It is known that antioxidants when added to extenders can contribute to preserving the integrity of sperm cells. How noni is considered a fruit with antioxidant potential, aimed to evaluate the feasibility of ram semen subjected to dilution in medium containing different amounts of aqueous extract of noni (Morinda citrifolia L). Initially noni cropped and then elaborated the aqueous extract to be added to the medium thinner. The fruit was evaluated for its physical and chemical characteristics as presenting results ph = 4.12; Titratable acidity = 8.78%; Soluble solids = 8.18 ° Brix and Vitamin C = 309.43 mg.100-1 content. The aqueous extract produced was evaluated for quantification of total phenolic compounds, antioxidant activity and ability to inhibit lipid peroxidation, with amounts of total phenols of 47.96 ± 1.95 mg Eq. Gálico.100g acid-1 extract. Concentration of 3.0 μg.mL-1 time 30 minutes had antioxidant activity 89.35 ± 2.32% It was observed that only 1.2 ± 0.15 ug / ml of sample is sufficient to reduce the DPPH by 50%. It also exhibited excellent redox ability to inhibit lipid peroxidation in a concentration of 10 μg.mL-1, similar to the synthetic Trolox positive control (p <0.05) at 72 The Extract concentrations and 120μg.mL-1 was able to inhibit lipid peroxidation in the thinner half in 21.75% and 51.32%. Treatments for ram semen freezing differ in the use of thinner medium containing different concentrations of the extract: T1- control without addition; T2 24 mg / mL; T3-72 / mL; T4 - 120 mg / mL. A total of 16 ejaculates were collected, diluted according to the treatments and frozen. After thawing the semen was subjected to heat resistance test (TTR) and evaluated for the subjective motility, sperm vigor, health test hypoosmotic swelling test plasma membrane, supravital test, and the combination of SYBR Green and fluorochrome propidium iodide (PI ), and the status of sperm capacitation and acrosome reaction by clortetracliclina (CTC). The results found for TTR showed T2 with better motility 22.6 ± 9.7; than the other treatments with the addition of extract, while the T1 and T2 treatments showed better effect than T4; in hiposmotic test T3 was superior to T2 after two hours of incubation; T4 showed better preservation of the plasma membrane and the sperm capacitation treatments differ P <0.05 only for trained with sperm acrosome reacted. Also the kinetic analysis was performed using a computerized system at the time of thawing and the percentages for progressive motility in T1, T2, T3 and T4 were 26.9 ± 9.7; 20.1 ± 12.6; 20.7 ± 10.8 and 15.5 ± 9.2 respectively, for the curvilinear velocity parameters (VCL) and the average speed path (VAP) T1 and T2 shown to be superior to T3 and T4, and amplitude lateral displacement of the head (ALH) T4 showed inferiority to the other tested treatments. No difference was observed for straight-line speed (VSL), straightness (STR) and linearity (LIN). The treatments with the addition of aqueous extract of noni showed higher viability than control. / Sabe-se que as substâncias antioxidantes quando adicionadas aos meios diluidores podem contribuir para a preservação da integridade de células espermáticas. Como o noni é considerado um fruto com potencial antioxidante, objetivou-se avaliar a viabilidade de sêmen ovino submetido a diluição em meio contendo diferentes quantidades de extrato aquoso de noni (Morinda citrifolia L). Inicialmente o noni foi colhido e em seguida elaborou-se o extrato aquoso a ser adicionado ao meio diluidor. O fruto foi avaliado quanto as suas características físico-químicas apresentando como resultados ph=4,12; Acidez titulável = 8,78%; Sólidos solúveis = 8,18°Brix e teor de Vitamina C = 309,43 mg.100-1. O extrato aquoso produzido foi avaliado quanto a quantificação de compostos fenólicos totais, atividade antioxidante e capacidade de inibição da peroxidação lipídica, apresentando quantidades de fenóis totais de 47,96 ± 1,95 mg Eq. Ácido Gálico.100g-1 do extrato. Na concentração de 3,0 μg.mL-1 no tempo de 30 minutos apresentou uma atividade antioxidante de 89,35 ± 2,32 %, sendo observado que apenas 1,2± 0,15 μg/mL da amostra é suficiente para reduzir o radical 2,2-difenil-1- picril-hidrazila (DPPH) em 50%. Também apresentou uma excelente capacidade redox em inibir a lipoperoxidação na concentração de 10 μg.mL-1, sendo semelhante ao controle positivo sintético Trolox (p<0,05) O extrato nas concentrações de 72 e 120μg.mL-1 foi capaz de inibir a lipoperoxidação no meio diluídor em 21,75% e 51,32%. Os tratamentos para congelação de sêmen ovino diferiram quanto a utilização de meio diluidor contendo diferentes concentrações do extrato: T1- controle, sem adição; T2- 24 μg/mL; T3-72 μg/mL; T4 - 120 μg/mL. Um total de 16 ejaculados foram coletados, diluídos de acordo com os tratamentos e congelados. Após a descongelação o sêmen foi submetido ao teste de termorresistência (TTR) e avaliado quanto a motilidade subjetiva, vigor espermático, teste de integridade de membrana plasmática pelo teste hiposmótico, teste supravital, e pela combinação de fluorocromos SYBR Green e iodeto de propídio (IP), e o status de capacitação espermática e reação acrossomal pela clortetracliclina (CTC). O resultado encontrado para o TTR mostrou o T2 com melhor motilidade 22,6 ± 9,7; que os demais tratamentos com adição de extrato, enquanto que os tratamentos T1e T2 apresentaram melhor vigor que o T4; no teste hiposmótico o T3 mostrou-se superior ao T2 após duas horas de incubação; o T4 mostrou melhor preservação da membrana plasmática e quanto a capacitação espermática os tratamentos diferiram P<0,05 apenas para espermatozoides capacitados com acrossomo reagido. Também foi realizada a análise de cinética através de sistema computadorizado no momento da descongelação e os percentuais para motilidade progressiva nos tratamentos T1, T2, T3 e T4 foram 26,9±9,7; 20,1±12,6; 20,7±10,8 e 15,5±9,2 respectivamente, para os parâmetros velocidade curvilinear (VCL) e velocidade do percurso médio (VAP) os tratamentos T1 e T2 mostraram-se superior ao T3 e T4, e para amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) o T4 apresentou inferioridade aos outros tratamentos testados. Não se observou diferença para velocidade em linha reta (VSL), retilinearidade (STR) e linearidade (LIN). Os tratamentos com adição de extrato aquoso de noni apresentaram maior viabilidade que o tratamento controle.

Diversos estudos indicam que touros europeus (Bos taurus) apresentam uma maior susceptibilidade ao estresse térmico com um consequentemente aumento do estresse oxidativo. Este, por sua vez, leva a uma diminuição na qualidade espermática. O espermatozoide possui, fisiologicamente, uma grande quantidade de ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) em sua membrana. As ligações duplas entre carbonos desses PUFAs confere a membrana plasmática uma maior fluidez, necessária aos processos fisiológicos do espermatozoide como motilidade e fertilização. No entanto essas ligações são mais facilmente oxidadas e, portanto, mais susceptíveis a peroxidação lipídica. Sendo assim, a suplementação com PUFAs promoveria uma melhoria na qualidade espermática, porém, tornaria o espermatozoide ainda mais susceptível à peroxidação lipídica. A vitamina E é um antioxidante chave na prevenção do estresse oxidativo através da interceptação do radical hidroxila, protegendo os PUFAs da membrana espermática contra a peroxidação lipídica. Portanto, uma alternativa para melhorar a qualidade espermática de touros europeus submetidos ao estresse térmico, seria a suplementação com PUFAs associada a um tratamento com vitamina E para prevenir um possível efeito deletério oxidativo desses ácidos graxos. Estudos sugerem uma importante relação entre os testes convencionais de avaliação de sêmen e fertilidade. No entanto, a limitação destes testes também tem sido reconhecida, principalmente em casos de infertilidade idiopática. Estudos demonstram que os testes funcionais de avaliação do sêmen, podem ser uma alternativa importante para a avaliação da capacidade fecundante de uma determinada amostra seminal. A interação entre espermatozóide e zona pelúcida ocorre através da ligação de receptores acrossomais às proteínas ZP3 e ZP2 do oócito. A membrana perivitelínica de ovos de galinha possui uma homologia com essas proteínas, permitindo sua ligação com espermatozóides de diversas espécies. Sendo assim, o teste de ligação espermática a essa membrana parece ser bastante eficiente para avaliar a capacidade fecundante do sêmen. No presente estudo, 16 touros Bos taurus foram submetidos à insulação testicular durante 4 dias e submetidos a um arranjo fatorial 2x2, sendo os fatores: dieta rica em PUFAs (Megalac&reg;, 4 Kg ao dia) e tratamento com Vitamina E (Monovin E&reg;, 3000 UI a cada 13 dias) durante 60 dias. As amostras seminais criopreservadas/descongeladas foram submetidas à avaliação da análise computadorizada da motilidade (CASA; Hamilton Thorne, Ivos 12.3, USA), integridade de membrana (Eosina Nigrosina), integridade acrossomal (Fast Green Rosa Bengala), atividade mitocondrial (33 diaminobenzidina), susceptibilidade ao estresse oxidativo (Substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico - TBARS), integridade de DNA (SCSA) e o teste de ligação de espermatozóides à membrana vitelínica de ovos de galinha, que foi previamente padronizado. O tratamento com vitamina E apresentou efeitos benéficos para algumas características espermáticas, sendo o contrário observado pelo tratamento com PUFAS, quando ambos foram analisados isoladamente. No entanto, a associação entre estes tratamentos não foi eficiente para melhorar a qualidade espermática assim como a capacidade fecundante avaliada através do teste de ligação espermática em membrana perivitelínica de ovos de galinha. / Several studies suggest a high susceptibility of European bulls (Bos taurus) to the heat stress, which will lead to an increase on oxidative stress and consequent impairment on sperm viability. Sperm membranes are rich in poly-unsaturated fatty acids (PUFAs). The carbon-carbon double bounds (insaturations) that characterize these PUFAs confer the necessary fluidity to the sperm membrane, essential to motility and fecundation capacity. However, these insaturations are more unstable and, therefore, more susceptible to the lipid peroxidation (i.e., attack of reactive oxygen species to the lipids). Hence, PUFA supplementation would improve certain sperm characteristics but increase the already high susceptibility to the oxidative stress. Vitamin E is a key antioxidante on oxidative stress prevention by intercepting hydroxyl radical and protecting sperm membrane PUFAS against lipid peroxidation. Therefore, an alternative to improve sperm quality in heat stressed european bulls would be a PUFA supplementation associated to a Vitamin E therapy in order to avoid a possible deleterious oxidative effects of these fatty acids. Estudies suggest an important relationship between conventional tests for sperm evaluation and fertility. However, limitations have been also verified, especially in cases of idiopathic infertility. Thus, tests to evaluate sperm functionality may be an interesting alternative to assess fecundation capacity of semen samples. The binding of sperm to the zona pellucida occurs initially by the interaction between acrosomal receptors and oocyte proteins ZP3 and ZP2. The perivitelline membrane of chicken eggs present homologies to zona pellucida proteins, which allows sperm from several species to bind to this membrane. Thus, the sperm binding test to the perivitelline membrane may be an efficient method to asses the fecundation capacity in semen of bulls. In the present study, 16 Bos taurus bulls were submitted to testicular insulation for 4 day. Animals were then submitted to a 2x2 factorial design, with the factor represented by a PUFA oral supplementation (Megalac&reg;, 4 Kg for day) and the treatment with Vitamin E (Monovin E&reg;, 3000 UI, each 13 days) for 60 days. Samples were cryopreserved/thawed and analyzed for motility variables by the computer assisted sperm analysis (CASA; Hamilton Thorne, Ivos 12.3, USA), membrane integrity (Eosin / Nigrosin), acrosome integrity (Fast Green / Bengal Rose), mitochondrial activity (33 diaminobenzidine), susceptibility to the oxidative stress (tiobarbituric acid reactive substances - TBARS), DNA integrity (SCSA) and the sperm binding test to the chicken egg perivitelline membrane, which was previously validated. Results demonstrated a beneficial effect of Vitamin E on some sperm characteristics, with the inverse effect observed for PUFA when both treatments were considered individually. However, the association between both treatments were not efficient to improve sperm quality as well as the fecundation capacity as evaluated by the sperm binding test to the chicken perivitelline membrane.

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giovano Neumann.pdf: 1483055 bytes, checksum: 73310de09daeb1b45d1ac1eda6a64ce0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This dissertation is based on the development of two separate scientific papers. (1) First article it is a scientometric analysis: In 2007 was released in the scientific means by Wilson-Leedy and Ingermann, the first article using the CASA free software in sperm mobility analysis for fish, for this study, from of scientometric techniques, the contribution has been assessed and the impact that the article caused the scientific community. It also evaluated the frequency in the number of publications using andrologic analysis in fish, from 2007 to 2014 in four magazines that publish articles related to this topic. Were evaluated under articles made soundness analysis in fish using any existing CASA system, the variables used and ways to interpret the results to determine the sperm viability and correlate the sperm motion parameters with the potential fertilization. For scientometry CASA launching the contribution in free software took place in the google scholar search to get all the work that had quoted the article. For scientometry of items with fish using CASA, was conducted using the search index of ScienceDirect. And to assess the variables and the interpretations made by the authors, harvest characteristics of the materials and methods and results in the articles. It was found 123 quotes Wilson-Leedy article and Ingermann these, 94 are articles, of which 66 were performed with fish, and 35 of these conducted their research using CASA in free software, and there was an increase of 85% in citing publications the author reference. In the search for articles that use in fish soundness analysis, an increase of 59.4% from 2007 to 2014. Of the publications articles using any home system for the assessment of sperm motility in fish, 75.76% of the two work assesses or more times the spermatic movement, 51.52% use at least four of the characteristics generated by CASA, about ¼ of the work validated the CASA results with fertilization and hatching of eggs and used statistical models to group correlated variables CASA and explanations them, less than 10% of articles explores statistical modeling in sperm kinetics and to explain the characteristics generated by CASA on sperm fertility. The article by Wilson-Leedy and Ingermann contributed to the advancement of research with fish sperm, and sperm was used in the evaluation of other animals and other cells also concluded that little is known of the relationship of some sperm variables generated by CASA with fertility sperm in fish. And the researchers do not use in full the resources of the CASA system. (2) According to an article this is an experiment of artificial reproduction: The objective of this study was to evaluate the interactive effects of the relationship or independent mobile sperm: oocyte and sperm speed on artificial reproduction procedures with the use of semen catfish (Rhamdia quelen) cryopreserved. Through the Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) were evaluated in six replicates motility and sperm velocity of cryopreserved semen from eight seconds of its activation and to each according to the end of the spermatic movement. For the fertilization test an experimental design was used in a factorial (6x3x3) consists of six mobile sperm relations: oocyte (70,000, 90,000, 110,000, 130,000, 150,000 and 170,000), three sperm speeds (60, 40 and 20&#956;m.s-1) and three experimental replicates or blocks (pools of oocytes from three groups of female). Activation curves of sperm (kinetic) have been prepared with the help of non-linear statistical model. The effects were evaluated on the fertilization, hatching and normal larvae. In evaluating the variables, the response surface analysis showed no interaction effect (p>0.05) between the relationship moving sperm: oocyte and sperm speed, on the fertilization rates, hatching and normal larvae. Only linear effect was found (p<0.05) of sperm speed under the fertilization rates and hatching eggs. According to the results, it is concluded that there is no difference between the use of 70,000 up to 170,000 mobile sperm for each oocyte on the reproductive success in terms of fertilization rate, hatching and larval normality of catfish (Rhamdia quelen) and that the value of the sperm velocity is decisive on the reproductive success of sperm catfish (Rhamdia quelen) decreasing the fertilization and hatching rates as decreases sperm speed. / Esta dissertação baseia-se na elaboração de dois artigos científicos distintos. (1) Primeiro artigo trata-se de uma análise cientométrica: Em 2007 foi lançado no meio cientifico por Wilson-Leedy e Ingermann, o primeiro artigo utilizando o CASA em software livre em análise de mobilidade espermática para peixes, para este estudo, a partir de técnicas cientométricas, foi avaliado a contribuição e o impacto que o artigo provocou na comunidade cientifica. Também foi avaliada a frequência no número de publicações utilizando analises andrológicas em peixes, desde 2007 à 2014 em quatro revistas que publicam artigos referentes a este tema. Foram avaliados sob artigos que realizaram analise andrológica em peixes utilizando algum sistema CASA existente, as variáveis utilizadas e as formas de interpretação dos resultados para determinar a viabilidade espermática e correlacionar os parâmetros de movimento espermático com o potencial de fertilização. Para a cientometria da contribuição do lançamento do CASA em software livre foi realizada busca no google acadêmico para levantar todos os trabalhos que haviam citado o artigo. Para a cientometria dos artigos com peixes utilizando o CASA, foi realizado busca utilizando o indexador da ScienceDirect. E para avaliar as variáveis e as interpretações realizadas pelos autores, colhemos suas características dos materiais e métodos e resultados nos artigos. Encontrou-se 123 citações do artigo de Wilson-Leedy e Ingermann destes, 94 são artigos, dos quais 66 foram realizados com peixes e, 35 destes realizaram suas pesquisas utilizando o CASA em software livre, e ocorreu um aumento de 85% nas publicações citando o autor referência. Na busca de artigos que utilizam analise andrológica em peixes, ocorreu um aumento de 59,4% das publicações de 2007 à 2014. Dos artigos que utilizam qualquer sistema CASA para a avaliação da mobilidade espermática em peixes, 75,76% dos trabalhos avalia dois ou mais tempos do movimento espermático, 51,52% utiliza pelo menos quatro das características geradas pelo CASA, aproximadamente ¼ dos trabalhos validou os resultados do CASA com fertilização ou eclosão dos ovos e usou modelos estatísticos para agrupar as variáveis correlacionadas do CASA e explica-las, menos de 10% dos artigos explora modelagem estatística na cinética espermática e para explicar as características gerados pelo CASA sobre a fertilidade espermática. O artigo de Wilson-Leedy e Ingermann contribuiu para o avanço das pesquisas com espermatozoides de peixes, e foi utilizado na avaliação espermática de outros animais e outras células, também concluímos que pouco se sabe da relação de algumas variáveis espermáticas geradas pelo CASA com a fertilidade espermática em peixes. E que os pesquisadores não utilizam em sua totalidade os recursos do sistema CASA. (2) Segundo artigo trata-se de um experimento de reprodução artificial: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos interativos ou independentes da relação espermatozoides móveis:ovócito e da velocidade espermática em procedimentos de reprodução artificial com o uso do sêmen do jundiá (Rhamdia quelen) criopreservado. Através do Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) foram avaliadas em seis réplicas a motilidade e a velocidade espermática do sêmen criopreservado a partir de oito segundos da sua ativação e a cada um segundo até o termino do movimento espermático. Para o ensaio de fertilização foi aplicado um delineamento experimental em esquema fatorial (6 x 3) composto de seis relações espermatozoides móveis:ovócito (70.000, 90.000, 110.000, 130.000, 150.000 e 170.000), três velocidades espermáticas (60, 40 e 20µm.s-1) e três réplicas ou blocos experimentais (pools de ovócitos provenientes de três grupos de fêmeas). As curvas de ativação dos espermatozoides (cinéticas) foram elaboradas com auxílio de modelo estatístico não linear. Os efeitos foram avaliados sobre as taxas de fertilização, eclosão e larvas normais. Na avaliação das variáveis, a análise de superfície de resposta não mostrou efeito interativo (p>0,05) entre a relação espermatozoides móveis:ovócito e as velocidades espermáticas, sobre as taxas de fertilização, de eclosão e de larvas normais. Somente foi encontrado efeito linear (p<0,05) da velocidade espermática sob as taxas de fertilização e de eclosão dos ovos. De acordo com os resultados, conclui-se que não há diferença alguma entre uso de 70.000 até 170.000 espermatozoides móveis para cada ovócito sobre o sucesso reprodutivo em termos de taxa de fertilização, eclosão dos ovos e normalidade larval do jundiá (Rhamdia quelen) e, que o valor da velocidade espermática é determinante sobre o sucesso reprodutivo dos espermatozoides de jundiá (Rhamdia quelen) diminuindo as taxas de fertilização e eclosão conforme diminui a velocidade espermática.

Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença crônica autoimune com predomínio no sexo feminino e com evidente impacto em sua fertilidade. Por sua vez, em homens com LES foi observado alterações nos parâmetros seminais e nos níveis de hormônios sexuais. A análise seminal somente apresenta baixa correlação com potencial de fertilidade dos pacientes. Recentemente, a análise da integridade do DNA do espermatozoide tem mostrado melhor capacidade prognóstica para predizer a fertilidade do que os parâmetros seminais convencionais. Objetivo: Avaliar a fragmentação do DNA espermático de homens com LES sem azoospermia. Métodos: Vinte e oito pacientes homens, consecutivos, com LES (pelos critérios da ACR) e 34 controles foram avaliados conforme dados demográficos e de exposição ambiental, avaliação urológica, perfil hormonal e avaliação seminal (incluindo a fragmentação do DNA espermático). Aspectos clínicos, escores de atividade e dano cumulativo da doença e aspectos do tratamento também foram analisados. Resultados: Mediana da idade [33(20-52) vs. 36.5(25-54) anos, p=0.329] e frequência de varicocele (25% vs. 32%, p=0.183) foram similares entre o grupo de pacientes e o grupo controle. Na análise da fragmentação do DNA do espermatozoide observou-se quantidades significativamente mais altas de células classe III [44(9-88) vs. 16.5(0-80)%,p=0.001] e células classe IV [10.5(3-86) vs. 7(0-36)%,p=0.039] no grupo com LES. O índice de fragmentação do DNA espermático também foi significativamente mais alto em pacientes com LES [62(31-97) vs. 25.5(0-100)%, p < 0.001]. Parâmetros seminais convencionais (incluindo contagem espermática, motilidade e morfologia) foram similares em ambos os grupos. Dentro de grupo de pacientes com LES não foi observada correlação entre o índice de fragmentação do DNA espermático com idade, duração da doença, SLEDAI-2K e SLICC/ACR-DI ou dose cumulativa de predinisona, hidroxicloroquina, metotrexato, azatioprina, micofenolato mofetil ou ciclofosfamida intravenosa (CIC) (p > 0.05). Análises adicionais evidenciaram que motilidade espermática total foi significativamente menor no grupo que fez uso de CIC [64%(15-83) vs. 72%(57-86)%, p=0.024]. O índice de fragmentação do DNA espermático foi semelhante nos dois grupos [52.5(31-95) vs. 67.5(34-97)%, p=0.185]. Conclusões: Homens com SLE sem azoospermia apresentam maior índice de fragmentação do DNA espermático sem alteração dos parâmetros seminais ou hormonal. CIC não parece ter papel significativo nesta alteração. Estudos prospectivos futuros são necessários para determinar o impacto desta alteração na fertilidade destes pacientes / Introduction: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic autoimmune disease with a female predominance and have clear impact on fertility. In male SLE has been shown to alter seminal parameters and sexual hormonal levels. Recently, sperm DNA integrity analysis has shown better prognostic performance to predicting male fertility than seminal parameters. Objective: To evaluate sperm DNA fragmentation in non-azoospermic male SLE patients. Methods: Twenty-eight consecutive male SLE patients (ACR criteria) and 34 healthy controls were evaluated for demographic/exposures data, urologic evaluation, hormone profile and seminal analysis (including sperm DNA fragmentation). Clinical features, disease activity/damage scores and treatment were also assessed. Results: Median age [33(20-52) vs. 36.5(25-54) years, p=0.329] and frequency of varicocele (25% vs. 32%, p=0.183) were similar in SLE patients and healthy controls. Sperm DNA fragmentation showed significantly higher levels of cells class III [44(9-88) vs. 16.5(0-80)%, p=0.001] and cell class IV [10.5(3-86) vs. 7(0-36)%,p=0.039] in SLE. Sperm DNA fragmentation Index was also significantly higher in SLE patients [62(31-97) vs. 25.5(0-100)%, p < 0.001]. Conventional sperm parameters (including sperm count, motility and morphology) were similar in both groups. In SLE patients no correlations were observed between sperm DNA fragmentation index with age, disease duration, SLEDAI-2K and SLICC/ACR-DI scores, and cumulative dose of prednisone, hydroxychloroquine, intravenous cyclophosphamide (IVCYC), methotrexate, azathioprine and mycophenolate mofetil (p > 0.05). Further analysis of SLE patients treated with and without IVCYC showed that total sperm motility was significantly lower in the former group [64%(15-83) vs. 72%(57-86)%, p=0.024]. Sperm DNA fragmentation index was alike in both groups [52.5(31-95) vs. 67.5(34-97)%, p=0.185]. Conclusions: To our knowledge, this is the first demonstration that male non-azoospermic SLE patients have increased sperm DNA fragmentation without evident gonadal dysfunction. IVCYC does not seem to be a major determinant for this abnormality. Future prospective study is necessary to determine the impact of this alteration in these patients\' fertility

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-20T20:06:17Z No. of bitstreams: 1 leonardotoshiooshio.pdf: 6184732 bytes, checksum: 2ae5dded31a5fbae3336c3f4555afe20 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T15:26:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leonardotoshiooshio.pdf: 6184732 bytes, checksum: 2ae5dded31a5fbae3336c3f4555afe20 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T15:26:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leonardotoshiooshio.pdf: 6184732 bytes, checksum: 2ae5dded31a5fbae3336c3f4555afe20 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / O Extrato de Ginkgo biloba (EGb) é um dos fitoterápicos mais consumidos no mundo e tem sido utilizado no tratamento da disfunção erétil e como afrodisíaco. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade sistêmica do EGb e o efeito sobre o sistema reprodutor masculino de ratos Wistar. Oitenta animais de três meses de idade foram tratados com água destilada (Grupo Controle) e extrato aquoso de Ginkgo biloba nas seguintes doses: 3,5 (EGb 3,5); 7,0 (EGb 7,0) e 14,0 mg/kg (EGb 14,0) uma vez ao dia, por 56 dias consecutivos. Foram avaliados o peso corporal, estimativa de consumo diário de ração, indícios de sinais clínicos de toxicidade, peso de órgãos e glândulas acessórias do sistema reprodutor masculino e dados histométricos testiculares. Espermatozoides foram coletados da cauda do epidídimo e foram submetidos à contagem e avaliados quanto à vitalidade e morfologia. Foram realizados hemograma completo, dosagem bioquímica sérica de ureia, creatinina e alanina aminotransferase (ALT) e concentração de testosterona total sérica. Não foram observados nos animais sinais clínicos de toxicidade sistêmica e mortes. Apesar de ter ocorrido diferenças estatísticas significativas na estimativa de consumo de ração, hemoglobinometria, concentração de hemoglobina globular média e volume das células de Leydig, concluise que o EGb no presente trabalho, e com as doses utilizadas, não causou toxicidade sistêmica nem promoveu alteração na morfometria testicular e qualidade espermática de ratos Wistar. / Ginkgo biloba Extract (GBE) is one of the most consumed herbal medicines in the world and it has been used in the treatment of erectile dysfunction and as an aphrodisiac. The present study had as objective to evaluate the GBE systemic toxicity and its effect on male reproductive system of Wistar rats. Eighty animals of threemonth- old age were treated with distilled water (Control Group) and aqueous extract of Ginkgo biloba in the following doses: 3.5 (GBE 3.5); 7.0 (GBE 7.0) and 14.0 mg/kg (GBE 14.0) once per day, for 56 consecutive days. Body weight, daily food consumption estimation, toxicity clinical signs evidences, male reproductive system organs and accessory glands weights and testis histometric analysis data were evaluated. Spermatozoa were collected from the cauda epididymis and were subjected to counting and evaluations of vitality and morphology. Complete blood count test, serum biochemistry test of urea, creatinine and alanine aminotransferase (ALT) and total serum testosterone levels were realized. Clinical signs of systemic toxicity and deaths were not seen. In spite of it had had significant statistical differences on daily food consumption estimation, hemoglobinometry, mean corpuscular hemoglobin concentration and Leydig cell volume, it was concluded that GBE in the present study and with the doses used, did not cause systemic toxicity nor promoted alterations on testicular morphometry and spermatic quality of Wistar rats.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_jorgea_pradiee.pdf: 964026 bytes, checksum: e100969ef5fb9f72ec9bf73b616695fd (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / In an attempt to diminish the structural damage to the plasma membrane, due to free radicals and reactive oxygen species (ROS), the antioxidants β-mercaptoethanol (BME) and cysteine (CIS) were tested for semen cryopreservation and in vitro maturation (IVM) and culture (IVC) of ovine embryos. Semen samples from four rams of the Crioula Lanada breed were collected with artificial vagina twice weekly (n = 23). Samples of four rams were pooled and split in six treatments: T1, control without antioxidant, T2, with 2mM BME, T3, with 5mM BME, T4, with 2mM BME and 5mM cysteine; T5, with 5 mM BME and 5mM cysteine, and T6 with 5 mM cysteine. Semen was diluted in tris-egg yolk-glycerol and stored in straws of 0.25 mL containing 100 x 106 spermatozoa. Cooling and freezing were performed using a TK3000 and thawing was performed at 37°C for 20 s. Sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity and acrosome, before freezing and after thawing, did not differ between treatments (P> 0.05). Quantification of ROS and total antioxidant activity after thawing were similar between treatments (P> 0.05). At the tested concentrations, the inclusion of BME, and cysteine did not affect sperm viability after thawing. In the first experiment of IVP, the inclusion of 20 mM of BME in IVM and IVC of embryos was compared to a control treatment without antioxidants. There was no deleterious effect of antioxidant on the cleavage rate (control: 70.0%; BME: 69.8%). However, the rate of development to the blastocyst stage with BME (5.2%) was lower (P <0.001) than with the control (16.9%). In the second experiment, we tested the association of 50 mM BME and 600 mM of CIS in IVM and IVC. There was no difference between control and BME/CIS (P> 0.05), for cleavage (60.3% and 64.3%, respectively) and embryonic development rates (33.6% and 36.6 %, respectively). The addition of 20 mM of isolated BME in IVM and IVC sheep embryos was associated with decreased embryonic development to blastocyst. However, the addition of antioxidants BME, and cysteine in combination, did not affect the rates of cleavage and embryo development to blastocyst. Therefore, the combination of antioxidants and CIS BME used in freezing ram semen and PIV, did not improve the treatments that have been added, albeit at different concentrations. / Na tentativa de diminuir os danos estruturais na membrana plasmática, devido aos radicais livres e espécies reativas de oxigênio (ROS), os antioxidantes β-mercaptoetanol (BME) e cisteína (CIS) foram testados na criopreservação de sêmen e na maturação (MIV) e cultivo (CIV) in vitro de embriões de ovinos. Amostras de sêmen de quatro carneiros da raça Crioula Lanada foram coletadas com vagina artificial, duas vezes por semana (n = 23). As amostras dos quatro machos foram combinadas em pool e divididas em seis tratamentos: T1, Controle, sem antioxidante; T2, com 2mM BME; T3, com 5mM BME; T4, com 2mM BME e 5mM de cisteína; T5, com 5mM BME e 5mM de cisteína; e T6 com 5mM de cisteína. O sêmen foi diluído em tris-gema-glicerol e estocado em palhetas de 0,25 mL contendo 100 x 106 espermatozoides. O resfriamento e o congelamento foram realizados em máquina TK3000 e o descongelamento foi realizado a 37ºC por 20 s. A motilidade, a integridade da membrana espermática e do acrossoma e a atividade mitocondrial, antes do congelamento e após o descongelamento, não diferiram entre os tratamentos (P> 0,05). A quantificação de ROS e da atividade antioxidante total pós-descongelamento foram semelhantes entre os tratamentos (P> 0,05). Nas concentrações testadas, a inclusão de BME e cisteína não influenciou a viabilidade espermática pós-descongelamento. No primeiro experimento de PIV, a inclusão de 20 μM de BME na MIV e CIV de embriões foi comparada a um tratamento controle sem antioxidantes. Não houve efeito deletério do antioxidante sobre a taxa de clivagem (Controle: 70,0%; BME: 69,8%). Porém, a taxa de desenvolvimento até o estágio de blastocisto no tratamento BME (5,2%) foi inferior (P<0,001) à do controle (16,9%). No segundo experimento, foi testada a associação de 50 μM de BME e 600 μM de CIS, na MIV e CIV. Não houve diferença entre os tratamentos controle e BME/CIS (P>0,05), quanto às taxas de clivagem (60,3% e 64,3%, respectivamente) e de desenvolvimento embrionário (33,6% e 36,6%, respectivamente). A adição isolada de 20 μM de BME na MIV e CIV de embriões ovinos foi associada com redução no desenvolvimento embrionário até blastocisto. Porém, a adição dos antioxidantes BME e cisteína, em associação, não afetou as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário até blastocisto. Assim, a associação dos antioxidantes BME e CIS usados no congelamento de sêmen ovino e na PIV, não promoveu melhora dos tratamentos em que foram adicionados, ainda que em concentrações diferentes.

[ES] La familia Tephritidae constituye un grupo de dípteros de gran interés económico debido a que incluye especies consideradas plagas en casi todas las áreas frutícolas del mundo. Entre las especies de tefrítidos citadas en España, se encuentra Ceratitis capitata, la mosca de la fruta del Mediterráneo, plaga de gran relevancia económica en el país. La gestión de esta plaga requiera de actuaciones en grandes áreas frutícolas y con integración de diversas tecnologías y herramientas de control, siendo las actuaciones principales los tratamientos químicos, el trampeo masivo y la aplicación de la técnica del insecto estéril (TIE). Conocer la biología reproductiva de C. capitata es de gran importancia para desplegar nuevos métodos de control y mejorar los ya existentes, especialmente la TIE. En este sentido, y haciendo uso de los avances biotecnológicos, se desarrolló un método molecular de cuantificación, basado en la aplicación de una PCR en tiempo real mediante el uso de marcadores del cromosoma Y, para estimar la cantidad de espermatozoides contenidos en las espermatecas (capítulo 2). Este método fue validado satisfactoriamente como medio de cuantificación de la cantidad de esperma almacenado en las espermatecas después del apareamiento para dos cepas de C. capitata, la cepa silvestre y la cepa Vienna-8, empleada internacionalmente en la producción masiva de machos estériles para el programa TIE. Además, los resultados obtenidos mostraron detecciones positivas de esperma en apareamientos de corta duración (10 minutos) y se confirmó la transferencia efectiva de esperma en el 78 % de los casos evaluados. Una vez obtenido un método más eficaz para cuantificar el esperma almacenado en las espermatecas, éste se empleó para estudiar (Capítulo 3) la influencia de la edad del macho y la duración de la cópula en la cantidad de esperma trasferido durante la misma, en ambas cepas. Estos aspectos que se han relacionado con el rendimiento de los machos estériles empleados en los programas TIE. Además de observarse un efecto de la cepa, se determinó una influencia positiva de la duración de la cópula en la cantidad de esperma recibido por las hembras. Los resultados mostraron un patrón gradual de transferencia no lineal que aumenta con la duración del apareamiento en ambas cepas. En cuanto a la edad de los machos no se observó una influencia en la cantidad de esperma transferido dentro del rango de edad evaluado. Por último, se estudió la capacidad de los machos Vienna-8 estériles para volver a aparearse e inseminar a las hembras (Capítulo 4). El fenómeno del apareamiento múltiple, relacionado con la eficacia reproductiva de C. capitata, ha sido observado en las poblaciones naturales, tanto en hembras (poliandria) como en machos (poliginia), pero ha sido poco estudiada en machos irradiados. Los resultados mostraron que el 57 % de los machos estériles recopularon hasta en tres ocasiones y el 73 % al menos en una ocasión y que en estos reapareamientos hubo transferencia efectiva de esperma en el 99 % de los casos. En cuanto a la cantidad de espermatozoides transferidos en las recópulas producidas, se observó una tendencia a disminuir respecto a la primera cópula, pero no se detectó una situación de aspermia. En conclusión, esta tesis desarrolla un nuevo método molecular basado en la detección del cromosoma Y para evaluar el esperma almacenado en las espermatecas de hembras en C. capitata. Este método ha sido validado para estimar los espermatozoides de las cepas silvestre y Vienna-8 de esta especie, y podría servir como modelo base para la cuantificación de gametos en otras especies de tefrítidos. Se han mejorado los patrones de transferencia del esperma con relación al tiempo de apareamiento para ambas cepas, y se ha determinado, por primera vez, el potencial de recópula de los machos estériles Vienna-8 y su capacidad para transferir esperma no viable a lo largo de múltiples apareamientos. / [CA] La família Tephritidae constituïx un grup de dípters de gran interés econòmic pel fet que inclou espècies considerades plagues en quasi totes les explotacions frutícoles del món, especialment les conegudes com a mosques de la fruita. Entre les espècies de tefrítids citades a Espanya, es troba Ceratitis capitata, la mosca de la fruita del Mediterrani, plaga de gran rellevància econòmica al país. La gestió d'aquesta plaga requerisca d'actuacions en grans àrees frutícoles i amb integració de diverses tecnologies i ferramentes de control, sent les actuacions principals els tractaments químics, el trampeig massiu i l'aplicació de la tècnica de l'insecte estèril (TIE). Conéixer la biologia reproductiva de C. capitata és de gran importància per a desplegar nous mètodes de control i millorar els ja existents, especialment la TIE. En este sentit, i fent ús dels avanços biotecnològics, en primer lloc (capítol 2) es va desenvolupar un mètode molecular de quantificació, basat en l'aplicació d'una PCR en temps real mitjançant l'ús de marcadors del cromosoma Y, per a estimar la quantitat d'espermatozoides continguts en les espermateques. Este mètode va ser validat satisfactòriament com a mitjà de quantificació dels espermatozoides emmagatzemats en les espermateques després de l'aparellament per a dos soques de C. capitata, la soca silvestre i la soca Vienna-8, empleada internacionalment en la producció massiva de mascles estèrils per al programa TIE. A més, els resultats obtinguts van mostrar deteccions positives d'esperma en aparellaments de curta duració (10 minuts) i es va confirmar la transferència efectiva d'esperma en el 78% dels casos avaluats. Una vegada obtingut un mètode més eficaç per a quantificar l'esperma emmagatzemat en les espermateques, aquest es va emprar per a estudiar (capítol 3) la influència de l'edat del mascle i la duració de la còpula en la quantitat d'esperma transferit durant esta, en ambdues soques. Estos aspectes s'han relacionat amb el rendiment dels mascles estèrils empleats en els programes TIE. A més d'observar-se un efecte de la soca, es va determinar una influència positiva de la durada de l'acoblament en la quantitat d'esperma rebut per les femelles. Els resultats van mostrar un patró gradual de transferència no lineal que augmenta amb la duració de l'aparellament en ambdues soques. Quant a l'edat dels mascles, no es va observar una influència en la quantitat d'esperma transferit dins del rang d'edat avaluat. Finalment, es va estudiar la capacitat dels mascles Vienna-8 estèrils per a tornar a emparellar-se i inseminar a les femelles (capítol 4). El fenomen de l'aparellament múltiple, relacionat amb l'eficàcia reproductiva de C. capitata, ha sigut observat en les poblacions naturals, tant en femelles (poliàndria) com en mascles (poligínia), però ha sigut poc estudiada en mascles irradiats. Els resultats van mostrar que el 57% dels mascles estèrils van recopular fins a tres ocasions i el 73% almenys en una ocasió i que en estos reaparellaments va haver-hi transferència efectiva d'esperma en el 99% dels casos. Quant a la quantitat d'espermatozoides transferits en les récopulas produïdes, es va observar una tendència a disminuir respecte a la primera còpula, però no es va detectar una situació d'aspèrmia. En conclusió, esta tesi desenvolupa un nou mètode molecular basat en la detecció del cromosoma Y per a avaluar l'esperma emmagatzemat en les espermateques de femelles en C. capitata. Este mètode ha sigut validat per a estimar els espermatozoides de les soques silvestre i Vienna-8 d'esta espècie, i podria servir com a model base per a la quantificació de gàmetes en altres espècies de tefrítids. S'han millorat els patrons de transferència de l'esperma en relació amb el temps d'aparellament per ambdues coques, i s'ha determinat, per primera vegada, el potencial de recòpula dels mascles estèrils Vienna-8 i la seua capacitat per a transferir esperma no viable al llarg de múltiples aparellaments. / [EN] Tephritidae family constitutes a great interest group of dipterans as it includes species considered pests in almost all fruit-growing areas around the world, especially those known as fruit flies. The Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata, is among the recorded tephritids species in Spain and it is recognized as a pest of great economic importance by Spanish government. The ability to adapt to different environmental conditions of each of its development stages and its polyphagy are two of the key aspects to become such a harmful pest. C. capitata has the largest host range known among tephritids. These biological and adaptative traits make management of this pest require actions in large fruit-growing areas and the integration of various technologies and control tools. The integrated pest management programme includes chemical treatments, mass trapping and the application of the sterile insect technique (SIT). The study of the reproductive biology of C. capitata is relevant for deploying new control methods and improving existing ones, especially SIT. Taking it into consideration, and making use of biotechnological advances, in chapter 2, we develop a molecular quantification method, based on the application of real-time PCR using Y-chromosome markers, to estimate the amount of sperm contained in spermathecae. This method was successfully validated to quantify the amount of spermatozoa stored in the spermathecae after mating for two strains of C. capitata, wild-type strain and Vienna-8 strain, used internationally in the mass production of sterile males in TIE programmes. Positive sperm detections were obtained in short-term matings (10 minutes) and effective sperm transfer was confirmed in 78% of the cases evaluated. Once obtained this effective method to quantify the sperm stored in the spermathecae, it was used to study in chapter 3 the influence of male age and copula duration on the amount of sperm transferred during mating in both strains. These aspects have been related to the performance of sterile males used in TIE programmes. In addition to observing a strain effect, it was determined a positive influence of copula duration on the amount of sperm received by females. The results showed a gradual pattern of non-linear transfer that increases with mating duration in both strains. Regarding the age of the males, no influence was observed on the amount of sperm transferred within the evaluated age range. Finally, the ability of sterile Vienna-8 males to remate and inseminate females was studied in chapter 4. The phenomenon of multiple mating, related to the reproductive efficiency of C. capitata, has been observed in natural populations, both in females (polyandry) and males (polygyny), but it has been barely studied in irradiated males. The results of this chapter showed that 57% of the sterile males recopulated up to three times and 73% at least once, and there was effective sperm transfer in 99% of these rematings. Regarding the amount of sperm transferred along the remating occasions, a tendency to decrease was observed with respect to the first copulation, but a situation of aspermia was not detected. In conclusion, this thesis develops a new molecular method based on the detection of the Y-chromosome to estimate the sperm stored in the spermathecae of females in C. capitata. This method has been validated to estimate spermatozoa from wild-type and Vienna-8 strains of this tephritid and it could be used as a model for the quantification of gametes in other fruit fly species. Sperm transfer patterns have been improved in relation to mating time for both strains, and the remating potential of sterile Vienna-8 males and their ability to transfer non-viable sperm over multiple matings have been determined for the first time in a period of their lifetime. / Català Oltra, M. (2024). Cuantificación y análisis de la transferencia de espermatozoides en Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae): Aplicaciones en programas de la Técnica del Insecto Estéril [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/213442