Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:31Z : No. of bitstreams: 1 000853353_20160401.pdf: 477077 bytes, checksum: 3fbebb8bad4f24900ae9405979963fe5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-04-01T11:49:41Z: 000853353_20160401.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T11:50:35Z : No. of bitstreams: 1 000853353.pdf: 1877326 bytes, checksum: 0800b485adb0e3c6151cb1cf5fd826ed (MD5) / O câncer de pulmão é a causa mais frequente de óbito por câncer, com 1,6 milhões de óbitos mundialmente, a cada ano. Apesar dos avanços nas estratégias de tratamento, o prognóstico dos pacientes com carcinoma pulmonar ainda é pobre. O desenvolvimento de drogas com alvos moleculares têm levado a um aumento, embora modesto, na sobrevida de pacientes com carcinomas pulmonares de células não pequenas (NSCLC), especialmente do subtipo histológico adenocarcinoma (AD). A identificação de vias moleculares como alvos terapêuticos é uma área promissora de investigação. Considerando que os miRNAs regulam a expressão gênica, os miRNAs têm o potencial de modular vias moleculares associadas à gênese e progressão do câncer. Investigamos alterações na expressão e ou mutações em sequências de miRNAs em AD pulmonar, utilizando plataformas de análise de sequenciamento de alto desempenho (Illumina) (N=17 AD e N=7 tecidos pulmonares histologicamente normais) e ensaios da PCR quantitativa em tempo real (RQ-PCR) (N=22 AD e N=9 N). A análise de miRNA-Seq identificou variações em nucleotídeos únicos (SNVs) bem como alterações na expressão de miRNAs em AD pulmonar. Três miRNAs (miR- 328, miR-574 e miR-99a) foram validados, com expressão aumentada (p<0,05) em AD comparado com N. Adicionalmente, realizamos uma meta-análise de dados da literatura em NSCLC, com o objetivo principal de comparar os dados da literatura com os nossos dados de miRNA-Seq em AD. Os miRNAs identificados na meta-análise foram utilizados em análises de predição de genes-alvo potencialmente regulados por miRNAs. Redes de interação proteica e vias moleculares relevantes em AD pulmonar foram identificadas. mRNAs-alvo identificados nas redes de interação foram validados por RQ-PCR em 57 amostras de 38 pacientes com NSCLC (N=30 NSCLC e N=27 N). Os resultados mostraram que 3 genes-alvo de miRNAs (PIK3R1, NOTCH1, KLF4), estavam frequentemente...

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:48Z : No. of bitstreams: 1 000851416.pdf: 1126248 bytes, checksum: 7a28413fc3c47fd85da6d3f405ba33fc (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve agentes hereditários, ambientais e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas também estão relacionadas à presença de comorbidades como a hipertensão arterial, diabetes tipo 2 e doenças cardiovasculares, sendo considerada pela Organização Mundial da Saúde como uma epidemia global. A obesidade é definida como uma doença associada à inflamação crônica de baixo grau, caracterizada pelos elevados níveis circulantes de citocinas inflamatórias e proteínas de fase aguda e ao excesso de adipocinas no tecido adiposo. A cirurgia bariátrica, importante forma de tratamento para a obesidade mórbida, tem dentre seus efeitos positivos a melhora do perfil inflamatório devido à redução do tecido adiposo. Contudo, esse procedimento produz alterações na anatomia e fisiologia gastrointestinal, as quais têm consequências na absorção de alimentos, podendo resultar em deficiências de micronutrientes como vitaminas e sais minerais. Sabe-se que vários micronutrientes podem contribuir para a redução de distúrbios associados à obesidade devido à habilidade de regular a expressão gênica, modular a adipogênese e o processo inflamatório. Diante desse cenário, o presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a ingestão de micronutrientes, o perfil de citocinas plasmáticas circulantes e o padrão de expressão dos genes IL-6, IL-10 e TNF-α em mulheres com obesidade mórbida (n =30), antes e após suplementação nutricional com as vitaminas A, B6, B12, C, E e D3, ácido fólico, ferro, selênio e zinco, e a cirurgia bariátrica. Os dados obtidos mostraram que apenas para as vitaminas C e D3 foram detectadas concentrações séricas abaixo dos valores de referência após a suplementação e cirurgia bariátrica. Com relação às citocinas TNF-α, VEGF e MCP-1, todas apresentaram concentrações mais altas nas mulheres... / Obesity is a multifactorial disorder involving hereditary and environmental factors and lifestyle, its adverse effects are not only social or psychological, but are also related to the presence of comorbidities such as hypertension, type 2 diabetes and cardiovascular disease, being considered by World Health Organization as a global epidemic. Obesity is defined as a disease associated with chronic low-grade inflammation characterized by elevated levels of circulating cytokines and acute phase proteins and excess of adipokines in adipose tissue. Bariatric surgery, important treatment for morbid obesity, has among its positive effects the improvement of inflammatory profile promoted by the reduction of adipose tissue. However, this procedure leads to changes in the gastrointestinal anatomy and physiology and, consequently, alters the absorption process, which may result in micronutrient deficiencies such as vitamins and minerals. It is known that several micronutrients may contribute to the reduction of obesity-related disorders due to the ability to regulate gene expression, modulate adipogenesis and inflammation. In this context, the present study aimed to evaluate the relationship between micronutrient intake, the expression pattern of IL-6, IL-10 and TNF-α genes and the profile of circulating plasma cytokines in women with morbid obesity (n = 30) before and after dietary supplementation with vitamins A, B6, B12, C, D3, and E, folic acid, iron, selenium, zinc, and bariatric surgery. The data showed that only vitamin D3 and C serum concentrations were detected below reference values after supplementation and bariatric surgery. The circulation levels of TNF-α, VEGF and MCP-1 cytokines were significant higher in obese women compared to normal weight women, confirming the inflammatory state associated with obesity. IL-6, TNF-α and VEGF circulation levels were significant decreased after bariatric surgery. Gene expression data also showed ...

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:31:06Z : No. of bitstreams: 1 000851990.pdf: 2929983 bytes, checksum: 4b4eebc0f3dce25973868ccbceeb93e2 (MD5) / O Brasil é o segundo maior produtor de soja do mundo e maior parte da produção se encontra nas áreas tropicais do país, mais propensas à ocorrência de seca e de altas temperaturas. Sob tais condições estressantes é comum a ocorrência de retenção de clorofila nas sementes ao final da maturação. Muito pouco se sabe a respeito do papel da clorofila em sementes em desenvolvimento, mas a presença de tal pigmento em sementes oleaginosas aumenta a oxidação do óleo extraído, resultando em redução na vida de prateleira, aparência desagradável e consequentemente preços mais baixos pagos ao produtor. A qualidade fisiológica das sementes também é severamente afetada. Além das condições ambientais, fatores genéticos também controlam a susceptibilidade à retenção de clorofila. Caracterização detalhada da produção de sementes verdes por duas cultivares conduzidas sob condições de estresse e os efeitos sobre a qualidade fisiológica das sementes foi realizada. Na tentativa de determinar os mecanismos moleculares da degradação de clorofila em sementes e consequentemente sua retenção, uma análise de transcriptoma foi conduzida utilizando-se sementes estressadas (verdes) e não estressadas (amarelas) de soja em três estádios de maturação; R6, R7 and R8. Múltiplas ontologias foram significativamente afetadas pelo estresse. Entre as mais alteradas estão os processos fotossintéticos, particularmente a categoria fotossistema II. A análise de expressão gênica sugere aumento na expressão das proteínas D1 (psbA), D2 (psbD), A1 (psaA) e A2 (psaB), subunidades principais dos fotossistemas II e I, em sementes estressadas/verdes. Atenção especial também foi dada a enzimas do catabolismo de clorofila e a genes stay-green, dentre os quais, distúrbios na expressão de PPH2, D1 e D2 podem ser a principal causa da retenção de clorofila em sementes de soja / Brazil is the second largest soybean producer in the world and most of its production is located in the tropical area of the country which is prone to drought and high temperature. Under such stressful conditions it is common to observe the retention of chlorophyll at the end of seed maturation. Very little is known about the role of chlorophyll in developing seeds, but its presence in oilseeds enhances oxidation of the extracted oil, resulting in reduced shelf life, unappealing appearance and a lower price for the producer. Also seed quality for propagation is severely affected by chlorophyll retention. Besides environmental conditions, there are also genetic components controlling the sensitivity of different cultivars to retain chlorophyll. A detailed characterization of green seed production by two different cultivars under stressed conditions and its effect on seed lot quality was carried out. In an attempt to determine the molecular basis of chlorophyll degradation and, consequently, its retention, a transcriptome analysis was performed using stressed (green) and non-stressed (yellow) soybean seeds at three stages of maturation: R6, R7 and R8. Multiple ontologies were enriched in soybean seeds produced under stress. Among the top-ranking was the photosynthetic process, particularly the photosystem (PS) II category. The expression analysis suggests higher levels of the proteins D1 (psbA), D2 (psbD), A1 (psaA) and A2 (psaB) core subunits of PSII and PSI, in stressed/green seeds. Special attention was also given to chlorophyll catabolic enzymes and to stay-green genes, among which, disturbances in expression of PPH2, D1 and D2 caused by environmental stresses appears to be the major cause for chlorophyll retention in soybean seeds.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-22. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:18Z : No. of bitstreams: 1 000855558.pdf: 2496353 bytes, checksum: afab1cef7d337a1187a0d63fa17d398d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O cerebelo é suscetível aos efeitos lesivos do etanol em exposições agudas ou crônicas, em diferentes idades, podendo ocasionar alterações motoras, de aprendizado, cognitivas e favorecer a morte celular apoptótica. Nosso objetivo foi avaliar a apoptose nos neurônios de Golgi, Purkinje e células granulares do cerebelo de ratos adultos da variedade UChA. Metodologia: Os ratos foram divididos em dois grupos experimentais (20 ratos por grupo): um grupo controle, composto de animais UChA abstinentes e o grupo experimental, formado por ratos UChA, consumidores voluntários de etanol a 10% (˂ 2g etanol/Kg peso corpóreo/dia). Dos 65 dias aos 120 dias de idade, os animais receberam solução de etanol a 10%. Aos 120 dias, os animais foram anestesiados e preparados para eutanásia. O cerebelo foi então analisado por microscopia eletrônica de transmissão (MET), imunoistoquímica para apoptose, caspase-3 (próapoptótica), XIAP (antiapoptótica) e IGF-1R nos neurônios de Golgi, Purkinje e granulares. Avaliou-se também por RT-PCR os genes reguladores da caspase-3, XIAP e IGF-1R no córtex cerebelar dos grupos estudados. Resultados: Os animais UChA mostraram acúmulo de gotas lipídicas, presença de núcleos eletrodensos nos neurônios granulares e de Purkinje, desorganização do corpo medular do cerebelo com alterações na bainha de mielina no córtex cerebelar. Identificou-se também aumento significativo na imunomarcação de caspase-3 e XIAP nos neurônios de Purkinje e granulares. A fragmentação do DNA foi significativa nas células de Purkinje. O IGF-1R não apresentou alterações. Não houve diferenças significativas na expressão dos genes de caspase-3, XIAP, e o IGF-1R. Conclusão: O etanol induz apoptose nas células de Purkinje e granulares do cerebelo de ratos adultos UChA / Introduction: The cerebellum is susceptible to the harmful effects of ethanol in acute or chronic exposures at different ages, which may cause motor, learning and cognitive disorders and promote apoptotic cell death (PCD) as well. Our objective was to evaluate apoptosis in Golgi and Purkinje neurons and in granular cell disease of the cerebellum of adult rats of the type UChA. Methodology: The rats were divided in two experimental groups (20 rats per group): a control group, consisting of abstinent UChA animals and the experimental group, formed by UChA rats, volunteers consumers of 10% ethanol (˂ 2g ethanol / kg weight body / day). From 65 day-age to the 120 day-age, the animals received 10% ethanol solution. After 120 days, the rats were anesthetized and prepared for euthanasia. The cerebellum was then analyzed by transmission electron microscopy (TEM), immunohistochemistry to apoptosis, caspase-3 (pro-apoptotic), XIAP (anti-apoptotic) and IGF-1R in Golgi, Purkinje neurons and granular as well. It was also evaluated by RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction) the regulatory genes caspase-3, XIAP and IGF-1R in the cerebellar cortex of groups. Results: The UChA animals showed accumulation of lipid droplets, presence of electron-nuclei in granule neurons and Purkinje, disorganization of the medullary body of the cerebellum with some changes in the myelin sheath of the cortex. It was also identified significant increase in the Immunostaining caspase-3 and XIAP in Purkinje neurons and granular. The DNA fragmentation was significant in Purkinje cells. The IGF-1R didn't have any change though. There were no significant differences in the formulation of caspase-3 genes, XIAP and IGF-1R. Conclusion: Ethanol induces apoptosis in granular and Purkinje cells of the cerebellum of adult UChA rats / FAPESP: 2011/50466-0

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:33:19Z : No. of bitstreams: 1 000855233_20170902.pdf: 401917 bytes, checksum: e7c11118f603b9f4ad566ac2209ad7f0 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-06T14:01:35Z: 000855233_20170902.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-06T14:02:27Z : No. of bitstreams: 1 000855233.pdf: 2952114 bytes, checksum: 6326db3d25695fe62195613e3ac064a8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No Brasil, a cultura da cana-de-açúcar tem se expandido para regiões com prolongados períodos de deficiência hídrica, o que vem limitando a produção sucroenergética. Neste estudo, os perfis de expressão gênica de duas cultivares de cana-de-açúcar (Saccharum spp.), uma tolerante e outra sensível ao estresse hídrico, foram avaliados através da tecnologia de RNA-Seq. A montagem de novo do transcriptoma de folhas foi realizada visando identificar e analisar os genes diferencialmente expressos entre as cultivares, envolvidos com a resposta molecular durante períodos de estresse hídrico. Para isso, as duas cultivares foram plantadas em casa de vegetação e aos 60 dias após o plantio foram submetidas a três controlados potenciais hídricos do solo (controle, déficit hídrico moderado e déficit hídrico severo) e avaliadas aos 30, 60 e 90 dias após a aplicação dos tratamentos. A partir do método RNA-Seq, foram geradas mais de um bilhão de sequências, as quais permitiram obter um total de 177.509 e 185.153 sequências de transcritos, para as cultivares tolerante e sensível, respectivamente. O conjunto de transcritos expressos foram montados com o auxílio do programa Trinity. Estes transcritos foram alinhados com sequências de Sorghum bicolor, Miscanthus giganteus, Arabidopsis thaliana bem como sequências de cana-de-açúcar disponíveis em bancos públicos. Esta análise permitiu identificar o conjunto de genes de cana-de-açúcar compartilhados com outras espécies, bem como levou à identificação de novos transcritos ainda não catalogados. Os transcritos foram anotados e categorizados através dos termos do Gene Ontology (GO) em três categorias: componente celular, função molecular e processos biológicos para as duas cultivares. Os termos regulador de enzima e regulador de transcrição que se encontram dentro da categoria função molecular estão em evidência dentro dos termos associados aos... / In Brazil, the sugarcane culture has expanded to areas with prolonged drought seasons, which is constraining sugarcane production. In this study, the gene expression profiles of two sugarcane cultivars (Saccharum spp.), one tolerant and other sensitive to water stress, were assessed by the RNA-Seq technology. The de novo assembly of leaves transcriptome was held aiming to identify and to analyze differentially expressed genes between the cultivars involved with molecular response during water stress periods. In order to accomplish this, the two cultivars were planted in a greenhouse and 60 days after planting them, they were submitted to three potential controlled water soil (control, moderate drought and severe water deficit) and evaluated at 30, 60 and 90 days after treatments application. Using the RNA-Seq method were generated over a billion sequences, which allowed to obtain a total of 177,509 and 185,153 transcripts sequences for the tolerant and sensitive cultivars, respectively. The set of expressed transcripts were assembled using the Trinity program. These transcripts were aligned with Sorghum bicolor, Miscanthus giganteus, Arabidopsis thaliana sequences and sugarcane sequences available in public databases. This analysis allowed the identification of the set of sugarcane genes shared with other species, as well as led to the identification of novel transcripts not cataloged yet. The transcripts were annotated and categorized by the terms of the Gene Ontology (GO) into three categories: cellular component, molecular function and biological process for the two cultivars. The terms enzyme regulator and transcription regulator that lie within the molecular function category are highlighted within the terms associated with the differentially expressed genes between the contrasting cultivars, suggesting the importance of gene regulation for the studied cultivars. This study found different molecular patterns of the involved ...

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-29. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:33:41Z : No. of bitstreams: 1 000854236.pdf: 3500858 bytes, checksum: 0816f15b9343c3e3ecc9d4ad9291ee5e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma de células escamosas de laringe (CCEL) é um dos mais comuns que acometem a região da cabeça e pescoço, representando aproximadamente 25% dos tumores malignos desta localização anatômica. Os fatores de risco associados ao desenvolvimento deste tumor são o consumo de tabaco e álcool, história familiar e a infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV) em uma parcela dos casos. A ocorrência de segundos tumores primários e metástases é frequentemente relatada nos CCEL. Entretanto, até o momento, não há marcadores moleculares úteis na prática clínica que sejam capazes de predizer a progressão e a evolução clínica da doença. Neste contexto, as plataformas de microarranjos de oligonucleotídeos (microarrays), têm possibilitado uma análise mais ampla na busca por marcadores de detecção precoce, progressão, resposta e risco de recorrência e metástase. Foram incluídos neste estudo 88amostras de CCEL de pacientes não tratados. O grupo teste foi composto por 35 CCEL avaliados previamente para expressão gênica global (8x60K, Agilent Technologies) e 33 para a expressão de miRNAs (plataforma Array 8x60K, Agilent Technologies). O grupo de validação foi formado por 33amostras fixadas em formalina e em blocos de parafina (FFPE) e 19 amostras de tumor a fresco. O grupo teste foi avaliado para genotipagem para o HPV (LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test, Roche), resultando em dois casos positivos para HPV16. A análise de expressão de transcritos revelou 1.680 genes diferencialmente expressos comparados aos tecidos normais de laringe (necrópsias). A análise de expressão global de miRNAs revelou 89 miRNAs diferencialmente expressos na comparação entre tecido normal e tumoral. A integração entre os dados de transcritos codificadores e de miRNAs (correlação negativa r<0) revelou alterações recorrentes em um subgrupo de genes associados com a degradação de componentes da matriz extracelular... / Laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) is one of the most common head and neck malignancies representing approximately 25% of the tumors located in this region. Risk factors associated to development of LSCCs include alcohol and tobacco consumption, family history of cancer and human papilloma virus (HPV) infection. Second primary tumors and metastasis are frequently observed in patients with LSCC. To date, no useful molecular markers have been described that can successfully predict disease progression and clinical outcome. In this context, large scale molecular studies enable a global analysis of tumor molecular alterations aiming to reveal biomarkers for early diagnosis, prognosis and response to therapy. LSCC samples were obtained from 88 untreated patients. Global gene (Array plataform 8x60K, Agilent Technologies) and miRNA expression (Array platform 8x60K, Agilent Technologies) profiles were evaluated in 35 and 33 samples, respectively (Test group, N=36). An independent group of samples (N=33, validation group) was included, being 33 formalin fixed and paraffin embedded tissue samples and 19 fresh frozen tissues. HPV genotyping using LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (Roche) was performed in tumor samples from test group. Only two cases were HPV16-positive. The expression analysis revealed 1,680 differentially expressed genes in tumors compared to normal tissue (pool of normal laryngeal samples from necropsies). The miRNA analysis revealed 89 miRNAs differentially expressed. Integrative transcriptome and miRNAs analysis data (negative correlation r<0) revealed a subset of altered genes associated with the degradation of extracellular matrix components (MMP3, MMP9, MMP10, MMP13, COL10A1 and COL3A1) and neoplastic processes (CAV1, ERBB4, HLF,HMGA2, HOXB6, KLF2, PDCD4, PPP1R3 and TOP2), as well as their putative miRNA regulators (hsa-miR-199b-5p, hsa-miR-218-5p, hsa-miR-29c-3p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-204-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR- ...

Submitted by FELIPE MORALES DALANEZI null (fmdalanezi@gmail.com) on 2016-03-01T17:52:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_EV_MIV_Felipe_Dalanezi.pdf: 987917 bytes, checksum: 4a81200cfc32872f02a3c22702235ec4 (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-03-01T19:24:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dalanezi_fm_me_bot.pdf: 987917 bytes, checksum: 4a81200cfc32872f02a3c22702235ec4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-01T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dalanezi_fm_me_bot.pdf: 987917 bytes, checksum: 4a81200cfc32872f02a3c22702235ec4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Vários são os componentes que tem a capacidade de interferir no metabolismo e desenvolvimento do oócito no interior do folículos, dentre esses fatores estão As EVs. Sendo assim o objetivo deste estudo foi avaliar a modulação da maturação oocitária in vitro pelas EVs extraídos de vacas submetidas ao estresse térmico (ET) ou não. Para tanto 12 vacas da raça holandesa foram submetidas ao ET e 12 vacas foram mantidas em condições de termo-neutralidade, em seguida tiveram seus folículos aspirados em dois momentos do ciclo estral (pré-ovulação e desvio). Após a separação das EVs do fluido folicular, e visualizados pela microscopia eletrônica. Então As EVs foram colocados em meio de maturação para avaliação da ação destas vesículas durante a maturação oocitária. Após 22 horas de maturação, os oócitos e as células do cummulus foram recuperados para posterior análise de progressão da maturação e também para expressão de genes de interesse. Não foi observada diferença estatística entre os grupos na análise de progressão meiótica nem na integridade do DNA. Indicando que As EVs não interferiram na morfologia oocitária. A expressão gênica no entanto demonstrou que genes relacionados a expansão do cummulus (BMP15, HAS2, GDF9, PTX3), metabolismo energético (BMP15,CPT1B, PFKP), IGF (IGFBP2 e 4) e apoptose (BCL2 e STAT3), apresentaram expressão diminuída no grupo termo-neutro. Os dados do nosso estudo indicam que o ambiente termo-neutro levou a uma sinalização intrafolicular das EVs com a finalidade de indicar uma situação favorável para o oócito. / There are several components that have the ability to interfere with the metabolism and development of the oocyte in side of follicles, among these factors are the EVs. Thus the aim of this study was to evaluate the modulation of oocyte maturation in vitro by EVs extracted from cows under heat stress or not. For that, 12 Holstein cows were subjected to heat stress and 12 cows were kept in a thermo-neutral conditions, then had their follicles aspirated in two stages of the estrous cycle (pre-ovulation and deviation). After separation of the EVs from follicular fluid, and visualized by electron microscopy. The EVs were placed in maturation medium for evaluation of the action of these vesicles during oocyte maturation. After 22 hours of maturation, oocytes and cummulus cells were recovered for further analysis of meiotic progression and for expression of genes of interest. There was no statistical difference between the groups in meiotic progression analysis or the DNA integrity. Indicating that the EVs not interfere in oocyte morphology. Gene expression however demonstrated that genes related to the expansion of the cumulus (BMP15, HAS2, GDF9, PTX3), energy metabolism (BMP15, CPT1B, PFKP), IGF (IGFBP2 and 4) and apoptosis (BCL2 and STAT3) showed decreased expression the thermo-neutral group. The data from our study indicate that the thermo-neutral environment led to a intrafollicular signaling EVs in order to indicate a favorable situation for the oocyte.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-16. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:55Z : No. of bitstreams: 1 000858918_20161201.pdf: 333330 bytes, checksum: c0636ee17df2fc68440f54982793fb62 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-12-02T12:25:12Z: 000858918_20161201.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-02T12:25:55Z : No. of bitstreams: 1 000858918.pdf: 833899 bytes, checksum: 61471c8c48738cbaa1ecc21825c5d2ac (MD5) Bitstreams deleted on 2016-12-02T12:41:53Z: 000858918.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-02T12:42:33Z : No. of bitstreams: 1 000858918.pdf: 833899 bytes, checksum: 61471c8c48738cbaa1ecc21825c5d2ac (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As abelhas Apis mellifera podem estar sujeitas a uma série de ameaças como parasitas e patógenos que acometem seu sistema imunológico. Tal fato torna necessária a busca por produtos naturais que possam contribuir com a melhora do sistema imune destes insetos, como a própolis. Diante do exposto, o objetivo foi analisar a influência do fornecimento da própolis em expressões de genes relacionados à imunidade de abelhas Apis mellifera L. submetidas ao desafio bacteriano. Ao longo de 30 dias, quatro colmeias receberam semanalmente os tratamentos com diferentes porcentagens de extrato alcoólico de própolis 30% (0%, 5%, 10%, 15%). O experimento foi casualizado em esquema fatorial 4 x 2 x 2x 3 (tratamentos x com ou sem bactéria x tempos x períodos), totalizando 48 amostras. Foram observadas as expressões dos genes abaecin, hymenoptaecin, apidaecin e defensin1. Como controle interno foi utilizado o gene actina. Os resultados foram comparados por ANOVA seguidos do teste de Tukey (P<0,05). Foram observadas alterações na expressão gênica das abelhas estudadas para todos os períodos e tratamentos, antes e após desafio bacteriano, para todos os genes propostos, sendo ainda verificada induções da expressão relativa nos três períodos. Conclui-se que nas condições do presente trabalho, a própolis pode induzir a expressão relativa dos genes abaecin, hymenoptaecin, apidaecin e defensin1, quando submetidas a desafio bacteriano. Entretanto, não se pôde caracterizar um tratamento com própolis que apresente uma maior expressão relativa para todos os genes simultaneamente. / The Apis mellifera bees may be subject to a number of threats as parasites and pathogens that affect your immune system. This fact makes it necessary to look for natural products that can contribute to improving the immune system of these insects such as propolis. Given the above, the objective was to analyze the influence of the supply of propolis in gene expressions related to immunity of Apis mellifera L. bees subjected to bacterial challenge Over 30 days, four hives receive weekly treatments with different percentages of alcoholic extract of propolis 30% (0%, 5%, 10%, 15%). The experiment was randomized in a factorial 4 x 2 x 2x 3 (treatments x with or without bacteria x times x periods), totaling 48 samples. It was observed the expressions of abaecin, hymenoptaecin, apidaecin and defensing1 genes. As internal control was used actin gene. The results were compared by ANOVA followed by Tukey test (P <0.05). Alterations were observed in gene expression of bees studied for all periods and treatments before and after bacterial challenge for all proposed genes, were yet verified inductions of relative expression in the three periods. It is concluded that under the conditions of this study, propolis can induce the relative expression of genes abaecin, hymenoptaecin, apidaecin and defensin1, when subjected to bacterial challenge. However, it is not able to characterize a treatment with propolis presenting greater relative expression for all genes simultaneously.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:58Z : No. of bitstreams: 1 000858926.pdf: 586103 bytes, checksum: a84b6c12879576818c1fa5f3604f1db0 (MD5) / O ensaio de crescimento foi realizado para estimar a disponibilidade de 4 fósforo (P) do fosfato bicálcico, a exigência de fósforo e os sinais externos de 5 deficiência em dietas para zebrafish (Danio rerio) em aquários de 15 L. Foram 6 utilizadas seis dietas semipurificadas para conterem os níveis graduais de (0,35, 0,65, 7 0,95, 1,25, 1,55 e 1,85%) de fósforo total por 8 semanas. A dieta basal (T1), contendo 8 0,35% de fósforo total, não foi suplementada com fonte mineral de fósforo, e as cinco 9 dietas experimentais foram formuladas com inclusão crescente de fosfato bicálcico. O 10 delineamento foi inteiramente casualizado com seis tratamentos e cinco repetições, 11 utilizando 450 alevinos (peso médio inicial de 0,0079 ± 0,0003g e idade de 31 dias pós12 eclosão). Os peixes foram alimentados 6 vezes ao dia, e mantidos em temperatura 13 constante de 28±1 ᵒC, o pH e as concentrações de amônia e oxigênio dissolvido foram 14 de 6,8 ± 0,32 mg L-1, 0,06 ± 0,01 mg L-1 e 6,5 ± 0,3, respectivamente. A 15 disponibilidade de fósforo do fosfato bicálcico foi de 53,84%. A conversão alimentar 16 (FC), a taxa de crescimento específico (SGR), o crecimento (G) e o comprimento final 17 (L) tiveram correlação positiva com o nível de fósforo na dieta (p>0,01). A eficiência na 18 retenção de fósforo foi maior nos peixes alimentados com as dietas com 0,35 e 0,65% 19 de fósforo. As análises de composição corporal dos peixes mostraram que o fósforo, 20 cálcio, magnésio, matéria seca e lipídeos foram significativamente afetados pela 21 concentração de fósforo nas dietas (p<0,01), porém, não significativo para a 22 concentração corporal de manganês, zinco e cobre entre os tratamentos. Sinais da 23 deficiência de fósforo foram caracterizados pelo menor crescimento, baixa apetite, 24 aumento da concentração corporal de lipídeos, aparecimento de sinais externos de 25 ... / The growth assay was performed to estimate the dicalcium phosphate 4 phosphorus (P) availability, the phosphorus requirement and external deficiency signs 5 in diet of zebrafish (Danio rerio) allocated in 15 L aquarium . Six semipurified diets 6 were used with graded total phosphorus levels (0.35, 0.65, 0.95, 1.25, 1.55 and 1.85%) 7 for 8 weeks. The basal diet (T1), with 0.35% total phosphorus was not supplemented 8 with phosphorous mineral source, and all diets were formulated with inorganic 9 phosphate inclusion increasing. For the experiment 450 zebrafish fingerlings were used 10 (0.0079 ± 0,0003g average weight with 31 days post-hatching), distributed in a 11 completely randomized design experiment with five replications. The fish were fed six 12 times a day at 28 ± 1 ᵒC, 6.8 ± 0, 32 pH, 0.06 ± 0.01 mg L-1 ammonia concentration 13 and 6.5 ± 0.3 mg L-1dissolved oxygen. Dicalcium phosphate phosphorus availability 14 was 53.84%. Feed Conversion (FC), Specific Growth Rate (SGR), Growth (G) and the 15 final Length (L) had a positive correlation with phosphorus diet levels (p> 0.01). The 16 phosphorus retention efficiency was higher in fish fed 0.35 and 0.65% phosphorus diets. 17 The fish body composition analyzes showed that phosphorus, calcium, magnesium, dry 18 matter and lipids were significantly affected by phosphorus diets concentration (p> 19 0.01), however, not significant for body manganese, zinc and copper concentration 20 among treatments. Phosphorus deficiency signs were characterized by lower growth, 21 low appetite, increased body lipid contents, external appearance of skeletal deformity 22 (cranial, lordosis and scoliosis), mineralization bone reduction (bone tissue thickness). It 23 can be concluded that the better phosphorus level was 1.55% for all parameters 24 evaluated. 25 26 ...

Submitted by ANDRÉ LUIS GIACOMETTI CONCEIÇÃO null (andre4487@gmail.com) on 2016-03-08T12:40:30Z No. of bitstreams: 1 Arquivo_Completo_-_Tese_Doutorado_-_André_Luis_Giacometti_Conceição.pdf: 1296182 bytes, checksum: 29c1b4fbebefc1b96e79210f433f4d2f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-09T16:44:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 conceicao_alg_dr_sjrp.pdf: 1296182 bytes, checksum: 29c1b4fbebefc1b96e79210f433f4d2f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-09T16:44:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 conceicao_alg_dr_sjrp.pdf: 1296182 bytes, checksum: 29c1b4fbebefc1b96e79210f433f4d2f (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma renal de células claras (ccRCC) é o mais comum dos subtipos histológicos de carcinoma renal. Este carcinoma é histologicamente caracterizado pela presença de células com citoplasma claro e abundante. O processo inicial de metástase pode ser atribuída à transição epitélio mesênquima (EMT). Neste estudo, buscou-se identificar genes diferencialmente expressos em ccRCC, construindo assim um perfil molecular para este tumor. Nós selecionamos genes descritos na literatura que apresentam relação com EMT, diferenciação e proliferação celular. Analisou-se por PCR quantitativo e imuno-histoquímica a expressão dos genes e suas proteínas, respectivamente, e os possíveis mecanismos epigenético que regulam a sua expressão em amostras de ccRCC e linhagem celular. Os genes OCLN e GAS1 foram encontrados com baixa expressão em ccRCC, e nós sugerimos que o miR-122 e miR- 34a podem regular sua expressão, respectivamente, neste tipo de câncer. Além disso, mostramos, por qPCR e imuno-histoquímica, a alta expressão de SLC2A1 foi significantemente alta em ccRCC. O conjunto de genes identificados neste estudo possibilita a compreensão das bases moleculares e de desenvolvimento do ccRCC. / Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common histological subtype of kidney cancer. This carcinoma is histologically characterized by the presence of clear and abundant cytoplasm. The initial process of ccRCC metastatic tumor formation can be attributed to epithelial- mesenchymal transition (EMT). In this study, we sought to identify genes differentially expressed in ccRCC and build a molecular profile of this cancer. We selected genes described in the literature to be related to EMT, cellular differentiation and proliferation. We analyzed the gene and protein expression by quantitative PCR and immunohistochemistry, respectively, and examined possible epigenetic mechanisms that regulate their expression in ccRCC samples and cell lines. OCLN and GAS1 genes were under-expressed in ccRCC, and we report that miR-122 and miR- 34a, respectively, may regulate their expression in this cancer. Furthermore, we showed by quantitative PCR (qPCR) and immunohistochemistry that SLC2A1 was significantly over-expressed in ccRCC. The set of genes identified in this study furthers our understanding of the molecular basis and development of ccRCC. / FAPESP: 2012/08853-0