O mosquito Aedes aegypti é vetor de doenças como a febre amarela, dengue, chinkungunya e zika. O sistema digestório é responsável pela digestão e absorção de nutrientes, é também uma interface com o ambiente externo sendo a porta de entrada de organismos infecciosos. A presença de duas lipases digestivas foi confirmada por qPCR, uma na fase larval (L-Aa7051) e outra na fase adulta (L-Aa7055). Estas enzimas foram agrupadas na família das lipases neutras e apresentam alterações em resíduos envolvidos na especificidade, domínio tampa e alça β9. A L-Aa7055 recombinante foi expressa heterologamente em Escherichia coli na porção insolúvel, com atividade após a renaturação. Observamos que a expressão da lipase L-Aa7055 sofre uma redução de 30% na infecção Plasmodium gallinaceum, não sendo afetada pelo vírus dengue sorotipo 2 (DENV2). A digestão de lipídeos é importante na fase larval, com altos níveis de transcrito. Um estudo mais aprofundado ainda será necessário para compreender completamente o papel das lipases no processo infeccioso. / The Aedes aegypti borne diseases yellow fever, dengue fever, chinkungunya and zica are important public healthy problems. The digestion and absorption of nutrients are performed in the digestive system, which is also an external environment interface that allows the infection by pathogenic microorganisms. The presence of two digestive lipases were identified by qPCR, L-Aa7051 in the larval phase and L-Aa7055 in the adult female. The lipase sequences were grouped in the neutral family, and exhibit alterations in residues involved in specificity, lid domain and β9 loop. The recombinant L-Aa7055 was expressed in the insoluble fraction, and show activity after a renaturation process. We notice that the expression levels of L-Aa7055 are reduced by 30% in the Plasmodium gallinaceum infection and were not affected by serotype 2 dengue virus (DENV2). The lipid digestion is important in the larval phase, with higher transcript levels. New studies will be necessary to the complete understanding of lipase contribution in the infectious process.

Resumo: Neste trabalho foi avaliado o uso de enzimas exógenas: amilase com endo-β-glucanase (AG) e fitase (Fi) em dietas para cachara (Pseudoplatystoma reticulatum). Foram realizados ensaios de digestibilidade de nutrientes de dietas contendo quatro diferentes níveis destas enzimas, em esquema fatorial 4x4. Este estudo mostrou que a adição das enzimas alteraram os valores dos coeficientes de digestibilidade aparente dos nutrientes e de absorção dos minerais. No entanto as alterações foram dependentes dos níveis utilizados, e houve interações entre os níveis das enzimas estudadas. Após, foi realizado um ensaio de desempenho com 70 dias de duração, no qual foi avaliado o efeito da ausência de enzimas ou adição de 150 mg de AG kg-1; 2.500 UF kg-1; 100 mg de AG kg-1 com 1.500 UF kg-1 em duas dietas (com 30 ou 60% da proteína de origem animal). Neste experimento, além do desempenho produtivo dos peixes, foram observadas alterações na produção endógena das enzimas digestivas; alterações histológicas do trato gastrintestinal, pâncreas e fígado; alterações na composição da carcaça; e na retenção de fósforo, cálcio e magnésio nos ossos. O sinergismo observado entre as enzimas estudadas sugere que o uso destas enzimas pode melhorar o aproveitamento das dietas para peixes carnívoros, aumentando a energia disponível, mas isto vai depender do balanceamento adequado da dieta em que são empregadas. As alterações das enzimas digestivas e histológicas observadas mostraram que as adições das enzimas exógenas avaliadas exerceram um papel importante na nutrição do cachara, no aumento do aproveitamento da proteína e dos carboidratos / Abstract: This work evaluated the exogenous enzymes amylase with endo-β-glucanase (AG) and phytase (Fi) in Barred sorubim (Pseudoplatystoma reticulatum) diets. Apparent nutrients digestibility assays were done with four different enzyme levels, in a 4x4 factorial scheme. This study showed that the enzymes addition changed the nutrients apparent digestibility coefficients and the minerals absorption. However, the alterations were dependents on the levels used, and there were interactions between the evaluated enzymes levels. After, a 70 days long performance assay was done, in which was evaluated the absence or presence of 150 mg of AG.kg-1; 2,500 UF.kg-1; 100 mg of AG.kg-1 + 1,500 UF.kg-1 enzymes in two diets (30 or 60% of animal-protein). In this experiment, fish performance and alterations in the endogenous production of the digestive enzymes; histologic changes in the gastrointestinal tract, pancreas, and liver; carcass composition changes; phosphorus, calcium, and magnesium retention in the bone were observed. The synergism observed among the enzymes evaluated suggests that its use can improve the diets profit to carnivore fishes, increasing the available energy, depending on the adequate balance in each diet though. The digestive and histologic enzymes alterations observed showed that the addition of the exogenous enzymes evaluated played an important role in the Barred sorubim nutrition, in the protein and carbohydrates profit improving / Orientador: Dalton José Carneiro / Coorientador: João Martins Pizauro Júnior / Banca: Wilson Massamitu Furuya / Banca: Antonio Carlos de Laurentiz / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Marta Verardino De Stefani / Doutor

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / O Aedes aegypti é o vetor mais importante de arboviroses humana sendo responsável pelas transmissões de dengue e febre amarela urbana. As enzimas tipo tripsina apresentam um importante papel na digestão de estádios de vida larval e adulto de Ae. aegypti. No presente trabalho, nós identificamos as duas enzimas tipo tripsina majoritárias do intestino médio larval através da construção de uma biblioteca de fragmentos de cDNA de tripsina. Elas são AAEL005607 e AAEL006371, com frequências de expressão de 29,3% e 20%, respectivamente. Análises por PCR semi-quantitativo mostraram que a tripsina AAEL005607 foi transcrita em todos os instars larval, mas a tripsina AAEL006371 apareceu somente nos 3º e 4º instar larvais. A fim de confirmar os dados de transcrição, enzimas tipo tripsina do intestino médio de larvas de 4º instar foram purificadas por cromatografias de afinidade, troca iônica e fase reversa. A tripsina purificada apresentou massa molecular de 28 kDa por SDS-PAGE. Sua sequência de aminoácidos parcial nos permitiu sugerir que a atividade de tripsina é codificada pela sequência AAEL005607. A tripsina purificada (AAEL005607) exibiu um valor de Km de 36,4 μM para o substrato Tosyl-Gly-Pro-Arg-pNa e foi fortemente inibida por AaTI e HiTI, ambos inibidores de tripsina, com valores de Ki de 0,94 pM e 160 pM, respectivamente. Em conclusão, pela primeira vez, a enzima digestiva majoritária de 4º instar larval de Ae. aegypti foi purificada e caracterizada. / Aedes aegypti is the most important vector of human arboviral diseases and it is responsible for dengue and urban yellow fever transmissions. Trypsin-like enzymes plays an important role in the Ae. aegypti adult and larval life stages digestion. In the present work, we identified the two major trypsin-like enzymes of Ae. aegypti larval midgut through the trypsin cDNA fragments library construction. They are AAEL005607 and AAEL006371, with expression frequencies of 29.3% and 20%, respectively. Semi quantitative PCR analysis showed that the AAEL005607 was transcripted in all larval instars, but AAEL006371 appeared only in 3rd and 4th larval instars. In order to confirm the transcription data, trypsin-like enzymes from 4th instar larvae of Ae. aegypti midgut were purified by affinity, ionic exchange and reversedphase chromatographies. Purified trypsin presented molecular mass of 28 kDa by SDS-PAGE. Its partial amino acid sequence allowed us to suggest that the trypsin activity is encoding by AAEL005607 sequence. The purified trypsin (AAEL005607) showed Km value of 36.4 μM for Tosyl-Gly-Pro-Arg-pNa substrate and was strongly inhibited by AaTI and HiTI, both trypsin inhibitors, with Ki of 0.94 pM and 160 pM, respectively. In conclusion, for the first time, the major digestive enzyme of 4th larval instar of Ae. aegypti was identified and characterized. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:04:37Z : No. of bitstreams: 1 stech_mr_dr_jabo.pdf: 1806594 bytes, checksum: c5ec84ba98becc882b11fe47213ba597 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste trabalho foi avaliado o uso de enzimas exógenas: amilase com endo-β-glucanase (AG) e fitase (Fi) em dietas para cachara (Pseudoplatystoma reticulatum). Foram realizados ensaios de digestibilidade de nutrientes de dietas contendo quatro diferentes níveis destas enzimas, em esquema fatorial 4x4. Este estudo mostrou que a adição das enzimas alteraram os valores dos coeficientes de digestibilidade aparente dos nutrientes e de absorção dos minerais. No entanto as alterações foram dependentes dos níveis utilizados, e houve interações entre os níveis das enzimas estudadas. Após, foi realizado um ensaio de desempenho com 70 dias de duração, no qual foi avaliado o efeito da ausência de enzimas ou adição de 150 mg de AG kg-1; 2.500 UF kg-1; 100 mg de AG kg-1 com 1.500 UF kg-1 em duas dietas (com 30 ou 60% da proteína de origem animal). Neste experimento, além do desempenho produtivo dos peixes, foram observadas alterações na produção endógena das enzimas digestivas; alterações histológicas do trato gastrintestinal, pâncreas e fígado; alterações na composição da carcaça; e na retenção de fósforo, cálcio e magnésio nos ossos. O sinergismo observado entre as enzimas estudadas sugere que o uso destas enzimas pode melhorar o aproveitamento das dietas para peixes carnívoros, aumentando a energia disponível, mas isto vai depender do balanceamento adequado da dieta em que são empregadas. As alterações das enzimas digestivas e histológicas observadas mostraram que as adições das enzimas exógenas avaliadas exerceram um papel importante na nutrição do cachara, no aumento do aproveitamento da proteína e dos carboidratos / This work evaluated the exogenous enzymes amylase with endo-β-glucanase (AG) and phytase (Fi) in Barred sorubim (Pseudoplatystoma reticulatum) diets. Apparent nutrients digestibility assays were done with four different enzyme levels, in a 4x4 factorial scheme. This study showed that the enzymes addition changed the nutrients apparent digestibility coefficients and the minerals absorption. However, the alterations were dependents on the levels used, and there were interactions between the evaluated enzymes levels. After, a 70 days long performance assay was done, in which was evaluated the absence or presence of 150 mg of AG.kg-1; 2,500 UF.kg-1; 100 mg of AG.kg-1 + 1,500 UF.kg-1 enzymes in two diets (30 or 60% of animal-protein). In this experiment, fish performance and alterations in the endogenous production of the digestive enzymes; histologic changes in the gastrointestinal tract, pancreas, and liver; carcass composition changes; phosphorus, calcium, and magnesium retention in the bone were observed. The synergism observed among the enzymes evaluated suggests that its use can improve the diets profit to carnivore fishes, increasing the available energy, depending on the adequate balance in each diet though. The digestive and histologic enzymes alterations observed showed that the addition of the exogenous enzymes evaluated played an important role in the Barred sorubim nutrition, in the protein and carbohydrates profit improving

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-03-16T15:01:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) CAROLINA KROPNICZKI GOUVEIA - DISSERTAÇÃO.pdf: 1168935 bytes, checksum: ec9fc0cb4665cb4641bd7162f5449c56 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-16T15:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) CAROLINA KROPNICZKI GOUVEIA - DISSERTAÇÃO.pdf: 1168935 bytes, checksum: ec9fc0cb4665cb4641bd7162f5449c56 (MD5) Previous issue date: 2012 / A produção de camarões marinhos na região Nordeste do Brasil vem crescendo principalmente pela introdução da espécie Litopenaeus vannamei. Adicionadas à dieta ou diretamente na água, as bactérias probióticas têm sido utilizadas para controle biológico e aumento da digestibilidade alimentar e do sistema imune dos animais, elevando a lucratividade dos empreendimentos dedicados à carcinicultura. A influência de enzimas exógenas de bactérias na digestão dos camarões não está bem elucidada e ainda existe uma grande lacuna no que diz respeito a aspectos nutricionais tanto dos microrganismos, quanto dos animais cultivados. Dessa forma, objetivou-se avaliar as atividades proteolítica e amilolítica de cepas bacterianas isoladas do hepatopâncreas e estômago do L. vannamei e identificar as bactérias produtoras destas enzimas pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. Para estudo do ambiente em tanques heterotróficos experimentais utilizando dois probióticos comerciais (HP1 e HP2) e em tanques controles heterotrófico (Het) e autotrófico (Aut), amostras de água foram tomadas ao final do experimento para contagem de bactérias heterotróficas, autotróficas e víbrios por plaqueamento em meios específicos. As médias de população bacteriana foram submetidas à análise de variância (ANOVA) complementada pelo teste de Tukey (p<0,05). Dos órgãos das amostras de camarão (n=3) foram retirados os materiais internos para isolamento das cepas bacterianas e seleção in vitro pela capacidade de produção de enzimas digestivas. Uma cepa de Bacillus subtilis (ATCC 6633) foi utilizada como testemunha na identificação utilizando os inicializadores universais para o domínio bactéria fD1 (Forward) e rD1 (Reverse). A população de bactérias heterotróficas foi mais representativa quando comparada às de autotróficas e víbrios, e o experimento Het atingiu a maior média (1,91x107 UFC/mL). As menores cargas de víbrios foram encontradas nos tanques experimentais HP1 e HP2 com médias de 2,46x104 e 2,00x104 UFC/mL, respectivamente. De 64 cepas isoladas, 11 possuíram índices enzimáticos satisfatórios (IE ≥ 2,0) para a produção de protease e amilase. Os amplicons após sequenciamento do DNA apresentaram tamanho maior que 1,4Kb e homologia com o GenBank e RDP, identificando bactérias como Bacillus subtilis e Shewanella algae. O incremento da população heterotrófica está relacionado à adição de melaço como fonte de carbono no sistema de cultivo e nos experimentos com os probióticos comerciais, a carga vibrionácea foi reduzida. A técnica de sequenciamento do gene 16S rRNA utilizando os primers fD1 e rD1 foi eficiente na caracterização bacteriana a nível de espécie e até subespécie, revelando a presença de bactérias com potencial para utilização como probiótico. / The marine shrimps cash crop in the Northeast region of Brazil is raising due to the introduction of Litopenaus vannamei. The probiotics bacteria added in the diet or directly in the water have been used for biological control and augmentations in the alimental digestibility and in the immune system, increasing the profits of enterprises related to carciniculture. The influence of bacterial exogenic enzymes on shrimp digestion is not clear and still has a gap concerning the nutrition aspects of shrimps and microorganisms. Therefore, this study had as objective the evaluations of proteolytic and amylolytic activities of bacterial strains isolated from hepatopancreas and stomach of L. vannamei and identify the bacteria responsible for enzymes production by sequencing the 16S rRNA gene. For environmental study in heterotrophic tanks using two commercial probiotics (HP1 e HP2) and in heterotrophic (Het) and autotrophic (Aut) control tanks, water samples were collected at the end of the experiment in order to count the autotrophic and heterotrophic bacteria and vibrio by plating in specific media. The means of bacterial population were submitted to variance analysis (ANOVA) and complemented by Tukey’s test (p<0.05). Internal materials were extracted from shrimp organs samples (n=3) in order to isolate the bacterial strains and “in vitro” selection due to its capacity to produce digestive enzymes. One strain of Bacillus subtilis (ATCC 6633) was used as witness on the identification using the universal primers fD1 (Forward) e rD1 (Reverse). The population of heterotrophic bacteria was more representative compared with autotrophic and vibrio population and the Het experiment presented the greatest mean (1,91x107 CFU.mL-1). The minor loads of vibrio were found in the experimental tanks HP1 and HP2 with means 2,46x104 e 2,00x104 CFU.mL-1 respectively. From sixty four strains, only eleven showed satisfactory enzymatic index (EI ≥ 2.0) to protease and amylase production. The amplicons after the DNA sequencing showed sizes bigger than 1,4Kb and homology with GenBank e RDP, identifying bacteria as Bacillus subtilis and Shewanella algae. The increment of heterotrophic population is related with the addition of molasses as carbon source in the crop system and the vibrio load were reduced in the experiments with commercial probiotics. The sequencing technique of 16S rRNA gene using fD1 and rD1 were efficient in the characterization of bacteria at the level of species and even at the level of subspecies, revealing the presence of bacteria with potential use as probiotic.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-07-08T17:05:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bernardo do Rego Belmonte_Mestrado.pdf: 1797925 bytes, checksum: 7816587bf6318d594398ab8d0d619d73 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-08T17:05:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bernardo do Rego Belmonte_Mestrado.pdf: 1797925 bytes, checksum: 7816587bf6318d594398ab8d0d619d73 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / FACEPE / Lectinas são proteínas que apresentam atividade inseticida, sendo capazes de interferir na alimentação, desenvolvimento, reprodução e sobrevivência de insetos. Sitophilus zeamais, conhecido como gorgulho-do-milho, destaca-se como uma das principais pragas de grãos armazenados no Brasil e causa danos aos grãos de milho, trigo, sorgo e arroz. Myracrodruon urundeuva (aroeira-do-sertão) é uma árvore, madeira de lei, amplamente distribuída no Brasil. O presente trabalho avaliou os efeitos deletérios de extratos e lectinas isoladas da entrecasca (MuBL) e do cerne (MuHL) de M. urundeuva sobre o gorgulho-do-milho. Para determinação da atividade inseticida, a amostra foi incorporada a discos de farinha de trigo que serviram como dieta para os insetos durante 7 dias. As faixas de concentração testadas foram: 4 a 20 mg do extrato da entrecasca por g de farinha de trigo, 14 a 70 mg/g (extrato do cerne), 0,6 a 3,0 mg/g (MuBL) e 1,4 a 7,0 mg/g (MuHL). Após o término do bioensaio, foi avaliada a taxa de mortalidade e os seguintes parâmetros nutricionais: índice de deterrência alimentar (IDA), taxa de consumo relativo (TCR), taxa de ganho relativo de biomassa (TGB) e eficiência na conversão do alimento ingerido (ECAI). Em seguida, foram realizados ensaios com o extrato da entrecasca, extrato do cerne, MuBL e MuHL em concentrações de 20 mg/g, 70 mg/g, 3 mg/g e 7 mg/g, respectivamente, e após 7 dias, extratos de intestino dos insetos foram obtidos e avaliados quanto às atividades de protease, celulases (endoglucanase, exoglucanase, β-glicosidase), fosfatases (ácida e alcalina) e α-amilase. As dietas contendo os extratos de entrecasca e do cerne não induziram mortalidade dos insetos em um período de 7 dias de experimento, bem como não exerceram efeito deterrente sobre os insetos. Contudo, ambos os extratos interferiram nos parâmetros nutricionais dos insetos. Em todos os tratamentos com os extratos houve redução da biomassa corporal, uma vez que os valores de TGB foram negativos. Os valores de ECAI também foram negativos, variando de -3% a -70%. Com relação à TCR, os valores não foram significativamente diferentes (p > 0,05) que no controle, corroborando com a ausência de efeito deterrente. A comparação entre as concentrações testadas e os valores obtidos para os parâmetros nutricionais revela que o extrato da casca foi mais efetivo que o extrato do cerne. MuBL não induziu mortalidade em 7 dias, mas afetou a incorporação da dieta pelos insetos, como evidenciado pelos valores negativos de TGB e ECAI. Os valores de TCR foram maiores que no grupo controle, indicando a ausência de efeito deterrente. MuHL apresentou efeito deterrente variando de 44,82% (fraca) a 89,65% (forte) de acordo com a concentração e afetou fortemente a nutrição dos insetos, com valores de ECAI chegando a -360%. Uma vez que todas as amostras testadas apresentaram efeitos antinutricionais, as atividades de enzimas digestivas em insetos do grupo controle e que ingeriram os extratos e as lectinas foram avaliadas. A ingestão do extrato da entrecasca não resultou em alteração significativa (p > 0,05) das atividades de protease, fosfatase ácida, fosfatase alcalina e β-glicosidase. Já as atividades de endoglucanase, exoglucanase e α-amilase foram maiores em relação ao controle. Os insetos que ingeriram o extrato do cerne apresentaram atividades de protease, endoglucanase, exoglucanase e α-amilase menores em comparação ao controle enquanto a atividade de fosfatase ácida foi maior. No tratamento com MuBL, as atividades de fosfatase ácida e α-amilase foram menores em relação ao controle. Por outro lado, as atividades de protease, endoglucanase e exoglucanase foram maiores. No tratamento com MuHL, as atividades de fosfatase alcalina, fosfatase ácida e exoglucanase foram menores em relação ao controle. Em conclusão, extratos e lectinas de entrecasca e cerne de M. urundeuva exerceram efeitos antinutricionais sobre adultos de S. zeamais, apresentando potencial para uso no controle dos danos causados por esse inseto-praga. / Lectins are proteins with insecticidal activity able to interfere with the feeding, development, reproduction and survival of insects. Sitophilus zeamais, known as maize weevil, stands out as one of the main stored grain pests in Brazil and causes damage to maize, wheat, sorghum and rice. Myracrodruon urundeuva (aroeira-do-sertão) is a hardwood tree broadly distributed in Brazil. The present work evaluated the deleterious effects of extracts and lectins isolated from the bark (MuBL) and heartwood (MuHL) of M. urundeuva against the maize weevil. For determination of insecticidal activity, the sample was incorporated into wheat flour disks that served as diet for the insects during 7 days. The concentration ranges tested were: 4–20 mg of bark extract per gram of wheat flour, 14–70 mg/g (heartwood extract), 0.6-3.0 mg/g (MuBL) and 1.4-7.0 mg/g (MuHL). After the end of bioassay, it was evaluated the mortality rate and the following nutritional parameters: feeding deterrence index (FDI), relative consumption rate (RCR), relative biomass gain rate (BGR) and efficiency in conversion of ingested food (ECIF). Next, it was performed assays with the bark extract, heartwood extract, MuBL and MuHL at concentrations of 20 mg/g, 70 mg/g, 3 mg/g and 7 mg/g, respectively, and after 7 days, extracts from insects gut were obtained and evaluated for the activities of protease, cellulases (endoglucanase, exoglucanase, β-glucosidase), phosphatases (acid and alkaline) and α-amylase. The diets containing the bark and heartwood extracts did not induce mortality of the insects in a period of 7 days of assay as well as did not exert deterrent effect on the insects. However, both extracts interfered with the nutritional parameters of the insects. In all treatments with the extracts, there was a reduction of body biomass since the values of BGR were negative. The values of ECIF were also negative, ranging from -3% to -70%. Concerning RCR, the values were not significantly (p > 0.05) from control, corroborating the absence of deterrent effect. The comparison between the tested concentrations and the values obtained for the nutritional parameters reveal that the bark extract was more effective than the heartwood extract. MuBL did not induce mortality in 7 days but affected the incorporation of the diet by the insects, as evidenced by the negative values of BGR and ECIF. The RCR values were higher than in control group indicating the absence of deterrent effect. MuHL showed deterrent effect ranging from 44.82% (weak) to 89.65% (strong) according to the concentration and affected strongly the insect nutrition, with ECIF values reaching -360%. Since all the tested samples showed antinutritional effects, the activities of digestive enzymes from insects of control group and that ingested the extracts and lectins were evaluated. The ingestion of bark extract did not result in significant alteration (p > 0.05) of the activities of protease, acid and alkaline phosphatases and β-glucosidase. However, the activities of endoglucanase, exoglucanase and α-amylase were higher concerning control. The insects that ingested the heartwood extract showed protease, endoglucanase, exoglucanase and α-amylase activities lower than in control while the activity of acid phosphatase was higher. In treatment with MuBL, the acid phosphatase and α-amylase activities were lower than in control. On the other hand, the activities of protease, endoglucanase and exoglucanase were higher. In the treatment with MuHL, the activities of alkaline and acid phosphatases and of exoglucanase were lower than in control. In conclusion, the extracts and lectins from bark and heartwood of M. urundeuva exerted antinutritional effects on S. zeamais adults, showing potential for use in control of the damages caused by this insect pest.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-10-21T18:53:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Evando Alves Filgueiras - 2013.pdf: 1115430 bytes, checksum: 62f6695a211d8461f75ac10013af7bed (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-21T20:21:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Evando Alves Filgueiras - 2013.pdf: 1115430 bytes, checksum: 62f6695a211d8461f75ac10013af7bed (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-21T20:21:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Evando Alves Filgueiras - 2013.pdf: 1115430 bytes, checksum: 62f6695a211d8461f75ac10013af7bed (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-11-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Biological additives, such as probiotics, prebiotics and digestive enzymes, as well as the combination of these components - commonly called synbiotics - are an alternative to improve livestock performance. In order to evaluate the effects in dairy cattle of a synbiotic containing microencapsulated bacteria, a meta- analysis was conducted using results obtained on commercial farms. Variables included milk production and quality, and reproductive performance. Data were collected on 22 farms feeding a commercial synbiotic composed of microencapsulated probiotics, prebiotics and fibrolytic enzymes (Biofórmula Leite®). All herds followed the manufacturer's recommended dosage of 2 g / animal / day. Information was collected on bulk tank milk production and quality (Somatic Cell Count - SCC,and contents of milk fat, protein and total solids), as well as reproductive data, such as inseminations and calving dates. These data were pooled for meta-analysis, which was performed according to the mixed models procedures recommended by St. Pierre. An analysis of variance was performed, considering the farm as a random variable and treatment as a fixed effect, with time period nested within farm. For each analysis, we used the GLM procedure of Minitab (Minitab, Inc., State College, PA, USA). A probability level of 0.05% was used to determine the statistical significance of each effect. Treatment with the synbiotic produced significant reductions in bulk tank SCC(-41%) , and in calving interval (- 73 days). There was no significant effect on the contents of fat, protein, and total solids in milk. The synbiotic additive used in this study proved to be an effective tool in the reduction of somatic cells in milk, as well as improving the fertility of animals. / Os aditivos biológicos, como os probióticos, prebióticos e enzimas digestivas, ou mesmo, a combinação destes componentes, comumente denominada de simbióticos, têm se mostrado como uma alternativa para melhorar o desempenho dos animais. Com a finalidade de observar os benefícios advindos dos simbióticos com bactérias microencapsuladas em bovinos de leite, objetivou-se nessa pesquisa, realizar uma meta-análise dos resultados obtidos em nível de campo com a utilização de um produto simbiótico no desempenho produtivo, reprodutivo e na qualidade do leite de vacas leiteiras. Os dados foram coletados em 22 propriedades que utilizam o simbiótico comercial Biofórmula Leite®, composto por probióticos, prebióticos e enzimas fibrolíticas. A dosagem utilizada em todas as propriedades seguiu a indicação do fabricante de 2 g/animal/dia. Foram coletadas informações de qualidade do leite (Contagem de Células Somáticas - CCS, teores de Gordura, Proteína e Sólidos Totais), foram registradas também as médias de produção dos animais ou quantidades entregues no laticínio, bem como os dados reprodutivos, como datas das inseminações e dos partos. Esses dados foram agrupados para realização de uma meta-análise, que foi realizada de acordo com os procedimentos de modelos mistos preconizados por St. Pierre. Foi realizada uma análise de variância usando o modelo misto, considerando a fazenda como variável aleatória e o tratamento como efeito fixo, e o período aninhado na fazenda. Para cada análise, foi utilizado o procedimento GLM do Minitab (Minitab, Inc., State College, PA, EUA). O nível de probabilidade de 0,05% foi utilizado para determinar a significância estatística de cada efeito. Foi observada uma redução significativa na média de CCS dos tanques (-41%), além de uma redução de 73 dias no IP. Não foi constatado efeito significativo nos teores de gordura, proteína, e sólidos totais do leite. O aditivo simbiótico utilizado neste estudo demonstrou ser uma ferramenta eficaz na redução de células somáticas no leite, bem como na melhoria da fertilidade dos animais.

Utilizando uma bibioteca de expressão feita a partir do epitélio do intestino médio da larva de Diatraea saccharalis, nós clonamos e sequenciamos 3 cDNAs completos (Ds&#946;glyA, Ds&#946;glyB e Ds&#946;glyC), além de uma seqüência parcial que teoricamente codificam &#946;-glicosidases. As sequências dos peptídeos obtidos após digestão por tripsina das &#946;-glicosidases &#946;gly1 e &#946;gly2 de D. saccharalis mostraram que Ds&#946;glyA codifica a &#946;gly1, caracterizada anteriormente. Ds&#946;glyB e Ds&#946;glyC provavelmente codificam duas &#946;-glicosidases solúveis com massas moleculares teóricas de, respectivamente, 57,5 KDa e 56,2 KDa. Levando em consideração as semelhanças entre &#946;gly1 e &#946;gly3 e entre Ds&#946;glyA e Ds&#946;glyC, é razoável supor que Ds&#946;glyC codifique a &#946;gly3. Os peptídeos produzidos após a hidrólise de &#946;gly2 por tripsina não são codificados por nenhum dos cDNAs que nós sequenciamos. &#946;gly2 provavelmente é codificada pelo cDNA cuja seqüência ainda está incompleta. A inativação da &#946;gly2 por carbodiimida usando o tio-glicosídeo sinigrina e o O-glicosídeo p-nitrofenil &#946;-D-galactopiranosídeo resulta na mesma constante de inativação, indicando que o mesmo sítio ativo é responsável pela hidrólise dos dois substratos. A mesma conclusão é obtida calculando o Km de &#946;gly2 para os dois substratos e o Ki da inibição que cada um deles causa na hidrólise do outro. Os resultados indicam que uma só enzima é responsável pela hidrólise de sinigrina e p-nitrofenil &#946;-D-glicosídeo com atividade semelhante. Essa propriedade nunca foi descrita para outra tio- ou O-glicosidase. / We used an expression library made from Diatraea saccharalis midgut epithelium and succeeded in cloning and sequencing three complete cDNAs (Ds&#946;GlyA; Ds&#946;GlyB; Ds&#946;GlyC) plus a partial sequence that hypothetically code for &#946;-glycosidases. The sequence of peptides obtained from the purified D. saccharalis &#946;-glycosidases (&#946;Gly1 and &#946;Gly2) after trypsin digestion shows that Ds&#946;GlyA codes for &#946;Gly1, an enzyme that had already been characterized. Ds&#946;GlyB and Ds&#946;GlyC probably code for two soluble &#946;-glycosidases with, respectively, 503 and 493 amino acid residues and theoretical molecular weighs of 57.5 kDa and 56.2 kDa. Taking into account the similarities of &#946;Gly1 and &#946;Gly3 and of Ds&#946;GlyA and Ds&#946;GlyC it is reasonable to suppose that Ds&#946;GlyC codes for &#946;Gly3. The peptides produced after &#946;Gly2 hydrolysis by trypsin could not coded by any of the complete sequenced cDNAs, although they might be code by the still partial sequence we have. We determined the chemical inactivation of &#946;Gly2 using the thio-glucoside sinigrin and the O-glycoside p-nitrophenyl-&#946;-D-galactoside, and found the same inactivation constant, indicating that the same active site is responsible for the hydrolysis of the two substrates. The same conclusion is reached determining &#946;Gly2 Km for both substrates and the Ki for inhibition of the hydrolysis of one substrate using the other as inhibitor. These results indicated that only one enzyme is responsible for the hydrolysis of sinigrin and p-nitrophenyl-&#946;-D-galactoside with similar activities, which is not a property reported before for any O- or S- &#946;-glycosidase.

O cultivo do camarão-rosa Farfantepenaeus paulensis pode ser viabilizado com alimentos de boa digestibilidade proteica, por melhorar o rendimento e reduzir a liberação de resíduos no meio ambiente. Um método in vitro que utiliza o titulador pHstat e enzimas digestivas da espécie estudada para avaliar a digestibilidade proteica, obteve resultados comparáveis aos alcançados pelo cultivo de salmonídeos e camarões (Litopenaeus vannamei). No presente trabalho de suporte nutricional ao camarão autóctone F. paulensis, analisou-se a performance de cultivo dessa espécie em relação a três rações comerciais, verificou-se a previsibilidade do método in vitro de digestibilidade proteica e complementou-se os conhecimentos metodólogicos dessa técnica. Nos resultados, a performance de cultivo diferiu conforme a ração empregada e houve correlação (R2=0,55) entre os dados in vivo e in vitro de digestibilidade proteica para duas rações, sendo uma terceira ração excluída da análise devido às suas propriedades físicas, que possivelmente afetaram apenas a digestibilidade proteica in vivo. Os resultados obtidos com as enzimas empregadas no método in vitro diferiram pouco conforme a ontogênese, fonte alimentar e estado nutricional dos camarões. Os presentes resultados indicam que o método in vitro ainda não substitui o cultivo experimental, mas pode auxiliar na busca por alimentos adequados. / Culture of pink shrimp Farfantepenaeus paulensis can be achieved by digestible feeds that may result in higher yields and reduced residual nutrient release into the environment. An in vitro method to assess protein digestibility in a pH-stat reaction involving enzyme extracts of the target species was previously found to preview in vivo apparent protein digestibility in salmonids and shrimp Litopenaeus vannamei. The present survey explored culture performance of F. paulensis fed three commercial shrimp feeds and checked the potential of the pH-stat method to preview apparent protein digestibility. Moreover, the suitability of using hepatopancreas enzyme extracts was assessed in terms of shrimp ontogenesis, nutritional status (fed/unfed) and diet history. Culture performance differed among feeds and a correlation (R2=0.55) was found between in vivo and in vitro protein digestibility in two of the tested feeds. The remaining feed was excluded from analysis due to technical constraints that possibly affected apparent in vivo protein digestibility and culture performance. Shrimp hepatopancreas enzyme extracts employed for in vitro assays were not affected by ontogenesis, nutritional status and diet history. Though the in vitro method still cannot replace experimental rearing trials it can further assist in the search for adequate feedstuffs for shrimp rearing.

Um enfoque analítico, envolvendo centrifugação diferencial de homogeneizados de cecos gástricos de Rhynchosciara americana preparados em condições brandas e vigorosas, suporta a asserção de que existe uma classe principal de aril-&#945;- e &#946; -glicosidases, aril-&#945;- e &#946;-galactosidases e celobiases que é ligada à membrana plasmática, e duas classes de maltases, aminopeptidases, carboxipeptidases e dipeptidases. Maltases ocorrem na membrana plasmática e no interior de lisossomos na forma solúvel, enquanto que as peptidases (amino-carboxi- e dipeptidase) são encontradas na membrana plasmática e citossol. A ocorrência das enzimas citadas acima na membrana plasmática das células cecais, foi confirmada por resultados obtidos em preparações de microvilosidades realizadas com técnica desenvolvida para enterocito de mamíferos. O tratamento de microvilosidades com solução hiperosmótica de Tris, seguido de centrifugação em gradiente de densidade, permitiu a separação de quatro frações de membrana e de uma fração que contém microvilosidades intactas e, provavelmente, microfilamentos isolados. Eletroferogramas do material recolhido do gradiente mostrou diferenças entre as frações de membrana e sugeriu a ocorrência de actina como componente majoritário dos microfilamentos das microvilosidades. Ensaios enzimáticos nas diferentes frações do gradiente confirmaram a ocorrência de celobiase e carboxipeptidase ligadas à membrana plasmática. Os resultados de distribuição intracelular de hidrolases nos cecos de R. americana permitiram propor que a digestão terminal de proteínas ocorre na membrana plasmática e no citossol, por ação de amino-, carboxi- e dipeptidases, enquanto que a digestão de carboidratos, com exceção da trealose, ocorre somente na superfície das microvilosidades. / An analytical approach involving differencial centrifugation of Rhynchosciara Americana midgut caeca homogenates prepared in mild and in vigorous conditions support the assumption there are one main class of aryl-&#945;- e &#946;-glucosidases, aryl-&#945; - e &#946;-galactosidases and cellobiases, which are plasma membrane bound, and two classes of maltases, aminopeptidades, carboxypeptidases and dipeptidases. Maltases, occur in plasma membrane and in lysosomes (as a soluble enzyme) and the others are found in plasma membrane and cytosol. A succeful purification of caeca cells brush-borders by tecniques used for mammal enterocytes confirmed the assumptions based on differential centrifugation data. Treatment of purified microvilli with a hyperosmotic solution of Tris, followed by density gradient centrifugation, resulted in the separation of four membrane fractions and one fraction containing intact microvilli and, probably, isolated microfilaments. Electropherograms of the material recovered from the gradient showed differences among the membrane fractions, and they permitted to propose that actin is a major component of microvilli microfilaments. Enzymatic assays in the different fractions from the gradient confirmed the occurrence of cellobiase and carboxypeptidase plasma membrana bound. The results permite to propose that the majority of the terminal digestion of proteins and carbohydrates, with the exception of trehalose, occurs on the surface of the insect midgut caeca cells microvilli.