Ao contrário de outras espécies de animais domésticos, na égua os embriões descem tardiamente para o útero, creditando-se isto a uma dependência da PGE2. Conseqüentemente, são recuperados embriões que já estão em fases mais avançadas de desenvolvimento (blastocisto e blastocisto expandido) e com um tamanho que normalmente ultrapassa os 300 micrômetros quando a colheita é realizada após o 6º dia. Isto reflete em um insucesso nos protocolos de criopreservação embrionária. Em razão deste problema, testou-se a eficácia da aplicação da PGE2 por dois métodos (experimento I) e a eficácia da PGE1 e do análogo misoprostol (experimento II) na promoção da recuperação antecipada de embriões. Os dois experimentos foram realizados em éguas superestimuladas com Extrato de Pituitária Eqüina. No primeiro experimento, no 4º dia após a ovulação (D4), duas éguas foram submetidas à laparoscopia pela fossa paralombar para a deposição de 0,2 mg de PGE2 em gel sobre a tuba uterina e em outras três éguas a PGE2 foi administrada topicamente sobre a junção útero-tubárica (JUT) com auxílio de uma pipeta flexível (método não-cirúrgico). Vinte e quatro horas após a deposição do gel (D5), para ambos os métodos, foi realizada uma primeira tentativa de recuperação embrionária sendo que não foram recuperados embriões. Uma nova tentativa foi realizada entre o D6-6,5, sendo que desta vez, foram recuperados dois embriões das cinco éguas (40%), um de cada grupo. No segundo experimento, duas aplicações de 0,2 mg de PGE1 100% (n=5) ou de misoprostol 1% (n=5) diluídos em gel foram realizadas na região da JUT, no D4, pelo método não-cirúrgico. Não foram recuperados embriões no D5 das éguas que receberam PGE1 (0/5) e apenas de uma delas foram recuperados dois embriões no D6-6,5. Do grupo que recebeu misoprostol recuperaram-se três embriões de diferentes éguas no D5 (3/5), sendo uma mórula e dois embriões de sete dias provenientes de ovulações não-sincrônicas. No D6, entretanto, foram recuperados oito embriões de todas as éguas (5/5) que receberam misoprostol, resultado que é significativamente superior (P=0,048) ao do grupo que recebeu PGE1 (1/5). Apesar do pequeno número de animais, foram recuperados 11 embriões das 12 ovulações que ocorreram nas éguas do grupo misoprostol, todos com diâmetro igual ou inferior a 300 micrômetros. No último experimento detectou-se qualitativamente por imuno-histoquímica os diferentes subtipos de receptores (EP1 a EP4) para as PGE no útero, na JUT e nos diferentes segmentos da tuba uterina das éguas, em todas as fases do ciclo estral e durante dois períodos da gestação, porém, há uma menor quantidade (P< 0,0001) de receptores do subtipo EP1 em comparação aos demais subtipos. Os resultados obtidos por imuno-histoquímica indicam que realmente parece ser efetiva a administração tópica de PGE na JUT pelo método não-cirúrgico e os resultados obtidos nos dois primeiros experimentos demonstram que apesar de não antecipar a descida do embrião eqüino para o útero, o protocolo utilizando misoprostol 1% em éguas superovuladas mostrou-se eficaz em aumentar de maneira significativa a recuperação de embriões de seis dias com características desejáveis para a criopreservação. / Differently of any other ways of occurrence among the domestic animals, concerning mares, their embryos migrate in a delayed lapse of time to their uterus due to a correlation to the PGE2. Consequently, one extracts embryos which are already into some more advanced phase of their development (blastocyst and expanded blastocyst) normally exceeding 300 micrometers when their extraction is performed after the 6th day. This fact results into a failure concerning the protocols of embryonic cryopreservation. Regarding this problem, the effectiveness of applying PGE2 using two different methods (experiment I) and the effectiveness of PGE1 and the analogous misoprostol (experiment II) for promoting the anticipated extraction of the embryos, were evaluated. Both experiments were carried on some superstimulated mares using Equine Pituitary Extract. Experiment I: after the 4th day after the ovulation (D4), two mares were submitted to laparoscopy through the flank for depositing 0.2mg of PGE2 gel on the oviduct; to three other mares PGE2 was topically applied on the uterus-tube junction (UTJ) with the aid of a flexible pipette (not-surgical method). Twenty and four hours after the gel disposal (D5) regarding both methods, a first attempt for extracting the embryos was unsuccessfully performed. Another attempt was performed between the D6-6.5, and this time two embryos were extracted from the five mares (40%), one of each group. Experiment II: two applications of 0.2mg of PGE1 gel 100% (n=5) or misoprostol gel 1% (n=5) were accomplished on the UTJ region, at D4, through the not-surgical method. There werent any extracted embryos at D5 from the mares which had received PGE1 (0/5) and there were just two embryos extracted from a mare at D6-6.5. From the group which had received misoprostol three embryos from different mares were extracted at D5 (3/5), being a morula and two embryos aged seven days, from not-synchronous ovulations. However, at D6, eight embryos were extracted from all of the mares (5/5) which have received misoprostol, a significantly superior result (P=0.0048) comparing to the group which received PGE1 (1/5). Although the small number of animals, there were extracted eleven embryos from the twelve ovulations into the group which received misoprostol, all of them with a diameter 300 micrometers. In the last experiment it was qualitatively detected by immunohistochemistry the different receptor subtypes (EP1 to EP4) for the PGEs in the uterus, on the UTJ and in the different segments of the oviduct, in all stages of the estrous cycle and during two periods of gestation; however, there is a smaller amount (P<0.0001) of the receptor subtype EP1 in comparison to the other subtypes. The obtained results by immunohistochemistry genuinely indicate that the topical application of PGE on the UTJ through a not-surgical method seems effective and the obtained results in the first two experiments show that even though it doesnt anticipate the embryos migration to the uterus, the protocol using misoprostol 1% in superstimulated mares was significantly effective for increasing the extraction of embryos aged six days with desirable characteristics for the cryopreservation.

Nós humanos estamos inevitavelmente expostos a uma mistura de poluentes, e evidências nos mostram que estes poluentes aumentam a incidência de desordens reprodutivas. Já se sabe que camundongos cronicamente expostos a níveis de poluentes ambientais em São Paulo apresentam: mudanças no ciclo estral, alteração no número de folículos ovarianos, aumento das perdas embrionárias pós implantacionais e alterações na morfologia placentária. Nós hipotetizamos que as alterações na resposta uterina a implantação possa ser mediado por mastócitos e células NK uterinas levando ao aumento na incidência de perdas pós implntacionais associadas a poluição do ar. Para testar essa hipótese, camundongos foram expostos a níveis ambientais de poluentes até os 60 dias de vidas usando câmaras de exposição [uma câmara recebendo ar filtrado e a outra ar ambiente (poluído) não]. Ao atingir a idade reprodutiva os animais foram colocados para acasalar, os machos utilizados neste estudo não foram expostos aos poluentes, e no 6° e 8° dia pós-coito a gestação foi terminada. O desempenho reprodutivo foi avaliado e as fêmeas foram subdivididas em 4 grupos de acordo com a idade gestacional (6º ou 8º dpc) e exposição (ar filtrado ou ar não filtrado). Métodos estereológicos foram usados para avaliar o desenvolvimento dos sítios de implantação, contagem das células NK uterinas e mastócitos. A concentração de média de PM2.5 nas câmaras com o ar não filtrado foi de 27.5 g.m-3 e 6.5 g.m-3 na câmara com ar filtrado (P<0.001). A exposição a poluição do ar nos primeiros dias de gestação mostrou há diferenças no desenvolvimento dos compartimentos do sítio de implantação no 8° dia pós-coito: redução do volume endométrio e volume total do sítio.Quando nós avaliamos o número total de NK uterina o 8° dia pós-coito, observamos que há uma redução no número destas células nos animais expostos a poluição do ar. Os mastócitos no 6° dia gestacional também se mostram em menor número nos animais expostos a poluição, mas essa diferença desaparece com o avanço da gestação. Na avaliação histopatológica do endométrio, verificamos que há uma redução do volume de células deciduais, de trofoblasto, e um aumento do volume de glândulas nos sítios implantacionais no 8° dia pós-coito de animais expostos ao ar poluído. Nossos resultados confirmam os achados de estudos prévios que correlacionam a exposição a poluição do ar com aumento na incidência de falhas implantacionais e fertilidade diminuída. A avaliação da morfologia uterina e do número de células NK uterinas e mastócitos sugerem que os compostos presentes no ar interferem ou prejudicam o processo de implantação embrionária por alterações na resposta do sistema imunológico materno / Humans are inevitably exposed to mixtures of environmental contaminants, and a vast body of evidence now links exposure to these chemicals with an increased incidence of reproductive disorders. We have shown that mice chronically exposed to ambient levels of air pollution (AP) in São Paulo city have negative reproductive performance: resulting in changes in estrous cyclicity, number of follicles and increased post implantation loss rate as well defective placentation. We hypothesized that alterations in uterine response to implantation could be mediated by mast and uNKcells leading to increased incidence of pos implantation losses associated with exposure to air pollution. To test this female mice were exposed to ambient levels of AP from birth to 60 days of age using exposure chambers (receiving filtered air or non filtered situated near to a high traffic crossroad). On reaching the reproductive age, estrous cyclicity, was evaluated and females were allowed to mate to non exposed males and exposures continued until 6ºdpc or 8ºdpc when pregnancy was terminated. Reproductive performance was assessed and females, subdivided in to 4 groups according to gestational day (6ºdpc or 8ºdpc ) and exposure (filtered or non filtered air). Stereological methods and immunohistochemical techniques were used to evaluate implantation sites (IS) development, do cell identification (NK cells and Mast cells) and counts. Mean concentration of PM2.5 in the non-filtered chamber was 27.5 g.m-3 and 6.5 g.m-3; in the filtered chambers (P<0.001). Females exposed to air pollution previously and during the first days of pregnancy showed borderline differences in the development of the compartments of the IS on day 8 of gestation: volume of the endometrium is reduced as well as the IS total volume. When we evaluated the total number of uNk cells (8ºdpc), we observed that there is a decrease in those animals exposed to air pollution The number of mast cells (6º dpc) are also reduced when compared to females exposed to filtered air, but as pregnancy progress this differences in the number of mast cells disappear. The histopathological evaluation was observe the decrease in the volume occupied by decidual and trophoblast cells, and increased the volume of glands, showing development delay in implantation sites in 8dpc.Our data confirm results from previous studies that link exposure to AP and decreased fertility and increased implantation failure. Evaluation of the uterine morphology and the number of mast call and uNkcell suggests that components present in AP interfere or impair embryonic implantation trought changes in maternal immune system responses

Nós humanos estamos inevitavelmente expostos a uma mistura de poluentes, e evidências nos mostram que estes poluentes aumentam a incidência de desordens reprodutivas. Já se sabe que camundongos cronicamente expostos a níveis de poluentes ambientais em São Paulo apresentam: mudanças no ciclo estral, alteração no número de folículos ovarianos, aumento das perdas embrionárias pós implantacionais e alterações na morfologia placentária. Nós hipotetizamos que as alterações na resposta uterina a implantação possa ser mediado por mastócitos e células NK uterinas levando ao aumento na incidência de perdas pós implntacionais associadas a poluição do ar. Para testar essa hipótese, camundongos foram expostos a níveis ambientais de poluentes até os 60 dias de vidas usando câmaras de exposição [uma câmara recebendo ar filtrado e a outra ar ambiente (poluído) não]. Ao atingir a idade reprodutiva os animais foram colocados para acasalar, os machos utilizados neste estudo não foram expostos aos poluentes, e no 6° e 8° dia pós-coito a gestação foi terminada. O desempenho reprodutivo foi avaliado e as fêmeas foram subdivididas em 4 grupos de acordo com a idade gestacional (6º ou 8º dpc) e exposição (ar filtrado ou ar não filtrado). Métodos estereológicos foram usados para avaliar o desenvolvimento dos sítios de implantação, contagem das células NK uterinas e mastócitos. A concentração de média de PM2.5 nas câmaras com o ar não filtrado foi de 27.5 g.m-3 e 6.5 g.m-3 na câmara com ar filtrado (P<0.001). A exposição a poluição do ar nos primeiros dias de gestação mostrou há diferenças no desenvolvimento dos compartimentos do sítio de implantação no 8° dia pós-coito: redução do volume endométrio e volume total do sítio.Quando nós avaliamos o número total de NK uterina o 8° dia pós-coito, observamos que há uma redução no número destas células nos animais expostos a poluição do ar. Os mastócitos no 6° dia gestacional também se mostram em menor número nos animais expostos a poluição, mas essa diferença desaparece com o avanço da gestação. Na avaliação histopatológica do endométrio, verificamos que há uma redução do volume de células deciduais, de trofoblasto, e um aumento do volume de glândulas nos sítios implantacionais no 8° dia pós-coito de animais expostos ao ar poluído. Nossos resultados confirmam os achados de estudos prévios que correlacionam a exposição a poluição do ar com aumento na incidência de falhas implantacionais e fertilidade diminuída. A avaliação da morfologia uterina e do número de células NK uterinas e mastócitos sugerem que os compostos presentes no ar interferem ou prejudicam o processo de implantação embrionária por alterações na resposta do sistema imunológico materno / Humans are inevitably exposed to mixtures of environmental contaminants, and a vast body of evidence now links exposure to these chemicals with an increased incidence of reproductive disorders. We have shown that mice chronically exposed to ambient levels of air pollution (AP) in São Paulo city have negative reproductive performance: resulting in changes in estrous cyclicity, number of follicles and increased post implantation loss rate as well defective placentation. We hypothesized that alterations in uterine response to implantation could be mediated by mast and uNKcells leading to increased incidence of pos implantation losses associated with exposure to air pollution. To test this female mice were exposed to ambient levels of AP from birth to 60 days of age using exposure chambers (receiving filtered air or non filtered situated near to a high traffic crossroad). On reaching the reproductive age, estrous cyclicity, was evaluated and females were allowed to mate to non exposed males and exposures continued until 6ºdpc or 8ºdpc when pregnancy was terminated. Reproductive performance was assessed and females, subdivided in to 4 groups according to gestational day (6ºdpc or 8ºdpc ) and exposure (filtered or non filtered air). Stereological methods and immunohistochemical techniques were used to evaluate implantation sites (IS) development, do cell identification (NK cells and Mast cells) and counts. Mean concentration of PM2.5 in the non-filtered chamber was 27.5 g.m-3 and 6.5 g.m-3; in the filtered chambers (P<0.001). Females exposed to air pollution previously and during the first days of pregnancy showed borderline differences in the development of the compartments of the IS on day 8 of gestation: volume of the endometrium is reduced as well as the IS total volume. When we evaluated the total number of uNk cells (8ºdpc), we observed that there is a decrease in those animals exposed to air pollution The number of mast cells (6º dpc) are also reduced when compared to females exposed to filtered air, but as pregnancy progress this differences in the number of mast cells disappear. The histopathological evaluation was observe the decrease in the volume occupied by decidual and trophoblast cells, and increased the volume of glands, showing development delay in implantation sites in 8dpc.Our data confirm results from previous studies that link exposure to AP and decreased fertility and increased implantation failure. Evaluation of the uterine morphology and the number of mast call and uNkcell suggests that components present in AP interfere or impair embryonic implantation trought changes in maternal immune system responses

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-13Bitstream added on 2014-06-13T20:33:41Z : No. of bitstreams: 1 silva_bm_me_jabo.pdf: 548750 bytes, checksum: 36f590119119f6fe622e3615252bd6ac (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A acetilação das histonas é um dos principais mecanismos de reprogramação epigenética do genoma dos gametas a fim de estabelecer um estado totipotente para o desenvolvimento normal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da utilização da Tricostatina A (TSA) sobre os níveis de acetilação das histonas e o desenvolvimento embrionário, avaliando-se a contagem do número de células da massa celular interna (MCI), trofectoderma (TE), e células totais, e os níveis da reação de imunocitoquímica para H3K9ac. Para isso, três experimentos foram delineados. No primeiro experimento, verificou-se que o grupo tratado com 5nM de TSA por 144h durante o cultivo in vitro (CIV) aumentou (p<0,01) o nível de H3K9ac em relação ao grupo controle. A taxa de clivagem e o desenvolvimento embrionário foram avaliados em um segundo experimento, e o grupo tratado com 5nM de TSA não apresentou diferença na produção de embriões comparado ao grupo controle. No experimento 3, o tratamento com a TSA não apresentou efeitos significativos em relação ao número de células da MCI, porém houve redução (p<0,01) tanto do número de células da TE quanto de células totais comparado ao grupo controle. Portanto, conclui-se que o tratamento com TSA não altera o desenvolvimento embrionário pré-implantacional de embriões fêmeas de bovinos, mostrando efeito negativo sobre o desenvolvimento dos embriões tratados / Histone acetylation is one of the major mechanisms of epigenetic reprogramming of gamete genome to establish a totipotent state for normal development. The aim of this work was to evaluate the use of Trichostatin A (TSA) on the levels of histone acetylation and embryonic development, the assessment of counting the cell number of inner cell mass (ICM), trophectoderm (TE), and total cells, and the levels of H3K9ac for immunocytochemical reaction. Therefore, three experiments were designed. In the first experiment, it was verified that the group treated with TSA for 5nM for 144h during in vitro culture (IVC) increased (p <0.01) the level of H3K9ac in the control group. Cleavage rate and embryo development were evaluated in a second experiment, and the group treated with 5nM TSA showed no difference in embryo production compared to control. In Experiment 3, treatment with TSA had no significant effect on the cell number of ICM, but decreased (p <0.01) both the cell number of TE and total cells as compared to control. Therefore, it is concluded that treatment with TSA does not alter the preimplantation embryonic development female bovine embryos, showing a negative effect on the development of embryos treated

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-09Bitstream added on 2014-06-13T20:09:28Z : No. of bitstreams: 1 valentin_fn_me_jabo.pdf: 2224903 bytes, checksum: 63d93391228c3e9a48eb572d59e71cf8 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A tilápia é uma das espécies mais significativas para a piscicultura atual. Todo o conhecimento relativo à qualidade do ovo, pode melhorar as técnicas de reversão sexual, da qual depende o seu cultivo. Assim, a identificação estrutural dos eventos que ocorrem na reprodução induzida, fertilização e desenvolvimento embrionário, numa faixa de tempo conhecida, contribuirá para uma melhor compreensão da reprodução da tilápia do Nilo e será útil tanto no manejo como no controle da espécie. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito da idade de matrizes sobre as taxas de fecundidade, de fertilidade e de eclosão, bem como sobre a morfometria, a morfologia estrutural e a ultra-estrutural dos ovos da tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), desde as primeiras clivagens até a eclosão. A reprodução induzida foi realizada em dois tratamentos: grupo 1 (2 a 3 anos) e grupo 2 (3 ½ a 4 anos), os exemplares eram pertencentes ao setor de Tilapicultura do Centro de Aqüicultura da Unesp. As amostras dos ovos foram coletadas nos tempos de extrusão, fertilização, 1 minuto, 45 minutos, 60 minutos, de 30 em 30 minutos até completar seis horas, depois de hora em hora até completar 24 horas. A partir daí, as coletas foram realizadas de seis em seis horas até a eclosão. Para observações em estereomicroscópio, morfometria dos ovos e microscopia eletrônica de varredura, as amostras foram fixadas em solução de Karnovsky, lavadas em tampão Cacodilato de Sódio e conservadas em álcool 70 %. Nos dois grupos estudados, o período embrionário se estendeu de 60 a 84 horas, desde a fertilização até a eclosão, a uma temperatura média de 30,4 ± 0,75 ºC. Em relação ao tamanho dos ovos, não houve diferença significativa entre os dois grupos, apresentando diâmetro médio de 2,58mm e 2,57mm para os ovos do grupo 1 e 2, respectivamente... / Tilapia is one of the most significant species for the fish crops nowadays. All the knowledge related to egg quality can increase the sexual reversion techniques, in which its cultivation is needed. Thus, the structural identification of the events that occur on the inducted reproduction, fertilization, and embryo development, in a known time range, will contribute to a better comprehension of the reproduction of the Nile tilapia and will be useful either in the management as well as in the species control. The goal of this research was to analyze the effect of the matrix age on the fecundity, fertility and eclosion rates, as well as about the morphometry, structural and extra-structural morphology of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) eggs, since the first cleavage until the eclosion. The inducted reproduction was performed in two treatments: group 1 (2 to 3 years old) and group 2 (3 ½ to 4 years old), the samples pertaining to the sector of Tilapia crop of the Center of Water Crops from Unesp (State University of São Paulo). The egg samples were collected in the periods of extrusion, fertilization, 1 minute, 45 minutes, 60 minutes, every 30 minutes until complete six hours, and after every one hour until complete 24 hours. From then, the collects were performed every six hours until eclosion. For the observation in stereomicroscopy, eggs morphometry, and scanning electronic microscopy the samples were fixed in a solution of Karnovsky, washed in cacodilate of sodium buffer and conserved in alcohol 70%. In both studied groups, the embryo period has extended from 60 to 84 hours, since fertilization until eclosion, in an average temperature of 30.4 ± 0.75ºC. When it comes to the eggs size, no significant differences between both groups were presented, showing an average diameter of 2.58mm and 2.57mm for the eggs in group 1 and 2, respectively ...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-13Bitstream added on 2014-06-13T20:59:33Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_fs_me_jabo.pdf: 514303 bytes, checksum: 2ff947581f5831ab66e019d8c9ec7990 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Recentemente, tem-se dado atenção crescente aos efeitos deletérios dos radicais livres sobre os oócitos e embriões cultivados in vitro em mamíferos. No entanto, poucos estudos foram conduzidos sobre a ação desses agentes sobre a interação entre o espermatozóide-oócito durante a fertilização in vitro (FIV). Com o intuito de melhorar os resultados da produção in vitro de embriões bovinos, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da suplementação do meio de fecundação in vitro com antioxidantes cisteamina (Cist) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) sobre a capacitação espermática, fecundação, qualidade dos zigotos e competência no desenvolvimento embrionário. Os espermatozóides apresentaram o DNA íntegro quase na totalidade entre os diferentes tratamentos e durante o tempo no processo da FIV. / Recently, deleterious effects of free radicals over oocytes and embryos cultivated in vitro in mammals have received increasing attention. Nonetheless, few studies were conducted about the action of those agents over the interaction between the sperm-oocyte during in vitro fertilization (IVF). Aimed at improving results of in vitro production of bovine embryos, this work had as objective to evaluate the effects of supplementation of the in vitro fertilization environment with antioxidants cisteamine (Cist) and 2-Mercaptoethanol (2-ME) over the spermatic capacitation, fertilization, quality of zygotes and competency in the embryonic development. Spermatozoas exhibited an integral DNA almost in the totality of the different treatments and along the time in the IVF process.

O saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião durante o período em que a placenta verdadeira ainda não está completamente formada. É responsável pela hematopoiese, pois dele se desenvolvem os primórdios das células sanguíneas, bem como parte do sistema circulatório primitivo do embrião. Tivemos como objetivo caracterizar a área transicional do saco vitelino para o intestino primitivo através de análise macroscópica, microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e reação imunohistoquímica para detecção de células germinativas (Oct-4). Foram realizados cortes seqüenciais de todos os embriões para permitir a visualização da estrutura como um todo. Nas amostras obtidas, pudemos observar a presença do saco vitelino com a área de conexão com intestino primitivo composto por inúmeras ilhotas vasculares que correspondem aos vasos envolvidos pelas células vitelínicas e células mesenquimais. No interior dos vasos identificamos hemangioblastos em grande quantidade. A camada correspondente ao mesênquima é delgada e com células alongadas e endoderma da membrana vitelínica é composto por células endodérmicas, grandes, uni ou binucleadas. Tal arranjo celular se assemelha a uma glândula devido a sua arquitetura em ilhas vasculares somado às camadas teciduais. O epitélio do intestino primitivo inicia sua diferenciação com células colunares estratificadas e bordadura em escova seguido de células mesenquimais indiferenciadas. A área transicional entre o saco vitelínico e o intestino primitivo é estreita em relação à luz destas duas estruturas com células de formato irregular, constituindo um delicado revestimento no lúmen contendo hemangioblastos. No mesênquima da área transicional inúmeros e pequenos capilares foram observados com hemangioblastos em seu interior. Em embriões e fetos submetidos à imunohistoquímica, verificamos células reativas como o metanefro, gônadas, parênquima hepático e saco vitelino. / The yolk sac is the main source of embryo nutrition during the period that true placenta are not still formed and responsible by hematopoieses because from it were developed the blood cells, as a part of embryo primitive circulatory system. We aimed to characterize the transitional area between the yolk sac and the primitive intestine by light microscopy, transmission electron microscopy and detection of germ cell lines by Oct-4 immunohistochemistry. Were done in all embryos serial sections to permit the identification for all structures. Were possible identify the yolk sac connection with primitive intestine composed by many blood islet corresponding to relation with yolk and mesenchymals cells. Inside the vessels were identified hemangioblasts. The layer corresponding to mesenchyme is thin and with elongated cells and the vitellinic membrane endoderm is composed by large, uni or binucleate endodermic cells. This shape is similar to a gland related to their architecture, vessels islets and tissue layers. Primitive intestine epithelium begins their differentiation with stratified columnar cells and undifferentiated mesenchymals cells. This transitional area is thin related to their lumen with irregular shape and constituted by delicate lumen basement and hemangioblast. Inside the mesenchyme there are many smaller capillaries observed with hemangioblast in it. Embryos and fetus submitted to immunohistochemistry and were verified positive cells like metanefrons, gonads, hepatic parenchyma and yolk sac.

No intuito de descrever a evolução do desenvolvimento do concepto bubalino entre 10 e 60 dias de gestação, esse estudo utilizou a metodologia de mensuração por Crow rump para revelar a idade estimada de 96 embriões e fetos coletados no Matadouro municipal de Macapá, no estado do Amapá entre os anos de 2006 a 2008. Os parâmetros utilizados consistiram em medidas de comprimento (crânio caudal) e peso utilizando-se balança eletrônica de precisão. Para visualização macroscópica foram feitas fotografias, e a microscopia eletrônica de varredura auxiliou na identificação de inúmeras estruturas externas dos embriões. Foram realizados cortes histológicos de 5µm os quais foram corados em HE e picrosirius, e submetidos a técnicas de imunohistoquimica para detecção de Oct4, PCNA e vimentina. Nossos resultados revelam que embriões de mamíferos até a 5° semana de gestação são muito semelhantes aos de outras espécies de mamíferos já estudados. Similaridades entre bovinos e bubalinos persistem com exceção dos estágios fetais onde aparentemente búfalos se desenvolvem mais rapidamente que bovinos. Em conclusão, o estudo indica características importantes que podem ser utilizadas para verificar a viabilidade de embriões de búfalos e auxiliar avaliações em exames complementares como os de ultrassonografia, e também indicam a presença de importantes sítios de células pluripotentes em regiões diferentes do embrião dependendo do estágio de desenvolvimento em que o mesmo se encontra. / The aim of this study was to describe the developmental changes in the bubaline conceptus from 10-60 days of gestation using the Crown rump methodology to diagnostic the estimated age of those 96 embryos and fetuses obtained at Matadouro Municipal de Macapá, on Amapá state, from 2006 until 2008. Parameters used were cranio-caudal length (CR) and weight. For macroscopic view photographies were done, Scanning electron microscopy helps to identify inumerous external structures of the embryos. Histotogic section of 5µm were done and stained using Hematoxilin-Eosin, picrosirius, and also subjected to immunohistochemistry for Oct4, PCNA and vimentin were evaluated. Transmission electron microscopy was used in fetal membranes to describe it better. The obtained results revealed that mammal embryos until 5th weeks of gestation has to much similar characteristics to others studied species. Similarities between bovine and bubaline persist; except on fetal stages that buffalos seems develop faster than bovine ones. In conclusion, the overall data indicated the important characteristics that can be evaluated to verify the viability of buffalo embryos and help the evaluations of ultrasonographic exams, also identify the presence of important regions with pluripotente cells that changes according to the stage of the embryo development.

Dissertação(mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Instituto de Oceanografia, 2008. / Submitted by Cristiane Silva (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2012-07-22T21:55:11Z No. of bitstreams: 1 dissertaao shei.pdf: 955699 bytes, checksum: 8f9882265e94129eca93eb60bbe7cdf7 (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-07-27T19:09:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertaao shei.pdf: 955699 bytes, checksum: 8f9882265e94129eca93eb60bbe7cdf7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-27T19:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertaao shei.pdf: 955699 bytes, checksum: 8f9882265e94129eca93eb60bbe7cdf7 (MD5) Previous issue date: 2008 / O “neon goby” Elacatinus figaro é endêmico da costa brasileira e foi uma das espécies mais importantes no comércio de peixes ornamentais marinhos do país. Atualmente, encontra-se na lista de espécies ameaçadas de extinção e resguardadas do extrativismo. Este trabalho teve como intuito descrever a reprodução, o desenvolvimento embrionário e a larvicultura do “neon goby” em laboratório. As primeiras desovas naturais foram observadas a partir do 24° dia após a formação dos casais, sendo o intervalo entre as desovas de 8 a 10 dias a 26°C. A fecundidade variou de 430 a 1.020 ovos por desova com média de 648 ± 183 ovos (média ± desvio padrão1, com taxa de eclosão média de 69 ± 16% Os ovos são elípticos, medem 1,81 ± 0,1 mm de comprimento e 0,61 ± 0,03 mm de diâmetro, eles apresentam filamentos adesivos na parte basal e contêm cinco protuberâncias na parte distal. O tempo para eclosão das larvas é de 7 a 8 dias. As larvas recém eclodidas medem 3,15 ± 0,07 mm, apresentam fototaxia positiva, olhos pigmentados, boca aberta e vesícula gasosa inflada. As larvas foram alimentadas com rotíferos Brachionus plicatilis em sistema de água verde com a microalga Nannochloropsis oculata do 1° ao 20° dia após a eclosão. Náuplios de Artemia foram oferecidos a partir do 15 ° dia em conjunto com rotíferos e, exclusivamente, a partir do 20° dia. O assentamento ocorreu a partir do 28° dia, quando as larvas do “neon goby” atingiram comprimento de 8,50 ± 0,18 mm com sobrevivência entre 2 e 20%. / The “neon goby” Elacatinus figaro is endemic of the Brazilian coast and was one of the most important species in the marine ornamental fish trade in the country. Today it is on the list of endangered species and it can no longer be collected in the wild. This work was carried out in order to describe natural breeding, embryonic development and larviculture of neon goby in laboratory. The first natural spawning was observed 24 days after the pairs were formed 8 to 10 days at 26°C. Mean fecundity was 648 ± 183 (± SD) eggs per clutch and ranged from 430 to 1020 eggs, the hatching rate was 69 ± 16%. Eggs are elliptical in shape, they present adhesive filaments at the proximal end and five protuberances at the distal end. Egg length averaged 1.81 ± 0.1 mm and maximum width was 0.61 ± 0.03 mm. The embryonic developmental period lasts between 7 and 8 days. The newly hatched larvae measure 3.15 ± 0.07 mm, showing positive phototaxis, pigmented eyes, mouth opened and insufflated gas bladder. Larvae were fed with rotifers Brachionus plicatilis in green water system along with the microalgae Nannochloropsis oculata from day 1 to day 20 day after hatching. Artemia nauplii were added to the diet on day 15, and 5 days later rotifers were no longer offered. Larvae began to settle to the bottom on day 28, when length of neon goby was 8.50 ± 0.18 mm, the final survival rate ranged between 2 and 20%.

Dissertação(mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Instituto de Oceanografia, 2010. / Submitted by Cristiane Silva (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2012-07-27T14:13:27Z No. of bitstreams: 1 dissertao corrigido final de ana carolina sampaio.pdf: 1962570 bytes, checksum: 530d0baf753727aa3bda4dcc7e937c68 (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-07-27T17:07:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertao corrigido final de ana carolina sampaio.pdf: 1962570 bytes, checksum: 530d0baf753727aa3bda4dcc7e937c68 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-27T17:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertao corrigido final de ana carolina sampaio.pdf: 1962570 bytes, checksum: 530d0baf753727aa3bda4dcc7e937c68 (MD5) Previous issue date: 2010 / O objetivo deste trabalho foi descrever os principais eventos ocorridos durante o desenvolvimento inicial da matrinxã Brycon amazonicus, correlacionando-os com o comportamento alimentar apresentado pelas larvas no período de 24 a 240 h após a eclosão (HAE) ou 10 dias. O objetivo do primeiro capítulo foi descrever o desenvolvimento embrionário e larval da matrinxã, caracterizando os principais eventos ocorridos até 72 h após a fertilização (HAF). O trabalho foi desenvolvido na Estação de Piscicultura de Balbina Município de Presidente Figueiredo. A caracterização foi feita com base na análise estéreo-microscópica, morfométrica e comparação bibliográfica. Os ovos da matrinxã são livres, transparentes, esféricos com grande espaço perivitelínico (0,56 ± 0,3 mm). As sucessivas clivagens originam células com 64 blastômeros na primeira hora AF. A gástrula, iniciada 02 h e 40 min AF, caracterizou-se por progressiva involução celular e formação do eixo embrionário, culminando com diferenciação de cabeça e cauda, com 05 h e 30 min AF. A embriogênese teve duração de 3 h com formação de somitos, notocorda, vesículas óptica, ótica e otólitos, além de batimentos cardíacos e liberação da cauda. As larvas eclodiram com 10 h e 30 min AF, quando teve início o estágio larval, em temperatura média de 29,9ºC. As larvas eclodiram com 3,56 ± 0,46 mm de comprimento total. Entre 19 e 30 h após a fertilização (HAF) foram observadas: 1) pigmentação e formação do tubo digestivo 2) surgimento de arcos branquiais 3) nadadeira peitoral 4) abertura da boca e 5) surgimento dos dentes. O canibalismo foi iniciado às 34 HAF, com 5,7 ± 0,66 mm de comprimento total, abertura bucal 1,46 ± 0,19 mm e intensos movimentos mandibulares acompanhados de natação vertical. A larva está apta à natação, busca e apreensão de presas e escape de predadores desde 60 HAF, permitindo sua transferência aos viveiros de alevinagem. No segundo capítulo se objetivou conhecer a seletividade alimentar da matrinxã no período de 24 a 240 h após a eclosão (HAE). Foram ofertados diariamente uma mistura de organismos zooplanctônicos (50 organismos/larva) e ração. A mistura ofertada foi previamente quali e quantificada e as larvas alimentadas eram amostradas diariamente para verificação do conteúdo alimentar no trato digestório analisado sob estereomicroscópio. Não foi observada seleção por organismos menores (Rotíferos e náuplios) e não foi observada correlação entre as medidas morfométricas da larva e medidas da presa. Os resultados mostram seleção por alimento vivo, com preferência alimentar por Cladóceros até o décimo dia de vida. No terceiro capítulo foi avaliado o desempenho das larvas quando submetidas a diferentes tratamentos alimentares, no período de 28 a 100 HAE, sendo: T1 = ração; T2 = zooplâncton e T3 = Ração + zooplâncton. O T3 apresentou maior taxa de crescimento específico (TCE) (2,03) e comprimento (6,49 mm), contudo a sobrevivência não diferiu entre os tratamentos. As larvas iniciaram a ingestão de alimento vivo ou ração no período entre 40 e 43 HAE, quando restavam pequenas proporções da reserva endógena (vitelo), indicando início de alimentação exógena neste período e utilização do alimento vivo até 240 HAE. Diante dos resultados observados, acredita-se que um correto manejo alimentar deve considerar redução no período de incubação de 72 h para 40 h, quando as larvas deverão receber alimento vivo e treinamento alimentar para aceitação de ração até o 10º dia após a eclosão. Isto possivelmente proporcionará maiores taxas de sobrevivência na larvicultura. / The objective of this work was to describe the main events happened during the initial development of the matrinxã Brycon amazonicus, correlating them with the alimentary behavior presented by the larvae in the period from 24 to 240 h after hatching (HAH) or 10 days. The objective of the first chapter was to describe the embryonic and larval development of the matrinxã, characterizing the main events happened until 72 h after fertilization (HAF). The work was developed in Center of Tecnology, Training and Production in Aquaculture (CTTPA), in Balbina Municipal district of President Figueiredo. The characterization was made under stereomycroscopic analysis, morfometry and bibliographical comparison. The eggs of matrinxã are free, transparent, and spherical with a large perivitelline space (0.56 ± 0.3 mm). The successive clivages originate cells with 64 blastomeres in the first HAF. The gastrulation initiates at 02 h and 40 min AF, and was characterized by progressive cells involution and formation of the embryonic axis, culminating with differentiation of head and tail with 05 h and 30 min AF. The embriogenesis had duration of 3 h with somitos formation, notocord, optical vesicle, otics vesicle and otholits, besides heart beats and liberation of the tail. The larvae hatched at 10 h and 30 min AF, when it had beginning the apprenticeship, in medium temperature of 29.9ºC. Larvae total lengh at hatching was 3.56 ± 0.46 mm. Between 19 and 30 HAF they were observed: 1) pigmentation and formation of the digestory tube 2) appearance of branchial arches 3) fin peitoral 4) opening of the mouth and 5) appearance of the teeth. The cannibalism started at 34 HAF, with 5.7 ± 0.66 mm of total length, mouth opening 1.46 ± 0.19mm and intense jaw movements and vertical swimming. The larva is capable the swimming, it looks for and apprehension of preys and escape of predators, from 60 HAF, allowing your transfer to the nurseries ponds, reducing the incubation period. In the second chapter two the objective was to know de feeding selectivity of matrinxã larvae between 24 and 240 hours after hatching (HAH). Daily was offered a mixture of zooplanctonic organisms (50 organisms/larvae) and ration. The mixture was previously quantificated and qualificated and the feeding contents of larvae were analysed under estereomicroscopy. We didn´t observed selectivity for little items (rotifers and nauplians) and there wasn´t correlations between larvae and pray measurement. The results show selection for live food and preferences by Cladocera until tenth day of life. In the third chapter, it was evaluated the acting of the larvae when submitted to different alimentary treatments, in the period from 28 to 100 HAH, being: T1 = ration; T2 = zooplancton and T3 = Ration + Zooplancton. T3 presented larger specific growth rate (SGR) (2.03), and length (6,49 mm), however the survival didn't differ among the treatments. The larvae began the ingestion of alive food or ration bettween 40 and 43 HAH ages, when they remain small proportions of the endogenous reservation (vitelo). The results indicate beginning of the feeding exogen between 40 and 43 HAH and the use of the alive food up to 240 HAH. Before the observed results, we believed that a correct handling to feed it should consider reduction in the incubation period, from 72 to 40 h, when the larvae should receive alimentary training for ration acceptance, until the 10th day after appearance. So, may be possible to increase the survival rates during hatchery.