O arroz é um importante produto agrícola brasileiro com destaque na produção para o Rio Grande do Sul. Neste trabalho estudou-se a composição química de óleos de farelo e farinha de arroz produzido no Rio Grande do Sul. Os óleos do farelo de arroz integral e integral parboilizado, e da farinha dos grãos do arroz integral parboilizado, parboilizado polido e branco polido foram obtidos por extração com Soxhlet. Foram pesquisados os tocóis (tocoferóis e tocotrienóis), ácidos graxos (livres e ligados) e -orizanol. Os óleos foram caracterizados através espectrometria de massa com ionização por eletronebulização (ESI-MS/MS), cromatografia líquida com detector de arranjo de diodo (LC-DAD), acoplamentos LC-DAD-ESI-MS, LC-ESI-MS/MS, além da cromatografia gasosa com detector de ionização em chama (GC-FID). O farelo de arroz apresentou maior teor de óleo que a farinha dos grãos, como também maiores concentrações dos ácidos graxos. No óleo do farelo de arroz integral foi encontrada a maior concentração dos constituintes da fração do -orizanol. A vitamina E foi detectada em pequena quantidade nos óleos analisados. A metodologia de análise quantitativa por LC-DAD, da fração do -orizanol foi realizada considerando os principais parâmetros (seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez) de acordo com guia de validação do International Conference on Harmonisation (ICH). / Rice is an important Brazilian agricultural product and Rio Grande do Sul is its major producer. Oil composition of rice bran and rice flour produced in Rio Grande do Sul was investigated in this work. The oils from integral and brown parboiled rice bran, flour from grain parboiled brown rice, parboiled polished and polished white were obtained by Soxhlet extraction. Tocopherols and tocotrienols, fatty acids (free and bound) and -oryzanol also were analyzed in this work. The oils were characterized by mass spectrometry with electrospray ionization (ESI-MS/MS), liquid chromatography with diode array detector (LC-DAD), tandem LC-DAD-ESI-MS, LC-ESI-MS/MS and gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID). Rice bran had a higher oil content than the flour of grains, as well as higher concentrations of fatty acids. In oil rice bran was found the highest concentration of the fraction of -oryzanol. Vitamin E was detected in small amounts in the oils analyzed. The methodology of quantitative analysis of -oryzanol fraction, by LC-DAD, was validated considering selectivity, linearity, precision, accuracy and robustness as main parameters, in accordance with International Conference on Harmonisation (ICH) validation guide.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-01T14:19:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao VLADIMIR COSTA SILVA.pdf: 1643501 bytes, checksum: 6e9988053bc43a87fda35ed86d6e7320 (MD5) / Rejected by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com), reason: Falta abstract. on 2010-01-09T00:26:45Z (GMT) / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2010-01-12T15:27:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao VLADIMIR COSTA SILVA.pdf: 1643501 bytes, checksum: 6e9988053bc43a87fda35ed86d6e7320 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-12T22:13:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao VLADIMIR COSTA SILVA.pdf: 1643501 bytes, checksum: 6e9988053bc43a87fda35ed86d6e7320 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-12T22:13:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao VLADIMIR COSTA SILVA.pdf: 1643501 bytes, checksum: 6e9988053bc43a87fda35ed86d6e7320 (MD5) Previous issue date: 2006-08-04 / Introdução: O estudo do conteúdo alimentar de vetores hematófagos é de reconhecida importância ecológica e epidemiológica. As metodologias atualmente empregadas nesse estudo não possibilitam a identificação de múltiplas fontes de sangue, caracterização de espécies filoganéticamente relacionadas bem como repastos tardios acima de 72 horas, no trato digestivo de insetos vetores. Objetivo: O presente trabalho tem por objetivo utilizar a espectrometria de massa para identificação de fontes de sangue em vetores de zoonoses tendo como modelo o flebótomo Lutzomyia longipalpis (Díptera – Psychodidae). Para identificação e diferenciação de espécies de animais vertebrados foi usada a hemoglobina que é a molécula mais abundante no trato digestivo dos insetos após alimentação. Material e Métodos: As amostras retiradas do trato digestivo de 250 insetos foram separadas por cromatografia líquida de alto desempenho e submetidas à identificação em espectrômetros de massa MALDI TOF/TOF e LC ESI-Q-TOF em escala de nanofluxo. Resultados: Dos cinco mil espectros gerados foram identificadas todas as espécies de animais vertebrados (homem, cão, galinha, porco, raposa e hamster) usados nos experimentos em laboratório incluindo múltiplos repastos. Foi possível também a identificação de espécies após 96 horas da primeira alimentação e o acompanhamento da digestão das hemoglobinas que revelaram diferentes perfis de clivagem para cada animal usado como fonte de sangue. As hemoglobinas identificadas em insetos capturados no campo foram as de cão doméstico, porco e galinha que correspondem a espécies presentes na residência onde foram feitas as coletas. Discussão: As técnicas mencionadas neste trabalho foram desenvolvidas para aplicação de forma inédita na identificação de reservatórios de zoonoses e demonstraram considerável sensibilidade e acurácia, podendo ser usadas para estudos de comportamento e preferências alimentares de vetores em áreas endêmicas e de risco, contribuindo assim para elaboração de medidas de controle mais eficazes no combate a doenças transmitidas por insetos hematófagos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: The study of the food content of hematophagous insects is useful for ecological and epidemiological. The methods currently employed in this study did not allow the identification of multiple sources of blood, characterization of species and related filoganéticamente repasts late over 72 hours, the gut of insect vectors. Objective: This study aims to use mass spectrometry to identify sources of blood in vectors of zoonoses and based on the sandfly Lutzomyia longipalpis (Diptera - Psychodidae). For identification and differentiation of species of vertebrate animals used was the hemoglobin molecule is the most abundant in the digestive tract of insects after feeding. Methods: Samples taken from the digestive tract of 250 insects were separated by liquid chromatography high performance and submitted for identification in mass spectrometers MALDI TOF / TOF and LC-ESI Q-TOF-scale Nanoflow. Results: of the five thousand spectra generated were all identified species of vertebrates (humans, dogs, chicken, pig, fox and hamster) used in laboratory experiments including multiple blood meals. They also allowed the identification of species after 96 hours of first feeding and monitoring the digestion of hemoglobin, which revealed different patterns of cleavage for each animal used as a source of blood. Hemoglobins identified in insects were captured in the field of the domestic dog, pig and chicken that correspond to species present in the residence where the collections were made. Discussion: The techniques mentioned in this paper were developed for use in novel ways to identify reservoirs of zoonoses and demonstrated considerable sensitivity and accuracy, and can be used for studies of behavior and feeding preferences of vectors in endemic areas and risk, thus contributing to development control measures more effective in combating diseases transmitted by blood-sucking insects.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2011. / Submitted by Matheus Denezine (matheusdenezine@yahoo.com.br) on 2011-06-20T14:45:33Z No. of bitstreams: 1 2011_KellianeAlmeidadeMedeiros.pdf: 2006761 bytes, checksum: 44c20b9f14190fe83440b45c88cac36e (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-06-20T19:11:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_KellianeAlmeidadeMedeiros.pdf: 2006761 bytes, checksum: 44c20b9f14190fe83440b45c88cac36e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-20T19:11:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_KellianeAlmeidadeMedeiros.pdf: 2006761 bytes, checksum: 44c20b9f14190fe83440b45c88cac36e (MD5) / As alternativas comuns para o tratamento do câncer têm sido a quimioterapia e a radioterapia apesar destas terapias destruírem células tumorais e não tumorais, sendo necessária a busca por novas alternativas. Entretanto, muitas novas moléculas também podem causar toxicidade em células não tumorais, sendo necessários seus encapsulamentos em sistemas de liberação controlada. Uma das estratégias para a liberação controlada é o uso de nanopartículas com composição e natureza variadas para confinar o composto. O presente estudo tem como objetivo identificar peptídeos com função antitumoral a partir de bibliotecas de sequências (EMBRAPA) de moléculas, encapsular os peptídeos em nanopartícula contendo em sua composição quitosana e desenvolver um sistema de liberação controlada em células tumorais. Foram selecionados dois peptídeos encontrados em anfíbios (H-ALWKDLLKNVGIAAGKAVLNKVTDMVNQ-OH e H-YIGWGYHDY-OH), um fragmento de uma proteína supressora de metástase (H-FINKAGKLQSQLRTTVVAAAAFLDAFQKVA-NH2) e um peptídeo de veneno de abelha, como controle positivo (H-GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH2). Os peptídeos foram sintetizados manualmente pelo método da fase sólida e purificados em RP-HPLC. Tiveram pureza e identidade molecular aferidas em espectrômetro de massa MALDI-TOF/TOF e foram avaliados quanto à eficácia e potência in vitro contra as linhagens de células tumorais B16F10, MCF7, HeLa e HSG e contra a linhagem não tumoral de fibroblasto por meio de ensaio de viabilidade celular (MTT). Foram escolhidos para os ensaios seguintes, um dos peptídeos de anfíbio e a linhagem HeLa, por este peptídeo ter sido mais ativo sobre esta linhagem. Verificou-se que o peptídeo age sobre a membrana da célula e a mitocondrial hiperpolarizando-a. Em seguida, o peptídeo foi encapsulado pelo método de geleificação iônica. Obteve-se eficiência de encapsulamento de 73 e 80% para nanopartículas de quitosana e peptídeo e as de quitosana, polietilenoglicol e peptídeo, respectivamente. As nanopartículas mostraram-se polidispersas, com tamanho médio de 100 a 200 nm, estabilidade coloidal excelente a moderada e de liberação controlada lenta. Estas nanopartículas foram pouco mais ativas sobre a linhagem tumoral HeLa do que o peptídeo livre, apesar de tendo o mesmo resultado sobre a linhagem não tumoral de fibroblasto. Assim, este sistema foi eficiente no encapsulamento do peptídeo podendo vir a ser entregue a alvo específico em estudos posteriores. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The common alternatives for the cancer treatment have been chemotherapy and radiation therapies despite these therapies destroy tumor and healthy cells, being necessary to search for new alternatives. However, many new molecules can also cause toxicity in non-tumor cells, requiring their encapsulation in controlled release systems. One strategy for the controlled release is the use of nanoparticles with varied composition and nature to confine the compound. The present study aims to identify peptides with antitumor function from sequence libraries (EMBRAPA) of molecules, encapsulate the peptides in nanoparticles containing chitosan in its composition and develop a controlled release system in tumor cells. We selected two peptides found in amphibians (H-ALWKDLLKNVGIAAGKAVLNKVTDMVNQ-OH and H-YIGWGYHDY-OH), a fragment of a metastasis suppressor protein (H-FINKAGKLQSQLRTTVVAAAAFLDAFQKVA-NH2) and a bee venom peptide, as positive control (H -GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH2). The peptides were synthesized manually by solid phase method and purified by RP-HPLC. Molecular identity and purity were measured in MALDI-TOF/TOF mass spectrometer and were evaluated for efficacy and potency in vitro against B16F10, MCF7, HeLa and HSG tumor cell lines, and against the healthy fibroblast cell line through cell viability test (MTT). For all other experiments, it was chosen a peptide of amphibian and the HeLa cell line due to the fact that this peptide was the more active against this cell line. It was found that the peptide acts on the cell membrane and promote mitochondrial hyperpolarization. Then, the peptide was encapsulated by the ionic gelation method. It was obtained efficiency of encapsulation of 73 and 80% for peptide and chitosan, and chitosan, PEG and peptide nanoparticles, respectively. The nanoparticles were polydisperse, with average size ranging from 100 to 200 nm, exhibited excellent colloidal stability, and moderately slow and controlled release. These nanoparticles were little bit more active on HeLa tumor cell line than free peptide, despite the fact that had the same effect on healthy fibroblast lineage cells. Thus, this system was efficient in encapsulating the peptide that may ultimately be delivered to specific target in future studies.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, Laboratório de Bioquímica e Química de Proteínas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-09T16:36:15Z No. of bitstreams: 1 2013_MaraOlimpiaMachado.pdf: 1881289 bytes, checksum: d18ed6a8947e91ea0320ab3f94f39319 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-09-10T12:41:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MaraOlimpiaMachado.pdf: 1881289 bytes, checksum: d18ed6a8947e91ea0320ab3f94f39319 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-10T12:41:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MaraOlimpiaMachado.pdf: 1881289 bytes, checksum: d18ed6a8947e91ea0320ab3f94f39319 (MD5) / A doença de chagas, também conhecida como tripanossomíase americana, encontra-se entre as Doenças Tropicais Negligenciadas com maiores taxas de prevalência no Brasil. A transmissão se da, principalmente, por duas vias: pelas fezes do vetor triatomíneo e por transfusão sanguínea. Seu agente etiológico é o Trypanosoma cruzi, um protozoário flagelado. Nos vertebrados, os tripomastigotas, forma infectante do T. cruzi, podem aderir e penetrar em quase qualquer célula hospedeira. Nesses processos estão interligadas as proteínas da superfície celular e as secretadas. Para caracterização das proteínas secretadas/excretadas pelo tripomastigota, utilizou-se a abordagem proteômica por nanoLC-MS/MS. Identificou-se as proteínas totais secretadas e realizou-se estudos preliminares de proteínas glicosiladas e fosforiladas. Os dados foram analisados por bioinformática. Encontrou-se um total de 535 proteínas distintas, destas 24 eram proteínas glicosiladas e 40 fosforiladas. Em sua grande maioria, baseado em algoritmos de predição por análise de sequencias, apresentam-se como secretadas, principalmente pela via não clássica (65%) e não pela via clássica (15%). As demais proteínas (20%) não foram preditas como secretadas, porém entre estas incluem-se proteínas já descritas anteriormente como liberadas no meio extracelular. Isso reflete provavelmente a limitação dos softwares bioinformáticos disponíveis e da peculiaridade do modo de liberar proteínas pelo parasito no meio externo. Este estudo apresenta uma abordagem adequada para identificar uma grande diversidade de proteínas secretadas no sobrenadante da cultura de T. cruzi e oferece novas perspectivas para o estudo de moléculas potencialmente envolvidas nas fases iniciais da infecção, já que tais proteínas são mediadores-chave da interação parasito-hospedeiro. / Chagas disease, also known as American trypanosomiasis, is found to be one of the Tropical Neglected Diseases with highest prevalence in Brazil. The transmission occurs, mainly, for two ways: the vector triatomine faecal matter and blood transfusions. Its etiological agent is Trypanosoma cruzi, a flagellate protozoan. On vertebrate, the trypomastigote, infected form of T. cruzi, can adhere and penetrate in almost any host cell. On these processes both the secreted and the cellular surface protein are nterlocking. To character both secreted/ excreted proteins by trypomastigote, was used a proteomics approach by nanoLC-MS/MS. It was identify the total secreted proteins and preliminary studies of glucose and phosphorylation was held. The data were analyzed by bioinformatics. It was found a total of 535 distinct proteins, among 24 were glycosylated and 40 were phosphorylated. The great part, based on sequential analysis of prediction algorithms, was presented as secreted, mainly by a non-classical way (65%), and not by a classic way (15%). The remaining proteins (20%) were not predicted as secreted, however among them there are proteins described previously released into the extracellular environment. This, probably, reveals the limitation of bioinformatic software available and the peculiarity of the mode of release proteins by the parasite in his medium. This study presents an adequate approach to identify a great diversity of proteins secreted in the T. cruzi culture supernatant and it also offers new perspective to the study of molecules potentially involved on the initial phases of the infection, since such proteins are key mediators of the interaction parasite-host.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-07T10:56:16Z No. of bitstreams: 1 2013_RaquelSilvadeNegreiros.pdf: 6245785 bytes, checksum: 5da9f4c315f41c976088353b8d4780e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-07T12:29:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RaquelSilvadeNegreiros.pdf: 6245785 bytes, checksum: 5da9f4c315f41c976088353b8d4780e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-07T12:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RaquelSilvadeNegreiros.pdf: 6245785 bytes, checksum: 5da9f4c315f41c976088353b8d4780e9 (MD5) / Diversos isolados e cepas de Trypanosoma cruzi são classificados em seis grupos genéticos ou discrete typing units (DTUs), TcI a TcVI. A cepa G estudada no presente trabalho pertence ao DTU TcI e foi isolada de um gambá da região Amazônica brasileira. Parasitos pertencentes a essa cepa apresentam um genoma não híbrido e menor que da cepa CL Brener. Além disso, tripomastigotas metacíclicas da cepa G são qualificados como pouco virulentas e, surpreendentemente, amastigotas axênicas são altamente infectivas. Dentro de um amplo projeto do nosso grupo de pesquisa que envolve o futuro sequenciamento do genoma da cepa G de T. cruzi, está inserida a análise proteômica de epimastigotas em larga escala que auxiliará na anotação dos genes. Para isso, foi realizada a análise por LC-MS/MS dos peptídeos gerados por digestão em gel do lisado proteico de epimastigotas. Foram feitas três buscas automatizadas em bancos de dados. Para a primeira busca, utilizando-se do banco de dados de Trypanosoma spp. e outros tripanossomatídeos, 1.460 proteínas foram identificadas. Para a segunda busca, no banco de dados apenas da cepa CL Brener, foram obtidas 953 identificações. Para ambas as buscas, foi utilizado o algoritmo do programa Sequest. Já com a utilização do algoritmo do PEAKS, foram detectadas 2.947 proteínas a partir do confronto dos espectros MS/MS com o banco de dados das cepas CL Brener e Sylvio X10/1. Considerando essa última abordagem, este é o proteoma mais abrangente realizado até hoje disponível independentemente do estágio de vida. Em todas as buscas, a via metabólica mais abundante em número de anotações foi metabolismo de purinas, o que está condizente com o alto requerimento energético de formas epimastigotas replicativas. A via glicólise também foi listada entre as dez vias metabólicas mais representativas em todas as buscas, provavelmente devido à presença de glicose no meio de cultivo e à preferência por essa hexose como fonte de carbono por epimastigotas. Todas as buscas resultaram na predominância de proteínas preditas a serem secretadas pela via não clássica e na identificação de diversas proteínas integrais de membrana potenciais, mostrando que a extração de proteínas por solubilização com SDS foi eficiente para o propósito de um proteoma abrangente. Particularmente, na busca 3, foram identificadas várias proteínas candidatas a alvos de drogas estudadas pelo nosso grupo, como leucil-aminopeptidase (LAP), oligopeptidase B (OPB), proliloligopeptidase (POP), metiltioadenosina fosforilase (MTAF) e catepsina B. Em relação às famílias multigênicas de T. cruzi, a terceira busca resultou na identificação de uma grande quantidade de membros das famílias de transsialidases (TS), mucin-associated surface proteins (MASP), mucinas, proteínas retrotransposon hot spot (RHS) e dispersed gene family 1 (DGF-1) e glicoproteínas de 63 kDa (gp63). Portanto, podemos concluir que a busca no banco de dados das cepas CL Brener e Sylvio X10/1 foi a mais satisfatória. Este proteoma representa um avanço significativo para o conhecimento do conjunto de proteínas expresso em T. cruzi e, também, um passo importante para a elucidação da sequência genômica da cepa G de T. cruzi. / Many isolates and strains of Trypanosoma cruzi are classified into six genetic groups or DTUs (discrete typing units), TcI to TcVI. G strain studied in the present work belongs to DTU TcI and was isolated from an opossum of Brazilian Amazon. G strain parasites have a non-hybrid and smaller genome than CL Brener strain. Moreover, G strain metacyclic trypomastigotes forms are characterized as low virulent and surprisingly axenic amastigote forms are highly infective. Within a broad project of our research group, which involves the subsequent genome sequencing of T. cruzi G strain, high-throughput proteomic analysis of epimastigotes is inserted to help gene annotation. For this, LC-MS/MS analysis of peptides generated by in-gel digestion of epimastigote protein lysate was accomplished. Three database automated searches were done. The search using the database of Trypanosoma spp. and other trypanosomatids allowed identification of 1.460 proteins. Secondly the search against T. cruzi CL Brener strain database resulted in 953 identifications. For both searches, Sequest algorithm was employed. With the use of PEAKS algorithm, 2.947 were detected from search against both CL Brener and Sylvio X10/1 strains database. Considering the last approach, this is the most abrangent proteome that has been revealed so far regardless the life stage of the parasite. In all searches, the most abundant metabolic pathway in number of annotations was purine metabolism, which is consistent with high energy requirement of replicative epimastigote forms. The glycolysis pathway also was related to the ten most representative metabolic pathways in all searches, probably due to the presence of glucose in culture medium and the preference for this hexose as carbon source by epimastigotes. All searches revealed the predominance of proteins secreted by non classical pathway and in the identification of many potential integral membrane proteins, showing that protein extraction was efficient for the purpose of an in-depth proteome. Notedly, with the search against both CL Brener and Sylvio X10/1 strains database, several drug target candidates studied by our group, as leucyl aminopeptidase (LAP), oligopeptidase B (OPB), prolyl oligopeptidase (POP), methylthioadenosine phosphorylase (MTAF) and cathepsin B were detected. In relation to multigenic families of T. cruzi, the third search resulted in the identification of a large amount of members of families of trans-sialidases (TS), mucin-associated surface proteins (MASP), mucins, retrotransposon hot spot (RHS) and dispersed gene family 1 (DGF- 1) proteins and 63 kDa glycoproteins (gp63). Therefore, we conclude that the search against both CL Brener and Sylvio X10/1 strains of T. cruzi was the most satisfactory. This proteome represent a significant advance in understanding the set of proteins expressed in T. cruzi and also an important step for elucidation of genome sequence of T. cruzi G strain.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Química, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-26T12:32:31Z No. of bitstreams: 1 2013_JessicadeAguiafrança.pdf: 2054879 bytes, checksum: 41746e33a38032a4742dbd76315b4e94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-27T13:46:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_JessicadeAguiafrança.pdf: 2054879 bytes, checksum: 41746e33a38032a4742dbd76315b4e94 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-27T13:46:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_JessicadeAguiafrança.pdf: 2054879 bytes, checksum: 41746e33a38032a4742dbd76315b4e94 (MD5) / A entomotoxicologia forense advém da união da toxicologia e das ciências forenses com a entomologia, área da biologia que estuda os insetos. Em casos avançados de putrefação do cadáver, amostras de tecidos humanos para análise toxicológica não estão disponíveis, e a utilização de larvas de insetos para acessar a exposição a substâncias tóxicas pode auxiliar na elucidação da causa mortis. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar um método analítico para determinação de onze substâncias em larvas de insetos necrófagos e analisar amostras entomológicas coletadas pelo Instituto Médico Legal do Distrito Federal. O método desenvolvido envolveu extração sólido-líquido com purificação à baixa temperatura (ESL-PBT) e análise por LC-MS/MS. Após otimização por testes univariados e um planejamento fatorial, o método foi validado seguindo protocolos internacionalmente aceitos. Foi observado efeito significativo da matriz na resposta de todos os analitos, havendo a necessidade do uso de curva de calibração em matriz fortificada pré-extração e regressão por mínimos quadrados ponderados. Os limites de quantificação (LOQ) variaram entre 1,0 e 40 ng g-1 e o coeficiente de variação nos ensaios de repetitividade, entre 2,83 e 16,9%. O método validado foi utilizado para análise de 27 amostras de larvas coletadas de cadáveres do IML-DF entre 2009 e 2012. Em 37% das amostras foi determinada pelo menos uma substância: cocaína (3 amostras), seu metabólito benzoilecgonina (4 amostras), diazepam (3 amostras), carbamazepina (1 amostra) e amitriptilina (1 amostra). Os resultados encontrados neste estudo representam as primeiras amostras entomotoxicológicas analisadas no Brasil. O método desenvolvido para este trabalho pode suprir a demanda da Polícia Civil do Distrito Federal de uma ferramenta complementar para elucidar casos de morte relacionados a intoxicações em situações onde as matrizes toxicológicas usuais não se encontram disponíveis. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Entomotoxicology emerges as the union of toxicology, forensic sciences and entomology, the area of biological sciences that studies the insects. When the body is in advanced putrefaction state, human tissues for toxicological analysis may not be availabe, and the use of insect larvae to access exposure to toxic substances may aid in the elucidation of the causa mortis. The aims of this study were to develop and validate an analytical method for the determination of eleven substances in necrophagous insect larvae, and to analyze entomological samples collected by the Medico-Legal Institute of the Federal District (IML-DF). The method involves a solid-liquid extraction with low temperature purification (SLE-LTP) and analysis by LC-MS/MS. Upon optimization by univariate analysis and a factorial design, the method was validated following internationally accepted protocols. Significant matrix effect was observed for all analytes, indicating the need to use calibration curves in pre-extraction spiked matrix and regression using weighted least squares. The limits of quantification (LOQ) ranged from 1,0 to 40 ng g-1, with coefficient of variation determined in the repeatability assays between 2.83 and 16.9%. The validated method was used to analyze 27 larvae samples collected from corpses by the IML-DF between 2009 and 2012. At least one substance was determined in 37% of the samples analyzed: cocaine (3 samples), its metabolite benzoylecgonine (4 samples), diazepam (3 samples), carbamazepine (1 sample) and amitriptyline (1 sample). The results obtained in this study represent the first entomotoxicological samples analyzed in Brazil. The method developed can be implemented in the Civil Police of the Federal District as a complementary tool to elucidate intoxication-related deaths where usual toxicological matrices are not available.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Sementes de Centrolobium tomentosum Guill. ex Benth., pertencente à famÃlia Fabaceae, SubfamÃlia Papilionoideae, Tribo Dalbergieae, possuem uma lectina ligante à manose/glicose que aglutina eritrÃcitos de coelho nativos ou tratados com enzimas proteolÃticas. A lectina foi purificada por cromatografia de afinidade em Sepharose-manose, sendo posteriormente nomeada CTL. SDS-PAGE demonstrou que CTL possui um perfil eletroforÃtico composto por uma banda majoritÃria de massa molecular aparente de aproximadamente 28 kDa e duas bandas menores de massas de aproximadamente 14 e 12 kDa, tanto na presenÃa como na ausÃncia do agente redutor. A anÃlise por espectrometria de massa indicou que CTL possui massa molecular de 27.257  2 Da. A lectina de Centrolobium tomentosum apresenta elevada estabilidade tÃrmica, nÃo depende de cÃtions divalentes e mantÃm sua atividade hemaglutinante em uma ampla faixa de pH. CTL estimulou o crescimento microbiano e a formaÃÃo de biofilme experimental de duas espÃcies bacterianas do gÃnero Streptococcus, S.mitis e S. sobrinus. AlÃm disso, tambÃm demonstrou ser tÃxica para o microscrustÃceo Artemia sp. Esses resultados reforÃam a ideia da utilizaÃÃo de lectinas vegetais como ferramentas biotecnolÃgicas em estudos sobre os mecanismos de interaÃÃo proteÃna-carboidrato.

O monitoramento dos resíduos de avermectinas no leite produzido no Brasil começou em 1998, como parte do Programa Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) em alimentos, aplicado pelo Ministério da Agricultura. Desde então, as avermectinas têm sido analisadas por cromatografia líquida com detecção de fluorescência após extração do leite com acetonitrila, purificação em cartuchos de extração em fase sólida e derivação com 1-metilimidazol/anidrido acético. No presente trabalho, um novo método de extração das avermectinas e milbemicinas do leite foi proposto, baseado na partição líquido-líquido com acetonitrila e purificação em baixa temperatura (aprox. - 20 °C). Nesse método, são formadas duas fases, sendo uma fase congelada contendo as impurezas e outra fase líquida (solvente) contendo os analitos. A técnica utilizada na quantificação desses compostos permaneceu sendo a cromatografia líquida com detecção por fluorescência. Entretanto, a derivação desses resíduos foi realizada com 1- metilimidazol/anidrido trifluoroacético. Com esse procedimento foram obtidos derivados mais estáveis, com menor tempo de reação (20 minutos ao invés de 60 minutos) e em menores temperaturas (64 °C ao invés de 100 °C). Para a confirmação da presença dos resíduos de avermectinas e milbemicinas no leite, também foi desenvolvido um método analítico por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas. Os dois métodos analíticos foram validados segundo alguns parâmetros da Comissão das Comunidades Européias (EC 2002/657) e foram considerados adequados para aplicação no PNCR para o monitoramento das avermectinas e milbemicinas em amostras de leite. / Avermectins residues started to be monitored in Brazilian milk in 1998 as part of the National Residue Control Plan (NRCP) applied by the Ministry of Agriculture. Since then, the avermectins have been extracted from milk samples with acetonitrile, purified with solid-phase extraction, derivatized with 1- methylimidazole/acetic anhydride and further analysed by Liquid Chromatography with fluorescence detection. In the present work a new method for avermectins and milbemycin extraction is proposed, based on liquid-liquid partition with low temperature cleanup. In this method two phases were obtained. The phase that contains the organic solvent and the analytes remains liquid, whereas the other, phase composed mainly of water, protein (for milk) and the fatty matrix, freezes. For quantitative analysis, liquid chromatography with fluorescence detection is still used. However, the derivatization is carried out with 1-methylimidazole/ trifluoroacetic anhydride. With this procedure, more stable derivatives were obtained in a shorter time (20 min instead of 60 min), and with lower temperatures (64 °C instead of 100 °C). For confirmatory data at concentrations above the permitted limits, a Liquid Chromatography tandem mass spectrometry was also developed. Both the methods were validated for some parameters of European Commission Decision EC 2002/657 and were considered able to apply in the Brazilian NRCP to monitor avermectins and milbemycin in whole milk samples.

A pirólise (aquecimento em atmosfera inerte) é uma das formas de aproveitamento dos resíduos da agroindústria, gerando o bio-óleo (produto condensável), gases e resíduo sólido (sílico-carbonoso) com utilidades diversas, tanto para fins energéticos como outras utilizações industriais. Neste trabalho estudou-se a pirólise rápida da casca de arroz usando um forno tubular e um reator de leito fixo. Após otimização do processo de pirólise (7 g de casca de arroz moída, pirolisada a 700ºC com uma taxa de aquecimento de 100ºC.m-1 e um fluxo de nitrogênio de 1 mL.min-1), foram obtidos e analisados o bioóleo, os gases e o resíduo sólido. Foi determinada a composição química dos gases e do bioóleo, usando cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. Para a amostragem dos gases fez-se uso da microextração em fase sólida com duas fibras de diferente polaridade (polidimetilsiloxano e poliacrilato). Os bioóleos mostraram-se ricos em compostos oxigenados (fenóis, cetonas e ácidos carboxílicos). O mesmo foi encontrado para os gases, tendo-se nestes últimos, a presença majoritária dos compostos mais voláteis. O resíduo sólido apresentou alto teor de sílica, indicando a sua possível utilização como adsorvente em processos industriais ou purificação de água. / The pyrolysis (heating in an inert atmosphere) is one of the ways of using residues of the agro industry, by the generation the bio-oil (condensed product), gases and solid residue (siliceous-carbonaceous material) with many utilities as energy production or as other industrial uses. In this work it was studied the fast pyrolysis of the rice husk using a tubular oven and a fixed bed reactor. After optimization of the pyrolysis process (7 g of milled rice husk, pyrolysis at 700ºC with a heating rate at 100ºC. min-1 and 1 mL.min-1 of nitrogen), the bio-oil, the gases and the solid residue were analyzed. The chemical composition of the gases and of the bio-oil was achieved by gas chromatography coupled to the mass spectrometry. For sampling of the gases it was used of the solid phase microextraction with two fibers of different polarity (polydimethyilsiloxane and polyacrylate). The bio-oils showed high amounts of oxygenated compounds (phenols, cetones and carboxylic acids). The same was found for the gases, with a predominance of the most volatile compounds in this last one. The solid residue presented high silica content, indicating its possible use as adsorbent in industrial processes or in water purification.

O arroz é um importante produto agrícola brasileiro com destaque na produção para o Rio Grande do Sul. Neste trabalho estudou-se a composição química de óleos de farelo e farinha de arroz produzido no Rio Grande do Sul. Os óleos do farelo de arroz integral e integral parboilizado, e da farinha dos grãos do arroz integral parboilizado, parboilizado polido e branco polido foram obtidos por extração com Soxhlet. Foram pesquisados os tocóis (tocoferóis e tocotrienóis), ácidos graxos (livres e ligados) e -orizanol. Os óleos foram caracterizados através espectrometria de massa com ionização por eletronebulização (ESI-MS/MS), cromatografia líquida com detector de arranjo de diodo (LC-DAD), acoplamentos LC-DAD-ESI-MS, LC-ESI-MS/MS, além da cromatografia gasosa com detector de ionização em chama (GC-FID). O farelo de arroz apresentou maior teor de óleo que a farinha dos grãos, como também maiores concentrações dos ácidos graxos. No óleo do farelo de arroz integral foi encontrada a maior concentração dos constituintes da fração do -orizanol. A vitamina E foi detectada em pequena quantidade nos óleos analisados. A metodologia de análise quantitativa por LC-DAD, da fração do -orizanol foi realizada considerando os principais parâmetros (seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez) de acordo com guia de validação do International Conference on Harmonisation (ICH). / Rice is an important Brazilian agricultural product and Rio Grande do Sul is its major producer. Oil composition of rice bran and rice flour produced in Rio Grande do Sul was investigated in this work. The oils from integral and brown parboiled rice bran, flour from grain parboiled brown rice, parboiled polished and polished white were obtained by Soxhlet extraction. Tocopherols and tocotrienols, fatty acids (free and bound) and -oryzanol also were analyzed in this work. The oils were characterized by mass spectrometry with electrospray ionization (ESI-MS/MS), liquid chromatography with diode array detector (LC-DAD), tandem LC-DAD-ESI-MS, LC-ESI-MS/MS and gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID). Rice bran had a higher oil content than the flour of grains, as well as higher concentrations of fatty acids. In oil rice bran was found the highest concentration of the fraction of -oryzanol. Vitamin E was detected in small amounts in the oils analyzed. The methodology of quantitative analysis of -oryzanol fraction, by LC-DAD, was validated considering selectivity, linearity, precision, accuracy and robustness as main parameters, in accordance with International Conference on Harmonisation (ICH) validation guide.