Em crustáceos, ainda não são conhecidas as fontes de aminoácidos e as rotas metabólicas envolvidas no controle da concentração intracelular de aminoácidos. Os experimentos deste trabalho tiveram como objetivo investigar se o estresse osmótico provoca alterações intrínsecas sobre o metabolismo de aminoácidos nos tecidos de C. granulatus submetidos a estresse agudo in vitro. Medimos a síntese e a mobilização de proteínas, a captação de aminoácidos e a produção de 14CO2 a partir de 14C-leucina no hepatopâncreas, músculo mandibular e brânquias anteriores e posteriores submetidos a estresse hipo e hiperosmótico agudo, in vitro. O controle da síntese de proteínas parece estar envolvido no ajuste metabólico da concentração intracelular de aminoácidos no hepatopâncreas, músculo mandibular e brânquias submetidos à alteração osmótica aguda, in vitro. Por outro lado, durante o estresse hiposmótico agudo, in vitro, a diminuição na captação de aminoácidos via sistema A e o aumento na oxidação total de 14C-L-leucina foram usados como mecanismos para reduzir as concentrações intracelulares de aminoácidos nas brânquias posteriores e anteriores, respectivamente. A captação de aminoácidos e a mobilização de 14C-proteina não foram mecanismos usados para aumentar a concentração intracelular de aminoácidos em todos os tecidos estudados.

Dissertação de mestrado apresentado ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / As respostas inflamatórias e imunológicas evocadas durante a sepse podem criar uma disfunção cerebral aguda e de longo prazo. O estresse crônico moderado (ECM) pode ocasionar a mudanças neuroquímicas e comportamentais, e seus impactos necessitam ser compreendidos, sobretudo na sepse que é uma patologia com alto índice de mortalidade e co-morbidade. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto do ECM sobre parâmetros comportamentais e bioquímicos em ratos submetidos à sepse. Foram utilizados ratos Wistar machos, adultos, procedentes do biotério da UNESC. Os animais foram divididos entre os grupos experimentais: controle e ECM e, em seguida, iniciou-se ao protocolo de ECM. Após 40 dias da indução do estresse crônico, os animais foram submetidos ao teste de anedonia (durante sete dias). Ao final do teste, os animais foram submetidos à sepse por CLP e divididos em quatro grupos experimentais: Controle+Sham, Controle+CLP, ECM+Sham, e ECM+CLP. Imediatamente após a indução da sepse foi realizada a avaliação do sickness behavior e o controle da mortalidade. Em 10 dias após a sepse, os animais foram submetidos aos testes de habituação ao campo aberto, splash test e nado forçado. Em seguida foram retirados o córtex frontal e hipocampo para análise dos níveis de citocinas (IL1β, IL6 e TNF-α) e de estresse oxidativo (TBARS e carbonilação de proteínas). O grupo ECM apresentou um comportamento anedônico, e após a sepse, foi observada uma maior mortalidade e uma diminuição das atividades locomotora e exploratória nos grupos ECM+CLP e Controle+CLP. Ocorreu uma diminuição de grooming no grupo controle+CLP e ECM+sham. Os níveis de TBARS estavam aumentados no córtex frontal, nos grupos Controle+CLP e ECM+CLP e no hipocampo, no grupo ECM+CLP. Também foi observado em córtex frontal o aumento dos níveis das proteínas carboniladas nos grupos Controle+CLP, ECM+Sham e ECM+CLP, e no hipocampo, nos grupos Controle+CLP e ECM+CLP. Os níveis de TNF- apresentaram um aumento em córtex frontal e hipocampo no grupo Controle+CLP comparados ao grupo Controle+Sham. Os níveis de IL-1 estavam aumentados no grupo Controle+CLP comparado ao grupo Controle+Sham no hipocampo. Os níveis de IL-6 estavam aumentados no córtex frontal dos animais dos grupos Controle+CLP e ECM+Sham, e no hipocampo no grupo Controle+CLP, comparado ao grupo Controle+Sham. Os dados do presente estudo sugerem que o estresse anterior, causado pela indução da ECM, pode diminuir a inflamação cerebral e o comportamento depressivo de longo prazo induzido pela sepse grave.

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No. of bitstreams: 1 TeseJOD.pdf: 3785515 bytes, checksum: 592ad83b75048b0033a139bdb7574c8b (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / This study aimed to investigate the physiological and somatic changes evoked by chronic stress regimens in adolescent and adult rats, with a focus on cardiovascular function. Additionally, we evaluated the long-term changes induced by stress exposure during adolescence, as well as a possible vulnerability to effects of stress in adult animals exposure to chronic stress during adolescence. Male rats were exposed to repeated restraint stress (RRS) or chronic variable stress (CVS) during adolescence (28 days) and/or adulthood (60 days). Adrenal hypertrophy, thymus involution, and elevated plasma glucocorticoid were observed only in adolescent rats, whereas reduction in body weight was caused by both stress regimens in adults. CVS increased blood pressure and heart rate regardless of the age, whereas RRS increased blood pressure selectively in adults. Resting tachycardia evoked by CVS was associated with increased cardiac sympathetic tone in adults while a decreased cardiac parasympathetic activity was observed in adolescents. Changes in baroreflex function were evoked by both RRS and CVS, but this effect was age- and type-stress specific. The pressor response to systemic administration of a α1-adrenoceptor agonist was increased by both stress regimens in adolescents. Depressor responses to acetylcholine and the nitric oxide donor sodium nitroprusside were affected by RRS in both ages. Except for the circulating glucocorticoid change, all alterations observed during adolescence were reversed in adulthood. However, the RRS or CVS in adult animals subjected to the respective chronic stressor during adolescence evoked responses that was not identified in animals exposure to the stressors only in adulthood, including: CVSevoked increase in circulating corticosterone, adrenal hypertrophy, RRS-evoked increase in heart rate and cardiac sympathetic activity, reduction of intrinsic heart rate by CVS, and baroreflex changes evoked by both stressors. These findings suggest a stress vulnerability of adolescents to somatic and neuroendocrine effects regardless of stress regimen. Our results indicate an age- and stress type-specific influence in stressevoked cardiovascular/autonomic changes. Data suggest minimal consequences in adulthood of stress during adolescence, but indicate that stress experience during adolescence causes a vulnerability to neuroendocrine and cardiovascular effects of stress in adulthood. / O objetivo do presente estudo foi investigar as alterações fisiológicas e somáticas, com ênfase na análise dos efeitos sobre a função cardiovascular, induzidas pela exposição ao estresse crônico em ratos adolescentes e adultos. Nós também investigamos as consequências a longo prazo da exposição ao estresse durante a adolescência, além de analisar uma possível vulnerabilidade para os efeitos do estresse durante a vida adulta em animais pré-expostos a protocolos de estresse crônico durante a adolescência. Ratos machos foram expostos aos protocolos de estresse por restrição repetido (ERR) ou estresse crônico variável (ECV) durante a adolescência (28 dias) e/ou a idade adulta (60 dias). Hipertrofia da adrenal, involução do timo e elevação nos níveis basais de corticosterona plasmática foram observados somente nos animais adolescentes. Por outro lado, redução do peso corporal foi causada por ambos os protocolos de estresse nos animais adultos. O ECV aumentou a pressão arterial e frequência cardíaca independentemente da idade, enquanto o ERR aumentou a pressão arterial seletivamente nos animais adultos. A taquicardia de repouso induzida pelo ECV foi associado com aumento da atividade simpática cardíaca nos animais adultos, ao passo que diminuição da atividade parassimpática cardíaca foi observada nos animais adolescentes. O ECV e o ERR alteraram a atividade do barorreflexo, porém esse efeito foi dependente da idade e do tipo de estresse. A resposta pressora decorrente da administração sistêmica de fenilefrina (agonista α1-adrenoceptor) foi aumentada por ambos os protocolos de estresse na adolescência. A resposta depressora da acetilcolina e do doador de óxido nítrico nitroprussiato de sódio foi alterada pelo ERR em ambas as idades. Exceto pelo aumento nos níveis de glicocorticoide circulante, todas as alterações causadas pelo estresse durante a adolescência foram revertidas na fase adulta. Entretanto, a exposição ao ERR ou ao ECV em animais adultos pré-expostos aos respectivos protocolos de estresse crônico durante a adolescência causaram efeitos não observados nos animais estressados somente na idade adulta, que incluíram: elevação da corticosterona pelo ECV, hipertrofia da adrenal, elevação da frequência cardíaca e da atividade simpática cardíaca pelo ERR, redução da frequência cardíaca intrínseca pelo ECV e alterações nas respostas do barorreflexo por ambos os estressores crônicos. Em suma, os resultados do presente estudo indicam uma vulnerabilidade ao estresse durante adolescência para os efeitos somáticos e neuroendócrinos. Os achados indicam que os efeitos sobre a função cardiovascular e atividade autônoma são dependentes do tipo de estresse e da idade. Por fim, os resultados indicam consequências mínimas na vida adulta da exposição ao estresse crônico durante a adolescência, porém sugerem que a exposição ao estresse durante a adolescência acarreta uma vulnerabilidade aos efeitos neuroendócrinos e cardiovasculares desencadeados pela exposição a estressores crônicos na vida adulta.

Orientador: Prof. Dr. Rogério Miranda Gomes / Coorientador: Prof. Dr. Guilherme Souza Cavalcanti de Albuquerque / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva. Defesa: Curitiba, 18/07/2017 / Inclui referências : f. 172-178 / Resumo: O presente trabalho está inserido na linha de pesquisa Teorias e Práticas de Ensino na Educação Básica. Tem como objeto de estudo o Projeto Rádio Web e os sujeitos que o tornam possível na existência educacional de uma escola municipal de Curitiba. Parte da questão maior de pesquisa de quais são as contribuições pedagógicas do Projeto Rádio Web, em uma escola da Rede Municipal de Curitiba? Traz-se, como objetivo geral, analisar o uso do Projeto Rádio Web, na concepção pedagógica de professores de uma escola da Rede Municipal de Curitiba. Partiu da abordagem qualitativa, adotando o método da Análise de Discurso (AD), para explicar e interpretar o discurso escrito pelos professores, sujeitos, desta pesquisa, por meio de cartas narrativas. Como instrumentos de coleta de dados, adotaram-se: diário itinerante, composto pelas observações da pesquisadora, no percorrer da vivência da pesquisa; o questionário e as cartas narrativas. Para fundamentar a pesquisa utilizou-se como referencial: Assumpção(1999); Balestrin(2014), Camas (2014, 2013, 2012), Gomes (2013), Gonçalves(2015), Prado(2001), Silva (2014), Tosta e Pretto(2010). Pode-se entender que os sujeitos de pesquisa usam tecnologias e o Projeto Rádio Web. Também se observou que os sujeitos de pesquisa tem consciência da necessidade de desenvolver-se pedagogicamente para poder auxiliar seus alunos no processo de ensino e aprendizagem. Demonstram também a necessidade de educação continuada na formação do professor para poderem desempenhar melhor seu papel e sua função pedagógica, realizada na prática pedagógica. Palavras-Chave: Educação Básica. Tecnologias de Informação e Comunicação. Rádio Web. Formação do Professor. / Abstract: The present work is inserted in the line of research Theories and Practices of Teaching in Basic Education. Its object of study is the Web Radio Project and the subjects that make it possible in the educational existence of a public county school in Curitiba. It departs from the wider research question of which are the pedagogical contributions of the Web Radio Project, in a school of Curitiba's County Network? Its main goal is to analyze the use of the Web Radio Project in the pedagogical conception of teachers at a Curitiba County School. It started from the qualitative approach, adopting the Discourse Analysis (DA) method, to explain and interpret the discourse written by the teachers, subjects of this research, through narrative letters. As instruments of data collect, we adopted: itinerant diary, composed by the observations of the researcher, in the course of the experience of the research; a questionnaire and narrative letters. The following authors were used as reference to support the research: Assumpção (1999); Balestrin (2014), Camas (2014, 2013, 2012), Gomes (2013), Gonçalves (2015), Prado (2001), Silva (2014), Tosta and Pretto (2010).It is possible to analyze that the research subjects use technologies as well as the Web Radio Project, and are aware of the need to use them and to develop themselves to be able to help their students in the process of teaching and learning. They also demonstrate the need for continuing education in teacher training in order to better play their role and their pedagogical role, carried out in pedagogical practice. Keywords: Basic Education. Information and Communication Technologies. Web Radio. Teacher Education.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:09:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000448852-Texto+Completo-0.pdf: 665609 bytes, checksum: 0740bbfb36289c2dbf1d1223059bc24b (MD5) Previous issue date: 2013 / Individuals who are exposed to traumatic events and develop Posttraumatic Stress Disorder (PTSD) might present psychological, behavioral and cognitive difficulties after being exposed to trauma. Symptoms of PTSD include reexperience of the traumatic event, avoidance of stimuli related to the trauma and increased excitability. Regarding cognitive impairments, in addition to impairment in episodic memory and attention, PTSD has also been associated with impairments in executive functions. The impairments are not associated only with the formal diagnosis of PTSD and were also identified in individuals with high symptomatology of the disorder. This study aims to investigate cognitive performances on measures of executive functions in individuals with PTSD symptoms. For this, two studies were conducted, one theoretical and one empirical, presented in form of articles. The theoretical article sought to establish an overview of executive impairments shown by individuals exposed to trauma with either formal diagnoses of PTSD, history of PTSD or PTSD symptoms through a systematic review. The empirical article aimed to assess the cognitive performance of 29 subjects exposed to trauma and high scores on SPTSS inhibition, working memory and cognitive flexibility symptoms.These individuals had their performances compared to 24 individuals who were never exposed to any traumatic event, matched in age and education. Considering the high prevalence of disorders presented in comorbidity with PTSD the control group was formed by individuals who were being treated for any psychological or psyquiatric disorder other than PTSD. The control group consisted of clinical population because the presence of other psychopathologies can cause impairments on executive function. PTSD symptoms were assessed with the Screen for Posttraumatic Stress Symptoms (SPTSS), that aims to identify reexperience, avoidance and increased excitability symptoms in individuals exposed to trauma. A descriptive study with cross-sectional design was conducted. The group with individuals exposed to trauma and high PTSD symptoms showed poorer performance on Trail Making Test (p=0,009), an instrument used to assess cognitive flexibility. These impairments can lead to difficulties in adopting new cognitive strategies needed to deal with cognitive and environmental triggers that lead to the memory of the traumatic event. Only impairments in cognitive flexibility were identified, suggesting that some but not all EF components are affected by PTSD. / Indivíduos que experienciam um evento estressor traumático e desenvolvem Transtorno de Estresse Pós-traumático (TEPT) podem apresentar dificuldades psicológicas, comportamentais e cognitivas decorrentes da exposição ao trauma. Entre os principais sintomas do TEPT destacam-se a revivência do evento traumático, a esquiva de estímulos relacionados ao trauma e a excitabilidade aumentada. No que se refere aos prejuízos cognitivos, além dos prejuízos na memória episódica e na atenção, o TEPT tem sido associado a prejuízos no funcionamento executivo. Esses prejuízos não são associados apenas ao diagnóstico formal de TEPT, sendo, também, identificados em indivíduos com alta sintomatologia do transtorno. O objetivo geral deste estudo foi investigar o desempenho cognitivo em medidas de Funções Executivas (FE) de indivíduos com elevada sintomatologia pós-traumática de TEPT. Para isso, foram realizados dois estudos, um teórico e um empírico, apresentados na forma de artigos. O artigo teórico busca estabelecer, através de uma revisão sistemática, um panorama geral dos prejuízos executivos apresentados por indivíduos expostos a traumas com sintomas e diagnóstico formal atual ou passado de TEPT. O artigo empírico tem como objetivo avaliar o desempenho cognitivo de 29 indivíduos expostos a traumas e com elevada sintomatologia pós-traumática em medidas de inibição, flexibilidade cognitiva e memória de trabalho.Esses indivíduos tiveram seu desempenho comparado com o de 24 controles não expostos a nenhum evento traumático, pareados em relação à idade e escolaridade. Já que indivíduos com TEPT frequentemente apresentam outros transtornos em comorbidade, os controles incluídos também estavam em tratamento psicológico ou psiquiátrico – para outras psicopatologias. Dessa forma, buscou-se observar possíveis alterações de desempenho cognitivo que não se devessem simplesmente à existência de um transtorno, mas especificamente ao TEPT. Os sintomas de TEPT foram avaliados através do Instrumento de Rastreio de Sintomas de Estresse Pós-traumático (SPTSS), que tem como objetivo identificar sintomas de revivência, excitabilidade aumentada e esquiva em indivíduos expostos a traumas. A pesquisa realizada foi descritiva, com delineamento do tipo transversal. O grupo composto por indivíduos expostos a traumas e com alta sintomatologia de TEPT apresentou pior desempenho no Trail Making Test (p=0,009) instrumento utilizado para avaliação da flexibilidade cognitiva. Esses prejuízos podem conduzir a dificuldades na adoção de novas estratégias cognitivas necessárias para lidar com os gatilhos ambientais e cognitivos que remetem ao evento traumático. Os resultados indicam que prejuízos em um ou mais componentes das FE podem estar associados aos sintomas de TEPT.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:08:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434798-Texto+Completo-0.pdf: 1227746 bytes, checksum: 7ee47bf38ec67f4470c869ebf3036b24 (MD5) Previous issue date: 2011 / Metabolic syndrome (MS) is a combination of obesity, dyslipidemia, insulin resistance and hypertension, and these factors are related to the risk of cardiovascular disease. The dissertation was divided into two sections, the first section was composed by a theoretical study and the second section was empirical. The aim of the theoretical study was to conduct a systematic review to verify the occurrence of stress, both psychological and physiological, in empirical studies that evaluated patients with MS. Were included 11 articles, from the analysis of searches in databases and the results indicate positive associations and correlations between stress and MS, it is important to study how this occurs, as well as develop ways to cope with stress in order to focus on MS prevention strategies. In the empirical study is aimed to describe the profile of a cohort of 65 patients with MS submitted to the program of Lifestyle Change for patients with cardiovascular risk (MERC), assess social skills (SS), stress and identify the prevalence of psychological disorders. Were 63. 1% (n= 41) female and 36. 9% (n= 24) male, mean age of 51. 10 (SD= 6. 45) and mean weight 91. 54 (SD= 12. 11). The results show that 55. 4% (n= 36) of the population have stress, are in the resistance phase and have predominantly psychological symptoms. In anthropometric evaluation, the variables weight, BMI, waist circumference and cholesterol levels showed statistically significant differences when compared pre and post intervention (p <0. 005). SS when assessed before and after didn’t show statistically significant differences in all factors, but analysis of the items showed scores below average, regarding to request a change of approach, disagreeing with the group, ask friends for help and colleagues for favors.Therefore, modification of lifestyle, providing the opportunity to join a practice of healthy eating and regular exercise can benefit different age groups, with key focus on strategies that foster greater adherence of patients with MS to the intervention programs. / A síndrome metabólica (SM) é a combinação de obesidade, dislipidemia, resistência à insulina e hipertensão, sendo estes fatores relacionados ao risco da doença cardiovascular. A dissertação foi dividida em duas seções, a seção 1 foi composta pelo estudo teórico e a seção 2 pelo empírico. O objetivo do estudo teórico foi realizar uma revisão sistemática a fim de verificar a ocorrência de estresse, tanto psicológico quanto fisiológico, em estudos empíricos que avaliaram pacientes com SM. Foram incluídos 11 artigos, a partir da análise das buscas realizadas nas bases de dados e os resultados obtidos apontam associações e correlações positivas entre estresse e SM, sendo importante estudar como isso ocorre, bem como, desenvolver meios para enfrentamento do estresse, visando focar em estratégias de prevenção à SM. No estudo empírico, se objetivou descrever o perfil de uma coorte de 65 pacientes com SM submetidos ao programa de Mudança de Estilo de Vida para pacientes com Risco Cardiovascular (MERC), avaliar as habilidades sociais (HS), o estresse e identificar a prevalência de transtornos psicológicos. Foram 63,1% (n=41) sujeitos do sexo feminino e 36,9% (n=24) do sexo masculino, com média de idade de 51,10 (DP=6,45) e média de peso 91,54 (DP=12,11). Os resultados demonstram que 55,4% (n=36) da população possuem estresse, na fase de resistência e com sintomatologia predominante psicológica. Na avaliação antropométrica, as variáveis, peso, IMC, circunferência abdominal e colesterol mostraram diferenças estatisticamente significativas na avaliação pós-intervenção, comparadas a linha de base (p<0,005).As HS, quando avaliadas antes e depois não mostraram diferenças estatisticamente significativas em todos os fatores, mas a análise dos itens mostrou pontuações abaixo da média, no que se refere a pedir mudança de conduta, discordar do grupo, pedir ajuda de amigos e favores a colegas. Sendo assim, a modificação de estilo de vida, oportunizando adesão a uma alimentação saudável e a pratica de exercício físico regular pode beneficiar distintas faixas etárias, sendo fundamental o foco em estratégias que propiciem maior adesão dos pacientes com SM aos programas de intervenção.

Soja, uma cultura conhecida por sua importância econômica e nutricional, tem sido objeto de vários estudos que avaliam o impacto e as respostas efetivas das plantas aos estresses abióticos. O estresse salino é um dos principais estresses ambientais e afeta negativamente o crescimento e o rendimento das culturas, incluindo a soja. A edição de RNA é um processo pelo qual as sequências de nucleotídeos podem ser alteradas, revertendo mutações que podem mudar as sequências de proteínas para manter suas funções conservadas. As proteínas pentatricopeptide repeat (PPRs) são trans-elementos de edição caracterizados por reconhecer cis-elementos específicos de RNA e realizar a reação de edição. Vários estudos descreveram estes trans-elementos e seus sítios de edição cognatos, mas nem todas as proteínas que compõem o complexo de edição foram identificadas. A perda de eventos de edição de plastídios, resultante de mutações em fatores de edição de RNA ou através de interferência por estresse, leva a alterações de desenvolvimento, de fisiologia e da fotossíntese. O objetivo do presente trabalho é caracterizar os sítios de edição e os fatores associados à edição de RNA em Glycine max e a influência de estresses abióticos no processo de edição de RNA em cloroplastos. No capítulo 1, um método é apresentado para triar a edição de RNA de cloroplasto usando bibliotecas públicas de sRNAs de Arabidopsis, soja e arroz. Entre os sítios de edição previstos, 40,57, 34,78 e 25,31% foram confirmados utilizando sRNAs de Arabidopsis, soja e arroz, respectivamente. A análise de SNPs revelou alterações de C-to-U de 58,2, 43,9 e 37,5% nas respectivas espécies e identificou conhecidas e possíveis novas edições de RNA de adenosina para inosina (A-to-I) em tRNAs. O método e os dados revelam o potencial do uso de sRNA como uma fonte confiável para identificar novos e confirmar sítios de edição conhecidos. No capítulo 2, o processo de edição de RNA foi avaliado em cloroplastos de plantas de soja sob estresse salino. A abordagem de bioinformática utilizando bibliotecas de sRNAs e mRNAs foi empregada para detectar sítios específicos que mostram diferenças na taxa de edição. RT-qPCR foi usado para medir a taxa de edição nos sítios selecionados. Observamos diferenças nas taxas de edição nos transcritos dos genes ndhA, ndhB, rps14 e rps16 ao comparar os dados das bibliotecas controle e das tratadas com NaCl. Os ensaios de RT-qPCR 9 demonstraram um aumento na edição dos genes selecionados. Esses aumentos podem ser uma resposta para manter a homeostase das funções das proteínas do cloroplasto em resposta ao estresse salino. No capítulo 3, para identificar os fatores relacionados aos sítios de edição analisados, sondas biotiniladas de RNA foram projetadas com base nos sítios de edição de RNA de plastídio de soja para realizar um isolamento proteico específico do fator de edição. Proteínas que interagiram com as sondas foram isoladas através da ligação das sondas à biotina e foram identificadas utilizando espectrometria de massa. Entre os peptídeos detectados, cinco corresponderam a proteínas PPR. A comparação dos genes de Arabidopsis com as proteínas PPR da soja permitiu a identificação dos homólogos mais próximos. O presente estudo representa a primeira identificação do conjunto de sítios de edição de RNA, de fatores associados aos sítios de edição de RNA e a caracterização dos efeitos do estresse abiótico na edição de RNA em Glycine max. / Soybean, a crop known by its economic and nutritional importance, has been the subject of several studies that assess the impact and the effective plant responses to abiotic stresses. Salt stress is one of the main environmental stresses and negatively impacts crop growth and yield. RNA editing is a process whereby nucleotide sequences can be altered, reverting mutations that could change protein sequences to maintain their conserved functions. Pentatricopeptide repeat proteins are editing trans-elements characterized by recognize specific RNA cis-elements and perform the editing reaction. Several studies have described these trans-elements and their cognate editing sites, but not all proteins that compose the editing complex were identified. The loss of plastid editing events, resulting from mutations in RNA editing factors or through stress interference, leads to developmental, physiological and photosynthetic alterations. The aim of the present work is to characterize the editing sites and factors associated with RNA editing in Glycine max and the influence of abiotic stresses on the process of RNA editing in chloroplasts. In chapter 1, a method is presented to screen chloroplast RNA editing using public sRNA libraries from Arabidopsis, soybean and rice. Among the predicted editing sites, 40.57, 34.78, and 25.31% were confirmed using sRNAs from Arabidopsis, soybean and rice, respectively. SNP analysis revealed 58.2, 43.9, and 37.5% new C-to-U changes in the respective species and identified known and new putative adenosine to inosine (A-to-I) RNA editing in tRNAs. The method and data reveal the potential of sRNA as a reliable source to identify new and confirm known editing sites. In chapter 2, RNA editing process was evaluated in the chloroplast of soybean plants under salt stress. Bioinformatics approach using sRNA and mRNA libraries was employed to detect specific sites showing differences in editing efficiency. RT-qPCR was used to measure editing efficiency at selected sites. We observed differences in ndhA, ndhB, rps14 and rps16 editing rates between control and salt-treated libraries. RT-qPCR assays demonstrated an increase in editing efficiency of selected genes. These increases can be a response to keep the homeostasis of chloroplast protein functions in response to NaCl stress. In chapter 3, to identify the trans-acting factors of editing sites analyzed, we have designed RNA biotinylated probes based in soybean plastid RNA editing sites to perform 11 specific isolation of proteins associated to editosomes. Proteins that interacted with the probes were isolated by binding the probes to biotin and were identified using mass spectrometry. Among the detected peptides, five corresponded to PPR proteins. Comparison of Arabidopsis genes to the soybean PPR proteins allow identification of the closest related homologs. The present study represents the first identification of RNA editing sites set, associated factors to RNA editing sites and characterization of effects from abiotic stress in RNA editing in Glycine max.

A ascorbato peroxidase (APX) é uma das principais enzimas do sistema de detoxificação de espécies reativas de oxigênio (ERO) em plantas, catalisando a conversão do peróxido de hidrogênio em água usando o ascorbato como doador de elétrons. No arroz, oito genes codificam APX. O presente estudo teve como objetivo avaliar o papel das enzimas de APXs em arroz, através da determinação das localizações subcelulares das diferentes isoformas, do estudo da expressão gênica e da caracterização detalhada do efeito do silenciamento das isoformas cloroplastídicas (chlAPXs) no metabolismo da planta, em condições normais e na resposta à estresses abióticos. A expressão diferencial das diferentes isoformas de APXs em condições de estresses abióticos varia entre as espécies e com a intensidade e duração do estresse. A localização subcelular de OsAPX1 e OsAPX2 no citosol, OsAPX3 e OsAPX4 nos peroxissomos, OsAPX5 no cloroplasto/mitocôndria, OsAPX6 na mitocôndria e OsAPX7 no cloroplasto foram confirmadas em protoplastos de arroz. Plantas duplamente silenciadas para os genes OsAPX7/OsAPX8 não apresentam alterações fenotípicas, no entanto possuem alterações no metabolismo antioxidante sob condições normais de crescimento. Análises proteômicas dessas plantas revelaram que várias rotas importantes foram afetadas, especialmente proteínas envolvidas com processos fotossintéticos. Plantas silenciadas submetidas a estresse de alta luz (HL) e metil viologênio (MV) mostraram que as chlAPXs são importantes na proteção antioxidante em arroz. Alterações como fotodanos, fotoinibição e bloqueio do transporte de elétrons foram observadas nas plantas silenciadas submetidas a estresses abióticos, gerando grandes distúrbios na atividade fotoquímica. No entanto, sob alta luz as chlAPXs parecem não serem essenciais para a proteção de fotodanos, fotoinibição e danos oxidativos dirigidos pela alta luz no fotossistema II. Plantas silenciadas e não-transformadas (NT) exibem diferenças na fotossíntese sob condições normais de crescimento, bem como quando submetidas a estresses abióticos. / Ascorbate peroxidase (APX) is a major enzyme of the Reactive Oxygen Species (ROS) detoxification system in plants, catalyzing the conversion of hydrogen peroxide into water using ascorbate as electron donor. In rice eight genes encode APX. This study aimed to evaluate the role of APX enzymes in rice, through subcellular localization of the different isoforms, the study of gene expression and detailed characterization of chloroplastic APXs (chlAPXs) silencing in plant metabolism under normal conditions and in response to abiotic stresses. The differential expression of the different isoforms of APXs under abiotic stress conditions varies among species, and depends on the intensity and duration of stress. The subcellular localization of OsAPX1 and OsAPX2 in cytosol, OsAPX3 and OsAPX4 in peroxisomes, OsAPX5 in cloroplast/mitochondria, OsAPX6 in mitochondria and OsAPX7 in chloroplast were confirmed in rice protoplasts. Double silenced plants in OsAPX7/OsAPX8 genes did not show phenotypic changes; however presented alterations in the antioxidant metabolism under normal growth conditions. Proteomic analysis revealed that in theses plants several important pathways were affected, especially proteins involved with photosynthetic process. Silenced plants subjected to high light (HL) and methyl viologen (MV) stresses show that the chlAPXs are important in the antioxidant protection in rice. Alterations such photodamage, photoinhibition and obstruction of the electron transport were observed in silenced plants subjected to abiotic stresses, generating great disturbances in photochemical activity. However, under high light the chlAPXs appear not be essential to the protection of photodamage, photoinhibition and oxidative damage triggered by HL in photosystem II (PSII). Silenced and non-transformed (NT) plants exhibit differences in photosynthesis under normal growth conditions, as well as, when subjected to abiotic stress.

Em crustáceos, ainda não são conhecidas as fontes de aminoácidos e as rotas metabólicas envolvidas no controle da concentração intracelular de aminoácidos. Os experimentos deste trabalho tiveram como objetivo investigar se o estresse osmótico provoca alterações intrínsecas sobre o metabolismo de aminoácidos nos tecidos de C. granulatus submetidos a estresse agudo in vitro. Medimos a síntese e a mobilização de proteínas, a captação de aminoácidos e a produção de 14CO2 a partir de 14C-leucina no hepatopâncreas, músculo mandibular e brânquias anteriores e posteriores submetidos a estresse hipo e hiperosmótico agudo, in vitro. O controle da síntese de proteínas parece estar envolvido no ajuste metabólico da concentração intracelular de aminoácidos no hepatopâncreas, músculo mandibular e brânquias submetidos à alteração osmótica aguda, in vitro. Por outro lado, durante o estresse hiposmótico agudo, in vitro, a diminuição na captação de aminoácidos via sistema A e o aumento na oxidação total de 14C-L-leucina foram usados como mecanismos para reduzir as concentrações intracelulares de aminoácidos nas brânquias posteriores e anteriores, respectivamente. A captação de aminoácidos e a mobilização de 14C-proteina não foram mecanismos usados para aumentar a concentração intracelular de aminoácidos em todos os tecidos estudados.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4595_1.pdf: 1938039 bytes, checksum: c4f93fc7a8d37e558b6625c6c70bbb3f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O processo de fermentação alcoólica industrial é caracterizado por um intenso reciclo das células de leveduras, com constante exposição a baixos valores de pH tanto no mosto quanto no pré-fermentador. Isto induz um constante estresse ácido que leva a diminuição da viabilidade celular no processo. Este trabalho tem como objetivo o estudo dos fatores celulares responsáveis pela resistência ao estresse ácido a partir da identificação dos genes de Saccharomyces cerevisiae que respondem a este estresse e do isolamento e caracterização de mutantes resistentes a ácidos inorgânicos. Inicialmente a linhagem JP1 foi isolada do mosto de fermentação pela sua capacidade de dominância no processo fermentativo de diferentes destilarias. Esta linhagem apresentou a mesma resposta fenotípica às diferentes formas de estresse industrial (ácido e etanólico) que a linhagem comercial PE-2. As células da linhagem JP-1 foram posteriormente testadas para o crescimento celular e desempenho fermentativo em meio mineral acidificado e os resultados mostraram o baixo pH do meio não influenciou estes dois parâmetros. Adicionalmente, cerca de 1% dos genes da linhagem de laboratório JT-95 de S. cerevisiae apresentou modificação no padrão de expressão, sendo 35 genes reprimidos e 28 genes induzidos pelo ácido sulfúrico. Entretanto, não se observou uma relação direta entre o conjunto de genes modificados e os mecanismos conhecidos de resposta a estresse, o que sugere uma resposta multifatorial ao choque ácido em leveduras. E finalmente um mutante resistente a ácidos inorgânicos (sulfúrico e clorídrico) foi isolado a partir de células da linhagem JP-1. Este mutante foi capaz de crescer em meio ajustado para pH 2, mas semelhante ao parental não apresentou resistência a ácidos orgânicos (sorbato). Isto mostra que a resistência a estes dois tipos de ácidos deve ser mediada por mecanismos celulares diferentes. A análise de expressão gênica neste mutante deverá gerar informações mais precisas sobre este mecanismo de resistência