Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-19Bitstream added on 2014-06-13T19:24:36Z : No. of bitstreams: 1 niciura_scm_dr_jabo.pdf: 1029270 bytes, checksum: 8a93cc4207fdb3426be68df4fa064ef9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A maturação oocitária é marcada pela retomada da primeira divisão da meiose, com progressão do estádio de Vesícula Germinativa (GV) da Prófase I até a Metáfase II (MII), e inclui todos os eventos necessários para que o oócito expresse seu potencial máximo de desenvolvimento após a fecundação. Para avaliarmos a eficiência da maturação in vitro (MIV), utilizamos oócitos classificados em viáveis (graus I, II e III) e inviáveis (atrésico e desnudo), e acompanhamos a progressão nuclear e a distribuição dos grânulos corticais (GC) como indício de maturação citoplasmática, após MIV em TCM 199 com soro fetal bovino, hormônios, antibiótico e piruvato, por 24h em 5% de CO2 em ar. Maturação nuclear (78,4-87,8%) e citoplasmática (GC periféricos; 67,2-79,3%) foram semelhantes entre as diferentes classes de oócitos e apresentaramse como eventos independentes. Para o acompanhamento dos eventos desencadeados pelo espermatozóide, avaliamos a dinâmica nuclear e de microtúbulos, em intervalos de 2h, após fecundação in vitro (FIV), em meio TALP com heparina, PHE e sêmen preparado em gradiente de Percoll. Observamos que o estádio de MII foi predominante de 2 a 8h; MII e Anáfase/Telófase (A/T) predominaram às 10h; MII, A/T e estádio pronuclear (PN) de 14 a 16h; e PN a partir de 18h. A penetração do espermatozóide ocorreu após 4h da inseminação dos oócitos; a diferenciação dos PN 14 masculino e feminino pelo tamanho foi possível de 14 a 18h e a singamia ocorreu a partir de 24h. O período de 10h pode ser suficiente para que a FIV seja efetiva em oócitos bovinos, nas condições aqui descritas. / We aimed to evaluate events involved in in vitro maturation, fertilization and development, and parthenogenetic activation of bovine oocytes assessed by nuclear-cytoplasmic interaction and gene expression. Oocyte morphological selection did not affect nuclear maturation (78.4-87.8%) and cytoplasmic cortical granule distribution (67.2-79.3%). Following nuclear and microtubular dynamics after fertilization (IVF), we observed sperm penetration 4h after insemination; male and female pronuclei differentiation by size from 14 to 18h; syngamy after 24h; and sufficient co-incubation of spermatozoa and oocytes for 10h. Pronuclear transfer to study the interaction between nucleus (N) and cytoplasm (C) in parthenogenetic embryos produced by ionomycin followed by strontium (S) or 6-DMAP (D) was assessed by cleavage, eight-cell, and blastocyst development rates: CSND (76.5, 36.4, and 6.8%) and CDNS (69.5, 25.0, and 4.9%). S cytoplasm promoted dominant effect on D nucleus. Higher rates of developmental arrest up to the eight-cell stage were observed by the combination of cytoplasm and nucleus produced by the two different activation treatments. We recovered parthenogenetic D fetuses on Day 35, which were small but normal in formation and in appearance of chorio-alantoic membranes. Genomic imprinting of IGF2 was observed, but XIST was maternally expressed in extra-embryonic tissues. In vitro culture promoted higher expression of IGF2 and H19 genes and also increased IGF2/IGF2r ratio in IVF embryos compared to in vivo produced ones.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-05Bitstream added on 2014-06-13T20:56:06Z : No. of bitstreams: 1 sabino_nsc_me_araca.pdf: 202070 bytes, checksum: 6ec90b3bae49b1d0f452bd855b8ca174 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A desidratação dos ovos de avestruz (Struthio camelus) na incubação artificial é a principal causa do desenvolvimento e qualidade do filhote. Neste estudo, a necessidade de avaliar e manejar os ovos durante a incubação, tornou-se evidente. No incubatório das instalações do Setor Experimental de Zootecnia (SEZ) – UNESP/Araçatuba-SP, foram utilizados 129 ovos férteis eclodidos e 70 ovos férteis não eclodidos para a avaliação da perda de água aos 38 dias; as características da casca, a porosidade e a espessura foram confrontadas à perda total de água do ovo. Observou-se uma diferença na perda total de água para ovos férteis eclodidos (15,45%) e ovos férteis não eclodidos (10,45%). Foram estudados 1303 ovos férteis eclodidos quanto ao posicionamento na incubadora e à desidratação. Para a obtenção dos resultados, a incubadora foi estratificada em 7 prateleiras, 8 gavetas e 3 profundidades. Verificou-se uma perda maior de água por evaporação, quando os ovos estavam localizados nas gavetas próximas ao aquecedor e à entrada de ar desumidificado. Porém, não foram detectadas alterações provocadas pela altura da prateleira ou mesmo pela proximidade dos ovos em relação à porta ou ao fundo da incubadora. Desta forma, concluiu-se que a avaliação e o manejo dos ovos de avestruz na incubação artificial devem fazer parte do controle diário do incubatório. / The dehydration of eggs of ostrich (Struthio camelus) in the artificial incubation is the main cause of the development and quality of the youngling. In this study, the necessity to evaluate and to handling eggs during the incubation, became evident. In the room incubation of the installations of the Experimental Zootechny Sector (EZS) - UNESP/Araçatuba- São Paulo, Brazil, 129 ecloded fertile eggs and 70 fertile not ecloded eggs was been followed for the evaluation of the loss of water to 38 days and samples randomly of rinds was collated the characteristics of the rind, porosity and thickness, to the total loss of water of the egg. A difference observed in the total loss of water for ecloded fertile eggs was (15.45%) and fertile not ecloded eggs was (10.45%). Studied of 1303 ecloded fertile eggs how much to the positioning in the incubator and the dehydration for the attainment of the results, the incubator was subdivided in seven shelves, eight drawers and three depths. A bigger loss for evaporation of eggs was verified, when located in the drawers next to the heater and the dry air entrance. Nevertheless, no effect related to the shelves height was detected, not even when the proximity of the egg to the incubator door or the deep one was concerned. In such a way, one concluded that the evaluation and the handling of eggs of ostrich in the artificial incubation must be part of the daily control of the room incubation.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-08T12:30:20Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3898148 bytes, checksum: 4bd5b276470027c8968ec023cab6d4fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T12:30:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3898148 bytes, checksum: 4bd5b276470027c8968ec023cab6d4fd (MD5) Previous issue date: 2015-05-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cancer is characterized by uncontrolled cell growth of a particular tissue, which invades and impairs healthy cells functions. Chemotherapy is the main cancer treatment, and consists of drug administration that interferes in several metabolic pathways, leading to cancer cell death. Among the main chemotherapy drugs, antimitotics directly affect cell division. This study aimed to investigate the effect of a pyrimidinone derivative (4-4-chloro-phenyl)-2-(-4-methoxy-phenyl)-6-oxo-1,6-dihydropyrimidine- 5-carbonitrile, Py-09) on embryonic development of the sea urchin Echinometra lucunter. Adult animals were collected at João Pessoa coast, Paraíba, Brazil and kept in filtered sea water under constant air flow. Gametes or embryos were treated with Py-09 and the effects of the compound were analyzed on fertilization, embryonic development, mitochondrial membrane potential (ΔΨm), production of reactive oxygen species (ROS) and ABC transporters activity. Py-09 (12.5 μM) inhibited around 60% fertilization of pretreated eggs. However, treatment of sperm with Py-09 did not affect fertilization rate. Treatment of zygotes with Py-09 inhibited the early embryonic development in a time and dose-dependent pattern, with the maximum effect at 50 μM (EC50 = 12.5 μM). Morphological changes were observed in the pattern of embryos cleavage (unequal cleavage) and at larval stages (irregular distribution and cracks of spicules and pigment cells leakage). Py-09 induced the loss of ΔΨm without altering ROS intracellular levels. The assays with ABCB1 and ABCC1 transporters inhibitors (Reversin 205 and MK571, respectively) showed that Py-09 is not ABC proteins substrate. The intracellular calcein accumulation assay and PY-09/vinblastine association demonstrated Py-09 was not able to increase intracellular calcein fluorescence levels and that the compound did not reverse MXR phenomenon. In summary, this study demonstrated that the Py-09 features a remarkable antimitotic activity, producing changes both in morphology and cell physiology. Further studies are needed for a better understanding of the mechanism of action of the compound, and research on the potential of Py-09 as pharmacological tool for in vitro studies, as well as its therapeutic use. / O câncer é caracterizado pelo crescimento descontrolado de células de um determinado tecido, que invadem e comprometem, funcionalmente, células sãs do organismo. A quimioterapia é o principal tratamento do câncer, consistindo na administração de drogas que interferem em diversas vias metabólicas, ocasionando a morte celular. Dentre os principais quimioterápicos, os antimitóticos são drogas que afetam, diretamente, a divisão celular.O presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade antimitótica de um derivado de pirimidinona (Py-09) no desenvolvimento embrionário do ouriço-do-mar Echinometra lucunter. Animais adultos foram coletados na costa João Pessoa, Paraíba, Brasil, mantidos em água do mar filtrada sob fluxo de ar constante. Os gametas foram coletados por injeção intracelomática de KCl. Os gametas ou embriões foram tratados com Py-09 e foi analisada a atividade do composto sobre a fertilização, o desenvolvimento embrionário, o potencial de membrana mitocondrial interna (ΔΨm), a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e a atividade de transportadores ABC. O Py-09 (12,5 μM) inibiu, em cerca de 60%, a fertilização de óvulos previamente tratados com o composto. No entanto, o tratamento dos espermatozoides com o Py-09 não afetou a taxa de fertilização. O tratamento dos zigotos com o Py-09 inibiu o desenvolvimento embrionário inicial, apresentando um efeito antimitótico dose e tempo-dependente, atingindo um efeito máximo na concentração de 50 μM (CE50 = 12,5 μM). Foram observadas alterações morfológicas no padrão de clivagem dos embriões (clivagem desigual) e em estágios larvais (distribuição irregular e fissuras das espículas e extravasamento de células pigmentares).O tratamento com Py-09 promoveu a perda do ΔΨm, sem, entretanto, alterar os níveis intracelulares de ROS. O ensaio com os inibidores dos transportadores ABCB1 e ABCC1 (Reversina 205 e MK571, respectivamente) mostrou que o Py-09 não é substrato de proteínas ABC. Por outro lado, o ensaio de acúmulo intracelular de calceína e os ensaios de associação do Py-09 com a vimblastina demonstraram que o mesmo não reverte o fenômeno MXR, uma vez que o composto não foi capaz de aumentar os níveis de fluorescência intracelular da calceína, e a associação Py-09 (12,5 μM)/vimblastina (100 e 400 nM) apresentou o mesmo efeito inibitório da vimblastina per se.Em suma, o presente trabalho demonstrou que o Py-09 apresenta uma marcante atividade antimitótica, acarretando alterações tanto na morfologia quanto na fisiologia celular.Estudos adicionais são necessários para um maior entendimento do mecanismo de ação do composto, e para a investigação acerca do potencial do Py- 09 como ferramenta farmacológica para estudos in vitro, assim como para o seu uso terapêutico.

Orientador: Manoel Garcia Neto / Banca: Antonio Carlos de Laurentiz / Banca: Max José de Araújo Faria Júnior / Resumo: A desidratação dos ovos de avestruz (Struthio camelus) na incubação artificial é a principal causa do desenvolvimento e qualidade do filhote. Neste estudo, a necessidade de avaliar e manejar os ovos durante a incubação, tornou-se evidente. No incubatório das instalações do Setor Experimental de Zootecnia (SEZ) - UNESP/Araçatuba-SP, foram utilizados 129 ovos férteis eclodidos e 70 ovos férteis não eclodidos para a avaliação da perda de água aos 38 dias; as características da casca, a porosidade e a espessura foram confrontadas à perda total de água do ovo. Observou-se uma diferença na perda total de água para ovos férteis eclodidos (15,45%) e ovos férteis não eclodidos (10,45%). Foram estudados 1303 ovos férteis eclodidos quanto ao posicionamento na incubadora e à desidratação. Para a obtenção dos resultados, a incubadora foi estratificada em 7 prateleiras, 8 gavetas e 3 profundidades. Verificou-se uma perda maior de água por evaporação, quando os ovos estavam localizados nas gavetas próximas ao aquecedor e à entrada de ar desumidificado. Porém, não foram detectadas alterações provocadas pela altura da prateleira ou mesmo pela proximidade dos ovos em relação à porta ou ao fundo da incubadora. Desta forma, concluiu-se que a avaliação e o manejo dos ovos de avestruz na incubação artificial devem fazer parte do controle diário do incubatório. / Abstract: The dehydration of eggs of ostrich (Struthio camelus) in the artificial incubation is the main cause of the development and quality of the youngling. In this study, the necessity to evaluate and to handling eggs during the incubation, became evident. In the room incubation of the installations of the Experimental Zootechny Sector (EZS) - UNESP/Araçatuba- São Paulo, Brazil, 129 ecloded fertile eggs and 70 fertile not ecloded eggs was been followed for the evaluation of the loss of water to 38 days and samples randomly of rinds was collated the characteristics of the rind, porosity and thickness, to the total loss of water of the egg. A difference observed in the total loss of water for ecloded fertile eggs was (15.45%) and fertile not ecloded eggs was (10.45%). Studied of 1303 ecloded fertile eggs how much to the positioning in the incubator and the dehydration for the attainment of the results, the incubator was subdivided in seven shelves, eight drawers and three depths. A bigger loss for evaporation of eggs was verified, when located in the drawers next to the heater and the dry air entrance. Nevertheless, no effect related to the shelves height was detected, not even when the proximity of the egg to the incubator door or the deep one was concerned. In such a way, one concluded that the evaluation and the handling of eggs of ostrich in the artificial incubation must be part of the daily control of the room incubation. / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Resumo: A maturação oocitária é marcada pela retomada da primeira divisão da meiose, com progressão do estádio de Vesícula Germinativa (GV) da Prófase I até a Metáfase II (MII), e inclui todos os eventos necessários para que o oócito expresse seu potencial máximo de desenvolvimento após a fecundação. Para avaliarmos a eficiência da maturação in vitro (MIV), utilizamos oócitos classificados em viáveis (graus I, II e III) e inviáveis (atrésico e desnudo), e acompanhamos a progressão nuclear e a distribuição dos grânulos corticais (GC) como indício de maturação citoplasmática, após MIV em TCM 199 com soro fetal bovino, hormônios, antibiótico e piruvato, por 24h em 5% de CO2 em ar. Maturação nuclear (78,4-87,8%) e citoplasmática (GC periféricos; 67,2-79,3%) foram semelhantes entre as diferentes classes de oócitos e apresentaramse como eventos independentes. Para o acompanhamento dos eventos desencadeados pelo espermatozóide, avaliamos a dinâmica nuclear e de microtúbulos, em intervalos de 2h, após fecundação in vitro (FIV), em meio TALP com heparina, PHE e sêmen preparado em gradiente de Percoll. Observamos que o estádio de MII foi predominante de 2 a 8h; MII e Anáfase/Telófase (A/T) predominaram às 10h; MII, A/T e estádio pronuclear (PN) de 14 a 16h; e PN a partir de 18h. A penetração do espermatozóide ocorreu após 4h da inseminação dos oócitos; a diferenciação dos PN 14 masculino e feminino pelo tamanho foi possível de 14 a 18h e a singamia ocorreu a partir de 24h. O período de 10h pode ser suficiente para que a FIV seja efetiva em oócitos bovinos, nas condições aqui descritas. / Abstract: We aimed to evaluate events involved in in vitro maturation, fertilization and development, and parthenogenetic activation of bovine oocytes assessed by nuclear-cytoplasmic interaction and gene expression. Oocyte morphological selection did not affect nuclear maturation (78.4-87.8%) and cytoplasmic cortical granule distribution (67.2-79.3%). Following nuclear and microtubular dynamics after fertilization (IVF), we observed sperm penetration 4h after insemination; male and female pronuclei differentiation by size from 14 to 18h; syngamy after 24h; and sufficient co-incubation of spermatozoa and oocytes for 10h. Pronuclear transfer to study the interaction between nucleus (N) and cytoplasm (C) in parthenogenetic embryos produced by ionomycin followed by strontium (S) or 6-DMAP (D) was assessed by cleavage, eight-cell, and blastocyst development rates: CSND (76.5, 36.4, and 6.8%) and CDNS (69.5, 25.0, and 4.9%). S cytoplasm promoted dominant effect on D nucleus. Higher rates of developmental arrest up to the eight-cell stage were observed by the combination of cytoplasm and nucleus produced by the two different activation treatments. We recovered parthenogenetic D fetuses on Day 35, which were small but normal in formation and in appearance of chorio-alantoic membranes. Genomic imprinting of IGF2 was observed, but XIST was maternally expressed in extra-embryonic tissues. In vitro culture promoted higher expression of IGF2 and H19 genes and also increased IGF2/IGF2r ratio in IVF embryos compared to in vivo produced ones. / Doutor

This thesis has two parts. In the first part there is described an optimal methodological process for screening tests used in subsequently. Fertilized fish eggs of Oryzias latipes were incubated in 6 tests with different numbers (from 1 to 6) with standard conditions in ISO water. In the tests, hatching performance and duration of embryonic development were investigated and the results were applied on screening tests. The other part of the thesis is aimed on the proof of potential toxic effects of water with cyanobacterial water bloom. The fertilized eggs of Oryzias latipes were embedded into the test in stage 6 to 8. Three samples of cyanobacterial biomass from free waterbodies with known species composition and microcystin {--} LR, YR and RR contents were tested. The hatching performance, duration of embryonic development, lethal and sublethal effects were monitored during the tests. The tests were performed according to the OECD 212. There were detected significant differences in hatching performance, duration of embryonic development and in some cases also in induction of deformities between the control group and the tested groups.

Scientific research using nanotechnology is a relatively recent development with a variety of potential applications in many fields of science. Within this field of research, many new products, with improved performances, have been developed. Despite increased research on its toxicity to ecosystem, the knowledge about this area is still limited. To evaluate the toxicity and genotoxicity of different sizes silica nanoparticles (SiNP)to the environment, different species, on different trophic levels (Vibrio fisheri, Raphidocelissubcapitata, Daniorerio and Allium cepa) were exposed to TM40 (22 nm), HS30 (12 nm), SM30 (7 nm) with concentrations ranging from0.19 to 163.8 g/L (TM40) and 0.29 to 122.85 g/L (HS30 and SM30), and the following parameters were monitored during exposure: production of bioluminescence (V. fischeri), growth rate (R. subcapitata), embryonic development and DNA damage (D. rerio) and germination rate, growth and DNA damage (A. cepa). Within each test SiNPpresent a size dependent chronic toxicity. The bioluminescence test present a EC50 of 29.11, 32.34 and 4.58 g/L for TM40, HS30 and SM30, respectively. For the growth rate assay the EC50 was 9.32, 9.07 and 7.93 g/L for TM40, HS30 and SM30, respectively. And for the zebra fish embryonic development test for TM40, HS30 and SM30, the EC50 was 5.85, 1.13 and 2.68 g/L respectively. All particles also induce phytotoxicity in A.cepa, growth and germination reduce significatively when expose to SiNP. Futhermoregenotoxic effects were also induced by the particles for both A.cepaand D. rerio. Therefore, SiNP can cause toxicity to the environment and size can strongly influence this toxicity / Com uma variedade de aplicações potenciais, em diversos campos da ciência, as pesquisas científicas utilizando nanotecnologia são de desenvolvimento relativamente recente. Dentro deste campo de pesquisa, vários novos produtos, com desempenhos melhorados têm sido desenvolvidos. Apesar do aumento de pesquisas sobre a toxicidade dessas tecnologias à biota, o conhecimento sobre esta área ainda é limitado. Visando avaliar a toxicidade e genotoxicidade denanopartículasde sílica (SiNP) no meio ambiente diferentes espécies pertencentes a diversos níveis tróficos (Vibriofisheri, Raphidocelissubcapitata, DaniorerioandAllium cepa) foram expostos a Ludox TM40 (22 nm), Ludox HS30 (12 nm) e Ludox SM30 (7 nm). As espécies de teste foram expostas a concentrações de nanopartículas (NP) variando de 0.29 a 163.8 g/L (TM40) e 0.19 a 122.85 g/L (HS30 e SM30) e os seguintes parâmetros monitorizados durante a exposição: a produção de bioluminescência (V. fischeri), o crescimento taxa (R. subcapitata), inibição de alimentação (D. magna), desenvolvimento embrionário e dano ao DNA (D. rerio) e taxa de germinação, crescimento e danos ao DNA (A. cepa). Nos testes feitos com as SiNPfoi observado que a toxicidade é dependente do tamanho da partícula. O ensaio de bioluminescência apresentou um EC50 de 29.11, 32.34 e 4.58 g/L para TM40, HS30 e SM30, respectivamente. Para o ensaio de taxa de crescimento o EC50 foi 9.32, 9.07 e 7.93 g/Lpara TM40, HS30 e SM30, respectivamente. E para o teste de desenvolvimento embrionário com peixe zebra, para o TM40, HS30 e SM30 o EC50 foi de 5.85, 1.13 e 2.68g/L, respectivamente. Todas as partículas também induziram fitotoxicidade em A. cepa, crescimento e germinação reduziram significativamente quando o organismo foi exposto a SiNP. Efeitos genotóxicos também foram induzir pelas partículas, tanto para A. cepa quanto paraD. rerio. Portanto, as SiNP podem causar toxicidade ao ambiente e o tamanho pode influenciar fortemente a essa toxicidade

O carrapato bovino Boophilus microplus está presente em áreas tropicais e subtropicais no mundo e é um ectoparasito hematófago que causa inúmeras perdas à bovinocultura, através da espoliação ao bovino ou das doenças que transmite como vetor. Atualmente, o principal método de controle empregado baseia-se em produtos químicos, que são onerosos e contaminam o ambiente. Estudos a respeito da ecologia, comportamento e fisiologia de B. microplus são importantes para o desenvolvimento de novos métodos de controle do carrapato. A resposta ao estresse oxidadivo e a morte celular programada, examinadas neste estudo, permitem compreender melhor os mecanismos fisiológicos usados pelo carrapato adulto e seus ovos e larvas para sobreviver no ambiente. A resposta a estresse oxidativo foi analisada em ovos e larvas. A atividade de GST e outras moléculas envolvidas em mecanismos de proteção contra estresse oxidativo variaram dependendo do tempo transcorrido após a postura e eclosão. A cinética do consumo de oxigênio apresentou correlação positiva com o aumento na atividade de GST durante a embriogênese. Um alto conteúdo de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foi observado em extratos de ovos e larvas, indicando que carrapatos apresentam alto estresse oxidativo durante a embriogênese e desenvolvimento larval. Além disso, a atividade de GST apresentou forte correlação com peroxidação de lipídeos, uma indicação de seu papel na defesa antioxidante em ovos. Com o objetivo de melhor caracterizar o processo de morte celular, que elimina tecidos não mais necessários e leva à degeneração de glândulas salivares, ovários e singânglios, foi feita uma investigação usando ensaios de visualização de fragmentação de DNA em gel de agarose, teste cometa e TUNEL e a ativação da via apoptótica foi analisada usando ensaio de caspase. A fragmentação de DNA e a atividade enzimática de caspase-3 foram observadas em glândulas salivares e ovários 48 e 72 h após a remoção do carrapato do hospedeiro; em singânglios estes parâmetros foram mantidos em baixos níveis após 48 h. Estes resultados obtidos sugerem que há um controle refinado de manutenção de tecido através de apoptose. / The cattle tick Boophilus microplus is present in tropical and subtropical areas in the world and it is a haematophagous ectoparasite that causes several losses to cattle breeding, through the bovine exploiting and diseases transmitted. Currently, the main control method is based on chemicals, which are expensive and contaminate the environment. Studies about ecology, behavior and physiology of B. microplus are important to develop new methods for the tick control. The data examined in this study allow understanding the physiologic mechanisms used by the tick, eggs and larvae to survive in the environment. For this, the oxidative stress response in eggs and larvae and the cell death in different tissues of adult tick females during the pre-oviposition period were analyzed. The oxidative stress response was analyzed in eggs and larvae and the results showed that the GST activity and other molecules involved in mechanism of protection against oxidative stress varied depending on the time elapsed after oviposition and eclosion. A positive correlation was observed between the oxygen consumption kinetics and the increase in GST activity during embryogenesis. A high content of thiobarbituric acid reactive substances were observed in egg and larva extracts, indicating that ticks face high oxidative stress during embryogenesis and aging. In addition, GST activity presented strong positive correlation with lipid peroxidation, an indication that it plays a role in oxidant defences in eggs. In order to better characterize the cell death process that eliminates unnecessary tissues, the degeneration of salivary glands, ovaries and synganglia was investigated using DNA fragmentation in agarose gel, comet and TUNEL assays, and apoptosis activation pathway by the caspase assay. DNA fragmentation and enzymatic activity of caspase-3 were observed in salivary glands and ovaries at 48 and 72 h after tick removal from the host; in synganglia these parameters were maintained at low levels upon 48 h. These results obtained suggest that there is a refined control of tissue maintenance through apoptosis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Stem cell therapy has been applied as coadjutant or treatment for some diseases or disorders. A range of sources of pluripotent cells have been investigated as placental, umbilical cord, teeth pulp, fat. However pluripotent cell behavior submitted to a concomitant physiological disorder as diabetes has been no fully understood. Methods: We aimed to evaluate proliferative potential, and the characterization of stem cells markers for potential cell differentiation, mitochondrial activity, cell cycle and apoptosis in samples of stem cells from yolk sacs obtained from rats in 15 and 20 gd in normal and hyperglycemic conditions using flow cytometry to analyze cell cycle stages, mitochondrial membrane potential, expression of Stro-1, CD90, Nanog, Oct 3/4, CD117, CD115, CD 44, CD34, VEGF-R1, COX-2, MCP-1, INF-₢ R1, L 1 and phosphorylated Caspase-3. Results: In diabetic groups we observed high levels of mitochondrial inactivity, intensively decreasing in G2/M phase, over expression of caspase, decreased expression of adhesion formation markers such as CD 44, CD 34, and NANOG. Increased pluripotency CD 90 receptor, VEGF-R1, TNF-R1, IL-1, COX-2, Caspese. Discussion: In the last period of gestation diabetes might be associated to permeability deregulation, mitochondrial integrity, cytochrome c release, reduction in the cell cycle progression, apoptosis activation and proliferative capacity decreasing. Conclusion: Diabetes seems to play a negative influence on yolk sac cell behavior in the last period of gestation. / Introdução: A terapia com células-tronco tem sido aplicada como coadjuvante no tratamento para algumas doenças ou distúrbios. Uma variedade de células pluripotentes têm sido investigadas essas células podem ser encontradas na placenta, cordão umbilical, polpa de dentes. No entanto o comportamento de células pluripotentes submetido a um distúrbio fisiológico concomitante como diabetes não foi totalmente compreendido. Métodos: O objetivo foi avaliar o potencial de proliferação, e a caracterização de marcadores de células-tronco para diferenciação potencial celular, atividade mitocondrial, ciclo celular e apoptose das células-tronco do saco vitelino obtidos de ratas em 15 e 20 gd em condições normais e hiperglicêmicos usando a citometria de fluxo para analisar as fases do ciclo celular, o potencial da membrana mitocondrial, a expressão de Stro-1, CD90, Nanog, Out 3/4, CD117, CD115, CD 44, CD34, de VEGF-R1, a COX-2, a MCP-1, IFN-₢ R1, L 1 e a caspase-3. Resultados: Nos grupos diabéticos observou-se elevados níveis de inatividade mitocondrial, diminuindo intensamente em fase G2 / M, sobre a expressão de caspase, diminuição da expressão dos marcadores formadores de adesão como CD 44, CD 34, e NANOG. Aumento da Pluripotencia dos receptores CD 90, VEGF-R1, TNF-R1, IL-1, COX-2, Caspese Discussão: No último período de diabetes gestacional pode estar associado à desregulamentação permeabilidade, integridade mitocondrial, liberação de citocromo c, redução da progressão do ciclo celular, ativação da apoptose e diminuição da capacidade proliferativa. Conclusão: Diabetes parece ter uma influência negativa sobre o comportamento das células do saco vitelino nos último período de gestação.

Orientadores: Vera Lucia Gil da Silva Lopes, Iscia Lopes Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_ErikaCristinaLopesBurronede_D.pdf: 4235837 bytes, checksum: 014a02ceef9fbd93a09deb49df5f0a37 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Síndrome Blefaroqueilodôntica (BCD) e os Defeitos de Linha Média Facial com Hipertelorismo (DLMFH) são defeitos craniofaciais raros. Por esse motivo, os estudos de grandes casuísticas têm sido limitados. Contribuição científica significativa neste assunto tem sido dada por nosso grupo, que delineou características clínicas e diretrizes para seguimento de longo prazo e evidenciou achados neuroradiológicos em ambas as anomalias. Embasado nesses achados preliminares e evidências recentes da literatura pertinente, foi possível estabelecer uma estratégia inicial para investigação etiológica da BCD e dos DLMFH, sendo os objetivos desse projeto: investigar a etiologia da BCD nos indivíduos afetados pela síndrome, por meio de estudo dos genes candidatos IRF6, P63, OSR2, TBX10, FOXE1, SHH, FGF8 e PAX3; pesquisar, nos indivíduos com DLMFH, a presença de mutações nos genes candidatos SHH, FGF8 e PAX3; identificar, em ambas as malformações, possíveis alterações cromossômicas; e, por último, associar os achados clínicos detectados nas investigações anteriores aos possíveis achados moleculares. Foram utilizadas técnicas de sequenciamento direto, array-CGH, genotipagem automática e hibridação in situ por fluorescência. Não foi possível relacionar nenhuma mutação pontual nos genes estudados associadas às malformações em questão, pois não foram encontradas alterações gênicas patogênicas. Entretanto foram detectadas em pacientes com DLFMH três aberrações cromossômicas em regiões distintas do genoma, tratando-se de um caso de duplicação no cromossomo 6 (paciente DLMFH7), um caso com deleção no cromossomo 9 e duplicação no cromossomo 20 (paciente DLMFH10) e um caso de deleção no cromossomo 2 (paciente DLMFH1). Nesse último, o gene PAX3 encontrava-se dentro da região deletada, confirmando a hipótese inicial de que alguns genes de desenvolvimento estão envolvidos na etiologia dos DLMFH. Conclui-se, portanto, que em indivíduos com DLMFH, a técnica de array-CGH pode ser útil para detecção de aberrações cromossômicas diversas e o aconselhamento genético deve ser individualizado / Abstract: The Blepharocheilodontic Syndrome (BCD) and Midline Facial Defects with Ocular Hypertelorism (MFDH) are rare craniofacial anomalies. Considering the rarity of these two groups of congenital defects, studies with large casuistry have been limited. Our group has significantly contributed to the scientific knowledge about both anomalies, delineating clinical characteristics, evidencing neurological findings and designing protocols for long term follow-up. Based in these preliminary findings and recent evidences of pertinent literature, it was possible to determine an initial etiologic investigation strategy for the BCD and the MFDH. The objectives of this project are to investigate the etiology of the BCD in affected individuals through IRF6, P63, OSR2, TBX10, FOXE1, SHH, FGF8 and PAX3 candidate genes study; to search MFDH patients for mutations in the SHH, FGF8 and PAX3 candidate genes; to identify, in both syndromes, possible chromosomal anomalies; and finally, to associate the detected clinical findings in previous investigations to the molecular results. The direct sequencing, array-CGH, automatic genotyping and FISH were the molecular techniques used in this study. It was not possible to relate any punctual mutation in the studied genes associated to the syndromes investigated since none pathogenetic alteration was found. Although, chromosomal anomalies in different locations of the genome were detected in three MFDH patients, a chromosome 6 duplication (in patient MFDH7), a chromosome 9 deletion and chromosome 20 duplication (in patient MFDH10), and a chromosome 2 deletion (in patient MFDH1). In the latter case, the PAX3 gene was inside the deleted region, supporting the initial hypothesis that some development genes are involved in the MFDH etiology. Therefore, it can be concluded that in MFDH patients, the array-CGH investigation can be useful to detect a wide range of chromosomal anomalies and the genetic counseling must be individualized / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas