INTRODUÇÃO: O sucesso do tratamento de dependentes de álcool e outras drogas numa comunidade terapêutica (CT) depende fundamentalmente da adesão ao tratamento, ou seja, o tempo de permanência na comunidade. Sabe-se que pacientes que permanecem em tratamento por um período de pelo menos três meses têm uma evolução melhor do que aqueles que abandonam o tratamento precocemente. O ambiente emocional familiar tem grande influência na adesão ao tratamento, e pode ser medido por meio da emoção expressa EE). MÉTODOS: Foram avaliados familiares de 31 dependentes de substâncias psicoativas e/ou de álcool, internados involuntariamente, por meio da versão abreviada e traduzida para o português da Entrevista Familiar de Camberwell (EFC). A partir de então, mediu-se a taxa de permanência na CT após seis, 12 e 18 meses. Foram avaliados os aspectos hostilidade, superenvolvimento e calor afetivo. A hostilidade foi abordada como ausente (pontuação igual a zero) ou presente (pontuação igual a 1, 2 ou 3). O superenvolvimento e o calor afetivo foram considerados de forma contínua (pontuação de zero a 5) e categorizada. Todos os possíveis pontos de corte foram estudados na procura de novas relações e significados dos componentes da EE para esta população específica e os achados da amostra. RESULTADOS: Foram considerados com alta EE para hostilidade 41,9% dos familiares entrevistados e 71% para superenvolvimento emocional; 25,8% destes familiares pontua ram para ambos os componentes da EE (hostilidade e superenvolvimento). Dos 31 pacientes, cinco (16,1%) desistiram do tratamento até os seis meses; dois pacientes desistiram entre o 6 o e o 12 o mês (25% de desistência em 12 meses) e quatro abandonaram o tratamento entre o 12 o e o 18 o mês (47,8% de abandono em 18 meses). Houve uma associação significativa entre a presença de hostilidade e o abandono do tratamento antes dos seis meses (p = 0,008, teste exato de Fischer). Houve diferença significativa na frequência de superenvolvimento familiar entre o grupo que permaneceu 18 meses e o grupo que abandonou o tratamento (p = 0,037, teste de Mann-Whitney). Os pacientes que permanceram em tratamento até os 18 meses tiveram uma freqüência maior de familiares com alto nível de superenvolvimento familiar (> 4) (p = 0,012; teste exato de Fisher). Não houve nenhuma associação entre o tempo de permanência e o calor afetivo. CONCLUSÕES: Alta EE tem influência significativa sobre o tempo de permanência do dependente químico ou de álcool na CT. A presença de hostilidade foi mais freqüente no grupo com o abandono prematuro do tratamento, enquanto o alto superenvolvimento do familiar foi mais freqüente no grupo de pacientes que permaneceu em tratamento até os 18 meses. Estudos com uma população maior são necessários para apoiar esses achados. / BACKGROUND: The success of treatment for alcohol and other substance dependence in a therapeutic community (TC) depends greatly on the treatment adherence, i.e., the length of stay at the TC. It is well known that subjects who stay on treatment for ate least three months have a better outcome, compared with those who early withdraw. The family emotional environment can be measured through expressed emotion (EE) and has great influence on treatment adherence. METHODS: 31 key-relatives of alcoholics and other substance dependents, who involuntarily began a treatment in a TC, were assessed through the Camberwell Family Interview (CFI) (shorter translated to Portuguese version). The proportion of subjects who remained on treatment in the TC was then measured after six, 12 and 18 months. Evaluated aspects included hostility, overinvolvement and warmth. Hostility was assessed as absent (score = 0) or present (score = 1, 2 or 3). Overinvolvement and warmth were considered as continuous and categorized values (scores 0 to 5). Every possible cutoff points were studied, in order to find new associations and meanings of EE components of this specific population and the length pf stay in a TC. RESULTS: 41.9% of the relatives were considered as having high EE for hostility and 71% for overinvolvement; among those relatives with high EE, 25.8% had presence for both hostility and overinvolvement. Among the 31 patients, five (16.1%) abandoned treatment up to 6 months; 2 patients abandoned treatment between 6th and 12th month (25% treatment abandon in 12 months) and four abandoned the treatment between 12th and 18th month (47.8% treatment abandon at 18 months). There was a significant higher frequency of presence of hostility in the group that abandoned before six months (p = 0.008, Fischer exact test). A significant difference of familiar overinvolvement was found between the group who remained in the treatment up to 18 months and the group that abandoned treatment earlier (p = 0.037, Mann-Whitney test). Families with score = 4 for overinvolvement were more frequent in the group that remained on treatment up to 18 months (p = 0.0012; Fischer exact test). No correlation was found between warmth and length of stay at TC. CONCLUSIONS: High EE has a significant influence over the length of stay of the alcoholic or other substance dependent in a TC. The presence of hostility is more frequent among families of patients who prematurely abandon treatment, while higher score of overinvolvement was more frequent in the families of the group that completed 18 months of treatment in the TC. Further studies with larger population are needed to support those findings.

Paracoccidioides brasiliensis, um fungo termodimórfico, é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica prevalente da América Latina. A patogenicidade aparenta estar intimamente relacionada com a transição dimórfica da forma de micélio para a de levedura, que é induzida pela mudança da temperatura do ambiente pela temperatura do hospedeiro mamífero. Há poucas informações disponíveis sobre genes de P. brasiliensis que são necessários durante a fase patogênica. Nós, então, realizamos as técnicas de SSH (“Suppression Subtraction Hybridization”) e de “Macroarray” com o objetivo de identificar genes que sejam preferencialmente expressos na fase leveduriforme do isolado Pb18. Genes identificados em ambos os procedimentos estão mais expressos na fase leveduriforme e estão envolvidos em metabolismo básico, transdução de sinal, crescimento e morfogênese e metabolismo do enxofre. Para testar se as mudanças observadas na expressão gênica refletem as diferenças entre as condições de crescimento usadas para obter as duas formas morfológicas preferivelmente às diferenças intrínsecas dos tipos celulares, nós realizamos experimentos com RT-PCR em tempo real utilizando preparações de RNA derivadas de ambas as fases, micélio e levedura, crescidas a 26°C e 37°C nos meios de cultura completos (YPD e Sabouraud) e meio mínimo. Vinte genes, incluindo AGS1 ( -1,3-glucan synthase) e TSA1 (thiol-specific antioxidant), foram mostrados como mais expressos na levedura patogênica em relação ao micélio. Embora a expressão de RNA mensageiro foi bastante diferente em relação aos meios completos e meio mínimo, mostramos uma tendência geral para que esses genes serem mais expressos nas células leveduriformes patogênicas de P.x brasiliensis. Além disso, mostramos a complementação dos genes METR e SCONC de P. brasiliensis e uma cepa com estes genes deletados de Aspergillus nidulans, sugerindo uma possível homologia entre eles. Mostramos também a análise de genes da via do metabolismo do enxofre foram mais expressos na levedura patogênica de P. brasiliensis em relação ao micélio saprofítico. / Paracoccidioides brasiliensis, a thermodimorphic fungus, is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a prevalent systemic mycosis in Latin America. Pathogenicity appears to be intimately related to the dimorphic transition from the hyphal to the yeast form, which is induced by a shift from environmental temperature to the temperature of the mammalian host. Little information is available on the P. brasiliensis genes necessary during the pathogenic phase. We have therefore undertaken Suppression Subtraction Hybridization (SSH) and macroarray analyses with the aim of identifying genes that are preferentially expressed in the yeast phase. Genes identified by both procedures as being more highly expressed in the yeast phase are involved in basic metabolism, signal transduction, growth and morphogenesis, and sulfur metabolism. In order to test whether the observed changes in gene expression reflect the differences between the growth conditions used to obtain the two morphological forms rather than differences intrinsic to the cell types, we performed real-time RT-PCR experiments using RNA derived from both yeast cells and mycelia that had been cultured at 37 and 26°C in either complete medium (YPD or Sabouraud) or minimal medium. Twenty genes, including AGS1 ( 1,3-glucan synthase) and TSA1 (thiol-specific antioxidant), were shown to be more highly expressed in the yeast cells than in the hyphae. Although their levels of expression could be different in rich and minimal media, there was a general tendency for these genes to be more highly expressed in the yeast cells. Moreover, complementation of P. brasiliensis METR and SCONC genes in strains of Aspergillus nidulans with these genes deleted suggested a possible homology between them. We show the analyses of genes involved in the xii sulphur metabolism pathway and these genes were more expressed in the pathogenic yeast than saprophytic mycelia of P. brasiliensis.

Made available in DSpace on 2016-04-26T19:39:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Andre Marques dos Santos.pdf: 1289315 bytes, checksum: 28a3126a64acf0f1d9ab8338c8a0ac19 (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Rice is one of the most important cereals for the humanity, because it is primary source of nutrition for more than half of the world s population. Nitrogen is the most important element for plants and is predominantly present in aerated soils in the nitrate form. As a result of the poor quality of the cultivated areas, the usage of nitrogen fertilizers intensified, contributing to the increase of pollution, since this nutrient has high mobility in the soil. With the objective of evaluating physiologic, biochemical and molecular mechanisms responsible for the efficiency of the application of nitrogen in rice, experiments were conducted at the Soils Department of Federal Rural University of Rio de Janeiro. Two rice varieties were used, Piaui (traditional rice) and IAC-47 (improved rice). In the beginning, both varieties were cultivated in nutrition solutions and submitted to treatments simulating the seasonal fluctuation of nitrate, characteristic of the tropical region. Under this condition an evaluation was done in order to define the soluble sugar levels, nitrogen fractions, and the Nitrate Reductase Activity (NRA) as well as Glutamine Synthetase Activity. Piaui rice was more efficient in the acquisition and usage of nitrogen compared to IAC-47, accumulating nitrate in its tissue during the initial phase of growth for future consumption. Later, these same rice varieties were cultivated in a growth chamber with the objective of studying the effect of increased nitrate concentrations over nitrogen fraction levels, NRA, relative expression of genes for nitrate transporters (NRT1 and NRT2) as well as a nitrate reductase (Nia2). From the results obtained it was observed that the traditional rice variety contained less NRA, higher levels of nitrogen and free amino-N. Further, traditional variety presented higher relative expression of the genes which codify nitrate transporters of low affinity (NRT1) and those of high affinity (NRT2). These plants seemed to adopt a differentiated control of NRA, because even having a higher relative expression of the genes, the NRA maintained practically without influence from the different concentrations of nitrate in the solution. In the last experiment, genes in the tips of rice roots were identified, induced by different concentrations of nitrate (0.1 and 10 mM). Several genes were sequenced, were the most important data was the subunit E1 of the dehydrogenase pyruvate complex, and phosphofructokinase, suggesting the need for a better understanding of the complexity of the interaction between carbon and nitrogen metabolism. There were also found sequences homologous to the alpha actin, myosin, tropomyosin 1, creatin kinase, and glyoxalase I genes. / O arroz ? um dos mais importantes cereais para o homem, porque ? fonte prim?ria na alimenta??o de mais da metade da popula??o do mundo. As plantas necessitam de nitrog?nio para seu desenvolvimento, sendo este presente em solos aerados, na forma de nitrato. Em fun??o do desgaste das ?reas cultivadas, tem sido intensificada a utiliza??o de fertilizantes nitrogenados, o que contribui para o aumento da polui??o, visto que, esse composto possui grande mobilidade no solo. Objetivando-se avaliar os mecanismos fisiol?gicos, bioqu?micos e moleculares respons?veis pela efici?ncia no uso de nitrog?nio em arroz foram conduzidos tr?s experimentos no Departamento de Solos da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, com duas variedades de arroz, uma tradicional (Piau?) e outra melhorada (IAC-47). Primeiramente, ambas as variedades foram cultivadas em solu??o nutritiva e submetidas a tratamentos simulando o fluxo sazonal de nitrato, caracter?stico das regi?es tropicais. Nessa condi??o, foram avaliados os teores de a??cares sol?veis, fra??es nitrogenadas e a atividade das enzimas Nitrato Redutase (ANR) e Glutamina Sintetase. A variedade Piau? foi mais eficiente na aquisi??o e uso do N quando comparada a IAC-47, acumulando nitrato em seus tecidos durante as fases iniciais de crescimento. Depois, essas mesmas variedades foram cultivadas em c?mara de crescimento para estudar o efeito de concentra??es crescentes de nitrato sobre os teores das fra??es nitrogenadas, ANR e sobre o perfil de express?o relativa dos genes dos transportadores de nitrato (NRT1 e NRT2) e da Nitrato Redutase (Nia2). Dos resultados obtidos, foi observado que a variedade tradicional possui menor ANR, maiores teores de nitrato e N-amino livre. Al?m disso, esta apresentou maior express?o relativa dos genes que codificam os transportadores de nitrato de baixa (NRT1) e os de alta (NRT2) afinidade, sendo esse na parte a?rea. Estas plantas pareceram adotar um controle diferenciado da ANR, pois mesmo tendo maior express?o relativa desse gene, a atividade desta enzima se mant?m praticamente sem sofrer influ?ncia das concentra??es de nitrato na solu??o. No ?ltimo experimento, foram identificados os genes induzidos por duas concentra??es de nitrato (0,1 e 10 mM) em ?pices radiculares de arroz. Diversos genes foram seq?enciados, dentre eles, destacou-se a subunidade E1 do complexo piruvato desidrogenase e fosfofrutoquinase, indicando a necessidade de se melhor entender a complexidade da intera??o entre o metabolismo de carbono e nitrog?nio. Foram encontradas tamb?m seq??ncias hom?logas aos genes da alfa actina, miosina, tropomiosina 1, creatina cinase e glioxalase I.

O Brasil é o maior produtor de laranja doce do mundo, mas a história da citricultura brasileira é marcada por sucessivas perdas devido a pragas e doenças que atacam os pomares. Entre as doenças que afetam os pomares de citros, o huanglongbing (HLB) tem merecido destaque nos últimos anos. O HLB já é conhecido desde 1900 na China, mas no Brasil essa doença está presente desde 2004 e tem causado perdas significativas a citricultura. Essa doença é associada a três espécies de \"Candidatus Liberibacter\", mas no Brasil a espécie Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) é a mais comum. Devido à ausência de plantas de laranja doce resistentes a essa doença, a busca por plantas transgênicas que apresentem resistência a essa doença têm se intensificado nos últimos anos. Uma estratégia para projetar uma construção gênica visando a CLas é a utilização de promotores floema-específico, pois a CLas coloniza o floema das plantas de citros infectadas. Entretanto, para provar que uma sequência promotora funciona é preciso desafiar a construção gênica na presnça da CLas. Portanto, conduziu-se este trabalho com o objetivo de multiplicar plantas de Citrus sinensis Osbeck (L.) cv. \'Hamlin\' transgênicas contendo o gene uidA sob controle dos promotores floema-específicos Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPP2), Citrus phloem protein 2 (CsPP2) e Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSUC2), inocular com CLas por Diaphorina citri, avaliar a interdependência entre a expressão do transgene (gene uidA) e a concentração de CLas, para poder inferir sobre o controle da expressão dos promotores quando as plantas são inculadas com CLas. Para isso, cinco eventos de transformação de cada construção gênica, contendo apenas uma cópia do transgene foram selecionados, multiplicados e inoculados com CLas por Diaphorina citri, dezoito meses após a inoculação, o DNA e o RNA das plantas foram coletados. Foi realizada análise para verificar a concentração de CLas em todas as plantas inoculadas e a expressão do gene uidA foi realizada em uma linhagem transgênica de cada construção gênica. Com o auxílio da análise de coeficiente de correlação de Person, foi possível classificar qualitativamente a interdependência entre a concentração bacteriana e a expressão gênica. A frequência média de inoculação de CLas por Diaphorina citri foi de 30 %, demostrando que é possível incular CLas via Diaphorina citri. A análise de coeficiente de correlação de Person mostrou que nas construções com promotores AtPP2 e CsPP2 há baixa interdependência entre o controle da expressão gênica e a concentração de CLas. A construção sob controle do promotor AtSUC2 apresentou correlação forte e positiva, mostrando que quanto maior a concentração de CLas maior a expressão do transgene. / Brazil is the largest producer of sweet oranges in the world, however the Brazilian citrus history is marked by successive losses due to pests and diseases attacking orchards. Among the diseases affecting citrus groves, the huanglongbing (HLB) has been highlighted in recent years. The HLB is known in China since 1900, although in Brazil this disease has been present since 2004 and has caused significant losses to citrus industry. This disease is associated with three species of \"Candidatus Liberibacter\", however, in Brazil Candidatus Liberibacter asiaticus species (CLas) is the most common. Due to the absence of sweet orange plants resistant to this disease, the search for transgenic plants with resistance to this disease have intensified in recent years. One strategy to design a genetic construct targeting the CLas includes the use of phloem-specific promoters, because the CLas colonizes the phloem of infected citrus plants. On the other hand, to prove that a promoter sequence works it is necessary to challenge the genetic construct in the presence of CLas. Therefore, we conducted this study with the objectives of multiplying transgenic Citrus sinensis Osbeck (L.) cv. \'Hamlin\' bearing the uidA gene under the control of the phloem-specific promoters Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPP2), Citrus phloem protein 2 (CsPP2) and Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSUC2), inoculate CLas with Diaphorina citri, and evaluate the interdependence between the expression of the transgene (uidA gene) and the concentration of CLas, to infer the promoter expression when the plants are inoculated with CLas. Five events processing of each gene construct, containing only one copy of the transgene, and inoculated with CLas by Diaphorina citri. The DNA and RNA of plants were collected after eighteen months of inoculation. The concentration of CLas in the inoculated plants and the expression of the uidA gene were performed in each transgenic line of each gene construct, with the aid of the analysis of Person correlation coefficient. Thus it was possible to classify qualitatively the interdependence between bacterial concentration and gene expression. The average frequency of CLas inoculation by Diaphorina citri was 30%, demonstrating that it was possible to inoculate CLas via Diaphorina citri. Person correlation coefficient values suggested low interdependence between the control of gene expression and the concentration of CLas in constructions with promoters AtPP2 and CsPP2. The construction under AtSUC2 promoter control showed strong positive correlation, indicating that the higher the concentration of CLas the greater is the transgene expression.

Nos últimos anos tem-se destacado a importância dos ácidos graxos presentes na carne e leite, em especial aqueles que poderiam influenciar a saúde humana. A deposição de gordura, e também sua composição, é resultado da interação entre os fatores genotípicos e fenotípicos. Sendo assim, o contínuo melhoramento genético, com a seleção de determinados genes, pode influenciar na qualidade do produto que chega à mesa do consumidor. Objetivou-se com este estudo avaliar os padrões de expressão dos genes diferencialmente expressos relacionados ao perfil de ácidos graxos da carne de bovinos Nelore confinados, por meio da verificação dos padrões de expressão de genes envolvidos no metabolismo lipídico e na síntese dos ácidos graxos palmítico (C16:0), esteárico (C18:0), oléico (C18:1 cis-9), linoléico (C18:2 cis-9 cis- 12), CLA (C18:2 cis-9 trans-11) e linolênico (C18:3). Foram utilizados 48 bovinos machos inteiros, Nelore, com idade aproximada de 24 meses, dos quais foram coletadas amostras do músculo Longissimus para a realização das análises. Verificou-se um total de 1173 genes diferencialmente expressos entre os grupos de baixa e alta concentração de cada um dos ácidos graxos. Os genes diferencialmente expressos identificados no músculo Longissimus foram ACAT1, ACOX2, ACOT11, ACSM3, ACSS1, AGPAT6, BDH1, CIQTNF3, CYP4B1, DGAT2, FABP3, FABP4, FABP7, GK, IGF2, LCAT, LIPE (HSL), LPL, PLIN1, PLIN5, SCD5 e SLC27A6, que possuem ações nas vias metabólica dos ácidos graxos ou nas vias adjacentes, podendo influenciar sobre o perfil lipídico da carne. Estudos com RNAseq envolvendo o perfil de ácidos graxos na carne ainda são escassos, e em animais zebuínos não há relatos. Desta forma, ainda são necessários mais estudos a fim de esclarecer como determinados genes podem influenciar as características desejadas, como por exemplo, o perfil de ácidos graxos da gordura intramuscular. / Recently, the importance of fatty acids on meat and milk has been highlighted, especially those that could affect human health. The fat deposition, and its composition, is a result of the interaction between genotypic and phenotypic factors. In this way, the continuous genetic improvement, with the selection of some genes, can influence the quality of the product acquired by the consumers. The aim of this study was evaluate the patterns of expression of differentially expressed genes related to the fatty acid profile of Nellore cattle feedlot, by verifying the patterns of expression of genes involved in lipid metabolism and in the synthesis of fatty acids palmitic (C16: 0), stearic (C18: 0), oleic (C18: 1 cis-9), linoleic (C18: 2 cis-cis- 9-12), CLA (C18: 2 cis-9 trans-11) and linolenic acid (C18: 3). Forty-eight bovine, male, Nellore, with an average age of 24 months, from which were collected samples of Longissimus Muscle to carry out the analysis. There were a total of 1173 differentially expressed genes between groups of low and high concentration of each of the fatty acids. Differentially expressed genes identified in Longissimus were ACAT1 ACOX2, ACOT11, ACSM3, AGPAT6, BDH1, ACSS1, CIQTNF3, CYP4B1, DGAT2, FABP3, FABP4, FABP7, GK, IGF2, LCAT, LIPE (HSL), LPL, PLIN1, PLIN5, SCD5 and SLC27A6, that are related to metabolic pathways of fatty acids or the adjacent pathways, and may influence on meat lipid profile. Studies with RNAseq involving fatty acid profile in meat are still rare, especially in Zebu cattle, in which there are no reports. In this way, further studies are still needed in order to clarify how certain genes can influence the desired characteristics, for instance, the fatty acid profile of intramuscular fat content.

A diferenciação morfo-fisiológica entre rainhas e operárias de Apis mellifera decorre da alimentação recebida durante o desenvolvimento larval. Dentre as diferenças morfológicas entre as duas castas encontram-se estruturas especializadas para a coleta de pólen e própolis, localizadas nas pernas metatorácicas das operárias, ausentes nas pernas de rainhas. Os padrões de expressão de Ultrabithorax (Ubx) durante o desenvolvimento de operárias e rainhas estão associados aos padrões de cerdas das pernas de fêmeas adultas. Pernas mesotorácicas de operárias apresentam estruturas descritas como importantes na coleta de pólen, ausentes em rainhas. Por outro lado, as asas não possuem estruturas casta-específicas. No presente trabalho, análises globais de transcrição gênica por hibridação de lâminas de microarrays a partir de RNA total de pernas metatorácicas de operárias e rainhas em três estágios do desenvolvimento mostram 1952 genes diferencialmente expressos. Discos de pernas metatorácicas de larvas no início do quinto estágio larval, quando comparados aos de estágios mais tardios no desenvolvimento, têm alto níveis de transcritos de ativadores de Ubx, o qual está 25 vezes mais expresso em estágios subseqüentes do desenvolvimento. Buscas por motivos de ligação de fatores de transcrição nos promotores dos grupos de genes diferencialmente expressos revelam que os motivos para ligação de Ubx, Zeste e Twist estão super-representados em um dos conjuntos analisados. Dentro deste grupo, estão presentes genes cujos ortólogos em Drosophila são controlados por Ubx, como o caso do gene lola. Análises do processamento do mRNA de Ubx em pernas e asas de ambas as castas mostram que são produzidas três isoformas diferentes quanto à presença de dois microéxons (m1 and m2), que contêm 42 nt and 53 nt, respectivamente. A isoforma IIa-like, que contém o m2, entretanto, parece não ser capaz de produzir uma proteína Hox, já que possui um códon de terminação antes do homeodomínio. O perfil de transcrição diferencial de Ubx entre as castas está associado a apêndices que apresentam diferenças morfológicas, sendo Ubx mais transcrito em pernas meso e metatorácicas de operárias que rainhas. Quando analisadas as porcentagens de expressão de cada isoforma nos apêndices, claramente a isoforma IVa-like, sem microéxons, é a mais transcrita em todos os tecidos. Entretanto, nota-se que nas asas anteriores, onde há menos Ubx, a isoforma IIa-like é proporcionalmente mais transcrita que II nos outros apêndices. Destaca-se uma tendência à inclusão do microéxon m1 (isoforma IIIa-like) ao mRNA de Ubx transcrito em asas posteriores e pernas de rainhas em comparação a operárias, em detrimento da isoforma IVa-like. Análises do uso da região 3UTR em pupas de operárias mostram que há um microssatélite transcrito na porção distal da região 3UTR deUbx. A estrutura secundária predita agrupa separadamente as regiões codificadora e as regiões 3UTR proximal e distal. Análises de seqüenciamento de última geração revelaram que oito dos 51 microRNAs com sítios-alvo preditos na região 3UTR de Ubx estão mais expressos em asas anteriores, e outros dois em asas posteriores. Assim, nossos resultados mostram que o controle da expressão diferencial de Ubx é dada pela ativação desse gene por fatores de transcrição que se ligam ao promotor, controle do splicing alternativo, e expressão de microRNAs diferencial em cada casta e apêndice, controlando, assim, a morfogênese diferencial dos apêndices de fêmeas observada em A. mellifera. / Along with differences in physiological and behavioral characteristics, workers and queens of Apis mellifera also differ in appendage morphology. Some appendage specializations in the hind legs of honeybee workers, which are highly specialized pollinators, deserve special attention. The hind tibia of the worker has an expanded bristle-free region used for carrying pollen and propolis, the corbicula. In queens, this structure is absent. Although these morphological differences have been well characterized, the genetic inputs triggering the development of this alternative morphology have remained unknown. Through microarray analysis, we detected 1,952 genes that are differentially expressed during worker versus queen hind leg development. The gene expression signatures of the two castes have similar patterns of genes controlling development. At the beginning of the last larval instar, Ultrabithorax (Ubx) activators are more strongly expressed than in prepupae and early pupae; at this time Ubx expression is approximately 25 times higher. Within the gene expression signature, we identified a cluster formed by genes in which Ubx, Twist and Zeste binding sites are over-represented. This cluster includes genes for which Drosophila orthologs are known to be bound by Ubx, as in the case of lola. We also tested the extent of Ubx mRNA processing during wing and leg development. Unexpectedly, we found Ubx alternative splicing in both workers and queens; there were two microexons (m1 and m2) encoding 42 nt and 53 nt, respectively, arguing against the hypothesis that alternative splicing occurs exclusively within the Diptera. Inclusion of the m2 exon inserts a stop codon upstream from the exon containing the homeodomain, producing a truncated protein. Moreover, these bee microexons conserve the nucleotides known to be important for alternative splicing in Drosophila. During bee wing development, Ubx mRNA isoforms are transcribed in similar amounts in both castes; however, during leg development, queens produce 60% of the Ubx levels transcribed by workers. Analysis of 3UTR usage during bee development revealed a microsatellite region transcribed within the Ubx 3UTR. The predicted secondary structure locations separated the coding region into three branches and the proximal and the distal 3UTR regions. Deep-sequencing analysis revealed that eight out of 51 miRNAs predicted to target the Ubx mRNA are more highly expressed in worker forewings and two are more expressed in the hindwings. Therefore, we conclude that Ubx differential expression is activated by transcription factors that bind to its promoter, by control of alternative splicing, and moreover by microRNAs differentially expressed according to tissue and caste, resulting in differential morphogenesis of the hind leg in honeybee females.

Um dos desafios atuais da pesquisa em frutíferas tropicais é incorporar abordagens baseadas em marcadores moleculares nos programas convencionais de melhoramento. O maracujá-doce (Passiflora alata) é uma espécie diploide, de fecundação cruzada e pouco explorada. Recentemente, nosso grupo construiu um mapa de ligação de P. alata composto de diferentes tipos de marcadores moleculares. Além disso, dispõe-se de um conjunto de transcritos de Passiflora edulis, obtidos a partir de duas bibliotecas de expressão: forward e reverse onde foram isolados transcritos diferencialmente expressos na planta inoculada com Xanthomonas axonopodis (Xap) (672) e na planta controle, não inoculada (310), respectivamente. Assim, neste estudo, este conjunto de transcritos foi explorado visando ao desenvolvimento de marcadores SSR e SNP com o intuito de enriquecer, posteriormente, o mapa de ligação de P. alata com marcadores funcionais putativos. Para o desenvolvimento dos marcadores SSRs, as 672 sequências da biblioteca forward foram investigadas e em 91 delas foram encontrados 115 SSRs. Como esperado, a classe de repetições trinucleotídicas foi a mais abundante, sendo o motivo (AG)n o mais comum entre as repetições dinucleotídicas. Desenhou-se primers para amplificar 42 desses SSRs. Dois acessos de P. edulis e seis indivíduos da população de mapeamento de P. alata foram usados nos testes de transferibilidade e avaliação do polimorfismo. Trinta e quatro pares de primers apresentaram bom padrão de amplificação, porém apenas 10 deles revelaram polimorfismo em P. alata. Para o desenvolvimento dos marcadores SNPs, 118 sequências selecionadas das bibliotecas de expressão forward e reverse foram usadas para o desenho de primers; 37 delas foram usadas para avaliar o polimorfismo no mesmo set de indivíduos de P. alata. Foram encontrados 34 locos contendo SNPs bialélicos em 16 fragmentos gênicos, cujas sequencias variaram em tamanho de 332 a 872 pb. Considerando todos os fragmentos gênicos (16), foi analisado um total de 10.003 pb; a frequência de SNPs foi estimada como sendo 1 a cada 294 pb. Observou-se a mesma ocorrência de SNPs (50%, 17/34) em regiões codantes e não-codantes. Uma função putativa pôde ser atribuída a todos os fragmentos gênicos de P. alata, sendo que 82% mostraram homologia com as mesmas proteínas das sequências de origem, isoladas de P. edulis. No geral, os locos marcadores apresentaram baixo nível de polimorfismo molecular. Este é o primeiro trabalho sobre o desenvolvimento de locos marcadores funcionais putativos em Passiflora usando transcritos expressos em resposta à Xap. / One of the current challenges of tropical fruit research is to incorporate molecular marker-based approaches into conventional breeding programs. The sweet passion fruit (Passiflora alata) is a diploid, outcrossing and underexploited species. Recently, our group has constructed a P. alata linkage map consisted of different types of molecular markers. Moreover, we have a set of transcripts of Passiflora edulis obtained from two expression libraries: the forward and the reverse where differentially expressed transcripts were isolated from a plant inoculated with Xanthomonas axonopodis (Xap) (672), and from the control plant, uninoculated (310), respectively. Thus, in this study, this set of transcripts were exploited aiming at the development of SNP and SSR markers for future enrichment of the P. alata linkage map with putative functional markers. For the development of SSR markers, the 672 sequences from the forward library were investigated and 91 of them were found to have 115 SSRs. As expected, the trinucleotide class of repeats was the most abundant, and the (AG)n motif was the most common among the dinucleotide repeats. Primers were designed to amplify 42 of these SSRs. Transferability tests and polymorphism investigation were carried out using two accessions of P. edulis and six individuals of the mapping population of P. alata. Thirty-four primer pairs showed a good amplification pattern but only 10 loci revealed polymorphism in P. alata. For the development of SNP markers, 118 sequences selected from forward and reverse expression libraries were used for designing primers; 37 were used to assess the polymorphism in the same set of individuals of P. alata. Thirty-four biallelic SNPs were found in 16 gene fragment sequences that ranged in size from 332 to 872 bp. Considering all gene fragments, a total of 10,003 bp was obtained; the frequency of SNPs was estimated to be 1 every 294 bp. The same prevalence of SNPs (50%, 17/34) was observed within coding and non-coding regions. A putative function was assigned to all gene fragments of P. alata; 82% of them have shown homology to the original protein sequences isolated from P. edulis. Overall, the marker loci showed a low level of molecular polymorphism. This is the first report on the development of putative functional marker loci in Pasiflora using transcripts induced in response to Xap.

This project focuses on the use of sponge genetic transcripts in the form of expressed sequence tags (ESTs) readily available in Genbank to search for novel genes using bioinformatics analysis tools. Marine sponge species are known to house a diversity of marine microbes and are known as the ‘living fossils’ of the animal kingdom because of the large number of ancient genes they house. Genomic mining can be a useful tool in discovering these orthologous genes. This study utilized the techniques of genomic mining of 11 previously described sponge species transcripts. The results of this study provide a better understanding of the genomic structure of the organisms studied by creating a more detailed genetic map and examining a specific environmental snapshot of the genes in each sponge. Novel methods for dissecting beneficial information from large scale data sets available in genomic libraries utilizing bioinformatics search tool MGRAST were examined. The results of this study indicate that sponges house numerous genes that are likely to be evolutionary predecessors of genes in higher eukaryotes. Support was also given to the notion that microbial communities play a role in metabolic pathways of sponges.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-28T17:31:22Z No. of bitstreams: 1 carlacristinasoaresdeoliveiradovale.pdf: 1707127 bytes, checksum: e1b81c2967dbd6666fa4116846b99fdd (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-01-29T11:02:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carlacristinasoaresdeoliveiradovale.pdf: 1707127 bytes, checksum: e1b81c2967dbd6666fa4116846b99fdd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-29T11:02:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carlacristinasoaresdeoliveiradovale.pdf: 1707127 bytes, checksum: e1b81c2967dbd6666fa4116846b99fdd (MD5) Previous issue date: 2014-02-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objeto de pesquisa da presente investigação é a verificação de uma possível resposta emocional dos pacientes comatosos frente aos estímulos de seus familiares. Pretende-se identificar se o paciente comatoso internado na Unidade de Terapia Intensiva responde aos estímulos do visitante. E como objetivos específicos: Descrever as alterações das respostas fisiológicas monitoradas nos pacientes comatosos internados na UTI durante as visitas e destacar a importância ou não da comunicação verbal e não verbal com os pacientes comatosos. Atualmente, apesar dos avanços da Medicina e da Neurociência, ainda não se tem uma resposta precisa sobre o que se passa emocionalmente com o paciente em coma, o que demanda uma melhor compreensão dos seus processos emocionais. A pesquisa caracteriza-se por ser um estudo qualitativo, realizado na Unidade de Terapia Intensiva do Hospital Universitário da Universidade Federal de Juiz de Fora. Utilizou-se como metodologia a Análise do Conteúdo proposta por Bardin e a observação. A análise de conteúdo foi aplicada às entrevistas realizadas com os visitantes enquanto que a observação foi utilizada para identificar as alterações fisiológicas no momento da visita. A coleta de dados se deu em 45 dias de observação com pacientes que estavam dentro dos critérios de inclusão da pesquisa. Foram pesquisados 11 pacientes comatosos que estavam ligados a um monitor eletrônico multiparâmetros e à respiração artificial. Estes aparelhos mediam em tempo real os parâmetros fisiológicos que indicariam uma resposta do paciente frente ao estímulo do visitante (pressão arterial, frequência cardíaca e frequência respiratória). Essa medição foi feita antes, durante e depois das visitas e os dados foram registrados em uma planilha com o intuito de comparar os padrões fisiológicos e identificar alterações. Essa medição foi registrada em dois momentos sem estímulo (antes e depois da visita) e em três momentos com estímulo do visitante (durante a visita). A análise temática das entrevistas e do diário de campo resultou em três grandes categorias: 1- Respostas Emocionais nos pacientes comatosos, na qual se constatou a presença de respostas emocionais nos pacientes comatosos, identificadas através de dois aspectos: alterações fisiológicas e superficialização do nível de consciência; 2- A importância de um outro em que foi descrito os tipos de interação entre visitantes e pacientes, além de abordar a importância da visita na perspectiva do visitante; 3- Possibilidades de humanização no atendimento ao paciente comatoso onde foi discutida a relevância da atuação do psicólogo na UTI. Desta forma, a pesquisa indica a presença de respostas emocionais do paciente comatoso e possibilita informações para que se realizem o preparo da equipe multiprofissional para acolher os familiares que vivenciam este momento de crise estimulando de forma adequada e eficaz a interação dos binômios: “profissionais-família” e “família-doente”. Quanto ao binômio “profissional-paciente” a pesquisa contribui para a humanização combatendo a reificação do paciente em estado de coma. Como desdobramento desse estudo indica-se ainda novas pesquisas com outras tecnologias como a ressonância magnética e uma maior quantidade de pacientes. / Objective: The research aims at finding possible emotional responses to stimuli from their family members in comatose patients. It seeks to identify whether comatose patients admitted to the Intensive Care Unit respond to stimuli of visitors. The specific objectives: (i) to describe the changes in the monitored physiological responses in comatose ICU patients during family visits. (ii) To assess the degree of importance of verbal and nonverbal communication with comatose patients. Despite the advances in Medicine and Neuroscience, no answer to what precisely occurs with comatose patients is satisfactory, since further understanding of their emotional processes is still required. Methodology: The research comprises a qualitative study conducted in the Intensive Care Unit of the University Hospital of the Federal University of Juiz de Fora. Content Analysis (Bardin) of the visitors’ interviews and direct observation to identify the patients’ physiological changes during the family visits were used as methodology. The data collection lasted 45 days of direct observation of selected patients who met the criteria for inclusion in the survey. Eleven comatose patients connected to multi-parameter electronic monitors and artificial respirator were under scrutiny. These devices measured in real time physiological parameters that indicate a patient's response to the stimulus from the visitors (blood pressure, heart rate and respiratory rate). The measurements were conducted before, during and after the visits. The collected data were recorded in spreadsheets in order to compare physiological patterns and identify changes. One measurement was recorded at two moments without stimulation (before and after the visit), and another one three times with the visitor’s stimulus (during the visit). Results: A thematic analysis of the interviews and the field diary resulted in three major categories: (i) Emotional Responses in comatose patients, in which the presence of emotional responses were found and classified into two categories: physiological changes and superficialization of the consciousness’ level. (ii) The importance of the “other”, through which the types of interaction between visitors and patients were described, in addition to addressing the importance of the visit under a visitor's perspective. (iii) Possibilities of humanization in comatose patient care, in which the relevance of the psychologist in the ICU. Conclusion: The research indicates the presence of emotional responses in comatose patients and provides information on the preparation of a multidisciplinary team to sort out family members who best experience the moment of crisis and stimulate proper and effective interaction of the binomials: "Professional versus family" and "family versus patient." As for the binomial "physician versus patient", the research underscored the need for the humanization of such environments, and contended the reification of the patient in coma. The study also indicates the need for further research with other technologies such as magnetic resonance imaging with a larger number of patients.

Há muitas alterações nos sistemas fisiológicos de indivíduos com diabetes melittus em função dos constantes momentos de hiperglicemia, principalmente alterações relacionadas ao aumento dos riscos cardiovasculares. O objetivo desse estudo foi avaliar as respostas do controle glicêmico pelo monitor contínuo de glicose e da pressão arterial (PA), frequência cardíaca (FC) e sua variabilidade expressa pelos valores de RMSSD em diabéticos tipo II submetidos a testes de avaliação antes e após a realização de treinamento aeróbio e resistido. Participaram desse estudo 9 voluntários diabéticos tipo II do sexo masculino (45 a 65 anos) divididos em 3 grupos: DTA (n=7), diabéticos submetidos a seis semanas de treinamento aeróbio; DTR (n=5), diabéticos submetidos a treinamento resistido e GDC (n=5), diabéticos sem qualquer treinamento regular. Os voluntários realizaram testes laboratoriais, ergoespirometria e teste de fadiga em leg press antes e após o treinamento físico. Os resultados foram analisados estatisticamente pelo teste t de Student e pelo teste de Kruskal Wallis. Os voluntários tiveram a cinética da concentração de glicose mensurada pelo monitor contínuo e analisada qualitativamente antes, durante e após a realização da ergoespirometria e do teste de fadiga por 60 minutos. Como resultados o grupo DTA apresentou menores valores de concentração de glicose pela monitorização contínua e o grupo DTR a melhor resposta na cinética dessa curva, apresentando expressivo decaimento na mesma. Em relação à resposta pressórica, somente a PA diastólica (PAD) foi menor estatisticamente para o grupo DTA pós treinamento aeróbio no repouso. Não houve diferenças entre os valores pré e pós treinamentos em relação à FC e os voluntários do grupo DTA apresentaram maiores valores de RMSSD em repouso e o do grupo DTR incrementos desses valores na recuperação dos testes, mostrando maior ação parassimpática no controle autonômico cardíaco dos diabéticos submetidos a treinamentos. Os indivíduos do grupo GDC apresentaram decremento nesse valor, sugerindo piora no controle autonômico cardíaco. Como conclusão geral, este estudo sugere que indivíduos diabéticos tipo II que realizaram treinamento aeróbio e resistido apresentaram benefícios complementares no controle glicêmico registrado pelo monitor contínuo em repouso e no período de recuperação de exercício, respectivamente, adaptações que parecem estar associadas à melhora da ação parassimpática/vagal no controle autonômico cardíaco e, sugere, também, ser o treinamento físico aeróbio o que permite melhor organização hemodinâmica nas respostas de PAD. / There are many changes in physiological systems of people with diabetes melittus due to the constant moments of hyperglycemia, mainly related to increasing of cardiovascular risk. The aim of this study was evaluate the responses of glycemic control by continuos glucose monitoring and blood pressure (BP), heart rate (HR) and its variability expressed by the values of RMSSD in type II diabetics undergoing evaluation tests before and after performing aerobic and resistance training. Participants were 9 volunteers type II diabetic male (45-64 years) divided in 3 groups: DTA (n=7), diabetics undergoing six weeks of aerobic training; DTR (n=5), diabetics undergoing resistance training and GDC (n=5), diabetics without any regular training. The volunteers underwent laboratory tests, spirometry and fatigue tests on leg press before and after physical training. The results were statistically analyzed by Students t and Kruskal Wallis tests. The volunteers had the kinetics of glucose concentration measured by the continuos monitor and qualitatively analyzed before, during and after the spirometry and the fatigue tests for 60 minutes. As a result the DTA group had lower glucose concentration by continuos monitoring and DTR the best response in the kinetic curve, showing important decrease in it. In relation to the BP response, only diastolic BP (DBP) was statistically lower for the DTA group after aerobic training. There were no differences between pre and post training in HR and the DTA group showed higher RMSSD at rest and the DTR group showed increments of these values in the tests recovery showing higher parasympathetic action on cardiac autonomic control in diabetics patients with training. Individuals in the GDC group showed decrement this value, suggesting deterioration in cardiac autonomic control. As a general conclusion, this study suggests that type II diabetic individuals who performed aerobic and resistance training showed additional benefits in glycemic control by continuos monitor recorded at rest and during exercise recovery, respectively, adaptations that seem to be associated with improvement in parasympathetic action in cardiac autonomic control, and also suggests that aerobic exercise training has better organization hemodynamic in responses of DBP.