Submitted by Luiza Kleinubing (luiza.kleinubing@udesc.br) on 2018-03-12T17:41:30Z No. of bitstreams: 1 MHIRLEY MANSUR GONZAGA MILIAUSKIS.pdf: 2201058 bytes, checksum: 4d7fb69ec93710f07a2d27edfc858941 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-12T17:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MHIRLEY MANSUR GONZAGA MILIAUSKIS.pdf: 2201058 bytes, checksum: 4d7fb69ec93710f07a2d27edfc858941 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / This master dissertation intends to revise some specific issues regarding the transmission of corporeal mime, technique developed and codified by Etienne Decroux during the twentieth century. A journey starting from the records made and reports given by Decroux’s former students about the pedagogy he conceived until the path I have undertaken, for more than ten years, as a student up to the moment I finally became a teacher of this particular technique. The research proposes some of the questionings raised when corporeal mime is confronted to feminist and post-colonialist theories. Especially in regards to the ideological aspects due to revision when teaching this technique. The theoretical approach is the work on Cultural Studies by Edward Said, Homi Bhabha, Stuart Hall, Simone de Beauvoir’s feminist theory, Judith Butler’ studies on gender and Elizabeth Grosz’s questionings on the concept of universality. I take the opportunity to present my interpretation on corporeal mime technique. It also brings the exposure of the corporeal mime exercises used in my teachings. A map of the concepts that permeate corporeal mime practice is drawn by content analysis and filling in the gaps left by Decroux’s poetry with explanations of other theatrical practices developed in the twentieth century. Practices as biomechanics by Vsevolod Meyerhold, some of the basic fundaments on rhythm and effort by Rudolf Laban and the concept of ‘similar principles’ by Eugenio Barba in Theatre Anthropology. / Esta dissertação pretende revisar algumas questões pontuais no que diz respeito à transmissão do mimo corporal, técnica desenvolvida e codificada por Etienne Decroux ao longo do século XX. Uma jornada que vai desde os registros e relatos feitos pelos alunos antigos de Decroux sobre a pedagogia por ele concebida, até minha trajetória, por mais de dez anos, de aluna à professora desta técnica em particular. Propõe, também, alguns dos questionamentos que podem ser levantados ao confrontar o mimo corporal com as teorias feminista e póscolonialista, principalmente no que se refere aos aspectos ideológicos da transmissão desta técnica. São utilizados os trabalhos em Estudos Culturais de Edward Said, Homi Bhabha, Stuart Hall, a teoria feminista de Simone de Beauvoir, os estudos sobre gênero de Judith Butler e a problematização do conceito de universalidade de Elizabeth Grosz. Aproveito a oportunidade de apresentar minha interpretação da técnica do mimo corporal, por meio da exposição dos exercícios que aprendi, os quais atualmente utilizo na transmissão da técnica. É realizado um mapeamento dos conceitos que permeia a prática do mimo, por meio de análise de conteúdo, e pelo preenchimento das eventuais lacunas deixadas pela poesia de Decroux com explanações de outras práticas teatrais do século XX, como é o caso da biomecânica de Vsevolod Meierhold, alguns dos fundamentos de ritmo e esforço elaborados por Rudolf Laban e o conceito de ?princípios-que-retornam? de Eugenio Barba na Antropologia Teatral.

Submitted by Luiza Kleinubing (luiza.kleinubing@udesc.br) on 2018-03-22T19:22:14Z No. of bitstreams: 2 Luana Assis Navarro.pdf: 1060234 bytes, checksum: 50de3984293970ba961632bc18c1b3cd (MD5) Luana Assis Navarro 2.pdf: 15291622 bytes, checksum: 97153c5e7081a37f56bc8ecf57dbda84 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-22T19:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Luana Assis Navarro.pdf: 1060234 bytes, checksum: 50de3984293970ba961632bc18c1b3cd (MD5) Luana Assis Navarro 2.pdf: 15291622 bytes, checksum: 97153c5e7081a37f56bc8ecf57dbda84 (MD5) Previous issue date: 2016-07-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / This is a research, an object, a narrative that contains images and texts that make up a kind of body thought. This is also an intention of performance. This is a part and is my poetic process that embraces experimentation of several languages and formats (photography, video, text, reading and performance) that holds the body in question. One of the recent features of what I’ve been producing is the displacement of the use of my body image to create situations of reading aloud and performances held live starting from creative processes that are shared with artists and/or participants from other areas and contexts. In this moment some relations interest me such as: time and body, word and body, biography x fiction, writing, listening and fall. To think these relations I weave a writing here over and under my poetic process discussing the works Micro-Resistances, When the body happens, Until now we don’t know; maybe later, How does one take someone to dance? and Library for bodies in expansion. / Isto é uma pesquisa, um objeto, uma narrativa que contém imagens e textos que compõem uma espécie de pensamento corpo. Isto é também uma intenção de performance. Isto faz parte e constitui o meu processo poético que abarca a experimentação de diversas linguagens e suportes (fotografia, vídeo, texto, leitura e performance) e que tem o corpo como questão. Uma das características recentes do que tenho produzido é o deslocamento do uso da imagem do meu corpo para a criação de situações de leituras em voz alta e performances realizadas ao vivo a partir de processos de criação que são compartilhados com artistas e/ ou participantes de outras áreas e contextos. Neste momento algumas relações me interessam como: tempo e corpo, palavra e corpo, biografia x ficção, escrita e escuta e queda. Para pensar estas relações teço aqui uma escrita sobre e sob meu processo poético discutindo os trabalhos Micro-Resistências, Quando o corpo acontece, Até o momento não sabemos; quem sabe depois, Como se tira alguém para dançar? e Biblioteca para corpos em expansão. Esta pesquisa é composta também pelas publicações Assunto desconhecido, Corpo sem sinônimo e Biblioteca para corpos em expansão, tendo sido as duas últimas parte da exposição Corpo sem sinônimo.

Made available in DSpace on 2016-02-20T01:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477402-Texto+Parcial-0.pdf: 439357 bytes, checksum: e5a773a4f5e1be1b72fe8fc40681e86e (MD5) Previous issue date: 2015 / Considering the role that facial expressions play in interpersonal relations, efforts have been made in order to better understand this topic. However, there are still gaps concerning research with adolescents. As this developmental stage is marked by interpersonal relations, and as these are related to a better quality of life, this dissertation aimed to fulfill some of the gaps in the topic. Two studies were conducted. Study I aimed to fill the gap concerning the absence of an image database containing facial stimuli representing the six basic emotion expressions encompassing the entire period of adolescence and its transition to the beginning of adulthood. To this end, posed and spontaneous expressions of 31 teenagers and young adult from 12-20 years (14 men, Mage = 17. 4, SD = 2. 7) were collected with the use of three strategies: emotive scenarios, posed expressions, and reactions to visual stimuli. Two thousand two hundred and seventy nine frames were captured. Expert judges (N = 3) filtered the frames, thus leading to a total of 42 final frames (three for each basic emotion, and three depicting neutral faces, equally divided between genders). These images were standardized and after passing through a new panel of expert judges (N = 4), they have been validated, thus composing the Youth Emotion Picture Set (YEPS). Since there is a lack of studies that directly investigate the role of covariates in recognizing expressions, Study II aimed to investigate the role the verbal IQ, pubertal development, and socialization in the accuracy of recognition of expressions among adolescents. Participants were 90 adolescents and young adults (44 males, Mage = 16. 7, SD = 2. 4) divided into four age groups: 12-14 (n = 23), 15-16 (n = 19), 17-18 (n = 24), and 19-20 years (n = 25).They were assessed with regard to verbal IQ, number of friends, weekly interactions with friends, and level of pubertal development. After that, they completed an experimental task in which they had to categorize the emotion displayed in three different presentation speeds (200ms, 500ms, 1000ms). The facial stimuli used were collected from the YEPS. Findings showed that number of interactions with friends per week was inversely related to accuracy in recognizing anger and disgust. Verbal IQ was significantly proportional to the accuracy of surprise, disgust, and anger. Pubertal development was related to the recognition of expressions of happiness. This dissertation resulted in the development of the YEPS, an instrument that can be used in studies exploring emotions in adolescents or for clinical application purposes. Study II revealed that different covariates influenced the recognition of emotion expressions. The covariates predicted differently accuracy in emotion recognition, with none of them explaining it for all emotions under investigation. / Por considerar a importância do papel que as expressões faciais desempenham em relações interpessoais, esforços têm sido realizados para estudar o tema. Entretanto, ainda existem lacunas referentes a pesquisas com o público adolescente. Como esta etapa do ciclo vital é um período no qual relações interpessoais passam a ter destaque estando relacionadas a uma melhor qualidade de vida, esta dissertação teve o objetivo de suprir algumas destas lacunas. Para tanto, foram conduzidos dois estudos. O Estudo I objetivou preencher a lacuna referente à ausência de um banco de imagens que contenha estímulos faciais que representem as seis expressões básicas, englobando todo o período da adolescência e sua transição para o início da vida adulta. Para tal, foram coletadas expressões posadas e espontâneas de 31 jovens de 12 a 20 anos (14 homens, Midade = 17,4, DP = 2,7). Três estratégias foram usadas: cenários mentais, expressões posadas e reações a estímulos visuais. Foram captados 2279 frames que após passarem por processos de filtragem do pesquisador foram avaliados por três juízes experts e reduzidos a um total de 42 frames (três para cada emoção básica e três para faces neutras, igualmente divididos entre os gêneros). Estas imagens foram padronizadas e, após terem passado por mais um painel de quatro juízes, foram validadas constituindo assim o Youth Emotion Picture Set (YEPS). Dado que existe uma carência de estudos que investiguem diretamente a relevância de covariáveis no reconhecimento de expressões faciais, o Estudo II teve como objetivo investigar o papel do QI verbal, do desenvolvimento púbere e da socialização poderiam ter na acurácia do reconhecimento de expressões em adolescentes. Participaram do estudo 90 adolescentes e jovens adultos (44 do sexo masculino, Midade = 16,7, DP = 2,4) divididos em quatro grupos etários: 12-14 (n = 23), 15-16 (n = 19), 17-18 (n = 24) e 19-20 anos (n = 25).Eles tiveram seu QI verbal, quantidade de amigos, frequência de interações semanais com amigos e o nível de desenvolvimento púbere avaliados e realizaram uma tarefa experimental na qual deveriam categorizar a emoção apresentada nas imagens do YEPS em três velocidades (200ms, 500ms, 1000ms). Os resultados indicaram que a quantidade de interações sociais por semana com amigos está inversamente relacionada à acurácia no reconhecimento de expressões de raiva e nojo. O QI verbal foi significantemente proporcional a acurácia da identificação de expressões de surpresa, nojo e raiva. O desenvolvimento púbere se relacionou ao reconhecimento de expressões de alegria. A partir desta dissertação, foi possível desenvolver o YEPS, um instrumento que pode ser utilizado em outras pesquisas ou em estudos de aplicação clínica. Em relação ao Estudo II, foi possível identificar o modo como diferentes covariáveis operam no reconhecimento de expressões e que, entre as covariáveis estudadas, não existiu uma que fosse capaz de influenciar a acurácia de todas as emoções.

Orientador: Maurício Bacci Júnior / Banca: Klaus Hartmann Hartfelder / Banca: Claudio José Von Zuben / Resumo: As associações de mutualismo afetam a vida de todos os organismos vivos. Um modelo biológico muito útil para estudos sobre o mutualismo são as formigas da tribo Attini, cuja nutrição depende da associação com fungos basidiomicetos. Estes fungos produzem despolimerases que degradam a matéria vegetal, gerando açúcares simples que são essenciais para a sobrevivência das formigas. Estudos bioquímicos sugerem que pode haver vias metabólicas mutualistas, iniciando com passos catalisados por enzimas fúngicas e terminando com passos catalisados por enzimas das formigas. Estudos genômicos indicam que as formigas podem não ser capazes de sintetizar alguns aminoácidos, que seriam supridos pelos fungos. Estudos em microbiologia sugerem que as formigas utilizam antibióticos microbianos para proteção contra eventuais entomopatógenos. Desta forma, caracteriza-se uma dependência nutricional e de metabólitos microbianos pelas formigas. Para avaliar a extensão desta dependência, na presente dissertação de mestrado nós anotamos o transcriptoma da formiga Attini Atta sexdens rubropilosa em busca das vias metabólicas com elementos mais expressos. Foram avaliadas a presença e expressão de genes a partir de dados de transcriptômica de nova... / Abstract: Mutualistic associations affect all living organisms. A useful biological model for studies of mutualism are Attini ants, whose nutrition depends on the association with basidiomycete fungi. These fungi produce depolymerases that act on degrading plant material, producing simple sugars that are essential for the survival of ants. Biochemical studies suggest that may be metabolic pathways, starting with steps catalyzed by fungal enzymes and ending with steps catalyzed by enzymes of the ants. Genomic studies indicate that the ants may not be able to synthesize some amino acids that would be supplied by the fungi, thus characterizing nutritional mutualistic dependence. To assess the extent of this metabolic dependence, in this thesis we aimed to annotate the transcriptome of Attine ant Atta sexdens rubropilosa in search of metabolic pathways. The presence and expression of genes from transcriptomics data of next generation sequencing were evaluated / Mestre

Orientador: Daisy Maria Fávero Salvadori / Coorientador: Glenda Nicioli da Silva / Banca: Luís Fernando Barbisan / Banca: Denise Crispim Tavares / Resumo: Devido a propriedades terapêuticas, várias plantas e seus constituintes químicos vêm sendo muitas vezes utilizados como o primeiro recurso para o tratamento de diversas doenças. Nesse contexto, compostos isolados de plantas têm sido alvos de inúmeros estudos que avaliam, além da atividade, seus possíveis mecanismos de ação. Dentre os compostos com potencial quimioprotetor, o citral e o eugenol merecem atenção devido suas estruturas químicas de monoterpeno e de composto fenólico, respectivamente, e por seus potenciais anti-inflamatório, antiparasitário e antioxidante. Considerando que mutação no DNA pode ser a primeira etapa de várias doenças, e que lesões induzidas nessa molécula podem ser prevenidas ou moduladas por compostos naturais, este estudo objetivou avaliar, pelo teste do cometa, o potencial genotóxico do citral (25, 50 e 100 Tg/mL) e do eugenol (0,31, 0,62, 1,24 e 2,48 Tg/mL), após diferentes tempos de tratamento (6, 10, 24 e 30 h) e, também, seus possíveis efeitos moduladores sobre danos induzidos no DNA pela doxorrubicina (DOX), em diferentes protocolos de tratamento (pré, pós e simultaneamente à DOX) e momentos de análise (12, 24 e 36 h), em macrófagos peritoneais de camundongos. Além disso, foi avaliado o potencial toxicogenômico do citral e do eugenol por meio da modulação da expressão dos genes NF-kB1, COX-2 e TNF-α (relacionados a processos inflamatórios) em macrófagos ativados ou não por lipopolissacarideo de bactéria (LPS). Os resultados mostraram que ambos os compostos apresentaram potencial genotóxico. No caso do citral, a genotoxicidade foi observada para as duas maiores concentrações, mas apenas no tempo de 6h; para o eugenol, o aumento de danos no DNA foi detectado para todas as concentrações, em pelo menos um momento de análise. Com relação ao potencial... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Because of the therapeutic properties, several plants and their chemical constituents have been used for treatment of various diseases. Therefore, isolated compounds from plants have been targets of numerous studies that evaluate their activity and mechanisms of action. Among compounds with chemopreventive potential, citral and eugenol have gain attention because of their chemical structures, monoterpene and phenol,respectively, and for their anti-inflammatory, antioxidant and antiparasitic potentials. Since DNA mutation is the first step for some diseases, and since the lesions induced in this molecule can be prevented or modulated by natural compounds, aim of the present study was first to evaluate the genotoxic potential of citral (25, 50 and 100 Tg/mL) and eugenol (0.31, 0.62, 1.24 and 2.48 Tg/mL) at different times after exposure (6, 10, 24 and 30 h), and then, their ability to modulate DNA damage induced by doxorubicin (DOX) at different treatment protocols (pre, post and simultaneous with DOX) and times (12, 24 and 36 h) in mice peritoneal macrophages. In addition, the toxicogenomic potential of citral and eugenol by modulating the expression of NF-KB1, COX-2 and TNF-α (related to inflammatory processes) genes in macrophages activated or not by bacterial lipopolysaccharide (LPS) was also investigated. The results showed that both compounds have genotoxic potential. In the case of citral, genotoxicity was observed for the two major concentrations, but only 6h after the exposure. For eugenol, increased DNA damage was detected for all concentrations, in at least one moment of analysis. Related to the antigenotoxicity, both citral and eugenol presented protective effects at different concentrations and treatment protocols, and the more effective activities were detected at simultaneous and pre-treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Edmundo Medici Filho / Banca: Júlio Cezar de Melo Castilho / Banca: Plauto Christopher Aranha Watanabe / Banca: Solange Aparecida Caldeira Monteiro / Banca: Marlene Fenyo Soeiro de Matos Pereira / Resumo: A proposta nesta pesquisa foi verificar por meio de radiografias cefalométricas laterais a presença de razões áureas nos indivíduos com perfis considerados esteticamente agradáveis ou não. Foram utilizadas sessenta radiografias cefalométricas laterais, prévias e posteriores ao tratamento ortodôntico. Por meio do programa Radiocef Studio foram confeccionados os perfis faciais de antes e após o tratamento ortodôntico que, colocados aleatoriamente em página elaborada na internet, receberam opiniões de 283 examinadores acerca da preferência estética e assim foi dividida a amostra: grupo 1, melhora estética comparando o antes e depois do tratamento ortodôntico; e grupo 2, não ocorreu melhora estética comparando o antes e depois do tratamento ortodôntico. Foi adotado o nível de significância de 5% e os intervalos de confiança empregados com 95% de confiança estatística, sendo aplicados os testes T - Student Pareado e T - Student (uma amostra) tanto para o grupo 1 como para grupo 2. Concluímos que: a) grupo 1 - as razões "Sf1/-DM16/A-Pog" e "Ena-Me/A-B" estiveram em igualdade ao número áureo 1,618 antes e depois do tratamento ortodôntico, o mesmo ocorreu para a razão "Ena-AA/A-Pog" apenas no antes do tratamento ortodôntico e para as razões "A-Pog/Sf1/-C1MS" e "C1MSDM16/ Sf1/-C1MS" somente no depois do tratamento ortodôntico; b) grupo 2 - as razões "MxOr-MdOr/PONMd-Or", "A-Pog//Sf1/-C1MS" e "Ena-Me/A-B" no antes e depois do tratamento ortodôntico tiveram valores em igualdade com o número áureo 1,618 e apenas a razão "Sf1/-DM16/A-Pog" teve valor estatisticamente igual ao número áureo 1,618 no antes do tratamento ortodôntico / Abstract: This paper aimed to verify, through side cephalometric radiographs, the presence of some craniofacial ratio considered golden on individuals with facial outline modification, before and after orthodontical treatment, classified as pleasant or unpleasant regarding aesthetics. At a later time, to analyze these ratios tendencies regarding the golden number before and after orthodontical treatment in individuals with outlines considered aesthetically pleasant or unpleasant. Sixty side cephalometric radiographs, pre and post orthodontical treatment of 30 individuals with leucoderma that did not present craniofacial deformities, syndromes or cleft palates were used. Through Radiocef Studio program (Radiomemory, Belo Horizonte, Brazil), facial outlines pre and post orthodontical treatment were produced that, randomly displayed on a specially created website, received the opinion of 283 examiners around their aesthetical preference and the sample was divided like this: group 1, aesthetics improved, when comparing pre and post orthodontical treatment; and group 2, no aesthetics improvement occurred, when comparing pre and post orthodontical treatment. To analyze the golden ratio on side cephalometric radiographs, ratios considered important to Dental surgeon and Orthodontist were used and items made available by the program Radiocef Studio. Significance level of 5% was adopted, Confidence Intervals (CI) with 95% of statistical confidence were used and, applying Paired Student's t-test and Student's t-test (one sample) on both groups (1 and 2), it was concluded that: a) group 1 -"Sf1/-DM16/A-Pog" and "Ena-Me/A-B" ratios were in equality to the golden number 1,618 before and after the orthodontical treatment / Doutor

O cultivo da soja (Glycine max (L.) Merr.) em áreas de várzea surgiu como alternativa à monocultura de arroz, uma vez que cultivares com diferentes níveis de tolerância ao alagamento do solo foram identificadas. As tecnologias de sequenciamento de nova geração apresentam como vantagens o elevado volume de informações obtidas e uma visão direta na variação do DNA. Assim, é possível identificar polimorfismos e diferenciar genótipos quanto à característica de interesse. O objetivo deste trabalho foi ressequenciar e montar o genoma de duas cultivares de soja contrastantes para o caráter tolerância ao alagamento do solo, avaliar a expressão de genes candidatos e identificar alterações não sinônimas nas sequências gênicas. O DNA total das cultivares Introdução 27 (tolerante) e BRS 154 (sensível) foi extraído de folhas jovens. Ao DNA fragmentado e purificado foram adicionados indexadores e adaptadores conhecidos. Fragmentos com ~300pb foram selecionados e então realizado o sequenciamento pareado. As leituras de sequenciamento foram submetidas à verificação de qualidade das bases e a montagem foi realizada com os montadores ABySS, SOAPdenovo e a combinação Velvet e SSPACE. Para análise de RTqPCR foram escolhidos como candidatos à tolerância ao encharcamento do solo genes relacionados a rotas de captação de energia (ENO, ADH1, ALAT2 e GLB1), formação de estruturas associadas ao estresse (XETP e LBD41) e detoxificação celular (APX2). O alinhamento dos scaffolds gerados pelo montador AbySS e o genoma de referência da cv. Williams 82 foi realizado para reconstruir a sequência destes genes e as alterações não sinônimas foram identificadas. O sequenciamento gerou em média 111 milhões de leituras pareadas. A distribuição da qualidade das bases nas leituras foi elevada (e≥28) e adaptadores residuais não foram identificados. O programa ABySS mostrou maior eficiência na montagem dos genomas das cultivares Introdução 27 e BRS 154, gerando scaffolds maiores, com tamanho total de 1,024Gb e 1,020Gb, respectivamente. A taxa de alinhamento global das leituras com o genoma de referência foi de 97%. De maneira geral, a cultivar Introdução 27 apresentou maior expressão relativa de todos os genes avaliados. Alteração não sinônima entre os genótipos estudados foi constatada apenas no gene APX2 e diferenças na região promotora associada ao estresse foi constatada apenas no gene ALAT2. Dessa forma, não foi possível explicar as diferenças de expressão observadas, sugerindo uma maior complexidade do caráter estudado. / Soybean (Glycine max (L.) Merr.) in lowland areas emerged as alternative to rice monoculture, since cultivars with different levels of soil flooding tolerance have been identified. The next generation sequencing technologies generates high volume of data and a direct view of DNA variation. So, it is possible to identify polymorphisms and differentiate genotypes for traits of interest. The objective of this work was to resequence and assemble the genome of two contrasting soybean cultivars to soil flooding, to evaluate the expression of candidate genes and to identify non-synonymous changes in these gene sequences. Whole DNA of Introduction 27 and BRS 154 cultivars was extracted from young leaves. Indexers and adapters were added to fragmented and purified DNA. Fragments with ~300bp were selected and then pair-end sequencing was performed. Reads of sequencing were submitted to bases quality check and the assembly was performed with the ABySS, SOAPdenovo assemblers and the combination of Velvet and SSPACE. Candidate genes to soil flooding tolerance were submitted to RT-qPCR analysis. These genes were related to energy uptake routes (ENO, ADH1, ALAT2 and GLB1), formation of stress-associated structures (XETP and LBD41) and cell detoxification (APX2). The alignment of the scaffolds generated by the AbySS assembler and the cv. Williams 82 was performed to reconstruct the sequence of these genes and the non-synonymous changes were identified. Sequencing generated on average 111 million pair-end reads. The distribution of base quality in the reads was high (e≥28) and residual adapters were not identified. The ABySS program showed higher efficiency in assembling the genomes of Introduction 27 and BRS 154 cultivars, generating larger scaffolds, with a total size of 1.024Gb and 1.020Gb, respectively. The overall rate of alignment to reads with reference genome was 97%. In general, Introduction 27 cultivar presented the highest relative expression of all evaluated genes. Non-synonym alteration among the studied genotypes was observed only in the APX2 gene and differences in the promoter region associated with stress were found only in the ALAT2 gene. This way, was not possible to explain the differences in expression observed, suggesting a larger complexity in the studied trait.

Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Banca: Janete Aparecida Desidério / Banca: Tiago Santana Balbuena / Banca: André Ricardo de Lima Damásio / Banca: Igor Polikarpov / Resumo: O clone metagenômico B5pl37 (inserto de 23 Kb) foi obtido por meio de uma prospecção por PCR para o conjunto gênico de "Policetídeos Sintases tipo II" (PKSII) em uma biblioteca cosmidial de amostra de solo de bosque de eucaliptos (S.E.). As PKSII são responsáveis pela produção de inúmeras moléculas bioativas, dentre os quais se destacam os antibióticos policetídicos. Parte da sequência do inserto (cobertura de 27-43%) apresentou similaridade de 77-78% com bactérias da família Streptomycetaceae (ferramenta BlastN, Genbank). Além da PKS II, a anotação gênica permitiu identificar genes relacionados à degradação de compostos lignocelulósicos importantes para a produção de combustíveis de segunda geração (2G): uma β- glicosidase, uma celulase e uma "Multicopper oxidase" (MCO). Considerando a importância industrial destes genes, este trabalho teve como objetivo a caracterização in silico e in vitro/vivo dos mesmos. As análises in silico auxiliaram a identificar a arquitetura do sítio ativo (modelo de estrutura proteica obtida por homologia) e famílias enzimáticas (com base em agrupamentos fenéticos com sequências de enzimas de atividade conhecida). Quanto às análises in vitro/vivo, foram realizados experimentos de expressão em vetor pET28a em Escherichia coli para as enzimas celulase (linhagens de E.coli BL21; C41 e Artics) e β-glicosidase (E.coli BL21), enquanto o gene MCO foi submetido à síntese in vitro para um estudo posterior. Foi feita a caracterização cinética da β-glicosidase (melhor rendimento na expressão e purificação), que obteve os parâmetros catalíticos: Vmax de 0,79 μM/min; km de 0,46 mM.. Os respectivos valores de temperatura e pH ótimos para a enzima foram 37°C e pH7-7,5; e a enzima foi capaz de manter uma atividade acima de 80% para uma faixa de pH 6,5-8,0 e temperatura 35- 40°C. Com relação à PKSII, foram iniciados os processos preparatórios para a... / Abstract: The Clone metagenomic B5pl37 (insert of 23kb length) was obtained by a PCR prospect for gene set "Polyketide Synthases type II" (PKSII) in a library cosmidial eucalyptus grove soil sample (SE). The PKSII are responsible for producing many bioactive molecules, among which the antibiotics were noticeable. Part of the sequence of the insert (27-43% coverage) showed similarity of 77-78% with bacteria Streptomycetaceae family (BLASTN tool, Genbank). In PKS II gene annotation was possible to identify genes related to the degradation of lignocellulosic important compounds for the production of second generation biofuel (2G): A β-glucosidase, a cellulose and a Multicopper oxidase (MCO). Considering the industrial importance of these genes, this study aimed to characterize in silico and in vitro /in vivo thereof. The in silico analyzes helped identify the architecture of the active site (protein structure obtained by homology) and enzyme families (based on phenetic groups with sequences of known enzyme activity). The in vitro / vivo experiments were performed in pET28a expression vector in Escherichia coli for cellulase (E. coli strains BL21; Artics and C41) and β-glucosidase (E. coli BL21), while the gene MCO in vitro synthesis for a subsequent study it was submitted. We had done the kinetic characterization of β- glucosidase (best performance in the expression and purification), which obtained the catalytic parameters: Vmax 0.79 uM / min; km from 0.46 mM. The respective temperature and the pH optimum for the enzyme was 37 ° C and pH7-7,5; and the enzyme was able to maintain an activity above 80% at a pH of 6.5-8.0 and temperature range 35-40 ° C. With respect to PKSII, the preparatory processes have been started to insert the expression in the same host specialized for expression of Streptomyces coelicolor antibiotic M1152 (courtesy of Juan P. Gomez-Escribano, John Innes Centre, Norwich, UK). Cosmidial exchange vector was carried out ... / Doutor

Recentemente, uma quantidade significativa de dados de sequência (tanto genômicas como transcritômicas) para Echinococcus spp. foi publicado, facilitando a análise de genes expressos durante um estágio especifico ou envolvidos no desenvolvimento do parasito. Para realizar uma análise adequada de quantificação da expressão gênica, o uso de genes de referência validados é fortemente recomendado. Portanto, o objetivo deste trabalho foi identificar e validar genes de referência para permitir a normalização confiável da expressão gênica de determinados genes de interesse em Echinococcus granulosus sensu stricto (s.s.) (G1) e Echinococcus ortleppi durante o desenvolvimento inicial da forma pré-adulta do parasito. Protoescólices não tratados (PS) e protoescólices tratados com pepsina (PSP) do metacestódeo de E. granulosus s.s. (G1) e E. ortleppi foram usados para extração de RNA total e análise da expressão gênica. A estabilidade na expressão gênica de onze genes candidatos (TUB, NDUFV2, RPL13, TBP, CYP, RNApol sub2, EF-1α, βACT, GAPDH, ETIF4 e ERK) foi avaliada usando os programas geNorm, NormFinder e RefFinder. Nossos dados de RT-qPCR mostraram uma alta correlação com dados recentemente publicados de RNA-seq. Em relação à estabilidade na expressão, EF-1α e TBP foram os genes mais estáveis para ambas as espécies. Entretanto, βACT (gene comumente utilizado como normalizador), GAPDH e ETIF4 (previamente identificados como genes housekeeping) não tiveram um comportamento estável em nossas condições de ensaio. Desta maneira, propomos o uso de EF-1α como gene de referência para estúdios que envolvam análises de expressão gênica no inicio do desenvolvimento da forma pré-adulta de E. granulosus s.s. (G1) e E. ortleppi. Para demonstrar sua aplicabilidade, EF-1α foi usado como gene normalizador na quantificação relativa de transcritos para genes que codificam as proteínas ribossômicas L10, L14, e S15, e para as subunidades do antígeno B de E. granulosus. O mesmo gene de referência EF-1α poderia ser usado em estudos com outras espécies de Echinococcus sensu lato. Este é o primeiro relato que valida genes de referência adequados para a classe Cestoda, phyllum Platyhelminthes, portanto fornecendo uma base para futuras validações em espécies de cestódeos epidemiologicamente importantes, como aquelas do gênero Taenia.

A maioria das plantas transgênicas disponíveis atualmente possuem seus insertos regulados por promotores fortes que induzem uma transcrição intensa, permanente e generalizada, o que causa gastos energéticos desnecessários e dificulta a regeneração de um maior número de indivíduos transgênicos. O objetivo principal que norteou o presente trabalho foi desenvolver uma série de vetores plasmidiais contendo sequências promotoras projetadas e artificialmente sintetizadas para modular a expressão de genes de interesse em plantas. O promotor CaMV35S serviu como base para teste de elementos cis e geração de novos cassetes artificiais de expressão (CAEs). Os elementos cis TATA-box, CAAT-box e sítio de início da transcrição (TSS) originais da sequência de 90 pb do promotor mínimo CaMV35S foram substituídos pelos consensos já definidos para sequências promotoras de plantas, e a distância entre o TSS e o ATG de início da tradução, que originalmente era de 8 nucleotídeos, foi alterada para 75. Sítios de restrição para endonucleases foram introduzidos em posições estratégicas do promotor de forma a permitir a ligação dos elementos cis a serem testados e substituição de genes repórteres por genes de interesse. A distância entre o CAAT-box e o TATA-box, que originalmente era de 28 pb, foi alterada para 34 pb pela inclusão de um sítio para EcoRV na posição -46 do promotor artificial. Para compor o CAE, foram escolhidos o gene repórter tdTomato-ER e o terminador da nopalina sintase (Tnos). Foi desenvolvida, também, uma versão do CAE contendo o promotor CAMV35S (35S-CAE) integral para ser utilizada como controle positivo nesse trabalho. A partir de dados da literatura científica, foram selecionados os elementos cis W1, AC e RHE cujas atividades foram comprovadas como críticas à expressão regulada em sementes, tecidos vasculares e raízes respectivamente. Os elementos W1 e AC foram adaptados ao sítio de SmaI do CAE, dando origem às versões W1-CAE e AC-CAE. Não foram obtidas versões de RHE-CAE até o momento. Todas as versões do CAE obtidas nesse trabalho foram adaptadas ao vetor pKGW da série Gateway e empregadas para a transformação genética de Arabidopsis thaliana. Somente plantas transformadas com as versões CAE e 35S-CAE foram recuperadas. Sinais de fluorescências do gene repórter regulado pelas diferentes versões do CAE, necessários para validação da atividade promotora dos mesmos, não foram verificados em quaisquer das plantas recuperadas até o presente. / Most transgenic plants currently available have their inserts regulated by strong promoters that induce intense, permanent, and generalized transcription, which may cause unnecessary energy costs, preventing the regeneration of a larger number of transgenic events. The main purpose of this work was to develop a set of plasmid vectors containing designed promoter sequences, artificially synthesized to modulate the expression of genes of interest in plants. The CaMV35S was used as core promoter to test cis elements and to generate new artificial expression cassettes (AECs). Original-TATA box, CAAT-box and transcriptional start site (TSS) of the minimal 90 bp CaMV35S promoter sequence were replaced by already defined plant consensus sequences, and the distance between TSS and ATG, that was originally of 8 bp, was changed to 75 bp. Endonuclease restriction sites were introduced in strategic positions of the promoter in order to enable the cloning of cis elements and the replacement of reporter genes by genes of interest. The distance between CAAT-box and TATA-box, originally with 28 bp, was changed to 34 bp since one EcoRV site was included at position -46 of the artificial promoter. The reporter gene TdTomato-ER and the terminator of the nopaline synthase gene (Tnos) were chosen to compose the AEC. It was also developed an AEC version containing the CAMV35S promoter (35S-AEC) to be employed as positive control in this study. The W1, AC and RHE cis elements, whose activities were respectively proven as critical to the regulated expression in seeds, vascular tissues and roots, were selected from the scientific literature to be assayed. The W1 and AC cis elements were adapted to the SmaI site of the AEC, giving rise to the W1-AEC and AC-AEC versions. We did not obtain RHE-AEC versions. All AEC versions that were obtained in this study were ligated into pKGW vector of the Gateway series, and all vectors were employed to genetically transform Arabidopsis thaliana. Only plants transformed with the AEC and 35S-AEC versions were recovered. Fluorescence signals of the reporter gene regulated by AEC different versions, which were necessary for validation of promoter activity, were not observed in any of the recovered plants up to the present.