Mesmo com o constante avanço no estudo da sibilância e asma, existem inúmeras controvérsias sobre a participação da exposição à endotoxina, background genético e ativação celular. Investigamos a participação da exposição à endotoxina ambiental e o papel do LPS no desenvolvimento dos fenótipos de sibilância e asma. Para tanto selecionamos crianças sibilantes e não sibilantes, e crianças asmáticas e não asmáticas, sendo seu sangue coletado e as PBMC cultivadas com LPS. O sobrenadante foi colhido para análise de citocinas por ELISA, e analisamos os polimorfismos nos genes de CD14 e TLR4 por PCR-RFLP. Não encontramos relação entre a exposição à endotoxina ambiental e o quadro de sibilância. Observamos que PBMC estimuladas ou não com LPS de crianças sibilantes e asmáticas produzem baixos níveis de IL-12 e IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 quando comparado com crianças não sibilantes e não asmáticas. Os polimorfismos de TLR4 e CD14 não tiveram associação com sibilância ou asma. Nossos dados sugerem que não somente a polarização Th2 é importante para desenvolver essas patogenias, mas também uma diminuição na resposta Th1. / Although the great advance in the study of asthma and wheezing, there are numerous controversies about the involvement of endotoxin exposure, genetic background and cellular activation. We investigated the involvement of environmental endotoxin exposure and the role of LPS in the development of phenotypes wheezing and asthma. For experiments we selected wheezing and non-wheezing, and asthmatic and non-asthmatic children, and their blood collected and the PBMC cultured with LPS. The supernatant was collected for analysis cytokines by ELISA, and analyzed CD14 and TLR4 polymorphisms by PCR-RFLP. There was no relationship between environmental endotoxin exposure and the framework of wheezing. We observed that LPS-stimulated PBMC of wheezing and asthmatic children produce lower levels of IL-12 and IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 when compared with non-wheezing and non-asthmatic children. The polymorphisms TLR4 and CD14 were not associated with wheezing or asthma. Our data suggest that not only Th2 polarization is important to develop these diseases, but also a decrease in Th1 response.

Submitted by LETÍCIA GRILO DE SOUZA null (leti_gs17@hotmail.com) on 2016-02-18T17:57:05Z No. of bitstreams: 1 tese com ficha FINAL.pdf: 2457777 bytes, checksum: d2ec3867571ca27b81a1241f1d041c5e (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-02-18T18:39:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 souza_lg_me_sjc.pdf: 2457777 bytes, checksum: d2ec3867571ca27b81a1241f1d041c5e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-18T18:39:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 souza_lg_me_sjc.pdf: 2457777 bytes, checksum: d2ec3867571ca27b81a1241f1d041c5e (MD5) Previous issue date: 2016-01-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cárie é uma doença infectocontagiosa multifatorial. Em cavidades profundas, as lesões cariosas geralmente estão associadas a quadros de sintomatologia pulpar dolorosa. O objetivo deste estudo foi determinar a diversidade bacteriana e a quantidade de endotoxinas e casos de cáries sintomáticas e assintomáticas. Para este estudo foram selecionados 20 pacientes com lesões cariosas profundas com sensibilidade dolorosa compatível com pulpite reversível (n=10) e sem sintomatologia dolorosa (n=10). As amostras de dentina cariada foram obtidas com o auxílio de colheres de dentina estéreis e apirogénicas e foram coletadas em dois momentos: antes e após a remoção convencional do tecido cariado. Estas amostras foram divididas em duas alíquotas, que foram em seguida submetidas ao teste Checkerboard (alíquotas contendo 150 ul de TE e 100 uL de NaOH a 0,5 M) e teste cinético cromogénico LAL (Alíquotas com 1 ml de soro apirogênico) para determinação do perfil microbiano e quantificação de endotoxina, respectivamente. O teste estatístico Mann Whitney não mostrou diferença entre a camada de dentina superficial e profunda para as bactérias estudadas. Em relação ao fator sensibilidade as bactérias Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia buccalis e Lactobacillus species foram as que apresentaram diferenças estatisticas significantes, sendo mais presente em pacientes com sintomatologia. Para as endotoxinas, os dentes sintomáticos resultaram em maiores quantidades de endotoxinas (p = 0,047). Dentes sintomáticos apresentaram 4,13 log 10 EU / mg dentina, enquanto o nível de endotoxinas para os dentes dentes assintomáticos foi de 3,45 log 10 EU / mg dentina. Dentinas coletadas em diferentes áreas apresentaram quantidades similares de endotoxinas (p = 0,139). A quantidade de bactérias não parece estar relacionada com a sintomatologia de lesões cariosas profunda, enquanto a quantidade de endotoxinas é maior em cáries sintomáticas. / Caries is a multifactorial infectious disease. In deep cavities, carious lesions are usually associated with scenarios of pulp painful symptoms. The objective is to determine bacterial diversity and endotoxin levels in cases of sintomatic and assintomatic caries. Twenty patients with deep carious lesions with soreness compatible with reversible pulpitis (n = 10) and without pain symptoms (n = 10). Carious dentine samples were obtained with the aid of sterile dentine and apyrogenic spoons and harvested in two steps: before and after conventional caries removal. These samples were divided into two aliquots, which were then subjected to the checkerboard(aliquots contained in 150µl of TE and 100µl of 0.5 M NaOH) and kinetic chromogenic LAL test(aliquots with 1 ml of apirogenic serum) for determination of microbial profile and quantitation of endotoxin, respectively. By Mann Whitney test showed no difference between the superficial and deep dentin layer for the studied bacteria. In relation to factor sensitivity bacteria Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia buccalis e Lactobacillus species were the ones that showed statistically significant differences, being more present in patients with symptoms. For the endotoxins, symptomatic teeth resulted in greater quantity of endotoxins (p=0.047). Symptomatic teeth presented 4.13 log10 EU/mg dentin, while endotoxin level for no symptomatic teeth was 3.45 log10 EU/mg dentin. Dentin collected in different areas presented similar amount of endotoxins (p=0.139). The amount of bacteria does not seem to be related to symptomatology of deep carious lesions, while endotoxins quantity is greater in symptomatic scenarios.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-23Bitstream added on 2014-06-13T18:31:25Z : No. of bitstreams: 1 vilela_pgf_me_sjc.pdf: 389414 bytes, checksum: e94b74337996f5291f23f9666ba4f093 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A proposta desta pesquisa foi avaliar a capacidade de diferentes concentrações de endotoxinas (LPS) de Escherichia coli induzir secreção de MMP-3 e MMP-8 por macrófagos in vitro, em diferentes períodos de tempo. Para tanto, monócitos humanos da linhagem U937, diferenciados em macrófagos maduros com phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), foram ativados com 0 (controle), 5, 10 e 20 EU/mL e a produção de MMP- 3 e MMP-8 foi avaliada em três períodos de tempo (24, 48 e 72 h) por ensaios imunoenzimáticos (ELISA). Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%). Pode-se verificar que houve significativo aumento da produção de MMP-3 (p<0,05) e redução da produção de MMP-8 após ativação com diferentes concentrações de LPS em relação ao controle, nos períodos de 24, 48 e 72 h. Em praticamente todos os grupos (incluindo os controles), pode-se verificar que a produção de MMP-3 ou MMP-8 aumentou significativamente em relação ao aumento do tempo. Pode-se concluir que: a) diferentes concentrações de endotoxinas apresentaram capacidade de induzir aumento significativo da produção de MMP-3 nos períodos de 24, 48 e 72 h, independente da concentração utilizada, sugerindo que esta ativação é dependente da presença de endotoxina e não da dose; b) a presença de diferentes concentrações de endotoxinas induziu significativa redução da produção de MMP-8 em relação ao controle, em todos os períodos de tempo avaliados. / The aim of this study was to evaluate the capacity of different concentrations of endotoxins (LPS) of Escherichia coli to induce secretion of MMP-3 and MMP-8 in macrophages in vitro, in the periods of 24, 48 and 72 h. For this purpose, human monocytes line U937 were differentiated into mature macrophages with phorbol-12-myristate-13- acetate (PMA) and were activated with different concentrations of endotoxins: 0 (control), 5, 10 and 20 EU/ml and the production of MMP-3 and MMP-8 were evaluated at three periods of time (24, 48 e 72 h) by immunoenzymatic assays (ELISA). The results were analyzed statistically by ANOVA and Tukey’s test, 5%. Significant increase in the production of MMP-3 (p<0.05) after the activation with different concentrations of LPS in relation to the control at the periods of 24, 48 and 72 h were observed. Regarding MMP-8, significant reduction in the production after the activation with different concentrations of endotoxins in relation to the control was observed at all the periods evaluated. Basically in all groups (including the controls) the production of MMP-3 and MMP-8 increased significantly in relation to the time. It could be concluded that: a) different concentrations of endotoxins were able to induce significant increase in the production of MMP-3 at the periods of 24, 48 and 72 h, independently of the concentration used, suggesting that this activation is dependent of the presence of the endotoxin and dosis-independent; b) the presence of different concentrations of endotoxins induced significant reduction in the production of MMP-8 in relation to the control in all the periods of evaluation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-03Bitstream added on 2014-06-13T20:16:42Z : No. of bitstreams: 1 brito_eg_me_sjc.pdf: 1907796 bytes, checksum: bf58da81036e3153fe91516a2dffc53e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A proposta deste trabalho foi avaliar a efetividade de extratos naturais, como soluções irrigadoras, sobre E. faecalis, S. aureus, E. coli, e endotoxinas (LPS) em canais radiculares. Foi avaliado também o efeito citotóxico do conteúdo do canal, após os tratamentos, pela produção de TNF-α e IL-1β em cultura de macrófagos. Foram utilizados 84 dentes unirradiculados, contaminados com associação dos três microrganismos por 28 dias. Após, foram divididos em 7 grupos (n=12), de acordo com o irrigante utilizado: G1) solução fisiológica (controle); G2) solução de clorexidina 2%; G3) extrato glicólico de própolis 12%; G4) extrato glicólico de alcaçuz 20%; G5) extrato glicólico de barbatimão 20%; G6) extrato glicólico de romã 20%; G7) extrato glicólico de cavalinha 20%. Foram realizadas 2 coletas do conteúdo do canal radicular: imediatamente após a instrumentação e após 7 dias da instrumentação. Para todas as coletas, foi realizada avaliação da atividade antimicrobiana pela contagem de UFC/mL em meios de cultura seletivos, verificação da neutralização de endotoxinas pelo teste cinético cromogênico do lisado de amebócitos de Limulus (LAL) e avaliação dos efeitos citotóxicos do conteúdo do canal pela produção de IL-1 e TNF-α por macrófagos. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%). Todos os extratos promoveram significativa redução microbiana em relação ao controle na 1ª coleta após instrumentação (p<0,05). Com relação E. faecalis, os extratos de própolis (G3), barbatimão (G5), romã (G6) e cavalinha (G7) promoveram ausência de crescimento microbiano em muitos espécimes, sendo semelhantes a clorexidina e diferentes dos demais grupos (p<0,05). Com relação S. aureus, os extratos de própolis (G3) e barbatimão (G5) promoveram ausência de crescimento microbiano em todos os espécimes, sendo semelhantes... / The purpose of this study was to evaluate the effects of natural extracts as irrigating solutions on E. faecalis, S. aureus, E. coli, and endotoxins (LPS) in root canals. The post treatment citotoxic effect of root canal content was also evaluated by TNF-α and IL-1β production by macrophages cell culture. A total of 84 single root canal teeth were contaminated with E. faecalis, S. aureus and E. coli for 28 days. The groups were assigned into 7 groups (n=12) according to the irrigant solution used: G1) physiologic solution (control); G2) chlorhexidine 2%; G3) propolis glycolic extract 12%; G4) liquorice glycolic extract 20%; G5) barbatiman glycolic extract 20%; G6) pomegranate glycolic extract 20%; G7) horsetail glycolic extract 20%. Samples were twice collected from root canals: immediately after instrumentation and 7 days after instrumentation. All samples were submitted to antimicrobial evaluation by CFU/mL counting on selective culture media. The endotoxin detoxification was evaluated by Limulus amebocyte lysate assay (LAL), and the citotoxic effects was evaluated by TNF-α and IL-1β production by macrophages cell culture. The results were statistically analysed (ANOVA and Tukey, 5%). All the extracts promoted significant microbial reduction compared to the control group on samples collected immediately after instrumentation (p<0,05). E. faecalis results showed that propolis (G3), barbatiman (G5), pomegranate (G6) and horsetail (G7) extracts promoted no microbial growth in all samples, similar to chlorhexidine solution and different from other groups (p<0,05). S. aureus results showed that propolis (G3) and barbatiman (G5) promoted absence of microbial growth in all samples, similar to chlorhexidine solution and different from other groups (p<0,05). E. coli results showed that propolis (G3), pomegranate (G6) and horsetail (G7) promoted... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-07Bitstream added on 2014-06-13T18:20:50Z : No. of bitstreams: 1 xavier_acc_me_sjc.pdf: 1016350 bytes, checksum: a962a7e714de7e776f6fedbac277efc6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo avaliou in vivo a ação do extrato glicólico de própolis 12%, como substância química auxiliar em tratamentos endodônticos de dentes com necrose pulpar e lesão periapical. A avaliação foi realizada através da cultura e detecção de microrganismos por Reação em Cadeia Polimerase (PCR) e da quantificação de endotoxinas. Além disso, foi avaliada a correlação entre o tamanho da lesão periapical e a quantidade de endotoxinas presente. Foram selecionados 30 dentes, os quais foram divididos em 3 grupos (n=10), de acordo com a substância química auxiliar utilizada para a instrumentação: NaOCl) Hipoclorito de sódio 1%; CLX) Clorexidina gel 2%, intercalada com solução salina; PRO) Extrato glicólico de própolis 12%, intercalado com solução salina. As radiografias iniciais foram digitalizadas e as lesões periapicais foram medidas através de software específico. Foram realizadas 3 coletas do conteúdo do canal radicular: após a abertura coronária, após instrumentação e após 14 dias da medicação intracanal. A medicação intracanal utilizada foi o hidróxido de cálcio com propilenoglicol. Em todas as coletas realizou-se: detecção de microrganismos por PCR; avaliação do crescimento microbiológico em diferentes meios de cultura e quantificação de endotoxinas através do teste cinético cromogênico (LAL). Os resultados foram analisados através dos testes de Kruskal Wallis, Dunn (nível de significância 5%) e correlação linear de Pearson. A quantidade de microrganismos e endotoxinas, nas 2ª e 3ª coletas, diminuiu em relação à 1ª coleta, em todas as soluções avaliadas (p<0,05). Os canais apresentaram diversidade microbiana, com predominância de Parvimonas micra, Tanerella forsythia e Prevotella nigrescens. Concluiu-se que o extrato glicólico de própolis 12% apresentou atividade antimicrobiana e antiendotóxica semelhante aos demais... / The aim of this study was in vivo evaluated of 12% propolis glycolic extract action in root canal treatments, through the culture of microorganisms, quantification of endotoxins and detection of microorganisms by molecular method of polymerase chainreaction (PCR). A total of 30 human teeth were divided into 3 groups (n=10) according to the auxiliary chemical solution used for biomechanical preparation: NaOCl) sodium hypoclorite 1%; CLX) 2% chlorhexidine gel; PRO) 12% propolis glycolic extract. Collections were performed immediately after coronary open, after instrumentation and after 14 days with intracanal medication. For all collections were performed the following tests: microorganisms detection by PCR; assessment of microbiological growth and analyzing the amount of endotoxi (Limulus amoebocyte lysate). The results showed a decrease in the amount of microorganisms and endotoxins in the 2nd and 3rd collections of all irrigation solutions. The canals showed microbial diversityy, but Parvimonas micra was predominantly. It was concluded thar all solutions are evaluated antimicrobial and anti-endotoxic similar. The most common microorganism present in root canals with pulp necrosis and periapical lesion was Parvimonas microns. There is a evidence that the higher amount of endotoxins is in the biggest lesions

Mesmo com o constante avanço no estudo da sibilância e asma, existem inúmeras controvérsias sobre a participação da exposição à endotoxina, background genético e ativação celular. Investigamos a participação da exposição à endotoxina ambiental e o papel do LPS no desenvolvimento dos fenótipos de sibilância e asma. Para tanto selecionamos crianças sibilantes e não sibilantes, e crianças asmáticas e não asmáticas, sendo seu sangue coletado e as PBMC cultivadas com LPS. O sobrenadante foi colhido para análise de citocinas por ELISA, e analisamos os polimorfismos nos genes de CD14 e TLR4 por PCR-RFLP. Não encontramos relação entre a exposição à endotoxina ambiental e o quadro de sibilância. Observamos que PBMC estimuladas ou não com LPS de crianças sibilantes e asmáticas produzem baixos níveis de IL-12 e IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 quando comparado com crianças não sibilantes e não asmáticas. Os polimorfismos de TLR4 e CD14 não tiveram associação com sibilância ou asma. Nossos dados sugerem que não somente a polarização Th2 é importante para desenvolver essas patogenias, mas também uma diminuição na resposta Th1. / Although the great advance in the study of asthma and wheezing, there are numerous controversies about the involvement of endotoxin exposure, genetic background and cellular activation. We investigated the involvement of environmental endotoxin exposure and the role of LPS in the development of phenotypes wheezing and asthma. For experiments we selected wheezing and non-wheezing, and asthmatic and non-asthmatic children, and their blood collected and the PBMC cultured with LPS. The supernatant was collected for analysis cytokines by ELISA, and analyzed CD14 and TLR4 polymorphisms by PCR-RFLP. There was no relationship between environmental endotoxin exposure and the framework of wheezing. We observed that LPS-stimulated PBMC of wheezing and asthmatic children produce lower levels of IL-12 and IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 when compared with non-wheezing and non-asthmatic children. The polymorphisms TLR4 and CD14 were not associated with wheezing or asthma. Our data suggest that not only Th2 polarization is important to develop these diseases, but also a decrease in Th1 response.

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T18:03:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Herrera_DanielRodrigo_D.pdf: 1815873 bytes, checksum: c8ecc16aeec2193dae476030ea7ba24d (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O principal fator de virulência das bactérias Gram-negativas é representado pela liberação de seus subprodutos [Lipopolissacarídeos (LPS) ¿ endotoxinas] presentes na membrana externa do envelope celular bacteriano. O acumulo destes componentes bacterianos no canal radicular e a sua saída para os tecidos periapicais estimula o sistema imune do hospedeiro produzindo uma reação antígeno-anticorpo que gera uma resposta inflamatória a nível periapical. Esta reação é caraterizada pela expressão de mediadores químicos e enzimas, tais como as citocinas pró-inflamatórias e as metaloproteinases (MMPs). Assim, foram objetivos do presente estudo: 1) avaliar a influência do conteúdo infeccioso diante as diferentes etapas do tratamento endodôntico de dentes com infecção primária, na resposta imune do hospedeiro para a produção de interleucina 1 alfa (IL-1?), 1 beta (IL-1?), fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), prostaglandina E2 (PGE2), MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 correlacionando esses níveis com os sinais e sintomas clínicos (capitulo 1); 2) avaliar o efeito da ativação do EDTA 17% com ultrassom na redução do conteúdo infeccioso de dentes com infecção primária (capitulo 2); 3) investigar os níveis de endotoxinas de dentes com infecção primária, antes e após o preparo químico-mecânico (PQM) e determinar seu potencial antigênico contra fibroblastos 3T3 através da atividade gelatinolítica de MMPs (capitulo 3). Método: Foram selecionados 24 pacientes com necessidade de intervenção endodôntica por necrose do tecido pulpar e presença de lesão periapical. Amostras do conteúdo do canal radicular foram coletadas antes do PQM (S1), depois do PQM (S2) e depois do uso de EDTA 17% (S3) com e sem ativação com ultrassom (G1 e G2, respectivamente). Amostras para quantificação de citocinas e MMPs foram coletadas passando um cone de papel 2 mm além do ápice radicular depois do PQM. As amostras microbiológicas foram processadas por cultura para contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) e identificação. PCR foi realizado utilizando primers espécie-específicos. As amostras de LPS foram analisadas pelo método Limulus Amoebocyte Lysate (LAL). As coletas de citocinas e MMPs foram quantificadas utilizando kits específicos pelo ensaio imunoenzimático de absorção (ELISA). A atividade gelatinolítica foi avaliada por zimografia. Os níveis de produção das citocinas e MMPs foram correlacionados individualmente com os sinais e sintomas clínicos [dor à percussão (POP), dor à palpação (TOP), presença de exudato (EX)]. O teste de Pearson foi utilizado para avaliar a correlação entre endotoxinas e a produção de citocinas e MMPs. Os testes de Friedman e Wilcoxon compararam os níveis de endotoxina e carga microbiana em cada tempo operatório. Os dados obtidos pela atividade gelatinolítica foram analisados pelos testes de ANOVA e Tuckey. O nível de significância foi estabelecido em 5% (p<0,05). Resultados: IL-1?, IL-1?, TNF-?, PGE2, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 foram detectados em todas as amostras. Foi encontrada correlação positiva entre os níveis de endotoxinas e de todas as citocinas e MMPs avaliadas (p<0,05). EX foi correlacionado positivamente com TNF-?, enquanto os níveis de IL-1?, PGE2 e MMP-8 foram correlacionados com sintomatologia dolorosa (POP/TOP) (p<0,05). O PQM reduziu significativamente os níveis de endotoxina e da carga bacteriana (p<0,05). Maiores níveis de redução de endotoxinas foram registrados quando a irrigação com EDTA foi ativada com ultrassom. Não foram encontradas diferenças significativas na redução da carga bacteriana entre G1(99.98%) e G2 (99.93%) (p>0,05). Foi encontrada correlação entre os níveis de entotoxinas (S1) e a expressão de MMP-2 por fibroblastos. Não foi observada atividade gelatinolítica para MMP-9. Conclusão: 1) O conteúdo infeccioso/endotóxico é um potente estímulo para a resposta imune do hospedeiro na produção de IL-1?, IL-1?, TNF?, PGE2, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9 and MMP-13. 2) O PQM consegue reduzir significativamente a carga microbiana e os níveis de endotoxinas. Adicionalmente, a ativação do EDTA com ultrassom promove uma redução maior dos níveis residuais de endotoxinas. 3) O conteúdo infeccioso/endotóxico é um potente estímulo para a expressão gênica de MMP-2 por fibroblastos 3T3 / Abstract: Lipopolysaccharides (LPSs, known as endotoxins) present on the outer layers of Gram-negative bacterial envelope, and released during bacteria multiplication and death, can egress into periradicular tissues, acting as one of the most potent stimuli for immunocompetent cells in the release of inflammatory mediators and matrix metalloproteinases (MMPs). Thus, the objectives of this study were: 1) To evaluate the influence of primarily infected root canal contents (bacterial and endotoxin contents) on host-immune response by interleukin (IL)-1?, IL-1?, tumor necrosis factor ? (TNF-?), prostaglandin E2 (PGE2), matrix metalloproteinases (MMP) MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9 and MMP-13 production and to correlate their levels with clinical features (chapter 1); 2) To investigate the influence of 17% ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) ultrasonic activation after chemo-mechanical preparation (CMP) on eliminating/reducing oral bacterial lipopolysaccharide (LPS, known as endotoxins) and cultivable bacteria in teeth with pulp necrosis and apical periodontitis (chapter 2); 3) To investigate the endotoxin levels from primary endodontic infection before and after CMP, and to determine their antigenicity against 3T3 fibroblasts through gelatinolytic activity of MMPs (chapter 3). Methods: Root canal content samples were taken from 24 primarily infected root canals with apical periodontitis by using sterile/apyrogenic paper points. Samples were taken at different clinical times: S1- before CMP; S2- after CMP; S3- after EDTA: G1- with ultrasonic activation (n=12) and G2- without ultrasonic activation (n=12). PCR technique (16S rRNA) was used for the detection of the target bacteria. Culture techniques were used to determine the number of colony-forming units (CFU). Limulus Amebocyte Lysate (LAL) was used to measure endotoxin. Cytokines and MMPs levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) from samples that were taken passing 2 mm through the root apex after CMP. The levels of MMP-2 and MMP-9 gelatinolytic activity were measured using the zymography technique. The Pearson coefficient was used to correlate the amount of endotoxins with cytokine and MMP levels. Clinical data were set as dependent variables and correlated by individual correlation with each cytokine and MMP level. Friedman¿s and Wilcoxon tests was used to compare the amount of bacteria and endotoxin contents at each clinical time. Data obtained from gelatinolytic activity was analysed using Anova and Tukey¿s tests. The significance levels always were set at 5% (p<0,05). Results: IL-1?, IL-1?, TNF-? and PGE2, as well as, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9 and MMP-13 were detected in all samples. A correlation between endotoxin levels with cytokines and MMPs production was found (p<0.05). Root canal exudation was positively correlated with high levels of TNF-?, and symptomatic teeth were correlated with IL-1?, PGE2 and MMP-8 (p<0.05). CMP were effective in reducing endotoxins and bacterial load (p<0.05). Higher values of endotoxin reduction were achieved when EDTA received ultrasonic activation compared with the no-activation group (p<0.05). No differences were found in the bacterial load reduction after EDTA when comparing G1 (99.98%) and G2 (99.93%) (p>0.05). A correlation was found between the levels of endotoxins and MMP-2 expression (p<0.05). No gelatinolytic activity of MMP-9 was observed. Conclusion: 1) Primarily infected root canal infection contents are potent stimuli factor for host-immune response by the production of IL-1?, IL-1?, TNF-?, PGE2, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9 and MMP-13. 2) Although CMP was effective in reducing bacteria and endotoxins, it was not able to eliminate them from all root canals analyzed. The ultrasonic activation of EDTA was efficient in reducing even more the endotoxins levels in the root canals of teeth with pulp necrosis and apical periodontitis. 3) Root canal content from primary endodontic infection showed gelatinolytic activity for MMP-2 / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Autorizada por el autor, pero con restricción para ser publicada a texto completo hasta diciembre de 2015, en el Portal de Tesis Electrónicas. / La diferenciación de fibroblastos cardiacos (FC) a miofibroblastos cardiacos (MFC) es gatillada por TGF-β1, la cual señaliza principalmente a través de las proteínas Smad. Los MFC muestran como principal característica la presencia de microfilamentos citoplásmicos de α-SMA, estructuradas como fibras de estrés, lo que les permite la contracción. Por otro lado, LPS es un ligando del receptor TLR4, que señaliza de manera dependiente e independiente de MyD88 teniendo como principal efector el NF-κB, induciendo así la expresión de genes de citoquinas proinflamatorias. Sin embargo, aunque se ha descrito un efecto antagónico entre la señalización inducida por LPS y la señalización canónica de TGF- β, a la fecha no se ha estudiado si en FC y en MFC la expresión de α-SMA inducida por TGF-β1 es antagonizada por LPS. Para responder estas interrogantes se utilizaron FC y MFC de ratas adultas, y se determinó in vitro la capacidad de LPS de inhibir la expresión de α-SMA. Además, utilizando TAK- 242, un inhibidor de las vías intracelulares dependientes de TLR4, se determinó que los efectos gatillados por LPS ocurrían a través de este receptor. La utilización de los inhibidores PD98059, LY29002 y BAY 11-7082 permitió determinar que en FC LPS a través de la vía de señalización PI3K/Akt, disminuye la expresión de α-SMA. Por lo que nuestros resultados demuestran que LPS inhibe la expresión de α-SMA en FC, a través del receptor TLR4 mediante la activación de vía de señalización PI3K/Akt y que LPS es capaz de disminuir la expresión de α-SMA en MFC a través de TLR4 inhibiendo la mantención del fenotipo miofibroblasto / The difference between cardiac fibroblasts (CF) and cardiac myofibroblast (CMF) is triggered by TGF-β1, which mainly signals via Smad proteins. The main characteristic of CMF is cytoplasmic microfilaments of α-SMA; this are structured as stress fibers, which allow the contraction of CMF. Also, LPS is a ligand of the TLR4 receptor that signals via a dependant and independent pathway of MyD88 whose main factor is NF-κB; this induces the expression of inflammatory cytokine genes. However, despite an opposite effect has been described between the signaling induced by LPS and the canonical signaling of TGF-β, the opposite effect that LPS may have on the expression of α-SMA on CF and CMF induced by TGF-β1 has not been studied so far. In order to answer these questions, CF and CMF of adult rats were used; this showed in vitro evidence that LPS is capable of inhibiting the expression of α-SMA. Also, with the use of TAK-242, which is an inhibitor of the dependant intracellular domain of TLR4, we determined that the effects triggered by LPS occurred through said receptor. Using PD98059, LY29002 and BAY11-7082 inhibitors allowed us to determine that, via the PI3K/Akt signaling pathway, LPS decreases the expression of α-SMA in CF. Therefore, our results show that LPS inhibit the expression of α-SMA in CF through the TLR4 receptor via the activation of the PI3K/Akt signaling pathway, and that LPS is capable of decreasing the expression of α-SMA in CMF through TLR4 receptor, which inhibits the maintenance of the myofibroblast phenotype

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T08:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marinho_ArianeCassiaSalustiano_M.pdf: 2625506 bytes, checksum: 4b9c6de7f98fb06e145d2b86f601d06f (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Lipopolisacarídeos (LPS) - endotoxinas são capazes de estimular células a produzirem citocinas pró-inflamatórias envolvidas na destruição tecidual periapical. Os objetivos do presente estudo foram: 1) Verificar e quantificar endotoxinas em canais radiculares infectados de dentes com periodontite apical crônica e sua relação com sinais e sintomas clínicos de origem endodôntica; 2) Avaliar a efetividade do preparo químico-mecânico (PQM) com hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5%; clorexidina gel (CLX) 2% e soro fisiológico (SS-controle) na eliminação de endotoxinas; 3) Avaliar o potencial inflamatório do conteúdo endodôntico, antes (C1) e após a instrumentação do canal radicular (C2) com NaOCl 2,5%, CLX 2% ou soro fisiológico e após uso de EDTA 17% (C3) em cultura de células de macrófagos quanto à produção de citocinas pró-inflamatórias - IL-1?, TNF-?. Amostras foram coletadas de 30 canais radiculares com necrose pulpar e presença de lesão periapical em C1, C2 e C3 utilizando cones de papel estéreis/apirogênicos. Endotoxina foi detectada em 100% dos canais radiculares estudados, representada pela mediana de 18,70 EU/mL. Dentes com presença de dor à percussão e exsudação intracanal foram relacionados com níveis elevados de endotoxina (p<0,05). Após o PQM, significativa redução de endotoxina foi obtida nos canais radiculares: NaOCl 2,5% + EDTA17% (99,75%), CLX gel 2% + EDTA 17% (98,27%), SS+ EDTA 17% (98,71%) (p<0,05). IL1- ? e TNF-? foram produzidos por macrófagos estimulados pelo conteúdo endodôntico (C1>C2>C3). Foi possível concluir que 1) Endotoxinas estavam presentes em todos os casos investigados, apresentando níveis mais elevados nos dentes com dor à percussão e exsudato intracanal. 2) O preparo químico-mecânico foi eficaz na redução do conteúdo de endotoxinas, independente da substância química auxiliar testada; 3) O potencial inflamatório do conteúdo endodôntico foi demonstrado pela produção de IL1- ? e TNF-?, exercendo maior atividade inflamatória contra macrófagos nas amostras iniciais, quando comparado com as obtidas após o preparo químico-mecânico / Abstract: Lipopolysaccharide (LPS)-endotoxin are able to stimulate cells to produce proinflammatory cytokines involved in the periapical tissue destruction. The aims of this study were: 1) To verify and quantify endotoxin in infected root canals of teeth with apical periodontitis and correlate the levels with clinical signs and symptoms of the primary endodontic infections; 2) To assess the effectiveness of chemo-mechanical preparation (CMP) with 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl), 2% chlorhexidine (CHX) and saline solution (SS), as negative control, for the elimination of endotoxins; 3) To evaluate the inflammatory potential of endodontic content before (C1) and after the CMP (C2) with 2.5% NaOCl, 2% CHX or SS and after final rinse with 17% EDTA (C3) in macrophage cell culture regarding the production of proinflammatory cytokines - IL-1 ? and TNF-?- via the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Samples were collected from 30 canals with pulpal necrosis and apical periodontitis in C1, C2 and C3 using sterile non-pyrogenic/paper points. Endotoxin was detected in 100% of root canals studied, represented by the median of 18.70 EU/mL. Teeth with tenderness to percussion and intracanal exudate were related to high levels of endotoxin (p< 0.05). After CMP, significant reduction of endotoxin was obtained in root canals instrumented with 2.5% NaOCl + 17% EDTA (99.75%), CHX 2% + 17% EDTA (98.27%) and SS + EDTA 17% (98,71%) (p< 0.05). IL1-? and TNF-? were produced by the macrophages in response to the endodontic content (C1>C2>C3). It was possible to conclude that 1) Endotoxin were present in all cases investigated, showing higher levels in the teeth with tenderness to percussion and intracanal exudate; 2) CMP was effective in reducing the endotoxic content, regardless of the auxiliary chemical substance; 3) The inflammatory potential of endodontic content was demonstrated by the production of IL1-? and TNF-? in all cases. The infectious content present in the root canal in the initial samples exerted greater inflammatory activity against macrophages compared to the residual content after CMP / Mestrado / Endodontia / Mestra em Clínica Odontológica

Orientadores: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes, Caio Cezar Randi Ferraz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-27T00:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa-Ribeiro_Marlos1986-_M.pdf: 4792753 bytes, checksum: 592cb57914c07a67f1cf0d83a084cbe7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O conhecimento da comunidade microbiana e do seu potencial antigênico é importante para o entendimento da patogênese da periodontite apical em dentes endodonticamente tratados. Os objetivos do presente estudo foram: 1) Caracterizar a microbiota associada ao insucesso endodôntico através do teste bioquímico, Nested PCR e sequenciamento parcial do gene 16S rRNA; 2) Quantificar endotoxinas (LPS) por meio do teste Limulus Amebocyte Lysate (LAL) e citocinas pró-inflamatórias IL-1?, IL-1?, TNF-? e PGE2 através do ensaio imunoenzimático (ELISA), correlacionando-as com aspectos clínicos e radiográficos dos pacientes; 3) Avaliar o efeito do preparo químico-mecânico (PQM) e medicação intracanal (MIC) na redução de microrganismos, LPS e de citocinas pró-inflamatórias. Foram coletadas amostras do conteúdo endodôntico de 20 dentes unirradiculares antes (C1), após o PQM (C2), após o uso de EDTA 17% (C3) agitado com ultrassom, e após a MIC (C4). Utilizaram-se materiais estéreis e/ou apirogênicos e técnicas assépticas durante as coletas. Após o processamento laboratorial das amostras, os dados foram tabulados e analisados pelos testes estatísticos Qui-quadrado, Correlação de Spearman e ANOVA (Tukey-Kramer). Os resultados apontaram a presença de uma microbiota mista contendo bactérias Gram positivas e Gram negativas. Quatro diferentes filos foram identificados: Actinobacteria, Firmicutes, Fusobacteria e Proteobacteria. Enterococcus faecalis foi a espécie mais prevalente, identificada fenotipicamente (19/158) e genotipicamente (42/158). O sequenciamento conseguiu identificar 10,12% das amostras em nível de gênero e 89,88% em nível de espécie, enquanto que o teste bioquímico identificou 13,29% e 51,26%, respectivamente. As bactérias mais prevalentes identificadas por Nested PCR foram: Enterococcus faecalis (97,5%), seguido de Porphyromonas gingivalis (88,75%), Fusobacterium nucleatum (56,25%) e Aggregatibacter actinomycetemcomitans (37,5%). O PQM reduziu bactérias em 96,69% (p<0,05), com percentual de redução para Clorexidina (CLX) 2% gel em 99,3% e para NaOCl 6% em 92,1% (p>0,05). O EDTA 17% somente mostrou efeito complementar na redução bacteriana no grupo do NaOCl 6% (p<0,05). Apenas a CLX 2% gel foi efetiva na redução de endotoxinas comparado ao NaOCl 6% e EDTA 17% (P<0,05). O PQM, independentemente da substância química utilizada, foi efetivo na redução dos níveis das citocinas pró-inflamatórias Il-1? (88,14%), Il-1? (89,33%), TNF-? (89,85%) e PGE2 (48,60%) (p<0,05). A MIC não mostrou efeito aditivo na redução de bactérias e citocinas pró-inflamatórias em ambos os grupos (p<0,05); e somente apresentou ação sobre LPS no grupo Ca(OH)2 + CLX 2% gel (p<0,05). Houve correlação positiva ente bactérias, LPS, citocinas pró-inflamatórias e os aspectos clínicos e radiográficos dos pacientes (P<0,05). Conclui-se que o PQM apresentou efeito significante na redução do conteúdo infeccioso de canais radiculares de dentes com insucesso do tratamento endodôntico, enquanto que a MIC não mostrou efeito aditivo significante na redução desses níveis / Abstract: The knowledge of the microbial community and its antigenic potential is important for understanding the pathogenesis of apical periodontitis in endodontically treated teeth. The objectives of this study were: 1) Characterize the microbiota associated to endodontic failure through the biochemical test, Nested PCR and partial sequencing of gene 16S rRNA.; 2) Quantify endotoxin (LPS) by Limulus Amebocyte Lysate test and pro-inflammatory cytokines IL-1?, IL-1?, TNF-? and PGE2 by enzyme-linked immunosorbent assay, correlating them with the patients' clinical and radiographic features; 3) To evaluate the effect of chemo-mechanical preparation (CMP) and intracanal medications (ICM) in reducing microorganisms, LPS and pro-inflammatory cytokines. Samples of endodontic content of 20 single-rooted teeth were collected before (C1), after CMP (C2), after the use of 17% EDTA (C3) agitated with ultrasound, and after ICM (C4). Sterile/apyrogenic materials and a aseptic techniques were used during the samples' collection. After processing the samples, the data were tabulated and analyzed by statistical testes Chi-square, Spearman correlation, and analysis of variance (Tukey-Kramer). The results indicated the presence of a mixed microbiota presenting Gram positive and Gram negative bacteria. Four different phyla were identified: Actinobacteria, Firmicutes, Proteobacteria and Fusobacterium. Enterococcus faecalis was the most prevalent species, identified phenotypically (19/158) and genotypically (42/158). Sequencing was able to identify 10.12% of the samples at the genus level and 89.88% at the species level, whereas the biochemical test identified 13.29% and 51.26%, respectively. The most prevalent bacteria by Nested PCR were: Enterococcus faecalis (97.5%), followed by Porphyromonas gingivalis (88.75%), Fusobacterium nucleatum (56.25%) and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (37.5%). CMP reduced bacteria in 96.69% (p<0.05), with a percentage reduction in 99.3% for 2% CLX gel and in 92.1% for 6% NaOCl (p>0.05). EDTA 17% showed only a further effect on bacterial reduction in the 6% NaOCl group (p<0.05). Only 2% CLX gel was effective in reducing endotoxin compared to 6% NaOCl and 17% EDTA (p<0.05). CMP regardless of chemical substance used, was effective in reducing the levels of pro-inflammatory cytokines IL-1? (88.14%), IL-1? (89.33%), TNF-? (89.85%) and PGE2 (48.60%) (p<0.05).The intracanal medication not show additive effect in reducing bacteria and proinflammatory cytokines in both groups (p<0.05); and only presented action against LPS in the Ca(OH)2 + 2% CLX gel group (p<0.05). There was a positive correlation between bacteria, LPS, pro-inflammatory cytokines and clinical and radiographic features (p<0.05). In conclusion, CMP presented a significant effect in reducing the infectious content of root canal of teeth with endodontic failure, while ICM showed no significant additive effect in reducing these levels / Mestrado / Endodontia / Mestre em Clínica Odontológica