Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-06T18:05:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_João Paulo F. Rufino.pdf: 1279416 bytes, checksum: ebe8315a6bd411352960eb60ab486177 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-06T18:05:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_João Paulo F. Rufino.pdf: 1279416 bytes, checksum: ebe8315a6bd411352960eb60ab486177 (MD5) Previous issue date: 2018-02-07 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the effects and biological potential of L-glutamine for in ovo feeding (IOF) at fertile eggs. This study was conducted at the Laboratory of Poultry Technology, Poultry Sector, Department of Animal and Vegetable Production (DPAV), College of Agrarian Sciences (FCA), Federal University of Amazonas (UFAM), South Sector at the University Campus, Manaus, State of Amazonas, Brazil. Two trials were developed to evaluate the bioefficacy of L-glutamine for IOF. In the first trial, 315 fertile eggs Rhode Island Red (breeders with 32-weeks) were used. The experimental design was completely randomized with the treatments constituted by two controls and five solutions containing L-glutamine levels with 45 replicates (eggs) each. The variables evaluated were incubation yields (hatchability, embryo mortality and chick/egg correlation), serum biochemical parameters and gastrointestinal tract development (directly related organs and regions) of hatched chicks. In the second trial, 300 fertile eggs Rhode Island Red (breeders with 42-weeks) were used. The experimental design was completely randomized with the treatments constituted by two controls and three solutions containing L-glutamine and L-glutamine + ISP (Isolated Soy Protein), with 60 replicates (eggs) each. The variables evaluated were incubation yields (hatchability, embryo mortality and chick/egg correlation) and gastrointestinal tract development (directly related organs and regions) of hatched chicks. Statistical analysis was performed from software SAS 9.8 developed by SAS Institute Inc. The data were subjected to variance analysis, with the estimates of treatments of the first trial were submitted to polynomial regression at 0.01 and 0.05 of significance, and estimates of treatments of the second trial were evaluated by Tukey test at 0.01 and 0.05 of significance. The results of this study indicate that until 0.5% L-glutamine may be supplemented in ovo to chick embryos without negative influence on chick weight and gastrointestinal tract development, acting as serum biochemical metabolism regulator and obtaining better hatchability. The L-glutamine together with 1.0% ISP obtained medium hatchability, don't affected the intermediary embryo mortality and showed good gastrointestinal tract development. / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos e o potencial biológico da L-glutamina para fins de inoculação em ovos embrionados. O estudo foi conduzido no Laboratório de Tecnologia Avícola do Setor de Avicultura do Departamento de Produção Animal e Vegetal da Faculdade de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Amazonas, Manaus, Amazonas, Brasil. Foram realizados dois experimentos para avaliação da bioeficácia da L-Glutamina para fins de inoculação in ovo. No primeiro experimento, foram utilizados 315 ovos férteis oriundos de matrizes Rhode Island Red (32 semanas de idade). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado onde os tratamentos foram constituídos por duas soluções controle e cinco soluções experimentais contendo níveis crescentes de L-glutamina, com 45 repetições (ovos) por tratamento. No primeiro experimento foram avaliados os rendimentos de incubação, a relação pinto/ovo, os parâmetros bioquímicos séricos e o desenvolvimento do trato gastrointestinal (órgãos diretamente relacionados e regiões) dos pintos ao nascer. No segundo experimento, foram utilizados 300 ovos férteis oriundos de matrizes Rhode Island Red (42 semanas de idade). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, onde os tratamentos foram constituídos por duas soluções controle e três soluções experimentais contendo L-glutamina e L-glutamina + Proteína Isolada de Soja (PIS), com 60 repetições (ovos) por tratamento. No segundo experimento foram avaliados os rendimentos de incubação, a relação pinto/ovo e o desenvolvimento do trato gastrointestinal (órgãos diretamente relacionados e regiões) dos pintos ao nascer. A análise estatística foi realizada através do programa computacional SAS (2008), onde os dados coletados foram submetidos à análise de variância e as estimativas dos tratamentos do Experimento 1 serão analisados por regressão polinomial à 0,01 e 0,05 de significância, enquanto as médias dos tratamentos do Experimento 2 foram avaliadas pelo teste de Tukey a 0,01 e 0,05 de significância. Os resultados deste estudo indicaram que até 0,5% de L-glutamina pode ser utilizada para fins de alimentação in ovo em embriões avícolas, proporcionado melhor eclodibilidade maior peso do pintanho ao nascer, maior desenvolvimento do trato gastrointestinal e atuando como regulador do metabolismo bioquímico sérico. Quando consorciada com a Proteína Isolada de Soja (1,0%), a L-glutamina obteve resultados satisfatórios de eclodibilidade, não afetando negativamente a mortalidade emrionária intermediária e apresentando bom desenvolvimento do trato gastrointestinal.

Os primeiros trabalhos em desenvolvimento embrionário de opiliões tiveram início no final do século XIX, enfocando principalmente espécies holárticas, e desde o final da década de 1970 o assunto não foi mais abordado. Visando retomar este tema com um componente comparativo, o presente estudo objetivou a descrição do desenvolvimento embrionário de quatro subfamílias de Gonyleptidae (Opiliones Laniatores), a saber: Caelopyginae (Ampheres leucopheus), Goniosomatinae (Goniosoma proximum e Goniosoma spelaeum), Mitobatinae (Longiperna zonata e Promitobates ornatus) e Progonyleptoidellinae (Iporangaia pustulosa). Dados adicionais obtidos para outras espécies foram incluídos com fins comparativos. O desenvolvimento dos embriões foi acompanhado através de fotografias digitais diárias de ovos em diversas desovas de cada espécie. Ovos de ambas as espécies de Goniosomatinae (que apresentam cuidado materno das desovas) são depositados com aproximadamente 1,5 1,6 mm, atingindo 2,1 mm em G. proximum e 2,3 mm in G. spelaeum próximos à eclosão, ao passo que em A. leucopheus e I. pustulosa (que apresentam cuidado paterno) apresentam 1,13 mm e 1,30 mm logo após a deposição, e 1,35 mm e 1,59 mm próximos à eclosão, respectivamente. Foram observadas e descritas diferenças entre as espécies estudadas pelo presente, tanto na coloração do vitelo e transparência do córion como em características morfológicas e na seqüência de eventos, em especial no padrão de pigmentação. A duração do período embrionário foi de 29-56 dias em A. leucopheus, 35-66 dias em I. pustulosa, 3148 dias em G. proximum, 2954 dias em G. spelaeum, 43-64 dias em L. zonata e 35-55 dias in P. ornatus. Dentre as espécies estudadas a duração relativa de cada fase variou bastante, com a clivagem correspondendo a 3-4% do período embrionário, a formação da banda germinativa a 9-14%, a metamerização do prossoma a 3-13%, a inversão do embrião a 21-38%, a organogênese larval a 22-42% e a fase larval no ovo a 7-28%. / The first studies concerning the embryonic development of harvestmen started in the late XIX century, mostly concerning holarctic species, and the last studies appeared during the late 1970s. Aiming at filling a gap of more than 30 years in the study of embryology of harvestmen, and adding a comparative component, this study focused on the embryonic development of species of four subfamilies of Gonyleptidae harvestmen (Laniatores), namely Caelopyginae (Ampheres leucopheus), Goniosomatinae (Goniosoma proximum and Goniosoma spelaeum), Mitobatinae (Longiperna zonata and Promitobates ornatus) and Progonyleptoidellinae (Iporangaia pustulosa). Additional data acquired for other species is also included for comparison purposes. The embryonic development was followed in the field, by taking daily photographs of different eggs from a number of egg batches during about two months. Eggs of both species of the subfamily Goniosomatinae (which present maternal care of batches) are laid with ca. 1.5 1.6 mm in diameter, reaching ca. 2.1 mm in G. proximum and 2.3 mm in G. spelaeum near hatching, whereas recently laid eggs of A. leucopheus and of I. pustulosa (which present paternal care) have approximately 1.13 mm and 1.30 mm in diameter, respectively, reaching diameters of about 1.35 mm and 1.59 mm, respectively, close to hatching. Differences concerning yolk coloration and eggshell transparency were observed and are described for the presently studied species, as well as differing morphological features and sequence of events, particularly in reference to the pigmentation pattern. The duration of the embryonic phase was 29-56 days in A. leucopheus, 35-66 days in I. pustulosa, 3148 days in G. proximum, 29-54 days in G. spelaeum, 43-64 days in L. zonata and 35-55 days in P. ornatus. Amongst the species studied herein relative durations are quite variable, with cleavage corresponding to 3-4% of the embryonic development, germ band formation to 9-14%, prosoma metamerization to 3-13%, the inversion of the embryo to 21-38%, larval organogenesis to 22-42% and the larval phase in the egg to 7-28%.

Tabelas de estágio embrionário podem ser utilizadas para detectar semelhanças e diferenças de caracteres entre grupos e como ferramenta para estudos baseados na fase embrionária. Neste estudo, ovos do lagarto Iguana iguana foram utilizados para a elaboração de uma tabela de estágios e para determinar o padrão de excreção durante o desenvolvimento. Iguana é um modelo conveniente por produzir numerosas desovas de ovos de tamanho grandes, propiciando um fácil manuseio e um bom número de réplicas. Após a oviposição, 18 estágios embrionários foram determinados durante os quais uréia foi o resíduo nitrogenado principal. Apesar do iguana ser o primeiro lagarto estudado, o padrão ureotélico é comum entre a maioria das espécies reptilianas estudadas até o momento. A casca pergaminácea permite que os ovos dobrem em massa devido à absorção de água, e o mecanismo pelo qual os embriões lidam com a diluição e osmolaridade resultante é um tema interessante para futuros trabalhos e comparações com espécies de cascas rígidas. Há evidência de desenvolvimento heterocrônico dos membros e o desenvolvimento de iguana é similar ao do lagarto Anolis sagrei, também do clado Iguania. Mais estudos de desenvolvimento de lagartos são necessários e a utilização de critérios morfológicos similares para facilitar a comparação de eventos embrionários. / A Table of embryonic stages can be used to detect similarities and differences in developmental features between groups and as a tool for studies based on embryonic phase. In this study, eggs of the lizard Iguana iguana were used to elaborate a staging table and to determine the nitrogen excretion pattern during the development. Iguana is a convenient model for having a large clutch of large eggs, allowing an easy handling and a good number of replicates. After oviposition embryonic stages were determined during which urea was the main nitrogen waste. Although iguana is the first lizard studied, the ureotelic pattern is common among the majority of reptilian species so far studied The pergaminaceous shell allows that the eggs double in mass due to water absorption, and the mechanism and how the egg deals with dilution and resultant osmolarity is an interesting issue for future works and comparisons with species of rigid eggshells. There is evidence of heterocronic development of the limbs and the development of iguana is similar to the lizard Anolis sagrei, also from the clade Iguania. Further studies on lizard evelopment are required and the use of similar morphological approach to facilitate comparisons of embryonic events

As células pluripotentes (CPs), em teoria, são capazes de dar origem a todos os mais de 200 tipos de células do organismo. Na natureza, há três tipos de células pluripotentes: células-tronco embrionárias, células germinais embrionárias e células de carcinoma embrionário. As características das CPs têm permitido um importante avanço para a pesquisa básica e apontam uma grande aplicabilidade na medicina regenerativa. No núcleo das CPs existem fatores atuantes responsáveis pela manutenção da identidade pluripotente; dentre eles destacam-se OCT4, NANOG, SOX2, KLF4 e MYC. Muito já se sabe sobre os mecanismos que estes fatores atuam para promover a manutenção da pluripotência celular. Baseados nestes estudos foi possível gerar células de pluripotência induzida (iPSCs). Porém, os mecanismos moleculares que direcionam a indução da pluripotência ainda não estão muito bem esclarecidos. Alguns estudos revelaram que componentes chaves da via NFB estão envolvidos na regulação da pluripotência, bem como na diferenciação e destino celular das células-tronco. Neste estudo, analisamos a participação de componentes da via canônica (RelA e NFB1) e não-canônica (RelB e NFB2) de NFB nos processos de diferenciação e destino celular ou manutenção da pluripotência. Para isto usamos técnicas de PCR quantitativa em Tempo Real (qPCR) e Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP) investigando os papéis das vias canônica e não-canônica de NFB na manutenção da pluripotência e diferenciação de CPs, em um modelo de indução de diferenciação celular mediado por ácido trans-retinóico (atRA) em células de carcinoma embrionário NTera-2. Foram avaliadas as ligações dos fatores de transcrição RelA e RelB nas regiões promotoras dos genes OCT4, SOX2, MYC, KLF4 e GFAP e a regulação transcricional associada. Nossos resultados identificaram que as células não tratadas com atRA apresentaram níveis baixos na expressão dos componentes da via canônica de NFB, RelA e NFB1, e GFAP e quando induzidas à diferenciação por atRA durante 4 dias esses níveis se elevaram. Uma situação oposta foi vista nos componentes da via não-canônica de NFB, RelB e NFB2, e na expressão dos fatores de pluripotência OCT4, NANOG, SOX2 e KLF4, que apresentaram níveis de expressão elevados nas células não tratadas com atRA e sofreram redução com a indução da diferenciação celular. O ensaio de ChIP revelou que RelA liga-se nas regiões de regulação dos genes OCT4, SOX2, KLF4, MYC e GFAP apenas quando a célula está em processo de diferenciação, enquanto RelB se apresentou ligado às mesmas regiões tanto nas células indiferenciadas quanto naquelas induzidas à diferenciação por 4 dias. Com estes dados sugerimos que a via canônica de NFB pode estar relacionada com o processo de diferenciação e destino celular através da regulação negativa executada por RelA e NFB1 nos genes responsáveis pela identidade pluripotente das células aqui estudadas enquanto a via não-canônica de NFB, representada pela ativação de RelB e NFKB2, pode participar na manutenção da pluripotência através da regulação positiva destes mesmos fatores. / Human pluripotent stem cells (hPSCs) are able to give rise to all the 200 cell types of the adult organism. In nature, there are three types of hPSCs: embryonic stem cells, germ line stem cells and embryonal carcinoma cells. hPSCs characteristics have allowed a major advance in basic research, and are thought to have great applicability in regenerative medicine. In the nucleus of hPSCs there are transcription factors responsible for the maintenance of their pluripotent identity. OCT4, NANOG, SOX2, KLF4 and MYC are considered the core pluripotency factors in hPSCs. A great deal of knowledge about the mechanisms that promote and maintain pluripotency has been generated. Based on these studies it was possible to generate induced pluripotent stem cells (iPSCs). However, the molecular mechanisms that drive the induction of pluripotency are not fully understood. Some studies have recently indicated that key components of the NFkB may be involved in regulating pluripotency as well as cell differentiation and cell fate. In this study we analyzed the involvement of components of the canonical (RelA and NFB1) and the non-canonical NFB pathways (RelB and NFB2) in the maintenance of pluripotency, differentiation and cell fate processes. The techniques of quantitative real-time PCR (qPCR) and chromatin immunoprecipitation (ChIP) were used to interrogate the roles of the canonical and non-canonical NFB pathways in maintenance of pluripotency and differentiation in a model of cell differentiation induced by all trans-retinoic acid (atRA) on embryonal carcinoma cells NTera-2. The transcription factors RelA and RelB occupancy in the promoter regions of OCT4, SOX2, KLF4, MYC and GFAP, and the transcriptional regulation associated were evaluated. Our results showed that undifferentiated cells exhibited low expression levels of canonical NFB pathway components, RelA and NFB1, while cells induced to differentiate for 4 days exhibited downregulated expression of these factors. In the other hand, the non-canonical NFB pathway components, RelB and NFB2, and the pluripotency factors OCT4, NANOG, SOX2 and KLF4 were expressed in higher levels in undifferentiated cells, and were downregulated upon the differentiation process. ChIP assay revealed that RelA binds to the regulatory regions of OCT4, SOX2, KLF4, MYC, and GFAP only when cells are induced to differentiate, while RelB was found bound to the same regions in both undifferentiated and differentiated cells. This data suggests that the canonical NFB pathway may be associated to differentiation and cell fate processes by downregulation of genes responsible for the pluripotent identity, and that the non-canonical NFB pathway may act in the maintenance of pluripotency through the upregulation of the same factors.

São preocupantes as doenças que tem o Aedes aegypti como vetor. A elevada competência vetorial deste mosquito, bem como sua antropofilia e adaptação ao ambiente urbano, geram habitats favoráveis e torna sua prevenção uma árdua tarefa considerando os recursos disponíveis. O controle atual enfatiza o mosquito, mas ainda há espaço para o aprimoramento da sua efetividade e sucesso, o que torna fundamental o maior conhecimento sobre este inseto. O Brasil apresenta condições favoráveis para a disseminação do mosquito. Diante do exposto este estudo visa estudar a vigilância entomológica do Aedes aegypti no Município de São Paulo no ano de 2013, bem como descrever as características morfológicas, morfométricas da fase de ovo e seu desenvolvimento embrionário. A análise da vigilância entomológica no Município de São Paulo, foi realizada a partir de dados secundários oriundos da Secretaria de Saúde do município. Já a etapa envolvendo a descrição morfológica, morfometrica e o desenvolvimento embrionário foi realizada a partir do material biológico cedido pelo Instituto de Ciências Biomédicas-USP utilizando recursos, tais como a Microscopia Eletrônica de Varredura, Microscopia Eletrônica deTransmissão e Microscopia Confocal. Os indicadores entomológicos Índice de Breteau (IB), Índice de Infestação Predial (IP) e Índice por Tipos de Recipientes Positivos (ITR), tiveram comportamento similares entre si nos anos estudados. Já o ITR revelou que o principal tipo de recipiente positivo para presença do vetor foi o prato/pingadeira para planta, seguido do vaso de planta, ou seja, os principais recipientes positivos encontram-se no ambiente domiciliar. Na avaliação do padrão morfológico e da mensuração acerca do comprimento, largura, razão comprimento/largura (índice) e diâmetro da micrópila constatou-se diferenças significantes entre as duas populações de ovos estudados, para cada um dos atributos morfométricos avaliados. Já a morfologia e o desenvolvimento embrionário apontam exocórion de grande resistência e de difícil permeabilidade, dificultando o acesso ao embrião. Considera-se fundamental a avaliação integrada dos dados oriundos do levantamento entomológico e de pesquisas quanto a características deste vetor nas diversas fases do ciclo biológico, pois somente desta maneira é possível investir em áreas específicas e promissoras para elaboração de políticas públicas efetivas e com poder transformador da realidade. / The diseases that have Aedes aegypti as a vector are worrisome. The high vectorial competence of this mosquito, as well as its anthropophilia and adaptation to the urban environment, generate favorable habitats and makes its prevention an arduous task considering the available resources. The current control emphasizes the mosquito, but its effectiveness and success in containing its dispersion still needs to improve, which makes fundamental the greater knowledge about this insect. Brazil presents highly favorable conditions for the spread of the mosquito. In view of the above, this study aims to study the entomological surveillance of Aedes aegypti in the city of São Paulo in 2013, as well as the morphological, morphometric characteristics of the egg phase and its embryonic development. The analysis of entomological surveillance was based on secondary data from health secretariats. The morphology, morphometry and embryonic development stages were performed using the biological material provided by the Institute of Biomedical Sciences of the University of São Paulo using resources such as Scanning Electron Microscopy (SEM), Transmission and Confocal. The entomological indicators Breteau Index (IB), Infestation Index (PI) and Index by Types of Positive Containers (ITR), had similar behavior among themselves in the years studied, since the ITR revealed that the main type of positive container for presence of the vector was dish / drip tray for plant followed by plant pot, the main positive containers are in the home environment. In the evaluation of the morphological pattern and measurement on length, width, length / width ratio (index) and diameter of the micropyle, it was observed significant differences between the two egg populations for each of the evaluated morphometric attributes. The morphology and embryonic development point to exochorion of big resistance and of difficult permeability, making difficult the access to the embryo. It is considered fundamental the integrated evaluation of data from the entomological survey and research on the characteristics of this vector in the various phases of the biological cycle, since only in this way is it possible to invest in specific and promising areas for the elaboration of effective public policies with transformative power of reality.

A membrana amniótica humana vem assumindo um papel de extrema importância na medicina regenerativa nos últimos anos, principalmente na área de dermatologia e oftalmologia, sendo seu uso promissor no tratamento de doenças cuja terapêutica atual é pouco eficaz. Além disso, na membrana amniótica humana encontram-se células-tronco mesenquimais, que apresentam plasticidade e vem sendo aplicadas para a regeneração de tecidos. Entretanto, muito pouco se sabe sobre a capacidade plástica e o uso de células-tronco de membrana amniótica de animais, já que a literatura a este respeito, não é tão ampla quanto à de humanos. Neste projeto estabelecemos a cultura de células-tronco de membrana amniótica (MA) de fetos caninos, caracterizando as células in vitro e in vivo. As células de MA foram obtidas a partir de um procedimento cirúrgico de histerectomia em cadelas prenhas, durante campanhas de castração da prefeitura da cidade de São Paulo. As células de MA foram caracterizadas in vitro, observando-se características semelhantes a outras células-tronco mesenquimais. Porém, quando foi analisado o seu comportamento in vivo, observamos a formação de um tumor de crescimento rápido, aproximadamente um mês, após o inóculo dessas células em 10 camundongos imunossuprimidos nude, sendo o tumor identificado histologicamente como um carcinoma embrionário. Diante do comportamento biológico formando um tumor in vivo, inferimos que células-tronco provenientes de membrana amniótica de cães não devem ser usadas para aplicação com objetivos terapêuticos em animais, pelo menos até que novas coletas sejam realizadas para que se possa confirmar ou não este comportamento. / The human amniotic membrane has taken an extremely important role in regenerative medicine in recent years, especially in dermatology and ophthalmology, and its promising use in treating diseases for which current therapy is ineffective. In addition, the amniotic membrane has human mesenchymal stem cells, which exhibit plasticity and have been applied to tissue regeneration. However, very little is known about the plastic capacity and the use of stem cells from amniotic membrane of animals, since the literature in this regard, it is not as broad as those of humans. In this project we established a culture of amniotic stem cells of dog, characterizing these cells in vitro and in vivo. The cells were obtained from a surgical procedure for hysterectomy in pregnant bitches, during castration\'s campaigns of the São Paulo\'s municipality. The cells were characterized in vitro, observing characteristics similar to other mesenchymal stem cells. In spite of their behavior, in vivo we observed the formation of a fast-growing tumor about a month after the inoculation of these cells in 10 immunosuppressed mice, being the tumor identified histologically as an embryonic carcinoma. Considering the biological behavior of forming a tumor in vivo, we infer that stem cells from amniotic membrane of dogs should not be used for application for therapeutic purposes in animals, at least until other collections are carried out so that it can be confirmed or not.

O saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião durante o período em que a placenta verdadeira ainda não está completamente formada. É responsável pela hematopoiese, pois dele se desenvolvem os primórdios das células sanguíneas, bem como parte do sistema circulatório primitivo do embrião. Tivemos como objetivo caracterizar a área transicional do saco vitelino para o intestino primitivo através de análise macroscópica, microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e reação imunohistoquímica para detecção de células germinativas (Oct-4). Foram realizados cortes seqüenciais de todos os embriões para permitir a visualização da estrutura como um todo. Nas amostras obtidas, pudemos observar a presença do saco vitelino com a área de conexão com intestino primitivo composto por inúmeras ilhotas vasculares que correspondem aos vasos envolvidos pelas células vitelínicas e células mesenquimais. No interior dos vasos identificamos hemangioblastos em grande quantidade. A camada correspondente ao mesênquima é delgada e com células alongadas e endoderma da membrana vitelínica é composto por células endodérmicas, grandes, uni ou binucleadas. Tal arranjo celular se assemelha a uma glândula devido a sua arquitetura em ilhas vasculares somado às camadas teciduais. O epitélio do intestino primitivo inicia sua diferenciação com células colunares estratificadas e bordadura em escova seguido de células mesenquimais indiferenciadas. A área transicional entre o saco vitelínico e o intestino primitivo é estreita em relação à luz destas duas estruturas com células de formato irregular, constituindo um delicado revestimento no lúmen contendo hemangioblastos. No mesênquima da área transicional inúmeros e pequenos capilares foram observados com hemangioblastos em seu interior. Em embriões e fetos submetidos à imunohistoquímica, verificamos células reativas como o metanefro, gônadas, parênquima hepático e saco vitelino. / The yolk sac is the main source of embryo nutrition during the period that true placenta are not still formed and responsible by hematopoieses because from it were developed the blood cells, as a part of embryo primitive circulatory system. We aimed to characterize the transitional area between the yolk sac and the primitive intestine by light microscopy, transmission electron microscopy and detection of germ cell lines by Oct-4 immunohistochemistry. Were done in all embryos serial sections to permit the identification for all structures. Were possible identify the yolk sac connection with primitive intestine composed by many blood islet corresponding to relation with yolk and mesenchymals cells. Inside the vessels were identified hemangioblasts. The layer corresponding to mesenchyme is thin and with elongated cells and the vitellinic membrane endoderm is composed by large, uni or binucleate endodermic cells. This shape is similar to a gland related to their architecture, vessels islets and tissue layers. Primitive intestine epithelium begins their differentiation with stratified columnar cells and undifferentiated mesenchymals cells. This transitional area is thin related to their lumen with irregular shape and constituted by delicate lumen basement and hemangioblast. Inside the mesenchyme there are many smaller capillaries observed with hemangioblast in it. Embryos and fetus submitted to immunohistochemistry and were verified positive cells like metanefrons, gonads, hepatic parenchyma and yolk sac.

Ao contrário de outras espécies de animais domésticos, na égua os embriões descem tardiamente para o útero, creditando-se isto a uma dependência da PGE2. Conseqüentemente, são recuperados embriões que já estão em fases mais avançadas de desenvolvimento (blastocisto e blastocisto expandido) e com um tamanho que normalmente ultrapassa os 300 micrômetros quando a colheita é realizada após o 6º dia. Isto reflete em um insucesso nos protocolos de criopreservação embrionária. Em razão deste problema, testou-se a eficácia da aplicação da PGE2 por dois métodos (experimento I) e a eficácia da PGE1 e do análogo misoprostol (experimento II) na promoção da recuperação antecipada de embriões. Os dois experimentos foram realizados em éguas superestimuladas com Extrato de Pituitária Eqüina. No primeiro experimento, no 4º dia após a ovulação (D4), duas éguas foram submetidas à laparoscopia pela fossa paralombar para a deposição de 0,2 mg de PGE2 em gel sobre a tuba uterina e em outras três éguas a PGE2 foi administrada topicamente sobre a junção útero-tubárica (JUT) com auxílio de uma pipeta flexível (método não-cirúrgico). Vinte e quatro horas após a deposição do gel (D5), para ambos os métodos, foi realizada uma primeira tentativa de recuperação embrionária sendo que não foram recuperados embriões. Uma nova tentativa foi realizada entre o D6-6,5, sendo que desta vez, foram recuperados dois embriões das cinco éguas (40%), um de cada grupo. No segundo experimento, duas aplicações de 0,2 mg de PGE1 100% (n=5) ou de misoprostol 1% (n=5) diluídos em gel foram realizadas na região da JUT, no D4, pelo método não-cirúrgico. Não foram recuperados embriões no D5 das éguas que receberam PGE1 (0/5) e apenas de uma delas foram recuperados dois embriões no D6-6,5. Do grupo que recebeu misoprostol recuperaram-se três embriões de diferentes éguas no D5 (3/5), sendo uma mórula e dois embriões de sete dias provenientes de ovulações não-sincrônicas. No D6, entretanto, foram recuperados oito embriões de todas as éguas (5/5) que receberam misoprostol, resultado que é significativamente superior (P=0,048) ao do grupo que recebeu PGE1 (1/5). Apesar do pequeno número de animais, foram recuperados 11 embriões das 12 ovulações que ocorreram nas éguas do grupo misoprostol, todos com diâmetro igual ou inferior a 300 micrômetros. No último experimento detectou-se qualitativamente por imuno-histoquímica os diferentes subtipos de receptores (EP1 a EP4) para as PGE no útero, na JUT e nos diferentes segmentos da tuba uterina das éguas, em todas as fases do ciclo estral e durante dois períodos da gestação, porém, há uma menor quantidade (P< 0,0001) de receptores do subtipo EP1 em comparação aos demais subtipos. Os resultados obtidos por imuno-histoquímica indicam que realmente parece ser efetiva a administração tópica de PGE na JUT pelo método não-cirúrgico e os resultados obtidos nos dois primeiros experimentos demonstram que apesar de não antecipar a descida do embrião eqüino para o útero, o protocolo utilizando misoprostol 1% em éguas superovuladas mostrou-se eficaz em aumentar de maneira significativa a recuperação de embriões de seis dias com características desejáveis para a criopreservação. / Differently of any other ways of occurrence among the domestic animals, concerning mares, their embryos migrate in a delayed lapse of time to their uterus due to a correlation to the PGE2. Consequently, one extracts embryos which are already into some more advanced phase of their development (blastocyst and expanded blastocyst) normally exceeding 300 micrometers when their extraction is performed after the 6th day. This fact results into a failure concerning the protocols of embryonic cryopreservation. Regarding this problem, the effectiveness of applying PGE2 using two different methods (experiment I) and the effectiveness of PGE1 and the analogous misoprostol (experiment II) for promoting the anticipated extraction of the embryos, were evaluated. Both experiments were carried on some superstimulated mares using Equine Pituitary Extract. Experiment I: after the 4th day after the ovulation (D4), two mares were submitted to laparoscopy through the flank for depositing 0.2mg of PGE2 gel on the oviduct; to three other mares PGE2 was topically applied on the uterus-tube junction (UTJ) with the aid of a flexible pipette (not-surgical method). Twenty and four hours after the gel disposal (D5) regarding both methods, a first attempt for extracting the embryos was unsuccessfully performed. Another attempt was performed between the D6-6.5, and this time two embryos were extracted from the five mares (40%), one of each group. Experiment II: two applications of 0.2mg of PGE1 gel 100% (n=5) or misoprostol gel 1% (n=5) were accomplished on the UTJ region, at D4, through the not-surgical method. There werent any extracted embryos at D5 from the mares which had received PGE1 (0/5) and there were just two embryos extracted from a mare at D6-6.5. From the group which had received misoprostol three embryos from different mares were extracted at D5 (3/5), being a morula and two embryos aged seven days, from not-synchronous ovulations. However, at D6, eight embryos were extracted from all of the mares (5/5) which have received misoprostol, a significantly superior result (P=0.0048) comparing to the group which received PGE1 (1/5). Although the small number of animals, there were extracted eleven embryos from the twelve ovulations into the group which received misoprostol, all of them with a diameter 300 micrometers. In the last experiment it was qualitatively detected by immunohistochemistry the different receptor subtypes (EP1 to EP4) for the PGEs in the uterus, on the UTJ and in the different segments of the oviduct, in all stages of the estrous cycle and during two periods of gestation; however, there is a smaller amount (P<0.0001) of the receptor subtype EP1 in comparison to the other subtypes. The obtained results by immunohistochemistry genuinely indicate that the topical application of PGE on the UTJ through a not-surgical method seems effective and the obtained results in the first two experiments show that even though it doesnt anticipate the embryos migration to the uterus, the protocol using misoprostol 1% in superstimulated mares was significantly effective for increasing the extraction of embryos aged six days with desirable characteristics for the cryopreservation.

Descrições morfológicas são os primeiros passos para compreender a fisiologia dos organismos e seus sistemas. A biologia do desenvolvimento e a ontogenia da hematopoese de serpentes são pouco conhecidas, sendo a hematopoese embrionária inteiramente desconhecida. Os principais objetivos deste trabalho foram caracterizar o desenvolvimento e a hematopoese embrionária da serpente falsa-coral Oxyrhopus guibei (Dipsadidae: Xenodontinae) a partir da oviposição, através da análise de caracteres morfológicos externos para a classificação dos estágios de desenvolvimento embrionário, de 30 embriões com 1-3, 15, 25, 30, 45, 65 e ~75 dias de ovipostura (d.o.) (quando eclodem), e de cortes histológicos de 29 ovos (ou embriões) de 1-3, 15, 25, 30, 45, 60d.o. e de filhotes do dia da eclosão e com uma semana de nascimento para a caracterização da hematopoese embrionária. Os embriões de 1-3d.o. foram classificados entre os estágios (st.) 17 e 23, com ausência da formação ocular até a presença de olhos sem pigmentação; de 15d.o. no st. 26, com olhos pigmentados e ductos endolinfáticos calcificados; de 25d.o. no st. 31, com escamas no corpo não pigmentado e a musculatura dos flancos não fusionada na linha mediana ventral; de 30d.o. entre os st. 31 e 33, que em adição à formação descrita no período anterior, apresentam membrana palpebral completa e musculatura fusionadas na linha mediana ventral na região pré-cardíaca; de 45d.o. entre os st.34 e 36, com musculatura completamente fusionada na linha mediana ventral e começando a desenvolver um padrão de pigmentação; de 65d.o. no st. 37 (último da tabela) com o padrão de pigmentação bem desenvolvido de coral em tríades, típico da espécie, e com o dente do ovo, e com ~75d.o. os ovos eclodiram com filhotes sadios, que apresentam cicatriz umbilical e o dente do ovo permanece presente até dois dias após a eclosão. A hematopoese em ovos de 1-3 e 15d.o. foi caracterizadas como hematopoese extraembrionária, ocorrendo nos vasos das membranas extraembrionárias e na fenda vitelínica, e hematopoese intraembrionária, na região AGM (aorta gonadal mesonéfrons), principalmente no interior da artéria aorta dorsal, que continua como local hematopoético embrionário até no período de 30d.o., porém com estruturas mais diferenciadas; com 45d.o. o principal local hematopoético passa a ser medula óssea, com foco hematopoético de multi-linhagem sanguínea a partir de 60d.o., nos seios vertebrais e medula costal, constituindo o local hematopoético definitivo. Foi observada a atividade hematopoética junto ao tecido renal, com o desenvolvimento da região AGM, entre os períodos de 15 a 30d.o., o timo e baço apresentam diferenciação linfocítica, observados a partir de 30 e 45d.o., respectivamente e o fígado não apresenta hematopoese embrionária. Esta é a primeira descrição do desenvolvimento embrionário de uma serpente Caenophidia ovípara e da hematopoese embrionária de Serpentes, contribuindo para o conhecimento da fisilogia destes processos e indicando a necessidade de estudos tanto para um melhor entendimento do desenvolvimento embrionário, quanto para a compreensão da ontogenia da hematopoese das serpentes. / Morphological descriptions are the first steps to understand the physiology of organisms and their systems. Developmental biology and ontogeny of hematopoiesis of snakes are poorly known, and the embryonic hematopoiesis is completely unknown. The main goals of this study were to characterize the embryonic and hematopoiesis development of the false coral snake Oxyrhopus guibei (Dipsadidae: Xenodontinae) since oviposition. Analysis of external morphological characters regarding the classification developmental stages for developmental stages classification has been made for 30 embryos with 1 -3, 15, 25, 30, 45, 65 and ~ 75 days after oviposition days (o.d.) (when hatched), and histological sections of 29 eggs (or embryos) from 1-3, 15, 25, 30, 45, 60o.d. and one day neonates and one week after birth for the characterization of embryonic hematopoiesis. The embryos with 1-3o.d. were ranked between 17 and 23 stages (st.), with the absence of eye formation to the presence of unpigmented eyes; with 15o.d. in 26 st., with pigmented eyes and calcified endolymphatic duct; with 25o.d. in 31 st., with unpigmented body scales and muscles of the flanks not fused in the midline, with 30o.d. between 31 and 33 st., which in addition to the preceeding form, have full eyelid membrane and muscles fused at midline in the pre-cardiac region; with 45d.o. between 34 and 36 st., with muscles completely fused in the midline and beginning the development of pigmentation pattern, with 65o.d. in 37 st. (last stage of table) with the distinctive pigmentation tricolor-triad pattern , and the egg tooth, and ~ 75 d.o. health newborns have hatched, exhibiting the umbilical scar and the egg tooth up to two days after hatching. The hematopoiesis in eggs of 1-3 and 15o.d. was characterized as extraembryonic hematopoiesis, occurring in the vessels of extraembryonic membranes and in yolk clef, and intraembryonic hematopoiesis, in the AGM (gonad mesonefron aorta), mainly within the dorsal aorta, which continues as the embryonic hematopoietic site until the 30o.d., although with better differentiated structures; wth 45o.d. the bone marrow turns the main hematopoietic site, and with a hematopoietic focus of multi-lineage blood beginning in the 60d.o. at vertebral sinus and the ribs marrow, consisting the definitive hematopoietic sites. Hematopoietic activity was observed with the kidney tissue, through development of the AGM region, between the periods of 15 to 30d.o., thymus and spleen lymphocyte differentiation have been observed at 30 . and 45o.d., respectively, and the liver does not displays embryonic hematopoiesis. This is the first description of embryonic development of an oviparous Caenophidia snake and of the embryonic hematopoiesis in Serpentes, contributing to the knowledge the physiology of these processes and demonstrating the need of further studies for a better understanding of both embryonic development and the ontogeny snake.

No intuito de descrever a evolução do desenvolvimento do concepto bubalino entre 10 e 60 dias de gestação, esse estudo utilizou a metodologia de mensuração por Crow rump para revelar a idade estimada de 96 embriões e fetos coletados no Matadouro municipal de Macapá, no estado do Amapá entre os anos de 2006 a 2008. Os parâmetros utilizados consistiram em medidas de comprimento (crânio caudal) e peso utilizando-se balança eletrônica de precisão. Para visualização macroscópica foram feitas fotografias, e a microscopia eletrônica de varredura auxiliou na identificação de inúmeras estruturas externas dos embriões. Foram realizados cortes histológicos de 5µm os quais foram corados em HE e picrosirius, e submetidos a técnicas de imunohistoquimica para detecção de Oct4, PCNA e vimentina. Nossos resultados revelam que embriões de mamíferos até a 5° semana de gestação são muito semelhantes aos de outras espécies de mamíferos já estudados. Similaridades entre bovinos e bubalinos persistem com exceção dos estágios fetais onde aparentemente búfalos se desenvolvem mais rapidamente que bovinos. Em conclusão, o estudo indica características importantes que podem ser utilizadas para verificar a viabilidade de embriões de búfalos e auxiliar avaliações em exames complementares como os de ultrassonografia, e também indicam a presença de importantes sítios de células pluripotentes em regiões diferentes do embrião dependendo do estágio de desenvolvimento em que o mesmo se encontra. / The aim of this study was to describe the developmental changes in the bubaline conceptus from 10-60 days of gestation using the Crown rump methodology to diagnostic the estimated age of those 96 embryos and fetuses obtained at Matadouro Municipal de Macapá, on Amapá state, from 2006 until 2008. Parameters used were cranio-caudal length (CR) and weight. For macroscopic view photographies were done, Scanning electron microscopy helps to identify inumerous external structures of the embryos. Histotogic section of 5µm were done and stained using Hematoxilin-Eosin, picrosirius, and also subjected to immunohistochemistry for Oct4, PCNA and vimentin were evaluated. Transmission electron microscopy was used in fetal membranes to describe it better. The obtained results revealed that mammal embryos until 5th weeks of gestation has to much similar characteristics to others studied species. Similarities between bovine and bubaline persist; except on fetal stages that buffalos seems develop faster than bovine ones. In conclusion, the overall data indicated the important characteristics that can be evaluated to verify the viability of buffalo embryos and help the evaluations of ultrasonographic exams, also identify the presence of important regions with pluripotente cells that changes according to the stage of the embryo development.