Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-03T18:50:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 128394 bytes, checksum: eade9f83480bcb6c288ec63ffe339c8e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T18:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 128394 bytes, checksum: eade9f83480bcb6c288ec63ffe339c8e (MD5) Previous issue date: 2005-02-22 / Esporulação de Alternaria solani é normalmente escassa e facilmente paralisada quando em cultivos in vitro. Foi obtido e validado um protocolo para induzir esporulação em A. solani baseado em fragmentação e desidratação de micélio. Para tal, quatro isolados oriundos de três municípios foram usados em ensaios de efeito da umidade, injúria do micélio, luz, fotoperíodo e meio de cultura, na esporulação. Maior esporulação ocorreu quando se cresceram culturas de A. solani em meio V8 sob agitação e triturou-se o micélio o qual foi vertido em placas com meio BDA (pH=6,5). As placas sem tampa, para permitir a desidratação, foram mantidas a 25 ± 2 o C, sob fotoperíodo de 12 h de luz negra por 60 horas. O protocolo foi validado com 20 isolados de A. solani de diferentes hospedeiros, localidades, idades e modo de armazenamento. Quantificaram-se a esporulação, germinação de conídios e infectividade do inóculo em tomateiro e batateira. Todos os isolados esporularam, e a germinabilidade dos conídios foi superior a 96%. Maiores valores de frequência de infecção ocorreram em folíolos do terço médio de batateira. Para avaliar o efeito das repicagens sucessivas na esporulação, efetuaram-se 24 repicagem periódicas, a cada 7 dias. Em cada repicagem, empregou-se o protocolo para induzir a esporulação e se quantificou a produção de conídios. Pelo menos uma das colônias de cada isolado esporulou até a 10a repicagem. / Sporulation of Alternaria solani is scarse and commonly reduced when the fungus is cultivated in vitro. A procedure to induce sporulation based on mycelial fragmentation and dehydration was developed and validated. Four isolates of A. solani were used in experiments to assess the effects of moisture, mycelial wounding, light quality and photoperiod, and culture media on conidia production. Sporulation was higher when the fungus was grown on V8 medium at 25 o C in darkness with agitation, followed be mycelium grinding and pouring to Petri dishes containing PDA (pH 6.5). In addition, colonies were incubated at 25 ± 2 o C under near ultraviolet light and 12-hour photoperiod. The procedure was validated with 20 isolates of A. solani from different hosts, places, ages, and storage conditions. Conidia production, germination, and infectivity were quantified. All isolates sporulated and minimum conidia germination was 96%. Inoculations with conidia suspension of all isolates resulted in lesions. Infection frequency was highest when leaflets of the middle third of tomato plants were inoculated. The effect of subculturing on A. solani sporulation was also assessed. After 24 subcultures, at every 7 days. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-17T15:16:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1021215 bytes, checksum: ab7bc485241cff731ada0b1c769f7691 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-17T15:16:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1021215 bytes, checksum: ab7bc485241cff731ada0b1c769f7691 (MD5) Previous issue date: 2015-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho visa contribuir para o melhor entendimento da aplicabilidade de esporos de bactérias aeróbias como um indicador da eficiência do tratamento de água. O trabalho consistiu, essencialmente, na pesquisa de esporos de bactérias aeróbias ao longo do processo de tratamento da estação de tratamento de água da Universidade Federal de Viçosa (ETA UFV). A remoção de esporos foi discutida comparativamente à: (i) estimativa da remoção de cistos de Giardia e de oocistos de Cryptosporidium, a partir de dados de remoção de turbidez na ETA UFV e do emprego de equações empíricas de literatura que relacionam a remoção de cistos de Giardia e de oocistos com a de turbidez; (ii) estimativa da inativação de cistos de Giardia a partir dos dados Ct da ETA UFV e do emprego de um modelo empírico de literatura de inativação de cistos por cloração em função de Ct. Os resultados obtidos indicaram que: (i) esporos de bactérias aeróbias foram removidos de forma consistente ao longo das etapas do tratamento; (ii) a remoção de turbidez no ciclo completo de clarificação (decantação + filtração) foi inferior à de esporos de bactérias aeróbias; (iii) a remoção observada de esporos de bactérias aeróbias no ciclo completo de clarificação (decantação + filtração) foi inferior à remoção estimada, com base na remoção de turbidez, de cistos de Giardia e próxima à de oocistos de Cryptosporidium; (iv) a inativação observada de esporos de baterias aeróbias por cloração foi inferior à inativação estimada, com base nos valores de Ct, de cistos de Giardia. Infere-se, pois, que a remoção / inativação de esporos apresenta potencial de indicador da remoção / inativação de (oo)cistos de Giardia e Cryptosporidium e que a turbidez possa ser utilizada como estimativa conservadora da remoção de esporos. / This work aims at contributing to the understanding of the use aerobic bacterial spores as an indicator of drinking-water treatment efficiency. Essentially, the work consisted of monitoring aerobic spores along the treatment processes in the water treatment plant of the University of Viçosa (UFV WTP). Spores removal was compared to: (i) Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts removal estimates, based on turbidity removal data from UFV WTP and the use of literature empirical equations which relate the removal of Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts to turbidity removal; (ii) Giardia cysts inactivation estimates, based on UFV WTP Ct values and a literature empirical model which relates Giardia cysts inactivation to Ct. The results indicated that: (i) aerobic bacterial spores were consistently removed along the UFV WTP treatment processes; (ii) turbidity removal in the whole clarification cycle (sedimentation + filtration) was below that of bacterial spores; (iii) the observed removal of bacterial spores in the whole clarification cycle (sedimentation + filtration) was below the removal estimates, based on turbidity removal, for Giardia cysts and close to that for Cryptosporidium oocysts; (iv) the observed inactivation of bacterial spores with chlorination was below the inactivation estimates, based on Ct values, for Giardia cysts. Thus, it is suggested that the removal / inactivation of aerobic bacterial spores can be potentially used as an indicator of removal / inactivation of Giardia and Cryptosporidium (oo)cysts, a well as that turbidity can be used as a conservative estimate of bacterial spores removal / Não foi encontrado o cpf do autor. Dissertação publicada sem o Termo de Autorização, apesar de solicitado via e-mail ao autor.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Vegetal / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:06:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 298331.pdf: 2245585 bytes, checksum: 63ea90684878d510b9a1a821a06598a9 (MD5) / A distribuição da vegetação mundial vem se alterando ao longo do tempo, mas atualmente as alterações climáticas estão ocorrendo rapidamente devido ao aumento da emissão de gases que causam o "efeito estufa" e o aquecimento global. Acrostichum danaeifolium Langsd. & Fisch. (Polypodiopsida, Pteridaceae) é uma pteridófita que cresce tipicamente em ambientes salobres ou salinos que cercam as costas, sendo também encontrada em alguns manguezais da Ilha de Santa Catarina. Considerados ecossistemas costeiros de transição entre os ambientes terrestre e marinho, os manguezais possuem riqueza e importância biológica como grandes "berçários" naturais. Esse ecossistema poderá ser severamente atingido pelas mudanças climáticas. Conhecer a fisiologia de sua vegetação e suas possíveis adaptações é de fundamental importância para sua preservação. Dessa forma o estudo da germinação de A. danaeifolium e de seu desenvolvimento gametofítico está implicado no conhecimento de suas características reprodutivas, visando à conservação e o manejo da espécie. O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos de variações no pH, temperatura, salinidade e da radiação UV B (RUV B) na porcentagem de germinação de esporos de A. danaeifolium, além de verificar alterações morfofisiológicas e bioquímicas em gametófitos jovens submetidos à RUV B. Frondes férteis da espécie foram coletadas na área de preservação permanente (APP) do manguezal do Itacorubi situado na região centro-oeste da Ilha de Santa Catarina, SC, Brasil. Esporos foram filtrados em papel entretela e armazenados a 7ºC. O teste de germinação foi realizado em sala de cultivo a 25ºC (27 mol m-2s-1). Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na germinação de esporos nos diferentes pHs utilizados (4 a 9). Temperaturas amenas (15-20ºC) inibiram e/ou retardaram a germinação, enquanto que na temperatura de 30ºC encontrou-se a máxima germinação da espécie. Observou-se uma diminuição na porcentagem de germinação com o aumento da salinidade e um retardo na germinação de esporos, com 7 dias de cultivo, submetidos à RUV B. Pode-se observar também redução de crescimento em gametófitos submetidos à RUV B, bem como o surgimento de ramificações anômalas, em imagens capturadas por microscópio confocal de varredura a laser. Alterações ultraestruturais no sistema de membranas dos cloroplastos e maior presença de grãos de amido e plastoglóbulos foram observadas em gametófitos submetidos à RUV B. Não foram observadas diferenças nas curvas rápidas de luz, obtidas pelo fluorímetro PAM, tanto nos gametófitos submetidos à RUV B, quanto no controle. Houve variação na concentração de clorofilas com a diminuição de clorofila a e aumento de clorofila b em gametófitos submetidos à RUV B. Não houve diferença estatisticamente significativa com relação aos carotenóides, mas observou-se aumento de compostos fenólicos em gametófitos cultivados sob RUV B / The distribution of the global vegetation has been changing over time, but now climate change is occurring rapidly due to increased emission of gases causing the "greenhouse effect" and global warming. Acrostichum danaeifolium Langsd. & Fish. (Polypodiopsida, Pteridaceae) is a fern that typically grows in brackish or saline surrounding the coast being also found in some mangroves of the island of Santa Catarina. Coastal ecosystems considered transitional between terrestrial and marine environments, mangroves have wealth and great biological importance as natural "nurseries". This ecosystem may be severely affected by climate change. Knowing the physiology of its vegetation and its possible adaptations has fundamental importance to its preservation. Thus the study of germination and development of A. danaeifolium gametophyte is implicated in the knowledge of their reproductive characteristics, aiming at the conservation and management of the species. The objective of this study was to evaluate the effects of variations on pH, temperature, salinity and UV B radiation in the germination of spores of A. danaeifolium, correlating them the likely changes caused by climate change, and to identify morphophysiological and biochemical changes in young gametophytes undergo UV B radiation. Fertile fronds of this species were collected in permanent preservation areas (APP) of mangrove Itacorubi located in the central-west of Santa Catarina Island, SC, Brazil. Spores were filtered lens paper and stored at 7 º C. The germination test was conducted in culture room at 25°C (27 mol m-2s-1). There were no statistically significant differences in germination of spores used in the different pHs (4-9). Mild temperatures (15-20 º C) inhibited and / or delayed germination, while the temperature of 30°C was found maximum germination of the species. There was a decrease in germination with increasing salinity and a delay in spore germination, with 7 days of culture, under UV B radiation. One can also observe a reduction of growth in gametophytes subjected to UV B radiation as well as the emergence of anomalous branches in images captured by confocal laser scanning microscopy. Ultrastructural changes in the membrane system of chloroplasts and greater presence of starch grains and plastoglobules were observed in gametophytes subjected to UV B radiation. No differences were observed in the rapid light curves, obtained by the PAM fluorometer, both in gametophytes subjected to UV B radiation and in control. There were variations in chlorophyll concentration, with decreased of chlorophyll a and increase of chlorophyll b. There was no statistically significant difference with respect to carotenoids, but there was an increase of phenolic compounds in gametophytes grown under UV B radiation

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos. / Made available in DSpace on 2013-06-25T19:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 309554.pdf: 1908260 bytes, checksum: 9ddec5d35aa224ea591bcf27308c16ab (MD5) / O Brasil é o maior produtor de tomate destinado à produção industrial e o maior consumidor de produtos de tomate da América do Sul. Sendo assim, a qualidade da matéria-prima deve ser garantida de forma a se obter um produto que atenda aos padrões de segurança. Bactérias e fungos podem ser potenciais contaminantes de produtos de tomate, podendo apresentar contaminações por fungos e bactérias formadoras de esporos, como o gênero Byssochlamys spp. e Bacillus coagulans. Portanto, o amplo conhecimento do comportamento destes microrganismos submetidos a processos de inativação é relevante para a constante melhoria dos tratamentos de esterilização, a fim de garantir a segurança e a qualidade de produtos de tomate sujeitos à contaminação por microrganismos termorresistentes. Neste contexto, o objetivo geral deste trabalho foi determinar a resistência de esporos de Byssochlamys fulva IOC 4518 e Bacillus coagulans ATCC 7050 em polpa de tomate comercial, sob condições isotérmicas, não isotérmicas e de altas pressões hidrostáticas. Primeiramente, um estudo sobre a idade e temperatura de esporulação destes microrganismos foi realizado para verificar as condições de maior termorresistênica, sendo 30 e 84 dias 30 °C para esporos de B. fulva e 10, 20 e 30 dias a 37, 45 e 50 °C para esporos de B. coagulans. Os fatores analisados não influenciaram a termorresistência de esporos de B. coagulans, sendo seus esporos produzidos nas condições de 10 dias e 37 °C. Porém, os esporos de B. fulva foram mais termorresistentes quando obtidos a 84 dias a 30 °C, sendo estas condições adotadas para o cultivo da suspensão de esporos. A partir deste estudo, a termorresistência de esporos de B. fulva (90 a 100 °C) e B. coagulans (95 a 105 °C) foi verificada em polpa de tomate ajustada para 4 e 10 °Brix, utilizando a metodologia de tubo TDT (tempo de morte térmica). Como já esperado, a temperatura influenciou nos parâmetros de inativação, sendo que o teor de sólidos solúveis não apresentou influência significativa (p > 0,05) sobre estes parâmetros, para ambos os microrganismos, dentro da faixa estudada. Como neste estudo os esporos de B. coagulans apresentaram maior termorresistência, estes foram utilizados para a sequência do trabalho. A fim de verificar se diferentes metodologias influenciariam nos parâmetros de inativação de esporos de B. coagulans, um estudo da resistência térmica (95 a 120 °C) de esporos deste microrganismo em polpa de tomate a 4 °Brix, utilizando as metodologias de tubo capilar e tubo TDT, foi realizado e os resultados obtidos foram comparados. A inativação térmica em tubo capilar apresentou, além das fases de ombro e exponencial de destruição que haviam sido observadas na metodologia em tubo TDT, uma cauda que permaneceu, pelo menos, os 60 minutos de experimento. Com os dados obtidos através do estudo da inativação térmica dos esporos de B. coagulans em polpa de tomate a 4 °Brix, utilizando o método de tubo capilar, a predição da inativação de esporos de B. coagulans sob condições de temperatura variáveis foi realizada com a aplicação de modelo não isotérmico e o modelo foi validado. A cinética das curvas de inativação preditas e observadas foi similar, apresentando o mesmo comportamento (ombro, exponencial e cauda). Finalmente, a resistência de esporos de B. coagulans em polpa de tomate a 4 °Brix foi analisada com o uso de alta pressão hidrostática combinada com temperatura. Pressões de 300 a 600 MPa e temperaturas de 50 e 60 °C foram testadas por períodos de 1 a 39 minutos. Houve a formação de duas fases, sendo estas bastante pronunciadas quando pressões de 300 a 450 MPa foram aplicadas, para ambas as temperaturas. Os modelos preditivos estabelecidos neste trabalho são relevantes para estimar o comportamento de microrganismos formadores de esporos em produtos de tomate, dentro dos limites analisados, podendo contribuir para a melhoria dos tratamentos utilizados pela indústria, a fim de garantir a segurança e qualidade dos produtos, diminuindo assim os riscos à saúde do consumidor e trazendo benefícios econômicos para a indústria de alimentos. / Brazil is considered the largest producer of tomatoes for the industry and the largest consumer of tomato products in South America. Therefore, the quality of the tomatoes should be ensured in order to obtain a high quality product. Bacteria and moulds may be a potential contaminant of tomato products, which may present contamination of spore-forming microorganisms, such as Byssochlamys spp. and Bacillus coagulans. Therefore, the extensive knowledge of these microorganisms behavior undergoes to inactivation process is relevant to the continuous improvement of the processes to guarantee the safety and quality of tomato products. Accordingly, the aim of this study was to determine the resistance of Byssochlamys fulva IOC 4518 and Bacillus coagulans ATCC 7050 spores in commercial tomato pulp, under isothermal, non-isothermal and high hidrostatic pressure conditions. Firstly, a study of the influence of different ages (30 and 84 days old at 30 °C) on the heat resistance of B. fulva; and different ages (10, 20, and 30 days old) and sporulation temperatures (37, 45, and 50 °C) on the heat resistance of B. coagulans were evaluated. The analyzed factors did not influence the heat resistance of B. coagulans spores and the spores were produced at 37 °C for 10 days. However, B. fulva spores were more heat resistant when cultivated for 84 days at 30 °C being these conditions used to produce the spores# suspension. From this study, the heat resistance of B. coagulans (95 to 105 °C) and B. fulva (90 to 100 °C) spores were analyzed in tomato pulp adjusted to 4 and 10 °Brix, using the TDT (thermal death time) tube methodology. As expected, the inactivation parameters were influenced by the temperature, and the soluble solids showed no significant influence (p > 0.05) on these parameters, for both microorganisms in the studied range. As B. coagulans spores presented higher heat resistance, these were used for the following studies. To verify whether different methodologies would influence the inactivation parameters of the B. coagulans spores, the heat resistance (95 to 120 °C) of this bacteria spores in tomato pulp at 4 °Brix using capillary and TDT tubes were realized, and the experimental data were compared. The thermal inactivation in capillary tube showed, apart from the shoulder and the exponential phase as observed in TDT tube, a tail that remained at least up to 60 minutes of the experiment. Throughout the isothermal inactivation data of B. coagulans spores in tomato pulp at 4 °Brix using capillary method the spores inactivation kinetics under varying temperatures could be predicted by the non-isothermal model. The non-isothermal model was validated with experimental inactivation data of B. coagulans spores in tomato pulp at 4 °Brix, using capillary tube method. Similar behavior was observed between observed and predicted inactivation kinetics (shoulder, exponential and tail phases). Lastly, the combined effect of HHP and temperature on B. coagulans spore survival in tomato pulp at 4 °Brix was evaluated. Pressures from 300 to 600 MPa and temperatures of 50 and 60 °C were applied from 1 to 39 minutes. There was a two phases formation and these were greatly pronounced when pressures from 300 to 450 MPa was applied, for both temperatures studied. The predictive models established in this study are relevant to estimate the behavior of spore-forming microorganisms in tomato products, in the studied range. The findings can contribute to improve the efficiency of treatments applied by the industries to ensure the quality and safety of the food products, and so reducing the consumer health risks and bringing economic benefits to the food industry.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Vegetal. / Made available in DSpace on 2012-10-21T19:01:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 207222.pdf: 1883046 bytes, checksum: d9ac2452bf1b0d8c032ff32bed996457 (MD5) / As pteridófitas constituem um importante grupo de organismos da flora brasileira. São importantes grupos de plantas utilizados na ornamentação de casas e jardins. Dados fisiológicos e morfológicos sobre essas plantas são restritos. Portanto, este trabalho teve a finalidade de estudar métodos que contribuam para otimizar sua propagação e conservação. Foram verificados aspectos da morfologia, viabilidade de esporos e desenvolvimento inicial de quatro espécies: Blechnum brasiliense Desv., Cyathea corcovadensis (Raddi) Domin., Cyathea delgadii Sternb. e Saccoloma inaequale (Kze) Mett. Frondes férteis foram coletadas no Parque Natural Municipal São Francisco de Assis, Blumenau-SC. As frondes secaram em papel de filtro à temperatura ambiente. Esporos foram separados dos esporângios por filtragem em papel entretela e armazenados a 7±1oC. Esporos foram analisados em microscópio óptico e em microscópio Eletrônico de Varredura. Experimentos para estabelecer as curvas de germinação, foram realizados em sala de cultivo a 20 ± 3oC, densidade de fluxo de fótons de 33 µmol.m-2.s-1e fotoperíodo de 16 horas. B.brasiliense atingiu 65% de germinação e o `t (tempo médio de germinação) foi de 12,54 dias. C. corcovadensis atingiu 31,75 % de germinação e o `t foi de 15,23 dias. C. delgadii apresentou 75 % de esporos germinados e o `t foi de 12,99 dias. S. inaequale apresentou 60% de germinação e seu `t foi de 17,81 dias. Estudou-se o efeito de 5, 22 ,42, 62 e 100% de irradiância na germinação de B. brasiliense (Junho,2003) e C. delgadii (Abril,2003). As s maiores porcentagens de germinação ocorreram sob 22 e 5% de irradiância. Gametófitos na fase cordiforme (com 180 a 200 dias de cultivo), foram analisados sob microscópio óptico e eletrônico de varredura. Todas as espécies apresentaram tricomas glandulares. Para o estudo da porcentagem de fecundação, gametófitos cordiformes foram transferidos para bandejas contendo solo: terra roxa e composto orgânico (3:1) e mantidos em sala de cultivo. B. brasiliense apresentou 91,5% de esporófitos após 303 dias de cultivo. C. corcovadensis apresentou 35,83% de esporófitos após 264 dias de cultivo. C. delgadii apresentou 79,16% de esporófitos após 249 dias de cultivo e S. inaequale, 48,39 % de esporófitos após 295 dias de cultivo. A análise de crescimento relativo (TCR) em altura da maior fronde, teve início quando os esporófitos apresentavam 2 a 3 cm de altura. B. brasiliense apresentou TCR de 2,19 cm/cm/ano. C. corcovadensis apresentou TCR de 2,04 cm/cm/ano. C delgadii e S. inaequale apresentaram TCR de 2,39 e 2,99 cm/cm/ano respectivamente.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T16:13:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T03:17:12Z : No. of bitstreams: 1 147232.pdf: 8736264 bytes, checksum: 969de9cd192ee2bfec5be86c67714876 (MD5)

O leite produzido a ultra alta temperatura denominado oficiamente como UHT é o leite de maior aceitação no mercado consumidor brasileiro. Com a finalidade de ampliar o conhecimento sobre a segurança microbiológica do leite UHT, objetivou-se estudar tanto os Bacillus spp, que vêm sendo relatados como contaminantes do leite UHT no Brasil, como os eventuais esporos sobreviventes ao processamento. A partir de 65 análises de leite UHT para a determinação de microrganismos mesófilos aeróbios estritos e facultativos viáveis, no leite UHT procedente das indústrias sob Inspeção Federal no estado de São Paulo, 7 apresentaram contagens acima de 100 UFC/ml, indicando um percentual de 10,76 % de provas fora dos padrões para essa determinação, no período de jul a nov de 2003. Entretanto por atuação dos controles de qualidade das indústrias partidas foram inutilizadas e o leite que foi ao consumo apresentou 7,69% de microrganismos mesofílicos aeróbios acima dos padrões, sendo que 6.15% destes microrganismos foram considerados como Bacillus sporothermodurans. Dos isolamentos das contagens de microrganismos mesófilos acima dos padrões, foram efetuados estudos de seis cepas de Bacillus spp do leite UHT das indústrias, além de três cepas isoladas do leite UHT alvo de reclamações de consumidores procedente do Instituto Adolfo Lutz da capital de São Paulo. O objetivo do presente projeto foi, após a identificação cultural, microscópica, bioquímica e genética de culturas do Bacillus spp, estudar a patogenicidade das amostras em diversos modelos experimentais como: Teste do camundongo neonatos, alça ligada de coelho, inoculação intraperitoneal em camundongo BALB C e culturas celulares (Vero, HEp2 e Fibroblastos de Embrião de Galinha). As 3 amostras isoladas de leite de reclamações dos consumidores do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo foram tipificadas preliminarmente pela técnica de Espectroscopia Infra-Vermelho a Transformada Fourier (FT- IR) como Bacillus flexus, enquanto que as amostras isoladas do leite procedente de três indústrias de São Paulo apresentaram presença de B. flexus e B.oleronius e Bacillus sporothermodurans. Exemplares de B.flexus testados quanto a patogenicidade apresentaram efeito citopático nas culturas celulares Vero, HEP2 e Fibroblastos de Embrião de Galinha e morbidade em camundongo BALB C. O Bacillus sporothermodurans não apresentou patogenicidade a nenhum dos modelos biológicos citados. / The milk produced at ultra high temperature, denominated UHT, is the most popular milk in the Brazilian market. With the intention of increasing the knowledge of microbiologic safety in UHT milk, we concentrated our study on the Bacillus spp, described as the most important contaminants of UHT milk in Brazil, and on possible survivors of the processing procedures. From the 65 analysis of UHT milk collected to determine the presence of strict, aerobe, mesophile microorganisms and viable options, coming from industries under Federal Inspection in São Paulo state, 7 presented a microbial count higher than 100CFU/ml, indicating a percentage of 10.76% samples outside the standard for this determination, in the period between July and November 2003. However, due to the quality control in industries, batches were rendered useless and the milk that went for consumption presented 7.69% mesophile microorganisms above standard, being these organisms 6.15% was considered Bacillus sporothermodurans. From the isolation of mesophile Bacillus counts above average, 5 strains Bacillus spp species from UHT industries were studied, as well as 3 strains isolated from UHT milk denounced by consumers of São Paulo city\'s Adolfo Lutz Institute. The aim of the project, following cultural, microscopic, biochemical and genetic identification of the Bacillus spp, was to study pathogenicity in samples from several experimental models, such as: neonatal mice; rabbit ileum loops, intraperitoneal inoculation of BALB C mice and cell cultures: Vero, Hep2 and Chick Embryo Fibroblasts. The three isolated samples of milk denounced by São Paulo consumers were typified as Bacillus flexus by the Fourier Infrared Transformed Espectroscopy (IF-FR) technique, while isolated samples of milk from 3 industries in São Paulo, accused the presence of the B. flexus, B. oleronius and Bacillus sporothermodurans. Samples of the B. flexus tested in terms of pathogenicity presented a citopatic effect upon cell cultures Vero, HeP2 and Chick Embryo Fibroblasts and a morbidity in mice BalbC. The Bacillus Sporothermodurans did not present pathogenicity in any of the biological models mentioned.

A água de coco, como comercializada atualmente, é esterilizada e adicionada de conservante químico ou antioxidante, o que ocasiona a redução de suas qualidades sensorial e nutricional. Para evitar esses efeitos indesejados tem se estudado o aquecimento da água de coco através da radiação por micro-ondas, o que possibilitaria uma bebida de melhor qualidade sensorial e sem adição de conservante ou com menor quantidade dessa substância. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar a viabilidade da pasteurização da água de coco por micro-ondas, utilizando esporos de B. coagulans como indicador biológico do processo. Esporos de B. coagulans CCGB (LFB-FIOCRUZ) 1433 foram inoculados em amostras de água de coco, obtida diretamente de frutos verdes (Cocos nucífera L.) e previamente acidificada (ácido ascórbico e cítrico), seguida de pasteurização em micro-ondas com frequência de 2450 MHz. Os ensaios, provenientes de um Delineamento Central Composto Rotacional, com 4 variáveis (temperatura, quantidade e composição dos ácidos e potência do aparelho de micro-ondas) foram realizados aleatoriamente, com tempo de processo de até 20 minutos. Os testes foram conduzidos com 3 repetições do ponto central. Também foi realizado o processo em manta de aquecimento a fim de comparar os dois métodos. Os resultados da inativação foram expressos em log número de esporos/mL de água de coco. A temperatura é o fator preponderante para o processo de pasteurização da água de coco através da análise dos resultados obtidos pela DCCR. Também foi possível observar que, nas seguintes condições: a) potência de 120 W; b) 76 mg de ácidos adicionados à bebida e c) composição dos ácidos de 22% ascórbico e 78% cítrico, houve uma separação dos resultados em dois grupos. Um grupo à temperatura de 86 °C, em que, a redução da população de esporos foi menor (entre 0,5 log e 3,7 log número de esporos/mL de água de coco), e outro à temperatura de 92 °C, que apresentou maiores reduções logarítimicas do micro-organismo (entre 3,4 log e 7,0 log número de esporos/mL de água de coco). Realizado o teste ANOVA, ficou comprovado que o aumento predito foi significativo. Houve diferença estatisticamente significativa na comparação entre o aquecimento por micro-ondas e o convencional. Porém, essa diferença não foi considerada uma vez que microbiologicamente pode ser desprezada. Quanto ao tempo de processo, são necessários, em média, 10 a 15 minutos de retenção na temperatura desejada para atingir o maior nível de inativação de esporos nas condições do ponto central (89 °C, 125 W, 75 mg de ácidos adicionados à água de coco e a composição desses ácidos de 75% cítrico e 25% ascórbico). A pasteurização da água de coco por micro-ondas mostrou-se viável, mas outros estudos são necessários para otimizar o processamento. / Coconut water, as currently marketed, is sterilized and added with chemical preservative or antioxidant, which reduces its sensory and nutritional qualities. In order to avoid these undesired effects, the heating of coconut water through microwaves radiation has been studied, which would allow a drink of better sensorial quality and without addition of preservatives or with reduced amount of these substances. The objective of this study was to evaluate the viability of the pasteurization of coconut water by microwave, using spores of B. coagulans as biological indicator of the process. Spores of B. coagulans CCGB (LFB-FIOCRUZ) 1433 were inoculated in samples of coconut water, obtained directly from green fruits (Cocos nucífera L.) and previously acidified (ascorbic and citric acid), followed by pasteurisation using microwaves with frequency of 2450 MHz. The tests, from a Rotational Composite Central Design, with 4 variables (temperature, quantity and composition of the acids and power of the microwave apparatus) were carried out randomly, with a process time of up to 20 minutes. The tests were conducted with 3 replicates of the central point. The conventional heating process was also carried out in order to compare the two methods. Inactivation results were expressed as log of spores /mL of coconut water. Temperature is the preponderant factor for the process of pasteurization of coconut water through the analysis of the DCCR. It was also possible to observe that, under the following conditions: a) power of 120W; b) 76 mg of acids added to the beverage and c) composition of acids of 22% ascorbic and 78% citric acid, the results were separated into two groups: one group at a temperature of 86 °C, where the reduction of the spore population was lower (between 0,5 log and 3,7 log of spores/mL of coconut water), and another one at a temperature of 92 °C, which presented higher logarithmic reductions of the microorganism (between 3,4 log and 7,0 log of spores/mL of coconut water). Once the ANOVA test was performed, it was verified that the predicted increase was significant. There was a difference statistically significant between conventional and microwave heating. However, this difference was not taken into account because microbiologically it could be neglected. As for processing time, an average of 10 to 15 minutes of retention at the desired temperature is required to achieve the highest level of inactivation of spores at the center point conditions (89 °C, 125 W, 75 mg of acids added to the cocnut water and the composition of acids of 75% cítrico e 25% ascórbico). The pasteurisation of coconut water by microwave has proved to be feasible, but other studies are needed to optimize processing.

Esporos de Bacillus subtilis podem ser utilizados como veículos vacinais capazes de expressar ou adsorver proteínas heterólogas em sua superfície. Estudos recentes indicaram que esporos de B. subtilis também conferem um forte efeito adjuvante para vacinas baseadas em proteínas purificadas administradas por via parenteral. Nesse cenário, o objetivo do presente projeto foi avaliar o papel adjuvante dos esporos de B. subtilis e viabilizar sua utilização como carregadores de vacinas de DNA pelo método da biobalística (gene gun). Nesta metodologia, os esporos foram utilizados como substitutos das micropartículas de ouro usualmente empregadas, mantendo a capacidade de transfecção de células eucarióticas in vitro, e produção de anticorpos específicos em camundongos C57BL/6 imunizados com o plasmídeo vacinal pgDE7h (que codifica para uma forma atóxica da oncoproteína E7 do HPV-16). Além disso, esporos de B. subtilis foram capazes de ativar células dendríticas in vitro e, quando coadministrados a pgDE7h pela via intramuscular, conferiram um aumento de 50% na proteção anti-tumoral de animais previamente transplantados com a linhagem tumoral TC-1 (que expressa a proteína E7 do HPV-16), em uma relação dose-dependente. / Bacillus subtilis spores can be used as vaccine vehicles capable of to display or adsorb heterologous proteins in its surface. Recent studies have indicated that spores of B. subtilis confer a strong adjuvant effect for vaccines based on purified proteins administered by the parenteral route. In this scenario, the objective of this project is to evaluate the adjuvant role of B. subtilis spores e viabilize its use as DNA vaccine carriers of biolistic method (gene gun). In this methodology, the spores are used as gold microparticles substitutes usually employed, maintaining the ability to transfect eukaryotic cells in vitro and production of specific antibodies in C57BL / 6 mice immunized with the vaccine plasmid pgDE7h (encoding a non-toxic form of the E7oncoprotein of HPV-16). Additionally, spores of B. subtilis were able to activate dendritic cells in vitro when co-administered intramuscularly to pgDE7h, conferring an increase of 50% of anti-tumor protection in animals previously transplanted with the TC-1 tumor cell line (expressing the E7 protein of HPV-16) in a dose-dependent manner.

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