Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-02-21T12:58:13Z No. of bitstreams: 1 2016_NilzadoCarmoFontes.pdf: 5507563 bytes, checksum: a852350264b81411483c9906f8dccb46 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-27T15:30:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_NilzadoCarmoFontes.pdf: 5507563 bytes, checksum: a852350264b81411483c9906f8dccb46 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T15:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_NilzadoCarmoFontes.pdf: 5507563 bytes, checksum: a852350264b81411483c9906f8dccb46 (MD5) / Os distúrbios congênitos de glicosilação tipo II (CDG II) são doenças graves, multissistêmicas, devidos a mutações deletérias em genes que codificam proteínas que mantêm a integridade do complexo de Golgi e de outros componentes que participam do processo de N-glicosilação. Este representa modificação pós-traducional de proteínas que dá origem às estruturas de N-glicanos, que são essenciais para o funcionamento normal do organismo. Para avaliação do desempenho da espectrometria de massa no diagnóstico dos CDG II, foi realizada análise e comparação por espectrometria de massa, de estruturas de N-glicanos das moléculas de glicoproteinas plasmáticas de indivíduos portadores e não portadores de distúrbios congênitos de glicosilação tipo II e verificou-se que as diferenças entre os dois grupos foram em maior parte quantitativas. Entretanto, um subtipo de CDG II (MAN1B1-CDG) levou a produção e acúmulo de N-glicanos diferenciais que permitem um direcionamento do diagnóstico molecular. Através de diferenças quantitativas, a análise e estudo das estruturas de N-glicanos acumuladas estreita o número de genes candidatos ao diagnóstico molecular, auxiliando na identificação destes distúrbios, que não apresentam sintomas clínicos nem glicobiomarca específicos, e se confundem clinicamente com outras doenças metabólicas. Este trabalho é pioneiro no Brasil e evidenciou a importância da espectrometria de massa no auxílio ao diagnóstico de portadores de distúrbios congênitos de glicosilação tipo II. / Congenital Disorders of Glycosylation type II (CDG II) comprise a group of severe, multisystem diseases caused by mutations in genes responsible for maintaining the integrity of Golgi apparatus and of other components involved in N-glycosylation processing, i.e, post-translational modifications, which result in N-glycan structures. We performed analyses of N-glycan structures of plasma glycoproteins of CDG II patients and healthy controls, in order to evaluate the performance of mass spectrometry in the diagnosis of these diseases. Most of the differences between both groups of individuals were quantitative. One of the CDG II subtypes (MAN1B1-CDG) led to the accumulation of abnormal N-glycans, which allowed diagnosis, not yet confirmed by molecular methods. Analysis and characterization of accumulated N-glycan structures narrow the number of candidate genes to be considered in the diagnosis. This helps in the identification of these diseases, because the definite diagnostic is not possible by clinical features and there are no specific biomarkers. To the best of our knowledge, this is the first mass spectrometry-based study in Brazil aiming the diagnosis of these disorders. It also highlights the importance of mass spectrometry in the diagnosis of CDG II.

Resumo: Este trabalho apresenta a aplicação da metodologia de análise in silico em frações da partição líquido-líquido obtidas a partir do extrato hidroalcoólico das folhas de Ocotea paranapiacabensis e Aniba firmula (Lauraceae). A abordagem utilizou os dados obtidos a partir da técnica hifenada CLAE-DAD-IES-EM, sendo esses dados analisados e contrastados com a base de dados do Dictionary of Natural Products (DNP), a fim de se detectar metabólitos secundários previamente isolados nos gêneros Ocotea e Aniba. A partir da obtenção desses dados, foi possível direcionar o estudo das frações analisadas para a identificação de novas substâncias nos gêneros estudados. Utilizando a metodologia, foram detectadas, estruturas isoméricas de alcalóides aporfinóides e dois flavonóides monoglicosilados nas folhas de O. paranapiacabensis. Não há relatos desses flavonóides em espécies do gênero Ocotea, o que levou ao planejamento de uma estratégia para o isolamento desses constituintes, que tiveram sua estrutura elucidada através da análise de RMN 1H e 13C. A abordagem utilizada no estudo da fração acetato de etila das folhas de A. firmula possibilitou a detecção de quatro substâncias da classe das estirilpironas (1- 4), esses dados foram importantes para a obtenção de uma região específica do perfil cromatográfico CLAE-DAD onde não foram detectados substâncias previamente isoladas através da análise in silico. A fração AFFAc foi então submetida a CLAE-UV com a finalidade de identificar novos constituintes químicos (estirilpironas). A fração obtida foi analisada e purificada, resultando no isolamento de dímeros de estirilpironas inéditos na literatura, 4-metoxi-8'-(11',12'- metilenodioxifenil)-7-[6-(4-metoxi-2-pironil)]-6'-estiril-oxabiciclo[4,2,0]-ocat-4'-em-2'- ona (5) 8'-(11', 12'metilenodioxifenil)-8-fenil-7,7' di [6-(4,4'-dimetoxi-piran-2-ona) ciclobutano... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work presents the application of the methodology in silico in partition liquid-liquid fractions obtained from the hydroalcoholic extract of leaves of Ocotea paranapiacabensis and Aniba firmula (Lauraceae). The approach used the data obtained from the hyphenated technique HPLC-DAD-ESI-MS, these data are analyzed and contrasted with the database of the Dictionary of Natural Products (DNP) in order to detect secondary metabolites previously isolated in the genus Ocotea and Aniba. Upon obtaining these data, it was possible to direct the study of fractions analyzed to the identification of new substances in the genera studied. Using the methodology, were detected, isomeric structures of aporphinic alkaloids and two flavonoids in leaves of O. paranapiacabensis. There are no reports of these flavonoids in species of the genus Ocotea, which led to planning a strategy for the isolation of these constituents, which had its structure elucidated by analysis of 1H and 13C NMR. The approach used in the study of the ethyl acetate fraction of leaves of A. firmula enabled the detection of four substances of styrilpyrones class (1-4), these data were important for determination a specific region of the HPLC-DAD chromatographic profile which were not detected substances previously isolated by in silico analysis. The fraction AFFAc was then subjected to HPLC-UV with the aim of identifying new chemical constituents (styrilpyrones). The fraction obtained was analyzed and purified, resulting in the isolation of dimers of estirilpironas unprecedented in the literature, 4-methoxy-8 '- (11', 12 '-metilenodioxiphenyl) -7 - [6 - (4-methoxy-2-pironil) ] -6 '-styryl-oxabicyclo [4,2,0]-ocat-4'-at-'2-one (5) 8' - (11 ', 12' metilenodioxiphenyl)-8-phenyl-7, 7'- di [6 - (4,4 "-dimethoxy-pyran-2-one) ciclobutane (6), confirming the importance of application of in silico analysis as a tool for the identification of chemical constituents in the already described species. / Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Alberto José Cavalheiro / Banca: Patrícia Mendonça Pauletti / Mestre

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:01Z : No. of bitstreams: 1 000854199.pdf: 5245942 bytes, checksum: 78603c065ca6ba2cb04fe0531fde9643 (MD5) / A técnica de ionização MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization) foi uma das responsáveis por revolucionar a Espectrometria de Massas, tornando possível sua aplicação a moléculas termolábeis e de alta massa molecular, como as proteínas. Apesar de seu grande desenvolvimento, esta técnica ainda apresenta algumas limitações como a seleção da matriz utilizada e o método de preparo de amostras. Estes fatores são determinantes na reprodutibilidade da análise e na faixa de aplicação de m/z. Neste trabalho, inicialmente analisou-se diferentes linhagens de cianobactérias por MALDI-TOF-MS, com a finalidade de se buscar por novos analitos para os quais fosse possível o monitoramento utilizando-se as matrizes iônicas. Posteriormente avaliou-se as características destas matrizes, a metodologia de preparo de amostras, a composição do analito e a intensidade do laser da fonte de MALDI, com o objetivo de selecionar as melhores metodologias de análise. Após esta etapa, as matrizes iônicas e metodologias selecionadas foram aplicadas na detecção e quantificação de cianotoxinas e na análise de fármacos por MALDI-MS. Neste estudo obteve-se como resultados: a diferenciação de linhagens de cianobactérias através dos fingerprints obtidos por MALDI-TOF-MS que também permitiram a detecção de importantes metabólitos; a detecção da homoanatoxina-a, uma cianotoxina de baixa massa molecular, diretamente de células de cianobactérias; o desenvolvimento de um método quantitativo de análise de microcistinas com ótima precisão; e o desenvolvimento de uma metodologia inédita para a detecção dos componentes ativos de medicamentos, ampliando, portanto, o leque de aplicações da técnica de MALDI. / The Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization technique was one of the ionization sources responsible for revolutionizing Mass Spectrometry, making possible its application to labile and high molecular weight molecules, such as proteins. Despite its great development, this technique still has some limitations like the selection of the matrix and the sample preparation method. These factors determine the reproducibility of analysis and the m/z application range. Initially, in this work, we analyzed different cyanobacteria strains by MALDI-TOF-MS, in order to check for new analytes to be monitored using ionic matrices. Subsequently, the characteristics of these matrices, the sample preparation method, the composition of the analyte and laser intensity of the MALDI source were evaluated aiming to select the best methodologies of analysis. After this step, the selected ionic matrices and methodologies have been applied in the detection and quantification of cianotoxins and analysis of pharmaceutical drugs by MALDI-MS. In this study we obtained as results: the differentiation of strains of cyanobacteria through the fingerprints obtained by MALDI-TOF-MS which allowed the detection of important metabolites; the detection of homoanatoxin-a, a low molecular weight cyanotoxin, directly from cyanobacteria cells; the development of a quantitative method for the analysis of microcystins with great precision; and the development of a new methodology for the detection of active compounds of medicines, increasing, therefore, the application range of MALDI technique.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-19Bitstream added on 2014-06-13T19:38:16Z : No. of bitstreams: 1 queiroz_mmf_me_araiq.pdf: 1583542 bytes, checksum: 254340c142d2eed7b4992bbcdca413c1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho apresenta a aplicação da metodologia de análise in silico em frações da partição líquido-líquido obtidas a partir do extrato hidroalcoólico das folhas de Ocotea paranapiacabensis e Aniba firmula (Lauraceae). A abordagem utilizou os dados obtidos a partir da técnica hifenada CLAE-DAD-IES-EM, sendo esses dados analisados e contrastados com a base de dados do Dictionary of Natural Products (DNP), a fim de se detectar metabólitos secundários previamente isolados nos gêneros Ocotea e Aniba. A partir da obtenção desses dados, foi possível direcionar o estudo das frações analisadas para a identificação de novas substâncias nos gêneros estudados. Utilizando a metodologia, foram detectadas, estruturas isoméricas de alcalóides aporfinóides e dois flavonóides monoglicosilados nas folhas de O. paranapiacabensis. Não há relatos desses flavonóides em espécies do gênero Ocotea, o que levou ao planejamento de uma estratégia para o isolamento desses constituintes, que tiveram sua estrutura elucidada através da análise de RMN 1H e 13C. A abordagem utilizada no estudo da fração acetato de etila das folhas de A. firmula possibilitou a detecção de quatro substâncias da classe das estirilpironas (1- 4), esses dados foram importantes para a obtenção de uma região específica do perfil cromatográfico CLAE-DAD onde não foram detectados substâncias previamente isoladas através da análise in silico. A fração AFFAc foi então submetida a CLAE-UV com a finalidade de identificar novos constituintes químicos (estirilpironas). A fração obtida foi analisada e purificada, resultando no isolamento de dímeros de estirilpironas inéditos na literatura, 4-metoxi-8`-(11`,12`- metilenodioxifenil)-7-[6-(4-metoxi-2-pironil)]-6`-estiril-oxabiciclo[4,2,0]-ocat-4`-em-2`- ona (5) 8`-(11`, 12`metilenodioxifenil)-8-fenil-7,7` di [6-(4,4`-dimetoxi-piran-2-ona) ciclobutano... / This work presents the application of the methodology in silico in partition liquid-liquid fractions obtained from the hydroalcoholic extract of leaves of Ocotea paranapiacabensis and Aniba firmula (Lauraceae). The approach used the data obtained from the hyphenated technique HPLC-DAD-ESI-MS, these data are analyzed and contrasted with the database of the Dictionary of Natural Products (DNP) in order to detect secondary metabolites previously isolated in the genus Ocotea and Aniba. Upon obtaining these data, it was possible to direct the study of fractions analyzed to the identification of new substances in the genera studied. Using the methodology, were detected, isomeric structures of aporphinic alkaloids and two flavonoids in leaves of O. paranapiacabensis. There are no reports of these flavonoids in species of the genus Ocotea, which led to planning a strategy for the isolation of these constituents, which had its structure elucidated by analysis of 1H and 13C NMR. The approach used in the study of the ethyl acetate fraction of leaves of A. firmula enabled the detection of four substances of styrilpyrones class (1-4), these data were important for determination a specific region of the HPLC-DAD chromatographic profile which were not detected substances previously isolated by in silico analysis. The fraction AFFAc was then subjected to HPLC-UV with the aim of identifying new chemical constituents (styrilpyrones). The fraction obtained was analyzed and purified, resulting in the isolation of dimers of estirilpironas unprecedented in the literature, 4-methoxy-8 `- (11`, 12 `-metilenodioxiphenyl) -7 - [6 - (4-methoxy-2-pironil) ] -6 `-styryl-oxabicyclo [4,2,0]-ocat-4`-at-`2-one (5) 8` - (11 `, 12` metilenodioxiphenyl)-8-phenyl-7, 7`- di [6 - (4,4 -dimethoxy-pyran-2-one) ciclobutane (6), confirming the importance of application of in silico analysis as a tool for the identification of chemical constituents in the already described species.

Orientador : Rosângela Gonçalves Peccinini / Banca: Regina Helena Costa Queiroz / Banca: Rafael Victorio Carvalho Guido / Banca: Vera Lúcia Lanchote / Banca: Chung Man Chin / Resumo: A anemia falciforme é um distúrbio monogênico, cujas complicações resultam em um quadro debilitante, doloroso e fatal para os portadores. O planejamento, síntese e avaliação de novos compostos são imprescindíveis para renovar as esperanças daqueles acometidos por essa doença e os estudos de farmacocinética, relação PK/PD e de segurança são parte indispensável da continuidade de desenvolvimento de novos candidatos. O LAPDESF-SCD03 é uma nova molécula candidata a fármaco que foi planejada para o tratamento sintomático dessa doença e demonstrou resultados promissores. Neste trabalho desenvolvemos os estudos de farmacocinética pré-clínica e de avaliação da atividade inibitória da produção de TNF-α em ratos Wistar, e as análises foram realizadas por cromatografia líquida de ultra eficiência e ensaio imunoenzimático, respectivamente. Os estudos em busca de metabólitos foram conduzidos em hepatócitos e analisados por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas de alta resolução. Nos parâmetros farmacocinéticos observados para o LAPDESF-SCD03 destaca-se a meia-vida curta (4,7 minutos) e o clearance elevado (172,5 mL/min.kg) para administração IV. Na administração oral o MRT foi 10 vezes maior que na administração IV com meia-vida de eliminação de 30 minutos. No estudo de relação PK/PD, foi observada redução dos níveis de TNF-α tanto pela via intravenosa, quanto pela via oral. No estudo de metabolismo, tanto na presença dos hepatócitos funcionais quanto na incubação com os hepatócitos não funcionais, foi observada a existência de um metabólito formado por hidrólise na subunidade ftalimídica, que de acordo com estudos previamente publicados com a talidomida e seus metabólitos, pode resultar em atividade inibitória da produção de TNF-α. Em conclusão, o fármaco mostrou atividade e teve sua farmacocinética... / Abstract: Sickle cell disease is a severe monogenic disorder, whose complications include the increase in the susceptibility to infections, acute splenic sequestration, aplastic crisis, acute thoracic syndrome, vaso-occlusive crisis, cerebrovascular disease, bone disease, priapism and leg ulcerations. The design, synthesis and evaluation of new compounds are necessary in order to renew the hopefulness of those affected by this disease, and the preclinical pharmacokinetic study, PK/PD study, metabolism study and safety evaluations, are an indispensable part of the development of these candidates as LAPDESF-SCD03. The preclinical pharmacokinetic and the TNF-α inhibition evaluation have been done using ultra performance liquid chromatography and immunoassay, respectively. The metabolite study has been made using Wistar rat hepatocytes and analyzed liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry. The main results in the pharmacokinetic parameters were the short half-life (4.7 minutos) and the high clearance (172,5 mL/min.kg). In the oral administration, the MRT was ten-fold higher than the observed one in the iv administration, while the half-life was 30 minutes. In the PK/PD study, it was observed TNF-α reduction by both routes of administration, intravenous and oral. The metabolism study has addressed the formation of open ring metabolite, even though in the absence of the functional cells. Aftermath, the drug has shown activity and its pharmacokinetic was achieved, including the identification of a probable metabolite, which maybe can be pharmacologically active. / Doutor

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Cíntia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Flávia Talarico Saia / Resumo: O descobrimento de novas moléculas bioativas tem sido o grande al vo ao decorrer dos anos da química dos produtos naturais, particularmente, micro - organismos tem se evidenciado como uma importante fonte do descobrimento de novos fármacos. Uma ampla gama de compostos provenientes de organismos microbianos são relatados na literatura, porém, recentes pesquisas demonstram que tais micro - organismos podem sofrer indução por determinados agentes externos, químicos ou físicos, através de mecanismos de defesa ou até mesmo o mutualismo existente em determinado meio, produzindo nov as estruturas químicas, que até então, tinham sua rota b iosintética silenciada devido a metodologias padrões de cultivo isolado. Através de utilização de culturas mistas de bactérias, o presente trabalho proporciona o conhecimento da relação existente entr e Pseudoxanthomonas indica e Shigella sp., ambas provenientes da rizosfera de Senna spectabilis . Para isso, as bactérias foram cultivadas em meio de cultivo líquido czapek broth, sendo realizado o estudo do crescimento das bactérias e produção de metabolit os frente ao tempo, tendo em vista uma maximização de resultados e maior indução de compostos químicos. A utilização de ferramentas analíticas de análise rápida e eficiente como a cromatografia líquida de alta eficiência ( HPLC ) associada a espectrometria de massas de alta resolução do ( HRMS ) propiciaram a obtenção do perfil cromatográfico dos micro - organismos estudados em cultura mista e simples, sendo possível observar a existência de compostos químicos produzidos apenas em co - c ultura, evidenciado o potencial existente da abordagem utilizada. / Abstract: The discovery of new bioactive molecules has been the big target to over the ye ars the chemistry of natural products, particularly micro - organisms has been shown to be an important source of discovery of new drugs. A wide range of compounds from microbial organisms are reported in the literature, however, recent research shows that t hese micro - organisms can undergo induction by certain external, chemical or physical agents, through defense mechanisms or even the existing m utualism on a particular medium, producing new chemical structures, which until then had silenced their biosynthet ic route due to methodologies patterns of isolated farming. Through use of mixed cultures of bacteria, this study provides knowledge of the relationship between Pseudoxanthomonas indica and Shigella sp ., Both from the rhizosphere of Senna spectabilis . For this, bacteria were grown in liquid Czapek broth cultivation being conducted the study of the growth of bacteria and production of metabolites against time, with a view to maximizing results and greater induction of chemical compounds. The use of analytics quickly and efficiently analyzes such as high - performance liquid chromatograp hy tools (HPLC) associated with high resolution mass spectrometry (HRMS) enabled the obtaining of the chromatographic profile of microorganisms studied in mixed and single cultur e, and you can to observe the existence of chemical compounds produced only in co - culture demonstrated the potential of the approach used. / Mestre

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Angela Regina Araujo / Banca: Flavia Talarico Saia / Resumo: Atualmente, avançadas tecnologias têm sido desenvolvidas para a exploração de fontes naturais pouco exploradas (exemplo: rizosfera e suas interações microbianas e organismos marinhos), visando novos agentes quimioterapêuticos. Neste trabalho, plântulas de Senna spectabilis foram cultivadas em hidroponia, com coleta da microflora da rizosfera realizada em três tempos diferentes de desenvolvimento do vegetal. No total, foi possível o isolamento de 51 bactérias e 129 fungos e, após identificação por filogenia (16S rRNA), encontrou-se, como principais gêneros: Shigella, Pseudomonas, Stenotrophomonas, Bacillus, Burkholderia, Pseudoxanthomonas, Arthrobacter, Achromobacter e Rhizobiu. Foram escolhidas três bactérias, codificadas como CSP-50a, CSP-52b e CSP-53b, para o estudo cinético bacteriano, visando à relação do crescimento com a produção metabólica. A análise mostrou que as bactérias atingiram a fase estacionária em 40 horas, período em que há produção de metabólitos secundários. Para a caracterização dos metabólitos, as três linhagens foram inoculadas em meio líquido Nutriente à 25 °C, sob agitação e, ao atingir a fase de interesse, foi realizada partição líquido-líquido com acetato de etila. Os extratos foram analisados por espectrômetria de massas visando a detecção e caracterização dos metabólitos majoritários. Foi possível detectar 08 compostos e identificar 02. Dentro desse o ácido metropheno e, uma uma série isomérica de amidas e formamidas foram evidenciadas. Adicionalmente, a presença da série foi também confirmada através de uso de uma metodologia de desreplicação preliminar utilizando RMN. / Abstract: Nowadays, advanced technologies are developed for the discovery of unexplored natural sources (e.g. rhizosphere microbial interaction and marine organisms), targeting new chemotherapeutic agents. In this work, Senna spectabilis's seedlings were cultivated in hydroponic environment, and its rhizosphere's microflora collected at three different stages of the plant's development. It was possible to isolate 51 bacterias and 129 fungi and, after identification by phylogenetic (16S rRNA), was determined the main genders, such as Shigella, Pseudomonas, Stenotrophomonas, Bacillus, Burkholderia, Pseudoxanthomonas, Arthrobacter, Achromobacter and Rhizobiu. We chose three of bacterias, coded as CSP-50a, CSP-52b and CSP- 53b, for kinetic's studies, aiming the comparison between the bacteria growth and the production of metabolites. This analysis showed that they reached the stationary phase at an average of 40 hours, when the production of secondary metabolites started. To characterize those metabolites, the three strains were grown on liquid nutrient medium at 25°C under agitation to achieve the phase of interest, followed by liquid-liquid partition with ethyl acetate. Analysis by mass spectrometry was performed aiming the detection and characterization of the major metabolites. It was possible to detect 08 compounds and identify 02. Metrophene acid, as well as an isomeric formamide series were detected. Additionally the formamides were also confirmed by the use of a preliminary methodology using NMR dereplication tool. / Mestre

Em razão do constante aumento populacional, o nível de poluição no planeta tem crescido principalmente nos meios aquáticos. Parte destes contaminantes apresentam regulamentação, porém uma fração destes, chamados de “emergentes”, são constantemente lançados no ambiente sem nenhum controle além de não apresentarem regulamentação. Os hormônios sexuais fazem parte destes contaminantes emergentes e oferecem grande risco as diferentes formas de vida devido ao alto potencial em causar disrupção endócrina. Neste trabalho desenvolveu-se a metodologia analítica com o intuito de determinar e quantificar cinco hormônios sexuais, amplamente consumidos na reposição hormonal e contraceptivos. A determinação dos hormônios sexuais estrona (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-etinilestradiol (EE2) e progesterona foi realizada através da cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas com derivatização prévia. A derivatização dos estrógenos E1, E2, E3 e EE2 foi realizada com MSTFA-Imidazol, já a progesterona foi determinada na forma não derivatizada. Parâmetros como tempo e temperatura de derivatização, tipos de derivatizante e energia do impacto eletrônico no espectrômetro de massas, foram devidamente otimizados. A pré-concentração foi realizada por extração em fase sólida (SPE), utilizando cartuchos Oasis HLB e a validação do método foi conduzida pela avaliação dos parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão, precisão intermediária, exatidão, limite de detecção e de quantificação. A amostragem de águas superficiais e efluente urbano foi realizada nos meses de agosto, setembro e outubro de 2012, nos Rios Gravataí e dos Sinos, no Arroio Dilúvio, e na estação piloto de tratamento de efluente urbano, pertencente ao Instituto de Pesquisas Hidráulicas (IPH/UFRGS). Os hormônios E1, E2 e E3 foram encontrados nas amostras em concentrações de 6,2 a 541,4 ng L-1, 29 a 46,2 ng L-1 e 37,5 a 716,8 ng L-1 respectivamente. No estudo preliminar de degradação do EE2 , foram avaliadas a fotólise direta em água purificada e indireta com utilização de íons nitrato nas concentrações 20 e 100 mg L-1, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0128 min-1, 0,0175 min-1 e 0,0336 min-1 respectivamente. A fotodegradação também foi avaliada em diferentes matrizes: água purificada, efluente urbano e água da torneira, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0451 min-1, 0,0227 min-1 e 0,0864 min-1 respectivamente. Os sistemas investigados seguem uma cinética de pseudo-primeira ordem. Este estudo serve de base para futuramente determinar possíveis produtos de transformação. / Due to the constant increase in population, the level of pollution on the planet has grown mainly in aquatic environments. Some of these contaminants present regulation but a fraction of these, called "emerging", besides being continuously released into the environment without any control, have no regulation. Sex hormones are part of these emerging contaminants and offer great risk the different ways of life due to their potential to cause endocrine disruption. In this work the development of analytical methodology was enhanced in order to determine and quantify five sex hormones, widely consumed in hormone replacement and contraceptives. The determination of compounds estrone (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-ethinylestradiol (EE2) and progesterone was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry with previous derivatization. Derivatization of estrogens E1, E2, E3 and EE2 was performed using MSTFA-Imidazole, while the progesterone was determined in the non-derivatized form. Parameters as temperature and time of derivatization, and types of derivatives , energy of electron impact on mass spectrometer, were properly optimized. The preconcentration was performed by solid phase extraction (SPE) using Oasis HLB cartridges. The method validation was carried out by evaluating the parameters: linearity, sensitivity, selectivity, precision, intermediate precision, accuracy, limit of detection and quantification. The sampling was performed in the months of August, September and October of 2012 in Gravataí and Sinos rivers, Dilúvio Stream and urban sewage in wastewater treatment pilot plant, which belongs to the Institute of Hydraulic Research (IPH / UFRGS ). The hormones E1, E2 and E3 were found in samples at concentrations from 6.2 to 541.4 ng L-1, from 29 to 46.2 ng L-1 and from 37.5 to 716.8 ng L-1 respectively. In the preliminary study of degradation of EE2, in purified water photolysis direct and indirect use of concentrations ions nitrate 20 and 100 mg L-1 were assessed, with transformation rate constants 0.0128 min-1, 0.0175 min-1 and 0.0336 min-1 respectively. The photodegradation in different matrices: purified water, urban wastewater and tap water also were assessed, with transformation rate constants 0.0451 min-1, 0.0227 min-1 and 0.0864 min-1 respectively. The systems investigated kinetics follow pseudo-first order. This study provides a basis to determine in the future possible transformation products.

A indústria de celulose do Brasil progrediu muito nas últimas décadas no que tange ao gerenciamento ambiental de seus resíduos. Entretanto, existem perspectivas para usos mais nobres destes resíduos, objetivando-se um gerenciamento ambiental ainda melhor e, eventualmente, economicamente vantajoso. Neste trabalho, a serragem, o resíduo do digestor e o lodo da ETE foram submetidos a condições de pirólise. O processo de pirólise foi desenvolvido para o resíduo do digestor, e após, foi aplicado para as demais biomassas, a fim de avaliar o potencial de todos os resíduos para a produção de bio-óleos. As cromatografias gasosas monodimensional (1D-GC/qMS) e bidimensional abrangente (GC×GC/TOFMS) foram utilizadas para análise qualitativa e semiquantitativa dos bio-óleos. A maior eficiência da GC×GC/TOFMS proporcionou um estudo detalhado da composição dos bio-óleos, indicando a presença de um maior número de compostos detectados e tentativamente identificados e de coeluições que ocorreram na 1D-GC/qMS, aprimorando a investigação de caracterização dos bio-óleos. Por outro lado, a 1D-GC implica em uma análise mais simples e de menor custo, que forneceu uma visão geral dos componentes majoritários dos bio-óleos. Produtos de importância industrial, como fenóis, foram identificados como componentes majoritários nos bio-óleos, da serragem e do resíduo do digestor, indicando seu uso potencial como fontes destas matérias-primas para a indústria, e a semelhança química entre eles abre perspectivas para a pirólise conjunta destas biomassas. / Brazilian pulp industry has greatly improved in the last decades regarding environmental residues management. However, there is still perspective for a better use of its residues, having in mind an improved environmental management and a potential economic advantage. This study, sawdust, digester residue and the wastewater treatment sludge underwent pyrolysis conditions. The pyrolysis process was developed for digester residue, and than, was applied to the others biomasses, in order to investigate the potential of resulting bio-oils for further applications. One-dimension (1D-GC/qMS) and comprehensive two-dimension gas chromatography (GC×GC/TOFMS) have been employed for qualitative and semi-quantitative analysis of these bio-oils. The higher chromatographic efficiency of GC×GC provided a detailed study of the composition of bio-oils, resulting in a higher number of compounds detected and tentatively identified, and it also unveiled co-elutions that happened in 1D-GC, providing a higher quality characterization of these matrices. On the other hand, 1D-GC resulted in a simpler and cheaper analysis that has provided a general view of the major components of the bio-oils. Products of industrial importance, such as phenols, were identified as major components in the bio-oils of sawdust and digester residue, indicating the potential use of these bio-oils as sources of raw material for the industry, and chemical similarity between them opens prospects for the combination of these biomasses pyrolysis.

A adição de soro de queijo ao leite é uma das fraudes mais frequentes, tendo em vista a similaridade entre as matrizes, não havendo necessidade de correções de pH, teor de proteínas dentre outros parâmetros físico-químicos. A metodologia analítica, aplicada pelos laboratórios do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), para a detecção deste tipo de fraude, está baseada na determinação do índice de caseinomacropeptídeo (CMP), composto que está presente no soro de queijo após o processamento. Entretanto, a presença de bactérias no leite, principalmente Pseudomonas fluorescens, por estocagem indevida, produz peptídeo semelhante, o pseudo-caseinomacropeptídeo (pseudo-CMP). O método atualmente utilizado pelo MAPA não é capaz de diferenciar a fraude por adição de soro de queijo da contaminação bacteriana. A partir desta consideração, neste trabalho foram desenvolvidos dois métodos analíticos capazes de diferenciar e quantificar o peptídeo marcador da adulteração (CMP) do peptídeo gerado pela contaminação bacteriana do leite (pseudo-CMP). Ambas as metodologias utilizaram cromatografia a liquido acoplada a espectrometria de massas em tandem e eletrospray no modo positivo. A preparação das amostras foi baseada na digestão enzimática (com tripsina e a pepsina) dos peptídeos. Os parâmetros de espectrometria de massas foram otimizados com peptídeos sintéticos correspondentes aos fragmentos gerados pela digestão enzimática. Na metodologia com tripsina foi realizada pré-concentração, purificação dos analitos e mudança de solvente por extração em fase sólida (EFS) utilizando o cartucho de estireno-divinilbenzeno como fase sólida. Para extração dos analitos foi desenvolvido um método utilizando banho de ultrassom. Este método foi validado e os coeficientes de variação dos ensaios de repetitividade e reprodutibilidade, respectivamente foram: de 4,6 a 6,8% e de 1,1 a 3,0%. A faixa de linearidade foi de 25 a 200 mg mL-1 com coeficientes de determinação maiores que 0,99. Na metodologia com pepsina não houve a necessidade de EFS e a avaliação de desempenho do método foi satisfatória. Os limites de detecção e quantificação obtidos foram de 1 e 5 mg mL-1, respectivamente com coeficientes de variação menores que 10 e 16% para os ensaios de repetitividade e reprodutibilidade. A análise de amostras reais mostrou que ambos os métodos são capazes de identificar e diferenciar adulteração de contaminação bacteriana do leite. / The addition of whey to milk is one of the most frequent frauds due to the similarity between matrices, with no need of pH corrections, protein content among and other physicochemical parameters. The analytical methodology used in the laboratories of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA), for detecting this fraud is based in the determination of the caseinomacropeptídeo (CMP) index, which is a compound present in the whey. However, the presence of bacteria in milk, especially Pseudomonas fluorescens, for improper storage, can produce a very similar peptide called pseudo-caseinomacropeptídeo (pseudo-CMP). The methodology currently used by MAPA is not able to differentiate fraud by addition of whey or by bacterial contamination. From this consideration, in this work two analytical methods have been proposed to differentiate and quantify the CMP from the pseudo-CMP. These methodologies uses liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry and electrospray ionization in positive mode. The sample preparation was based on the enzymatic digestion (with pepsin and trypsin) of the peptides. The parameters for mass spectrometry wee optimized with synthetic peptides corresponding to fragments generated by enzymatic digestion. When trypsin was used, the pre-concentration, purification of the analytes and change of solvent, has been done by solid phase extraction (SPE) with styrene-divinylbenzene cartridge. The extraction step was performed by ultrasound bath. The methodology was fully validated with coefficient of variation for repeatability and reproducibility, respectively ranging from 4.6 to 6.8% and 1.1 to 3.0%. The linear range was evaluated from 25 to 200 mg mL-1 with correlation coefficients greater than 0.99. In the methodology that uses pepsin, the SPE was not necessary to ensure the performance of the method. The limits of detection and quantification were 1 and 5 m g mL-1, respectively, with coefficients of variation lower than 10 and 16% for the repeatability and reproducibility. The analysis of real samples showed that both methods are capable to differentiate and identify adulteration from the bacterial contamination in milk.