Utilizando uma bibioteca de expressão feita a partir do epitélio do intestino médio da larva de Diatraea saccharalis, nós clonamos e sequenciamos 3 cDNAs completos (DsβglyA, DsβglyB e DsβglyC), além de uma seqüência parcial que teoricamente codificam β-glicosidases. As sequências dos peptídeos obtidos após digestão por tripsina das β-glicosidases βgly1 e βgly2 de D. saccharalis mostraram que DsβglyA codifica a βgly1, caracterizada anteriormente. DsβglyB e DsβglyC provavelmente codificam duas β-glicosidases solúveis com massas moleculares teóricas de, respectivamente, 57,5 KDa e 56,2 KDa. Levando em consideração as semelhanças entre βgly1 e βgly3 e entre DsβglyA e DsβglyC, é razoável supor que DsβglyC codifique a βgly3. Os peptídeos produzidos após a hidrólise de βgly2 por tripsina não são codificados por nenhum dos cDNAs que nós sequenciamos. βgly2 provavelmente é codificada pelo cDNA cuja seqüência ainda está incompleta. A inativação da βgly2 por carbodiimida usando o tio-glicosídeo sinigrina e o O-glicosídeo p-nitrofenil β-D-galactopiranosídeo resulta na mesma constante de inativação, indicando que o mesmo sítio ativo é responsável pela hidrólise dos dois substratos. A mesma conclusão é obtida calculando o Km de βgly2 para os dois substratos e o Ki da inibição que cada um deles causa na hidrólise do outro. Os resultados indicam que uma só enzima é responsável pela hidrólise de sinigrina e p-nitrofenil β-D-glicosídeo com atividade semelhante. Essa propriedade nunca foi descrita para outra tio- ou O-glicosidase. / We used an expression library made from Diatraea saccharalis midgut epithelium and succeeded in cloning and sequencing three complete cDNAs (DsβGlyA; DsβGlyB; DsβGlyC) plus a partial sequence that hypothetically code for β-glycosidases. The sequence of peptides obtained from the purified D. saccharalis β-glycosidases (βGly1 and βGly2) after trypsin digestion shows that DsβGlyA codes for βGly1, an enzyme that had already been characterized. DsβGlyB and DsβGlyC probably code for two soluble β-glycosidases with, respectively, 503 and 493 amino acid residues and theoretical molecular weighs of 57.5 kDa and 56.2 kDa. Taking into account the similarities of βGly1 and βGly3 and of DsβGlyA and DsβGlyC it is reasonable to suppose that DsβGlyC codes for βGly3. The peptides produced after βGly2 hydrolysis by trypsin could not coded by any of the complete sequenced cDNAs, although they might be code by the still partial sequence we have. We determined the chemical inactivation of βGly2 using the thio-glucoside sinigrin and the O-glycoside p-nitrophenyl-β-D-galactoside, and found the same inactivation constant, indicating that the same active site is responsible for the hydrolysis of the two substrates. The same conclusion is reached determining βGly2 Km for both substrates and the Ki for inhibition of the hydrolysis of one substrate using the other as inhibitor. These results indicated that only one enzyme is responsible for the hydrolysis of sinigrin and p-nitrophenyl-β-D-galactoside with similar activities, which is not a property reported before for any O- or S- β-glycosidase.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4144.pdf: 662879 bytes, checksum: c1a69666cbb5d4bf5d667c14499a04f5 (MD5) Previous issue date: 2012-01-13 / Financiadora de Estudos e Projetos / Improvements in fish farming production require continuous research in nutrient formulation and diet technology. Feeding is the most important handling daily practiced by fish farmers and diets must supply the nutritional requirements to increase fish biomass. Aimed at improving the diets, a study was conducted to determine the ability of matrinxã (Brycon amazonicus) and of hybrid pintado (Pseudoplatistoma corruscans X Pseudoplatystoma fasciatum) to utilize different sources of carbohydrate in their diets. Triplicate groups of juveniles matrinxã were fed visual satiety one of five diets isonitrogenous (30% crude protein) and isolipidic (10% crude lipids) containing: 40% glucose, 40% maltose, 40% dextrin, 40% pregelatinized or 40% raw starch for 27 days. Weight gain, feed conversion ratio, feed consumption, digestive enzymes (amylase, maltase, unspecific proteases, trypsin, chymotrypsin, unspecific lipase and alkaline phosphatase), metabolites (glucose, lactate, pyruvate, ammonia, protein, fat acids, triglycerides, amino acids and glycogen) were measured. The same was done with juvenile hybrid, but the diet containing 30% crude protein, 10% crude lipids and 30% one of five carbohydrates. The matrinxã amylase and maltase activities were higher than those of pintado. In both species, fish fed diet containing glucose had the worst weight gain, feed conversion ratio and feed consumption, digestive enzymes (P < 0.05) among all groups. These results were followed by fish fed with diet containing maltose. Weight gain and feed conversion of matrinxã fed with diets containing pregelatinized starch or raw starch and of hybrid pintado fed with diet containing pregelatinized were higher than those of fish fed with the other carbohydrates. In intestinal of both species, amylase activity was higher in group fed with raw starch diets. In matrinxã, the activities of other digestive enzymes showed no significant changes. In pintado the highest maltase activity was observed in fish fed with pregelatinized. The alterations in plasmatic, muscular and hepatic metabolic intermediaries concentration become evident that the matrinxã and hybrid pintado were able to adapt its intermediary metabolism to the changes on the feeding condition to preserve vital functions. / A alimentação é o fator mais importante praticado por criadores de peixes e as dietas devem fornecer as necessidades nutricionais para aumentar a biomassa de peixes, por isso o aumento na produção piscícola exige pesquisa contínua na formulação de dietas e na busca de melhorias tecnológicas na confecção das dietas. Visando a melhoria das dietas, foi realizado um estudo para determinar a capacidade de matrinxã (Brycon amazonicus) e de híbrido pintado (Pseudoplatistoma corruscans X Pseudoplatystoma fasciatum) em utilizar diferentes tipos de carboidratos em suas dietas. Juvenis de matrinxã foram alimentados até a saciedade aparente com uma das cinco dietas isoproteicas (30% de proteína bruta) e isolipídica (lípidos em bruto 10%) que continham: 40% de glicose, maltose 40%, dextrina 40%, 40% prégelatinizados ou 40% de amido cru por 27 dias. Ganho de peso, conversão alimentar, consumo de ração, enzimas digestivas (amilase, maltase, proteases inespecíficas, tripsina, quimotripsina, lipase inespecífica e fosfatase alcalina), metabólitos (glicose, lactato, piruvato, proteína, amônia, triglicerídeos, aminoácidos e glicogênio) foram medidos. O mesmo foi feito com os juvenis de híbridos de pintado, mas a dieta continha 40% de proteína bruta, de 10% lipídios e 30% de um dos cinco tipos carboidratos. As atividades das carboidratases de matrinxã foram superiores aos de pintado. Em ambas as espécies, a dieta que continha glicose como fonte de carboidrato tiveram os piores valores de ganho de peso, de conversão alimentar, de consumo de alimentos e das atividades das enzimas digestivas (P <0,05) entre todos os grupos. Estes resultados foram seguidos pelos peixes alimentados com dieta que continha maltose. O ganho em peso e conversão alimentar de matrinxã alimentados com dietas contendo amido pré-gelatinizado ou amido cru e de híbrido pintado alimentados com dieta contendo pré-gelatinizado foram superiores aos dos peixes alimentados com a outros carboidratos. No trato intestinal de ambas as espécies, a atividade de amilase foi maior nos grupos alimentados com dietas com amido cru. Em matrinxã, as atividades de outras enzimas digestivas não apresentaram alterações significativas. Em pintado a maior atividade maltase foi observada em peixes alimentados com amido pré-gelatinizado. As alterações plasmáticas, de do músculo e do fígado concentração intermediários metabólicos torna evidente que o matrinxã e os híbridos de pintado foram capazes de adaptar o seu metabolismo intermediário para preservar as funções vitais perante as mudanças na dieta.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3545.pdf: 1477829 bytes, checksum: 41a816cc6c2dc590cf686cfbdb63674f (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Financiadora de Estudos e Projetos / The presence of a lignocellulolytic enzyme complex and/or symbiotic microorganisms in the invertebrate guts is an indicative of its ability of using wood as energy source. Despite the microbial involvement in the cellulose digestive processes of some species of aquatic insects, there is a lack of information regarding the importance of microorganisms in the digestive capacity of chironomid larvae. This research focuses on the analysis of the activity of enzymes responsible for cellulose and hemicelluloses digestion and the cultivable bacterial community capable of hydrolyzing wood compounds in the digestive tract of Stenochironomus larvae Kieffer (Diptera, Chironomidae). This is a cosmopolitan genus characterized by mining larvae of submerged decaying branches. Two larval morphotypes were studied. The results of enzymatic analysis in the larval digestive tract, performed by quantification of reducing sugars, showed limited ability of both morphotypes in the degradation of cellulose, but indicated capacity to hydrolyze xylan. There were isolated thirty-one types of colonies during the characterization of bacterial communities, of which nineteen strain responded positively into the ability to hydrolyze at least one of the four substrates used as the main carbon source in the culture media. Degradation capability was assessed using colorimetric tests. The bacteria were classified using 16S rRNA gene analysis. No bacteria capable of degrading lignin were isolated. Pseudomonas was highly richness, Bacillus showed the greatest capacity for degrading different substrates and Sphingobium was present in both Stenochironomus morphotypes. The results obtained in this research emphasize the participation of microorganisms in the degradation of the wood consumed by the Stenochironomus larvae. This is the first report of lignocellulolytic bacteria and lignocellulolytic enzymes in the gut of wood-mining chironomid. / A presença de complexo enzimático lignocelulolítico e/ou de microrganismos no trato digestivo de invertebrados é um indicativo da capacidade desses organismos utilizarem a madeira como fonte de energia. Apesar da participação microbiana em processos digestivos celulósicos em algumas espécies de insetos aquáticos, pouco se sabe sobre a importância dos microrganismos na capacidade digestiva de larvas de quironomídeos. Assim, este estudo teve como objetivo analisar as atividades enzimáticas digestivas de celulose e de hemicelulose e de avaliar a comunidade bacteriana cultivável capaz de hidrolisar compostos de madeira do trato digestivo de larvas de Stenochironomus Kieffer (Diptera, Chironomidae). Este é um gênero cosmopolita caracterizado por larvas minadoras de galhos submersos em decomposição. Foram estudados dois morfotipos larvais. Os resultados da análise enzimática, realizado através da quantificação de açucares redutores, demonstraram limitada capacidade na degradação de celulose, porém indicaram capacidade de hidrólise de xilana. Na caracterização da comunidade bacteriana foram isolados trinta e um tipos de colônias nos dois morfotipos estudados. Dezenove responderam positivamente à capacidade de hidrólise de pelo menos um dos quatro substratos utilizados como principal fonte de carbono nos meios de cultura. A capacidade de degradação foi avaliada através de testes colorimétricos. As bactérias foram identificadas pela análise do gene 16S rRNA. Nenhuma das bactérias isoladas foi capaz de degradar lignina. Pseudomonas foi o gênero com maior riqueza, Bacillus teve a maior capacidade de degradar diferentes substratos e Sphingobium foi encontrado em ambos os morfotipos. Os resultados deste trabalho evidenciam a participação de microrganimos na degradação da madeira consumida pelas larvas de Stenochironomus. Ressalta-se que este é o primeiro registro de bactérias e enzimas lignocelulolíticas no trato digestivo de quironomídeos minadores.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarlosEMG.pdf: 434119 bytes, checksum: cffd1dddf77ec049b23dadc1bfa89773 (MD5) Previous issue date: 2004-12-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A proteinaceous trypsin inhibitor was purified from Crotalaria pallida seeds by ammonium sulphate fractionation, affinity chromatography on immobilized Trypsin-Sepharose and TCA precipitation. The trypsin inhibitor, named ITC, had Mr of 32.5 kDa by SDS-PAGE and was composed by two subunits with 27.7 and 5.6 kDa linked by disulphide bridges, a typical characteristic of Kunitz-Inhibitor family. ITC was stable until 50?C, and at 100?C its residual activity was of about 60%. Also, ITC was stable at pHs 2 to 12. The inhibition of trypsin by ITC was non-competitive, with a Ki of 8,8 x 10-7M. ITC inhibits weakly other serine proteinases such as chymotrypsin and elastase. The inhibition of papain (44% of inhibition), a cysteine proteinase was an indicative of the bi-functionality of ITC. In vitro assays against digestive proteinases from several Lepdoptera, Diptera and Coleoptera pests were made. ITC inhibited in 100% digestive enzymes of Ceratitis capitata (fruit fly), Spodoptera frugiperda and Alabama argillacea, the last one being a cotton pest. It also inhibited in 74.4% Callosobruchus maculatus (bean weevil) digestive enzymes, a Coleoptera pest. ITC, when added in artificial diet models, affected weakly the development of C. capitata larvae and it had a WD50 of 2.65% to C. maculatus larvae / Um inibidor de proteinase foi isolado de sementes de Crotalaria pallida por fracionamento com sulfato de am?nio, cromatografia de afinidade em Sepharose com tripsina acoplada e precipita??o com ?cido tricloroac?tico (TCA). O inibidor de tripsina, denominado ITC, possui massa molecular de 32,5 kDa determinada por SDS-PAGE e ? composto por duas subunidades, uma de 25,7 e outra de 5,6 kDa, ligadas por pontes dissulfeto; uma caracter?stica t?pica da fam?lia de inibidores de Kunitz. ITC foi est?vel at? 50?C e a 100?C sua atividade residual foi cerca de 60%. ITC tamb?m foi est?vel em valores de pHs variando de 2 a 12. A inibi??o da tripsina por ITC ? do tipo n?o-competitivo, com um Ki de 8,8 x 10-7M. ITC inibe fracamente outras proteinases ser?nicas como quimotripsina e elastase. A inibi??o da papa?na (44%), uma proteinase ciste?nica, foi indicativa da bifuncionalidade de ITC. Ensaios in vitro contra proteinases digestivas de v?rios insetos praga das ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram realizados. ITC inibiu em cerca de 100% enzimas digestivas de Ceratitis capitata (mosca-das-frutas), Spodoptera frugiperda (lagarta do cartucho do algod?o), e Alabama argillacea (curuquer? do algod?o). ITC tamb?m inibiu em 74,4% enzimas digestivas de Callosobruchus maculatus (broca do feij?o) uma praga da ordem Coleoptera. ITC, quando adicionado a dietas artificiais, afetou fracamente o desenvolvimento de larvas de C. capitata e teve um WD50 de 2,65% contra larvas de C. maculatus

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:36:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarinoEAN_TESE.pdf: 1510121 bytes, checksum: 824b52d7ab71a45fa42ff2c16c22da7c (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Shrimp farming in Brazil is a consolidated activity, having brought economical and social gains to several states with the largest production concentrated in the northeast. This fact is also reflected in higher feed intake, necessitating a more efficient feed management. Currently, management techniques already foresee food loss due to molting. In this sense, studies relating shrimp s digestive physiology, molting physiology and behavioral response of shrimp feed can optimize the feed management. Thus, our study aimed to evaluate the behavioral response of the marine shrimp L. vannamei (Crustacea: Penaeidae) in accordance with the stages of moulting cycle and feeding schedules based on higher or lower activity of proteolytic digestive enzymes; also, to investigate the influence of feeding schedule on hepatosomatic index and non-specific and specific protease activity (trypsin). Experiments were carried out at the Laboratory of Shrimp Behavioral Studies at UFRN in partnership with the Laboratory of Enzimology UFPE. Juveniles of L. vannamei weighting 5.25 g (+ 0.25 g) were kept in aquaria at a density of 33 shrimp m -2. In the first experiment, shrimp were fed in the light phase or in the dark phase for 8 days; in the ninth day, the animals were observed for 15 minutes every hour during the 12 hours of each phase of the photoperiod. We recorded the frequency of inactivity, exploration, food intake, burrowing, swimming and crawling behavior. At the end of the 12th observation session, the shrimp were sacrified and classified by the method of setogenesis in the molt cycle stages A, B, C, D0, D1, D2 or D3. We found that the shrimp in A stage show high levels of inactivity. Moreover, the frequency of food intake was very low. The shrimp in D3 stage also had low food intake and high inactivity associated with elevated frequencies of burrowing. In the second experiment, shrimp were kept in physiological acclimation to experimental conditions for 28 days, distributed in 12 treatments in the light phase and 12 treatments in the dark phase. In the end, the animals were sacrified and dissected to assess non-specific and specific protease activity (trypsin) activity. In general, these parameters did not vary among animals fed in the light phase and those fed in the dark phase. However, significant differences were found in the activity of specific and nonspecific proteases in relation to food treatment. In the light phase, the major proteolytic activities converged to 10 hours after the start of the light phase, while the lowest activities converged to 6 hours after the beginning of this phase. In the dark phase, the highest enzyme activity converged to 12 hours after the onset of phase, while the lowest activities converged to 3 hours after the onset of phase. In the third experiment, we sought to evaluate the behavioral responses of shrimp in relation to dietary treatments based on higher or lower activity of proteolytic enzymes, considering the results of the second experiment. The behavioral categories observed were the same as the ones in the first experiment, with observations of 30 minutes (15min before and 15min after food supply). We found variation in behavioral responses as a function of the treatments, with greater intake of food in shrimp fed during the period of greatest activity of proteolytic enzymes, in the light phase. Thus we see that periodic events associated with the shrimp s physiology interfere in their behavioral responses, revealing situations that are more adjustable to the provision of food, and consequently optimizing feeding management / A carcinicultura brasileira ? uma atividade consolidada, pois trouxe ganhos econ?micos e sociais a v?rios estados, com a maior produ??o e ?rea cultivada localizada na regi?o nordeste. Esse fato tamb?m se reflete no maior consumo de ra??o, tornando necess?rio um manejo alimentar mais eficiente. Atualmente, as t?cnicas de manejo j? prev?em sobra alimentar em decorr?ncia dos processos de muda. Nesse sentido, estudos relacionando fisiologia digestiva, fisiologia da muda e resposta comportamental do camar?o podem otimizar o manejo alimentar. Assim, nosso trabalho teve o objetivo de avaliar a resposta comportamental do camar?o marinho L. vannamei (Crustacea: Penaeidae) de acordo com os est?gios do ciclo de muda e com a alimenta??o baseada em hor?rios de maior ou de menor atividade de enzimas digestivas proteol?ticas, bem como investigar a influ?ncia do hor?rio de alimenta??o sobre o ?ndice hepatossom?tico, atividade de protease espec?fica (tripsina) e n?o espec?fica. Para tanto, foram realizados tr?s experimentos no Laborat?rio de Estudos do Comportamento de Camar?es Departamento de Fisiologia da UFRN, em parceria com o Laborat?rio de Enzimologia Departamento de Bioqu?mica da UFPE. Juvenis de L. vannamei pesando 5,25 g (+ 0,25 g), foram mantidos em aqu?rios a uma densidade de 33 camar?es m-2. No primeiro experimento, os camar?es foram alimentados na fase de claro ou na fase de escuro durante 8 dias; no nono dia, os animais foram observados por 15 minutos a cada hora, durante as 12 horas de cada fase do fotoper?odo, sendo registradas as freq??ncias de ocorr?ncia dos comportamentos parado, explora??o, ingest?o de alimento, enterramento, nata??o e rastejamento. Ao final da 12? sess?o de observa??o, foram sacrificados e classificados pelo m?todo da setog?nese, nos est?gios do ciclo de muda A, B, C, D0, D1, D2 ou D3. Como resultado, encontramos que os camar?es em est?gio A apresentam elevada frequencia do comportamento parado. Por outro lado, a freq??ncia de ingest?o de alimento foi muito baixa. Os camar?es em est?gio D3 tamb?m apresentaram baixa ingest?o de alimento e elevada inatividade, associada a elevadas freq??ncias de enterramento. No segundo experimento, os camar?es foram mantidos em aclimata??o fisiol?gica ?s condi??es experimentais por 28 dias, distribu?dos em 12 tratamentos na fase de claro e 12 tratamentos na fase de escuro. Ao final, os animais foram sacrificados e dissecados para avalia??o da atividade de protease espec?fica (tripsina) e atividade de protease n?o espec?fica. De modo geral, esses par?metros n?o variaram entre os animais alimentados na fase de claro e aqueles alimentados na fase de escuro. No entanto, percebemos diferen?as significativas na atividade das proteases espec?fica e n?o espec?fica em rela??o ao tratamento alimentar. Na fase de claro, as maiores atividades proteol?ticas convergiam para a 10? hora ap?s o in?cio da fase de claro, enquanto as menores atividades convergiram para a 6? hora ap?s o in?cio dessa fase. Na fase de escuro, as maiores atividades dessas enzimas convergiram para a 12? hora ap?s o in?cio da fase, enquanto as menores atividades convergiram para a 3? hora ap?s o in?cio da fase. No terceiro experimento, buscamos avaliar as respostas comportamentais dos camar?es a tratamentos alimentares baseados na maior ou menor atividade de enzimas proteol?ticas, considerando os resultados do segundo experimento. As categorias comportamentais observadas foram ?s mesmas do primeiro experimento, com observa??es de 30 minutos (15min antes e 15min depois da oferta alimentar). Encontramos uma varia??o na resposta comportamental em fun??o dos tratamentos, com maior ingest?o de alimento nos camar?es alimentados no hor?rio de maior atividade de enzimas proteol?ticas, da fase de claro. Assim, percebemos que eventos peri?dicos associados ? fisiologia dos camar?es interferem em suas respostas comportamentais, revelando situa??es mais prop?cias ? oferta de alimento, capazes de otimizar o manejo alimentar

Um enfoque analítico, envolvendo centrifugação diferencial de homogeneizados de cecos gástricos de Rhynchosciara americana preparados em condições brandas e vigorosas, suporta a asserção de que existe uma classe principal de aril-&#945;- e &#946; -glicosidases, aril-&#945;- e &#946;-galactosidases e celobiases que é ligada à membrana plasmática, e duas classes de maltases, aminopeptidases, carboxipeptidases e dipeptidases. Maltases ocorrem na membrana plasmática e no interior de lisossomos na forma solúvel, enquanto que as peptidases (amino-carboxi- e dipeptidase) são encontradas na membrana plasmática e citossol. A ocorrência das enzimas citadas acima na membrana plasmática das células cecais, foi confirmada por resultados obtidos em preparações de microvilosidades realizadas com técnica desenvolvida para enterocito de mamíferos. O tratamento de microvilosidades com solução hiperosmótica de Tris, seguido de centrifugação em gradiente de densidade, permitiu a separação de quatro frações de membrana e de uma fração que contém microvilosidades intactas e, provavelmente, microfilamentos isolados. Eletroferogramas do material recolhido do gradiente mostrou diferenças entre as frações de membrana e sugeriu a ocorrência de actina como componente majoritário dos microfilamentos das microvilosidades. Ensaios enzimáticos nas diferentes frações do gradiente confirmaram a ocorrência de celobiase e carboxipeptidase ligadas à membrana plasmática. Os resultados de distribuição intracelular de hidrolases nos cecos de R. americana permitiram propor que a digestão terminal de proteínas ocorre na membrana plasmática e no citossol, por ação de amino-, carboxi- e dipeptidases, enquanto que a digestão de carboidratos, com exceção da trealose, ocorre somente na superfície das microvilosidades. / An analytical approach involving differencial centrifugation of Rhynchosciara Americana midgut caeca homogenates prepared in mild and in vigorous conditions support the assumption there are one main class of aryl-&#945;- e &#946;-glucosidases, aryl-&#945; - e &#946;-galactosidases and cellobiases, which are plasma membrane bound, and two classes of maltases, aminopeptidades, carboxypeptidases and dipeptidases. Maltases, occur in plasma membrane and in lysosomes (as a soluble enzyme) and the others are found in plasma membrane and cytosol. A succeful purification of caeca cells brush-borders by tecniques used for mammal enterocytes confirmed the assumptions based on differential centrifugation data. Treatment of purified microvilli with a hyperosmotic solution of Tris, followed by density gradient centrifugation, resulted in the separation of four membrane fractions and one fraction containing intact microvilli and, probably, isolated microfilaments. Electropherograms of the material recovered from the gradient showed differences among the membrane fractions, and they permitted to propose that actin is a major component of microvilli microfilaments. Enzymatic assays in the different fractions from the gradient confirmed the occurrence of cellobiase and carboxypeptidase plasma membrana bound. The results permite to propose that the majority of the terminal digestion of proteins and carbohydrates, with the exception of trehalose, occurs on the surface of the insect midgut caeca cells microvilli.

O cultivo do camarão-rosa Farfantepenaeus paulensis pode ser viabilizado com alimentos de boa digestibilidade proteica, por melhorar o rendimento e reduzir a liberação de resíduos no meio ambiente. Um método in vitro que utiliza o titulador pHstat e enzimas digestivas da espécie estudada para avaliar a digestibilidade proteica, obteve resultados comparáveis aos alcançados pelo cultivo de salmonídeos e camarões (Litopenaeus vannamei). No presente trabalho de suporte nutricional ao camarão autóctone F. paulensis, analisou-se a performance de cultivo dessa espécie em relação a três rações comerciais, verificou-se a previsibilidade do método in vitro de digestibilidade proteica e complementou-se os conhecimentos metodólogicos dessa técnica. Nos resultados, a performance de cultivo diferiu conforme a ração empregada e houve correlação (R2=0,55) entre os dados in vivo e in vitro de digestibilidade proteica para duas rações, sendo uma terceira ração excluída da análise devido às suas propriedades físicas, que possivelmente afetaram apenas a digestibilidade proteica in vivo. Os resultados obtidos com as enzimas empregadas no método in vitro diferiram pouco conforme a ontogênese, fonte alimentar e estado nutricional dos camarões. Os presentes resultados indicam que o método in vitro ainda não substitui o cultivo experimental, mas pode auxiliar na busca por alimentos adequados. / Culture of pink shrimp Farfantepenaeus paulensis can be achieved by digestible feeds that may result in higher yields and reduced residual nutrient release into the environment. An in vitro method to assess protein digestibility in a pH-stat reaction involving enzyme extracts of the target species was previously found to preview in vivo apparent protein digestibility in salmonids and shrimp Litopenaeus vannamei. The present survey explored culture performance of F. paulensis fed three commercial shrimp feeds and checked the potential of the pH-stat method to preview apparent protein digestibility. Moreover, the suitability of using hepatopancreas enzyme extracts was assessed in terms of shrimp ontogenesis, nutritional status (fed/unfed) and diet history. Culture performance differed among feeds and a correlation (R2=0.55) was found between in vivo and in vitro protein digestibility in two of the tested feeds. The remaining feed was excluded from analysis due to technical constraints that possibly affected apparent in vivo protein digestibility and culture performance. Shrimp hepatopancreas enzyme extracts employed for in vitro assays were not affected by ontogenesis, nutritional status and diet history. Though the in vitro method still cannot replace experimental rearing trials it can further assist in the search for adequate feedstuffs for shrimp rearing.