La comercialización de fresas en fresco plantea problemas, debido a la elevadavelocidad de respiración que presentan estos frutos, y a su extremada fragilidad, queimpide tratamientos efectivos de limpieza después de la recolección, por lo que esinevitable la presencia de hongos que limitan significativamente el periodo decomercialización.El objetivo de esta tesis es desarrollar un sistema de envasado activo para prolongar lavida útil de fresas silvestres, basado en técnicas de atmósfera modificada, para reducir lacinética de respiración post-recolección y la incorporación de elementos activos paradisminuir la incidencia de hongos durante el almacenamiento y distribución comercial.Se estudia inicialmente los materiales de envase y las condiciones de envasado másadecuadas para conseguir una atmósfera modificada en equilibrio con lasconcentraciones de dióxido de carbono y de oxígeno más adecuadas para laconservación de la fresa. Con esta tecnología de envasado se consigue una cierta mejorade la vida útil del producto, pero no suficiente para mantener los parámetros de calidaddel fruto durante un periodo de comercialización deseable. La alternativa desarrolladaha sido la incorporación en el interior del envase de un sistema de emisión de sustanciascon capacidad antifúngica con el que controlar el crecimiento del hongo Botrytiscinerea y retrasar la velocidad del metabolismo del fruto. Se han estudiado distintasalternativas con sustancias antifúngicas presentes de forma natural en las fresas, asícomo los posibles sistemas de aplicación práctica. Los mejores resultados se hanobtenido con la adición de 2-nonanona, sustancia presente de forma natural en el aromade la fresa, inocua para la salud del consumidor.Así mismo se ha estudiado la modelización de los mecanismos de transporte de masapresentados por este sistema activo, lo cual permite estimar con buena aproximación lasconcentraciones de compuesto volátil finales en el interior del envase con las queretrasar el deterioro metabólico y fúngico del fruto. / The commercialization of wild strawberries is very complex due to their highrespiration rate and extreme fragility which impedes the use of effective cleaningpostharvest treatments to reduce the incidence of fungal growth duringcommercialization period. In this context, the objective of this thesis was thedevelopment of an active packaging system to prolong wild strawberry shelf life, basedon the combination of modified atmosphere techniques to reduce postharvest respirationrate and the introduction of active compounds to slow down fungal decay during storageand commercial distribution.Initially, the packaging materials and conditions were optimized to obtain anequilibrium modified atmosphere (EMAP) with carbon dioxide and oxygenconcentrations suitable to preserve wild strawberries. Although this packagingtechnology resulted in a produce shelf life improvement, it was insufficient to keepquality parameters during the desired commercial period, especially fungal decay.Accordingly, the development of a system to release (within the package) antifungalvolatile compounds which could inhibit the growth of Botrytis cinerea, andsimultaneously contributed to delay metabolic processes was carried out. Severalvolatile compounds which are naturally found in strawberry fruit have been studied asantifungal compounds, from which 2-nonanone presented the best characteristics lowmammalian toxicity, harmless to consumer healthy, and effective antifungal. A plasticsachet containing the compound and an appropriate sorbate was developed, studied andfinally incorporated as a part of the active packaging system. The final packagepermitted to increase the shelf life of wild strawberries, delaying fungal decay andmaintaining the overall quality of the fruits.Finally, a model to simulate the mass transport mechanisms which take place inside thisactive package was successfully designed and will serve to predict the behaviour offuture active packaging developments.

La Fibromialgia (FM) es un reumatismo no articular caracterizado por dolor difuso músculo-esquelético de carácter crónico. Su etiología es desconocida. En la actualidad hay evidencias de alteraciones en la neuromodulación del dolor y asociación de trastornos psicopatológicos a la misma.Objetivos: &#61656; Tipificar la alteración de la neuromodulación mediante la utilización de una técnica neurofisiológica: dependencia del estímulo (DIE) en Potenciales Evocados Auditivos (PEA).&#61656; Determinar el patrón bioquímico de la serotonina plaquetar.&#61656; Valorar la importancia de trastornos depresivos y del sueño en la evolución del proceso y su relación con la gravedad.&#61656; Evaluar la posible utilidad de instrumentos que valoran las dimensiones de la personalidad desde su substrato biológico (TPQ).Material y MétodosEstudio Caso-Control en 31 pacientes diagnosticados de FM según los criterios de la Academia Americana de Reumatologia y 29 controles, pareados por edad y sexo, en los que se descartó la presencia de enfermedad.Se realizó: 1) Valoración clínica del proceso de Fibromialgia.2) Valores de Serotonina hemáticos3) Estudio de PEA en series de intensidad creciente4) Valoración Psicológica:a) Inventario de la depresión de Beck (BDI)b) Cuestionario Tridimensional de la Personalidad (TPQ)c) Subescala del sueño del MMPI5) Análisis estadístico. Los resultados fueron procesados en el SPSS-V8. La significación estadística fue estimada mediante tests paramétricos, como medida de asociación se utilizó la regresión logistica.Resultados.Las amplitudes medias de los PEA en la FM son superiores en todas las intensidades, siendo en la estimulación de mayor rango cuando se observa la máxima diferencia (p=0.003.) La pendiente de la curva de ambos grupos muestra una p=0.027. La dimensión evitación de daño (HA) es la única del TPQ con valores significativamente diferentes entre ambos grupos (p <0,0001). El análisis de regresión logística aplicado, muestra que las variables HA y PEA105 aportan un valor predictivo en la ecuación de -0,27 y de -0,16 respectivamente, con una significación en ambos casos de p<0,001, siendo la OR para la asociación de ambas variables de 6,234. No se encontraron diferencias en los valores plaquetares de serotonina. La Depresión (BDI) muestra diferencias entre casos y controles (p<0001). Se demostró una correlación positiva entre la depresión y la evolución de la enfermedad. Las alteraciones del sueño en la FM se manifestaron desde el inicio del proceso.Discusión.Existen diferencias entre ambos grupos en la capacidad de regulación de los estímulos auditivos a nivel cortical. Estas diferencias se han interpretado, como una deficiente capacidad de regulación cortical de los estímulos auditivos en la FM en relación con un bajo nivel de preactivación del sistema inhibidor, lo que correspondería a una baja actividad serotonérgica central.La dimensión evitación de daño (HA), relacionada con la serotonina, es la única del test de personalidad (TPQ) que muestra valores significativamente diferentes entre ambos grupos (p<0,0001).La correlación existente entre valores elevados de la amplitud del potencial y la dimensión evitación de daño en el FM es muy consistente, con alto valor predictivo de ser paciente. Este hallazgo sugiere la conveniencia de la utilización conjunta de ambas determinaciones en pacientes con FM.Se ha comprobado que la sintomatología depresiva acompaña a la evolución de la enfermedad, indicando una mala adaptación a la misma. En el momento actual el diagnóstico de la FM es clínico. La caracterización de los pacientes con pruebas complementarias objetivas y reproducibles, PEA y test psicológicos, podría suponer una ayuda útil en la valoración de la FM aunque se necesitan más estudios para determinar si los instrumentos referidos pueden contribuir a perfilar mejor el diagnóstico. / Fibromyalgia (FM) is a chronic rheumatism of an unknown aetiology. Alterations have been described in the neuromodulation of pain and in psychopathological disorders.Objectives: &#61656; Classify the neuromodulation alteration by means of Auditive Evoked Potentials (AEP).&#61656; Determine the biochemical pattern of platelet serotonin.&#61656; Evaluate the importance of both depressive and sleep disorders. &#61656; Evaluate the utility of instruments that assess the dimensions of the personality (TPQ).Material and MethodsCase-Control Study. The following were conducted: 1) Clinical assessment of the Fibromyalgia process2) Haematic serotonin values 3) AEP study 4) Psychological assessmenta) Beck Depression Inventory (BDI)b) Three-dimensional Personality Questionnaire (TPQ)c) MMPI sleep subscale5) Statistical analysis Results.The mean AEP ranges in FM are higher in all the intensities, with a greater intensity in stimulation where the maximum difference is observed (p=0.003). Harm avoidance (HA) is the only dimension of the TPQ with significantly different values between both groups (p<0.0001). The applied logistic regression analysis reveals that the HA and PEA105 variables provide a predictive value of -0.27 and of -0.16 respectively in the equation, with a significance of p<0.001 in both cases, where the OR for the association of both variables is 6.234. No differences were found in the blood seratonin values. Differences are seen between cases and controls for Depression (p<0001), and a positive correlation is observed between depression and the evolution of the disease. Sleep disorders in FM were apparent from the start of the process.Discussion.Differences exist between both groups with regards to the regulation capacity of the cortical auditive stimuli. In FM, there would be an inadequate cortical regulation capacity to stimuli in relation with a low level of preactivation of the inhibitor system, which would in turn correspond to a poor central serotonergic activity. This finding, along with the HA dimension in FM, is highly consistent with a high predictive value for the diagnosis of these patients. The combined usage of both determinations could prove useful in assessing this disease.

En la actualidad, se comercializa una amplia variedad de productos para laalimentación infantil. La calidad de las materias primas, los tratamientostecnológicos y las condiciones de almacenamiento pueden modificar el valornutritivo de su fracción lipídica e influir en su seguridad por la formación decompuestos tóxicos.El conocimiento de la calidad de la fracción lipídica de los alimentos infantilespermite evaluar los efectos que el procesado y/o almacenamiento ejercen sobre ellay optimizar los procesos tecnológicos utilizados en su elaboración.El objeto del estudio es conocer la evolución, a lo largo de su vida útil, de lafracción lipídica en papillas de cereales con leche (PCL) listas para el consumodestinadas a la alimentación infantil.Los parámetros analizados son: perfil lipídico, TBARS, compuestos volátiles,esteroles y sus productos de oxidación (SOP). Para evaluar la influencia del tiempoy de la temperatura de almacenamiento en la estabilidad de la fracción lipídica delas muestras, se aplica un diseño factorial completo con 3 factores: a) Tiempo dealmacenamiento (0, 1, 2, 4, 5, 7, 8 y 9 meses), b) Temperatura dealmacenamiento (25, 30 y 37 ºC) y c) Tipo de muestra (A- con miel y B- confrutas).Las conclusiones más relevantes son:- La determinación de TBARS es poco útil para monitorizar el estado de oxidación,ya que, debido a las reacciones entre los distintos componentes de las papillas, seproducen durante el almacenamiento aumentos y disminuciones delmalondialdehido.- El método por SPME-CG, puesto a punto y validado para la determinación decompuestos volátiles, es útil para evaluar la estabilidad de la fracción lipídica defórmulas para lactantes (FL) y PCL.- A lo largo del almacenamiento disminuyen los contenidos de pentanal, hexanal yheptanal de las PCL, mientras que el de pentano aumenta; en ambos casos influyela temperatura. Se propone un modelo predictivo útil para estimar el tiempo dealmacenamiento de las PCL a partir de los contenidos de pentanal y heptanal.- El aumento del contenido de pentano durante el almacenamiento indica que ladegradación lipídica iniciada en el procesado continúa. Su determinación puedeusarse para evaluar la oxidación de las PCL.- El hexanal es el compuesto volátil mayoritario de PCL y FL. El mayor contenido dehexanal de las FL puede atribuirse a su menor actividad del agua y su mayorcontenido de grasa (25%).- Las PCL tienen un contenido de esteroles de 6.4%, de los cuales el 5.1% sonfitosteroles. El &#946;-sitosterol es el mayoritario (3.4%), seguido del campesterol(1.2%); estigmasterol y brassicasterol son menos abundantes.- Se han detectado y cuantificado un total de 22 compuestos distintos procedentesde la oxidación de esteroles, siendo mayoritario el 7-cetositosterol. Elalmacenamiento no influye en los contenidos de esteroles oxidados, a excepción delepoxicampesterol y el sitostanotriol.- Las diferencias obtenidas entre los SOP, con respecto a los esteroles deprocedencia, indican el distinto grado de oxidación de la grasa de la leche y losaceites vegetales; estas diferencias pueden atribuirse a las distintas condiciones aque han sido sometidos durante su procesado.Como conclusión general del estudio realizado se señala que durante la vida útil delas PCL, el grado de oxidación de los ácidos grasos y de los esteroles es bajo. Sinembargo, los potenciales efectos negativos para la salud de los productos de oxidación lipídica hacen necesario su control. Es de destacar la gran influencia queejercen la calidad de las materias primas y el proceso de elaboración sobre elestado de la grasa del producto final, pues sus efectos son superiores a los delalmacenamiento. / The quality of raw materials, technological treatments and storage conditions ofproducts for infant feeding can modify the nutritional value of their lipid fractionand affect their safety due to formation of toxic compounds.The objective is to know the evolution of the lipid fraction in cereals and milk-basedready-to-eat foodstuffs for infant feeding (MCF) throughout their shelf-life.The parameters analysed are: fatty acid profile, TBARS, volatile compounds, sterolsand their oxidation products (SOP). In order to evaluate the influence of storagetime and temperature, a three-factor design is applied: Storage time (0-9 months),storage temperature (25, 30 and 37 ºC) and kind of sample (honey and fruits).The most relevant conclusions are:- TBARS determination is not useful for monitoring the oxidation stage, due toreactions between the different components of the MCF, increases and decreases onMDA contents are produced.- The SPME-GC method, developed and optimized, for the determination of volatilecompounds, is useful to evaluate the stability of the lipid fraction.- Pentanal, hexanal and heptanal contents decrease through storage, whereaspentane content increases. A predictive model useful for estimating the storagetime of the MCF from pentanal and heptanal contents is proposed.- The increase in pentane content throughout storage points out that lipid oxidationinitiated during processing continues. Its determination can be used in order toevaluate the oxidation in MCF.- The sterol content of MCF is 6.4%, from which a 5.1% are phytosterols. &#946;-Sitosterol is the most representative, followed by campesterol, stigmasterol andbrassicasterol.- A total of 22 different SOP have been identified and quantified, being the 7-ketositosterol the most abundant.- The differences obtained between SOP, with respect to the original sterols,indicate the different oxidation level of milk and vegetable oils; these differencesmay be attributed to the quality of the raw materials and different conditionsapplied during processing.As a final conclusion it can be stated that during the shelf-life of MCF, fatty acidsand sterols show a low oxidation pattern. However, the potential negative healtheffects of the lipid oxidation products confirm the need of their control.

El estudio de la categorización y de la identificación perceptiva puede dividirse en dos grandes áreas según el tipo de estímulo empleado: categorización unidimensional y multidimensional. Desde ambas perspectivas se han desarrollado diferentes modelos que no suelen ponerse a prueba utilizando tipos de estímulos del otro enfoque. De esta forma, los modelos o teorías multidimensionales pocas veces se comprueba su validez empleando estímulos unidimensionales. Por otra parte, cuando se comparan modelos dentro de una misma perspectiva, suelen presentar un elevado grado de ajuste por lo que aceptar uno u otro depende en ocasiones de criterios vagos. Por ejemplo, desde el estudio de la categorización multidimensional los pronósticos realizados por la teoría de ejemplares y de límites son prácticamente iguales. Por otra parte, estos modelos pueden presentar poca validez externa debido a la poca variación en el número de estímulos que presentan en los experimentos. El objetivo de esta investigación es analizar cómo ocurre la categorización humana contrastando los supuestos teóricos contradictorios que defienden los principales paradigmas.A partir de una revisión critica de los conceptos utilizados en esta área de estudio, se formula un modelo basado en un concepto fundamental, implícito en la mayoría de las teorías tanto multidimensionales como unidimensionales: el orden. A partir del orden de los estímulos puede establecerse una comparación entre estímulos en una o varias características, lo que conlleva la similitud. Este orden implica, además, una posición de los estímulos en un continuo. A partir de este orden y de las características de las categorías presentadas, una persona puede establecer a qué categoría pertenecerá un estímulo considerando que ese estímulo se situará dentro o fuera de la que denominamos zona de incertidumbre, es decir, un segmento del continuo en el que no es posible conocer con certeza una categoría.La cuestión fundamental es si se pueden aprender categorías nunca vistas anteriormente ya que probar este hecho contradice el implícito modelo de memoria a largo plazo que comparten las principales teorías.Se realizaron 5 experimentos, en los que participaron 75 estudiantes universitarios, con los siguientes objetivos generales: (1) comprobar la discriminabilidad de los estímulos presentados; (2) comprobar que los participantes categorizaban correctamente conjuntos de estímulos no percibidos anteriormente; (3) constatar que se reconocía una nueva categoría de la que no se había visto ningún estímulos. En todos los experimentos se contrastaron las predicciones de las distintas teorías.El resultado más importante del trabajo es que es posible aprender una categoría de la cual no se ha percibido ninguno de sus estímulos y que se pueden categorizar infinidad de estímulos. Estos resultados indican que la categorización puede explicarse, satisfactoriamente, a partir del el orden de los estímulos ya que el modelo de memoria a largo plazo no puede explicar la categorización de un estímulo no percibido anteriormente. / The main purpose of this investigation was to analyze the mechanisms of the human categorization contrasting the theoretical basis of the main paradigms.The study of the categorization and perceptive identification can be divided in two areas according to the type of stimulus employed: unidimensional and multidimensional categorization. Each perspective has developed different models with its own set of stimuli, normally paying little attention to the set of stimuli developed under other theoretical framework, and, for example, only a few papers have analysed the validity of the multidimensional models of categorization using unidimensional stimuli. On the other hand, when models from the same theroretical perspective are compared, an usually high adjustment among them has been found, but sometimes final selection of the right model is based in weak reasonings. This study start from a thoroughful revision of the concepts used in this area of knowledge. Using the preexisting theoretical and empirical framerwok as basis, a new model is formulated. The model is based on a fundamental concept implicit in most of the multidimensional or unidimensional theories: the order.A central point of the model is the investigation about the possibility that no previously perceived categories can be effectively learned. If so, this finding would be contradictory with the existence of a long term memory which is an essential element in the main theories that explain human categorization. In this context, five experiments were carried out with the following objectives: (1) to evaluate the discriminability of the set of stimuli; (2) to check if participants were able to classify new stimuli in a category not learned previously; (3) to verify that a new category was recognized by the participants that had not exposed to any stimuli.Finally, the fitting of experimental results to predictions of the different theories was analysed and discussed.

Zoonosis causada por bacterias del género Borrelia. por la transmisiónaccidental por garrapatas infectadas. El género Borrelia. pertenece a la familiaSpirochateaceae, y son 4 las causales de la borreliosis de Lyme, asociadas en elcomplejo Borrelia burgdorferi sensu lato ( B. burgdorferi sensu stricto,B. afzelii, B.garinii y B. Valaisiana) La adherencia de 48 horas es el mínimo exigido, para lainoculación de Borrelia burgdorferi sensu latoDiagnóstico de borreliosis de Lyme: Diagnóstico directo a partir dediferentes muestras clínicas al observarse fácilmente empleando colorantesconvencionales, Cultivo enmedio de BSK, técnicas de amplificación y la detecciónmediante sondas de ADN específico.En el diagnóstico indirecto se emplean como métodos de referencia, elenzimoinmunoanálisis como prueba de cribado y la inmunotransferencia para laconfirmación.Objetivos:1.- Obtener y caracterizar ixódidos procedentes de distintas áreas de laprovincia de Valencia.2.- Determinar la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato en los ixódidosobtenidos.3.- Seleccionar muestras clínicas con resultado en la prueba de cribado EIApositivo.4.- Analizar dichas muestras mediante otras pruebas específicas yconfirmatorias así como evaluar la presencia de reactividad cruzada con otros procesosnosológicos.5.- Estudiar las características clínicas y evolución de los pacientes conmarcadores serológicos sugestivos de borreliosis de Lyme así como evaluar susignificación.Materiales y métodos. Obtención y caracterización de ixódidos, se procedió ala detección de Borrelia burgdorferi mediante estudio microscopico, cultivo y PCR. Laselección de muestras clínicas, se realizó mediante el método de cribado EIA, y elestudio de reactividad cruzada y su confirmación mediante pruebas específicas. Y porúltimo, se realizó el análisis de signos y síntomas clínicos y su relación con lasresultados serológicos. Se realizaron macerados y disecciones a los que se practicó unestudio microscópico y cultivo en BSK II.Ya en el 2º periodo, se procedió a la detección de B. Burgdorferi mediantetécnicas de PCR. anidado, utilizando 2 parejas de iniciadores del gen de Osp A, segúnel método de Guttman y colaboradores, que permiten obtener en la 2ª amplificación,un fragmento de 345 pares de bases. Para el gen de la flagelina, utilizamos igualmene2 parejas de iniciadores del gen de la flagelina, según el método de Lebech ycolaboradores. que permiten obtener en la 2ª amplificación, un fragmento de 275pares de bases. Para el estudio serológico, se utilizó en primer lugar un método decribado EIA IgM-IgG Sistema VIDAS LYT (de bioMèrieux) y un métodocomplementario IFI Lyme Spot (también de bioMèrieux) que determina anticuerpos declase IgM e IgG por separado. Como método confirmatorio, se utilizó lainmunotransferencia B. burgdorferi cepa B31 (de MarDx Diagnostic) y · B. gariniigenogrupo 2 (de Gull Laboratories). La reactividad serológica cruzada, se llevó a cabofrente a Treponema pallidum, Coxiella burnetii, Rickettsia conori y Brucella mellitensis,virus de Epstein-Barr, Citomegalovirus y virus de la inmunodeficiencia humana. Lapoblación de pacientes se correspondió con los atendidos en el área del HGUVConclusiones:1.-La colección e identificación de garrapatas ixódidas procedentes dediferentes áreas de la provincia de Valencia, ha revelado la existencia de cincogéneros, con siete especies distintas. Ninguno de ellos, clasificado como Ixodes ricinus,reconocido principal vector de la borreliosis de Lyme.2.-En ninguna de las garrapatas estudiadas se ha identificado una espiroquetacompatible con Borrelia burdorferi sl. u otra especie de Borrelia asociada a un cuadrode borreliosis de Lyme.3.-Consideramos que el método más adecuado para el estudio microbiológicoen los ixódidos, es la disección de las garrapatas con extracción de sus estructurasglandulares e intestinos medios. El uso de ejemplares macerados para detección pormétodos moleculares es desaconsejado por la probable inhibición de la amplificacióndel ADN específico.4.-El método de enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado, selecciona unapoblación de pacientes con características clínicas muy variables, pero también ungrupo de pacientes con manifestaciones características y con una concreta evoluciónclínica, que sustentan la existencia de casos probables de borreliosis de Lyme.5.-La titulación de los anticuerpos específicos de clase IgM e IgG medianteinmunofluorescencia y los criterios establecidos para la interpretación de las pruebasconfirmatorias de inmunotransferencia con antígenos de B. burgdorferi y B. garinii, semuestran escasamente rentables en nuestro medio, ya que no permiten confirmar nidescartar la existencia de la enfermedad en el grupo de pacientes estudiados.Todo lo cual nos permite considerar la necesidad de un mejor estudioepidemiológico y clínico de los casos sospechosos de borreliosis de Lyme, yparticularmente el desarrollo de criterios de diagnóstico microbiológico que se adecuenal perfil de la enfermedad en nuestra área. / Zoonosis caused by bacteria of the genre Borrelia. by the accidentaltransmission by infected ticks. The genre Borrelia. concerns to the familySpirochateaceae, and they are 4 the grounds of Lyme's borreliosis, associated in thecomplex broad Borrelia burgdorferi sensu (B. burgdorferi sensu stricto, B. afzelii, B.garinii and B. Valaisiana) The adherence of 48 hours is the demanded minimum, forthe inoculation of Borrelia burgdorferi sensu lato.Diagnostic of the Lyme borreliosis: Direcly diasnostic by detection of spirochaetawith the uses of the clinical specimens (skin biopsies, CSF semple, peripheral blood,etc.) of patients whith conventional laboratory tintions is relative easy to reconized.Culture of the organism in BSK medium, molecular characterization of Borrelia isolatesby gene sequences from DNAs amplified (flagellin (flaB), and outer surface protein A(ospA)) from ticks or patiens confirmed the presence of several Borrelia species.In the indirect diagnosis use as methods of reference, theenzimoinmunoanálisis as test of screening and the inmunotransferencia for theconfirmationObjetivos:1.- Recolection and caracterization of ixodid ticks from diferent areas ofValencia countri.2.- Investigated la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato in these ixodeticks recolected.,3.-To select clinical samples with result in the test of screening positive EIA.4.-To analyze the above mentioned samples by means of other specific andconfirmatory tests(proofs) as well as to evaluate the presence of cross-reactivity withother processes nosológicos.5.-To study the clinical characteristics and evolution of the patients withserologic results suggestive of borreliosis of Lyme as well as to evaluate hissignificance.Materials and methods: Obtaining and characterization of ixodids, one proceeded tothe detection of Borrelia burgdorferi by means of microscopic study, culture and PCR.The selection of clinical samples, it was realized by means of the method EIA, and thestudy of crossed reactivity and his confirmation by means of specific tests. And finally,there was realized the analysis of signs and clinical symptoms and his relation withresults serológicos. There were realized softened and dissections those who amicroscopic study was practised and culture in BSK II.In the 2º periode, we made a molecular characterization of B. Burgdorferi fromticks by gene sequences DNAs amplified (nexteed PCR using 2 primers of gen of outersurface protein A (OspA), by el Guttman' metode et all that permeted the obtention inthe 2ª amplification, a fragment of 345 pairs of bases. By the flagelina, gene, weusing too 2 pairs of primers of the flagelin gene, by the Lebech metode et al. Thatallow to obtain in 2 ª amplification, a fragment of 275 bases pair. For the serologicstudy, there was in use first a method of sifted EIA IgM-IgG System VIDAS LYT (ofbioMèrieux) and a complementary method IFI Lyme Spot (also of bioMèrieux) thatdetermines antibodies of class IgM and IgG separately. As confirmatory method, therewas in use the inmunotransferencia B. burgdorferi B31 (of MarDx Diagnostic) and B.garinii genogrupo 2 (of Gull Laboratories).The serologic cross reactivity, whith Treponema pallidum, Coxiella burnetii,Rickettsia conori and Brucella mellitensis, Epstein-Barr virus, Citomegalovirus virus andAIDS virus. The population of patients corresponded(fitted) with the attended ones inthe area of the HGUV.Conclusiones:1.-The collection and identification of ixodid ticks proceeding from differentareas of the province of Valencia, it has revealed the existence of five genres, withseven different species. None of them, classified as Ixodes ricinus, recognized principalvector of Lyme's borreliosis.32.-En none of the studied ticks has been identified an espiroqueta compatiblewith Borrelia burdorferi sl. or another Borrelia's species associated with borreliosis ofLyme disease.3.-We considered that the method most adapted for the microbiological study inthe ixodid, is the ticks dissection with extraction of its glandular structures and mediumintestines. The use of specimens softened for detection for molecular methods isdissuaded by the probable inhibition of the amplification of the specific ADN4.-The enzimoinmunoanálisis method of as screening test, a population ofpatients selects with clinical very changeable characteristics, but also a group ofpatients with typical manifestations and with a concrete clinical evolution, which theysustain the existence of probable cases of borreliosis of Lyme.5.-La qualifications of the specific antibodies of class IgM and IgG by means ofinmunofluorescencia and the criteria established for the interpretation of theconfirmatory tests of inmunotransferencia with B. burgdorferi antigens and B. garinii,prove to be scantily profitable in our way, since they allow neither confirm nor todiscard the existence of the disease in the group of studied patients.Allows to consider the need of a better epidemiological and clinical study of thesuspicious cases of borreliosis of Lyme, and particularly the development of criteria ofmicrobiological diagnosis us that they serve to the profile of the disease in our area.

Rotavirus es el principal agente causante de gastroenteritis viral en niños y animales jóvenes en todo el mundo. Una de las principales proteínas de rotavirus es la glicoproteína no estructural 4 (NSP4) que juega un papel crucial tanto en el ciclo replicativo de rotavirus, actuando como receptor de partículas inmaduras en el retículo endoplasmático, como en la fisiopatología de rotavirus, siendo la primera enterotoxina de origen vírico descrita hasta el momento. El objetivo de la presente tesis fue clonar y producir la glicoproteína NSP4 de diferentes cepas humanas y animales de rotavirus para así poder realizar estudios inmunogénicos tales como la caracterización de epitopos presentes en la proteína y la respuesta inmune que esta proteína despierta tras la infección por rotavirus. Así mismo nos planteábamos estudiar la capacidad que poseen tanto la infección por rotavirus como la proteína NSP4 de producir óxido nítrico (ON) tanto "in vivo" como "in vitro" y la posible implicación del ON en la fisiopatología de rotavirus. Se utilizó el sistema de expresión de baculovirus en células de insecto para la producción y purificación de la proteína NSP4 de diferentes cepas de rotavirus humanas y de animales en forma biológicamente activa. Experimentos de inmunización de ratones demostraron que los anticuerpos producidos frente a la proteína NSP4 reconocen principalmente el fragmento carboxi-terminal de la proteína (aminoácidos 114 a 175), por lo que esta región es inmunodominante. En la presente tesis se utilizó la tecnología de "phage display" para producir anticuerpos monoclonales de simple cadena (scFv) frente a la proteína NSP4. Esta técnica nos permitió aislar scFvs frente a regiones no inmunodominantes de la proteína NSP4.Los estudios realizados con sueros de niños convalecientes de una infección por rotavirus muestran que la proteína NSP4 provoca una respuesta inmune humoral tras la infección natural por rotavirus en niños, constituída por anticuerpos séricos de clase IgG y que esta respuesta no parece ser de larga duración, según los resultados obtenidos con sueros de niños y adultos sanos. Proteínas NSP4 procedentes de dos diferentes genotipos (A y B) fueron utilizadas para estudiar la reactividad cruzada de los anticuerpos frente a NSP4. Los resultados obtenidos muestran que los anticuerpos IgG séricos desarrollados frente a NSP4 en niños con gastroenteritis aguda por rotavirus presentan en el 40% de los casos estudiados reactividad cruzada frente a más de un genotipo de dicha proteína, por lo que este reconocimento de los genotipos A y B de NSP4 no es siempre heterotípico. Los experimentos realizados con células epiteliales humanas HT-29 "in vitro" muestran que la proteína NSP4 provoca un incremento de la secreción de ON en este tipo celular. Este incremento ocurre de forma paralela al incremento de calcio intracelular observado en la misma línea celular en respuesta a NSP4, indicando una posible participación de la enzima óxido nítrico sintasa constitutiva (cNOS). Por último los experimentos realizados "in vivo" en el modelo murino, así como en muestras de orina procedentes de niños con gastroenteritis por rotavirus muestran que las infecciones por rotavirus en ratones Balb/c provocan un aumento en la concentración de los productos derivados del ON en la orina de los animales infectados, con la participación de la enzima óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) en el modelo murino y que este incremento se observa también en la orina de niños con gastroenteritis por rotavirus. / The baculovirus expression system in insect cells was utilized to produce and purify the biologically active form of the NSP4 protein from rotavirus strains isolated from different animal and human strains. After the immunization of mice with the different ourified NSP4 proteins the super-immune sera obtained from NSP4 immunized mice, strongly recognize the carboxi-end of the protein (aminoacids 114 to 175), being indicative of the immunodominance of this region.One of the objebtives of this thesis was to obtain monoclonal antibodies, using the phage display technique that showed to be a useful tool in producing antibodies that recognize different epitopes in the NSP4 protein, thus being able to conduct inhibitory studies to identify biological activity. One interesting result when using this technique was that the phage display technique allowed us for the isolation of single chain monoclonal antibodies against non-immunodominant regions of NSP4.We also present data on the immunogenicity of the NSP4 protein in natural rotavirus infections in humans. Our results show that the NSP4 protein elicits a humoral immune response in children that had been naturally infected by rotavirus. The IgG serical antibodies developed against the NSP4 in children suffering acute rotavirus gastroenteritis, present cross reactivity against more than one genotype of the protein in 40% of the studied cases, indicating that the recognition of A and B NSP4 genotypes is not always heterotypic.Finally we studied the possible role of the nitric oxide (NO) in rotavirus pathophysiology. The NSP4 protein produced an increase in NO secretion in cultured HT-29 human epithelial cells. This increase occurred in parallel to the intracellular calcium increase previously observed in the same cell line in response to the NSP4.The rotaviral infections in Blab/c mice produced an increase in the concentration of the nitric oxide derived products in the urine of the infected animals, through the induction of the inducible nitric oxide enzyme (iNOS) in the murine model. This increase was also observed in the urine of children suffering acute rotaviral gastroenteritis.

El presente trabajo aborda la ecología de los productores primarios en varios lagos someros mediterráneos, a través de dos estudios experimentales en mesocosmos in situ con enriquecimiento de nutrientes y distintas densidades de peces planctívoros, junto a un estudio de la ecología del lago de la Albufera de Valencia. Los resultados muestran que: 1) La ecología de los lagos someros estudiados se asemeja más a la ecología de los lagos tropicales y subtropicales que a la descrita para los lagos someros del norte y centro de Europa. 2) El desvío de nutrientes en el lago de la Albufera fue insuficiente para conseguir un cambio de estado trófico, pero condujo a la reducción de la biomasa del fitoplancton y a la aparición de varias fases claras. 3) En los estudios experimentales con mesocosmos, las concentraciones de nutrientes influyeron más que la densidad de peces planctívoros sobre la biomasa del fitoplancton, epifiton y macrófitos sumergidos. 4) El crecimiento del epifiton fue exponencial y máximo entre concentraciones de 0,1-0,35 mg L-1 de fósforo, mientras que el fitoplancton tuvo un incremento lineal y dominó por encima de 0,35 mg L-1 de fósforo y la biomasa de las carófitas fue mayor con valores por debajo de 0,05 mg L-1. 5) La ausencia de los macrófitos sumergidos favoreció la liberación de nutrientes desde el sedimento perpetuando biomasas algales elevadas y un estado de turbidez. 6) Las cianobacterias dominaron bajo un amplio rango de concentraciones de nutrientes. La densidad de peces planctívoros y la depredación debida al zooplancton tuvieron un papel selectivo de su tamaño. 7) Los modelos de dominancia de cianobacterias propuestos por Gragnani et al. (1999) y Scheffer et al. (1997), no se cumplen para los lagos someros estudiados. 8) Se propone un modelo alternativo que explica la alternancia observada de dominancia entre cianobacterias croococales y oscilatoriales, en base a sus requerimientos de nutrientes, luz, sensibilidad a la depredación por el zooplancton y condiciones de estabilidad de la columna de agua. 9) Las comunidades del fitoplancton y epifiton estuvieron estrechamente vinculadas y su composición tendió a homogeneizarse al aumentar la concentración de nutrientes. 10) El reclutamiento de las algas desde el sedimento fue mayor que desde el perifiton y se incrementó con las concentraciones de nutrientes. 11) El reclutamiento de las cianobacterias fue un factor importante que retroalimentó y estabilizó sus poblaciones y dominancia en el fitoplancton. 12) La visión de un espacio continuo y heterogéneo (multihábitats) entre el bentos y plancton en los lagos someros, puede ayudar a mejorar el conocimiento del ticoplancton que caracteriza a estos sistemas. 13) La diversidad de las comunidades del epifiton y del fitoplancton se redujo frente a un incremento de las concentraciones de nutrientes y peces planctívoros, especialmente en ausencia de plantas sumergidas. 14) Los grupos funcionales propuestos para el fitoplancton por Reynolds et al. (2002), ofrecen una valiosa y complementaria información para entender la ecología del fitoplancton en los lagos someros de la zona mediterránea, aunque se sugieren algunas modificaciones de algunos de los grupos funcionales originalmente descritos. 15) La recuperación y conservación de los lagos someros mediterráneos implica una reducción importante de la carga externa de nutrientes y la adopción de medidas complementarias que potencien un control interno de la carga de nutrientes dentro de la red trófica para recuperar su calidad ecológica y biodiversidad. / The present work studies the ecology of primary producers in some Spanish shallow Mediterranean lakes. The results from two in situ mesocosms experiments with additions of different nutrient concentrations and planktivorous fish densities, together with those on the ecology of the Albufera Lake, concluded that: 1) Nutrient diversion in the Albufera Lake did not shift the present turbid state, but reduced its phytoplankton biomass and produced some short-term clear water phases. 2) The in situ mesocosm experiments showed that nutrient concentrations influenced more than densities of planktivorous fish, biomasses of phytoplankton, epiphyton and submerged macrophytes. 3) Epiphyton had an exponential and maximum growth at phosphorus levels between 0.1 and 0.35 mg L-1, while phytoplankton increased linearly and dominated with values over 0.35 mg L-1, and characean biomass was higher at levels lower than 0.05 mg L-1. 4) Absence of submerged macrophytes favoured nutrient release from the sediment stabilizing a high phytoplankton biomass and the turbid state. 5) Cyanobacteria dominated in a wide range of nutrient levels, while planktivorous fish and zooplankton affected size selection of the species. 6) An alternative model, from those proposed by Gragnani et al. (1999) and Scheffer et al. (1997), is shown to explain the dominance of cyanobacteria and the observed replacement between chroococcal and oscillatorial species. 7) Phytoplankton and epiphyton communities were closely related and their species composition became more similar at increasing nutrient levels. 8) Algae recruitment from the sediment into the phytoplankton was higher than that from the periphyton and increased with nutrient levels. Cyanobacteria were significantly recruited. 9) Diversity of epiphyton and phytoplankton was reduced at increasing nutrient levels and planktivorous fish densities, especially in absence of submerged plants. 10) Several changes are suggested to define some of the functional groups of the phytoplankton originally proposed by Reynolds et al. (2002). 11) The restoration and conservation of shallow Mediterranean lakes implies a severe reduction of the external nutrient loading and the use of complementary measures that may enhance the internal nutrient control within the food web, for recovering their ecological quality and biodiversity.

El género Aeromonas con una amplia distribución en medios acuáticos, principalmente dulciacuícolas, incluye bacilos Gram negativos, oxidasa-positivos, heterótrofos y anaerobios facultativos. Su identificación durante las últimas décadas ha sido muy controvertida entre otros por la aparente incoherencia que se ha apreciado entre genotipo y genotipo que ha originado que los términos fenospecie y genospecie se usen como categorías independientes en la clasificación de la cepas de Aeromonas móviles. Este trabajo estudia extensamente las especies móviles y mesófilas, descritas en el género Aeromonas, utilizando la caracterización fenotìpica y el análisis numérico de los perfiles fenotípicos presentes en las cepas, además del estudio genotípico mediante hibridación DNA-DNA. Hemos obtenido que la taxonomía fenotípica es una buena herramienta para delimitar e identificar las especies de Aeromonas móviles, por la excelente correlación entre los grupos definidos según nuestra metodología y los datos genotípicos y filogenéticos disponibles para dichas cepas como es el caso de A. jandaei, A. sobria, A. ichthiosmia, A. allosaccharophila, A. trota, A. hydrophila, A.caviae, A. encheleia, A. eucrenophila, A. media, A. schubertii y A. salmonicida. Proponemos una tabla de diagnóstico para la diferenciación de la mayoría de las especies de Aeromonas descritas, basada en 35 pruebas bioquímicas, entre las que destacan por su valor resolutivo, las siguientes: producción de H2S a partir de cisteína, oxidación de gluconato, ácido de celobiosa y glicerol, y utilización de L-serina y de L-lactato. El estudio de taxonomía numérica fenotípica realizado y los experimentos de hibridación DNA-DNA efectuados utilizando como referencia, entre otras, la cepa tipo de la especie A. jandaei han confirmado la existencia en este taxón de cepas de origen ambiental y de ámbito veterinario, las cuales presentan la capacidad de producir ácido a partir de sacarosa, aspectos todos ellos novedosos en cuanto a la descripción original de la especie A. jandaei. Se propone la enmienda de la descripción original de la especie A. jandaei efectuada por Carnahan y col. en el año 1992, para así incluir estas cepas sacarosa-positivas en dicha especie. En la descripción enmendada destacan, por ser recogidos por primera vez, la composición en bases guanina-citosina del DNA de la especie A. jandaei la cual oscila entre 58,1-61,1mol%. / The genus Aeromonas comprises Gram-negative, oxidase- and catalase-positive, heterotrophic, non-halophilic and facultative anaerobic bacilli which are widely distributed in natural waters. There is strong evidence for the role of Aeromonas as aetiological agents of a variety of systemic and localized diseases in poiquilothermic animals for the species A. salmonicida, A. hydrophila and A. jandaei. Moreover, during the last 15 years Aeromonas has been increasingly recognized as a primary, opportunist disease agent in humans, and at least six new Aeromonas species were originally isolated from clinical samples.This study was undertaken to cluster and identify a large collection of Aeromonas strains. Numerical taxonomy was used to analyze phenotypic data obtained on 54 new isolates from different sources 99 type and reference strains. Each was tested for 121 characters but only the data for 71 were analyzed using the "SSM" and "SJ" coefficients, and the UPGMA clustering algorithm. At SJ values of &#8805; 81.6% the strains clustered into 22 phenons which were identified as A. jandaei, A. veronii biogroup veronii, A. sobria, A. ichthiosmia, A. allosaccharophila, A. trota, A. hydrophila, A.caviae, A. encheleia, A. eucrenophila, A. media, A. schubertii y A. salmonicida. A good correlation was generally observed among this phenotypic clustering and previous genomic and phylogenetic data. Three new phenotypic groups were found which may correspond to new Aeromonas species or biotypes. DNA relatedness between strains grouped in the A. jandaei cluster and A. jandaei CECT 4228T ranged from 70 to 100 %, but was below 50 % when DNAs from A. veronii biogroup sobria CECT 4835, A. veronii biogroup veronii CECT 4257T and A. ichthiosmia CECT 4486T were used. In addition, DNA relatedness between peripheral A. veronii biogroup sobria strains and the species A. jandaei (CECT 4228T), A. veronii (CECT 4257T, CECT 4835) and A. ichthiosmia (CECT 4486T) was always below 54 %, as it was between the species A. ichthiosmia (CECT 4486T) and A. veronii (CECT 4257T, CECT 4835). Emendation of A. jandaei is proposed; this taxon now includes sucrose-positive clinical and environmental strains as well as environmental isolates that are pathogenic for fish and humans. The DNA G+C content of A. jandaei is also reported for the first time; it ranges from 58·1 to 61·1 mol%. The DNA relatedness data support the classification of peripheral reference strains of A. veronii biogroup sobria outside this taxon, indicating that biogroup sobria requires further revision.

This paleolimnological research work was focused on the analysis of the temporal variability of the primary producers community of two close karstic lakes, La Cruz and Lagunillo del Tejo (Cuenca, Spain). Photosynthetic pigments preserved in lake sediments were considered as the most suitable biomarker because of their taxonomic specifity and the accurate understanding of the transference from the water column into sedimentary signal by means of an experimental study about the sedimentation processes carried out over three annual cycles in Lake La Cruz. The multidimensional statistical analysis of the pigments stratigraphic profiles showed the site specific responses to different forcing factors over the last centuries. The detailed analysis of the sedimentary signal indicates that the lake-level changes associated to regional hydroclimatic variability have played a relevant role on the composition of the primary producers commnunity in Lagunillo del Tejo, whereas solar variability has pointed out as forcing factor of the inferred changes of Lake La Cruz primary production, which was characterised by a pigment compositional stability. On the other hand the annually laminated sediment of Lake La Cruz have been shown as an excellent quantitative climatic proxy; calibration analysis of calcite laminae thickness indicated a highly significant correlation with winter rainfall. Winter rainfall anomalies are, in turn, highly correlated with the phase of North Atlantic Oscillation (NAO). Given this strong climatic relationship, an annual winter rainfall reconstruction for the period 1589 A.D. to present was performed. The dominance of nonstationary component at high frecuencies of the climate signal over the last 420 years indicates that the connection between winter rainfall and the NAO is not stable over time and suggest that different patterns, not only NAO, have played a role in determining rainfall variability. / Este estudio paleolimnológico se centra en el análisis de la variabilidad temporal de la comunidad de productores primarios de dos lagos próximos, la Laguna de La Cruz y el Lagunillo del Tejo (Cuenca, España). Se consideró que los pigmentos fotosintéticos conservados en el sedimento eran los biomarcadores más adecuados para trazar la varibilidad de los organismos fotosintéticos debido a la especificidad taxonómica que presentan y al conocimiento sobre su transferencia de la columna de agua al sedimento, obtenido en un estudio experimental de los procesos de sedimentación durante tres ciclos anuales en la Laguna de La Cruz. El análisis estadístico multidimensional de los perfiles estratigráficos de los diferentes pigmentos evidenció la respuesta específica de cada sistema a diferentes factores ambientales durante los últimos siglos. El análisis en detalle de la señal sedimentaria indicó que en el Lagunillo del Tejo las fluctuaciones de nivel de agua, asociadas a variabilidad hidroclimática, han influido notablemente en la composición de la comunidad de productores primarios. Sin embargo en la Laguna de La Cruz, caracterizada por una estabilidad en la composición de la comunidad de organismos fotosintéticos, los cambios inferidos en la producción primaria parecen haber sido condicionados por la variabilidad solar. Por otro lado este estudio ha demostrado que el sedimento laminado de la Laguna de La Cruz es un excelente indicador climático cuantitativo. Los resultados del análisis de calibración del espesor de las láminas de calcita indican que dichos espesores estan principalmente relacionados con las precipitaciones acumuladas durante los meses de invierno presentando una correlación altamente significativa. Las precipitaciones invernales, a su vez, mostraron una correlación altamente significativa con el índice atmosférico de Oscilación del Atlántico Norte (NAO). Dada esta significativa relación climática, utilizamos el sedimento laminado de la Laguna de La Cruz para reconstruir las precipitaciones invernales anuales desde 1589 d.C. hasta el presente. El análisis de la señal climática mostró un dominio de procesos no estacionarios en las altas frecuencias lo que sugiere que la conexión entre las lluvias regionales y el patrón NAO no ha sido estable durante los últimos siglos y que probablemente otros patrones de circulación hayan ejercido su influencia en la región.

Las infecciones por rotavirus son la causa más importante de gastroenteritis en niños menores de cinco años de edad. Se calcula que provocan unas 600.000 muertes anuales, principalmente en los países en vías de desarrollo. Una de las estrategias más prometedoras de desarrollo de nuevas vacunas consiste en el uso de virus recombinantes. Entre los sistemas virales de expresión de proteínas recombinantes más interesantes se encuentran los coronavirus. En este trabajo se aborda la producción de vectores virales basados en genomas del coronavirus TGEV (virus de la gastroenteritis porcina transmisible) para aplicarlos como vacunas experimentales de las infecciones por rotavirus. Para ello se han desarrollado coronavirus recombinantes que expresan las proteínas VP2, VP6 y VP7 de rotavirus mediante técnicas de ingeniería genética sobre el ADNc completo de TGEV. Estos vectores se han aplicado en un modelo experimental en ratón para evaluar la respuesta inmunitaria y la protección conferidas. Para ello se ha sustituido el tropismo porcino del vector por el del ratón, mediante el cambio del dominio globular de la proteína de la espícula de TGEV por la del virus MHV (virus de la hepatitis murina) mediante técnicas de ingeniería genética. Se han desarrollado así vectores virales con tropismo murino expresando las proteínas recombinantes de rotavirus. Los análisis de susceptibilidad de distintas líneas celulares a los virus recombinantes demostraron que la línea murina LR7 ofrece los niveles de replicación más elevados. Se ha comprobado la expresión de las proteínas heterólogas en cultivo celular mediante inmunofluorescencia indirecta y la presencia del gen heterólogo mediante RT-PCR. La producción de VLPs en cultivo celular ha sido investigada mediante microscopía laser confocal y microscopía electrónica e inmunomarcaje. Se han inoculado dos líneas de ratones (ratones Balb/c inmunocompetentes y STAT1-/- inmunodeficientes) por vía intragástrica con el vector viral murinizado y se ha confirmado la replicación viral en diferentes órganos (intestino, hígado, pulmón y bazo) mediante RT-PCR e inmunofluorescencia de cortes histológicos de dichos órganos. Se han inmunizado ratones Balb/c con el vector que expresa establemente la proteína VP7 por 3 vías (intragástrica, intragástrica-intranasal e intraperitoneal) y también se han inmunizado ratones inmunodeficientes STAT1-/- por vía intragástrica. La producción específica de anticuerpos de clase IgG e IgA en muestras de sueros y heces de los ratones inmunizados se analizó mediante inmunoensayo. Se ha demostrado la producción de anticuerpos IgG séricos frente a rotavirus tras la inoculación del vector por vía intraperitoneal, y frente al propio vector por las diferentes vías ensayadas en ratones Balb/c. No se ha detectado la producción específica de anticuerpos en ratones STAT1-/-. Se ha medido el nivel de 10 citocinas en suero y en cultivo de esplenocitos de los ratones inoculados mediante inmunoensayo con microesferas fluorescentes marcadas y lectura por citometría de flujo. Se ha determinado una respuesta inmunitaria preferentemente de tipo humoral, con la producción de interleucina 10 y de bajos niveles de interferón-&#947;. El estudio de protección conferida en el modelo de ratón lactante se llevó a cabo con ratones recién nacidos de madres inmunizadas con el virus que expresa la proteína VP7 por las vías intragástrica e intraperitoneal, inoculados con rotavirus bovino (RF) y de ratón (EDIM). Se controló la presencia de diarrea durante los 4 días posteriores, habiéndose comprobado una protección parcial frente a la diarrea por rotavirus en las crías nacidas de hembras inmunizadas por vía intraperitoneal con el vector que expresa la proteína VP7. / Coronavirus vectors expressing rotavirus proteins have been developed in order to induce an immune response and protection against rotavirus in the mouse model. Rotaviruses are the leading etiology of severe diarrhea disease in children and cause annually 610.000 deaths of children younger than 5 years of age worldwide. The tropism of the TGEV (porcine transmissible gastroenteritis virus)-derived vector was modified by replacing the spike protein with the S protein from mouse hepatitis virus (MHV-A59 strain). The rotavirus gene encoding VP7, the outer capsid protein of bovine rotavirus strain RF, was cloned into the coronavirus cDNA by replacing the non-essentials 3a and 3b genes under the control of the corresponding transcription-regulating signals. The genes encoding structural proteins VP2 and VP6 have also been cloned and their co-expression allows the intracellular assembly of rotavirus VLPs (VP2/VP6). Balb/c and STAT1-deficient mice were inoculated by the oral, intranasal and intraperitoneal routes with the recombinant viral vector encoding VP7, which stably expresses the VP7 rotavirus protein. Organ tropism and viral titers in different tissues were studied by RT-PCR and immunofluorescence. Analyses of antibody responses to TGEV and rotavirus were performed by ELISA. Production of cytokines in serum samples and in cultivated splenocytes from the inoculated mice were determined by multiplex immunofluorescence beads and flow cytometry. Protection against rotavirus-induced diarrhea in suckling Balb/c mice after maternal immunization with rTGEVS-MHV-VP7 virus was determined. The viral vector with modified tropism, rTGEVS-MHV, replicates in the small intestine of mice and spread to other organs such as liver, spleen and lung. TGEV and rotavirus-specific IgG antibodies were detected in sera of Balb/c mice. TGEV-specific antibodies were measured in all inoculated groups (mostly by intraperitoneal and intranasal routes), while rotavirus-specific antibodies was detected only after immunization by intraperitoneal route. In addition, humoral and fecal IgA antibodies anti-TGEV responses were detected. A predominant type-Th2 cytokine response was identified in Balb/c mice, with production of IL-10, and low levels of IFN-&#61543; and TNF-&#61537;. A partial protection against rotavirus diarrhea was induced in pups born to dams immunized with the recombinant viral vector encoding VP7 when challenged orally with the homotypic rotavirus strain.