (CR) then in an environment without contaminants (sterile) the embryos were micro-dissected focusing in the paramesonephric region near the region of somite where the germ cells are. The fragments were isolated and placed in culture with a specific media for the development and spread of primordial germ cells (PGCs). Success was achieved in cultures with embryos at a gestational age close to 22 to 30th days of gestation, in which the cells showed a rounded morphology and small. In electron microscopy and transmission analyses, sizes were observed between the cells attached to each other, showing a conspicuous nucleus and in the cytoplasm was observed several types of cell organelles, especially mitochondria. Immunohistochemical analysis revealed the positive immunolabeling for Oct4, suggesting the presence of pluripotent cells and germ cells. The analyses using immunophenotyping by flow cytometry showed low expression for Oct4 while for CD34 and C-kit markers had positive expression. RT-PCR showed expression of the pluripotency markers Oct4 and Sox2. By the technique of Western Blotting identified protein expression specific for Oct4. Thus these findings suggest the successful establishment of culture, proliferation and development of primordial germ cells canine.

O presente trabalho analisou as etapas de formação de rudimentos seminais e grãos de pólen de Passiflora elegans e P. haematostigma. As espécies foram analisadas fazendo-se o uso de microscopia fotônica e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O gineceu apresenta um estigma com emergências estigmáticas, estilete sólido e ovário tricarpelar e unilocular. O ovário apresenta inúmeros rudimentos seminais que formam-se a partir de divisões periclinais da camada central. Os rudimentos são crassinucelados e os tegumentos têm origem dérmica. A célula arquesporial divide-se mitoticamente antes da meiose. A meiose resulta em uma tétrade linear, com ginósporo calazal viável. A ginogametogênese é do tipo Poligonum e, durante a diferenciação do ginófito, os estratos parietais do nucelo são parcialmente consumidos e a epiderme nucelar divide-se periclinalmente na porção apical. As antípodas são efêmeras e o ginófito maduro apresenta duas sinérgides com aparelho fibrilar desenvolvido, oosfera e núcleo secundário no pólo micropilar. O rudimento seminal é anátropo, arilado, bitegumentado e com micrópila em “zig-zag”. O androceu é constituído por cinco anteras tetrasporangiadas. Os estratos parietais desenvolvem-se do tipo Dicotiledôneo e as camadas médias são persistentes na antera madura de P. haematostigma. As células do tapete são poliplóides e colapsam liberando os conteúdos no interior do lóculo. A citocinese é do tipo simultânea e as tétrades são tetraédricas na maioria. O pólen é liberado na fase bicelular, apresenta número de colpos variável em P. elegans e seis colporos em P. haematostigma. A esporoderme não apresenta camada basal em P. elegans e é mais espessa do que em P. haematostigma. Plastídios e mitocôndrias são englobados durante a formação da célula generativa e persistem até a fase de pólen maduro. / The present work analyzed the different developmental stages of the ovule and of the pollen grain in Passiflora elegans and P. haematostigma. The species were analyzed using photonic microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The gynoecium has a stigma with stigmatic outgrowths, solid style and tricarpelar and unilocular ovary. The ovary has several seminal rudiments that are originated from the periclinal divisions of the central layer. The ovule is crassinucelate and the dermal layer originates the integuments. The arquesporial cell divides mitotically before meiosis. The meiosis results into a linear tetrad and only the chalazal gynospore is viable. The gynogametogenesis is of the Poligonum type, the nucellus parietal layers are partially degraded during the gynophyte differentiation, and nuclear epidermis divides periclinally in the apical portion. The antipodal cells are ephemeral and the mature gynophyte has two synergids with a developed filiform apparatus, egg cell and secondary nuclei in the micropilar pole. The ovule is anatropous, arillate, bitegmic and with zig-zag micropile. The androecium is constituted of five tetrasporangiate anthers. The parietal layers develop like the Dicotiledoneous type and middle layers are persistent in the mature anther of P. haematostigma. The tapetal cells are polyploids and collapse releasing their contents to the locus. The cytokinesis is of the simultaneous type and most of the tetrads are tetrahedral. The pollen is released during the bicellular stage, has a variable number of colpus in P. elegans and six colporus in P. haematostigma. The sporoderm does not have a basal layer in P. elegans and is thicker than in P. haematostigma. Plastids and mitochondria are enclosed during the generative cell formation and persist until the mature pollen stage.

Resumo não disponível.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-06-25T13:29:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1372442 bytes, checksum: 3068f373d5ea48eec7b669ecf2b0ed43 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-25T13:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1372442 bytes, checksum: 3068f373d5ea48eec7b669ecf2b0ed43 (MD5) Previous issue date: 2009-05-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi substituir as soluções de manipulação de embriões bovino em uso na rotina de TE por meios mais simples e estáveis e, que possam ser armazenados em temperatura ambiente. Na primeira etapa experimental, foram utilizados embriões de camundongas nos estádios de blastocisto inicial (Bin), mórula compacta grau I (McI) e II (McII), distribuídos aleatoriamente em três tratamentos, de acordo com o meio de manutenção: T1 - PBS modificado (Controle); T2 (MD1) e T3 (MD2). Os embriões foram mantidos durante quatro horas no meio de manutenção e, posteriormente cultivados em meio TCM 199. Após o término do tempo de cultivo, os embriões de cada tratamento foram separados aleatoriamente em amostras para avaliação da taxa de clivagem e morfometria, aspectos ultra-estruturais, detecção de apoptose celular e quantificação de expressão gênica de Hsp70.3. A taxa de desenvolvimento dos embriões após manutenção por quatro horas nos meios de manipulação foi inferior (P<0,05) para os embriões do Controle, quando comparada com os embriões do MD1 e MD2, diferença esta não observada (P>0,05) após o cultivo in vitro. Contudo, os embriões McII do MD2 tiveram um maior desenvolvimento (P<0,05), quando comparado com embriões do Controle e MD1, indicando o efeito benéfico do enriquecimento do meio MD2. Não foi verificada diferença (P>0,05) entre tratamentos no diâmetro celular, nuclear, nucleolar, na relação núcleo:nucléolo, no número de células e na percentagem de células apoptóticas. Quanto à expressão gênica de Hsp70.3, foi verificado diferença entre tratamentos (P<0,001), em embriões Bin, McI e McII após manutenção e, posterior cultivo in vitro. Na segunda etapa experimental, foram testados dois meios de manipulação utilizados para coleta e manipulação de embriões, MD1 e MD2 e como controle o PBS modificado, usualmente empregado nas rotinas de TE nas diferentes espécies animais. A transferência dos embriões bovino foi realizada a fresco, ou seja, os embriões coletados de uma determinada doadora foram inovulados no período máximo de quatro horas nas receptoras. Foram coletados e transferidos apenas os embriões de qualidade I e II. Foram utilizados 58 receptoras de embriões, distribuídas aleatoriamente em três tratamentos: T1 – PBS modificado (Controle); T2 (MD1) e T3 (MD2). As taxas de gestação observadas foram: Controle = 47,4% (9/19); MD1= 47,4% (9/19) e MD2 = 55,0% (11/20). Estes resultados demonstram que o uso de diferentes meios de manipulação não influenciou nas taxas de gestação (P>0,05). Deste modo, conclui-se que os meios de manipulação MD1 e MD2 podem ser utilizados nas rotinas de TE, em substituição a solução PBS modificado. / This work aimed substitutes the usually used manipulation solution of bovine embryos on ET routines for more simple and stable medias which could be stored at room temperature. In the first experimental stage, the mice embryos used in the experiment were all at early blastocyst (Bin), compact morula grade I (McI) and II (McII), randomly assigned in three treatments: T1 – modified PBS (Control); T2 (MD1) and T3 (MD2). In each treatment the embryos were kept in manipulation media for four hours. Finishing the manipulation period, the embryos were classified according the development stage and quality. Following, embryos were cultured in modified TCM 199. After the culture period, the embryos were being evaluated accordingly quality and development stage. Following were randomly selected embryo in each treatment and separated in samples to cleavage rate and morphometric, ultra- structural evaluation, cellular apoptosis and genetic expression quantification of Hsp70.3. The development rate for Bin, McI and McII after maintenance for four hours in manipulation media between was lower for Control (P>0.05) when compared with MD1 and MD2. However, after in vitro culture, was not observed difference (P>0.05) on embryo development rate among Control, MD1 and MD2. Moreover, McII from MD2 had a higher development (P<0.05), when compaired with Control and MD1, indication a beneficial effect when MD2 is supplemented. It was not verified difference (P>0.05) among the treatments in relation the nucleus, nucleolus, cell diameter and on total cell number cellular and apoptosis rate. In relation of embryo morphometry (diameter), there was no difference (P>0.05) between the treatments, using embryos Bin, McI and McII after maintenance followed by in vitro culture. Otherwise, genetic expression of Hsp70.3 had difference in Bin, McI and McII after maintenance followed by in vitro culture among the treatments (P<0.001). In the second experimental stage, it was tested three different manipulation media, which were used to recovery and manipulation of the embryos. The control treatment used was the modified PBS, usually used in ET routines in different animal species. The bovine embryos were transferred freshly, i.e., they were recovered from a identified donor and transferred within less than four hours to the recipient cow. Just embryos at quality I and II were recovered and transferred. Were used 58 recipient cows randomly assigned for one of the three treatments: T1 – modified PBS (Control); T2 (MD1) and T3 (MD2). As result we observed the following pregnancy rates: Control = 47.4% (9/19); MD1 = 47.4% (9/19) and MD2 = 55.0% (11/20), which did not differ among them (P>0.05). Therefore, the manipulation media MD1 and MD2 can be used on ET routines to substitute the PBS modified solution. / Termo de autorização não encontrado, numeração das páginas em algarismos romanos difere da numeração do índice. E-mail enviado aos interessados em 25-06-2018.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-21T16:34:48Z No. of bitstreams: 1 Alicely Araujo Correia.pdf: 855643 bytes, checksum: 24d919a750b0f3a0eea3a19c45fac7da (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-21T16:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alicely Araujo Correia.pdf: 855643 bytes, checksum: 24d919a750b0f3a0eea3a19c45fac7da (MD5) Previous issue date: 2012-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In search for efficient and low environmental impact alternatives for control of Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), major corn insect pest, the use of botanical insecticides and insect growth regulators combined or not with biological control have been standing out. Therefore, this study tested different concentrations of the insecticides lufenuron (Match®), methoxyfenozide (Intrepid®), azadirachtin (AzaMax®), spinosad (Tracer®) and deltamethrin (Decis®), in order to evaluate the effects on S. frugiperda biology and embryology and on the egg parasitoid, Trichogramma pretiosum Riley (Hymenoptera: Trichogrammatidae). All insecticides were promising for controlling S. frugiperda. Since, in general, caused mortality; reduction in larval period, pupal period, pupal weight, longevity, fecundity and fertility. In addition, S. frugiperda larvaes have presented deformities and morphological abnormalities, such as retention of larval morphological characters and constrictions of abdominal segments. Azadirachtin, lufenuron and deltamethrin, even at low concentrations, showed effect on embryo development of S. frugiperda and on egg parasitoid T. pretiosum. They have reduced the number of S. frugiperda parasited eggs, parasitism percentage and parasitoid emergence and longevity. But, the period of development from egg to adult and sex ratio of T. pretiosum were not affected. The light and scanning electron microscopy evaluation showed S. frugiperda eggs spherically shaped, slightly flattened at the poles, with chorion, yolk, vitelline membrane and embryo formation. Nevertheless, in both the microscopic analysis, after treatment with azadirachtin, lufenurom and deltamethrin, the eggs showed up deformed and unviable, preventing embryo formation. Azadirachtin, lufenuron, methoxyfenozide and spinosad at concentrations below the recommeded may be alternative to the use of pyrethroids in the control of S. frugiperda. However, azadirachtin and lufenuron are not selective to the parasitoid T. pretiosum. / Na busca de alternativas eficientes e de baixo impacto ambiental para controle de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), principal praga do milho, o uso de inseticidas botânicos e reguladores de crescimento associados ou não ao controle biológico vêm se destacando. Assim, a presente pesquisa testou diferentes concentrações dos inseticidas lufenurom (Match®), metoxifenozide (Intrepid®), azadiractina (AzaMax®), espinosade (Tracer®) e deltametrina (Decis®), visando avaliar os efeitos sobre a biologia e embriologia de S. frugiperda e no parasitóide de ovos, Trichogramma pretiosum Riley (Hymenoptera: Trichogrammatidae). Todos os inseticidas apresentaram-se promissores no controle de S. frugiperda. Uma vez que, em geral, ocasionaram mortalidade; redução no período larval, período pupal, peso das pupas, longevidade, fecundidade e fertilidade. Além disso, as lagartas de S. frugiperda apresentaram deformidades e anormalidades morfológicas, como retenção dos caracteres morfológicos larvais e constricções dos segmentos abdominais. Azadiractina, lufenurom e deltametrina, mesmo em baixas concentrações, apresentaram efeito sobre o desenvolvimento embrionário de S. frugiperda e no parasitóide de ovos T. pretiosum. Eles reduziram a quantidade de ovos de S. frugiperda parasitados, porcentagem de parasitismo, emergência e longevidade dos parasitóides. Porém, a duração do ciclo ovo-adulto e a razão sexual de T. pretiosum não foram afetadas. A avaliação em microscopia de luz e eletrônica de varredura mostrou ovos de S. frugiperda com formato esférico, ligeiramente achatado nos polos, com córion, vitelo, membrana vitelínica e formação do embrião. No entanto, em ambas as análises microscópicas, após tratamento com azadiractina, lufenurom e deltametrina, os ovos apresentaram-se deformados e inviáveis, impedindo a formação do embrião. Azadiractina, lufenurom, metoxifenozide e espinosade, mesmo em concentrações abaixo do recomendado, podem ser alternativas ao uso dos piretróides, no controle de S. frugiperda. Todavia, azadiractina e lufenurom não são seletivos ao parasitóide T. pretiosum.