Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-14T15:03:52Z No. of bitstreams: 1 marcelladealmeidapassarella.pdf: 2836466 bytes, checksum: fbbb0b0cabcf2306412b24731f01fa85 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-06-27T14:43:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marcelladealmeidapassarella.pdf: 2836466 bytes, checksum: fbbb0b0cabcf2306412b24731f01fa85 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-27T14:43:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcelladealmeidapassarella.pdf: 2836466 bytes, checksum: fbbb0b0cabcf2306412b24731f01fa85 (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / A família Rhabdoweisiaceae Limpr. inclui musgos acrocárpicos, de tamanho pequeno a médio, que crescem, predominantemente como tufos e ocorrem, geralmente, sobre rochas e solo. A circunscrição da família é controversa, sendo sua monofilia sustentada por dados moleculares. O presente trabalho tem como objetivo realizar o estudo palinológico de espécies de Rhabdoweisiaceae Limpr. ocorrentes nas Américas e interpretar as relações entre as características palinológicas e as estratégias ecológicas das espécies estudadas, que pertencem aos gêneros Amphidium Schimp.; Arctoa Bruch & Schimp.; Cynodontium Schimp; Dichodontium Schimp.; Dicranoweisia Lindb. ex Milde; Kiaeria I. Hagen; Oncophorus (Brid.) Brid.; Oreas Brid.; Oreoweisia (Bruch & Schimp.) De Not.; Rhabdoweisia Limpr. Os esporos foram observados sob microscópio de luz antes e após acetólise e sob microscópio eletrônico de varredura e de transmissão. Para a avaliação das relações entre a morfologia dos esporos e as estratégias ecológicas foi realizada a análise de agrupamento, considerando os tipos de elementos de ornamentação, espessura do esporoderma polaridade, condição de tamanho, área apertural, forma de vida e substrato. As espécies estudadas apresentam esporos de tamanho pequeno a médio, com simetria radial e âmbito subcircular, são heteropolares ou apolares. O esporoderma é formado por intina, exina e perina. Os elementos de ornamentação permitiram a caracterização de quatro tipos morfológicos. Das 23 espécies estudadas, nove, incluídas em três gêneros apresentam esporos anisomórficos, sendo aqui relatados pela primeira vez. Os esporos das espécies de Amphidium Schimp. apresentam características palinológicas que permitem diferenciá-las das demais espécies integrantes de Rhabdoweisiaceae Limpr. Os padrões de ornamentação da superfície do esporoderma mais frequentes foram o baculoide e o granuloide; cerca de 80% das espécies analisadas apresentam área apertural diferenciada; dentre as carcterísticas ecológicas, rocha foi o substrato mais frequente, seguido por solos e a maioria das espécies apressentm tufo como forma de vida. As espécies de Rhabdoweisiaceae Limpr. analisadas neste trabalho foram agrupadas através de características palinológicas e ecológicas. / The family Rhabdoweisiaceae Limpr. includes small to medium sized acrocarpic mosses that grow predominantly as tufts and usually occur on rocks and soil. The circumscription of the family is controversial, and its monophyly is supported by molecular data. The present work aims to carry out the palynological study of species of Rhabdoweisiaceae Limpr. occurring in the Americas and to interpret the relationships between the palynological and ecological strategic characteristics of the species studied, which belong to the genera Amphidium Schimp.; Arctoa Bruch & Schimp.; Cynodontium Brid.; Dichodontium Schimp.; Dicranoweisia Lindb. ex Milde; Kiaeria I. Hagen; Oncophorus (Brid.) Brid.; Oreas Brid.; Oreoweisia (Bruch & Schimp.) De Not.; Rhabdoweisia Limpr. The spores were observed under light microscopy before and after acetolysis and under scanning and transmission electron microscopy. For the evaluation of the relationships between the spore morphology and the ecological strategies, the grouping analysis was performed considering the types of ornamentation elements, sporoderma polarity thickness, size condition, aesthetic area, life form and substrate. The species studied present small to medium spores, with radial symmetry and subcircular extent, are heteropolar or nonpolar. The sporoderm is formed by intina, exina and perina. The ornamentation elements allowed the characterization of four morphological types. Of the 23 species studied, nine, included in three genera present anisomorphic spores, being reported here for the first time. The spores of Amphidium Schimp. species have palynological characteristics that allow them to differentiate them from the other Rhabdoweisiaceae Limpr species. The most frequent patterns of ornamentation of the sporoderm surface were baculoid and granuloid; about 80% of the analyzed species present a distinct aperural area. Among the ecological characteristics, rock was the most frequent substrate, followed by soils and most species apressentm tuff as a way of life. The species of Rhabdoweisiaceae Limpr. analyzed in this work were grouped through palynological and ecological characteristics.

Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T22:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilvaFonseca_AdenilzaCristinada_M.pdf: 2857134 bytes, checksum: 9329779ba094b04efc1a51c3932a5dfd (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Mucormicose é uma infecção oportunista invasiva causada por fungos filamentosos denominados de Mucorales, antes Zygomycetes, de difícil tratamento e, com mau prognóstico em pacientes imunocomprometidos, caracterizada por manifestações rinocerebrais, pulmonares ou disseminadas. Espécies dos gêneros Rhizopus, Mucor, Absidia (Lichtheimia) e Rhizomucor, são os Mucorales mais isolados de pacientes. São micro-organismos resistentes a voriconazol e equinocandinas in vitro e in vivo. A terapia inclui a reversão dos fatores predisponentes, retirada cirúrgica da área infectada e administração de antifúngicos, em geral, anfotericina B, de atividade terapêutica limitada e muitos efeitos colaterais. Objetivos: Identificação dos isolados de Mucorales selecionados para o estudo por metodologia clássica e técnicas moleculares; padronização da técnica de microdiluição em caldo para avaliação de suscetibilidade aos antifúngicos isolados: anfotericina B; 5-fluorocitosina; fluconazol; micafungina; itraconazol; voriconazol; miconazol e terbinafina de outros gêneros de Mucorales que não Rhizopus spp.; avaliação da Concentração Inibitória Fracional para determinação do tipo de interação que ocorre entre as combinações de antifúngicos anfotericina B x itraconazol; anfotericina B x voriconazol; terbinafina x itraconazol; terbinafina x voriconazol e terbinafina x anfotericina B; padronização da metodologia de avaliação dinâmica de crescimento para o gênero Rhizopus sp. e Rhizopus oryzae (LIF 1832), para possível estabelecimento de correlação clínico-laboratorial já que este foi isolado de um paciente em tratamento de mucormicose. Metodologia: Estudo realizado com 10 isolados clínicos de Mucorales com identificação morfológica prévia de gênero. A identificação molecular foi realizada com os iniciadores ITS1/ITS4; ITS4/ITS5 e NL1/NL4. Os testes de suscetibilidade aos antifúngicos isolados, in vitro, foram realizados pelo método de microdiluição em caldo (CLSI M38-A2). Os antifúngicos combinados foram analisados de acordo com a metodologia do "tabuleiro de xadrez". Já a avaliação dinâmica de crescimento de hifas frente aos antifúngicos anfotericina B, itraconazol e terbinafina para o isolado Rhizopus oryzae (LIF 1832) foi realizada através do sistema Biocell-Tracer?. Resultados: As identificações morfológica e molecular foram discordantes para os isolados LIF 1237 e 1832, classificados morfologicamente como Absidia (Lichtheimia) sp. e Rhizomucor sp. e identificados como Rhizopus oryzae após sequenciamento de DNA. Considerando todos os isolados, as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) foram de: 8 a ? 16 µg/mL para micafungina, de 0,25 a 8 µg/mL para anfotericina B, ? 64 µg/mL para 5-fluorocitosina, de 16 a ? 64 µg/mL para fluconazol, de 1 a > 8 µg/mL para itraconazol, > 8 µg/mL para voriconazol; de 0,25 a 4 µg/mL para miconazol e de 0,031 a > 128 µg/mL para terbinafina. As interações resultantes da combinação de antifúngicos foram de: 100% de sinergismo entre anfotericina B x voriconazol e anfotericina B x itraconazol; 90% de sinergismo entre terbinafina x itraconazol; 80% de sinergismo entre terbinafina x voriconazol e 100% de sinergismo para a combinação de terbinafina x anfotericina B. As taxas de inibição de crescimento das hifas do isolado Rhizopus oryzae (LIF 1832) frente aos valores de CIMs obtidos pelo método de microdiluição em caldo foram: 88.25% para anfotericina B; 0% para itraconazol e 98,70% para terbinafina. O teste com a combinação de concentrações séricas de itraconazol e terbinafina resultaram em 49,8% de taxa de inibição. Conclusões: Foi observada divergência entre identificação morfológica e molecular para dois isolados. Perfis diferentes de sensibilidade aos antifúngicos foram observados dependendo das espécies. Os antifúngicos mais ativos contra a maioria dos isolados foram anfotericina B e itraconazol. Valores de CIM bem baixos para terbinafina foram observados para Cunninghamella bertholletiae e Syncephalastrum racemosum e todos os isolados foram altamente resistentes a micafungina, 5-fluorocitosina, fluconazol e voriconazol. Os testes de antifúngicos combinados mostraram redução da CIM dos antifúngicos em associação. CIMs elevadas para terbinafina foram observadas para os isolados de R. oryzae e R. stolonifer enquanto que no teste de combinação valores baixos de CIMs foram encontrados, o que ressalta a importância da combinação de antifúngicos no manejo de mucormicose. A taxa de inibição do crescimento das hifas para o isolado LIF 1832 frente aos antifúngicos isolados sugere que hifas podem ser mais suscetíveis que esporos frente aos antifúngicos avaliados. Apesar de não muito alta, a taxa de inibição de crescimento das hifas frente à anfotericina B e à combinação das concentrações séricas de terbinafina e itraconazol pode estar favoravelmente relacionada ao desfecho clínico do paciente em tratamento de mucormicose / Abstract: Introduction: Mucormycosis is an invasive opportunistic infection caused by filamentous fungi called Mucorales (formerly Zygomycetes), difficult to treat, and with poor prognosis in immunocompromised patients, characterized by rhino-cerebral, pulmonary or disseminated manifestations. Species of the genera Rhizopus, Mucor, Absidia (Lichtheimia) and Rhizomucor are the Mucorales most commonly isolated from patients and show resistance to voriconazole and echinocandins in vitro and in vivo. Therapy includes to reverse predisposing factors, surgical removal of the infected area and administration of antifungal agents, in general, Amphotericin B, with limited therapeutic activity and many side effects. Objectives: identification of selected Mucorales isolates by morphological and molecular methods; standardization of broth microdilution for antifungal susceptibility assessment of other Mucorales genera except Rhizopus to the alone antifungals: amphotericin B, fluorocytosine, fluconazole, Itraconazole, voriconazole ; miconazole and terbinafine; establish Fractional Inhibitory Concentration to determine the type of interaction that occurs between combinations of Amphotericin B/Itraconazole; Amphotericin B/Voriconazole; Terbinafine/Itraconazole; Terbinafine/Voriconazole and Terbinafine/Amphotericin B; standardization of the dynamic growth methodology for evaluation Rhizopus sp. and study of isolate Rhizopus oryzae (LIF 1832), for possible establishment of clinical-laboratory correlation this was isolated from a patient undergoing treatment for mucormycosis. Material and Methods: This study evaluated 10 clinical Mucorales isolates with previous morphological gender identification. The molecular identification was performed with primers ITS1/ITS4; ITS4/ITS5 and NL1/NL4. The antifungal susceptibility in vitro was performed by broth microdilution method (CLSI M38-A2). Antifungal combinations were analyzed according to the "chessboard" methodology . The dynamic evaluation of hyphal growth for the isolate Rhizopus oryzae (LIF 1832) for the antifungals amphotericin B, terbinafine and itraconazole, was carried through the BioCell-Tracer system. Results: The morphological and molecular identifications were discordant for LIF 1237 and LIF 1832 isolates, classified morphologically as Absidia (Lichtheimia) sp. and Rhizomucor sp. and after DNA sequencing both as Rhizopus oryzae. Considering all isolates, the minimum inhibitory concentrations (MICs) were 8 to ? 16 µg/mL for Micafungin; from 0.25 to 8 µg/mL for Amphotericin B , ? 64 µg/mL for 5 ¿ Fluorocytosine; of 16 to ? 64 µg/mL for Fluconazole; 1 to > 8 µg/mL for Itraconazole; > 8 µg/mL for Voriconazole ; 0.25 to 4 µg/mL for Miconazole and from 0.031 to > 128 µg/mL for Terbinafine. Interactions resulting from the combination of antifungals were: 100% synergism for Amphotericin B/Voriconazole and Amphotericin B/Itraconazole; 90% synergism between Terbinafine/Itraconazole; 80% synergism between Terbinafine/Voriconazole and 100% synergism for the combination Terbinafine/ Amphotericin B. The hyphae growth inhibition rates obtained for microdilution method MIC values for Rhizopus oryzae (LIF 1832) were 88.25%, for Amphotericin B; 0% for itraconazole and 98.70% to terbinafine. Combined Itraconazole and Terbinafine serum concentrations showed 49.8% of growth inhibition rate. Conclusions: Divergence between morphological and molecular identification for two isolates was observed. Different antifungal susceptibility profiles were observed depending on the species. The most active antifungal agents were Amphotericin B and Itraconazole. MICs for Terbinafine very low were observed to the Syncephalastrum racemosum and C.bertholletiae and all isolates were highly resistant to Micafungin, 5- Fluorocytosine, Fluconazole and Voriconazole. It was possible to observe antifungal MIC reduction in combined tests. MICs high for terbinafine alone were observerd to the Rhizopus oryzae and Rhizopus stolonifer while in the combo test low MIC values were observed, which highlights the importance of combining antifungal drugs in the management of mucormycosis. The hypha growth inhibition rates obtained for Rhizopus oryzae (LIF 1832) against antifungal isolates suggest that hyphae may be more susceptible to antifungal agents against spores. Although not too high, the hyphae growth inhibition rate obtained for the combination serum achievable concentrations of Terbinafine and Itraconazole can probably be related to the clinical outcome / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campionas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-20T10:25:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tsuchiya_AnaClaudia_M.pdf: 449310 bytes, checksum: 3afe68453ac7a3b16148cef90be5c03f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Clostridium difficile é um bacilo anaeróbio responsável por doença intestinal associada ao tratamento prévio com antibióticos, manifestando desde uma diarreia leve até casos graves de colite pseudomembranosa causada principalmente pelas toxinas A (TcdA) e B (TcdB). Os casos de infecção estão relacionados à contaminação em hospitais, porém pesquisas recentes sugerem possível associação ao consumo de alimentos contaminados, pois C. difficile já foi isolado de bovinos, suínos e aves e suas carnes sugerindo os animais como reservatórios. Desta forma, os estudos são de suma importância para o entendimento da transmissão da doença causada por C. difficile. Diante de poucas pesquisas de C. difficile e da inexistência de método padronizado para seu isolamento a partir dos alimentos, o trabalho consistiu em três etapas: 1) avaliação de metodologia [utilizando dois procedimentos (tratamento com álcool e plaqueamento direto) e dois meios seletivos (ágar Clostridium difficile moxalactan norfloxacina ¿ CDMNA e ágar cicloserina cefoxitina frutose ¿ CCFA)] de detecção de C. difficile em carnes (bovina moída e peito de frango [Peitoralis profundus e superficialis]); 2) avaliação da ocorrência de C. difficile em amostras de carnes resfriadas (bovina moída, bovina peça [Semimembranosus], suína [Longuisimus dorsi] e frango [Peitoralis profundus e superficialis]), compreendendo detecção, isolamento e identificação dos isolados; 3) avaliação do perfil toxigênico dos isolados através da detecção de genes tcdA e tcdB codificadores de TcdA e TcdB e respectivamente avaliação de produção do toxinas pelos isolados. A partir da comparação de dois procedimentos, observou-se que o plaqueamento direto foi mais eficaz e recuperou uma maior quantidade de C. difficile se comparado com o tratamento com álcool e o ágar Clostridium difficile moxalactan norfloxacina (CDMNA) apresentou maior taxa de recuperação em relação ao ágar cicloserina cefoxitina frutose (CCFA). A ocorrência de C. difficile foi observada em 11,5% (17/147) das amostras analisadas, totalizando 80 isolados, destes 41,2% (33/83) apresentaram positivo para pelo menos um gene de virulência (A-B+), ou para ambos os genes (A+B+). Houve concordância de 70,5% entre os testes fenotípicos e genotípicos utilizados para detecção de toxinas. Desta forma, sugere-se que alimentos de origem animal são uma potencial fonte de transmissão de C. difficile para humanos / Abstract: Clostridium difficile is an anaerobic bacillus responsible for intestinal deseases in individuals previouslly treated with antibiocs, who can manifest from a mild diarrhea to severe cases of pseudomembranous colitis, mainly caused by toxins A (TcdA) and B (TcdB). The infections are related to contamination in hospitals, but recent researches sugests a possible association with the consumiption of contaminated foods as C. difficile has been isolated from bovines, suines and poultries and their meat, sugesting animals as reservatories. Thus, studies are extremelly important to elucidate the transmition of the desease caused by C. difficile. Faced with few researches about this bacteria and the lack of a standard method for its isolation from food, this work is divided in three steps: 1) Evaluation of the methodology for C. difficile detection in meet (commercial bovine mince and chicken breast ¿ [Peitoralis superficialis and Peitoralis profundus] [using two procedures (treatment with alcohol and direct plating) and two selective mediums (agar Clostridium difficile moxalactan norfloxacin ¿ CDMNA and cycloserine cefoxitin fructose agar¿ CCFA)]; 2) Assessing of the occurrence of C. difficile in samples of chilled meat (bovine: commercial mince and the whole Semimembranosus; suine: whole Longuisimus dorsi; chicken: Peitoralis profundus and Peitoralis superficialis) by detection, isolation and identification of the isolated; 3) Evaluation of the toxicogenic profile of the isolated by the detection of the genes tcdA and tcdB, which are encoding of TcdA and TcdB respectivelly, and the capacity of toxine production by the isolated bacterias. From the comparison of the two proceeding above it was observed that the direct plating was more efficient and recovered a larger aumont of C. difficile than the treatment with alcohol. Furthermore, the CDMNA agar presented a higher recovery rate compared to CCFA agar. It was observed the occurrence of C. difficile in 11,5% (17/147) of the analyzed samples, comprising 80 isolates, of which 41,2% (33/83) showed a positive response for at least one virulence gene (A-B+), or for both genes (A+B-). In addition, there was a 70,5% concordance between the phenotypic and genotypic tests used to detect toxins. In this way, it is suggested that foods of animal origin are a potential source of transmission of C. difficile for humans / Mestrado / Tecnologia de Alimentos / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-19T18:55:50Z No. of bitstreams: 1 Ferreira, Thaís Gonçalves [Dissertação, 2012].pdf: 3520619 bytes, checksum: 0a743346b244c2aef9fcdf90c62f99ae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T18:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira, Thaís Gonçalves [Dissertação, 2012].pdf: 3520619 bytes, checksum: 0a743346b244c2aef9fcdf90c62f99ae (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Ministério da Ciência e Tecnologia (MTC/Pronex) / Ministério da Saúde do Brasil / INTRODUÇÃO: Clostridium difficile é um importante patógeno entérico e o agente etiológico da diarreia associada ao C. difficile (CDAD). Pacientes com CDAD excretam uma grande quantidade de células vegetativas e esporos em suas fezes, levando a contaminação do ambiente hospitalar e propagação deste patógeno. Este fato pode ser explicado pela resistência dos esporos a muitos desinfetantes utilizados na rotina de desinfecção hospitalar. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade de desinfetantes hospitalares contra os esporos e células vegetativas de C. difficile. Além disso, foram analisados os perfis de proteínas totais das células vegetativas das cepas de C. difficile, tratadas com os mesmos desinfetantes. MÉTODOS: Os agentes de limpeza hospitalar Virkon® (peroxigênio), Cloro-Rio® (agente liberador de cloro ativo), Peresal® (peroxigênio), Riohex® (biguanida), e Cidex Opa® (aldeído), comumente utilizados em hospitais brasileiros, foram testados contra os esporos das cepas de C. difficile HU17- ribotipo 133 e SJ1-ribotipo 135, ambos ribotipos encontrados exclusivamente no Brasil. A cepa hipervirulenta de C. difficile, BI/NAP1/027, foi utilizada para comparação. Os testes foram realizados de acordo com o método padrão para teste da atividade esporocida de desinfetantes dos Estados Unidos, ASTM E2414-05. Para a análise do perfil de proteínas totais, as mesmas cepas de C. difficile, incluindo também a ATCC 9689, foram crescidas na presença e na ausência de concentração subinibitória dos desinfetantes citados e submetidas a eletroforese em gel de SDS-PAGE. RESULTADOS: Os agentes Cloro-Rio® e Cidex Opa® eliminaram completamente os esporos de todas as cepas testadas, enquanto o Riohex® não exibiu qualquer redução significante. Por outro lado, o Virkon® reduziu significativamente a concentração de esporos para as cepas HU17-133 e BI/NAP1/027, mas o mesmo não foi observado com a cepa SJ1-135. O agente Peresal® eliminou completamente os esporos da cepa HU17-133, mas apenas reduziu a concentração inicial dos esporos para as cepas C. difficile SJ1-135 e BI/NAP1/027. Os desinfetantes Cloro- Rio® e Riohex® foram os que mais afetaram a expressão de proteínas em todas as cepas avaliadas. CONCLUSÕES: Em conjunto, nossos resultados mostraram que o Cloro-Rio® e Cidex Opa® foram os desinfetantes mais eficazes para eliminação dos esporos de C. difficile. O estudo das proteínas afetadas pelos desinfetantes poderia ajudar a elucidar a resistência do C. difficile frente a alguns agentes de limpeza e criar novas alternativas para eliminar e/ou diminuir a contaminação do ambiente hospitalar por esta bactéria / Introduction: Clostridium difficile is an important enteric pathogen and the etiological agent of C. difficile-associated diarrhea (CDAD). Patients with CDAD, excrete a large amount of vegetative cells and spores in their stools, leading to contamination of the hospital environment and spread of the pathogen. This fact can be explained by the resistance of spores to many disinfectants used in hospital routine. The aim of this study was to evaluate the activity of hospital disinfectants against C. difficile spores and vegetative cells. Furthermore were analyzed the whole proteins profiles of the vegetative cells of these strains treated with the same disinfectant. METHODS: The hospital cleaning agents Virkon® (peroxygen), Cloro-Rio® (chlorine), Peresal® (peroxygen), Riohex® (biguanide), and Cidex Opa® (aldehyde), usually used in Brazilian hospitals, were tested against C. difficile strains spores HU17-ribotype 133 and SJ1-ribotype 135, both exclusively Brazilian. BI/NAP1/ribotype 027 strain was also used for comparison. The tests were performed in accordance with the standard method for testing the sporicidal activity of disinfectants of the United States, ASTM E2414-05. For the analysis of whole proteins profile, the strains were grown in the presence and absence of sub inhibitory concentrations of the disinfectants and applied on SDS-PAGE gel. RESULTS: Cloro-Rio® and Cidex Opa® completely eliminated spores of all strains tested, while Riohex® did not show any significant reduction. On the other hand, Virkon® significantly reduced HU17 and BI/NAP1/027 spores, but the same was not observed with SJ1 strain. The agent Peresal® completely eliminate the spores of strain HU17-133, but only reduced the initial concentration of spores for strains SJ1-135 and BI/NAP1/027. The disinfectants Cloro-Rio® and Riohex® were the most affected protein expression in all strains evaluated. CONCLUSIONS: Taken together, our results show that Cloro-Rio® and Cidex Opa® are the most remarkable agents for eliminating spores. The study of proteins affected by the disinfectant might help to elucidate the resistance of C. difficile against some cleaning agents and create new alternatives to eliminate and/or reduce the contamination of the hospital by this bacterium

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-12T12:26:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 451562 bytes, checksum: 6f7e57c6a3ba3860fe5ea9a087da2f4a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T12:26:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 451562 bytes, checksum: 6f7e57c6a3ba3860fe5ea9a087da2f4a (MD5) Previous issue date: 2001-05-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esporos de Bacillus sporothermodurans CCT6247 foram avaliados quanto à adesão em cupons de aço inoxidável e resistência a sanificantes químicos, em condições de uso simulado, utilizando um modelo de linha de circulação de leite, em aço inoxidável AISI 304. Seis cupons de prova, sendo dois em formato de cotovelo 90º, dois cilíndricos e dois em T, foram inoculados com uma suspensão, em tampão fosfato, de 0,31 M em pH 7,0±0,1, contendo cerca de 10^5 esporos/mL por 12 horas a 30°C. A quantificação dos esporos foi feita em três dos seis cupons após rinsagem com tampão fosfato, durante 15 minutos, plaqueando diluições adequadas por espalhamento superficial em ágar BHI e incubação a 37°C/24h. Depois, os seis cupons foram conectados, em pontos específicos, no modelo utilizado. Simulou-se um processo de sanificação, circulando-se 15 L dos sanificantes por 15 minutos a uma velocidade de 1,5 m/s, à temperatura ambiente (20-25°C), pelas tubulações. Verificou-se que não houve diferença (P ≥0,05) na adesão entre os cupons cotovelo 90º, cilíndrico e T. O log10 do número de esporos aderidos por cm² nesses cupons foi, respectivamente, de 4,01, 3,88 e 4,03, correspondentes a 3,93, 2,55 e 4,46% de adesão. Nenhum dos sanificantes obteve três reduções decimais (RD) na população de esporos, valor sugerido na aprovação de sanificantes, atuando sobre microrganismos aderidos. Não houve diferença (P≥0,05) entre os sanificantes, com exceção do hipoclorito de sódio a 100 mg/L de CRT, em pH 9,45, que apresentou a menor eficiência (1,57 RD), e também não se observou influência do tipo de cupom na ação dos sanificantes. Os números de reduções decimais obtidos, em ordem descrescente, foram 2,84; 2,77; 2,67; 2,47; 2,43; e 2,26 RD para as soluções de hipoclorito contendo 100 mg/L em pH 7,0; de cloramina orgânica contendo 100 mg/L em pH 7,18; de hipoclorito contendo 100 mg/L em pH 8,0; de cloramina orgânica contendo 60 mg/L, em pH 7,18; de ácido peracético a 60 mg/L em pH 3,4; e de ácido peracético a 30 mg/L em pH 3,7, respectivamente. Portanto, os resultados sugerem que o uso de hipoclorito corrigido para pH 8,0 ou 7,0 pode ser escolhido sem prejuízo da eficiência do processo de higienização, além de apresentar menor custo. Avaliando a higienização dos cupons pela técnica de ATP bioluminescência, verificou-se inconsistência entre os resultados desta técnica e do método tradicional de contagem em placa na detecção de esporos aderidos ao aço inoxidável, em razão, provavelmente, do baixo nível de ATP detectável desses esporos. / Bacillus sporothermodurans CCT 6247 spores were evaluated for attachment on stainless steel coupons and resistance to chemical sanitizing agents, under simulated conditions, using a milk circulation AISI 304 stainless steel pipe system. Six coupon tests (two 90° elbow, two cylindrical and two T- piece) were inoculated in a phosphate buffer, 0.31M, pH 7.0 ± 0.1 suspension, containing around 10^5 spores/ mL during 12 h at 30°C. Spore quantification was performed in 3 of 6 coupons following phosphate buffer rinsing for 15 min., plating adequate dilutions on BHI agar plate and incubation at 37°C/24h. The six coupons were then connected at specific points in the model. A sanitizing process was simulated by circulating 15 L of the sanitizing agents for 15 min. at a speed of 1.5 m/s at room temperature (20-25°C) through the tubes. No difference (P≥0.05) was verified in the attachment among the 90º elbow, the cylindrical and the T-piece coupons. The spore number log10 attached per cm² on these coupons were, respectively, 4.01, 3.88 and 4.03, which correspond to 3.93, 2.55 and 4.46%. None of the sanitizing agents obtained 3 decimal reductions (DR) within the spore population, a value suggested for the sanitizing agents approval, when acting on the attached microorganisms. No difference was found (P≥0.05) among the sanitizing agents, except for sodium hypochlorite at 100 mg/L of CRT, pH 9.45, which showed the least efficiency (1.57 DR) nor any influence of the type of coupon was observed on the sanitizing agents’ action. The decimal reductions number reached, in decreasing order, 2.84, 2.77, 2.67, 2.47, 2.43 and 2.26 DR for the hypochlorite solution containing 100 mg/L, pH 7.0; the organic chloramine solutions containing 100 mg/L, pH 7.18; hypochlorite containing 100 mg/L, pH 8.0; organic chloramine containing 60 mg/L, pH 7.18; peracetic acid at 60 mg/L in pH 3.4; and of peracetic acid at 30 mg/L in pH3.7, respectively. Thus, the results suggest that the use of hypochlorite corrected for 8.0 or 7.0 can be chosen without compromising the process of hygienization, besides presenting lower cost. When evaluating the coupons higienization by bioluminescence ATP technique, inconsistency between the results of this technique and those of the traditional method of plate counting was observed in detecting spores attached to the stainless steel, this being probably due to these spores low detectable ATP levels.

A análise microbiológica atua como ferramenta fundamental para a obtenção de dados sobre a qualidade, sanidade, higiene e segurança na produção de alimentos; desta forma, tem sido adotada na indústria alimentícia para o controle de qualidade. Por sua composição completa e balanceada, o leite é um substrato ideal para o desenvolvimento de diversos grupos de microrganismos. Com o objetivo de pesquisar bactérias da espécie Bacillus cereus em amostras de leite fluido, bem como a capacidade de germinação de esporos e a multiplicação dessa bactéria após processo de fervura, com manutenção das amostras à temperatura ambiente e à temperatura de refrigeração por períodos de 1, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 horas, foram analisadas 75 amostras de leite, conforme as metodologias recomendadas por Silva et al. (2007). Destas, 46 amostras (61,3%) mostraram-se com algum grau de contaminação pela bactéria antes de serem submetidas à fervura. Por sua vez, as amostras mantidas à temperatura ambiente após a fervura, tiveram suas contagens bacterianas, principalmente a partir da 8a hora, superiores à contagem inicial, inclusive atingindo níveis capazes de desencadear uma toxinfecção alimentar, demonstrando a ocorrência da germinação dos esporos e a multiplicação das células vegetativas. Por outro lado, alíquotas dessas mesmas amostras mantidas sob refrigeração (7ºC) não atingiram populações preocupantes, enfatizando, desse modo, a importância da necessidade da refrigeração do leite após a fervura. / The microbiological analysis acts as basic tool for the attainment of data on the quality, health, hygiene and security in the food production, in such a way, she has been adopted in the nourishing industry for the quality control. For its complete and balanced composition, milk is an ideal substratum for the development of diverse groups of microorganisms. With the objective to search cereus bacteria of the Bacillus species in fluid milk samples, as well as the capacity of germination of spores and the multiplication of this bacterium after boil process, with maintenance of the samples to the ambient temperature and the temperature of refrigeration for periods of 1, 2, 4, 6, 8, 10 and 12 hours, 75 milk samples had been analyzed, as the methodologies recommended for Silva et al. (2007). Of these, 46 samples (61.3%) had revealed with some degree of contamination for the bacterium before being submitted to the boil. In turn, the samples kept to the ambient temperature after the boil, had its bacterial countings, mainly from 8a hour, superiors to the initial counting, also reaching levels capable to unchain an alimentary toxinfection, demonstrating to the occurrence of the germination of the spores and the multiplication of the vegetative cells. On the other hand, aliquot of these same samples kept under refrigeration (7ºC) had not reached preoccupying populations, emphasizing, in this manner, the importance of the necessity of the refrigeration of milk after the boil.

O S. mutans é o agente etiológico da cárie dental humana, uma doença com ampla distribuição mundial. A adesão à superfície dental depende da interação entre a proteína de superfície P1 e a aglutinina salivar (SAG) adsorvida ao dente. A região N-terminal da P1 é um alvo vacinal importante que está diretamente associada às funções de adesão e agregação. Este trabalho teve o objetivo de avaliar estratégias vacinais contra o S. mutans baseadas na proteína P1 usando linhagens recombinantes de B. subtilis. O B. subtilis é uma bactéria gram positiva, formadora de esporos, não patogênica, empregada como sistema de expressão de proteínas heterólogas e como veículo vacinal administrado por vias de mucosas. Empregamos o B. subtilis para expressar e purificar a proteína P139-512 derivada da proteína P1 de S. mutans UA159. O antígeno P139-512 apresentou epítopos lineares e conformacionais semelhantes aos presentes na proteína P1 nativa. O sítio de ligação à SAG está preservado nessa proteína assim como suas propriedades imunogênicas. A coadministração parenteral do antígeno com adjuvantes vacinais promoveu resposta sistêmica específica com anticorpos eficazes no bloqueio da adesão de S. mutans. Por fim, usamos esporos de B. subtilis como veículo de entrega de mucosa para o antígeno alvo de S. mutans. Esporos de B. subtilis foram modificados para expressar na superfície adesinas bacterianas (SlpA, InvA ou Inv600) com capacidade de ligação ao epitélio intestinal e, quando no estágio de célula vegetativa, expressar intracelularmente o antígeno P139-512. A imunização oral com os esporos adesivos induziu altas concentrações de anticorpos sistêmicos e de mucosa. A imunização nasal ou sublingual com os esporos recombinantes induziu níveis de anticorpos sistêmicos maiores do que aqueles obtidos após a imunização oral. Além disso, esses anticorpos foram mais eficientes em bloquear a adesão de S. mutans à SAG imobilizada, sem interferir com a agregação. Em conclusão, os resultados obtidos abrem perspectivas interessantes para o desenvolvimento de vacinas anti-cárie baseadas em linhagens de B. subtilis. / S. mutans is the major etiologic agent of human dental caries, a disease with worldwide distribution. The adhesion to the tooth surface is dependent on the interaction of the P1 surface protein and salivary agglutinin (SAG) adsorbed to the tooth. The N-terminal region of P1 is an important vaccine target that is directly associated with adhesion and aggregation functions. This study aimed to evaluate vaccination strategies against S. mutans based on the P1 protein using recombinant B. subtilis strains. B. subtilis is a gram positive, spore-forming, non-pathogenic bacterium used as expression system for heterologous proteins and as a vaccine vehicle administered by mucosal routes. Inicially, we employed a recombinant B. subtilis strain to express and purify the P139-512 protein derived from the S. mutans UA159 P1 protein. The P139-512 antigen showed important conformational and linear epitopes similar to those present in the native P1 protein. The SAG-binding site is preserved in P139-512 as well as immunological properties. The parenteral co-administration of antigen with vaccine adjuvants stimulated systemic antibodies effective in blocking adhesion of S. mutans to SAG. Lastly, we used B. subtilis spores as a mucosal delivery vehicle for antigen targeting. B. subtilis endospores were modified to display bacterial adhesins (SlpA, InvA or Inv600), capable to bind to the intestinal epithelium, on the spore surface and to express intracellularly the P139-512 antigen during the vegetative cell stage. Oral immunization with adhesives spores induced high systemic and mucosal specific antibodies levels. The nasal or sublingual immunization with B. subtilis recombinant spores induced higher amounts of systemic antibodies than the oral immunization. Furthermore, the specific antibodies were highly effective in blocking the adherence of S. mutans to immobilized SAG, without interfering with aggregation. In conclusion, the results open interesting perspectives for the development of anti-caries vaccines based on B. subtilis strains.

Bacillus subtilis é uma bactéria gram positiva de solo, não patogênica, não colonizadora de tecidos, naturalmente transformável e formadora de esporos utilizada como modelo de estudo de bactérias gram-positivas. Essas características acarretam em vantagens para a produção de proteases de interesse industrial e para utilização como veículo de antígenos vacinais, porém a falta de vetores induzíveis torna sua utilização como ferramenta biológica pouco explorada. No presente trabalho descrevemos a construção de diferentes vetores capazes de expressar os antígenos subunidade B da toxina termo-lábil (LTB) e subunidade estrutural da fímbria CFA/I (CFAB) de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) e avaliamos seu potencial vacinal. Foi avaliada a imunogenicidade de linhagens capazes de expressar LTB sob o controle de diferentes promotores: PgsiB (induzido em condições de estresse), PlepA (promotor constitutivo) e Pspac (induzido pela adição de IPTG) e em diferentes locais da célula (ancorada à parede celular ou secretada para o meio externo). Avaliamos ainda a imunogenicidade de linhagens capazes de co-expressar LTB e a listeriolisina O (LLO) de Listeria monocytogenes. O antígeno CFAB foi produzido no citoplasma ou ancorado à parede celular de B. subtilis em condições de estresse e as linhagens bacterianas administradas sozinhas ou conjuntamente com a toxina termo-lábil (LT) como adjuvante de mucosa. Camundongos imunizados com células ou esporos de B. subtilis recombinantes desencadearam respostas de anticorpos sistêmicos e secretados específicos para os antígenos (LTB e CFAB), não alterados pela adição do adjuvante. A expressão de LLO causou a supressão da resposta de anticorpos específicos para o antígeno LTB. Os resultados obtidos demonstram a viabilidade do uso de B. subtilis como veículo vacinal. / Bacillus subtilis is a gram positive, generally regarded as safe and spore forming soil bacteria used as a model for genetic and phisiological studies. This safety status allow its use as host for production of industrial protases and its application as vaccine vehicles, however the lack of epissomal inducible expression systems disable the exploration of this organism as a biotechnologic tool. In this work we describe the construction of epissomal vectors able to express the B subunit of the heat-labile toxin (LTB) and the structural subunit of the CFA/I fimbrae (CFAB) from the enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). We evaluate strains able to express LTB under the control of three promoters: PgsiB (stress inducible), PlepA (constitutive) e Pspac (IPTG inducible) and allowing the expression of LTB secreted or anchored to the cell wall We also evaluate the immunogenicity of strains able to co-express LTB and the listeriolysin O (LLO) from Listeria monocytogenes. CFAB was expressed in the cytoplasm or anchored to the cell wall and administred alone or with the mucosal adjuvant LT. Mice immunized both with cells or spores elicited secreted and systemic specific antibodies responses, which were not altered by the addition of the adjuvant LT. LLO expression suppressed the antibodies responses against LTB. The data shows the ability of B. subtilis to be used as vaccine vehicle.

A transmissão de parasitas da malária por mosquitos vetores é dependente do desenvolvimento bem sucedido das formas infectantes de Plasmodium sp., especialmente os esporozoítas, que são as formas que infectam o hospedeiro vertebrado. A manipulação genética de mosquitos vetores tem sido uma estratégia alternativa na tentativa de controle da malária. Um componente extremamente importante desta estratégia é a escolha de uma molécula efetora capaz de reduzir a transmissão do patógeno. Microplusina é um peptídeo antimicrobiano rico em cisteína, originalmente descrito como um componente antimicrobiano da hemolinfa e dos ovos de carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Testes anteriores utilizando o modelo experimental mosquito Aedes aegypti infectado por Plasmodium gallinaceum mostraram que a microplusina é altamente tóxico para esporozoítas de Plasmodium gallinaceum em concentração relativamente baixa, sem apresentar toxicidade aos mosquitos vetores Aedes aegypti. Nosso objetivo foi analisar a expressão da microplusina e seu efeito na infecção de P. gallinaceum em mosquitos transgênicos. Obtivemos quatro linhagens através da integração de um transgene contendo a região promotora do gene da vitelogenina de Ae. aegypti, peptídeo sinal maltase-like I de Ae. aegypti e a sequência codificadora da microplusina (PMOS [3xP3-EGFP-AeVg Micro]). A atividade anti esporozoítas da microplusina expressa pelos mosquitos transgênicos mostrou diferença significante as linhagens. O desenho de novas moléculas utilizando como molde moléculas efetoras existentes e testadas, possibilitará o aperfeiçoamento da expressão de genes exógenos em mosquitos transgênicos, tornando-os refratários ao parasita. / Transmission of malaria parasites by mosquito vectors is dependent on the successful development of Plasmodium sp. infective forms, particularly the sporozoites, which are the forms that enter the vertebrate host. The genetic manipulation of mosquito vectors has been a strategy for malaria control. An extremely important component of this strategy is the effector molecule of choice which reduces parasite transmission. Microplusin is a cysteine-rich antimicrobial peptide originally described as an hemolymph and eggs antimicrobial component of the cattle tick Boophilus microplus. Previous tests using the experimental model Plasmodium gallinaceum infected Aedes aegypti showed that microplusin is highly toxic to P. gallinaceum sporozoites in relatively low concentration, without showing toxicity to the mosquito vector A. aegypti. Our goal was to analyze transgenic mosquitoes expressing microplusin and its effect on infection of P. gallinaceum. We obtained four lines through the integration of transgene that containing the promoter region of the A. aegypti vitelogenin gene, the maltase-like I signal peptide of A. aegypti and microplusin coding sequence (pMos[3xP3-EGFPAeVg-Micro]). The activity anti sporozoites microplusin expressed by transgenic mosquitoes showed significant differences between strains. The design of effector molecules using information from existing and tested molecules as template will enable the improvement of the expression of foreign genes in transgenic mosquitoes, making them resistant to the parasite.

A ferrugem da videira, causada pelo fungo Phakopsora euvitis, é uma doença importante para a viticultura brasileira por causar desfolha precoce e, consequentemente, prejudicar a maturação dos frutos e comprometer as safras seguintes. Por ser um patógeno biotrófico, a preservação de urediniósporos para estudos com o patógeno, se faz em folhas do hospedeiro vivo. Em outras espécies de ferrugens é possível conservar os esporos em condições controladas por longos períodos de armazenamento. Outro ponto importante, para auxiliar na compreensão da epidemiologia do patossistema, está relacionado com as condições ambientais favoráveis na germinação de urediniósporos e na patogenicidade do fungo em folhas de videira. Com o objetivo de preservar o patógeno e determinar as condições ambientais favoráveis para a doença, foram avaliados: (1) O efeito da temperatura e desidratação na manutenção da viabilidade dos esporos; (2) O efeito da temperatura e do período de molhamento na germinação de urediniósporos e na patogenicidade em mudas de \"Niágara Rosada\" inoculadas. Os resultados obtidos mostraram que a desidratação dos esporos proporcionou maior viabilidade destes ao longo do tempo, para todas as condições de armazenamento testadas. A desidratação seguida pelo armazenamento a -80°C conseguiu manter os esporos viáveis, com uma alta porcentagem de germinação, por até 150 dias de armazenamento. Os urediniósporos armazenados no ambiente, independente do processo de desidratação, não conseguiram manter sua viabilidade por um período superior a 15 dias. A faixa de temperatura para germinação de urediniósporos foi ampla, entre 10 e 30°C, com um ótimo em 20°C. A expressão de sintomas em plantas inoculadas foi maior nas temperaturas de 25 e 30°C. O período de molhamento mínimo estimado pelo modelo monomolecular foi de 7 horas para as plantas mantidas a 15 °C e 5 horas para as plantas mantidas a 20, 25 e 30 °C. Para períodos acima de 6 horas de molhamento, a maior severidade da doença ocorreu na temperatura de 30 °C. Não ocorreu sintomas em plantas inoculadas e mantidas a 35°C em nenhum dos períodos de molhamento testados. O período de latência da ferrugem foi de 7 dias para plantas inoculadas e mantidas a 25 e 30°C, estendendo-se para 13 dias quando as plantas foram mantidas a 15°C. / Grapevine rust, caused by Phakopsora euvitis, is an important disease in brazilian viticulture, causing early defoliation and jeopardizing the maturation of fruits and the following crop season. P. euvitis is a biotrophic pathogen, and for research purpose, uredospores are kept through inoculation in grapevine plants. In other species of rust, it is possible to preserve spore under controlled conditions for long periods of storage. Understand the favorable environmental conditions for uredospores germination and the pathogenicity of the fungus on grapevine leaves are important for the understanding of the pathosystem epidemiology. In order to preserve the pathogen and determine the favorable conditions for the disease were evaluated: (1) The effect of temperature and dehydration in maintaining the viability of the spores; (2) The effect of temperature and wetness period on uredospores germination and pathogenicity in \'Niágara Rosada\' inoculated plants. The results showed that spore dehydration maintained high viability, for all the tested storage conditions. Dehydration followed by storage at -80°C kept viable spores, with a high percentage of germination, for 150 days of storage. The uredospores stored in the environment, independent of the dehydration process, could not maintain their viability for a period exceeding 15 days. The temperature range for uredospores germination varied from 10 to 30°C, with an optimal at 20°C. The expression of symptoms in inoculated plants was higher at 25°C and 30°C temperatures. The minimum wetness period estimated by the monomolecular model was 7 hours for plants kept at 15 °C and 5 hours for plants kept at 20, 25 and 30 ºC. For wetness periods up to 6 hours, the highest disease severity occurred at 30 °C. There were no symptoms on inoculated plants maintained at 35°C in any of the tested wetness periods. The rust latency period was 7 days for inoculated plants kept at 25 and 30°C extending for 13 days when the plants were kept at 15°C.