Introduction. La cigarette électronique (e-cig) est un dispositif créé pour réduire les effets nocifs du tabac en remplaçant la fumée par un aérosol contenant de la nicotine. Cet aérosol peut interagir avec les tissus mous, durs et particulièrement les implants dentaires pouvant mener à une péri-implantite. Les objectifs de cette étude sont d'évaluer l'effet de l'e-cig sur l'adhésion, la prolifération et la migration des cellules après culture sur les implants et exposition à l'e-cig. Nous avons analysé aussi si l'e-cig induit la mort cellulaire par apoptose ou par nécrose. Matériels et Méthodes. Les cellules ont été ensemencées sur des disques de titane 6AL-4V et d'AL-4V revêtus de nitrure de titane puis exposées ou non à la vapeur d'e-cig pendant 10 minutes, 2 fois par jour, pendant 24 ou 48h. L'adhésion est évaluée qualitativement par le marquage de Hoechst. L'adhésion et la prolifération ont été évaluées quantitativement par le test colorimétrique après 24 h, et 48h, respectivement. La migration est évaluée à 0, 8, 12 et 24h post exposition à l'e-cig après la création d'une plaie sur les monocouches cellulaires. La capacité cicatricielle des fibroblastes exposés ou non a été évaluée par un test de contraction de gel de collagène pendant 48h. La toxicité des aérosols a été évaluée en mesurant le taux du lactate déshydrogénase dans le surnageant. Le mode de toxicité de l'aérosol sur les fibroblastes a été évalué par un test d'apoptose/nécrose à l'aide de marquage à l'annexine V et à l'iodure de propidium. Résultats. L'e-cig inhibe l'adhésion, et réduit la prolifération et la migration des fibroblastes sur les implants dentaires. Aussi, l'e-cig provoque une mort cellulaire par nécrose et apoptose. L'effet négatif de l'e-cig tend à être plus prononcé sur les implants en titane que sur les implants en titane revêtus de nitrure. Conclusion. L'exposition de l'implant dentaire à l'e-cig peut causer une rupture de l'interaction de l'implant avec son milieu buccal, favorisant des réactions inflammatoires et un rejet de l'implant. / IIntroduction. The electronic cigarette (e-cig) is a device designed to reduce the harmful effects of tobacco by replacing smoke with an aerosol containing nicotine. This aerosol can interact with hard tissues, soft tissues, and dental implants. Such interaction could compromise the stability of dental implants in e-cig users. The aims of this study are to investigate the effects of e-cigs on the adhesion, proliferation, and migration of gingival and diabetic fibroblasts on two types of dental implants. We will also analyze whether e-cigs induce cell death by apoptosis or necrosis. Materials and methods. Human gingival fibroblasts and diabetic skin fibroblasts were seeded onto titanium nitride-coated 6AL-4V and AL-4V titanium discs and then exposed or not to e-cig vapor for 10 minutes, twice a day, for 24 or 48 hours. The cell adhesion was assessed by Hoechst staining, and the MTT colorimetric assay assessed the proliferation at 24 h and 48 h. Cell migration after wound was evaluated at 0, 8, 12, and 24h post-exposure to the e-cig. The capacity of e-cig-exposed fibroblasts to contract collagen gel was assessed during a period of 48 h. The aerosol toxicity was assessed by measuring lactate dehydrogenase levels in the supernatant. Apoptotic and necrotic populations were determined by annexin V and propidium iodide labeling. Results. Exposure to e-cig inhibits fibroblast adhesion, decreases proliferation, and delays migration to the implant surfaces. The negative effect of e-cig tends to be more pronounced in titanium implants than in nitride-coated titanium implants. The effect of e-cig on human fibroblasts involves apoptotic and necrotic pathways. Conclusion. The exposure of dental implants to e-cigs may cause a breakdown in the implant's interaction with its oral environment, promoting inflammatory reactions and implant rejection

Les sites apuriniques/apyrimidinique (AP) représentent une forme de dommage à l’ADN hautement mutagène et ce type de dommage peut survenir spontanément ou être induit par une variété d’agents. Afin de préserver la stabilité génomique, deux familles d’endonucléases de type AP, endo-IV et exo-III, sont nécessaires pour contrecarrer les effets mutagènes des sites AP. Malgré l’identification de membres des deux familles dans plusieurs organismes unicellulaire tels que E.coli et S. cerevisiae, aucun membre de la famille endo-IV n’a été identifié chez les organismes multicellulaires à l’exception de C. elegans et de C. briggsae. Nous avons donc décidé d’investiguer l’importance biologique de APN-1 chez C. elegans par l’utilisation d’une approche de knockdown du gène. Dans notre étude, nous avons montré que le knockdown du gène apn-1 chez C. elegans, en utilisant des ARN d’interférence (ARNi), cause une accumulation de mutations spontanées et induites par des drogues résultant en un délai de l’éclosion des œufs ainsi que par une diminution de la survie et de la longévité des vers adultes. De plus, nous avons montré que cette accumulation de mutations mène à un délai dans la progression du cycle cellulaire durant l’embryogénèse, représentant possiblement une explication du délai dans l’éclosion des œufs. Nous avons montré qu’il y avait une augmentation du niveau de mutations dans la gorge des vers, sans toutefois pouvoir confirmer la distribution de APN-1 qui possède une étiquette GFP. Les animaux transgéniques APN-1-GFP n’exprimaient pas suffisamment de la protéine de fusion pour permettre une visualisation à l’aide d’un microscope à fluorescence, mais la protéine a été détectée par immunobuvardage de type western. Les animaux transgéniques APN-1-GFP étaient instables et avaient des phénotypes concordants avec les défauts génétiques. En conclusion, il semble que C. elegans aie évolué afin de retenir un niveau de base de APN-1 jouant ainsi un rôle versatile afin de maintenir l’intégrité génétique d’autant plus que cet organisme semble manquer plusieurs enzymes de la voie de réparation par excision de base. / Apurinic/apyrimidinic (AP) sites are a form of highly mutagenic DNA damage that arise either spontaneously or by a variety of DNA damaging agents. To preserve genomic stability two AP endonuclease families, endo-IV and exo-III, evolved to counteract the mutagenic effect of AP sites. While members of both families were identified in multiple unicellular organisms, notably E. coli and S. cerevisiae, no members of the endo-IV family were identified in multicellular ones, with the exception of C. elegans and its close relatives, particularly C. briggsae. We set out to investigate the biological importance of APN-1 in C. elegans using gene knockdown approach. In our study, we showed that the knockdown of C. elegans apn-1 gene, using RNAi causes the accumulation of spontaneous and drug induced mutations, resulting in a delay in egg hatching, decreased survival and longevity. Furthermore, we have showed that the accumulated mutations lead to delays in cell cycle progression during early embryogenesis, thus providing a possible explanation for the observed delay in hatching. Although we showed increased mutations in the gut of the worm, we were unable to confirm APN-1 distribution tagged with GFP. The transgenic APN-1-GFP animal did not express enough of this fusion protein to be visualized by fluorescent microscopy, although it was detected by Western blot analysis. The transgenic animals over-expressing APN-1-GFP were unstable and showed phenotypes consistent with genetic defects. In conclusion, it would seem that C. elegans has evolved to retain a balanced level of APN-1, which plays a versatile role in maintaining genetic integrity, since this organism lacks a full complement of the enzymes in the base-excision repair pathway.

ABSTRACT The xyloglucan endo-transglycosylase/hydrolase (XTH) genes are found in all vascular and some nonvascular plants. The XTH genes encode proteins which comprise a subfamily of glycoside hydrolase (GH) family 16 in the Carbohydrate-Active enZYmes (CAZY) classification. The XTH gene products are believed to play intrinsic role in cell wall modification during growth and development throughout the lifetime of the plant. In the present investigation, biochemical and reverse genetic approaches were used to better understand the functions of individual members of the XTH gene family of two important plants: the model organism Arabidopsis thaliana and the grain crop barley (Hordeum vulgare). A phylogenetic tree of the xyloglucan-active enzymes of GH16 has previously been constructed, where enzymes with similar activities have been shown to cluster together. Several members of phylogenetic Group I/II and III-B, predicted to exhibit xyloglucan endo-transglycosylase activity (EC 2.4.1.207) and members of Group III-A, predicted to exhibit xyloglucan endo-hydrolase activity (EC 3.2.1.151), were included to analyze the functional diversity of XTH gene products. A heterologous expression system using the yeast Pichia pastoris was found to be effective for recombinant protein production with a success rate of ca. 50%. XTH gene products were obtained in soluble and active forms for subsequent biochemical characterization. In order to be able to screen larger numbers of protein producing clones, a fast and easy method is required to identify clones expressing active protein in high enough amounts. Thus, a miniaturized XET/XEH assay for high-throughput analysis was developed, which was able to identify activities with good precision and with a reduced time and materials consumption and a reduced work load. Enzyme kinetic analysis indicated that the XET or XEH activity of all XTH gene products characterized in the present study corresponded to predictions based on the previously revised phylogenetic clustering. To gain insight into the biological function of the predominant XEHs AtXTH31 and AtXTH32, which are highly expressed in rapidly developing tissues, a reverse genetic approach was employed using T-DNA insertion lines of the A. thaliana Columbia ecotype. Genotypic and phenotypic characterization, together with in situ assays of XET and XEH activities, in single- and double-knock-out mutants indicated that these Group III-A enzymes are active in expanding tissues of the A. thaliana roots and hypocotyl.  Although suppression of in muro XEH activity was clearly observed in the double-knock-out, no significant growth phenotype was observed, with the exception that radicle emergence appeared to be faster than in the wild type plants. Keywords: Arabidopis thaliana, Hordeum vulgare, plant cell wall, xyloglucan, glycoside hydrolase family 16, xyloglucan endo-transglycosylase/hydrolase gene family, xyloglucan endo-transglycosylase, xyloglucan endo-hydrolase, heterologous protein expression, Pichia pastoris, T-DNA insertion, in situ XET/XEH assay, high-throughput screening / QC 20110114

Les sites apuriniques/apyrimidinique (AP) représentent une forme de dommage à l’ADN hautement mutagène et ce type de dommage peut survenir spontanément ou être induit par une variété d’agents. Afin de préserver la stabilité génomique, deux familles d’endonucléases de type AP, endo-IV et exo-III, sont nécessaires pour contrecarrer les effets mutagènes des sites AP. Malgré l’identification de membres des deux familles dans plusieurs organismes unicellulaire tels que E.coli et S. cerevisiae, aucun membre de la famille endo-IV n’a été identifié chez les organismes multicellulaires à l’exception de C. elegans et de C. briggsae. Nous avons donc décidé d’investiguer l’importance biologique de APN-1 chez C. elegans par l’utilisation d’une approche de knockdown du gène. Dans notre étude, nous avons montré que le knockdown du gène apn-1 chez C. elegans, en utilisant des ARN d’interférence (ARNi), cause une accumulation de mutations spontanées et induites par des drogues résultant en un délai de l’éclosion des œufs ainsi que par une diminution de la survie et de la longévité des vers adultes. De plus, nous avons montré que cette accumulation de mutations mène à un délai dans la progression du cycle cellulaire durant l’embryogénèse, représentant possiblement une explication du délai dans l’éclosion des œufs. Nous avons montré qu’il y avait une augmentation du niveau de mutations dans la gorge des vers, sans toutefois pouvoir confirmer la distribution de APN-1 qui possède une étiquette GFP. Les animaux transgéniques APN-1-GFP n’exprimaient pas suffisamment de la protéine de fusion pour permettre une visualisation à l’aide d’un microscope à fluorescence, mais la protéine a été détectée par immunobuvardage de type western. Les animaux transgéniques APN-1-GFP étaient instables et avaient des phénotypes concordants avec les défauts génétiques. En conclusion, il semble que C. elegans aie évolué afin de retenir un niveau de base de APN-1 jouant ainsi un rôle versatile afin de maintenir l’intégrité génétique d’autant plus que cet organisme semble manquer plusieurs enzymes de la voie de réparation par excision de base. / Apurinic/apyrimidinic (AP) sites are a form of highly mutagenic DNA damage that arise either spontaneously or by a variety of DNA damaging agents. To preserve genomic stability two AP endonuclease families, endo-IV and exo-III, evolved to counteract the mutagenic effect of AP sites. While members of both families were identified in multiple unicellular organisms, notably E. coli and S. cerevisiae, no members of the endo-IV family were identified in multicellular ones, with the exception of C. elegans and its close relatives, particularly C. briggsae. We set out to investigate the biological importance of APN-1 in C. elegans using gene knockdown approach. In our study, we showed that the knockdown of C. elegans apn-1 gene, using RNAi causes the accumulation of spontaneous and drug induced mutations, resulting in a delay in egg hatching, decreased survival and longevity. Furthermore, we have showed that the accumulated mutations lead to delays in cell cycle progression during early embryogenesis, thus providing a possible explanation for the observed delay in hatching. Although we showed increased mutations in the gut of the worm, we were unable to confirm APN-1 distribution tagged with GFP. The transgenic APN-1-GFP animal did not express enough of this fusion protein to be visualized by fluorescent microscopy, although it was detected by Western blot analysis. The transgenic animals over-expressing APN-1-GFP were unstable and showed phenotypes consistent with genetic defects. In conclusion, it would seem that C. elegans has evolved to retain a balanced level of APN-1, which plays a versatile role in maintaining genetic integrity, since this organism lacks a full complement of the enzymes in the base-excision repair pathway.

Cette thèse est composée de deux parties distinctes ayant comme thématique commune, la synthèse d’hétérocycles via la catalyse organométallique.Nous nous sommes intéressés, dans un premier temps, à une voie de synthèse permettant un accès rapide au squelette tétrahydrocyclopenta[c]acridine. Ces composés polyfonctionnalisés sont obtenus très efficacement en seulement trois étapes dans des conditions particulièrement douces. L’étape clé de cette synthèse est une réaction de Pauson-Khand intramoléculaire catalysée au cobalt. Certains composés issus de la famille des tétrahydrocyclopenta[c]acridines présentent une activité d’inhibition sélective envers les kinases dépendantes des cyclines (CDKs), et plus particulièrement la CDK2. Un composé chef de file est identifié, puis grâce aux données de co-Cristallisation avec CDK2 et de modélisation moléculaire, suivi de l’étude des relations structure-Activité, la conception rationnelle d’une deuxième génération de molécules est rendue possible. Le composé le plus avancé présente une CI50 de 300 nM envers CDK2/cyclin A et un excellent profil de stabilité métabolique.Dans un deuxième temps, nous avons étudié et développé une réaction tandem d’addition/cyclisation catalysée par l’argent, avec des nucléophiles carbonés sur des substrats ortho-Alcynylbenzaldéhydes. La stratégie de synthèse conduit à des dérivés 1H-Isochromènes par création de deux nouvelles liaisons (C-C et C-O). Une étude approfondie de la réaction tandem nous a permis d’obtenir une large gamme de dérivés d’isochromènes en mettant en évidence l’influence de différents substituants, portés par le groupement alcyne ou le substrat, ainsi que l’utilisation de différents nucléophiles carbonés (alcynes, aromatiques, hétéroaromatiques). Les limitations de la réaction tandem ont également pu être identifiées. / My thesis proJect is organized around two main topics having in common organometallic chemistry and the synthesis of heterocycles.Firstly, we were interested in a methodology for the synthesis of tetrahydrocyclopenta[c]acridines. These compounds are synthesized in three steps from various quinolines. The key step is a cobalt-Catalyzed intramolecular Pauson-Khand reaction. Some compounds of this family exhibit selective Cyclin Dependent Kinases (CDKs) inhibition, particulary against CDK2, in the submicromolar range. A hit compound has been identified, and then using data from co-Crystallization with CDK2 and molecular modeling, followed by the study of structure-Activity relationships, the rational design of a second generation of molecules has been investigated. The most advanced compound has an IC50 of 300 nM against CDK2/cyclin A with an excellent metabolic profile. In the second axis of research, we have studied and developed a new silver-Catalyzed tandem addition/cyclization reaction with carbon nucleophiles. The systems studied are (hetero)aromatics compounds having an aldehyde group and in ortho-Position an alkynyl group. The synthetic strategy leads to 1H-Isochromene derivatives by creating two new bonds. A thorough study of the tandem reaction allowed us to obtain a wide range of isochromene derivatives, highlighting the influence of different substituents carried by the alkyne group or on the (hetero)aromatic substrates; and also to investigate the use of different carbon nucleophiles (alkynes, aromatics and heteroaromatics). The limitations of the tandem reaction have also been identified.

Problématique : La majorité des études publiées sur la réhabilitation par mise en charge immédiate de deux implants non jumelés avec une prothèse totale mandibulaire de recouvrement n’ont rapporté que des mesures cliniques objectives et très peu ont évalué les mesures centrées sur le patient, et ce, avec des erreurs de mesure. Aucune étude n’a évalué les attentes des patients vis-à-vis d'un tel protocole. Objectifs : Évaluer les attentes, le niveau de satisfaction ainsi que la qualité de vie reliée à la santé bucco-dentaire des édentés complets suite à un protocole de mise en charge immédiate. Méthodologie : Cet essai clinique de phase 1 utilise un design pré-post afin d’évaluer les mesures centrées sur le patient. Dix-huit individus, complètement édentés et âgés en moyenne de 62,39 ± 7,65 ans, ont reçu une prothèse totale mandibulaire de recouvrement sur deux implants non jumelés suite à un protocole de mise en charge immédiate, conjointement à une prothèse totale conventionnelle maxillaire. Un instrument adapté pour mesurer leurs attentes à l’aide d’échelles visuelles analogues, le questionnaire « McGill Denture Satisfaction Instrument » ainsi que le questionnaire OHIP-20 ont été remis aux patients avant de procéder aux traitements (T0), ainsi qu’aux rendez-vous de suivi à 2 semaines (T1), 1 mois (T2) et 4 mois (T3). De plus, l’inventaire de personnalité révisé (NÉO PI-R) ainsi qu’un questionnaire sociodémographique ont été remplis par les participants. Les « change scores » ont été calculés puis des tests non paramétriques et des analyses de variances en mesures répétées suivies de comparaisons par paires ont été utilisés afin d’analyser les données recueillies. La taille d’effet a été estimée. Résultats : Les participants avaient différentes attentes par rapport à la mise en charge immédiate. Certains s’attendaient à un effet positif à court terme par rapport à leur apparence esthétique (83,3 %) et à leur vie sociale (55,7 %), alors que d’autres avaient des craintes envers leur confort (5,6 %), leur habileté à mastiquer (11,1 %) et à nettoyer leur prothèse inférieure (11,1 %). À 4 mois, le protocole de mise en charge immédiate avait rencontré la majorité des attentes des patients par rapport à l’esthétique (94.4 %), la mastication (83.3 %), la phonétique (61.1 %), le confort (94.4 %), l’hygiène (88.9 %) et leur vie sociale (88.9 %). Une amélioration statistiquement significative de la satisfaction en générale, du confort, de l’esthétique, de la stabilité de la prothèse inférieure et de l’habileté à mastiquer a été notée à 2 semaines (p<0,001). Également, les comparaisons par paires ont révélé une diminution statistiquement significative du score total de l’OHIP-20 (p < 0,001) de même que la majorité des domaines de l’OHIP (p < 0.01), sauf pour l’handicap social qui n’a diminué significativement qu’après 1 mois (p = 0.01). Ces changements (pour la satisfaction et la qualité de vie) sont restés stables au cours des suivis subséquents. Indépendamment des traits de personnalité et des variables sociodémographiques, le protocole immédiat a satisfait 94,4 % des participants et a amélioré leur qualité de vie avec une large magnitude d’effet (d = 1.9; p < 0.001). Bien que deux patients aient perdu des implants au cours du traitement, 100 % des participants étaient d’accord pour recommander cette procédure à leurs pairs. Conclusions: Le protocole de mise en charge immédiate semble satisfaire les patients quelles que soient leurs attentes. Le protocole MCI peut améliorer, à court terme, la qualité de vie des patients totalement édentés. Les résultats prometteurs de la phase 1 devraient être corroborés lors de la 2e phase de cette étude. / Statement of problem: Most published research on the immediate loading of a mandibular 2-implant overdenture has only reported on clinical outcomes. Few studies have evaluated patients centered-outcomes but with measurement errors. Consequently, there is a need to assess clinical and patient-reported outcomes in this regard. Objectives: To examine patients’ level of satisfaction, expectations and quality of life with regard to the implants’ immediate loading protocol in edentate individuals. Methods: This phase-I trial used a pre-post design to assess patient-centered outcomes in 18 edentate individuals (mean age 62.39 ± 7.65 years) who have received a 2-implant (unsplinted) mandibular overdenture through an immediate loading protocol. The McGill Denture Satisfaction Instrument, a VAS instrument assessing expectations and the OHIP-20 questionnaire were used to evaluate patients’ outcomes at baseline, 2 weeks, 1 and 4 months. Socio-demographic and personality trait data were obtained using the Revised NEO Personality Inventory and a self-administered questionnaire. Change scores were calculated and non-parametrical tests were used to analyse the data. Repeated measures ANOVAs and paired t-tests were also conducted, and effect size was estimated. Results: The participants had a wide range of expectations regarding the immediate loading protocol. Expectations included short-term positive impact on aesthetics (83.3 %) and social life (55.7 %). Other expectations included negative effects on comfort (5.6%), the ability to chew (11.1 %) and to clean their lower denture (11.1%). At 4 months, the immediate loading protocol had met most patients’ expectations regarding aesthetics (94.4%), the ability to chew (83.3%), ability to speak (61.1%), comfort (94.4%), the ability to clean their lower denture (88.9%) and their social life (88.9%). The statistical analysis showed an overall satisfaction increase with a median change score of 66 (range=7-98), 68 (range=7- 95), and 70 (range= 17- 99), at 2 weeks, 1 month and 4 months respectively. There was a statistically significant improvement in overall satisfaction, comfort, perceived aesthetics, stability of the overdenture, and ability to chew at 2 weeks (p < 0,001). Pairwise comparison (within-subjects comparisons) revealed significant decreases in total OHIP scores (P < 0.001), as well as fewer functional limitations, physical pain, psychological discomfort, physical disability, psychological disability, and handicap (P < 0.01) from baseline to 2 weeks, 1 month and 4 months follow-up. Social disability score decrease significantly only after 1 month follow-up (p = 0.01). These changes remained stable during subsequent follow-ups. The protocol satisfied 94.4% of the participants and improve their quality of life with an estimated effect size of 1.9 (p < 0.001), regardless of socio-demographic and personality profiles. There was 100% agreement among patients on recommending this procedure to their peers. Conclusions: Immediate loading of two unsplinted implants with a mandibular overdenture seemed to fulfill patients’ satisfaction regardless of their expectations and may improve oral health-related quality life of edentate individuals in short-term. Encouraging results from phase I should be confirmed and approved in Phase II clinical trials.

Resumo: Associação das próteses parciais removíveis de extremidade livre com os implantes osseointegrados é, ainda, uma opção de tratamento pouco explorada na Odontologia reabilitadora moderna. Por isso, o objetivo deste estudo é avaliar, utilizando o método dos elementos finitos bidimensional, a distribuição de tensão e o deslocamento nas estruturas de suporte da prótese parcial removível de extremidade livre (PPREL) associada a um implante osseointegrado de 10,0 x 3,75 mm com sistema ERA de retenção, em diferentes formatos de rebordo alveolar. Para tanto, foram criados oito modelos, os quais, em corte sagital, representam: Modelo A (MA) - uma hemiarcada com rebordo horizontal, sem suporte posterior, com a presença do dente 33 e de uma PPREL convencional, com apoio metálico na incisal do dente 33, em substituição aos dentes 34, 35, 36 e 37; Modelo B (MB) - semelhante ao MA, diferenciando-se deste pela presença de um implante de 3,75 x 10,00 mm com sistema ERA de retenção associado, na região posterior da base da PPREL; Modelo C (MC) - semelhante ao MA, entretanto o rebordo distal apresenta uma conformação ascendente distal; Modelo D (MD) - semelhante ao MC, diferenciando-se deste pela presença do implante com sistema de retenção associado; Modelo E (ME) - semelhante ao MA, entretanto o rebordo distal apresenta uma conformação descendente distal; Modelo F (MF) - semelhante ao ME, diferenciando-se deste pela presença do implante com sistema ERA de retenção; Modelo G (MG) - semelhante ao MA, entretanto o rebordo distal apresenta formato descendente-ascendente; Modelo H (MH) - semelhante ao MG, diferenciando-se deste pela presença do implante com sistema ERA de retenção. Com o auxílio do programa de elementos finitos ANSYS 9.0, os modelos foram carregados com forças verticais de 50 N, em cada ponta de cúspide....(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The association of mandibular distal extension removable artial dentures with an osteointegrated implant is a treatmeat hasn't been fully explored by modern rehabilitation dentistry yet. For this reason, the objective of this study is to evaluate, by means of the bidimensional method of finite elements, the distribution of tension and the displacement on the structures supporting the distal extension removable partial denture (DERPD), associated to a 10.0 x 3.75 mm osteointegrated implant with an ERA retention system, in alveolar ridges of different shapes. For that purpose, eight models were created, representing, from a sagittal perspective: Model A (MA) - a half arch with a horizontal ridge without posterior support, with the presence of the lower left canine, and a conventional DERPD, with metallic support in the incisal aspect of this canine, as replacement for the first and second pre-molars and the first and second molars of the lower left half arch; Model B (MB) - similar to MA, but different because of the presence of a 3.75 x 10.00 mm implant with an associated ERA retention system in the posterior region of the DERPD base; Model C (MC) - similar to MA, however with a distally ascending ridge format; Model D (MD) - similar to MC, but different because there is an implant associated to a retention system; Model E (ME) - similar to MA, however with a distally descending ridge format; Model F (MF) - similar to ME, but different in the sense that there is an implant with an associated ERA retention system; Model G (MG) - similar to MA, however with a distally descending-ascending ridge format; Model H (MH) - similar to MG, but different in the sense that there is an implant with an associated ERA retention system. The finite element program ANSYS 9.0 was used to load the models with vertical forces of 50 N, on each cuspid tip...(Complete abstract, click electronic address below) / Orientador: Eduardo Piza Pellizzer / Coorientador: João Antonio Pereira / Banca: Adriano de Almeida de Lima / Banca: Paulo Renato Junqueira Zuim / Banca: Regina Tamaki / Banca: Wilson Roberto Poi / Doutor

Metazoans have evolved conserved mechanisms to promote cell survival under low oxygen tensions by initiating a transcriptional cascade centered on the action of Hypoxia Inducible transcription Factors (HIFs). In aerobic conditions, HIFs are inactivated by ubiquitin-proteasome-mediated degradation of their a subunit, which is dependent on prolyl hydroxylation by 2-oxoglutarate (2-OG) and Fe(II)-dependent prolyl hydroxylases (PHDs). In hypoxia, HIF-$\alpha$ is no longer hydroxylated and is therefore stabilised, activating a global transcriptional response to ensure cell survival. Interestingly, HIFs can also be activated in aerobic conditions, however the mechanisms of this oxygen-independent regulation are poorly understood. Here, I have explored the role of the vacuolar H+-ATPase (V-ATPase), the major proton pump for acidifying intracellular vesicles and facilitating lysosomal degradation, in regulating HIF-$\alpha$ turnover. Unbiased forward genetic screens in near-haploid human cells identified that disruption of the V-ATPase leads to activation of HIFs in aerobic conditions. Rather than preventing the lysosomal degradation of HIF-$\alpha$, I found that V-ATPase inhibition indirectly affects the canonical proteasome-mediated degradation of HIF-$\alpha$ isoforms by altering the intracellular iron pool and preventing HIF-$\alpha$ prolyl hydroxylation. In parallel, I characterised two putative mammalian V-ATPase assembly proteins, TMEM199 and CCDC115, identified by the forward genetic screen and subsequent mass spectrometry analysis. I confirmed that both TMEM199 and CCDC115 are required for V-ATPase function, and established assays to determine how TMEM199 and CCDC115 associate with components of the core V-ATPase complex. Lastly, to measure how V-ATPase activity leads to changes in the labile iron pool, I developed an endogenous iron reporter using CRISPR-Cas9 knock-in technology. This approach confirmed that iron homeostasis is impaired during V-ATPase inhibition, and demonstrated that exogenous ferric iron can restore the labile iron pool in a transferrin-independent manner. Together my studies highlight a crucial link between V-ATPase activity, iron homeostasis, and the hypoxic response pathway.

Problématique : La majorité des études publiées sur la réhabilitation par mise en charge immédiate de deux implants non jumelés avec une prothèse totale mandibulaire de recouvrement n’ont rapporté que des mesures cliniques objectives et très peu ont évalué les mesures centrées sur le patient, et ce, avec des erreurs de mesure. Aucune étude n’a évalué les attentes des patients vis-à-vis d'un tel protocole. Objectifs : Évaluer les attentes, le niveau de satisfaction ainsi que la qualité de vie reliée à la santé bucco-dentaire des édentés complets suite à un protocole de mise en charge immédiate. Méthodologie : Cet essai clinique de phase 1 utilise un design pré-post afin d’évaluer les mesures centrées sur le patient. Dix-huit individus, complètement édentés et âgés en moyenne de 62,39 ± 7,65 ans, ont reçu une prothèse totale mandibulaire de recouvrement sur deux implants non jumelés suite à un protocole de mise en charge immédiate, conjointement à une prothèse totale conventionnelle maxillaire. Un instrument adapté pour mesurer leurs attentes à l’aide d’échelles visuelles analogues, le questionnaire « McGill Denture Satisfaction Instrument » ainsi que le questionnaire OHIP-20 ont été remis aux patients avant de procéder aux traitements (T0), ainsi qu’aux rendez-vous de suivi à 2 semaines (T1), 1 mois (T2) et 4 mois (T3). De plus, l’inventaire de personnalité révisé (NÉO PI-R) ainsi qu’un questionnaire sociodémographique ont été remplis par les participants. Les « change scores » ont été calculés puis des tests non paramétriques et des analyses de variances en mesures répétées suivies de comparaisons par paires ont été utilisés afin d’analyser les données recueillies. La taille d’effet a été estimée. Résultats : Les participants avaient différentes attentes par rapport à la mise en charge immédiate. Certains s’attendaient à un effet positif à court terme par rapport à leur apparence esthétique (83,3 %) et à leur vie sociale (55,7 %), alors que d’autres avaient des craintes envers leur confort (5,6 %), leur habileté à mastiquer (11,1 %) et à nettoyer leur prothèse inférieure (11,1 %). À 4 mois, le protocole de mise en charge immédiate avait rencontré la majorité des attentes des patients par rapport à l’esthétique (94.4 %), la mastication (83.3 %), la phonétique (61.1 %), le confort (94.4 %), l’hygiène (88.9 %) et leur vie sociale (88.9 %). Une amélioration statistiquement significative de la satisfaction en générale, du confort, de l’esthétique, de la stabilité de la prothèse inférieure et de l’habileté à mastiquer a été notée à 2 semaines (p<0,001). Également, les comparaisons par paires ont révélé une diminution statistiquement significative du score total de l’OHIP-20 (p < 0,001) de même que la majorité des domaines de l’OHIP (p < 0.01), sauf pour l’handicap social qui n’a diminué significativement qu’après 1 mois (p = 0.01). Ces changements (pour la satisfaction et la qualité de vie) sont restés stables au cours des suivis subséquents. Indépendamment des traits de personnalité et des variables sociodémographiques, le protocole immédiat a satisfait 94,4 % des participants et a amélioré leur qualité de vie avec une large magnitude d’effet (d = 1.9; p < 0.001). Bien que deux patients aient perdu des implants au cours du traitement, 100 % des participants étaient d’accord pour recommander cette procédure à leurs pairs. Conclusions: Le protocole de mise en charge immédiate semble satisfaire les patients quelles que soient leurs attentes. Le protocole MCI peut améliorer, à court terme, la qualité de vie des patients totalement édentés. Les résultats prometteurs de la phase 1 devraient être corroborés lors de la 2e phase de cette étude. / Statement of problem: Most published research on the immediate loading of a mandibular 2-implant overdenture has only reported on clinical outcomes. Few studies have evaluated patients centered-outcomes but with measurement errors. Consequently, there is a need to assess clinical and patient-reported outcomes in this regard. Objectives: To examine patients’ level of satisfaction, expectations and quality of life with regard to the implants’ immediate loading protocol in edentate individuals. Methods: This phase-I trial used a pre-post design to assess patient-centered outcomes in 18 edentate individuals (mean age 62.39 ± 7.65 years) who have received a 2-implant (unsplinted) mandibular overdenture through an immediate loading protocol. The McGill Denture Satisfaction Instrument, a VAS instrument assessing expectations and the OHIP-20 questionnaire were used to evaluate patients’ outcomes at baseline, 2 weeks, 1 and 4 months. Socio-demographic and personality trait data were obtained using the Revised NEO Personality Inventory and a self-administered questionnaire. Change scores were calculated and non-parametrical tests were used to analyse the data. Repeated measures ANOVAs and paired t-tests were also conducted, and effect size was estimated. Results: The participants had a wide range of expectations regarding the immediate loading protocol. Expectations included short-term positive impact on aesthetics (83.3 %) and social life (55.7 %). Other expectations included negative effects on comfort (5.6%), the ability to chew (11.1 %) and to clean their lower denture (11.1%). At 4 months, the immediate loading protocol had met most patients’ expectations regarding aesthetics (94.4%), the ability to chew (83.3%), ability to speak (61.1%), comfort (94.4%), the ability to clean their lower denture (88.9%) and their social life (88.9%). The statistical analysis showed an overall satisfaction increase with a median change score of 66 (range=7-98), 68 (range=7- 95), and 70 (range= 17- 99), at 2 weeks, 1 month and 4 months respectively. There was a statistically significant improvement in overall satisfaction, comfort, perceived aesthetics, stability of the overdenture, and ability to chew at 2 weeks (p < 0,001). Pairwise comparison (within-subjects comparisons) revealed significant decreases in total OHIP scores (P < 0.001), as well as fewer functional limitations, physical pain, psychological discomfort, physical disability, psychological disability, and handicap (P < 0.01) from baseline to 2 weeks, 1 month and 4 months follow-up. Social disability score decrease significantly only after 1 month follow-up (p = 0.01). These changes remained stable during subsequent follow-ups. The protocol satisfied 94.4% of the participants and improve their quality of life with an estimated effect size of 1.9 (p < 0.001), regardless of socio-demographic and personality profiles. There was 100% agreement among patients on recommending this procedure to their peers. Conclusions: Immediate loading of two unsplinted implants with a mandibular overdenture seemed to fulfill patients’ satisfaction regardless of their expectations and may improve oral health-related quality life of edentate individuals in short-term. Encouraging results from phase I should be confirmed and approved in Phase II clinical trials.

Resumo: Os dados sobre a influência da forma do rebordo alveolar na distribuição interna das tensões na associação da prótese parcial removível de extremidade livre (PPREL) com os implantes osseointegrados são inconclusivos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar através do método dos elementos finitos (MEF) bi-dimensional, a influência do formato do rebordo alveolar na distribuição interna das tensões. Para isso, foram confeccionados 12 (doze) modelos no programa AutoCAD 2005 (Autodesk Inc, USA), sendo: Modelo A (MA) - hemiarcada com a representação do dente natural 33 e o rebordo edentado para distal; Modelo B (MB) - semelhante ao MA com uma PPREL convencional substituindo os dentes ausentes 34, 35, 36 e 37; Modelo C (MC) - semelhante ao MB, porém com um implante do Sistema Bränemark (3,75 x 10,0 mm) posicionado na região retromolar, sob a base da prótese, conferindo apenas suporte; Modelos A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3, B4, C1, C2, C3 e C4 foram baseados nos respectivos modelos: A, B e C, com a identificação numérica seguindo a forma do rebordo alveolar no plano sagital, como descrito: descendente distal (1), côncavo (2), plano (3) e ascendente distal (4). Os modelos foram exportados para o programa de elementos finitos ANSYS 8.0 (Swanson Analysis Systems, Houston, Pa) para a análise numérica. O carregamento foi realizado com forças verticais de 50 N. Os resultados mostraram que máxima tendência ao deslocamento para os rebordos analisados ocorreu de forma semelhante entre os modelos B e C, sendo: descendente distal (B1 - 0,2484 mm e C1- 0,2513 mm), plano (B3 - 0,2415 mm e C3 0,2452 mm), côncavo (B2 - 0,2377 mm e C2 0,2392 mm) e ascendente distal (B4 - 0,2255 mm e C4 - 0,2293 mm); a máxima concentração de tensão nos modelos B apresentou a seguinte ordem: descendente distal (288,77 MPa), côncavo (199,99 Mpa), plano (197,11 MPa) e ascendente distal (185,22 MPa)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The data about the influence of the alveolar ridge shape in the stress distribution during the association of a free-end saddle removable partial denture (FERPD) with an osseointegrated implant are inconclusive. Thus, the objective of this study was to evaluate, by bidimensional the finite element analysis (FEA), the influence of the alveolar ridge shape in the stress distribution. For this, 12 (twelve) models were created in the program AutoCAD 2005 (Autodesk Inc, USA), representing: model A (MA) - hemiarch containg only the natural tooth 33 and edentulous space for distal; model B (MB) - similar to MA with a conventional FERPD replaying the absent teeth 34, 35, 36 and 37; model C (MC) - similar to MB, however with an implant of the Sistema Bränemark (3,75 x 10,0 mm) positioned in posterior area, in order to support FERPD base; Models A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3, B4, C1, C2, C3 and C4 were based on the respective models: A, B and C, with the numeric identification following the shape in the sagital plane, as described: distal descending (1), concave (2), plan (3) and distal ascendancy (4). The models were exported for the FEA hardware (ANSYS 8.0 Swanson Analysis Systems, Houston, PA) for numeric analysis. The loading were performance with vertical forces of 50 N. The results showed maximum displacement tendency (mm) were between models B and C: distal descending (B1 - 0.2484 mm and C1 - 0.2513 mm), plan (B3 - 0.2415 mm and C3 0.2452 mm), concave (B2 - 0.2377 mm and C2 0.2392 mm) and distal ascendancy (B4 - 0.2255 mm and C4 - 0.2293 mm); the maximum stress concentration for models B were distal descending (288,77 MPa), concave (199,99 MPa), plan (197,11 MPa) and distal ascendancy (185,22 MPa); the model C present an inversion between plan and distal ascending shape: C1 with 395,93 MPa, C2 with 341,49 MPa, C4 with 266,02 MPa and C3 with 219,58 MP... (Complete abstract, click electronic address below). / Orientador: Eduardo Passos Rocha / Coorientador: João Antônio Pereira / Banca: Eduardo Piza Pellizzer / Banca: Renata Cunha Matheus Rodrigues Garcia / Mestre