Orientador: Lúcia Elvira Alvares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T00:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sensiate_LucimaraAparecida_M.pdf: 8827752 bytes, checksum: 66afd653eb6cf0a2ff14cc79c158cfc1 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Dentre as moléculas envolvidas na sinalização molecular durante o desenvolvimento, têm papel de destaque aquelas envolvidas nas vias de sinalização Wnt e TGF-ß. Trabalhos demonstram que as proteínas Dapper (Dpr) são capazes de modular tais vias de sinalização. A família de genes Dpr é constituída por três componentes: Dpr1, Dpr2 e Dpr3 em peixe-zebra, camundongo e humanos e Dpr1 e Dpr2 em aves. Os genes Dpr têm sido associados a movimentos morfogenéticos durante a gastrulação, especificação do mesoderma, morfogênese do encéfalo, coração e olhos. Apesar da grande relevância desta família gênica para o desenvolvimento, pouco se sabe sobre o padrão de expressão de tais genes em mamíferos e aves. Este projeto de pesquisa teve como objetivo principal a caracterização do padrão de expressão dos genes Dpr ao longo do desenvolvimento embrionário de camundongo e com maiores detalhes, a caracterização do padrão de expressão dos genes Dpr durante a ontogênese dos membros em embriões de camundongo e galinha. O padrão de expressão foi determinado através de ensaios de hibridação in situ whole mount e em cortes de parafina. Para permitir comparações, hibridações in situ foram realizadas com marcadores para o desenvolvimento de cartilagem, tendão e músculo. Como resultado, observamos que os genes Dpr são expressos em seis domínios chave (tubérculo genital, membros, focinho, somitos, hérnia umbilical fisiológica e encéfalo) durante o desenvolvimento de camundongo. A análise do padrão de expressão sugere fortemente o envolvimento dos genes Dpr na ontogênese dos membros em embriões de galinha e camundongo. Contudo, a expressão destes genes é bastante diferente entre estes dois organismos. O gene Dpr1 parece estar envolvido com a formação de elementos da articulação e do pericôndrio durante o desenvolvimento dos membros em embriões de camundongo e galinha. O gene Dpr2 possui expressão bastante difusa durante o desenvolvimento dos membros em embriões de camundongo. Em contrapartida, na galinha, Dpr2 possui expressão localizada no blastema dos dígitos e articulações do autópode. O gene Dpr3 possui expressão difusa durante o desenvolvimento dos membros. Apesar disto, os domínios de expressão identificados sugerem que Dpr3 esteja relacionado com o desenvolvimento dos dígitos e articulações / Abstract: Among the molecules involved in molecular signaling during development, those involved in the Wnt and TGF-ß pathways are particularly important. Studies have shown that the Dapper protein family (Dpr) can modulate Wnt and TGF-ß signaling. The Dpr gene family consists of three members: Dpr1, Dpr2 and Dpr3 in zebrafish, mice and humans, and only two: Dpr1 and Dpr2, in birds. Dpr genes have been associated with morphogenetic movements during gastrulation, mesoderm specification, morphogenesis of the brain, heart and eyes. Despite the great relevance of this gene family during development, little is known about the expression pattern of the Dpr genes in mammals and birds. This research project had as main aims to characterize the expression pattern of the Dpr genes during mouse embryonic development and, in more detail, their expression during limb ontogenesis in mouse and chicken embryos. The expression pattern was determined by in situ hybridization in whole mount and in paraffin sections. To allow comparisons, were performed in situ hybridization with markers for the development of cartilage, tendon and muscle. Our results indicate that Dpr genes are expressed in six key areas (genital tubercle, limbs, nose, somites, brain and physiological umbilical hernia) during development of mouse. The expression pattern in the limbs strongly suggests that the Dpr genes work in limbs development in chicken and mouse embryos. However, the expression pattern of these genes is different in these two organisms. Dpr1 seems to be involved in joint and perichondrium formation during limb development in mouse and chicken embryos. For Dpr2, the expression was diffuse during limb development in mouse embryos. In contrast, chicken Dpr2 has localized expression in the digits and joints. Dpr3 gene has diffuse expression during limb development. However, its expression domains suggest that Dpr3 is related to digits and joints development / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Carlos Alberto Petta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T05:22:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cossiello_RaquelDiFalco.pdf: 3774222 bytes, checksum: 96b4cbfa6f25f58d8240f552b5c83617 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Objetivo: comparar os efeitos de quatro diferentes meios de cultura na morfologia dos zigotos e embriões. Materiais e métodos: estudo retrospectivo conduzido no Centro de Reprodução Humana de Campinas, em que 2.289 embriões de 319 ciclos de ICSI foram avaliados de setembro de 2006 a setembro de 2008. O protocolo longo foi usado para estimulação ovariana em todos os casos. Todos os oócitos foram cultivados em dois meios diferentes. O meio HTF (Irvine Scientific) foi usado como meio-padrão, enquanto que os meios Universal IVF Médium (Medicult), Global (LifeGlobal) e IVF-30 (Vitrolife) foram usados como secundários. A separação dos oócitos em meios diferentes foi realizada alternadamente após ICSI. A presença e a posição de pronúcleos e Nuclear Precusror Bodies (NPBs) foram checadas 18 a 20 horas após ICSI. Baseado na classificação descrita por Gianaroli et al., os zigotos foram identificados como: (A1) pronúcleos justapostos e centralizados com NPBs grandes e alinhados; (A2) pronúcleos justapostos e centralizados com NPBs grandes e dispersos. Os embriões foram avaliados 44 a 46 horas após ICSI, de acordo com o número de blastômeros, porcentagem de fragmentação e multinucleação. Os embriões considerados top apresentaram quatro blastômeros regulares, fragmentação menor que 20% do volume embrionário e blastômeros não multinucleados. Para a análise dos dados foram utilizados Z-test, odds ratio simples e múltiplo através de regressão logística com seu respectivo intervalo de confiança a 95%. Resultados: quando a classificação dos zigotos foi analisada, o meio IVF-30 mostrou maior porcentagem (55,2%) de zigotos A1+A2, em relação ao HTF, Global e Universal IVF Medium (49,1%, 44,7% e 44,2%, respectivamente). A porcentagem de embriões top foi significativamente maior no meio Global (40,4%) comparado com HTF (21,1%), IVF-30 (25,0%) e Universal IVF Medium (11,1%). No segundo dia de desenvolvimento, Medicult produziu mais embriões com três células em relação aos outros meios que produziram mais embriões com quatro células. Conclusão: Houve diferenças significativas entre os quatro meios de cultura sobre a morfologia dos zigotos e a morfologia embrionária. IVF-30 (Vitrolife) resultou em maior número de zigotos com pronúcleos centralizados e nucléolos justapostos e dispersos. Global (LifeGlobal) sustentou maior formação de embriões top no dia 2 e maiores taxas de clivagem em relação aos demais meios / Abstract: Objective: compare the effects of four different culture media on the quality of zygotes and embryos. Methods: This retrospective study, performed at the Center for Human Reproduction of Campinas-Brazil analyzed 2289 embryos were assessed from September 2006 to September 2008. Long protocol was used for ovarian stimulation in all cases. The oocytes of each patient were cultivated in two different culture media. The medium HTF - Irvine was set as the default for all cycles and IVF Medium - Medicult, GGG 20 - Global and IVF 30 - Vitrolife defined as secondary media. The sibling oocytes were divided in the two culture media after ICSI. The confirmation of fertilization and classification as described by Gianaroli were evaluated 18-20 hours after ICSI. On the second day (day 2) of development, the embryos were evaluated according the number of cells, percentage of fragmentation and number of nuclei. On day 2, the embryos that had four cells with less than 20% of fragmentation and were mononucleated embryos were classified as Top. Z-test and Odds ratios were used for statistical analysis. Results: IVF-30 showed a higher percentage (55.2) of zygotes A1 + A2 when compared to HTF, Global and Universal IVF Medium media (49.1%; 44.7%; 44.2% respectively) The percentage of Top embryos was significantly higher in Global medium (40.4%) compared to HTF (21.1%), IVF-30 (25.0%) and Universal IVF medium (11.1%). On day 2 Universal IVF Medium produced more embryos with three blastomeres when compared to other media that produced more embryos with four blastomeres. Conclusions: The use of IVF- 30 medium resulted in a higher number of zygotes with centralized pronuclei with juxtaposed or scattered nucleoli. Meanwhile, Global medium produced a greater number of morphologically good embryos (TOP) and higher cleavage rate on the second day of development / Universidade Estadual de Campi / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-22T11:15:04Z No. of bitstreams: 2 Tese - Mariana Alves Mesquita - 2017.pdf: 2201375 bytes, checksum: 148d30a33a0e8c8b215e89ab657bd8d2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-22T11:15:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Mariana Alves Mesquita - 2017.pdf: 2201375 bytes, checksum: 148d30a33a0e8c8b215e89ab657bd8d2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-22T11:15:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Mariana Alves Mesquita - 2017.pdf: 2201375 bytes, checksum: 148d30a33a0e8c8b215e89ab657bd8d2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-01 / Two experiments were conducted at North Carolina State University to elucidate the hypothesis that exposing broiler embryos to monochromatic lights during incubation period may influence embryonic growth and development, improving incubation traits and posthatching period. In the first experiment, intermittent green light, continuous green light, intermittent red light and dark were evaluated. In addition, the influence of egg position in the tray was also tested. In the second experiment, monochromatic green light exposure was evaluated during different phases of incubation period. Treatments were: 1) 21d of incubation in the dark; 2) 21d of incubation with green light; 3) dark until E5 and continuous green light until hatch; 4) continuous green light until E5 and dark until hatch; 5) dark until E18 and continuous green light until hatch; 6) continuous green light until E18 and dark until hatch. Machine temperatures were adjusted daily in order to obtain optimal eggshell temperature (99,5 a 100,4°F) during the whole incubation period. In the first trial, embryo mortality in intermediate phase was higher in the group exposed to intermittent green light. Relative proventriculus weight was influenced by light stimuli, and the group that was not exposed to light showed the greatest organ development. Feed intake was also influenced by light treatments at 21 d of age. In the second trial, exposing embryos to continuous green light at different moments during incubation period affected the percentage of hatch and hatch of fertile. In addition, dead pipped was higher in the group exposed to light until E18. Liver weight was higher in chicks incubated in the dark during 21 d. Feed conversion ratio at 35 and 42 days was also influenced by light treatments, and the group that was not exposed to light during the whole incubation period had the lower feed conversion ratio. Significant interaction was observed between light stimuli and sex for breast yield. Male chicks that were light stimulated until E18 had the lowest breast yield. Comparing sexes, the highest breast yield was observed for females that were light stimulated until E18 during incubation. In conclusion, with incubation conditions that were established during the experiments, exposing broiler embryos to monochromatic lights did not promote benefits in incubation traits and also did not influenced chick growth and development in posthatching period. / Foram realizados dois ensaios experimentais na North Carolina State University com o objetivo de elucidar a hipótese de que a exposição de embriões de frangos de corte à luz monocromática durante o período de incubação pode influenciar o crescimento e desenvolvimento embrionário promovendo melhorias no rendimento da incubação e no período pós-eclosão. No primeiro experimento avaliou-se a estimulação com luz monocromática verde intermitente, verde contínua, vermelha intermitente e ausência de luz. Foi testado também a influência da posição dos ovos no interior da bandeja em relação a fonte de luz. No segundo experimento, avaliou-se a exposição deovos à luz verde monocromática durante diferentes fases do período de incubação. Os tratamentos estudados foram: 1) 21 dias de incubação no escuro; 2) 21 dias de incubação com luz verde contínua; 3) escuro até o quinto dia de desenvolvimento embrionário (E5) e luz verde contínua até o nascimento; 4) luz verde contínua até E5 e escuro até o nascimento; 5) escuro até o décimo oitavo dia de desenvolvimento embrionário (E18) e luz verde contínua até o nascimento; 6) luz verde contínua até E18 e escuro até o nascimento. As temperaturas das máquinas, em ambos os experimentos foram reguladas diariamente com o objetivo de se obter uma temperatura ótima da casca do ovo (99,5 a 100,4°F) durante todo o período de desenvolvimento embrionário. No primeiro experimento, o percentual de mortalidade embrionária na fase intermediária foi superior no tratamento exposto à luz verde intermitente. O peso relativo do proventrículo foi influenciado pelos estímulos luminosos, sendo que o grupo que não foi exposto a luz, o que apresentou maior desenvolvimento do órgão. O consumo de ração também foi influenciado pelos tratamentos estudados aos 21dias de idade. No segundo experimento, a exposição à luz verde contínua em diferentes momentos do período de incubação prejudicou os percentuais de eclosão e eclosão sobre férteis. Além disso, o percentual de bicados mortos foi superior no tratamento exposto à luz verde contínua até E18. O peso relativo do fígado foi superior nas aves que permaneceram no escuro durante os 21 dias de incubação. A conversão alimentar aos 35 e 42 dias de idade também foi influenciada pelos tratamentos estudados, sendo que o grupo que não foi exposto à luz durante todo o período de incubação o que apresentou melhor conversão alimentar. Houve interação entre estímulo luminoso e sexo para rendimento de peito, sendo que para machos o menor rendimento de peito foi observado no grupo que recebeu estímulo luminoso até E18. Comparando-se os sexos, constatou-se maior rendimento para fêmeas oriundas de incubação com estímulo luminoso até E18. Concluiu-se que nas condições de incubação estabelecidas durante a realização dos experimentos, a exposição de embriões de frangos de corte à luz monocromática não promoveu benefícios no rendimento da incubação e também não favoreceu o crescimento e desenvolvimento das aves no período pós-eclosão.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:47:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anelise_Carradore_Lutz.pdf: 653471 bytes, checksum: 13b467a27a78c3b2a37a5189e6c50cfe (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / The catfish (Rhamdia branneri) is a native fish endemic to the Iguaçu River that has potential to grow due to their husbandry characteristics, due to this the present work aims to describe its initial development, with a view to commercial exploitation and management for conservation species. The study was conducted at the Experimental Station of Ichthyological Studies in Plant Ney Braga, reservoir Segredo, between January and February 2012. Spawnings were conducted, collected and analyzed 438 eggs, 394 individuals in the larval stage-yolk, 35 in pre-flexion, flexion 15 in, 13 in post-flexion and 1 juvenile. The eggs are yellow, non-adhesive and spherical, have a double membrane, diameter 1.13 mm, the perivitelline space has an average size of 0.21 mm during this period, there were four steps: initial cleavage, early embryo, and embryo free tail end. The larvae hatch after 26:00 hours at a temperature of 23.3 ° C, with mean standard length of 2.60 mm, are slightly pigmented and have a large yolk sac, being poorly developed. The complete absorption of the yolk sac occurs with 5.52 mm and exogenous feeding began with 39:00 hours, and can observe the presence of food in the digestive tract. It can be concluded that the characteristics of eggs, embryonic and larval development are essential for an understanding of the biology of R. branneri. Furthermore, the data constitute an information base for intensive species, and is considered of commercial interest and high potential for fish farming / O jundiá (Rhamdia branneri) é um peixe nativo endêmico do rio Iguaçu que tem potencial para cultivo devido às suas características zootécnicas, devido a isto o presente trabalho tem como objetivo descrever seu desenvolvimento inicial, com vistas ao aproveitamento comercial e manejo para a conservação da espécie. O estudo foi realizado na Estação Experimental de Estudos Ictiológicos, na Usina de Ney Braga, reservatório de Segredo, no período entre janeiro e fevereiro de 2012. Foram realizadas desovas, coletados e analisados 438 ovos, 394 indivíduos no estágio larval-vitelino, 35 em pré-flexão, 15 em flexão, 13 em pós-flexão e 1 juvenil. Os ovos são amarelos, não adesivos e esféricos, apresentam membrana dupla, diâmetro médio de 1,13 mm, o espaço perivitelino tem tamanho médio de 0,21 mm, durante este período, observaram-se quatro etapas: clivagem inicial, embrião inicial, cauda livre e embrião final. As larvas eclodem após 26:00 horas, à uma temperatura de 23,3°C, com comprimento padrão médio de 2,60 mm, são pouco pigmentadas e possuem um saco vitelino grande, sendo pouco desenvolvidas. A completa absorção do saco vitelino ocorre com 5,52 mm e a alimentação exógena iniciou com 39:00 horas, sendo possível observar a presença do alimento no trato digestório. Pode-se concluir que às características de ovos, desenvolvimento embrionário e larval são essenciais para uma melhor compreensão da biologia do R. branneri. Além disso, os dados obtidos constituem uma base de informações para a criação intensiva da espécie, sendo que é considerada de interesse comercial e com alto potencial para a piscicultura

Descrições morfológicas são os primeiros passos para compreender a fisiologia dos organismos e seus sistemas. A biologia do desenvolvimento e a ontogenia da hematopoese de serpentes são pouco conhecidas, sendo a hematopoese embrionária inteiramente desconhecida. Os principais objetivos deste trabalho foram caracterizar o desenvolvimento e a hematopoese embrionária da serpente falsa-coral Oxyrhopus guibei (Dipsadidae: Xenodontinae) a partir da oviposição, através da análise de caracteres morfológicos externos para a classificação dos estágios de desenvolvimento embrionário, de 30 embriões com 1-3, 15, 25, 30, 45, 65 e ~75 dias de ovipostura (d.o.) (quando eclodem), e de cortes histológicos de 29 ovos (ou embriões) de 1-3, 15, 25, 30, 45, 60d.o. e de filhotes do dia da eclosão e com uma semana de nascimento para a caracterização da hematopoese embrionária. Os embriões de 1-3d.o. foram classificados entre os estágios (st.) 17 e 23, com ausência da formação ocular até a presença de olhos sem pigmentação; de 15d.o. no st. 26, com olhos pigmentados e ductos endolinfáticos calcificados; de 25d.o. no st. 31, com escamas no corpo não pigmentado e a musculatura dos flancos não fusionada na linha mediana ventral; de 30d.o. entre os st. 31 e 33, que em adição à formação descrita no período anterior, apresentam membrana palpebral completa e musculatura fusionadas na linha mediana ventral na região pré-cardíaca; de 45d.o. entre os st.34 e 36, com musculatura completamente fusionada na linha mediana ventral e começando a desenvolver um padrão de pigmentação; de 65d.o. no st. 37 (último da tabela) com o padrão de pigmentação bem desenvolvido de coral em tríades, típico da espécie, e com o dente do ovo, e com ~75d.o. os ovos eclodiram com filhotes sadios, que apresentam cicatriz umbilical e o dente do ovo permanece presente até dois dias após a eclosão. A hematopoese em ovos de 1-3 e 15d.o. foi caracterizadas como hematopoese extraembrionária, ocorrendo nos vasos das membranas extraembrionárias e na fenda vitelínica, e hematopoese intraembrionária, na região AGM (aorta gonadal mesonéfrons), principalmente no interior da artéria aorta dorsal, que continua como local hematopoético embrionário até no período de 30d.o., porém com estruturas mais diferenciadas; com 45d.o. o principal local hematopoético passa a ser medula óssea, com foco hematopoético de multi-linhagem sanguínea a partir de 60d.o., nos seios vertebrais e medula costal, constituindo o local hematopoético definitivo. Foi observada a atividade hematopoética junto ao tecido renal, com o desenvolvimento da região AGM, entre os períodos de 15 a 30d.o., o timo e baço apresentam diferenciação linfocítica, observados a partir de 30 e 45d.o., respectivamente e o fígado não apresenta hematopoese embrionária. Esta é a primeira descrição do desenvolvimento embrionário de uma serpente Caenophidia ovípara e da hematopoese embrionária de Serpentes, contribuindo para o conhecimento da fisilogia destes processos e indicando a necessidade de estudos tanto para um melhor entendimento do desenvolvimento embrionário, quanto para a compreensão da ontogenia da hematopoese das serpentes. / Morphological descriptions are the first steps to understand the physiology of organisms and their systems. Developmental biology and ontogeny of hematopoiesis of snakes are poorly known, and the embryonic hematopoiesis is completely unknown. The main goals of this study were to characterize the embryonic and hematopoiesis development of the false coral snake Oxyrhopus guibei (Dipsadidae: Xenodontinae) since oviposition. Analysis of external morphological characters regarding the classification developmental stages for developmental stages classification has been made for 30 embryos with 1 -3, 15, 25, 30, 45, 65 and ~ 75 days after oviposition days (o.d.) (when hatched), and histological sections of 29 eggs (or embryos) from 1-3, 15, 25, 30, 45, 60o.d. and one day neonates and one week after birth for the characterization of embryonic hematopoiesis. The embryos with 1-3o.d. were ranked between 17 and 23 stages (st.), with the absence of eye formation to the presence of unpigmented eyes; with 15o.d. in 26 st., with pigmented eyes and calcified endolymphatic duct; with 25o.d. in 31 st., with unpigmented body scales and muscles of the flanks not fused in the midline, with 30o.d. between 31 and 33 st., which in addition to the preceeding form, have full eyelid membrane and muscles fused at midline in the pre-cardiac region; with 45d.o. between 34 and 36 st., with muscles completely fused in the midline and beginning the development of pigmentation pattern, with 65o.d. in 37 st. (last stage of table) with the distinctive pigmentation tricolor-triad pattern , and the egg tooth, and ~ 75 d.o. health newborns have hatched, exhibiting the umbilical scar and the egg tooth up to two days after hatching. The hematopoiesis in eggs of 1-3 and 15o.d. was characterized as extraembryonic hematopoiesis, occurring in the vessels of extraembryonic membranes and in yolk clef, and intraembryonic hematopoiesis, in the AGM (gonad mesonefron aorta), mainly within the dorsal aorta, which continues as the embryonic hematopoietic site until the 30o.d., although with better differentiated structures; wth 45o.d. the bone marrow turns the main hematopoietic site, and with a hematopoietic focus of multi-lineage blood beginning in the 60d.o. at vertebral sinus and the ribs marrow, consisting the definitive hematopoietic sites. Hematopoietic activity was observed with the kidney tissue, through development of the AGM region, between the periods of 15 to 30d.o., thymus and spleen lymphocyte differentiation have been observed at 30 . and 45o.d., respectively, and the liver does not displays embryonic hematopoiesis. This is the first description of embryonic development of an oviparous Caenophidia snake and of the embryonic hematopoiesis in Serpentes, contributing to the knowledge the physiology of these processes and demonstrating the need of further studies for a better understanding of both embryonic development and the ontogeny snake.

As células pluripotentes (CPs), em teoria, são capazes de dar origem a todos os mais de 200 tipos de células do organismo. Na natureza, há três tipos de células pluripotentes: células-tronco embrionárias, células germinais embrionárias e células de carcinoma embrionário. As características das CPs têm permitido um importante avanço para a pesquisa básica e apontam uma grande aplicabilidade na medicina regenerativa. No núcleo das CPs existem fatores atuantes responsáveis pela manutenção da identidade pluripotente; dentre eles destacam-se OCT4, NANOG, SOX2, KLF4 e MYC. Muito já se sabe sobre os mecanismos que estes fatores atuam para promover a manutenção da pluripotência celular. Baseados nestes estudos foi possível gerar células de pluripotência induzida (iPSCs). Porém, os mecanismos moleculares que direcionam a indução da pluripotência ainda não estão muito bem esclarecidos. Alguns estudos revelaram que componentes chaves da via NFB estão envolvidos na regulação da pluripotência, bem como na diferenciação e destino celular das células-tronco. Neste estudo, analisamos a participação de componentes da via canônica (RelA e NFB1) e não-canônica (RelB e NFB2) de NFB nos processos de diferenciação e destino celular ou manutenção da pluripotência. Para isto usamos técnicas de PCR quantitativa em Tempo Real (qPCR) e Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP) investigando os papéis das vias canônica e não-canônica de NFB na manutenção da pluripotência e diferenciação de CPs, em um modelo de indução de diferenciação celular mediado por ácido trans-retinóico (atRA) em células de carcinoma embrionário NTera-2. Foram avaliadas as ligações dos fatores de transcrição RelA e RelB nas regiões promotoras dos genes OCT4, SOX2, MYC, KLF4 e GFAP e a regulação transcricional associada. Nossos resultados identificaram que as células não tratadas com atRA apresentaram níveis baixos na expressão dos componentes da via canônica de NFB, RelA e NFB1, e GFAP e quando induzidas à diferenciação por atRA durante 4 dias esses níveis se elevaram. Uma situação oposta foi vista nos componentes da via não-canônica de NFB, RelB e NFB2, e na expressão dos fatores de pluripotência OCT4, NANOG, SOX2 e KLF4, que apresentaram níveis de expressão elevados nas células não tratadas com atRA e sofreram redução com a indução da diferenciação celular. O ensaio de ChIP revelou que RelA liga-se nas regiões de regulação dos genes OCT4, SOX2, KLF4, MYC e GFAP apenas quando a célula está em processo de diferenciação, enquanto RelB se apresentou ligado às mesmas regiões tanto nas células indiferenciadas quanto naquelas induzidas à diferenciação por 4 dias. Com estes dados sugerimos que a via canônica de NFB pode estar relacionada com o processo de diferenciação e destino celular através da regulação negativa executada por RelA e NFB1 nos genes responsáveis pela identidade pluripotente das células aqui estudadas enquanto a via não-canônica de NFB, representada pela ativação de RelB e NFKB2, pode participar na manutenção da pluripotência através da regulação positiva destes mesmos fatores. / Human pluripotent stem cells (hPSCs) are able to give rise to all the 200 cell types of the adult organism. In nature, there are three types of hPSCs: embryonic stem cells, germ line stem cells and embryonal carcinoma cells. hPSCs characteristics have allowed a major advance in basic research, and are thought to have great applicability in regenerative medicine. In the nucleus of hPSCs there are transcription factors responsible for the maintenance of their pluripotent identity. OCT4, NANOG, SOX2, KLF4 and MYC are considered the core pluripotency factors in hPSCs. A great deal of knowledge about the mechanisms that promote and maintain pluripotency has been generated. Based on these studies it was possible to generate induced pluripotent stem cells (iPSCs). However, the molecular mechanisms that drive the induction of pluripotency are not fully understood. Some studies have recently indicated that key components of the NFkB may be involved in regulating pluripotency as well as cell differentiation and cell fate. In this study we analyzed the involvement of components of the canonical (RelA and NFB1) and the non-canonical NFB pathways (RelB and NFB2) in the maintenance of pluripotency, differentiation and cell fate processes. The techniques of quantitative real-time PCR (qPCR) and chromatin immunoprecipitation (ChIP) were used to interrogate the roles of the canonical and non-canonical NFB pathways in maintenance of pluripotency and differentiation in a model of cell differentiation induced by all trans-retinoic acid (atRA) on embryonal carcinoma cells NTera-2. The transcription factors RelA and RelB occupancy in the promoter regions of OCT4, SOX2, KLF4, MYC and GFAP, and the transcriptional regulation associated were evaluated. Our results showed that undifferentiated cells exhibited low expression levels of canonical NFB pathway components, RelA and NFB1, while cells induced to differentiate for 4 days exhibited downregulated expression of these factors. In the other hand, the non-canonical NFB pathway components, RelB and NFB2, and the pluripotency factors OCT4, NANOG, SOX2 and KLF4 were expressed in higher levels in undifferentiated cells, and were downregulated upon the differentiation process. ChIP assay revealed that RelA binds to the regulatory regions of OCT4, SOX2, KLF4, MYC, and GFAP only when cells are induced to differentiate, while RelB was found bound to the same regions in both undifferentiated and differentiated cells. This data suggests that the canonical NFB pathway may be associated to differentiation and cell fate processes by downregulation of genes responsible for the pluripotent identity, and that the non-canonical NFB pathway may act in the maintenance of pluripotency through the upregulation of the same factors.

São preocupantes as doenças que tem o Aedes aegypti como vetor. A elevada competência vetorial deste mosquito, bem como sua antropofilia e adaptação ao ambiente urbano, geram habitats favoráveis e torna sua prevenção uma árdua tarefa considerando os recursos disponíveis. O controle atual enfatiza o mosquito, mas ainda há espaço para o aprimoramento da sua efetividade e sucesso, o que torna fundamental o maior conhecimento sobre este inseto. O Brasil apresenta condições favoráveis para a disseminação do mosquito. Diante do exposto este estudo visa estudar a vigilância entomológica do Aedes aegypti no Município de São Paulo no ano de 2013, bem como descrever as características morfológicas, morfométricas da fase de ovo e seu desenvolvimento embrionário. A análise da vigilância entomológica no Município de São Paulo, foi realizada a partir de dados secundários oriundos da Secretaria de Saúde do município. Já a etapa envolvendo a descrição morfológica, morfometrica e o desenvolvimento embrionário foi realizada a partir do material biológico cedido pelo Instituto de Ciências Biomédicas-USP utilizando recursos, tais como a Microscopia Eletrônica de Varredura, Microscopia Eletrônica deTransmissão e Microscopia Confocal. Os indicadores entomológicos Índice de Breteau (IB), Índice de Infestação Predial (IP) e Índice por Tipos de Recipientes Positivos (ITR), tiveram comportamento similares entre si nos anos estudados. Já o ITR revelou que o principal tipo de recipiente positivo para presença do vetor foi o prato/pingadeira para planta, seguido do vaso de planta, ou seja, os principais recipientes positivos encontram-se no ambiente domiciliar. Na avaliação do padrão morfológico e da mensuração acerca do comprimento, largura, razão comprimento/largura (índice) e diâmetro da micrópila constatou-se diferenças significantes entre as duas populações de ovos estudados, para cada um dos atributos morfométricos avaliados. Já a morfologia e o desenvolvimento embrionário apontam exocórion de grande resistência e de difícil permeabilidade, dificultando o acesso ao embrião. Considera-se fundamental a avaliação integrada dos dados oriundos do levantamento entomológico e de pesquisas quanto a características deste vetor nas diversas fases do ciclo biológico, pois somente desta maneira é possível investir em áreas específicas e promissoras para elaboração de políticas públicas efetivas e com poder transformador da realidade. / The diseases that have Aedes aegypti as a vector are worrisome. The high vectorial competence of this mosquito, as well as its anthropophilia and adaptation to the urban environment, generate favorable habitats and makes its prevention an arduous task considering the available resources. The current control emphasizes the mosquito, but its effectiveness and success in containing its dispersion still needs to improve, which makes fundamental the greater knowledge about this insect. Brazil presents highly favorable conditions for the spread of the mosquito. In view of the above, this study aims to study the entomological surveillance of Aedes aegypti in the city of São Paulo in 2013, as well as the morphological, morphometric characteristics of the egg phase and its embryonic development. The analysis of entomological surveillance was based on secondary data from health secretariats. The morphology, morphometry and embryonic development stages were performed using the biological material provided by the Institute of Biomedical Sciences of the University of São Paulo using resources such as Scanning Electron Microscopy (SEM), Transmission and Confocal. The entomological indicators Breteau Index (IB), Infestation Index (PI) and Index by Types of Positive Containers (ITR), had similar behavior among themselves in the years studied, since the ITR revealed that the main type of positive container for presence of the vector was dish / drip tray for plant followed by plant pot, the main positive containers are in the home environment. In the evaluation of the morphological pattern and measurement on length, width, length / width ratio (index) and diameter of the micropyle, it was observed significant differences between the two egg populations for each of the evaluated morphometric attributes. The morphology and embryonic development point to exochorion of big resistance and of difficult permeability, making difficult the access to the embryo. It is considered fundamental the integrated evaluation of data from the entomological survey and research on the characteristics of this vector in the various phases of the biological cycle, since only in this way is it possible to invest in specific and promising areas for the elaboration of effective public policies with transformative power of reality.

A membrana amniótica humana vem assumindo um papel de extrema importância na medicina regenerativa nos últimos anos, principalmente na área de dermatologia e oftalmologia, sendo seu uso promissor no tratamento de doenças cuja terapêutica atual é pouco eficaz. Além disso, na membrana amniótica humana encontram-se células-tronco mesenquimais, que apresentam plasticidade e vem sendo aplicadas para a regeneração de tecidos. Entretanto, muito pouco se sabe sobre a capacidade plástica e o uso de células-tronco de membrana amniótica de animais, já que a literatura a este respeito, não é tão ampla quanto à de humanos. Neste projeto estabelecemos a cultura de células-tronco de membrana amniótica (MA) de fetos caninos, caracterizando as células in vitro e in vivo. As células de MA foram obtidas a partir de um procedimento cirúrgico de histerectomia em cadelas prenhas, durante campanhas de castração da prefeitura da cidade de São Paulo. As células de MA foram caracterizadas in vitro, observando-se características semelhantes a outras células-tronco mesenquimais. Porém, quando foi analisado o seu comportamento in vivo, observamos a formação de um tumor de crescimento rápido, aproximadamente um mês, após o inóculo dessas células em 10 camundongos imunossuprimidos nude, sendo o tumor identificado histologicamente como um carcinoma embrionário. Diante do comportamento biológico formando um tumor in vivo, inferimos que células-tronco provenientes de membrana amniótica de cães não devem ser usadas para aplicação com objetivos terapêuticos em animais, pelo menos até que novas coletas sejam realizadas para que se possa confirmar ou não este comportamento. / The human amniotic membrane has taken an extremely important role in regenerative medicine in recent years, especially in dermatology and ophthalmology, and its promising use in treating diseases for which current therapy is ineffective. In addition, the amniotic membrane has human mesenchymal stem cells, which exhibit plasticity and have been applied to tissue regeneration. However, very little is known about the plastic capacity and the use of stem cells from amniotic membrane of animals, since the literature in this regard, it is not as broad as those of humans. In this project we established a culture of amniotic stem cells of dog, characterizing these cells in vitro and in vivo. The cells were obtained from a surgical procedure for hysterectomy in pregnant bitches, during castration\'s campaigns of the São Paulo\'s municipality. The cells were characterized in vitro, observing characteristics similar to other mesenchymal stem cells. In spite of their behavior, in vivo we observed the formation of a fast-growing tumor about a month after the inoculation of these cells in 10 immunosuppressed mice, being the tumor identified histologically as an embryonic carcinoma. Considering the biological behavior of forming a tumor in vivo, we infer that stem cells from amniotic membrane of dogs should not be used for application for therapeutic purposes in animals, at least until other collections are carried out so that it can be confirmed or not.

Apesar da grande melhora nos resultados de desenvolvimento embrionário in vitro, cerca de 40% dos oócitos bovinos fecundados não completam o desenvolvimento na fase de pré-implantação. Diversos fatores estão relacionados a este fenômeno, conhecido como bloqueio do desenvolvimento embrionário. Partindo da premissa que o bloqueio no desenvolvimento ocorre normalmente, durante a ativação do genoma embrionário, aproximadamente, no 4º ciclo celular em bovinos, formulou-se a hipótese de que os genes transcritos no momento da ativação do genoma embrionário estão relacionados ao bloqueio. Nesta tese, um sistema fluorescente de Differential Display PCR (DDPCR) foi desenvolvido para isolar e identificar fragmentos de mRNAs expressos diferencialmente entre embriões que se desenvolvem mais rápido e com melhor taxa de desenvolvimento e aqueles que apresentam desenvolvimento mais lento e com maior taxa de bloqueio. Dentre 176 fragmentos recuperados, 27 foram clonados, seqüenciados e 30 genes identificados. Dois genes, PI3K e ITM2B foram quantificados pela PCR em tempo real. Os resultados sugerem que duas diferentes ativações do genoma podem estar ocorrendo: o grupo de desenvolvimento rápido ativa genes ligados ao desenvolvimento embrionário e, o grupo lento ativa os genes ligados à sobrevivência ou morte celular. / The embryonic developmental block occurs at the 8-cell stage in bovine and is characterized for a lengthening of the cell cycle. At the same stage, also takes place the maternal-embryonic transition (i.e. the activation of the embryonic genome). These events are highly correlated and many genes are activated at the 4th cell cycle however, their functions are mostly unknown. The study of gene expression during this stage will help understand the mechanisms involved in the maternal-embryonic transition and ultimately lead to improvements of in vitro embryo production rates. The aim of this study was to identify genes differentially expressed between bovine embryos with or without developmental competence to reach the blastocyst stage, using Differential Display PCR methodology. Embryos with fast cleavage divisions showing 8 cells at 48 hpi and high potential of development (R8), and embryos with slow cleavage divisions showing 4 cells at 48hpi (L4) and 8 cells at 80 hpi (L8), both with reduced rates of development to blastocyst, were analyzed. We developed an alternative protocol for amplification and recovery of differentially expressed genes from extremely small initial amounts of RNA (10 to 25 pg of mRNA) from preimplantation bovine embryos without need of radio-isotopes. A total of 176 differentially expressed bands were recovered, 27 isolated-fragments were cloned and sequenced confirming the expected primer sequences and allowing the recognition identification of 30 gene transcripts related to bovine embryonic physiology. Two genes, PI3K and ITM2B were chosen for relative quantification of mRNA using Real-Time PCR. Results suggest two different embryonic genome activation mechanisms: fast-developing embryos activate genes related to embryonic development, and slow-developing embryos activate genes related to cellular survival and/or death.

O tubarão-azul, Prionace glauca, é uma das espécies de elasmobrânquios pelágicos, mais capturadas pela frota de espinhel-de-superfície. No presente estudo analisou-se o crescimento relativo e a idade de 83 embriões, provenientes de fêmeas grávidas capturadas em 1998, durante o Programa Avaliação do Potencial Sustentável de Recursos Vivos da Zona Econômica Exclusiva REVIZEE, na região Sudeste-Sul do Brasil. Foram analisados 48 caracteres morfométricos, verificando-se que entre as variáveis morfométricas mais expressivas, o comprimento furcal, o comprimento pré-caudal, o comprimento inicial da segunda nadadeira dorsal, o comprimento pré-anal e o comprimento pré-pélvico contribuíram com valores acima de 50% na composição do corpo do embrião. Por meio de regressões lineares de variáveis logaritmizadas, constatou-se alometria negativa em (53,2%), positiva em (36,1%) e isometria em (10,7%) dos caracteres morfométricos analisados. A idade de cada embrião foi estimada por meio da utilização do método da proporção direta modificada de Dahl-Lea, e os parâmetros de crescimento foram ajustados através das curvas de crescimento logística, de von Bertalanffy e de Gompertz. De acordo com os critérios de seleção de Akaike (AICmin, i e wi) e da soma dos quadrados dos erros (SQE), o modelo de Gompertz foi escolhido como o melhor representante do crescimento embrionário de P.glauca. / The blue shark, Prionace glauca, is a pelagic elasmobranchs, mainly captured by the Brazilian pelagic longline fleet. In this study we analyzed both the relative growth and the age of 83 of pregnant females captured in 1998 during the Program \"Evaluation of the Sustainable Potential of Living Resources of the Exclusive Economic Zone\" - REVIZEE in the Brazilian Southeast-South region. We analyzed 48 morphometric characters, showing that among the most expressive, fork length, the length pre-flow, the initial length of the second dorsal fin, the length pre-anal and the length pre-pelvic represented above 50% of the composition of the embryos bodies. By means of linear regressions of logarithmic morphometric variables values, we found negative allometry (53.2%), positive allometry (36.1%) and isometry in (10.7%). The age of each embryo was estimated applying the direct proportion of Dahl-Lea method modified, and the parameters of growth were adjusted to logistic growth curves of von Bertalanffy and Gompertz. According to the selection criteria of Akaike (AICmin, i and wi) and the sum of the squares of errors (SSE), the Gompertz model was chosen as the most representative of the growth of P.glauca embryos.