Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: José Luiz Pedreira Mouriño / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Resumo: Os probióticos são microorganismos vivos que afetam de forma benéfica o hospedeiro ou o ambiente. Na aquicultura podem ser usados tanto na água como na ração, mas seu uso na alimentação é destacado como uma das principais medidas profiláticas. As doenças bacterianas são consideradas um dos principais entraves no crescimento da aquicultura, e assim, há a necessidade urgente no desenvolvimento de probióticos. O tambaqui Colossoma macropomum é a espécie nativa mais produzida no Brasil, e apesar de sua importância econômica, não há estudos que estabeleçam os microorganismos com potencial probiótico para esta espécie de peixe. Neste trabalho foi possível identificar e caracterizar bactérias autóctones com potencial probiótico para o tambaqui a partir de testes de: caracterização morfológica, catalase, tolerância à bile, antagonismo frente à patógenos, sensibilidade a antimicrobianos e sequenciamento do gene 16S rRNA. As cepas selecionadas foram: Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Lactococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus hominis e Staphylococcus saprophyticus. Todas as cepas foram tolerantes aos ácidos biliares do tambaqui e capazes de inibir o crescimento dos patógenos Enterococcus casseliflavus, Lactococcus garvieae e Aeromonas hydrophila. Todas as cepas foram parcialmente resistentes contra sete antibióticos. Como as cepas de S. saprophyticus e E. faecalis apresentaram menores valores no teste de antagonismo e por estas bactérias serem relatadas como a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Probiotics are living microorganisms that beneficially affect the host or the environment. In aquaculture it can be used in both water and feed, but its use in feed is highlighted as one of the main prophylactic measures. Bacterial diseases are considered to be one of the major obstacles to the growth of aquaculture, and thus, there is an urgent need for the development of probiotics. The tambaqui Colossoma macropomum is the most produced native species in Brazil, and despite its economic importance, there are no studies that establish the microorganisms with probiotic potential for this fish species. In this study it was possible to identify and characterize autochthones bacteria with probiotic potential for tambaqui from tests of: morphological characterization, catalase, bile tolerance, antagonism of pathogens, antimicrobial susceptibility and 16S rRNA gene sequencing. The selected strains were: Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Lactococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus hominis and Staphylococcus saprophyticus. All strains were tolerant to acids bile from tambaqui and capable of inhibiting the growth of Enterococcus casseliflavus, Lactococcus garvieae and Aeromonas hydrophila pathogens. All strains were partially resistant against seven antibiotics. Since the strains of S. saprophyticus and E. faecalis presented lower values in the test of antagonism and because these bacteria were reported as zoonotic agents, we conclude this study selecting fou... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os Enterococcus spp. apresentam natureza ubiquitária e são encontrados no trato gastrointestinal de diversos animais. Entretanto, estudos desses microorganismos associados a tartarugas marinhas são escassos. Os objetivos deste estudo foram: isolar enterococos a partir de amostras fecais de tartarugas marinhas encontradas no Litoral Norte do Rio Grande do Sul; determinar a prevalência das espécies; avaliar seu perfil de suscetibilidade antimicrobiana; verificar a presença de genes relacionados à resistência e à virulência e; analisar sua diversidade genética. Um total de 158 enterococos foram identificados como E. faecalis (55,7%), E. faecium (23,4%), E. hirae (15,2%) e E. casseliflavus (5,7%). A maioria dos isolados foi suscetível aos antimicrobianos testados, no entanto, fenótipos de resistência foram encontrados para eritromicina (34,2%), rifampicina (32,9%) e tetraciclina (0,63%). O gene de resistência à eritromicina msrC foi encontrado em todos os E. faecium resistentes, já o gene erm(B), não foi detectado. Somente um isolado foi resistente à tetraciclina, e este não apresentou nenhum dos genes testados. Os genes de virulência, gelE e ace (98,86%), asa (68.18%) e cylA (40,90%) foram detectados somente em E. faecalis. A atividade de gelatinase e citolisina foi verificada em 87 e 19 isolados, respectivamente. A maioria dos enterococos não foi capaz de formar biofilme. A análise dos perfis gerados por PFGE revelou um grande número de clones. Em conclusão, diferentes espécies de enterococos compõem a microbiota do trato gastrointestinal das tartarugas marinhas e a presença de determinantes de resistência e virulência nestes animais pode estar relacionada a fatores antropogênicos ou, ainda, ter origem no resistoma ambiental. / Enterococcus spp. shows an ubiquitous nature and are found in the gastrointestinal tract of several animals. However, studies of enterococus in sea turtles are scarce The aims of this study were: to isolate Enterococcus spp. from fecal samples of sea turtle found on the North coast of Rio Grande do Sul; to determine the prevalence of species; to evaluate their antimicrobial susceptibility profile; to check the presence of resistance and virulence related genes and; to analyse their genetic diversity. A total of 158 enterococci were identified as E. faecalis (55.7%) E. faecium (23.4%), E. hirae (15.2 %) and E. casseliflavus (5.7%). Most of the isolates were susceptible to the tested antimicrobials, however, resistance phenotypes were found for erythromycin (34.2%), rifampicin (32.9%) and tetracycline (0.63%). The erythromycin resistance gene msrC was detected in all E. faecium erythromycin resistant; moreover, the gene erm (B) was not detected. Only one sample was resistant to tetracycline, although it did not show any of the tetracycline resistant genes tested. Virulence genes gelE and ace (98.86%), asa (68.18%) and cylA (40.90%) were detected only in E. faecalis. The cytolysin and gelatinase activity was observed in 19 and 87 strains, respectively. Most enterococci were not able to form biofilm. The profile analysis generated by PFGE revealed a large number of clones. In conclusion, different species of enterococci were found in the microflora of sea turtle gastrointestinal tract and the presence of resistance and virulence determinants in these animals might be related to anthropogenic factors or even to an environmental resistome origin.

Apesar da importância ambiental dos morcegos em ambientes urbanos, poucos estudos relatam a presença de enterococos nestes animais. Este estudo teve como objetivos: a) isolar, identificar as espécies e detectar a presença de genes de resistência e fatores de virulência em enterococos isolados de fezes de morcegos Tadarida brasiliensis; e b) avaliar a distribuição das espécies de enterococos por qPCR e dos genes de resistência por PCR nas amostras de fezes de morcegos T. brasiliensis. Quatro pools de fezes de morcegos foram coletados em três municípios do Estado do Rio Grande do Sul e foram analisados por metodologias utilizando técnicas de microbiologia e moleculares. A partir das análises dos enterococos isolados das fezes, foram identificadas 4 espécies, sendo Enterococcus faecalis a mais frequente (83,6%), seguida de E. casseliflavus (13,7%), E. gallinarum (1,35%) e E. mundtii (1,35%). As cepas apresentaram perfil de resistência para rifampicina, eritromicina, norfloxacina, ciprofloxacina e tetraciclina. Dentre as 32 cepas resistentes à eritromicina, 28 apresentaram o gene ermC. Das 13 cepas resistentes à ciprofloxacina e norfloxacina nenhuma foi positiva para o gene gyrA. A única cepa resistente à tetraciclina apresentou o gene tetM. Os genes vanC1 e vanC2-3 foram observados em cepas de E. faecalis Quanto à presença dos genes de virulência, maior incidência foi observada para os genes gelE (97,3%) e ace (91,8%), seguido por agg (49,3%), cylA (5,5%) e esp (2,7%). A análise por qPCR permitiu identificar as espécies E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum e E. hirae nas fezes dos morcegos. Os genes de resistência ermC, gyrA, vanA, vanB, vanC1 e vanC2-3 foram detectados por PCR. Em conclusão, diferentes espécies de enterococos fazem parte da microbiota do trato gastrointestinal de morcegos T.brasiliensis e a presença de elementos de resistência e virulência podem estar relacionadas a fatores antropogênicos ou ter origem no resistoma ambiental. / Despite the environmental importance of bats in urban environments, few studies have reported the presence of enterococci in these animals. This study aimed: a) isolate, to identify the species and to detect the presence of resistance genes and virulence factors in enterococci isolated from feces of Tadarida brasiliensis bats; b) to evaluate the distribution of the enterococci species by qPCR and the resistance genes by PCR in the faecal samples of T. brasiliensis bats. Four pools of bats feces were collected in three places of the Rio Grande do Sul State and analyzed using microbiology and molecular methodologies. From the analysis of enterococci isolated from feces, 4 species were identified, being Enterococcus faecalis the most frequent (83.6%), followed by E. casseliflavus (13.7%), E. gallinarum (1.35%) and E. mundtii (1.35%). The strains showed a resistance profile to rifampicin, erythromycin, norfloxacin, ciprofloxacin and tetracycline. Of the 32 strains resistant to erythromycin, 28 presented the ermC gene. Of the 13 strains resistant to ciprofloxacin and norfloxacin, none were positive for the gyrA gene. The single tetracycline resistant strain showed the tetM gene. The vanC1 and vanC2-3 genes were observed in E. faecalis strains. As regards the presence of virulence genes, higher incidence was observed for to gelE (97.3%) and ace (91.8%) genes, followed by agg (49.3%), cylA (5.5%) and esp (2.7%). The qPCR analysis allowed to identify the E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum and E. hirae species in the bats feces. The ermC, gyrA, vanA, vanB, vanC1 and vanC2-3 resistance genes were detected by PCR. In conclusion, different species of enterococci are part of the gastrointestinal tract microbiota of T. brasiliensis bats and the presence of resistance and virulence elements may be related to anthropogenic factors or originate from the environmental resistome.

Submitted by Márcio Ropke (ropke13marcio@gmail.com) on 2017-06-19T14:45:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Influência do cloreto de cálcio e da clorexidina em propriedades físicoquímicas.pdf: 1059787 bytes, checksum: b05d8b93c55294e17664731b40cb68d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T14:45:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Influência do cloreto de cálcio e da clorexidina em propriedades físicoquímicas.pdf: 1059787 bytes, checksum: b05d8b93c55294e17664731b40cb68d7 (MD5) Previous issue date: 2016-08-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A incorporação de compostos resinosos fotopolimerizáveis ao MTA tem sido proposta para melhorar as suas propriedades e a reduzir o tempo de presa. O objetivo deste estudo foi avaliar a radiopacidade, sorção, solubilidade e atividade antibacteriana de um material retrobturador de cura dual à base de Bis-EMA/MTA (MTA-E) em comparação com o agregado trióxido mineral (MTA) e avaliar o efeito de CaCl2 sobre estas propriedades. Outro objetivo do estudo foi analisar a influência da clorexidina (CLX) sobre o pH, capacidade de liberação de ions de cálcio e tempo de presa do MTA-E em comparação com MTA-branco (MTA-B). Para análise de radiopacidade espécimes de cada material (MTA-B; MTA-E + 5% de CaCl2; MTA-E) foram preparados com anéis metálicos (6mm de diâmetro e espessura de 1mm). Os valores de radiopacidade foram determinados de acordo com a densidade radiográfica (mm Al). Para avaliar a sorção e solubilidade, espécimes (n = 10) de cada material foram preparados com o auxílio de uma matriz de acordo com as especificações ISO 4049/2009. O teste contato direto (TCD) foi utilizado para avaliar a atividade antibacteriana de cada material contra E. faecalis em 30 minutos e 24 horas após a manipulação. Um grupo contendo MTA-E + CLX 2% foi incluído para os testes a seguir. A liberação de íons de cálcio e o pH foram analisados com espectrofotômetro e peagâmetro, respectivamente. O tempo de presa de cada material foi verificado utilizando agulhas de Gilmore. Os dados foram analisados por análise de variância e teste de Tukey (P = 0,05). O MTA-E mostrou radiopacidade superior ao MTA (P <0,05) e a adição de 5% CaCl2 não alterou a sua radiopacidade (P> 0,05). Todos os materiais ganharam massa após 7 dias de imersão em água, enquanto que a adição de 5% de CaCl2 aumentou a absorção de água do MTA-E. O MTA-E + 5% de CaCl2 apresentou a maior solubilidade e foi estatisticamente diferente dos outros materiais (P <0,05). Todos os materiais foram 100% eficazes contra E. faecalis no prazo de 30 minutos após a manipulação (p = 0,005). Após 24 horas foi observada uma redução da atividade antibacteriana do MTA-E. O pH do MTA-E + CLX foi superior ao dos outros dois materiais após 7 dias e inferior após 30 dias (p <0,05). A adição de CLX aumentou a liberação de íons de cálcio do MTA-E para níveis estatisticamente semelhantes ao MTA-B. MTA-E mostrou um menor tempo de presa inicial e final em comparação com MTA-B (P <0,05). A adição de CLX 2% tanto no MTA como no MTA-E impediu a presa dos materiais. A adição de CLX ao MTA-E aumentou o seu pH e a liberação de íons cálcio. Enfim, o monómero Bis-EMA adicionado ao MTA formou um material (MTA-E) com maior radiopacidade e menor atividade antibacteriana do que o MTA-B. A adição de 5% de CaCl2 não alterou a sua radiopacidade enquanto aumentou a sua absorção de água, solubilidade e atividade antibacteriana. A adição de CLX ao MTA-E aumentou o pH e liberação de íons cálcio, mas impediu a presa do material. / The incorporation of resinous light-curable compounds to MTA has been proposed to improve the properties and to reduce the setting time. The aim of this study was to evaluate the radiopacity, sorption, solubility and antibacterial activity of a Bis-EMA / MTA based dual-cure retro-filling material (MTA-E) in comparison with mineral trioxide aggregate (MTA) and to evaluate the effect of CaCl2 on these properties. Another aim of the study was to evaluate the influence of 2% chlorhexidine (CHX) on pH, calcium ion release and setting time of an E-MTA compared to white-MTA (W-MTA). For radiopacity analysis specimens of each material (PCC; E-MTA + 5% CaCl2; E-MTA) were prepared with metal rings (6 mm diameter, and 1 mm thickness). The radiopacity values were determined according to the radiographic density (mm Al). To evaluate the sorption and solubility, specimens (n = 10) were prepared for each material with the aid of a matrix according to ISO 4049/2009 specifications. The direct contact test (DCT) was used to assess the antibacterial activity of each material against E. faecalis at 30 minutes and 24 hours after manipulation. A group of E-MTA + 2% CHX was included for the following tests. The calcium ions release and pH were analyzed with a spectrophotometer and pH meter, respectively. The setting time of each material was analyzed with Gilmore needles. Data were analyzed by analysis of variance and Tukey test (P = 0.05). E-MTA showed higher radiopacity than W-MTA (P <0.05) and the addition of 5% CaCl2 did not change its radiopacity (P> 0.05). All materials gained mass after 7 days in water immersion, while the addition of 5% CaCl2 increased water sorption of E-MTA. E-MTA + 5% CaCl2 showed the highest solubility and was statistically different (p <0.05) from the other materials. All materials were 100% effective against E. faecalis within 30 minutes of manipulation (p = 0.005). After 24, hours a reduction in the antibacterial activity was observed for E-MTA. However, the addition of CaCl2 increased the antibacterial activity of E-MTA. The pH of the E-MTA + CHX was higher than the other two materials after 7 days and lower after 30 days (p <0.05). The addition of CHX increased the calcium ion release of E-MTA to levels statistically similar to W-MTA. E-MTA showed shorter initial and final setting time, compared with W-MTA (P <0.05). The addition of 2% CHX to both MTA and E-MTA prevented setting of material. Finally, Bis-EMA monomer added to the MTA formed material (E-MTA) with higher radiopacity and lower antibacterial activity than the W-MTA. The addition of 5% CaCl2 did not change its radiopacity while increasing its water sorption, solubility and antibacterial activity. The addition of CHX to E-MTA increased its pH and calcium ion release, but prevented setting of the material.

Submitted by Suzana Kotzent (su_kotzent@hotmail.com) on 2017-03-17T13:27:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final 170317 Suzana Kotzent.pdf: 1627152 bytes, checksum: fb879e427474125c781d95d8fcc0faa5 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-23T16:43:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 kotzent_s_me_jabo_par.pdf: 1254030 bytes, checksum: 86a63f13335a097462b3bb9d50cce954 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T16:43:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 kotzent_s_me_jabo_par.pdf: 1254030 bytes, checksum: 86a63f13335a097462b3bb9d50cce954 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os probióticos são microorganismos vivos que afetam de forma benéfica o hospedeiro ou o ambiente. Na aquicultura podem ser usados tanto na água como na ração, mas seu uso na alimentação é destacado como uma das principais medidas profiláticas. As doenças bacterianas são consideradas um dos principais entraves no crescimento da aquicultura, e assim, há a necessidade urgente no desenvolvimento de probióticos. O tambaqui Colossoma macropomum é a espécie nativa mais produzida no Brasil, e apesar de sua importância econômica, não há estudos que estabeleçam os microorganismos com potencial probiótico para esta espécie de peixe. Neste trabalho foi possível identificar e caracterizar bactérias autóctones com potencial probiótico para o tambaqui a partir de testes de: caracterização morfológica, catalase, tolerância à bile, antagonismo frente à patógenos, sensibilidade a antimicrobianos e sequenciamento do gene 16S rRNA. As cepas selecionadas foram: Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Lactococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus hominis e Staphylococcus saprophyticus. Todas as cepas foram tolerantes aos ácidos biliares do tambaqui e capazes de inibir o crescimento dos patógenos Enterococcus casseliflavus, Lactococcus garvieae e Aeromonas hydrophila. Todas as cepas foram parcialmente resistentes contra sete antibióticos. Como as cepas de S. saprophyticus e E. faecalis apresentaram menores valores no teste de antagonismo e por estas bactérias serem relatadas como agentes zoonóticos, concluímos este estudo selecionando quatro potenciais cepas: E. hirae, L. lactis, P. pentosaceus, S. hominis. Este é o primeiro estudo a referir o potencial uso probiótico de cepas autóctones para o tambaqui. / Probiotics are living microorganisms that beneficially affect the host or the environment. In aquaculture it can be used in both water and feed, but its use in feed is highlighted as one of the main prophylactic measures. Bacterial diseases are considered to be one of the major obstacles to the growth of aquaculture, and thus, there is an urgent need for the development of probiotics. The tambaqui Colossoma macropomum is the most produced native species in Brazil, and despite its economic importance, there are no studies that establish the microorganisms with probiotic potential for this fish species. In this study it was possible to identify and characterize autochthones bacteria with probiotic potential for tambaqui from tests of: morphological characterization, catalase, bile tolerance, antagonism of pathogens, antimicrobial susceptibility and 16S rRNA gene sequencing. The selected strains were: Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Lactococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus hominis and Staphylococcus saprophyticus. All strains were tolerant to acids bile from tambaqui and capable of inhibiting the growth of Enterococcus casseliflavus, Lactococcus garvieae and Aeromonas hydrophila pathogens. All strains were partially resistant against seven antibiotics. Since the strains of S. saprophyticus and E. faecalis presented lower values in the test of antagonism and because these bacteria were reported as zoonotic agents, we conclude this study selecting four potential strains: E. hirae, L. lactis, P. pentosaceus, S. hominis. This is the first study to mention the potential probiotic use of autochthonous strains for tambaqui.

Orientador: Cristiane Duque / Coorientador: Eloi Dezan Júnior / Banca: Rogério de Castilho Jacinto / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Resumo: Na busca por fontes alternativas de antimicrobianos, diversos autores tem explorado o uso de plantas medicinais para o tratamento de várias doenças. A atividade antimicrobiana de várias espécies de plantas como, Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker e Psidium cattleianum, popularmente chamadas de erva-baleeira, guaco e de araçá, respectivamente, tem sido relatada contra diversos microrganismos orais. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano dos extratos hidroetanólico bruto e as suas respectivas frações aquosa, butanol, hexano e acetato de etila de Cordia verbenacea (CV) e Mikania laevigata (ML) e extratos aquoso e hidroetanólico de Psidium cattleianum (PC) contra Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii e Candida albicans, sob condições planctônicas e de biofilme. Os microrganismos foram analisados em condições planctônicas por meio de ensaios para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM), pelo método de microdiluição em caldo. Posteriormente, foram selecionados somente os extratos capazes de eliminar completamente cada microrganismo (CLM 100%), para a análise da atividade antimicrobiana em ensaios de biofilme. Os resultados mostraram que os valores de CIM e CLM variaram de 250 à 4000μg/ml. O biofilme formado por E. faecalis foi eliminado frente à ação dos extratos aquoso e hidroetanólico de PC e à fração acetato de etila de ML. A mesma fração de ML e o extrato hidroetanólico de PC também foram capazes de eliminar biofilme de P. aeruginosa. O mesmo ocorreu com as frações hexânicas de CV e ML e o extrato hidroetanólico de ML frente ao biofilme de A. israelii. Nenhum extrato/fração foi capaz de eliminar biofilme de C. albicans. Este estudo demonstrou o potencial antimicrobiano de extratos ou frações de Cordia verbenacea, Mikania laevigata... / Abstract: Seeking for alternative sources of the antimicrobials, several authors have explored the use of herbal medicines for the treatment of diseases. The antimicrobial activity of various species of plants, such as Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker and Psidium cattleianum, known as erva-baleeira, guaco and araçá, respectively, has been reported against several oral microorganisms. The present study aimed to evaluate the antimicrobial effect of Cordia verbenacea (CV) and Mikania laevigata (ML) hydroethanolic crude extracts and their fractions aqueous, butanol, hexane and ethyl acetate and aqueous and hydroethanolic extracts of Psidium cattleianum (PC) against Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii and Candida albicans, under planktonic and biofilm conditions. The microorganisms in planktonic conditions were analyzed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum lethal concentration (MLC) assays using the microdilution broth method. Posteriorly, only the extracts that were able to totally eliminate each microorganism (MLC 100%) were selected for the antimicrobial activity analysis in the biofilm assay. The results showed that the MIC and MLC values ranged between 250 and 4000μg/ml. E. faecalis biofilm was eliminated by PC aqueous and hydroethanolic extracts and the ML ethyl acetate fraction. The same ML fraction and PC hydroethanolic extract were also able to eliminate the P. aeruginosa biofilm. The same occurred with the CV and ML hexane fractions and ML hydroethanolic extract against the A. israelii biofilm. None of the extracts/fractions were able to eliminate the C. albicans biofilm. This study confirmed the antimicrobial activity potential of Cordia verbenacea, Mikania laevigata and Psidium cattleianum, suggesting their use for endodontic purposes due to their effectiveness against pathogens associated with persistent or se... / Mestre

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-04-14T14:53:02Z No. of bitstreams: 1 PDF - Amaro Lafayette Nobre Formiga Filho.pdf: 1284130 bytes, checksum: caeaf28bc01f345af720116bf8d65ead (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-22T15:00:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Amaro Lafayette Nobre Formiga Filho.pdf: 1284130 bytes, checksum: caeaf28bc01f345af720116bf8d65ead (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-22T15:00:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Amaro Lafayette Nobre Formiga Filho.pdf: 1284130 bytes, checksum: caeaf28bc01f345af720116bf8d65ead (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T15:00:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Amaro Lafayette Nobre Formiga Filho.pdf: 1284130 bytes, checksum: caeaf28bc01f345af720116bf8d65ead (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate in vitro experimental drugs made from plants of the Brazilian semiarid region, Schinopsis brasiliensis Engl. and Ximenia americana L., comparing its effectiveness with commercial medications. Hydroalcoholic extracts were prepared from six medicinal plants (Schinopsis brasiliensis Engl., Ximenia americana L., Cereus jamacaru DC., Croton campestres ST. Hill, Spondias mombin, Zornia reticulata SM.), which were subjected to an Enterococcus faecalis microbiological screening by agar dilution method, cylinder technique. The two groups of greater efficiency, Schinopsis brasiliensis Engl. and Ximenia americana L., were nebulized and potency was evaluated by the same method. In vitro contamination with E. faecalis was performed in teeth for 60 days with bacterial growth evaluated by scanning electron microscopy, optical microscopy and microbiological tests. After the inoculation period, the teeth were irrigated, dried and filled with different drugs: 1 - experimental S. brasiliensis paste, 2 - experimental X. americana paste, 3 - Calen ® paste and 4 – CTZ paste. The pastes removal and analysis of the results were performed after 8 and 28 days after their application. The results showed that the X. americana paste had greater efficacy and was able to inhibit the growth of E. faecalis after 28 days of treatment, compared with the other studied pastes, with CTZ exception, that presented the best results during the entire treatment period. / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro medicações experimentais formuladas a partir de plantas do semiárido brasileiro, Schinopsis brasiliensis Engl. e Ximenia americana L., comparando sua eficácia com medicações comerciais. Foram preparados inicialmente extratos hidroalcoólicos de seis plantas medicinais (Schinopsis brasiliensis Engl., Ximenia americana L., Cereus jamacaru DC., Croton campestres ST. Hill, Spondias mombin, Zornia reticulata SM.), os quais foram submetidos a um screening microbiológico frente à Enterococcus faecalis pelo método de diluição em ágar, técnica do cilindro. Os dois extratos de maior eficácia, Schinopsis brasiliensis Engl. e Ximenia americana L., foram nebulizados e sua potência foi avaliada através do mesmo método. Em seguida foi realizada a contaminação in vitro dos elementos dentários com E. faecalis por 60 dias, com o crescimento bacteriano comprovado através da Microscopia Eletrônica de Varredura, Microscopia Óptica e de testes microbiológicos. Decorrido o período de inoculação, os elementos dentários foram irrigados, secos e preenchidos com diferentes medicamentos: 1 – pasta experimental de S. brasiliensis, 2 – pasta experimental de X. americana, 3 – pasta comercial Calen ® e 4 – pasta CTZ. A remoção das pastas e a leitura dos resultados foram realizadas após 8 e 28 dias da sua aplicação. Os resultados obtidos mostraram que a pasta formulada a base da X. americana apresentou maior eficácia e foi capaz de inibir o crescimento de E. faecalis após 28 dias de tratamento, quando comparado com as outras pastas testadas, com exceção da CTZ que apresentou os melhores resultados durante todo o período de tratamento.

A contaminação das águas naturais representa um dos principais riscos à saúde pública, sendo conhecida a estreita relação entre a qualidade da água e inúmeras enfermidades. Enterococcus são habitantes da microbiota intestinal humana, podendo ser encontrados em praticamente todos os animais e ambientes. A importância crescente dos enterococos como patógenos oportunistas e a emergência e disseminação de cepas multiresistentes contribuiu para um maior interesse na epidemiologia desses micro-organismos. Os objetivos desse trabalho são caracterizar fenotipicamente e determinar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de Enterococcus isolados das águas do arroio Dilúvio, em Porto Alegre. Foram coletadas amostras de água em cinco diferentes pontos do arroio, em quatro períodos do ano. Dos 348 isolados, 62,07% foram identificados como E. faecium, 13,50% como E. faecalis, 12,07% como E. casseliflavus e 12,36% como Enterococcus sp. Noventa e quatro por cento dos isolados demontraram resistência a pelo menos uma classe de antimicrobianos e 44,25% a duas classes. E. faecium foi a espécie com maior frequência de cepas resistentes (74,07%) a pelo menos duas classes de antimicrobianos, seguida de E. casseliflavus (66,67%) e E. faecalis (36,17%). No ponto 1, que corresponde a nascente do arroio, foi observado a menor incidência de cepas de Enterococcus e de cepas resistentes, quando comparados com os demais pontos de coleta. Os resultados demonstram a presença de cepas de Enterococcus resistentes isoladas em todos os pontos do arroio Dilúvio. Estes resultados mostram a necessidade de medidas sanitárias urgentes que busquem a melhoria da qualidade de suas águas a fim de evitar a contaminação e a disseminação de micro-organismos resistentes à antimicrobianos. / The contamination of natural resources of water is a major risk to public health, due to the tight relation between water quality and countless diseases. Enterococcus is ainhabit of human intestinal microbiota, and can be isolated from animals and environments. The increasing importance of enterococci as opportunistic pathogens, as well as the emergence and dissemination of multiresistant strains, contribute for a greater interest in epidemiology study of these microorganisms. The aim of this study was to characterize phenotypic and to determine the antimicrobial susceptibility of Enterococcus isolated from Dilúvio stream, in Porto Alegre. Water samples were collected in five different locations of the stream, throughout four periods of the year. Among the 348 isolates obtained 62.07% were identified as E. faecium, 13.50% as E. faecalis, 12.07% as E. casseliflavus, and 12.36% as Enterococcus sp. Ninty-four percent of the isolates were resistant to at least one antimicrobial class, and 44.25% to two classes. E. faecium was the most frequently species resistant to at least two antimicrobial classes (74,07%), followed by E. casseliflavus (66.67%) and E. faecalis (36.17%). In all locations was isolated Enterococcus resistant the results indicate the urgent sanity initiative, in order to improve the water quality of Dilúvio’s to avoid the contamination and of antimicrobial-resistant microorganisms.

Los enterococos, considerados patógenos emergentes, presentan una gran versatilidad genética actuando en el medio ambiente como reservorios genéticos de virulencia y resistencia. Se determinó comparativamente en 33 cepas de enterococos clínicos y 34 cepas de origen marino los perfiles de resistencia antimicrobiana, perfil fenotípico y la presencia de los marcadores de virulencia gelE, cylA, esp y hyl, relacionados respectivamente con: la gelatinasa, hemolisina, la proteína de superficie enterocócica y una putativa glicosil-hidrolasa; además se realizaron ensayos de mortalidad en el modelo experimental Galleria mellonella (Orden: Lepidoptera). Se determinó en cepas marinas sólo la presencia de gelE y esp, con una expresión fenotípica fuerte de biopelículas en casi todas las cepas, aunque no se demostró asociación con estos marcadores. Sólo el 14.3% de enterococos gelE+ presentó actividad gelatinasa y ninguna cepa resultó ser betahemolítica ni portar cylA (Activador de la hemolisina). En el grupo clínico se observó múltiples antibiotipos y perfiles de virulencia en relación directa a la especie y al origen de la infección. El marcador hyl estaba presente sólo en cepas resistentes a vancomicina (EVR) y portadoras de esp, además se detectó en este grupo cepas betahemolíticas (12.1%) y portadoras de cylA (15.2%) mientras que el 48.5% presentaron gelE y la actividad gelatinasa fue detectada en un 30.3% de la cepas. Las cepas clínicas con actividad gelatinasa y hemolisina positivas desarrollaron una alta mortandad en G. mellonella, en tanto una cepa de E. faecalis de origen marino (gelatinasa positiva) presentó una mortandad similar al grupo clínico. Se determinó que los enterococos marinos, principalmente E. faecalis, conservan ciertas características de virulencia y de resistencia antimicrobiana por lo que su persistencia en el ambiente marino representa una amenaza potencial a la salud pública / --- Enterococci are emerging pathogens, retaining virulence and antimicrobial resistance genes in marine environmental. antimicrobial resistance profiles, phenotype profile and presence of virulence markers were compared in 33 clinical isolates and 34 marine strains. Virulence markets gelE, CylA, esp and hyl, these respectively are gelatinase, hemolysin, enterococcal surface protein, and putative glycosyl-hydrolase; besides mortality trials were conducted in the experimental model Galleria mellonella (Order: Lepidoptera). Was found only in marine enterococci the presence of gelE and esp, with strong biofilms in almost all strains, no association showed with these markers. Only 14.3% of enterococci gelE+ and gelatinase activity showed no strain proved beta hemolytic or carry cylA (hemolysin activator). In the clinical group multiple virulence antibiotypes and profiles related to the species and origin of infection was observed, hyl marker was present only in strains vancomycin resistance (VRE) and esp-positives, also detected in this group, beta-hemolytic (12.1%) and strains carrier cylA (15.2%), in addition 48.5% of clinical enterococci are gelE and gelatinase activity was detected in 30.3% of the strains. Gelatinase positive isolates and hemolysin developed a high mortality in G. mellonella, a strain of E. faecalis of marine origin (positive gelatinase) with similar clinical group mortality. It was determined that marine enterococci, mainly E. faecalis, retain some virulence characteristics and antimicrobial resistance so its persistence in the marine environment is a threat to public health. Keywords: Virulence, enterococci, multiresistance, pathogenicity, G. mellonella. / Tesis

Development of a rapid method for the detection of fecal enterococci and pathogenic microorganisms in beach water was attempted utilizing an evanescent wave fiber optic biosensor. Various assay formats including a sandwich immunoassay were tested in the development of a rapid assay. Fluorophore labeled antibodies were used for specific detection of bacteria captured or adsorbed directly to the surface of a polystyrene fiber optic waveguide. Binding of the fluorescent labeled antibody to its specific target or binding of a fluorescent labeled anti-IgG within 100-1000 nm of the waveguide surface caused excitation of the fluorescent conjugate resulting in a quantifiable signal. Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli O157:H7, and Vibrio cholerae were used as model organisms for biosensor detection in phosphate buffered saline and seawater. Seawater samples were selectively enriched for the presence of these model organisms, which were later detected on the biosensor. The sensitivity and specificity of the biosensor was examined by testing various assay formats, sample preparations, and molecules for capture and detection. Finally, an enrichment protocol combined with filter concentration was utilized to enhance detection of low levels of enterococci. The fiber optic biosensor has the potential to be a sensitive and specific system for the detection of fecal enterococci. The lower limit of detection in seawater and phosphate buffered saline was 2.8 x 106 CFU/ml. As few as 6 CFU/100ml (0.06CFU/ml) could be detected in seawater following a 14-24 hour enrichment and concentration step. Vibrio alginolyticus was found to grow under the same enrichment conditions as the enterococci. V. alginolyticus crossreacted with the polyclonal anti-Strep group D antibody used in the immunoassay at high cell concentrations. Staphylococcus aureus was the only other organism which showed significant cross-reactivity with this antibody. The biosensor was also able to detect other bacterial pathogens in PBS and seawater. The lower limit for detection of E. coli O157:H7 was 3.6 x 105 CFU/ml. The lower limit for detection of Vibrio cholerae O1 was 1.3 x 108 CFU/ml. The antibodies used in these assays were found to crossreact with other gram negative microorganisms. The biosensor was not able to detect Staphylococcus aureus.