Durante a gestação, observamos um influxo de linfócitos para a região mesometrial de camundongos denominados de células Natural Killer Uterinas (uNK). Estas células desempenham funções importantes no início da gestação, como a manutenção da tolerância materna ao feto, angiogênese e remodelação das artérias espiraladas. Sua capacidade citolítica é reduzida podendo ser ativada caso haja algum desequilíbrio entre citocinas pró e anti-inflamatórias durante a gestação. A ciclofosfamida é um medicamento usado no tratamento de doenças autoimunes e câncer. Trata-se de um teratógeno, sendo que seu uso pode levar a alterações macroscópicas e microscópicas, bem como, a redução da viabilidade gestacional em camundongos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da ciclofosfamida no útero e nas células uNK de camundongos no 10° ddg, por meio da análise morfológica, citoquímica e estereológica concomitantemente a análise da viabilidade gestacional e no comportamento destes animais nos parâmetros de depressão e ansiedade. Nossos resultados mostraram que a ciclofosfamida provoca rapidamente o aumento de células uNK no útero, bem como, diminuição na expressão de N-acetil-D-galactosamina em seus grânulos e superfície, atingindo primeiramente células uNK menos diferenciadas próximas ao mesométrio, e posteriormente células mais diferenciadas em regiões mais próximas ao embrião. Seu efeito drástico na gestação provocou ainda diminuição no número de células uNK após 48h de sua administração, concomitante ao aparecimento de muitos sítios em reabsorção, diminuindo a viabilidade gestacional, bem como, estabelecimento de comportamento semelhante ao doentio nesses animais, causando 100% de perda embrionária diagnosticada em nosso estudo da prenhez a termo / During pregnancy, we observed an influx of lymphocytes into the region of mice mesometrial decidua. These cells are natural killer cells (NK), presenting different behavior and phenotype of circulating NK cells. Uterine Natural Killer Cells (uNK) play important roles in early pregnancy, such as maintaining maternal tolerance to the fetus, angiogenesis and remodeling of the spiral arteries. Their cytolytic capacity is reduced during pregnancy and can be activated if there is an imbalance between pro and anti-inflammatory cytokines. Cyclophosphamide is a drug used in treating autoimmune diseases and cancer. It is known that it is a teratogen, and its use can lead to macroscopic and microscopic changes, as well as the reduction of viability pregnancy in mice. The objective of this study was to evaluate the effects of cyclophosphamide in the uterus and in cells uNK (morphological analysis, cytochemistry and stereological) on the 10th ddg, as well as its effects on behavior related to depression and anxiety. Our results showed that cyclophosphamide rapidly increased uNK cells number in the uterus as well as decreased expression of N-acetyl-D-galactosamine in their granules and surface, early reaching less differentiated uNK cells near the mesometrium, and latter more differentiated uNK cells closer to the embryo. His dramatic effect on pregnancy still caused a decreasing in the number of uNK cells 48 after the drug administration, concomitant with the appearance of many resorption implantation sites, decreasing of gestational viability, as well as, establishment of sickness-like behavior, causing 100% of embryo loss diagnosed in the pregnancy to term. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by Thaysa Marinho Farias (thaysa.farias@gmail.com) on 2018-12-05T13:46:12Z No. of bitstreams: 3 Dissertação_Thaysa Marinho Farias.pdf: 1463422 bytes, checksum: d589bcd62ce928045d73d03e80bfe6b2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósitoThaysa.pdf: 43146 bytes, checksum: 559d8856a2a56fd64fd56482ec66eaa4 (MD5) Ata de Defesa - Thaysa M. Farias.pdf: 66443 bytes, checksum: 49f6f19b616e68ebecc3f50b110293a6 (MD5) / Approved for entry into archive by PPGCAN Ciência Animal (ppgcan.ufam@gmail.com) on 2018-12-05T13:51:16Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Dissertação_Thaysa Marinho Farias.pdf: 1463422 bytes, checksum: d589bcd62ce928045d73d03e80bfe6b2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósitoThaysa.pdf: 43146 bytes, checksum: 559d8856a2a56fd64fd56482ec66eaa4 (MD5) Ata de Defesa - Thaysa M. Farias.pdf: 66443 bytes, checksum: 49f6f19b616e68ebecc3f50b110293a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-12-05T14:06:24Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Dissertação_Thaysa Marinho Farias.pdf: 1463422 bytes, checksum: d589bcd62ce928045d73d03e80bfe6b2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósitoThaysa.pdf: 43146 bytes, checksum: 559d8856a2a56fd64fd56482ec66eaa4 (MD5) Ata de Defesa - Thaysa M. Farias.pdf: 66443 bytes, checksum: 49f6f19b616e68ebecc3f50b110293a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-05T14:06:24Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertação_Thaysa Marinho Farias.pdf: 1463422 bytes, checksum: d589bcd62ce928045d73d03e80bfe6b2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósitoThaysa.pdf: 43146 bytes, checksum: 559d8856a2a56fd64fd56482ec66eaa4 (MD5) Ata de Defesa - Thaysa M. Farias.pdf: 66443 bytes, checksum: 49f6f19b616e68ebecc3f50b110293a6 (MD5) Previous issue date: 2018-11-12 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / This study aimed to evaluate the use of DL-methionine to in ovo feeding of chick embryos. The study was conducted at the facilities of Poultry Technology Laboratory of Poultry Sector of the Department of Animal and Plant Production, College of Agrarian Sciences, Federal University of Amazonas, Manaus, Amazonas, Brazil. A total of 224 fertile eggs from Rhode Island Red breeders (35 weeks of age) were used. The experimental design was completely randomized with the treatments constituted by two controls and five solutions containing DL-methionine levels with 32 replicates (eggs) each. Data collected were subjected to polynomial regression at 5% of significance. The incubation yields, chick / egg ratio, serum biochemical parameters and development of gastrointestinal tract (directly related organs and regions) of the hatch chicks were evaluated. Statistical analysis was performed using SAS software (2008), where the data collected were submitted to analysis of variance and the estimates of the treatments were analysed by polynomial regression at 0.01 and 0.05 of significance. The results of this study indicate that up to 1.0% of DL-methionine can be used for in egg feeding for chick embryos, providing higher birth weight, greater yolk sac weight, increased goblet cell numbers in crypts of small intestine and the villi of the large intestine, and better development of the mucous layer of the small and large intestine. / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos e o potencial biológico da DL-metionina para fins de inoculação em ovos embrionados. O estudo foi conduzido no Laboratório de Tecnologia Avícola do Setor de Avicultura do Departamento de Produção Animal e Vegetal da Faculdade de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Amazonas, Manaus, Amazonas, Brasil. Foi realizado experimento para avaliação da bioeficácia da DL-metionina para fins de inoculação in ovo. Foram utilizados 224 ovos férteis oriundos de matrizes Rhode Island Red com 35 semanas de idade. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, onde os tratamentos foram constituídos por dois controles e cinco soluções experimentais contendo níveis crescentes de DL-metionina, com 32 repetições (ovos) por tratamento. Foram avaliados os rendimentos de incubação, a relação pinto/ovo, os parâmetros bioquímicos séricos e o desenvolvimento do trato gastrointestinal (órgãos diretamente relacionados e regiões) dos pintos ao nascer. A análise estatística foi realizada através do programa computacional SAS (2008), onde os dados coletados foram submetidos à análise de variância e as estimativas dos tratamentos foram analisados por regressão polinomial à 0,01 e 0,05 de significância. Os resultados deste estudo indicaram que até 1,0% de DL-metionina pode ser utilizada para fins de alimentação in ovo em embriões avícolas, proporcionado maior peso do pintanho ao nascer, maior peso do saco vitelino, aumento no número de células caliciformes nas criptas do intestino delgado e nas vilosidades do intestino grosso, assim como estimular o desenvolvimento da camada mucosa do intestino delgado e grosso

Introdução: Apesar do grande avanço das técnicas de reprodução humana na área da infertilidade a avaliação do homem ainda carece de maiores conhecimentos. Estima-se que a prevalência de infertilidade seja de 10 a 15% de casais em idade reprodutiva (20-40 anos), com cerca de metade dos casos com algum grau de problema de ordem masculina. Até o momento a avaliação do homem quanto à fertilidade é, em grande parte, restrita a avaliação das características do sêmen. No entanto, a avaliação seminal não consegue determinar de maneira clara e eficaz a fertilidade masculina. Entretanto até agora nenhum autor havia correlacionado os parâmetros seminais com o escore embrionário (GES) que avalia todo o desenvolvimento embrionário. Nosso estudo avaliou a relação entre os parâmetros seminais (motilidade, motilidade progressiva e concentração) como fator prognóstico para o desenvolvimento embrionário em mulheres submetidas à fertilização in vitro (FIV convencional ou ICSI) com estimulação ovariana. Todos os casais foram avaliados no Centro De Reprodução Humana insemine. Material e métodos: Foi realizado um estudo prospectivo (coorte) no Período de janeiro de 2009 até agosto de 2010 com casais inférteis (n=290) que foram submetidos ao primeiro ciclo de Reprodução Assistida. Realizada estimulação ovariana, punção para retirada dos oócitos, FIV convencional ou ICSI conforme o caso, cultura dos embriões. Avaliado os parâmetros seminais (concentração, motilidade e motilidade A+B) pós preparo do sêmen. Avaliado o desenvolvimento embrionário com uso de escore embrionário (GES) proposto por Fisch 2001. Foram avaliados clivagem precoce, escore embrionário total e escore embrionário médio. Resultados: Foi demonstrado, após avaliar 290 casais, que sessenta e oito por cento realizaram FIV convencional e 32% ICSI. A média de oócitos recuperados após punção folicular foi de 6,2±4,6 com taxa de fertilização de 55% e clivagem de 97%. Analisando os parâmetros seminais após preparo e sua associação com clivagem precoce houve correlação com motilidade (P=0,006) e concentração (P=0,002). Entretanto não houve correlação com porcentagem de espermatozóides classificados como A+B (P=0,075). Em relação aos parâmetros seminais e clivagem precoce no grupo da FIV convencional existe correlação para motilidade (P=0,028) e concentração (P=0,001) e no grupo da ICSI não foi significativo para nenhum parâmetro. Com relação aos parâmetros seminais e escore embrionário médio, no grupo da FIV convencional existe correlação com a motilidade (P=0,0001) e motilidade A+B (P=0,0001), no grupo da ICSI apenas com a concentração (P=0,022). Conclusão: Existe correlação dos parâmetros seminais com a clivagem precoce no grupo da FIV convencional e nenhuma correlação destes parâmetros no grupo da ICSI. Em relação ao escore embrionário médio apresenta correlações tanto na FIV convencional quanto na ICSI.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:17:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297132.pdf: 1912112 bytes, checksum: c691c9e2fe55b7ead5cc910e948355ab (MD5) / Nas últimas décadas os pesquisadores têm voltado sua atenção para os efeitos da crescente incidência da radiação ultravioleta (UV) nos ecossistemas. A radiação UV pode causar efeitos diferenciados nos organismos, sendo conhecido o papel da radiação ultravioleta-A (UV-A) no processo de fotorreativação celular, recuperando danos causados pela radiação ultravioleta-B (UV-B). O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o efeito das radiações UV-A e UVB sobre os embriões do camarão de água doce Macrobrachium olfersi em três idades ao longo do desenvolvimento: idade 1 (E1-E6), idade 2 (E7-E9) e idade 3 (E10-E14). As fêmeas ovígeras foram submetidas aos seguintes procedimentos de irradiação: (1) exposição à radiação UV-A por 60 min.; (2) exposição à radiação UV-B por 30 min.; (3) exposição à radiação UV-B por 30 min., seguida de exposição à radiação UV-A por 60 min. Fêmeas ovígeras não irradiadas foram utilizadas como controle. Após os procedimentos de irradiação, as fêmeas foram mantidas por 4 dias no escuro, para então serem realizadas as analises macro e microscópicas. Nossos resultados mostram um aumento no volume dos ovos e atraso no ritmo do desenvolvimento dos embriões da idade 1 expostos à radiação UV-A, UV-B e UV-B+UV-A. Alterações morfológicas externas foram observadas nos embriões das idades 2 e 3, submetidos a todos os procedimentos de radiação. As análises por imuno-histoquímica mostraram que a expressão das proteínas envolvidas nas vias apoptóticas, como caspase 8, caspase 3, Bak e Bcl2, assim como as proteínas induzidas pelo estresse celular p53 e Hsp70, foram alteradas pela radiação UV-A e UV-B. A expressão da proteína p53 foi aumentada somente nos embriões expostos à radiação UV-A na idade 1. A expressão da caspase 8 foi maior em todas as idades nos embriões irradiados com UV-A e UV-B, contudo 10 nos embriões irradiados com UV-B+UV-A foi observado aumento da expressão de caspase 8 somente na idade 3. Embriões expostos à radiação UV-B+UV-A apresentaram uma diminuição da expressão da Bcl2, p53 e Hsp70 nas idades 2 e 3. As análises por imunohistoquímica mostraram ainda que houve pouca variação na proliferação celular, identificada pela expressão da proteína fosfohistona H3. Em síntese, nossos resultados mostram que (1) os embriões de M. olfersi irradiados nas idades 1, 2 e 3 apresentaram alterações na morfologia externa e na expressão das proteínas analisadas; (2) os embriões expostos às radiações UV-A ou UV-B separamente apresentam importantes alterações morfológicas e comprometimentos na expressão das proteínas p53 e Hsp70; (3) os embriões expostos à radiação UV-B seguida pela radiação UV-A apresentam efeitos mais atenuados, quando comparados aos embriões iradiados com UV-A ou UV-B separadamente. / In recent decades, researchers have been focused their attention in the effects of increasing incidence of ultraviolet (UV) radiation on ecosystems. The UV radiation can cause diverse effects on organisms, being recognized the roles of the ultraviolet-A (UV-A) radiation on the cellular photorreactivation, recovering the damages caused by ultraviolet-B (UV-B). The aim of this study was to characterize the effects of UV-A and UV-B radiation on embryos of the freshwater prawn Macrobrachium olfersi in three ages throughout development: age 1 (from E1 to E6), age 2 (E7-E9) and age 3 (E10-E14). Ovigerous females were submitted to the irradiation procedures: (1) exposure to UV-A radiation for 60 min.; (2) exposure to UV-B radiation for 30 min.; (3) exposure to UV-B radiation for 30 min. followed by the exposure to UV-A radiation for 60 min. Non-irradiated ovigerous females were used as control. After irradiation procedures, ovigerous females were kept for 4 days in the dark, and then were realized the macro- and microscopic analyses. Our results showed an increase in the egg volume and delay in the developmental rythm of the embryos at age 1 which were exposed to UV-A, UV-B and UV-B followed by UV-A. External morphological alterations were observed in embryos of ages 2 and 3, which were submitted to all radiation procedures. Immunohistochemistry analyses showed that the expression of proteins involved on apoptotic pathways, as caspase 8, caspase 3, Bak, as well as, the proteins induced by cellular stress, p53 and Hsp70, were altered by UV-A and UV-B radiation. In embryos irradiated with UV-A on age 3, was observed an increase on expression of every studied protein. The expression of p53 protein was increased only on embryos exposed to UV-A radiation on age 1. The expression of caspase 8 was higher in all ages of the embryos exposed to UV-A and UV-B radiation, however, in embryos exposed to UV-B followed UV-A high expression of caspase 8 occurred only at age 3. Embryos exposed to UV-B followed UV-A radiation showed a decrease of expression of Bcl2, p53 and Hsp70 at ages 2 and 3. Immunohistochemistry analysis also showed slight variation on cell proliferation, identified by the expression of phosphohistone H3 protein. In general, was verified that embryos exposed to UV-B followed UV-A showed few variation on expression of analyzed proteins when compared to embryos exposed to UV-A or UV-B separately. In summary, our results showed that (1) the embryos of M. olfersi exposed at ages 1, 2 and 3 exhibited alterations on external morphology and on expression of the analyzed proteins; (2) the embryos exposed to UV-A and UV-B separately, showed important morphological alterations and impairments on the expression of p53 and Hsp70; (3) embryos exposed to UV-B followed UV-A radiation showed more attenuated effects when compares to embryos irradiated with UV-A or UV-B separately.

Introdução: Apesar do grande avanço das técnicas de reprodução humana na área da infertilidade a avaliação do homem ainda carece de maiores conhecimentos. Estima-se que a prevalência de infertilidade seja de 10 a 15% de casais em idade reprodutiva (20-40 anos), com cerca de metade dos casos com algum grau de problema de ordem masculina. Até o momento a avaliação do homem quanto à fertilidade é, em grande parte, restrita a avaliação das características do sêmen. No entanto, a avaliação seminal não consegue determinar de maneira clara e eficaz a fertilidade masculina. Entretanto até agora nenhum autor havia correlacionado os parâmetros seminais com o escore embrionário (GES) que avalia todo o desenvolvimento embrionário. Nosso estudo avaliou a relação entre os parâmetros seminais (motilidade, motilidade progressiva e concentração) como fator prognóstico para o desenvolvimento embrionário em mulheres submetidas à fertilização in vitro (FIV convencional ou ICSI) com estimulação ovariana. Todos os casais foram avaliados no Centro De Reprodução Humana insemine. Material e métodos: Foi realizado um estudo prospectivo (coorte) no Período de janeiro de 2009 até agosto de 2010 com casais inférteis (n=290) que foram submetidos ao primeiro ciclo de Reprodução Assistida. Realizada estimulação ovariana, punção para retirada dos oócitos, FIV convencional ou ICSI conforme o caso, cultura dos embriões. Avaliado os parâmetros seminais (concentração, motilidade e motilidade A+B) pós preparo do sêmen. Avaliado o desenvolvimento embrionário com uso de escore embrionário (GES) proposto por Fisch 2001. Foram avaliados clivagem precoce, escore embrionário total e escore embrionário médio. Resultados: Foi demonstrado, após avaliar 290 casais, que sessenta e oito por cento realizaram FIV convencional e 32% ICSI. A média de oócitos recuperados após punção folicular foi de 6,2±4,6 com taxa de fertilização de 55% e clivagem de 97%. Analisando os parâmetros seminais após preparo e sua associação com clivagem precoce houve correlação com motilidade (P=0,006) e concentração (P=0,002). Entretanto não houve correlação com porcentagem de espermatozóides classificados como A+B (P=0,075). Em relação aos parâmetros seminais e clivagem precoce no grupo da FIV convencional existe correlação para motilidade (P=0,028) e concentração (P=0,001) e no grupo da ICSI não foi significativo para nenhum parâmetro. Com relação aos parâmetros seminais e escore embrionário médio, no grupo da FIV convencional existe correlação com a motilidade (P=0,0001) e motilidade A+B (P=0,0001), no grupo da ICSI apenas com a concentração (P=0,022). Conclusão: Existe correlação dos parâmetros seminais com a clivagem precoce no grupo da FIV convencional e nenhuma correlação destes parâmetros no grupo da ICSI. Em relação ao escore embrionário médio apresenta correlações tanto na FIV convencional quanto na ICSI.

Made available in DSpace on 2016-03-08T14:03:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luana_ferreira_ioc_dout_2014.pdf: 11732289 bytes, checksum: 1ef56f743ff0c803375a1307f2379adc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Diversos parasitas, agentes etiológicos de uma série de agravos, são transmitidos por mosquitos vetores em todo o mundo. A despeito de sua importância médica, ainda existem muitas lacunas no conhecimento da embriogênese desses insetos. Ovos de espécies do gênero Aedes resistem à dessecação, e são capazes de sobreviver vários meses no seco em estado de quiescência ao final da embriogênese. Entretanto, ovos de espécies de outros gêneros, como Anopheles e Culex, não possuem capacidade de resistir a longos períodos de exposição ao seco, apesar de adquirirem algum grau de impermeabilidade. Nos mosquitos Aedes aegypti e Anopheles gambiae tem sido mostrado que, durante a embriogênese, a síntese da cutícula serosa (CS), que contém quitina, coincide com a aquisição da resistência dos ovos à dessecação (ROD). O objetivo deste trabalho foi investigar, comparativamente, a embriogênese de diferentes mosquitos vetores, para elucidar semelhanças e diferenças na ROD. A maior parte do trabalho foi realizada com as espécies Ae. aegypti, An. aquasalis e Cx. quinquefasciatus. Verificamos que para An. aquasalis e Cx. quinquefasciatus a formação da CS também é simultânea à aquisição de ROD e contém quitina. O tempo requerido para a finalização da embriogênese de Ae. aegypti, An. aquasalis e Cx. quinquefasciatus é, respectivamente, 77,4, 51,3, e 34,2 horas após a postura A formação da CS ocorre em estágio embrionário equivalente para Ae. aegypti e An. aquasalis e um pouco mais tardio para Cx. quinquefasciatus. Ao final da embriogênese diferentes níveis de ROD foram detectados: alto para Ae. aegypti, médio para An. aquasalis e baixo para Cx. quinquefasciatus. Com o objetivo de entender essas diferenças, avaliamos, comparativamente, alguns aspectos físicos dos ovos: comprimento, largura, área, volume, peso e a superfície da casca. Apesar de diferenças interessantes e significativas terem sido observadas, não foi possível estabelecer correlação direta entre ROD e tais aspectos, quando avaliados individualmente. Quantificação do polissacarídeo quitina revelou tendência de maior conteúdo em cascas de ovos de espécies mais resistentes ao seco. Além disso, diferenças significativas foram encontradas no grau de melanização dos ovos das diferentes espécies, sugerindo que ovos mais melanizados são mais resistentes ao seco. Essa hipótese foi testada utilizando o mutante GORO da espécie An. quadrimaculatus. Nesta linhagem a melanização não ocorre corretamente, e as cascas de seus ovos têm aparência dourada. Em contraste, seu equivalente selvagem (WT) possui ovos de casca escura Ovos GORO possuem ROD deficiente: quando expostos ao seco por 10 horas após a formação da CS, apenas 12,3% são viáveis, em contraste com 66,5% de ovos WT. Nossos resultados confirmam de forma direta que, além da quitina da CS, a melanização da casca dos ovos é importante para a impermeabilização dos ovos de insetos / Several parasites, etiologic agents of a number of diseases, are transmitted by mosquito vectors worldwide. Despite their medical importance, many gaps in our knowledge about the embryogenesis of these insects still remain. Eggs from the Aedes genus resist to desiccation, and are able to survive several months in dry conditions in a quiescent status at the end of embryogenesis. In contrast, eggs belonging to other genera, like Anopheles and Culex, do not withstand long periods of exposure in dry conditions, although they acquire some degree of impermeability. It has already been demonstrated that, in the course of Aedes aegypti and Anopheles gambiae embryogenesis, the synthesis of the serosal cuticle (SC), which contains chitin, coincides with the acquisition of egg resistance to desiccation (ERD). The aim of the present work was to investigate, under a comparative basis, the embryogenesis of different mosquito vectors, in order to elucidate ERD similarities and differences. Most of the work was performed with Ae. aegypti, Anopheles aquasalis and Culex quinquefasciatus. We found that, for An. aquasalis and Cx. quinquefasciatus, ERD acquisition is also simultaneous to the development of SC, a layer containing chitin. Time required for embryogenesis completion is 77.4, 51.3, and 34.2 hours after egglaying for respectively Ae. aegypti, An. aquasalis and Cx. quinquefasciatus. The formation of SC occurs in an equivalent embryonic stage for Ae. aegypti and An. aquasalis, but a little later for Cx. quinquefasciatus. At the end of embryogenesis different ERD levels were detected: high for Ae. aegypti, medium for An. aquasalis and low for Cx. quinquefasciatus. In order to understand these differences, we comparatively evaluated some physical aspects of the eggs: length, width, area, volume, weight and eggshell surface appearance. Although interesting and significant differences have been observed, it was not possible to establish any direct correlation between ERD and these physical aspects, when individually considered. Quantification of chitin revealed tendency of higher amount of this polysaccharide in the eggshells of species more resistant to desiccation. Furthermore, significant differences were found in the degree of melanization of eggs from the different species, suggesting that more melanized eggs are also more resistant to dry conditions. This hypothesis was tested using the An. quadrimaculatus GORO mutant. In this strain, melanization does not occur properly, and the eggs have a golden appearance. Eggshells from the wild type (WT) strain, in contrast, are dark. GORO eggs exhibit a defective ERD: when exposed to dry conditions during 10 hours after the SC formation only 12.3% are viable, in contrast with 66.5% of WT eggs. Our results confirm, directly, that beyond the chitin present in the SC, the eggshell melanization is an important factor towards insect eggs impermeability

A produção in vitro de embriões expõe o concepto a condições diferentes do ambiente intra-tubárico-uterino. A alta tensão de oxigênio durante o cultivo in vitro induz estresse oxidativo mediante aumento dos níveis das espécies reativas de oxigênio. A condição de estresse oxidativo altera a expressão de RNAm e miRNAs, podendo comprometer vias de interação materno-embrionária. Recentemente, os exossomos têm sido descritos como um mecanismo complementar de transporte de RNAm e miRNAs, que beneficiam a comunicação bidirecional materno-embrionária. Portanto, além do estudo dos próprios embriões, a análise dos exossomos isolados do meio de cultivo da PIVE também é relevante. Comumente são utilizados dois modelos de cultivo na PIVE, a alta tensão (20%) e a baixa tensão (5%) de oxigênio. A hipótese deste estudo é que a alta tensão de oxigênio no cultivo embrionário gera uma condição de estresse oxidativo que causa alterações de expressão de RNAm e miRNAs presentes nos embriões e nos exossomos. Além disso, o estresse oxidativo exerceria efeito sobre o padrão de secreção destes exossomos. Para testar essa hipótese este estudo produziu embriões bovinos in vitro cultivados em diferentes tensões de oxigênio. Os embriões foram coletados no dia 7 e os meios de cultivo, para isolamento os exossomos, foram coletados nos dias 3 e 7 do cultivo. Os blastocistos cultivados em alta tensão de oxigênio apresentaram um aumentou dos níveis de EROs através de análise de fluorescência. Este resultado validou o modelo de estresse oxidativo para embriões. Os resultados iniciais indicaram que apesar do miR-199a-5p, descrito como possível regulador dos genes alvos ERBB2 e ERBB3, ter apresentado maior expressão nos embriões cultivados em alta tensão, os transcritos ERBB2 e ERBB3 e a proteína ERBB2 não apresentaram diferença significativa entre os grupos. Uma vez que não se estabeleceu uma relação de regulação entre o miR-199a-5p e o gene alvo ERBB2 para os embriões bovinos, este estudo se voltou para a análise de outros 96 RNAm e 378 miRNAs, destes 40 RNAm e 8 miRNAs apresentaram alterações significativas entre os embriões cultivados em alta e baixa tensão de oxigênio. Entre as principais funções alteradas estão associadas à resposta ao estresse oxidativo, proliferação e diferenciação celular, remodelação epigenética, apoptose, metabolismo e reconhecimento materno-fetal. Por fim, com o objetivo de compreender um panorama maior dos efeitos do estresse oxidativo, este estudo se propôs a analisar o padrão de expressão e os miRNAs do conteúdo dos exossomos do meio de cultivo. O estresse oxidativo alterou tanto a concentração dos exossomos quanto a expressão dos mRNAs, em ambos os dias do desenvolvimento embrionário (D3 e D7). Dentre os miRNAs, destaca-se o miR-210 que foi considerado por este trabalho como biomarcador não invasivo da condição de normoxia no cultivo in vitro de embriões bovinos. Em conclusão, esse estudo não elucidou como o estresse oxidativo altera a interação materno-embrionária em embriões produzidos in vitro em diferentes condições de tensão de oxigênio, mas gerou conhecimentos adicionais sobre do desenvolvimento embrionário bovino e os efeitos da alta tensão de oxigênio. / The in vitro embryo production exposes the concept to conditions different from the intra-tubal-uterine environment. The high oxygen tension during in vitro production induces the oxidative stress by increasing the concentration of reactive oxygen species. The oxidative stress condition changes the mRNA and miRNAs expression, it can compromise pathways of maternal-embryonic interaction. Recently, the exosomes have been described as a complementary mechanism of mRNA and miRNAs transport, which improve the bidirectional maternal-embryonic communication. Therefore, the studies of the embryos and exosomes isolated from the IVP culture medium are relevant. Two cultivation models are usually used in IVP, the high tension (20%) and the low tension (5%) of oxygen. The hypothesis of this study is that the high oxygen tension in the embryonic culture generates an oxidative stress condition that causes changes in the mRNA and miRNAs expression. In addition, this oxidative stress is able to modulate the secretion pattern of the exosomes isolated from IVP embryos. To test this hypothesis, this study produced in vitro bovine embryos developed at different oxygen tensions. The embryos were sampled on day 7 and the culture media, for exosomes isolation, were collected on days 3 and 7 of the embryo development. Blastocysts cultured in high oxygen tension showed increased levels of ROS through fluorescence analysis. This result validated the oxidative stress model for embryos. In order to understand the effect of oxidative stress on the pathways of maternal-embryonic interaction, this study aimed to analyze the ERBB signaling pathway. Despite the fact that miR-199a-5p, described as a possible regulator of the ERBB2 and ERBB3 target genes, showed higher expression in embryos cultured under high tension, the ERBB2 and ERBB3 transcripts and the ERBB2 protein showed no significant difference between high and low oxygen tension groups. Since a regulatory relationship between miR-199a-5p and the ERBB2 target gene was not established for bovine embryos, this study turned to the analysis of other 96 mRNAs and 378 miRNAs, out of 40 mRNAs and 8 miRNAs showed significant changes among the groups. The main altered functions are the response to oxidative stress, cell proliferation and differentiation, epigenetic remodeling, apoptosis, metabolism and maternal-fetal recognition. Finally, in order to understand the bigger picture of oxidative stress effect we analyze the secretion pattern and the miRNA content of the exosomes from culture medium of IVP embryos. Oxidative stress change both, the exosome concentration and the miRNA expression (at D3 and D7). Among the miRNAs, we highlight the miR-210 that was considered by this work as a non-invasive biomarker of the normoxia condition in the in vitro culture of bovine embryos. In conclusion, this study did not elucidate how oxidative stress changes the maternal-embryonic interaction in IVP embryos, but it generated additional knowledge about bovine embryonic development and the high oxygen tension effects.

Introdução: Apesar do grande avanço das técnicas de reprodução humana na área da infertilidade a avaliação do homem ainda carece de maiores conhecimentos. Estima-se que a prevalência de infertilidade seja de 10 a 15% de casais em idade reprodutiva (20-40 anos), com cerca de metade dos casos com algum grau de problema de ordem masculina. Até o momento a avaliação do homem quanto à fertilidade é, em grande parte, restrita a avaliação das características do sêmen. No entanto, a avaliação seminal não consegue determinar de maneira clara e eficaz a fertilidade masculina. Entretanto até agora nenhum autor havia correlacionado os parâmetros seminais com o escore embrionário (GES) que avalia todo o desenvolvimento embrionário. Nosso estudo avaliou a relação entre os parâmetros seminais (motilidade, motilidade progressiva e concentração) como fator prognóstico para o desenvolvimento embrionário em mulheres submetidas à fertilização in vitro (FIV convencional ou ICSI) com estimulação ovariana. Todos os casais foram avaliados no Centro De Reprodução Humana insemine. Material e métodos: Foi realizado um estudo prospectivo (coorte) no Período de janeiro de 2009 até agosto de 2010 com casais inférteis (n=290) que foram submetidos ao primeiro ciclo de Reprodução Assistida. Realizada estimulação ovariana, punção para retirada dos oócitos, FIV convencional ou ICSI conforme o caso, cultura dos embriões. Avaliado os parâmetros seminais (concentração, motilidade e motilidade A+B) pós preparo do sêmen. Avaliado o desenvolvimento embrionário com uso de escore embrionário (GES) proposto por Fisch 2001. Foram avaliados clivagem precoce, escore embrionário total e escore embrionário médio. Resultados: Foi demonstrado, após avaliar 290 casais, que sessenta e oito por cento realizaram FIV convencional e 32% ICSI. A média de oócitos recuperados após punção folicular foi de 6,2±4,6 com taxa de fertilização de 55% e clivagem de 97%. Analisando os parâmetros seminais após preparo e sua associação com clivagem precoce houve correlação com motilidade (P=0,006) e concentração (P=0,002). Entretanto não houve correlação com porcentagem de espermatozóides classificados como A+B (P=0,075). Em relação aos parâmetros seminais e clivagem precoce no grupo da FIV convencional existe correlação para motilidade (P=0,028) e concentração (P=0,001) e no grupo da ICSI não foi significativo para nenhum parâmetro. Com relação aos parâmetros seminais e escore embrionário médio, no grupo da FIV convencional existe correlação com a motilidade (P=0,0001) e motilidade A+B (P=0,0001), no grupo da ICSI apenas com a concentração (P=0,022). Conclusão: Existe correlação dos parâmetros seminais com a clivagem precoce no grupo da FIV convencional e nenhuma correlação destes parâmetros no grupo da ICSI. Em relação ao escore embrionário médio apresenta correlações tanto na FIV convencional quanto na ICSI.

Orientador: Pablo Agustin Vargas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_DanielBerrettaMoreira_M.pdf: 2353528 bytes, checksum: c4fc62eb44bbd4f300dbdb9d7dc74cd6 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: INTRODUÇÃO: As proteínas da família PLUNC ("palate, lung and nasalepithelium clone"), as quais são expressas no trato aéreo superior e na cavidade bucal humana, podem ser responsáveis por mediar a resposta imune inata e interagir com a superfície bacteriana. Entretanto, sabe-se muito pouco sobre a expressão destas proteínas nas glândulas salivares durante o período embrionário humano. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi analisar a expressão imunoistoquímica de SPLUNC1, SPLUNC2 e LPLUNC1 em glândulas salivares maiores e menores, língua e palato de fetos humanos. MATERIAIS e MÉTODOS: A amostra do presente estudo foi composta por 26 fetos humanos com idade variando entre 12 e 25 semanas de vida intra-uterina. As glândulas parótidas (n=7), submandibulares (n=13) e sublinguais (n=5) e as glândulas salivares menores [lábio (n=18), palato (n=9) e língua (n=6)] foram classificadas de acordo com os estágios de morfodiferenciação. A marcação imunoistoquímica citoplasmática das glândulas salivares, epitélio respiratório palatino e epitélio lingual, foi avaliada como positiva ou negativa. RESULTADOS: Dentre os 26 fetos avaliados, 13 (50%) apresentaram positividade para SPLUNC1 nos plugues de mucina dos ductos estriados e no citoplasma dos ácinos mucosos. Os dois casos positivos para LPLUNC1 apresentaram expressão citoplasmática na porção apical das células do ducto estriado primitivo. Nenhum dos casos apresentou marcação positiva para os anticorpos SPLUNC2A e SPLUNC2B. Os estágios de morfodiferenciação avançados (estágio canalicular e broto terminal) prevaleceram entre os fetos que apresentaram positividade para SPLUNC1. Tecidos que estavam adjacentes as glândulas salivares avaliadas, como células do epitélio respiratório associado à região do palato (n=6) e curiosamente, do epitélio escamoso de superfície da língua associado às glândulas salivares menores da região lingual (n=3), também apresentaram marcação positiva para SPLUNC1. Os resultados do presente estudo sugerem que a expressão de SPLUNC2 em glândulas salivares inicia na vida pós-natal. A expressão da proteína LPLUNC1 nas células ductais durante a vida intra-uterina precisa ser melhor estudada, visto que apenas dois casos foram positivos para esta proteína. CONCLUSÕES: A proteína SPLUNC1 inicia sua expressão durante a vida intra-uterina, nas glândulas salivares em estágio de morfodiferenciação avançado (estágio canalicular e broto terminal). Estudos com métodos mais sensíveis devem ser realizados para avaliar e quantificar a expressão de SPLUNC1 e LPLUNC1 em glândulas salivares maiores e menores de fetos humanos, visando entender melhor a função destas proteínas na vida intra-uterina. / Abstract: OBJECTIVES: The expression of PLUNC proteins in human fetal tissue has not been previously studied. The aim of this study, therefore, was to determine expression in major and minor salivary glands, tongue and palate throughout fetal development and thus gain further insight into the function of these proteins. MATERIALS AND METHODS: 26 human fetuses (12 to 25 intra-uterine weeks) were collected retrospectively. Parotid (n=7), submandibular (n=13), sublingual (n=5) and minor salivary glands [lips (n=18)], palate (n=9) and tongue (n=6)] were classified according to their morphodifferentiation stage. Immunohistochemical analysis of three PLUNC proteins (SPLUNC1, SPLUNC2 and LPLUNC1) was performed and immunoreactivity was assessed as positive or negative. RESULTS: Mucin plugs in striated ducts and mucous cells of submandibular (n=4, 30.77%), sublingual (n=4, 80%) and minor salivary glands (n=9, 27.27%) were positive for SPLUNC1. The apical portion of primitive striated duct cells of submandibular and sublingual salivary glands was positive for LPLUNC1 (n=2). SPLUNC1 was detected in late morphodiferentiation stages (canalicular stage and terminal bud stage) of salivary glands. Tissues adjacent to the minor salivary glands, such as respiratory epithelial cells located in the palate (n=6) and squamous epithelial cells of the tongue surface (n=3), were also positive for SPLUNC1. All cases (n=26) were negative for SPLUNC2. CONCLUSIONS: Our results suggest that SPLUNC2, the major PLUNC protein in adult salivary glands, is either expressed very late in fetal development or only in adult tissues. Only 2 cases of LPLUNC1 protein in fetal duct cells were positive; further studies are needed to confirm expression. Salivary glands expressed SPLUNC 1 only in late morphodifferentiation stages (canalicular and terminal bud stages). Further studies using other sensitive methods, such as in situ hybridization, should be performed to assess and quantify the expression of SPLUNC 1 and LPLUNC1 in major and minor salivary glands, tongue and palate in order to better understand their function in intra-uterine life. / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-12-02T20:42:07Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Izomar Barbosa Melo.pdf: 2004947 bytes, checksum: 6693dd37b010d6657da5fc6970265ffd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-12-03T18:17:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Izomar Barbosa Melo.pdf: 2004947 bytes, checksum: 6693dd37b010d6657da5fc6970265ffd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-12-03T18:26:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Izomar Barbosa Melo.pdf: 2004947 bytes, checksum: 6693dd37b010d6657da5fc6970265ffd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T18:26:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Izomar Barbosa Melo.pdf: 2004947 bytes, checksum: 6693dd37b010d6657da5fc6970265ffd (MD5) Previous issue date: 2015-07-15 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Gastropods of the genus Pomacea (Perry, 1810), as well as ecological importance are used for human consumption, are considered the largest freshwater gastropods group. This study investigated the daily activity and substrate selection of gastropod Pomacea amazonica (reeve, 1856), and reproduction and substrate selection for oviposition. The gastropods were collected from May to August of 2014 in the City of Itacoatiara, Amazonas, Brazil. Investigation of daily activity and substrate selection were performed under light and temperature conditions. The animals were observed for 48 hours to record their daily activities and substrate selection was analyzed by four different types of substrates sand, pebbles, water column and smooth surfaces. In reproduction experiment and substrate selection for oviposition graduates couples were kept in cages with different substrates, three types of sandpaper with different roughness, beyond the smooth wall of the bottle itself. P. amazonica activity was significantly different (P<0,05), Compared the time of day and night The highest activity was recorded overnight, about 70% of individuals explored the room during the day and 72% remained immobile. The substrate selection differed significantly compared between periods of day and night (X2 = 22,46; DF = 3; P <0,05). With greater use of the flat substrate during the day and during the night most of the animals went on to use the substrate pebble There was no significant difference (t=-1.1289; DF= 172; P=0.2605) as compared size between males and females of the collected population. As for the size of males and females of each couple, there was significant difference (Z=2.4326; P=0.0150), with fewer males than females. Altogether 29 females laid egg masses and of these, 6 left two bodies of consecutive eggs. The multiple spawns only the females that put two egg masses, no significant difference in the number of eggs (Z=0.8090; P=0.4185). Embryonic development averaged 10.38 ±1.73 mean hatch rate of 89.6% for the first spawn and 65% for the second spawning. Among masses of consecutive eggs of the same female diameter of the eggs did not differ (t=-0.1801; GL=5; P=0,8641). It was observed that the higher the female higher fertility, despite the low coefficient of determination (R2=0.22), regression was significant (F=7,6382; Gl=1; P=0,0099). The substrate selection for oviposition significantly different (X2=172,55; GL=3; P<0,05) with preference animals lay eggs in smooth surface. It can be concluded that P. amazonica nocturnal activities and substrate selection varies with the time of day. Although the size of the sexes is not different in P. amazonica mating females prefer the smaller males. The fecundity of this species is directly related to female size and egg laying mass occurs mostly at night in smooth substrate surface. Embryonic development was relatively short compared to other species of the same genus, and the diameter of the eggs did not differ between consecutive spawns. / Os gastrópodes do gênero Pomacea (Perry, 1810), além da importância ecológica são usados na alimentação humana, são considerados o maior grupo de gastrópodes de água doce. Este estudo investigou a atividade diária e seleção de substrato e a reprodução e seleção de substrato para oviposição do gastrópode Pomacea amazonica (Reeve, 1856). Os gastrópodes foram coletados no período de maio a agosto de 2014 no município de Itacoatiara, Amazonas, Brasil. A investigação da atividade diária, seleção de substrato foram realizadas sob condições de luz e temperatura ambiente. Os animais foram observados por 48 horas para registro de suas atividades diárias, e a seleção de substrato foi analisada por quatro diferentes tipos de substratos: areia, seixo, coluna d’água e superfície lisa. No experimento de reprodução e seleção de substrato para oviposição os casais formados foram mantidos em gaiolas, com diferentes substratos, três tipos de lixas de diferentes rugosidades, além da parede lisa do próprio frasco. A atividade de P. amazonica foi significativamente diferente (P<0,05), quando comparado o período do dia e da noite. A maior atividade foi registrada durante a noite, cerca de 70% dos indivíduos exploraram o ambiente e durante o dia 72% permaneceram imóveis. A seleção de substrato diferiu significativamente entre os períodos do dia e noite (X2 = 22,46; Gl = 3; P <0,05) com maior uso do substrato liso durante o dia e durante a noite a maioria dos animais passaram a usar o substrato seixo. Não houve diferença significativa (t=-1.1289; DF= 172; P=0.2605) quando comparado o tamanho entre machos e fêmeas da população coletada. Já para o tamanho de machos e fêmeas de cada casal, houve diferença significativa (Z=2.4326; P=0.0150), com machos menores que as fêmeas. Ao todo 29 fêmeas colocaram massas de ovos e destas, 6 colocaram duas massas de ovos consecutivas. As desovas múltiplas apenas das fêmeas que colocaram duas massas de ovos, não apresentaram diferença significativa quanto ao número de ovos (Z=0.8090; P=0.4185). O desenvolvimento embrionário teve média de 10,38±1,73 com taxa de eclosão média de 89,6% para primeira desova e 65% para a segunda desova. Entre massas de ovos consecutivas de uma mesma fêmea o diâmetro dos ovos não diferiu (t=-0.1801; GL=5; P=0,8641). Observou-se que quanto maior a fêmea, maior a fecundidade, e apesar do baixo coeficiente de determinação (R2=0,22), a regressão foi significativa (F=7,6382; Gl=1; P=0,0099). A seleção de substrato para oviposição apresentou diferença significativa (X2=172,55; GL=3; P<0,05) com preferência dos animais em colocar ovos em superfície lisa. Pode-se concluir que P. amazonica tem atividade noturna e a seleção de substrato varia de acordo com o período do dia. Embora o tamanho entre os sexos não seja diferente, no acasalamento de P. amazonica as fêmeas preferem os machos menores. A fecundidade desta espécie está diretamente relacionada ao tamanho da fêmea e a postura de massas de ovos ocorre principalmente à noite em superfície de substrato liso. O desenvolvimento embrionário foi relativamente curto em relação a outras espécies do mesmo gênero, e o diâmetro dos ovos não difere entre as desovas consecutivas