Una de las estrategias más satisafactorias empleadas en la lucha contra el cáncer es la utilización de la terapia génica para actuar en la inmunomodulación, es decir la actuación sobre el propio sistema inmunitario del paciente para que sea éste quien reconozca al tumor como algo foráneo, que no escape a la inmunovigilancia y lograr destruirlo. En esta tesis doctoral hemos explorado bajo este concepto las vacunas por terapia génica no viral, tanto preventivas como terapéuticas, trabajando bien con antígenos aislados y genes como con células y genes. Los experimentos en modelo de melanoma murino, se han divido en tres grandes bloques. 1) En las vacunas preventivas con antígenos, se obtuvieron diferentes tasas de reducción de volumen tumoral, acompañadas de producción de inmunnoglobulinas G específicas frente al tumor tratado. Se obtuvieron los mejores resultados en modelos de vacunación con acondicionamiento tisular en los que inicialmente se acondicionaba al animal con los antígenos purificados, transfectando posteriormente con plásmidos desnudos productores del gen de mGM-CSF. 2) En las vacunas preventivas celulares, transfectando células B16 con plásmidos portadores de los genes de mGM-CSF, mIL-12, mB7.2 y combinaciones entre ellos, se obtuvo la protección total frente al tumor en los animales vacunados con 3 dosis de 2x105 células transfectdas, irradiadas, no seleccionadas. Además se demostró que la vacunación había generado memoria inmunológica, al repetir la exposición al tumor en los mismos animales un año después y volver a lograr la protección total. Adicionalmente se realizaron experimentos de vacunación exclusivamente con las células transfectadas, seleccionadas y purificadas mediante bolas magnéticas. 3) Por último, se realizaron experimentos de vacunación terapéutica, en animales portadores de tumor, siguiendo el modelo de células transfectadas. Se probaron diferentes dosis celulares y el tratamiento previo con ciclofosfamida. Los mejores resultados de inhibición tumoral y prolongación de la supervivencia se obtuvieron en las vacunas con 2 millones de células/dosis. Finalmente se realizó una primera aproximación al estudio del bloqueo del éxito de la vacunación terapéutica, analizando la población de células T reguladoras en los animales tratados. / One of the most satisfactory strategies against cancer is the use of gene therapy for immunemodulation, that is acting over the patient's immune system in order to make it recognize the tumor and fight properly against it. In this thesis, we have explored the nonviral gene therpy vaccines under this concept, working with preventive as well as therapeutic models, with purified antigens and genes and also with whole cells and genes. The experiments have been performed with a murine melanoma model and been divided in three sets. 1) In preventive antigen vaccines, different rates of tumor growth inhibition were obtained, acompained by specific antitumor immunoglobulin G production. The best results were obtained with tissue conditioning, where the animals were firstly conditioned with purified tumor antigens and later the tissues were transfected in vivo with naked plasmids producing mGM-CSF. 2) In preventive cell vaccines, transfecting B16 cells with plasmids bearing mGM-CSF, mIL-12, mB7.2 genes alone or combined, total tumor protection was obtained vaccinating with 3 doses of 2x105 transfected, irradiated, non selected cells. This vaccine also showed immunological memory since a second challenge to the tumor in the same animals one year later also reached total protection. In addition, experiments vaccinating only with the selected population of transfected cells, by means of magnetic beads, were performed. 3) Finally, therapeutic vaccines were evaluated, continuing with transfected cells. Different cell doses and pretreatment with cyclophosphamide were tested. The best results of tumor growth inhibition and survival were obtained with 2 million transfected cells/dose. A first approach to the study of the blockade in therapeutic model success was performed analysing the regulatory T cell population in the treated animals.

El género Saccharomyces incluye tanto especies naturales como especies de levaduras que se utilizan en fermentaciones industriales y tradicionales. Algunas bebidas fermentadas, como son el Pulque y la Chicha, se obtienen mediante un proceso tradicional desarrollado durante el Neolítico americano en las civilizaciones precolombinas mesoamericanas y andinas. Por ello, las levaduras que participan en estos procesos de fermentación han estado aisladas de las poblaciones vínicas del resto del mundo, hasta la llegada de los europeos en 1942, con la introducción de nuevos procesos fermentativos, como son la producción de vino y los destilados. El objetivo del presente estudio fue determinar la variación genética de las cepas del género Saccharomyces, tanto presentes en fermentaciones tradicionales como las de procesos fermentativos industriales, para deducir el origen y la historia evolutiva de Saccharomyces cerevisiae. Con técnicas moleculares se detectó a S. cerevisiae y S. paradoxus en bebidas tradicionales de Latinoamérica, y mediante estudios fisiológicos se demostró que S. cerevisiae presenta propiedades tecnológicas adecuadas para una fermentación vínica. Con el análisis filogenético de cuatro regiones nucleares y una mitocondrial se detectó que S. cerevisiae esta compuesta por dos poblaciones, una de ambientes vínicos y la otra de ambientes no vínicos, muy diferentes entre ellas. Las poblaciones vínicas se caracterizan por ser un grupo muy homogéneo, con baja tasa de recombinación, alta frecuencia de homocigosis, con menos diversidad genotípica y menos divergencia nucleotídica. Esto indica una reciente domesticación, con reproducción clonal y sucesos de autodiploidización. En cambio, las poblaciones no vínicas están formadas por un grupo muy heterogéneo, con reproducción clonal pero la reproducción sexual más frecuente por anfimixis. La detección de alelos vínicos y no vínicos entre las cepas de las poblaciones latinoamericanas indica que existe flujo genético entre ambas poblaciones. Por otro lado, se detectó que los alelos vínicos de S. cerevisiae no provienen de S. paradoxus sino de los alelos no vínicos de S. cerevisiae. En base a los resultados obtenidos se proponen dos posibles escenarios no incompatibles para el origen de S. cerevisiae. En un primer escenario, las cepas no vínicas forman una población muy heterogénea con alelos muy diversos, lo que dio lugar a la aparición de las cepas vínicas por domesticación, y se vio reducida la diversidad genética cuando se fijaron los alelos vínicos. En el segundo caso, las cepas vínicas y no vínicas, son poblaciones con alelos muy diferentes, pero con flujo genético se intercambiaron alelos vínicos en no vínicos, pero muy raro en el otro sentido. Finalmente se proponen que al menos tres eventos de hibridación dieron origen a las cepas híbridas aisladas de vinos, y probablemente a partir de uno solo para las cepas híbridas cerveceras. Sin embargo, los fenómenos de recombinación y de introgresión detectados entre diferentes especies de Saccharomyces permiten suponer que la hibridación puede ocurrir con mayor frecuencia. / Traditional fermented beverages and foods from Latin America are poorly studied. The yeast microbiota involved in these ancient processes has been isolated from "Old World" yeast populations until the introduction of winemaking and distillation. The aim of this work was to study the genetic variation of Saccharomyces strains from traditional and industrial fermentations and to deduce the origin and evolution of S. cerevisiae. S. cerevisiae and S. paradoxus were isolated from traditional Latin American fermentations. Some of the investigated S. cerevisiae strains showed good physiological properties that are important in the wine production. A genetic analysis was performed based on sequencing of four nuclear and one mitochondrial gene of strains isolated from Latin-American traditional and industrial (mainly European) fermentative processes. Genetic variability from S. cerevisiae strains shows two populations, one from wine and the second from non-wine fermentations. Wine population represent a very homogeneous group, with low recombination rate, high frequency of homozygous strains, low genotypic diversity and low nucleotide divergence. These finding indicate a recent domestication event by clonal reproduction and some events of haplo-selfing. Non-wine populations represent a heterogeneous group, with clonal reproduction and rare sexual reproduction by anfimixis. Wine and non-wine alleles detected in Latin-American populations indicated genetic flow. Phylogenetic analysis shows that wine alleles of S. cerevisiae are originated from non-wine alleles of S. cerevisiae, but not from S. paradoxus. Two theories are proposed for the origin of wine S. cerevisiae strains: 1) wine yeast represent a population with low genetic diversity because "wine" alleles were fixed and emerged after domestication event from an ancestral and heterogeneous population of non-wine yeast; 2) wine and non-wine strains represent populations with different alleles, but genetic flow is frequent from wine to non-wine, and rare in opposite direction. Recombination and introgresion events detected in Saccharomyces species indicated that hybridizations occur more frequently then expected. According to the phylogenetic results wine hybrids S. cerevisiae x S. kudriavzevii were originated from three hybridizations events, and brewery hybrids from one.

El riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular en pacientes con hipertensión (HTA) se incrementa en más de 3 veces con respecto a otras enfermedades de elevado riesgo cardiovascular (diabetes, hipercolesterolemias, etc.), siendo además la HTA la mayor causa de mortalidad y morbilidad cardiovascular. La HTA se representa como una patología compleja que a menudo se asocia a otras alteraciones como microalbuminuria, disfunción endotelial, etc. Bajo estas condiciones fisiopatológicas se ha demostrado que se produce un aumento en la generación de especies oxidantes en el organismo, superando la capacidad de protección de los sistemas celulares de defensas antioxidantes, lo que provoca estrés oxidativo (EO).En la presente tesis doctoral se ha caracterizado el EO a nivel bioquímico y genético, mediante el análisis de los productos finales de EO, niveles de ARN mensajero y polimorfismos de genes implicados en la producción y defensa de EO y que pudieran afectar a la presión arterial y el daño orgánico.En este estudio se han analizado parámetros de EO como los glutatión reducido y oxidado, malondialdehido y 8-hidroxi 2-desoxiguanosina tanto en células mononucleares circulantes como en plasma de pacientes hipertensos (con y sin tratamientos) y en normotensos.Además, se han cuantificado los niveles de ARNm de los principales genes de estos sistemas, en linfocitos de hipertensos y controles (NADPHoxidasa, catalasa, superóxidos dismutasas y enzimas del sistema glutatión y tiorredoxina).Por otra parte, se ha realizado el estudio de variantes genéticas de genes de los sistemas implicados en EO, localizados en regiones que podrían afectar en la homeostasis oxidativa, lo que da lugar a alterarse la función de las proteínas y promotor región polimorfismos que alteran los niveles de EO como consecuencia de la regulación de genes. Esta parte del estudio se ha llevado a cabo en una población de hipertensos, controles y una población general.Los resultados obtenidos nos muestran que en la HTA esencial:1. Exite un aumento en los niveles de estrés oxidativo tanto en plasma como en células monolinfocitarias y a su vez este aumento se ve correlacionado con los niveles de presión arterial (PA) de los sujetos. Además, el EO se relaciona con el aumento los niveles de excreción urinaria de albúmina (EUA) independientemente de los valores de PA.2. Se produce un aumento de los niveles de ARNm de genes que codifican las distintas subunidades de NAD(P)H oxidasa y una disminución de los niveles de ARNm de las enzimas antioxidantes en monolinfocitos. Además, estos cambios se relacionan con el estado crónico de EO presente en la HTA, a pesar de la activación del sistema tiorredoxina y la enzima Manganeso Superóxido Dismutasa. Por tanto, los pacientes hipertensos tanto en presencia o en ausencia de microalbuminuria se encuentran peor protegidos frente a EO que los sujetos control.3. Independientemente del tratamiento antihipertensivo utilizado, los niveles de los marcadores bioquímicos de EO se reducen, y también los niveles de ARNm de todas las enzimas implicadas.4. Los análisis de asociación han mostrado que ciertas variantes, y sus haplotipos, se encuentran asociadas a niveles de EO, PA, EUA y riesgo de microalbuminuria en sujetos hipertensos. Hay que destacar que estos datos se han replicado en otra población de hipertensos y en la población general, donde se han mantenido dos de estas asociaciones.5. En el análisis de asociación entre los polimorfismos de distintos genes observamos la interacción entre el gen de la XDH y GPX1 en la población hipertensa. Estas interacciones nos confirman la naturaleza compleja de esta patología y de la necesidad de enfocar las nuevas investigaciones hacia el estudio de las interacciones entre distintos genes y estos con los factores ambientales. / Hypertension is a complex disease that is often associated with other disorders such as microalbuminuria, endothelial dysfunction, etc. Under this pathophysiological condition has been shown that there is an increase in the generation of oxidizing species in the body, without being able to avoid the protection capacity of cellular antioxidant defense systems, leading to oxidative stress (OS).In this thesis OS status has been characterized by biochemical and genetic level of OS byproducts, messenger RNA levels and polymorphisms of oxidant and antioxidant system genes.The results have shown increased levels of oxidative stress in blood and peripheral mononuclear cells and this increase is correlated with levels of blood pressure (BP) in essential hypertension.Furthermore OS seems to be a determinant of urinary albumin excretion (UAE) independent of BP levels even in hypertensive subjects.The increase in mRNA levels of genes encoding different subunits of NAD(P)H oxidase complex and decreased mRNA levels of antioxidant enzymes in peripheral mononuclear cells, has been related to the chronic state of OS in the hypertension, despite the action of thioredoxin system and manganese superoxide dismutase enzyme. Thus, hypertensive patients in presence or absence of microalbuminuria are less protected from OS compared to control subjects. Furthermore, any type of antihypertensive treatment reduced the levels of OS, and therefore also the mRNA levels of all enzymes involved.The association analysis have confirmed that certain genetic variants, their haplotypes and their interactions, are associated with levels of OS, BP, UAE and microalbuminuria risk in hypertensive subjects. It should be noted that these results have been replicated in another hypertensive population and in spanish general population some associations have remained.

La ataxia de Friedreich (FA) es una enfermedad neurodegenerativa autosómica recesiva con una prevalencia en la población de 1- 4 casos cada 100.000 habitantes. La mutación más común que provoca la ataxia de Friedreich es la expansión de la repetición del microsatélite GAA situado en medio de una secuencia Alu-Sx en el primer intrón del gen FXN. Las repeticiones asociadas a la enfermedad se encuentran en el intervalo desde 70 a más de 1000 repeticiones del triplete. El gen produce una proteína llamada frataxina cuya síntesis se ve comprometida en los pacientes ya que las expansiones del triplete GAA interfieren en la transcripción del gen. La función de la proteína no está del todo clara aunque se conoce que desempeña dicha función en la mitocondria. Así, se barajan varias hipótesis, (1) la frataxina sería una proteína que participaría en el sistema de almacenaje del hierro en la mitocondria; (2) otra posible función que podría desempeñar la frataxina es que actuase como transportador de hierro; (3) como tercera posible función, la frataxina estimularía la actividad de la cadena de transporte de electrones activando la formación de ATP; (4) además se ha descrito que la frataxina actuaría como antioxidante mitocondrial, cuya función sería eliminar los productos oxidativos como son las especies reactivas del oxigeno (ROS); o por último (5) la frataxina actuaría como una proteína chaperona para la formación de los centros Fe-S de proteínas mitocondriales. En este trabajo se ha abordado el estudio de la función del gen fh en Drosophila melanogaster empleando la técnica del ARN de interferencia, así como la confirmación de la localización mitocondrial de la frataxina. El sistema de la ARN de interferencia fue complementado con el uso del sistema UAS-GAL4 que permite la interferencia del gen fh en un patrón concreto. En este caso se han realizado estudios a nivel bioquímico de individuos que interfieren el gen fh de forma ubicua. Además estos estudios se realizaron modificando las condiciones de estrés oxidativo. Los resultados obtenidos apoyan el hecho de que, al menos en nuestro modelo, este factor sería importante en el desarrollo de la enfermedad así como que, en estas condiciones de alto estrés oxidativo y con reducción de la proteína frataxina, la aconitasa sería la enzima más sensible. Por otra parte, se ha comparado el patrón de desarrollo embrionario de individuos que sobreexpresaban el gen fh y que expresan el gen humano FXN. Los tejidos que se han comparado son los más afectados en los pacientes con ataxia de Friedreich, y son el sistema nervioso periférico (SNP), el sistema muscular en el cual se incluye el corazón, así como también el sistema nervioso central (SNC). En este estudio hemos observado que se produce una falta de fusión entre algunos músculos del embrión de Drosophila melanogaster,. Además, se ha observado una gran desestructuración de las fibras nerviosas que forman SNP. Por otra parte, no se ha observado ningún defecto ni en el SNC, que concuerda con los resultados obtenidos con la sobreexpresión del propio gen fh, ni en el corazón, el cual sí se veía afectado en el desarrollo de los individuos que sobreexpresaban el gen fh. A nivel bioquímico, tanto la sobreexpresión del gen fh como la sobreexpresión del gen FXN tienen como resultado la reducción de la actividad de la enzima aconitasa. Estos resultados nos permiten afirmar que las funciones de la frataxina humana y la de Drosophila melanogaster están conservadas, apoyando el uso de este organismo como modelo tanto para el estudio de la función de la frataxina. / Friedreich ataxia (FA), the most common form of hereditary ataxia, is caused by a deficit in the mitochondrial protein frataxin. While several hypotheses have been suggested, frataxin function is not well understood. Oxidative stress has been suggested to play a role in the pathophysiology of FA, but this view has been recently questioned, and its link to frataxin is unclear. We report the use of RNA interference (RNAi) to suppress the Drosophila frataxin gene (fh) expression. This model system parallels the situation in FA patients, namely a moderate systemic reduction of frataxin levels compatible with normal embryonic development. Under these conditions, fh-RNAi flies showed a shortened life span, reduced climbing abilities, and enhanced sensitivity to oxidative stress. Under hyperoxia, fh-RNAi flies also showed a dramatic reduction of aconitase activity that seriously impairs the mitochondrial respiration while the activities of SDH, respiratory complex I and II, and indirectly complex III and IV are normal. Remarkably, frataxin overexpression also induced the oxidative-mediated inactivation of mitochondrial aconitase. This work demonstrates, the essential function of frataxin in protecting aconitase from oxidative stress-dependent inactivation in a multicellular organism. Moreover our data support an important role of oxidative stress in the progression of FA and suggest a tissue-dependent sensitivity to frataxin imbalance. We propose that in FA, the oxidative mediated inactivation of aconitase, which occurs normally during the aging process, is enhanced due to the lack of frataxin. Moreover we carried out studies comparing the development between flies overexpressing fh and flies overexpressing the frataxin human gene FXN. We have seen structural abnormalities in the muscular and nervous systems in flies interfering and overexpressing fh in an ubiquitous way or in a tissue-specific patterns (PNS and heart). Flies expressing human frataxin showed the same abnormalities in the PNS although these defects were stronger than those observed for fly frataxin overxpression. However the heart developed normally in the transgenic flies carrying the FXN gene. Concerning the biochemical studies, we have seen significant reduction of the aconitase activity being similar in all scenarios. Moreover, in all cases flies showed reduction of lifespan and defects in behaviour as climbing.

La esquizofrenia es un desorden mental severo, con una incidencia del 1% y una elevada heredabilidad (alrededor del 80%). Por ello, hay un enorme interés en conocer los factores genéticos implicados en la vulnerabilidad a padecer esquizofrenia. Sin embargo, esta enfermedad presenta una herencia poligénica y además un importante número de factores ambientales parecen influir en su aparición. Asimismo, la heterogeneidad clínica también es elevada y esto dificulta el tener un fenotipo bien definido para el estudio genético. Por ello, el estudio de fenotipos más recortados y mejor definidos puede ser de gran utilidad. En el presente trabajo, se han seleccionado nueve genes de interés. Nuestra hipótesis principal es que variaciones en estos genes modulan la vulnerabilidad a padecer esquizofrenia o alguno de sus rasgos característicos, particularmente las alucinaciones auditivas, el deterioro cognitivo y la disfunción emocional. Como objetivo, nos planteamos el estudio de polimorfismos genéticos en varias muestras caso-control y familiares de España, Alemania y Estados Unidos. Se realizaron análisis de asociación caso-control, basados en familias y estudios de asociación con diferentes escalas clínicas. Asimismo, se estudió el impacto de ciertos polimorfismos sobre fenotipos de neuroimagen estructural y funcional. Los resultados más interesantes fueron los siguientes: por una parte, diferentes genes del sistema serotoninérgico (principalmente los genes SLC6A4 y HTR2A) parecían influir en el estado emocional del paciente, así como en la respuesta emocional del paciente a las alucinaciones auditivas. Además, el gen ASPM se asoció con el riesgo de psicosis y con diferentes parámetros cognitivos y de neuroimagen. Otros genes como NOS1, STMN1, PDE4D y PLEKHB1 parecían influir sobre el riesgo de psicosis, así como sobre las puntuaciones obtenidas en diferentes escalas psicopatológicas, si bien en estos casos la significación fue menor. Todos estos resultados permiten proponer un modelo de vulnerabilidad, según el cual ciertos genes tendrían un mayor efecto sobre la vulnerabilidad a sufrir esquizofrenia, mientras que otros genes influirían sobre la severidad de ciertos síntomas. Además, nuestros resultados apoyan la existencia de una vulnerabilidad genética a respuestas emocionales aberrantes, que podría estar modulada por la variación en ciertos genes, tales como el transportador de serotonina. / Schizophrenia is a severe psychotic mental disorder, with a prevalence of around 1% in general population. It is well known that this disease presents a high heritability (around 80%). For this reason, there is a great interest in discovering the genetic factors affecting the risk for schizophrenia. However, due to the polygenic inheritance of this disorder, it is particularly hard to discover schizophrenia-related genes. Moreover, it has been hypothesized that an important number of environmental factors of different nature may affect the vulnerability to schizophrenia. Furthermore, schizophrenia is a clinically heterogeneous disorder and it can be particularly difficult to have a well-defined phenotype for genetic studies. For all these reasons, we consider that it is important to study the neurobiology of schizophrenia as a global entity, but also to complement these studies with other approaches, for example through the use of other alternative phenotypes, such as cognitive impairment, electrophysiological responses or auditory hallucinations, for example. In the present study, different candidate genes were selected. Our main hypothesis is that variations in these nine genes modulate the vulnerability to schizophrenia and some of their most characteristic and important features, particularly auditory hallucinations, cognitive impairment and, finally, the emotional dysfunction associated to schizophrenia. To test this hypothesis, we focused the study on the analysis of genetic polymorphisms (mainly single nucleotide polymorphisms) in three case-control samples from Spain, Germany and United States and a family sample from the United States. All samples were of Caucasian origin. Different analysis were performed, namely case-control association analysis, family-based association analysis (in some cases) and association analysis with clinical measures that corresponded to different psychopathological scales (BPRS, KGV, PANSS and PSYRATS for auditory hallucinations and delusions). Moreover, we also assessed the impact of certain genetic polymorphisms on functional and structural neuroimaging phenotypes, which evaluated both cognitive and emotional aspects. The most interesting results were the following: first, several polymorphisms from serotonergic system genes (mainly SLC6A4 and HTR2A genes, but also TPH2 gene to a lesser extent) appeared to modulate the patient's emotional state, including the emotional response to auditory hallucinations, assessed with clinical scales and neuroimaging techniques. Moreover, the positive selection gene ASPM, involved in neurodevelopmental processes, was associated with the risk for psychosis and with different cognitive and neuroimaging measures in both the Spanish and the American sample. Other genes such as NOS1, STMN1, PDE4D and PLEKHB1 also appeared to influence the risk for psychosis and the scores in some psychopathological scales, although in these cases significance was weaker.All these findings allow us to propose a vulnerability model. According to this model, some genes would have a major effect on the vulnerability to schizophrenia, while other genes would have an effect on the severity to certain symptoms. Regarding the vulnerability to auditory hallucinations, our results also support the existence of a genetic vulnerability to aberrant emotional responses, which could be modulated by the variation in different genes, such as the serotonin transporter gene, among others.

En los materiales carbonáticos marinos del Triásico de la Península Ibérica se han muestreado 23 secciones, que de Norte a Sur son: en la Cordillera Pirenaica, Usseu, Sant Sebastià, Hostalets-Cadí y Alós de Balaguer; en la Cordillera Costero-Catalana, L'Ametlla, Olessa, Rasquera- Benifallet y Tivissa; en la Cordillera Ibérica, Calanda, Tramacastilla Libros, Henarejos, Moya, Bugarra y Montserrat; en la Cordillera Bética, Espejeras, Calasparra, Canara, Arroyo Hurtado, Valdepeñas de Jaén, Salmerón, Boyar y Cabo Cope.En conjunto para los materiales del Triásico de la Península Ibérica se han identificado doce especies. En el Anisiense: Neogondolella basisymetrica Budurov & Stefanov, Neogondolella constricta (Mosher & Clark), Neogondolella cornuta Budurov & Stefanov, Neogondolella excentrica Budurov & Stefanov, Neogondolella longa Budurov & Stefanov, Paragondolella bifurcata Budurov & Stefanov, Paragondolella bulgarica Budurov & Stefanov y Paragondolella hanbulogi Sudar & Budurov. De edad Ladiniense se registran los taxones Sephardiella truempyi (Hirsch), Sephardiella mungoensis (Diebel) y Pseudofurnishius murcianus van den Boogaard. Finalmente, de edad Carniense, Sephardiella cf. mostleri (Kozur).En el Ladiniense de la Península Ibérica, la especie más abundante es Pseudofurnishius murcianus. De esta especie se propone su desarrollo ontogénico y se puede reconstruir su aparato conodontal, que es de tipo septimembrado. El estudio de su variabilidad morfológica nos ha llevado a considerar que P. huddlei van den Boogaard & Simon debe de ser incluida dentro de esa variabilidad y a rechazar las diferentes subespecies de P. murcianus. De Sephardiella mungoensis se ha propuesto un modelo de su desarrollo ontogénico y se ha reconstruido también su aparato conodontal.Ha sido propuesto un mecanismo funcional para diferentes elementos P1. Así, para Neogondolella-Paragondolella se interpreta que realizaban una función de corte, para Pseudofurnishius una función principal de machacamiento del alimento y para Sephardiella se propone una función de corte-desgarramiento y también machacador del alimento.En cuanto a los aspectos tafonómicos, se ha comprobado que existe una preservación diferencial claramente favorable a los elementos P1 frente al resto de multielementos, siendo el elemento P2 el más raro en el registro. El estudio del estado de preservación del material ha permitido observar cinco tipos de alteración tafonómica.Mediante la revisión de cerca de 500 artículos relacionados con conodontos del Pérmico Superior al Triásico Superior se han desarrollado varias bases de datos, que se han utilizado para diferentes discusiones: primero, tras una revisión crítica se han aceptado 184 especies de conodontos como válidas. Segundo, se ha considerado la distribución paleogeográfica de las especies de conodontos en cada piso del Triásico, figurando los principales taxones en distintos paleomapas. Tercero, se han calculado las tasas de especiación, extinción e incremento neto para los distintos pisos del Triásico. El grupo muestra una rápida recuperación en el Triásico Inferior, seguido por una estabilización durante el Triásico Medio. Durante el inicio del Triásico Superior se observa una reducción en la biodiversidad, seguida por una liguera recuperación durante el Noriense. La diversidad del Rhaetiense se reduce rápidamente, extinguiéndose el grupo justo antes del fin del Triásico. / In the Iberian Peninsula Triassic marine strata, twenty-three sections have been studied. Usseu, Sant Sebastià, Hostalets-Cadí and Alós de Balaguer (Pyrenees); L'Ametlla, Olessa, Rasquera- Benifallet and Tivissa (Costero-Catalonian Ranges); Calanda, Tramacastilla Libros, Henarejos, Moya, Bugarra and Montserrat (Iberian Range); Espejeras, Calasparra, Canara, Arroyo Hurtado, Valdepeñas de Jaén, Salmerón, Boyar and Cabo Cope (Betic Range).Twelve species have been identified: Neogondolella basisymmetrica Budurov & Stefanov, Neogondolella constricta (Mosher & Clark), Neogondolella cornuta Budurov & Stefanov, Neogondolella excentrica Budurov & Stefanov, Neogondolella longa Budurov & Stefanov, Paragondolella bifurcata Budurov & Stefanov, Paragondolella bulgarica Budurov & Stefanov, Paragondolella hanbulogi Sudar & Budurov, Sephardiella truempyi (Hirsch), Sephardiella mungoensis (Diebel), Pseudofurnishius murcianus van den Boogaard and Sephardiella cf. mostleri (Kozur).The most common species is Pseudofurnishius murcianus, and we propose a model of its ontogenetic development and reconstruct its septimembrate apparatus. The morphological variability study points out that P. huddlei must be included into its variability and leads to reject the different subspecies of P. murcianus. A model of the ontogenetic development and apparatus recnstruction of Sephardiella mungoensis is also proposed.A functional mechanism is proposed for the P1 element of Neogondolella-Paragondolella (cutting function), Pseudofurnishius (crushing function) and Sephardiella (cut-tearing and crushing function).From a taphonomical point of view a differential preservation of P1 element has been observed, with P2 element being the rarest in the conodont fossil record. Five types of taphonomic alterations have been observed.With the revision of circa 500 Upper Permian to Upper Triassic papers, several databases have been developed and used for discussions. First, after a critical review we have accepted 184 conodont species as valid. Second, the paleogeographical distribution of Triassic conodont species has been summarized, with the main ones represented in different paleomaps. Finally, we have calculated the speciation, extinction and net rates for the Triassic stages. The group show a quick recovery during Early Triassic followed by stabilization during the Middle Triassic. A richness reduction is observed during early Upper Triassic followed by a light Norian recovery. The Rhaetian diversity is quickly reduced and its extinction happened just before the Triassic end.

Nowadays, the concept of homogeneity is one of the fundamental notions in geometry although its meaning must be always specified for the concrete situations. In this thesis, we consider the homogeneity of Riemannian manifolds and the homogeneity of manifolds equipped with affine connections. The first kind of homogeneity means that, for every smooth Riemannian manifold (M, g), its group of isometries I(M) is acting transitively on M. Part I of this thesis fits into this philosophy. Afterwards in Part II, we treat the homogeneity concept of affine connections. This homogeneity means that, for every two points of a manifold, there is an affine diffeomorphism which sends one point into another. In particular, we consider a local version of the homogeneity, that is, we accept that the affine diffeomorphisms are given only locally, i.e., from a neighborhood onto a neighborhood. More specifically, we devote the first Chapter of Part I to make a brief overview of some special kinds of homogeneous Riemannian manifolds which will be of special relevance in Part I and to show how the software MATHEMATICA© becomes useful. For that, we prove that "the three-parameter families of flag manifolds constructed by N. R. Wallach in "Compact homogeneous Riemannian manifols with strictly positive curvature, Ann. of Math. 96 (1972), p. 276-293" are D'Atri spaces if and only if they are naturally reductive spaces. Thus, we improve the previous results given by D'Atri, Nickerson and by Arias-Marco, Naveira.Moreover, in Chapter 2 we obtain the complete 4-dimensional classification of homogeneous spaces of type A. This allows us to prove correctly that every 4-dimensional homogeneous D'Atri space is naturally reductive. Therefore, we correct, complete and improve the results presented by Podestà, Spiro, Bueken and Vanhecke. Chapter 3 is devoted to prove that the curvature operator has constant osculating rank over g.o. spaces. It is mean that a real number 'r' exists such that under some assumptions, the higher order derivatives of the curvature operator from 1 to r are linear independent and from 1 to r + 1 are linear dependent. As a consequence, we also present a method valid on every g.o. space to solve the Jacobi equation. This method extends the method given by Naveira and Tarrío for naturally reductive spaces. In particular, we prove that the Jacobi operator on Kaplan's example (the first known g.o. space that it is not naturally reductive) has constant osculating rank 4. Moreover, we solve the Jacobi equation along a geodesic on Kaplan's example using the new method and the well-known method used by Chavel, Ziller and Berndt,Tricerri, Vanhecke. Therefore, we are able to present the main differences between both methods.In Part II, we classify (locally) all locally homogeneous affine connections with arbitrary torsion on two-dimensional manifolds. Therefore, we generalize the result given by Opozda for torsion-less case. Moreover, from our computations we obtain interesting consequences as the relation between the classifications given for the torsion less-case by Kowalski, Opozda and Vlá ek. In addition, we obtain interesting consequences about flat connections with torsion.In general, the study of these problems sometimes requires a big number of straightforward symbolic computations. In such cases, it is a quite difficult task and a lot of time consuming, try to make correctly this kind of computations by hand. Thus, we try to organize our computations in (possibly) most systematic way so that the whole procedure is not excessively long. Also, because these topics are an ideal subject for a computer-aided research, we are using the software MATHEMATICA©, throughout this work. But we put stress on the full transparency of this procedure. / En esta tesis, se consideran dos tipos bien diferenciados de homogeneidad: la de las variedades riemannianas y la de las variedades afines. El primer tipo de homogeneidad se define como aquel que tiene la propiedad de que el grupo de isometrías actúa transitivamente sobre la variedad. La Parte I, recoge todos los resultados que hemos obtenido en esta dirección. Sin embargo, en la Parte II se presentan los resultados obtenidos sobre conexiones afines homogéneas. Una conexión afín se dice homogénea si para cada par de puntos de la variedad existe un difeomorfismo afín que envía un punto en otro. En este caso, se considera una versión local de homogeneidad. Más específicamente, la Parte I de esta tesis está dedicada a probar que "las familias 3-paramétricas de variedades bandera construidas por Wallach son espacios de D'Atri si y sólo si son espacios naturalmente reductivos". Más aún, en el segundo Capítulo, se obtiene la clasificación completa de los espacios homogéneos de tipo A cuatro dimensionales que permite probar correctamente que todo espacio de D'Atri homogéneo de dimensión cuatro es naturalmente reductivo.Finalmente, en el tercer Capítulo se prueba que en cualquier g.o. espacio el operador curvatura tiene rango osculador constante y, como consecuencia, se presenta un método para resolver la ecuación de Jacobi sobre cualquier g.o. espacio. La Parte II se destina a clasificar (localmente) todas las conexiones afines localmente homogéneas con torsión arbitraria sobre variedades 2-dimensionales. Para finalizar el cuarto Capítulo, se prueban algunos resultados interesantes sobre conexiones llanas con torsión.En general, el estudio de estos problemas requiere a veces, un gran número de cálculos simbólicos aunque sencillos. En dichas ocasiones, realizarlos correctamente a mano es una tarea ardua que requiere mucho tiempo. Por ello, se intenta organizar todos estos cálculos de la manera más sistemática posible de forma que el procedimiento no resulte excesivamente largo. Este tipo de investigación es ideal para utilizar la ayuda del ordenador; así, cuando resulta conveniente, utilizamos la ayuda del software MATHEMATICA para desarrollar con total transparencia el método de resolución que más se adecua a cada uno de los problemas a resolver.

This memoir is devoted to the study of the numerical treatment ofsource terms in hyperbolic conservation laws and systems. In particular,we study two types of situations that are particularly delicate fromthe point of view of their numerical approximation: The case of balancelaws, with the shallow water system as the main example, and the case ofhyperbolic equations with stiff source terms.In this work, we concentrate on the theoretical foundations of highresolutiontotal variation diminishing (TVD) schemes for homogeneousscalar conservation laws, firmly established. We analyze the propertiesof a second order, flux-limited version of the Lax-Wendroff scheme whichavoids oscillations around discontinuities, while preserving steady states.When applied to homogeneous conservation laws, TVD schemes preventan increase in the total variation of the numerical solution, hence guaranteeingthe absence of numerically generated oscillations. They are successfullyimplemented in the form of flux-limiters or slope limiters forscalar conservation laws and systems. Our technique is based on a fluxlimiting procedure applied only to those terms related to the physicalflow derivative/Jacobian. We also extend the technique developed by Chiavassaand Donat to hyperbolic conservation laws with source terms andapply the multilevel technique to the shallow water system.With respect to the numerical treatment of stiff source terms, we takethe simple model problem considered by LeVeque and Yee. We studythe properties of the numerical solution obtained with different numericaltechniques. We are able to identify the delay factor, which is responsiblefor the anomalous speed of propagation of the numerical solutionon coarse grids. The delay is due to the introduction of non equilibrium values through numerical dissipation, and can only be controlledby adequately reducing the spatial resolution of the simulation.Explicit schemes suffer from the same numerical pathology, even after reducingthe time step so that the stability requirements imposed by thefastest scales are satisfied. We study the behavior of Implicit-Explicit(IMEX) numerical techniques, as a tool to obtain high resolution simulationsthat incorporate the stiff source term in an implicit, systematic,manner.

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Objetivos: Comparar los resultados del tratamiento conservador y quirúrgico de la paraplejia traumática en cuanto a recuperación neurológica, frecuencia de complicaciones médicas y postoperatorias, los periodos de hospitalización y la cifosis y el dolor a largo plazo. Como objetivos secundarios, intentamos identificar otros factores clínicos relacionados con los resultados y evaluar los beneficios de los corticoides según NASCIS.Material y Método:Estudio de observación analítico retrospectivo transversal de una cohorte de 223 pacientes con paraplejia traumática, ingresados en el Hospital La Fe de Valencia entre 1988-2002. En una segunda fase prospectiva de seguimiento, los pacientes eran seguidos en el tiempo para valorar la cifosis y el dolor en el foco de fractura.Muestra: fueron incluidos 223 pacientes con lesión medular, mediana de edad: 27 años. Eran 175 varones (78,5%) y 48 mujeres (21,5%). Recibieron tratamiento conservador 115 pacientes (51,8%) y quirúrgico 107 (48,2%).Resultados: La recuperación neurológica fue mayor en grados de ASIA tras el tratamiento conservador (media: 0,45; IC 95%: 0,30-0,60) que en el quirúrgico (0,15; IC 95%: 0,00-0,30) (F=8,014; p=0,005). No hallamos diferencias en la prevalencia de infección urinaria, úlceras por presión, flebotrombosis, neumonía y derrame pleural entre los grupos.No encontramos diferencias en la recuperación neurológica ni en la frecuencia de complicaciones según la administración de corticoides.En el raquis torácico y lumbar, la cirugía consiguió una mayor corrección de la cifosis del foco de fractura. A largo plazo, esa corrección se mantenía a nivel toracolumbar (media: 5,6º; IC95%: 1,5-9,6) en el quirúrgico, mientras empeoraba tras el conservador (media -8,2º; IC95%: -13,9 a -2,4º) (p=0,0005). El 32,6% presentó dolor crónico en el foco de fractura, sin diferencias entre ambos tratamientos.El tiempo de encamamiento fue superior en el tratamiento conservador (55,8 días) que en el quirúrgico (31,7 días) (p=0,0005), aunque no hubo diferencias en la estancia total hospitalaria (p=0,094).La estancia total se asoció positivamente con el número de complicaciones (b=16,5; IC95%: 10,6-22,5; p=0,0005).Conclusiones:1. En nuestro estudio, la lesión neurológica, desde el ingreso hasta el alta hospitalaria no se modificó en el 71,5% de los pacientes, mejoró en el 26,2% y empeoró en el 2,3%. El 95,8% de las lesiones completas al ingreso siguieron completas al alta hospitalaria, mientras que el 51,5% de las incompletas mejoró al menos un grado.2. La recuperación neurológica fue mayor con el tratamiento conservador.3. No hubo diferencias en la frecuencia de complicaciones entre los grupos.4. El dolor fue más frecuente tras el tratamiento quirúrgico. La deformidad fue similar en ambos grupos. 5. La cirugía provocó infección superficial o profunda en un 15% de los intervenidos, rotura o desplazamiento del material de osteosíntesis el 12,1% y se realizó extracción del material de osteosíntesis en 15%.6. El tratamiento quirúrgico consiguió de forma inmediata una mayor corrección de la cifosis del foco de fractura en el raquis torácico y toracolumbar. Esta corrección se mantuvo a largo plazo, a nivel del raquis toracolumbar, aunque no en el raquis torácico. A nivel lumbar bajo, no hubo diferencias entre ambos tratamientos.7. A largo plazo, el tratamiento quirúrgico fue más eficaz que el tratamiento conservador en reducir el acuñamiento vertebral, especialmente en el raquis toracolumbar.8. A largo plazo, no hallamos relación entre la presencia e intensidad del dolor del foco de fractura con el tipo de tratamiento recibido, por lo que no podemos deducir que la intervención quirúrgica fuera capaz de prevenir el dolor.9. La administración de corticoides, no se relacionó con la recuperación neurológica ni con las complicaciones.10. El tratamiento quirúrgico se asoció con un acortamiento del tiempo de encamamiento, aunque no influyó sobre la estancia hospitalaria. / The aim was to compare the conservative versus surgical treatment in patients with traumatic spinal cord injury (SCI) with regard to neurological recovery, medical and postsurgical complications, length of hospital stay, kyphosis and pain. As secondary aims: to identify other clinical factors related to the treatment results and to check the effect of high doses of methylprednisolone.Materials and Method:Transversal retrospective study that include patients with SCI admitted to the SCI Unit of Hospital Universitario La Fe of Valencia (Spain) from 1988 to 2002, and prospective study to evaluate kyphosis and pain at follow-up.A total of 223 SCI patients with thoracic or lumbar fractures were included. Median age: 27 years (range 11-76), 175 males (78.5%) y 48 women (21.5%). In this study, 115 patients (51.8%) received conservative treatment and 107 (48.2%) were operated. Results:Assessment since admission to discharge showed that the grade of the lesion of ASIA did not change in 71.5%, 26.2% improved and the neurological status was deteriorated in 2.3%. The 95.8% of complete lesions on admission were complete at discharge, but 51.5% of incomplete lesions improved at least one grade.The neurological improvement was more important in patients treated conservatively than patients treated surgically, in grades of ASIA (F= 8,014; p=0,005).No differences were found in prevalence of complications between both groups. The complications related to surgery were: 15% of patients suffered superficial or deep wound infection, instrumentation failure in 12.1% and removal of instrumentation was needed in 15% of the cases.Kyphosis was better corrected by surgery, but at long term this correction was only maintained in thoracolumbar spine.Long-term fracture pain was not related to treatment.No differences were found in neurological recovery neither in complications prevalence depending on corticosteroids therapy.Surgery was related to a shorter recumbency time, but no differences were found in length of hospital stay.