Esporos de Bacillus atrophaeus ATCC 9372 são utilizados como bioindicadores na avaliação da eficiência de processos de esterilização. Considerando o uso dos esporos de Bacillus, deve-se buscar alternativas para sua obtenção visando desenvolver um processo econômico e ambientalmente viável. A obtenção de biomassa de microalga seja para uso como suplemento alimentar ou obtenção de biodiesel se destaca pela elevada quantidade de água utilizada no processo. Após a retirada da biomassa, o meio residual, que é rico em matéria orgânica e nutrientes, poderia ser empregado como substrato para obtenção de outros micro-organismos e de subprodutos de interesse industrial. O objetivo deste trabalho é avaliar a utilização de meios residuais provenientes do cultivo de micro-organismos fotossintetizantes para produção de esporos de B. atrophaeus ATCC 9372. Alíquotas de 100 mL dos meios residuais f2 Guillard e Bold, foram autoclavados e avaliados in natura ou suplementados com glicose (2,5g/L), sulfato de amônio 2%, associados ou não e extrato de levedura (2,5g/L), ou adicionados ao meio após incubação de pré-inóculo por 2 e 4 horas. A suplementação com extrato de levedura e os cultivos com pré-inóculos proporcionaram população de 107 esporos/mL as quais apresentaram resistência térmica a 102 oC, expressos em termos de tempo de redução decimal de D =1,27 min em meio com extrato de levedura, D =1,42 min em meio preparado com inóculo de 4 horas, ambos em meio f2 e D = 1,25 min nas duas condições para meio Bold residual. Os resultados demonstraram a viabilidade do uso de meio residual como meio de crescimento e esporulação de Bacillus atrophaeus ATCC 9372, que pode ser reutilizado para obter produtos farmacêuticos e de interesse industrial. / Bacillus atrophaeus spores ATCC 9372 are commonly used as biological indicators in assessing the efficiency of sterilization processes. Considering the use of Bacillus spores, it is necessary to look for alternatives to obtain them, aiming at a viable economic process and environment. Obtaining microalgae biomass for use as a food supplement or obtaining biodiesel is notable for the high amount of water used in the process. After the biomass removal, the residual growth medium is rich in organic matter and nutrients that could be used as a substrate for the cultivation of other microorganisms, and to obtain by-products of industrial interest. The goal of this work is to evaluate the use of residues from the cultivation of photosynthetic microorganism for the production of spores of Bacillus atrophaeus ATCC 9372. Aliquots of 100 mL residual growth medium were autoclaved and evaluated in natura or supplemented with glucose (2.5g/L), ammonium sulphate 2%, associated or not to yeast extract (2.5g/L) or added to medium after pre-inoculum incubation for 2 and 4 hours. Yeast extract supplementation and cultures using pre-inoculum provided a population of 107 spores / mL which showed thermal resistance at 102 oC, expressed in terms of decimal reduction times of D = 1.27 min in medium with yeast extract, D = 1.42 min in medium prepared with 4 hour inoculum, both resistances related to f2 medium and D = 1.25 min in both conditions for residual Bold medium.The results demonstrated the feasibility of the use of residual medium growth way and sporulation of Bacillus atrophaeus, which can be reused to obtain pharmaceuticals and industrial interest.

A análise microbiológica atua como ferramenta fundamental para a obtenção de dados sobre a qualidade, sanidade, higiene e segurança na produção de alimentos; desta forma, tem sido adotada na indústria alimentícia para o controle de qualidade. Por sua composição completa e balanceada, o leite é um substrato ideal para o desenvolvimento de diversos grupos de microrganismos. Com o objetivo de pesquisar bactérias da espécie Bacillus cereus em amostras de leite fluido, bem como a capacidade de germinação de esporos e a multiplicação dessa bactéria após processo de fervura, com manutenção das amostras à temperatura ambiente e à temperatura de refrigeração por períodos de 1, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 horas, foram analisadas 75 amostras de leite, conforme as metodologias recomendadas por Silva et al. (2007). Destas, 46 amostras (61,3%) mostraram-se com algum grau de contaminação pela bactéria antes de serem submetidas à fervura. Por sua vez, as amostras mantidas à temperatura ambiente após a fervura, tiveram suas contagens bacterianas, principalmente a partir da 8a hora, superiores à contagem inicial, inclusive atingindo níveis capazes de desencadear uma toxinfecção alimentar, demonstrando a ocorrência da germinação dos esporos e a multiplicação das células vegetativas. Por outro lado, alíquotas dessas mesmas amostras mantidas sob refrigeração (7ºC) não atingiram populações preocupantes, enfatizando, desse modo, a importância da necessidade da refrigeração do leite após a fervura. / The microbiological analysis acts as basic tool for the attainment of data on the quality, health, hygiene and security in the food production, in such a way, she has been adopted in the nourishing industry for the quality control. For its complete and balanced composition, milk is an ideal substratum for the development of diverse groups of microorganisms. With the objective to search cereus bacteria of the Bacillus species in fluid milk samples, as well as the capacity of germination of spores and the multiplication of this bacterium after boil process, with maintenance of the samples to the ambient temperature and the temperature of refrigeration for periods of 1, 2, 4, 6, 8, 10 and 12 hours, 75 milk samples had been analyzed, as the methodologies recommended for Silva et al. (2007). Of these, 46 samples (61.3%) had revealed with some degree of contamination for the bacterium before being submitted to the boil. In turn, the samples kept to the ambient temperature after the boil, had its bacterial countings, mainly from 8a hour, superiors to the initial counting, also reaching levels capable to unchain an alimentary toxinfection, demonstrating to the occurrence of the germination of the spores and the multiplication of the vegetative cells. On the other hand, aliquot of these same samples kept under refrigeration (7ºC) had not reached preoccupying populations, emphasizing, in this manner, the importance of the necessity of the refrigeration of milk after the boil.

Esporos de Bacillus subtilis apresentam propriedades adjuvantes, sendo capazes de aumentar a resposta humoral após a sua coadministração com antígenos misturados ou adsorvidos à sua superfície. Mas, para isso, é necessária a produção de esporos altamente purificados e com rendimentos elevados. Neste trabalho, realizamos com sucesso uma análise quantitativa das condições de esporulação e dos métodos de purificação, o que melhorou a reprodutibilidade do processo e a obtenção de amostras com elevado grau de pureza e rendimento. Avaliamos também as propriedades imunomodulatórias destes esporos, utilizando como antígeno modelo a proteína recombinante Gag-p24 do HIV-1. A coadministração, mas não a adsorção à superfície do esporo, aumentou a imunogenicidade do antígeno sem induzir efeitos deletérios após a administração parenteral em camundongos BALB/c e C57BL/6. Além de promoveram a ativação das APCs, os esporos interagem com receptores relacionados à imunidade inata, devido à ausência do efeito adjuvante em camundongos nocautes para TLR2. Esses resultados abrem perspectivas interessantes para a utilização de esporos como adjuvantes vacinais. / Bacillus subtilis spores have been shown to behave as vaccine adjuvants, promoting the increase of antibody responses after co-administration with antigens either admixed or adsorbed on the spore surface. Nonetheless, such specialized application requires highly purified spore preparations at high yields. In this work, we successfully performed a systematic quantitative analysis of sporulation conditions and spore purification methods, which improved the reproducibility of the process and the obtainment of samples with high purity and yield. Afterwards, we further evaluated the immune modulatory properties of these spores using a recombinant HIV-1 Gag-p24 protein as a model antigen. The co-administration, but not adsorption to the spore surface, enhanced the immunogenicity of that target antigen, without inducing deleterious effects, after subcutaneous administration to BALB/c and C57BL/6 mice. Besides promoting activation of antigen presenting cells, spores interact with receptors related to innate immunity, due to the absence of the adjuvant effect on TLR2 knockout mice. These results open interesting perspectives for the use of B. subtilis spores as vaccine adjuvants.

Phosphorus (P) is a plant macronutrient and soils located in tropical regions generally show low content of this element. Moreover, these soils are acidic and show high fixing capacity of phosphorus, substantially decreasing fertilizers efficiency. For this reason, annual P inputs to soils are required to obtain feasible crop yields. The main concern regarding P in agriculture is this element is extracted from mines that are being depleted. For this reason, it is necessary to develop recycling P technologies in order economize mineral resources and obtain benefits from low cost sources locally available. Bones are a P-rich material that could be employed for P recycling; however, this sub-product from meat industry needs to be treated prior use to ensure health safety. Pyrolysis is a technology that has gained attention because it does not affect bone mineral structure as does calcination, which is a standard treatment. Performing pyrolysis of bones generates a material called bone char and tests suggests that its efficiency is comparable to common soluble fertilizers obtained from P rocks. Another way to obtain higher crop P and other nutrients absorption as well as yield, is to stimulate symbiosis of plants with arbuscular mycorrhizal fungi (AMF), which are naturally found in soils. However, acidic soils from tropical regions generally difficult plant-AMF interaction due to high amount of exchangeable aluminum present. An alternative to overcome this issue would be to apply pyrolysis to organic wastes, generating a material termed biochar, which is rich in carbon, and sometimes nutrients, assisting AMF-plant symbiosis. Our aim was to produce through pyrolysis a set of bone chars in different temperatures (400, 550 and 800 °C) and atmospheric composition (sealed chamber, N2 flux and steam flux), and perform a detailed characterization of the resultant materials (chapter 1) to verify which possible factors are controlling bone char efficiency as fertilizer in a pot experiment labelled with 32P (chapter 2). To test the symbiotic pathway in P acquisition by plants through biochar use, two biochars from eucalyptus wood chips were produced at 300 and 700 °C and applied to a soil inoculated or non-inoculated with AMF. In this experiment we analyzed plant growth and colonization by AMF as well as nutrient absorption (chapter 3). Additionally, a trial with AMF spore germination evaluation was performed to investigate the possible inhibitory or positive effects of the biochars on AMF fungi. / O fósforo (P) é um macronutriente para as plantas e solos localizados em regiões tropicais geralmente apresentam baixo conteúdo deste elemento. Ainda, estes solos são ácidos e apresentam alta capacidade de fixação de P, diminuindo substancialmente a eficiência de fertilizantes. Por esta razão, adições anuais de P ao solo são requeridas para obtenção de produtividades de plantas economicamente viáveis. A principal preocupação em relação ao uso de P na agricultura é que este elemento é extraído de minas que estão sendo exauridas. Por esta razão, é necessário o desenvolvimento de tecnologias de reciclagem de P a fim de economizar recursos minerais e obter benefícios oriundos de fontes de baixo custo disponíveis localmente. Um material que é rico em P e que poderia ser empregado na reciclagem de fósforo é o osso animal, no entanto, este subproduto da indústria de carnes necessita ser tratado previamente ao uso para garantir segurança sanitária. A pirólise é umas tecnologias que tem recebido atenção porque seu emprego no tratamento de ossos não afeta a estrutura do material como a calcinação, que é um tratamento padrão. Realizar a pirólise de ossos gera um material denominado de carvão de osso (bone char, em inglês), o qual testes sugerem que a sua eficiência é comparável à fertilizantes solúveis convencionais obtidos a partir de rochas fosfáticas. Outra forma de obter maior absorção de P e nutrientes e maior produtividade de cultivos é através do estímulo da simbiose de plantas com micorrízicos arbusculares (FMA), estes naturalmente encontrados em solos. No entanto, solos ácidos de regiões tropicais geralmente dificultam a interação de plantas-FMA devido ao elevado teor de alumínio trocável presente. Uma alternativa para superar esse problema seria a aplicação de pirólise a resíduos orgânicos, gerando assim um material chamado biocarvão, o qual é rico em carbono, e as vezes nutrientes, e poderia auxiliar na simbiose de plantas com AMF. Nosso objetivo foi produzir através da pirólise um conjunto de biocarvões em diferentes temperaturas (400, 550 e 800 °C) e composições atmosférias (câmara selada, fluxo de N2 e fluxo de vapor d\'água) e realizar a caracterização dos materiais resultantes (capítulo 1) para verificar que possíveis fatores controlam a eficiência do carvão de osso em um experimento em vasos com marcação com 32P (capítulo 2). A fim de testar o viés simbiótico na aquisição de P pelas plantas com o uso de biocarvão, dois biocarvões de cavaco de eucalipto produzidos a 300 e 700 °C foram aplicados a um solo inoculado ou não com FMA (capítulo 3). Nesse experimento foram analizados o crescimento de plantas e colonização por FMA, como também a absorção de nutrientes. Adicionalmente, um teste com a germinação de esporos de FMA foi realizado para investiar possíveis effeitos positions ou inibitórios dos biochar em esporos de FMA.

Em busca de melhorar a eficiência do uso de fontes de fósforo (P) e viabilizar o aumento da absorção deste nutriente, objetivou-se com este trabalho determinar as mudanças promovidas por plantas de cobertura, associadas à fontes fosfatadas de solubilidade distintas, na colonização por fungos micorrízicos arbusculares (FMA), como também avaliar as mudanças promovidas na disponibilidade de frações de P no solo e na eficiência de uso do P pelas coberturas. O delineamento adotado foi de blocos ao acaso, em esquema fatorial 5x3, com quatro repetições. Foram utilizadas quatro plantas de cobertura: milheto (Pennisetum glaucum), braquiária (Brachiaria ruziziensis), guandú-anão (Cajanus cajan) e crotalária (Crotalária juncea), além do controle (pousio);Duas fontes de P: fosfato natural reativo Bayóvar e superfosfato simples, além de um tratamento controle (sem fosfato),. Avaliou-se a colonização micorrízica por FMA e densidade de esporos no solo em três épocas, correspondendo à estação chuvosa e seca de 2013 e a estação chuvosa de 2014. Avaliou-se também a produção de massa seca e o acúmulo de P pelas plantas. No final do segundo ano, analisou-se o fracionamento de P do solo. A colonização radicular foi mais influenciada nas épocas chuvosas. A presença das plantas de cobertura proporcionou maior colonização micorrízica e densidade de esporos na época chuvosa. As aplicações de fontes fosfatadas não influenciam a densidade dos esporos, enquanto que as plantas de cobertura, principalmente o guandú e a braquiária, apresentaram aumento no número de esporos. Apesar de não aumentar as frações lábeis do P no solo, a utilização de plantas de cobertura proporcionou maior ciclagem do nutriente. Os fosfatos não influenciaram a massa seca nem o acúmulo de P, sendo que houve efeitos das plantas de cobertura na massa seca e no acúmulo de P na parte aérea, com destaque para o milheto e a braquiária. / In order to improve the use efficiency of phosphorus sources and enable a higher absorption of this nutrient, this research aimed to determine the changes promoted by cover crops and phosphorus sources of different solubility in the colonization by arbuscular mycorrhizal fungi (AMF), as much as the availability of P fractions in the soil and the use efficiency of P by the cover crops. A complete randomized block design was adopted, in a 5x3 factorial scheme, with four replications. For the first factor were used four cover crops: millet (Pennisetum glaucum), brachiaria (Brachiaria ruziziensis), pigeon pea (Cajanus cajan) and sun hemp (Crotalaria juncea), including a control (fallow); for the second factor were used the reactive phosphate Bayovar and the simple superphosphate plus a control treatment (no phosphate). It was assessed the AMF colonization, the spore density in the soil in three different times, the rainy and dry seasons in 2013, and the rainy season in 2014. At the end of 2014, it was also evaluated the amount of the fractioned P in the soil. The root colonization was more influenced in rainy season. The presence of cover crops provided greater mycorrhizal colonization and spore density in the rainy season. The applications of phosphate sources did not influence the spores density. However, the cover crops, mainly pigeon pea and brachiaria, showed an increase in the number of spores. The use of cover crops did not increase the labile fractions of P in the soil, Nevertheless they provided greater cycling of this nutrient. Phosphates did not influence the dry matter or the accumulation of P. Interestingly, the dry matter and P accumulation in shoots was influenced by the kind of cover crops, being higher for millet and brachiaria.

Há poucos estudos relacionados com a caracterização dos componentes biológicos presentes no material particulado atmosférico, chamados bioaerossóis. Esses componentes biológicos podem assumir uma relação direta com a deflagração de doenças e também estão relacionados com os processos climáticos, em especial como núcleos de formação de gelo. Dentre os bioaerossóis, foram estudados, neste trabalho, os fungos anemófilos, sendo os principais os Basidiomycota, Ascomycota e os Fungos mitospóricos. O objetivo desse trabalho foi estimar a contribuição dos aerossóis fúngicos para a composição biogênica do material particulado atmosférico da Região Metropolitana de São Paulo. Foram realizadas medidas em dois sítios: na Cidade Universitária e no Pico do Jaguará. Para isso, foram caracterizados os tipos fúngicos utilizando-se um microscópio ótico e estimada a massa dos aerossóis de origem fúngica utilizando-se biomarcadores. Foram realizadas coletas durante 2013, 2014 e 2015 com o amostrador Burkard 7-day Recording Sampler, sendo que em 2015 também foram realizadas coletas com filtros de quartzo com o amostrador Airmetrics MiniVol portable Sampler. Foram identificados e obtida a concentração dos tipos fúngicos observados na atmosfera da RMSP, sendo encontrados 39 grupos principais de fungos, sendo os principais os Basidiomycotas. A concentração média total foi de 5736 (± 2459) esporos/m³ por dia. Os Ascomycota, Basidiomycota e os fungos mitospóricos se correlacionaram com as variáveis meteorológicas de forma diferente. Observou-se variação da concentração de esporos durante os diferentes períodos do dia, sendo que a maior concentração de esporos ocorreu na madrugada, possivelmente devido às condições meteorológicas (elevada umidade e temperaturas mais amenas), contudo a concentração dos fungos mitospóricos foi maior durante o período da tarde, principalmente devido aos mecanismos de liberação de esporos. No verão e na primavera foram obtidas as maiores concentrações de Ascósporos e Basidiósporos e no inverno e outono foram obtidas as maiores concentrações dos fungos mitospóricos. Além disso, observou-se uma correlação positiva e significativa entre a concentração de esporos totais e o material particulado inalável (MP10), indicando que ambos são influenciados da mesma forma pelas variáveis meteorológicas e/ou tem uma fonte em comum, como por exemplo a ressuspensão da poeira do solo. O Arabitol, Manitol, Treitol e os esporos de fungos são positivamente correlacionados, indicando que os três açucares podem ser traçadores de esporos de fungos na atmosfera. Utilizando-se um fator de conversão proposto na literatura foi possível estimar que 2% da concentração do MP10 e 8% da concentração do OC estão associados aos esporos de fungos, indicando a importância dos esporos fúngicos. Com o uso de modelos receptores foram observadas 6 fontes para o MP10: queima de biomassa resultante de processos industriais; queima de biomassa resultante da queima da vegetação; aerossóis fúngicos; formação de aerossol secundário; ressuspensão do solo e emissão veicular. Esses resultados constituem um avanço para a pesquisa em bioaerossóis no Brasil, já que muitas dessas análises ainda não haviam sido realizadas em áreas urbanas no Brasil / Although the biogenic components of Particulate Matter (PM) can have a direct relationship with the outbreak of respiratory diseases and can be linked to changes in climate processes there are very few studies related to its characterization in the atmospheric aerosols. Among the bioaerosols, the airborne fungi were studied, and the Basidiomycota, Ascomycota and Mitosporic fungi were the main characterized. The goal of this work was to estimate the contribution of the fungal aerosol to the RMSP atmosphere, with samplings in two sites: Cidade universitária (USP) and Pico do Jaraguá (PJ). For that, the fungi types were characterized using an optical microscope and it was estimated the mass of the fungal aerosol using biomarkers. Sampling was carried out during 2013, 2014 and 2015 with the \"Burkard 7-day Recording Sampler\", and in 2015, filters were sampled with the \"Airmetrics MiniVol portable Sampler. It was identified and determined the concentration of the fungi types observed in the RMSP atmosphere, and were found 39 main groups of fungi. The main group was the Basidiomycota. The mean concentration of the total fungi was 5736 (± 2459) spores/m³ per day. The Ascomycota, Basidiomycota and the mitosporic fungi correlated in different ways with the meteorological variables. A variation of the spores concentration during different times of the day was observed, with the occurrence of the highest concentration of spores at dawn, possibly due to weather conditions (high humidity and cooler temperatures), but the concentration of the mitosporic fungi was higher during the afternoon, mainly due to the spores release mechanisms. In the summer and spring were observed higher concentrations of Ascospores and Basidiospores and in the autumn and winter were obtained higher concentration of Mitospores. Besides that, it was also observed a positive and significant correlation between the fungal spore with the particulate matter, indicating that both are influenced in the same way by weather variables and/or has a common source such as soil resuspension. Arabitol, Mannitol, Threitol and the fungi spores are positive correlated, indicating that these three sugar alcohols can be a tracer for fungi spores in the atmosphere. Using the conversion factor proposed in the literature was possible to estimate that 2% of the PM10 concentration and 8% of the OC concentration it is due to fungi spores, indicating its importance. Using receptor modeling it was identified six sources for PM10, the biomass burning resulting from industrial processes, the biomass burning resulting from vegetation burning, the fungal aerosol, the secondary formation aerosol, the soil resuspension and vehicular emission. These results are a breakthrough for research on bioaerosols in Brazil, since many of this analyzes had never been performed in urban areas in Brazil

This paper presents an analysis of palinomorfos (pollen and spores), contained in the sediments holocênicos testimony Cajuúna the Plain of Tide dE Soure, Island of Marajó, Pa. Have been identified and quantified, as a minimum, 300 grains of pollen per sub-sample, in addition to the spores and pollen exotic, resulting in 21 taxa. The reading of fluctuations of palinomorfos over the stratographic leveis in pollen diagrams, enabled the individualization of weather events as well as possible changes in plant composition of the area studied. The analysis palinológica was made in a testimony to the portion of 3.80 m above the plains of tide tide of Soure. That testimony was considered a portion of 2.06 m to the top of the witness. Four areas were identified pollen and there is a change and composition of palinomorfos along the sedimentary sequence, dated on the basis of 2.767 years ± 40 years A.P. And at the top, 564 years A.P. The dominance of the environment largely over ali testimony is recorded by the presence of pollen from Rhizophora, who presented abundance maximum of 95.33%. The change occurring in the hydrodynamic and hydrology, both regionally and locally, seem to have caused a reduction in the dominance of the pollen of Rhizophora type 1 and the increase of Rhizophora type 2, which was accompanied by an increase in the abundance of other kinds of pollen indicators environments restinga and the várzea. Through the analysis of sediments in the area were unable to meet the current deposition of palinomorfos and again the dominance of the largely evident. The Índices evaluated ecological changes through the analysis of richness, diversity and equitability. In order that registration guide aims to provide data for the information of the evolution of Holocene higher in the coastal zone of Paraense. / Este trabalho apresenta uma análise dos palinomorfos (pólen e esporos), contidos em sedimentos holocênicos do testemunho Cajuúna da Planície de Maré de Soure, Ilha do Marajó, Pa. Foram identificados e quantificados, no mínimo, 300 grãos de pólen por subamostra, além dos esporos e pólen exótico, resultando em 21 táxons. A leitura das flutuações dos palinomorfos ao longo dos níveis estratigráficos, nos diagramas polínicos, possibilitou a individualização de eventos climáticos e também de possíveis mudanças na composição vegetal da área estudada. A análise palinológica foi realizada em um testemunho de 3,80 m da porção de supra maré da planície de maré de Soure. Desse testemunho, foi analisada a porção de 2,06m até o topo do testemunho. Quatro zonas palinológicas foram identificadas observando-se a mudança e composição dos palinomorfos ao longo da seqüência sedimentar, datada na base em 2,767 anos ± 40 anos A.P. e no topo, 564 anos A.P. A dominância de ambiente de manguezal ao longo de todo testemunho é registrada pela presença do pólen de Rhizophora, que apresentou abundância máxima de 95,33%. A variação ocorrente na hidrodinâmica e hidrologia, tanto regional como local, parecem ter provocado a redução da dominância do pólen de Rhizophora tipo 1 e o incremento de Rhizophora tipo 2, o que veio acompanhado de um aumento da abundância de outros tipos polínicos indicadores de ambientes de restinga e várzea. Através da análise polínica dos sedimentos de superfície foi possível conhecer a atual deposição de palinomorfos e novamente a dominância evidente do manguezal. Os índices ecológicos avaliaram as mudanças ocorridas através das análises de riqueza, diversidade e eqüitabilidade. De modo que esse registro polínico pretende fornecer dados para a informação da evolução do Holoceno superior na zona costeira paraense.

O leite produzido a ultra alta temperatura denominado oficiamente como UHT é o leite de maior aceitação no mercado consumidor brasileiro. Com a finalidade de ampliar o conhecimento sobre a segurança microbiológica do leite UHT, objetivou-se estudar tanto os Bacillus spp, que vêm sendo relatados como contaminantes do leite UHT no Brasil, como os eventuais esporos sobreviventes ao processamento. A partir de 65 análises de leite UHT para a determinação de microrganismos mesófilos aeróbios estritos e facultativos viáveis, no leite UHT procedente das indústrias sob Inspeção Federal no estado de São Paulo, 7 apresentaram contagens acima de 100 UFC/ml, indicando um percentual de 10,76 % de provas fora dos padrões para essa determinação, no período de jul a nov de 2003. Entretanto por atuação dos controles de qualidade das indústrias partidas foram inutilizadas e o leite que foi ao consumo apresentou 7,69% de microrganismos mesofílicos aeróbios acima dos padrões, sendo que 6.15% destes microrganismos foram considerados como Bacillus sporothermodurans. Dos isolamentos das contagens de microrganismos mesófilos acima dos padrões, foram efetuados estudos de seis cepas de Bacillus spp do leite UHT das indústrias, além de três cepas isoladas do leite UHT alvo de reclamações de consumidores procedente do Instituto Adolfo Lutz da capital de São Paulo. O objetivo do presente projeto foi, após a identificação cultural, microscópica, bioquímica e genética de culturas do Bacillus spp, estudar a patogenicidade das amostras em diversos modelos experimentais como: Teste do camundongo neonatos, alça ligada de coelho, inoculação intraperitoneal em camundongo BALB C e culturas celulares (Vero, HEp2 e Fibroblastos de Embrião de Galinha). As 3 amostras isoladas de leite de reclamações dos consumidores do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo foram tipificadas preliminarmente pela técnica de Espectroscopia Infra-Vermelho a Transformada Fourier (FT- IR) como Bacillus flexus, enquanto que as amostras isoladas do leite procedente de três indústrias de São Paulo apresentaram presença de B. flexus e B.oleronius e Bacillus sporothermodurans. Exemplares de B.flexus testados quanto a patogenicidade apresentaram efeito citopático nas culturas celulares Vero, HEP2 e Fibroblastos de Embrião de Galinha e morbidade em camundongo BALB C. O Bacillus sporothermodurans não apresentou patogenicidade a nenhum dos modelos biológicos citados. / The milk produced at ultra high temperature, denominated UHT, is the most popular milk in the Brazilian market. With the intention of increasing the knowledge of microbiologic safety in UHT milk, we concentrated our study on the Bacillus spp, described as the most important contaminants of UHT milk in Brazil, and on possible survivors of the processing procedures. From the 65 analysis of UHT milk collected to determine the presence of strict, aerobe, mesophile microorganisms and viable options, coming from industries under Federal Inspection in São Paulo state, 7 presented a microbial count higher than 100CFU/ml, indicating a percentage of 10.76% samples outside the standard for this determination, in the period between July and November 2003. However, due to the quality control in industries, batches were rendered useless and the milk that went for consumption presented 7.69% mesophile microorganisms above standard, being these organisms 6.15% was considered Bacillus sporothermodurans. From the isolation of mesophile Bacillus counts above average, 5 strains Bacillus spp species from UHT industries were studied, as well as 3 strains isolated from UHT milk denounced by consumers of São Paulo city\'s Adolfo Lutz Institute. The aim of the project, following cultural, microscopic, biochemical and genetic identification of the Bacillus spp, was to study pathogenicity in samples from several experimental models, such as: neonatal mice; rabbit ileum loops, intraperitoneal inoculation of BALB C mice and cell cultures: Vero, Hep2 and Chick Embryo Fibroblasts. The three isolated samples of milk denounced by São Paulo consumers were typified as Bacillus flexus by the Fourier Infrared Transformed Espectroscopy (IF-FR) technique, while isolated samples of milk from 3 industries in São Paulo, accused the presence of the B. flexus, B. oleronius and Bacillus sporothermodurans. Samples of the B. flexus tested in terms of pathogenicity presented a citopatic effect upon cell cultures Vero, HeP2 and Chick Embryo Fibroblasts and a morbidity in mice BalbC. The Bacillus Sporothermodurans did not present pathogenicity in any of the biological models mentioned.

Orientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Andréia Cristina Nakashima Vaz / Resumo: O tratamento térmico por UAT elimina formas vegetativas dos microrganismos, porém, formas esporuladas altamente resistentes ao calor podem permanecer nos produtos e após a germinação dos esporos são capazes de liberar toxinas causadoras de doenças transmitidas por alimentos (DTAs). No presente estudo, objetivou-se avaliar a qualidade microbiológica de produtos tratados por UAT, por meio da contagem de microrganismos heterotróficos aeróbios mesófilos, isolamento e contagem de bactérias do grupo do Bacillus cereus e de Clostridium perfringens, comparar lotes dos três produtos quanto a tais microrganismos, identificar a espécie dos isolados e a presença dos fatores de virulência de bactérias do grupo do B. cereus. Para isso, foram obtidas 75 amostras, sendo 25 de cada produto (de leite de cabra UAT, alimento com soja UAT e bebida de leite de cabra e soja UAT), de 5 diferentes lotes, no comércio do interior do Estado de São Paulo. Os resultados evidenciaram possíveis falhas de processamento e utilização de matéria-prima inadequada, uma vez que altas populações (>104UFC/mL) de microrganismos heterotróficos aeróbios mesófilos foram verificadas em 100% dos lotes de alimento com soja e bebida de leite de cabra e soja e 80% dos lotes de leite de cabra. Microrganismos do grupo do B. cereus foram isolados de 80% dos lotes de alimento com soja, e 60% dos lotes de bebida de leite de cabra e soja e leite de cabra, com populações superiores a 1018 UFC/mL. C. perfringens foi isolado de 20% d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Heat treatment by UHT (ultra-high temperature) eliminates the vegetative forms of microorganisms, however, sporulated forms highly resistant to heat can remain in the products and following spore germination are capable of releasing toxins that cause foodborne diseases (FD's). The objective of this study is to evaluate the microbiological quality of products submitted to UHT, namely goat milk, soy food, and goat and soy milk drinks, by the counting of heterotrophic aerobic mesophilic microorganisms, the isolation and counting of bacteria from the Bacillus cereus groups and Clostridium perfringens, comparing batches of the three products for such microorganisms, to identify the species of the isolated and the presence of the virulence factors of bacteria of the B. cereus group. For this, 75 samples were obtained, 25 of each product (from UAT goat milk, food with UAT soy and drink from goat milk and UAT soy) from 5 different lots, in the interior trade of the State of São Paulo. The results demonstrated possible failures in the processing and use of inadequate raw material since high population (>104 ) of heterotrophic aerobic mesophilic microorganisms were found in 100% of the lots of soy food and goat and soy milk drinks and 80% of the lots of goat milk. Microorganisms from the B. cereus group were isolated from 80% of the lots of soy food and 60% of the lots of goat and soy milk drinks, with population above 1018 . The C. perfringens microorganisms were isolated from 20% of the soy food lots, with population above 103 . In the comparison between the lots, the expiration date did not influence the population of the analyzed microorganisms, therefore, they were conveyed by the raw material used. Of the B. cereus isolated, 100% (29/29) showed amplification for the hbl complex gene, 96,5% (28/29) for the nhe complex gene and 75,8% (22/29) for t... Complete abstract click electronic access below / Mestre

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-30T11:24:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 234148 bytes, checksum: e87c51395b549c59f32533fea0cc9040 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T11:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 234148 bytes, checksum: e87c51395b549c59f32533fea0cc9040 (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho teve como objetivo investigar a presença de Paenibacillus larvae subsp. larvae em mel de colméias do Estado do Piauí, pelo método analítico oficial brasileiro, e avaliar modificações nesta metodologia para reduzir seu limite de detecção. Esporos de P. larvae subsp. larvae não foram detectados em mel das colméias de diferentes regiões do Estado do Piauí. Comparando meios de cultura, o ágar P. larvae isolou maior número esporos desta bactéria presentes em mel e inibiu do mesmo modo contaminantes aeróbios presentes. A diluição de uma parte de mel em quatro partes de solução salina fosfatada tamponada recuperou maior número de esporos P. larvae subsp. larvae presentes em mel. As forças centrífugas 6000 g e 8000 por 30 ou 40 minutos não diferiram entre si, contudo recuperaram maior número de esporos de P. larvae subsp. larvae em comparação com a oficialmente recomendada. A redução no limite de detecção é relevante para analise de mel, principalmente, quando o patógeno encontra-se em quantidades mínimas, tanto na colméia quanto no produto comercializado. / This work had the following aims: detect the presence of Paenibacillus larvae subsp. larvae spores in honey collected in Piauí State apiaries using official Brazilian analytical method and to verify modifications in this methodology to reduce its detection limit. Spores of P. larvae subsp. larvae were not found in honey of hives from different regions of Piauí State. Comparing mediums, P. larvae agar isolated bigger spores quantities of these bacteria found in honey and inhibited, in the same way, other aerobical bacteria presented. Addition of one part of honey in four parts of phosphate buffer saline pH 7.2 isolated a bigger number of P. larvae subsp. larvae spores presented in honey. Comparisons between centrifuge forces of 6000 g and 8000 during 30 or 40 minutes showed that they were not different, however they recuperated a bigger number of P. larvae subsp. larvae spores than centrifuge force recommended in Brazilian law. Reduction in detection limit is important to honey analyses, mainly when pathogen is present in minimal quantities in hives or in commercialized product.