Orientadores: Sergio Roberto Peres Line, Marcelo Rocha Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T05:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_SimoneCaixetade_D.pdf: 127365203 bytes, checksum: 4736aaa809aadf03b1ad27e52dbb8b30 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A dentição não é somente o maior componente do complexo crânio facial dos mamíferos, mas um modelo útil de desenvolvimento, combinado em um sistema de um único órgão, onde ocorrem fenômenos de organização espacial, simetria, aquisição de formas complexas e citodiferenciação órgão-específica. Durante os primeiros estágios do desenvolvimento do dente ocorre uma série de interações entre o epitélio oral e mesênquima, por meio de diferentes moléculas sinalizadoras ao longo do futuro processo alveolar. Bmp4 atua ativando Msx1 na região de incisivos e molares e restringe a ação de Barx1 apenas na região dos molares. A interação entre o sinal mesenquimal Bmp4 e o sinal epitelial Shh faz parte dos primeiros eventos da formação do germe dentário no estágio botão. As fases seguintes são os estágios capuz e sino. Mutações nos genes Msx1 e Barx1 impedem o desenvolvimento do germe dentário além do estágio botão. Para o gene Msx1 essa condição é permanente, enquanto para Barx1 é temporal e o crescimento do germe dentário é retomado após o estágio E14.5 em camundongos. O objetivo desse trabalho é investigar a interação genética entre Msx1 e Barx1 no desenvolvimento do primeiro molar inferior na fase sino (E16.5) e qual a influência da ausência do gene Msx1 na dimensão das estruturas vestigiais MS, R2 e do primeiro molar inferior nas fases botão (E13.5) e sino (E16.5). Esse estudo também se propôs a avaliar se genes Barx2, Barhl1 e Barhl2 estariam expressos em botões de molares inferiores (E13.5). Os resultados indicaram que na ausência completa de Barx1, um único alelo de Msx1 não é suficiente para promover a evolução do botão dentário a capuz em camundongos E16.5 Barx1;Msx1 e não houve expressão de Bmp4 nesses camundongos. A expressão nula dos genes Barx2, Barhl1 e Barhl2 em botões de molares inferiores em camundongos wild-type E13.5 indica que genes da família Bar não possuem nenhum papel no desenvolvimento de molares inferiores. Ainda, dados alométricos de Msx1-/- (E13.5 e E16.5) indicam que a mutação no gene Msx1 e consequente ausência de expressão de Smad1-5-8 e Shh não impede o crescimento no sentido proximal-distal. Conclui-se que existe interação entre Barx1 e Msx1. Barx1 é necessário para controlar os níveis de expressão de Bmp4. Barx2 possivelmente desempenha um papel importante na morfogênese de pré-molares e incisivos inferiores. O atraso no desenvolvimento dos molares inferiores de camundongos Msx1-/- é permanente ao estágio botão, contudo, os botões dentários destes camundongos continuam a exibir um crescimento no sentido proximal-distal no estágio E16.5 / Abstract: The dentition is not only the largest component of the craniofacial complex of mammals, but a useful model of development, combined in a single organ system, where phenomena of spatial organization, symmetry, complex shape acquisition and organ-specific cytodifferentiation occur. During the early stages of tooth development, series interactions take place between oral epithelial and mesenchyme by different signalling molecules along the future alveolar process. Bmp4 acts by activating Msx1 in the region of incisors and molars and it restricts the action of Barx1 only to the molars' region. The interaction between mesenchymal Bmp4 signal and Shh epithelial signal is part of the first events of tooth germ formation at the bud stage. The next stages are cap and bell. Mutations in Msx1 and Barx1 genes inhibit the development of the tooth germ beyond the bud stage. For the Msx1 gene, this condition is permanent, while for Barx1 is temporal and the growth of tooth germ is retaken after stage E14.5 in mice. This study investigates the genetic interaction between Msx1 and Barx1 in the first lower molar development at the bell stage (E16.5), the effect of the absence of Msx1 gene in the size of the vestigial structures MS, R2 and first lower molar bud (E13.5) and bell (E16.5). This study also aimed to assess whether Barx2, Barhl1 and Barhl2 genes were expressed in lower molars buds (E13.5). The results indicated that in the complete absence of Barx1, a single allele of Msx1 is not sufficient to promote the development of tooth bud to cap in E16.5 Barx1;Msx1 mice, and there was no expression of Bmp4 in these mice. The null expression of Barx2, Barhl1 and Barhl2 genes in lower molar buds in E13.5 wild-type mice indicates that genes of the Bar family do not exert any role in the development of lower molars. Still, allometric data on Msx1-/- (E13.5 and E16.5) indicates that Msx1 gene mutation and consequently the absence of Shh and SMAD1-5-8 expression do not prevent growth towards proximal-distal. It is concluded that there is interaction between Barx1 and Msx1. Barx1 is necessary to control the expression levels of Bmp4. Barx2 might play a role in the lower premolars and incisors morphogenesis. The delayed development of Msx1-/- lower molars is permanent at the bud stage, however, the tooth buds of these mice continue to exhibit growth towards proximal-distal at E16.5 stage / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-16T12:06:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878278 bytes, checksum: a5bc538eab025dbd1c8aa2ee43aee778 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T12:06:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878278 bytes, checksum: a5bc538eab025dbd1c8aa2ee43aee778 (MD5) Previous issue date: 2014-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na interação planta/patógeno, a modulação da transcrição gênica é fundamental para montar uma resposta de defesa eficaz nas células do hospedeiro.Os fatores de transcrição estão entre os principais alvos em plantas para o aumento da tolerância a estresses, uma vez que estas proteínas controlam a expressão de vários genes ao mesmo tempo. Membros da família de fatores de transcrição bZIP podem atuar na defesa contra patógenos. Apesar da função de bZIPs na defesa contra patógenos ser conhecida, poucos trabalhos caracterizaram bioquimicamente membros dessa família que participam de vias de defesa. O GmbZIPE2 (Glyma05g30170.1) é um membro do grupo E da família bZIP de soja, que é responsivo à infecção por Phakopsora pachyrhizi. Esse trabalho teve como objetivo principal caracterizar funcionalmente o transfator GmbZIPE2, mapeando cis-elementos que ele se liga, bem como genes responsivos a GmbZIPE2. A proteína GmbZIPE2 foi capaz de se ligar ao H-box, cis-elemento que é relacionado a patógenos. GmbZIPE2 induz genes de vias importantes para a defesa da planta, como CHS15-6 e PR-1. GmbZIPE2 reprime ANK1, um regulador negativo de morte celular. Os resultados desse trabalho indicam uma relação do fator de transcrição GmbZIPE2 na defesa da planta contra o ataque de patógenos. Maiores conhecimentos sobre o GmbZIPE2 pode contribuir com o conhecimento acerca da resposta da planta a estresse biótico e poderá ser útil para a obtenção de novos alvos para a modificação genética de cultivares. / In a plant/pathogen interaction, modulation of gene transcription is essential to mount an effective defense response in host cells. Transcription factors are among the major targets in plants for increasing stress tolerance, since these proteins control the expression of several genes simultaneously. Members of the bZIP family of transcription factors can act in defense against pathogens. Despite the role in defense against pathogens bZIPs be known, few studies biochemically characterized members of this family that participate in the process of defense. The GmbZIPE2 (Glyma05g30170.1) is a member of the bZIP E group of soybean, which is responsive to infection by Phakopsora pachyrhizi. The objective of this study was functionally characterize the transfator GmbZIPE2, mapping the cis-elements that it binds as well as the responsive genes of GmbZIPE2. The GmbZIPE2 protein was able to bind to the H- box cis-element is related to pathogens. GmbZIPE2 induces genes important for plant defense pathways, as CHS15-6 and PR-1. GmbZIPE2 represses ANK1, a negative regulator of cell death. The results of this study indicate a relationship of GmbZIPE2 transcription factor in plant defense against pathogen attack. Improved knowledge of the GmbZIPE2 can contribute to the knowledge of plant response to biotic stress and may be useful for obtaining new targets for genetic modification of crops.

Orientador: Claudio Alexandre Gobatto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação Física / Made available in DSpace on 2018-08-27T03:03:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MassellidosReis_IvanGustavo_D.pdf: 3926036 bytes, checksum: 3eda6aa62a61d88c274a00563e5b2943 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Sabe-se que o estresse físico exerce uma função moduladora na expressão gênica dos MCTs 1 e 4 por meio de vias de sinalização moleculares aparentemente distintas envolvendo o co-ativador-1 'alfa' do receptor gama ativado por proliferador do peroxissomo (PGC-1?) e subunidade 1 'alfa' do fator induzível por hipóxia (HIF-1?) respectivamente. Apenas uma única sessão de exercício de resistência (endurance) está associada ao aumento na expressão do MCT1 e PGC-1?, mas não do MCT4, no músculo esquelético vasto lateral de humanos, enquanto o exercício intermitente de alta intensidade parece afetar ambos MCTs 1 e 4 além do PGC-1?. No entanto pouco se conhece sobre o efeito simultâneo do estresse físico sobre o HIF-1?, MCts 1 e 4 e PGC-1? em diferentes tecidos e tipos de fibra. É provável que tanto a expressão quanto a transcrição dos co-ativadores e fatores de transcrição envolvidos na modulação dos MCTs 1 e 4 frente ao estresse físico sejam afetadas pelas características da atividade e ainda variem de acordo com o tipo e especificidade do tecido analisado. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi verificar o efeito agudo de uma única sessão de natação até exaustão ou de 30 minutos contínuos ou 25 minutos acumulados intermitentemente, em uma intensidade equivalente ou 20% superior a máxima fase estável de lactato, sobre a expressão gênica e conteúdo protéico dos HIF-1?, MCTs 1 e 4, PGC-1?, imediatamente, 2, 4 e 8 horas após a sessão de exercício, em tecidos chaves para metabolismo do lactato (fibras esqueléticas I e II, fígado, coração) de ratos. O exercício físico aumenta a expressão proteica e mRNA em relação ao grupo controle para maior parte dos genes que foram analisados, porém, não há diferenças entre os grupos exercitados independente do tecido e do protocolo utilizado. Com exceção do tecido hepático cuja apenas a expressão de PGC-1? mRNA é estimulada, uma única sessão de exercício induz diferentes respostas ao longo de 8 horas na expressão mRNA e conteúdo de HIF-1?, MCTs 1 e 4, PGC-1?. Uma sessão contínua de volume reduzido ou uma sessão intermitente em intensidade 20% superior a MFEL, resultam nas mesmas adaptações de uma sessão contínua de 30 minutos de duração em intensidade equivalente a MFEL / Abstract: It is known that physical stress plays a role on regulating the gene expression of MCTs 1 and 4 by distinct molecular signaling pathways involving the peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1 alpha (PGC-1?) and hypoxia inducible factor 1 alpha subunit (HIF-1?) respectively. Only a single endurance session is associated with increased expression of both PGC-1? and MCT1, but not of the MCT4 in the muscle vastus lateralis of humans, while the intermittent exercise of high intensity seems to affect, besides the PGC-1?, both MCTs 1 and 4. However, the knowledge about the simultaneously effect of the exercise stress on the HIF-1?, MCTs 1 and 4 and PGC-1? in different types of tissues and skeletal muscles is unknow. Probably, the transcription factors and the coativators involved in the exercise induced modulation of MCTs 1 and 4 can being differently affected by the exercise intensity and may vary according to the type and metabolic specificity of the tissue. Thus, the aim of this study was to investigate the acute effect of a single swimming session of 30 continuous minutes or 25 minutes accumulated intermittently or until exhaustion in the intensity equivalent or 20% higher than the maximum lactate steady state (MLSS), on the gene expression and protein content of HIF-1?, MCTs 1 and 4, PGC-1?, immediately, 2, 4 and 8 hours after, in key tissues to the lactate metabolism (skeletal muscle of type I and II, liver, heart) of rats. Physical exercise increased protein content and mRNA expression for most of the analyzed genes, however, there are no differences between the exercised groups independently of the tissue or protocol used. With the exception to liver, where only PGC-1? mRNA was stimulated, a single exercise bout induced different responses throughout 8 hours on mRNA expression and content of HIF-1?, MCTs 1 and 4, PGC-1?. Both, continuous or intermittent exercise, of reduced volume and in higher intensity (20%) results in similar responses of a continuous session of 30 minutes duration in the MLSS intensity / Doutorado / Biodinamica do Movimento e Esporte / Doutor em Educação Física

Orientadores: Laura Sterian Ward, Márcio José da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T06:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_FernandodeAssis_M.pdf: 3590924 bytes, checksum: 1fef7139c4c821dd4dd2c2d3d10f7393 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Nódulos de tireoide, benignos e malignos, tem se tornado cada vez mais frequentes, obrigando a busca de marcadores de diagnóstico e prognóstico. Três fatores de transcrição tireoide-específicos estão envolvidos na manutenção do estado diferenciado da glândula e em sua carcinogênese: TTF-1, FOXE1 e PAX8. Os níveis de expressão destes genes estão relacionados com o grau de diferenciação tecidual em tumores tireoidianos. O repressor transcricional DREAM também está envolvido na expressão gênica tireoide-específica através da interação com o gene da tireoglobulina e com os fatores de transcrição TTF-1, FOXE1 e PAX8. O aumento da expressão de DREAM na tireoide está relacionado com o aumento da glândula e desenvolvimento nodular. O objetivo do presente estudo foi analisar a expressão dos genes TTF-1, FOXE1, PAX8 e DREAM em tecidos tumorais benignos e malignos da tireoide, além de identificar possíveis mutações no gene DREAM em pacientes com nódulos tireoidianos. Para tanto foram coletadas 200 amostras de tecido nodular, sendo 50 adenomas foliculares (AF), 49 bócios nodulares, 63 carcinomas papilíferos clássicos (CPTC), 36 carcinomas papilíferos de variante folicular (CPTVF). Todos os pacientes foram submetidos a um mesmo protocolo padrão e acompanhados por 12-87 meses (38 ± 17 meses). Foram extraídos DNA e RNA de todas as amostras. A análise de expressão foi realizada por qPCR e a detecção de mutações no gene DREAM foi feita por sequenciamento automático. Os dados obtidos foram relacionados com dados clínicos e de evolução dos pacientes. Demonstramos que, embora a expressão de TTF-1 tenha sido similar entre os diferentes nódulos analisados (p=0.7056), FOXE1 (p<0,0001), PAX8(p<0,0001) e DREAM (p<0,0001) foram significativamente mais expressos em tecidos benignos (AF e bócio) do que em malignos (CPTC e CPTVF) identificando malignidade com 75,9%; 70,6%; e 75,3% de acurácia respectivamente.Os três genes foram ainda diferencialmente expressos entre as lesões de padrão folicular AF e CPTVF (FOXE1,p=0,0052; PAX8, p=0,0002; DREAM, p<0,0001), diferenciando estas lesões com 67,9%; 70,6%; e 71,6% de acurácia respectivamente. No entanto, a expressão dos genes investigados não se associou a características de agressividade tumoral ou de evolução. Embora não tenhamos encontrado nenhuma alteração em regiões codificantes do gene DREAM, pudemos observar a ocorrência de 6 alterações em áreas não codificantes próximas aos éxons. A alteração IVS-95T>A está localizada na região promotora e foi encontrada em apenas um paciente. As alterações IVS2-131C>T e IVS3+17T>C foram encontradas em regiões intrônicas (intron 1 e 3 respectivamente) em um paciente cada. As alterações IVS1+41C>G, IVS3+10G>C e IVS8-118C>T foram encontradas em vários pacientes por se tratarem de polimorfismos já descritos (rs2248415, rs117109173 e rs58372613 respectivamente). As frequências alélicas e genotípicas das alterações não se associaram as características clínicas, de agressividade ou evolução. Concluímos que a expressão dos genes FOXE1, PAX8 e DREAM pode auxiliar o diagnóstico de malignidade e a diferenciação de lesões tireoidianas, mas não possui utilidade como marcador de prognóstico. Além disso, mutações e polimorfismos do gene DREAM em pacientes com nódulos tireoidianos não possuem clínica como biomarcadores de diagnóstico ou prognóstico do CT / Abstract: Thyroid nodules, benign and malignant, have become increasingly frequent, impelling the search for markers for their diagnosis and prognosis. Three thyroid-specific transcription factors are involved in maintaining the differentiation of the gland and its carcinogenesis: TTF-1, FOXE1 and PAX8. The expression levels of these genes are related to the degree of tissue differentiation in thyroid tumors. The transcriptional repressor DREAM is also involved in thyroid-specific gene expression through interaction with the thyroglobulin gene and the transcription factors TTF-1, FOXE1 and PAX8. An increased expression of DREAM was related to the thyroid enlargement and nodular development. The purpose of this study was to analyze the expression of TTF-1, FOXE1, PAX8 and DREAM genes in benign and malignant thyroid tumor tissues and identify possible mutations in the DREAM gene in patients with thyroid nodules. For that purpose, we collected 200 thyroid nodules samples: 50 follicular adenomas (FA), 49 nodular goiters, 63 classic papillary carcinomas (CPTC), 36 follicular variant of papillary thyroid carcinomas (FVPTC). All patients were submitted to the same standard treatment protocol and followed by 12-87 months (38 ± 17 months). Gene expression analysis was performed by real time PCR and we performed automatic sequencing in order to detect mutations of DREAM gene. The data obtained were correlated to clinical and pathological features and to patients¿ outcomes. We demonstrated that FOXE1 (p<0.0001), PAX8 (p<0.0001) and DREAM (p<0.0001) genes¿ expression, but not TTF-1 (p=0.7056), were higher in benign (FA and goiter) than in malignant thyroid lesions (CPTC and FVPTC), being able to identify malignancy with an accuracy of 75.9%, 70.6% and 75.3%, respectively. The three genes were also differentially expressed between follicular lesions FA and FVPTC (FOXE1, p=0.0052; PAX8, p=0.0002; DREAM, p<0.0001), identifying these lesions with 67.9%, 70.6% and 71.6% accuracy respectively. However, the expression of the investigated genes was not associated with any feature of tumor aggressiveness or patients¿ outcome. Although we did not find genetic alterations in coding regions of DREAM gene, we observed the occurrence of 6 alterations in non-coding regions near the exons. The alteration IVS-95T> A is located in the promoter region of the gene and was found in one patient. The alterations IVS2-131C>T and IVS3+17T> C were found in intronic regions (introns 1 and 3 respectively), each in one patient. The alterations IVS1+41C>G, IVS3+10G>C and IVS8-118C>T, corresponding to already described polymorphisms (rs2248415, rs58372613 and rs117109173 respectively), were found in several patients. Allelic and genotypic frequencies of the alterations were not associated with any clinical or pathological feature of aggressiveness or with outcome. We conclude that the expression of FOXE1, PAX8 and DREAM may help diagnose thyroid nodules, identifying malignancy and characterizing follicular-patterned thyroid lesions, but is not useful as a prognostic marker. In addition, mutations and polymorphisms in non-coding regions of the DREAM gene in patients with thyroid nodules are not associated with clinical features, not having utility as diagnostic or prognosis biomarkers for TC / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Ciências

Orientador: Marcelo Carnier Dornelas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T10:39:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_MairaNogueirade_M.pdf: 3639032 bytes, checksum: c25c08dbfd51087e6845ff57b3577284 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Os fatores de transcrição da família TCP são amplamente distribuídos no reino vegetal e, desde sua primeira descrição em 1999, novas descobertas demonstraram sua importância na evolução e controle do desenvolvimento de plantas. Entre as funções conhecidas dos genes TCP estão: o controle da dominância apical e da simetria de órgãos, bem como da curvatura da superfície foliar e da senescência. Este trabalho teve como objetivos a caracterização da função do gene TCP5 no desenvolvimento floral de Arabidopsis thaliana, através do estudo de seu padrão de expressão e da caracterização morfológica de plantas transgênicas apresentando alterações da expressão deste gene. Análises de RT-PCR revelaram a presença de transcritos de TCP5 em inflorescências, indicando um possível papel no desenvolvimento floral. O padrão de expressão espacial e temporal de TCP5 foi analisado através de hibridização in situ. Os transcritos localizam-se em meristemas de inflorescência e meristemas florais, e preferencialmente na região apical dos primórdios de órgãos florais. Estudos com plantas transgênicas superexpressando TCP5 na epiderme (construção pATML1:TCP5) revelaram que estas possuem pétalas com comprimento significativamente maior e com forma distinta do genótipo selvagem. Ainda, a análise destas plantas transgênicas com o uso de microscopia eletrônica de varredura revelou a presença de más-formações no gineceu e germinação ectópica de grãos de pólen. Plantas superexpressando um microRNA artificial (35S:miR-3TCP) que desliga a expressão dos genes do clado TCP5-like (TCP5, TCP13 e TCP17) apresentaram sépalas, pétalas e carpelos maiores do que o tipo selvagem. Juntos, os resultados corroboram a hipótese de que o gene TCP5 atua nos mecanismo de maturação de órgãos florais, determinando tamanho e forma através da regulação dos processos de proliferação e expansão celular / Abstract: The TCP family of transcription factors is widely distributed in the plant kingdom, and since its first description in 1999, new discoveries have shown its importance in evolution and control of plant development. Among the known functions of TCP genes are: the control of apical dominance and symmetry of organs as well as the curvature of leaf surface and senescence. The aims of this study were: to characterize TCP5 gene function in Arabidopsis thaliana floral development, through the study of its expression pattern and morphological characterization of transgenic plants with differential expression of the gene. RT-PCR analysis revealed the presence of TCP5 mRNA in inflorescences, suggesting a possible role in flower development. Spatial and temporal pattern of expression of TCP5 was analyzed by in situ hybridization. Transcripts are located in inflorescence meristem and floral meristems, and preferably in the apical region of the floral organ primordia. Studies with transgenic plants overexpressing TCP5 in the epidermis (pATML1:TCP5 construction) revealed longer petals than the wild-type. Still, the analysis of these transgenic lines by scanning electron microscopy revealed malformations in the gynoecium and ectopic germination of pollen grains. Overexpression of an artificial microRNA that turns off the expression of TCP5-like clade genes (TCP5, TCP13 and TCP17) in 35S:miR-TCP plants showed bigger sepals, petals and carpels than the wild type. Together, these results support the hypothesis that TCP5 gene operates in the mechanisms of floral organ maturation, determining size and shape through the regulation of cell proliferation and expansion processes / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestra em Biologia Vegetal

O parasita Plasmodium falciparum causa a forma mais grave da malária humana.Para evadir a resposta imune do hospedeiro, as formas assexuadas do parasita podem usar variação antigênica ou podem se diferenciar em formas sexuais como estratégia para sobreviver e garantir a sua transmissão para o mosquito.A base molecular desses processos ainda é pouco compreendida. Por manipulação genética, nos identificamos a participação de um fator de transcrição da família ApiAP2 ( PF3D7_1143100), no controle da transcrição de genes variantes e no desenvolvimento em formas sexuais na fase intraeritrocítica. Demonstramos ainda que um outro membro desta família, PF3D7_1466400, não é essencial no ciclo assexual de P. falciparum, já que seu silenciamento não afeto o normal desenvolvimento do parasita. / The parasite Plasmodium falciparum causes the most severe form of human malaria. To evade the host immune response, asexual parasite forms can employ antigenic variation or differentiation to gametocytes as a means to survive and secure their transmission to the mosquito. The molecular basis behind these processes is still poorly understood. By genetic manipulation, we indentified the participation of a ApiAP2 transcription factor, PF3D7_1143100, in the control of variant gene transcription as well as in the switching from asexual to sexual development in the intraerythrocytic stage. We also demonstrate that the ApiAP2 transcription factor PF3D7_1466400 is not essential in the asexual stage of P. falciparum, since its knockdown did not affect the normal development of the parasite.

Saccharomyces cerevisiae é o organismo de escolha para produção de etanol combustível, apresentando-se adaptadas ao ambiente hostil das dornas de fermentação. Adaptações como floculação, formação de espuma e de biofilme são características fenotípicas indesejáveis ao processo brasileiro. Por isso, a pronta identificação destas características faz-se necessária no intuito de minimizar perdas de rendimento e diminuir o custo da produção. Sabe-se que proteínas codificadas pela família de genes FLO estão relacionadas a estes fenótipos, os quais são regulados pela proteína Flo8p, a qual possui papel fundamental na apresentação destas características fenotípicas indesejáveis. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo analisar o fenótipo e o comportamento metabólico, relacionando-os com a regulação via Flo8p. Os resultados obtidos revelam o papel fundamental de Flo8p na regulação positiva destes fenótipos em linhagem isolada do ambiente industrial (FT02). Verificou-se uma forte tendência da participação do gene FLO11 na formação de espuma, via Flo8p. Além disso, através da deleção do FLO8 da linhagem FT02, observou-se a influência positiva de Flo8p na floculação e hidrofobicidade celular, filamentação e poder invasivo. / Saccharomyces cerevisiae is the chosen organism for fuel ethanol production, presenting adapted to the hostile environment of the fermentation vats. Adaptations like flocculation, d foam formation and biofilm are undesirable phenotypes for the Brazilian process. Hence, the early identification of these characteristics is necessary to minimize yield losses and lower the production cost. Proteins codified by FLO gene family are related with these phenotypes, which are positively regulated by Flo8p protein, showing fundamental role in the expression of the undesirable phenotypes. So, the present work aimed to analyze the phenotypes and the metabolic behavior of an industrial strain isolated directly from Brazilian ethanol production process (FT02), relating them with the Flo8p regulation. Our results showed that the Flo8p plays a fundamental role in the regulation of these characteristics in the industrial strain FT02. We also verified a strong tendency of the FLO11 gene participation in the foam formation, by Flo8p. Moreover, by FLO8 deletion in FT02 strain, we could identify the positive influences of the Flo8p in flocculation and cellular hydrophobicity, filamentation and invasive growth.

Scratch2 (Scrt2) é um fator de transcrição (FT) expresso em células neurais recém-pós-mitóticas. O mecanismo de regulação de sua transcrição permanece desconhecido. Nós buscamos por potenciais elementos cis-regulatórios (CR) e sítios de ligação para FT na região genômica de Scrt2. Nós testamos o efeito in vivo da região CR intrônica através de eletroporação em embrião de galinha. Esta CR intrônica levou à expressão de eGFP tubo neural, mas não gerou um padrão semelhante ao Scrt2 endógeno. Estes dados sugerem que esta região CR pode contribuir com o controle da expressão de Scrt2, mas requer regiões regulatórias adicionais. Nós também verificamos o papel de mAsh1, cPax6, cNgn2 e Brn na regulação da expressão de Scrt2 através da superexpressão destes no tubo neural embrionário. As análises foram realizadas por qPCR e hibridação in situ. A superexpressão de mAsh1 e cNgn2 levou a um leve aumento na expressão de cScrt2 visto através da hibridação in situ. Já a superexpressão de cPax6 e mBrn-Eng reduziu os níveis de cScrt2, com Brn apresentando efeitos mais severos. / Scratch2 (Scrt2) is a transcription factor expressed in early post-mitotic neural cells. The mechanisms that control its transcription remain unknown. We searched for potential cis-regulatory elements and putative transcription factors binding sites in the genomic region of cScrt2. Then, we tested the function of a candidate cis-regulatory intronic region through electroporation in chick embryos. This fragment drove eGFP expression in the neural tube of chick embryo, but its expression did not resemble the cScrt2 endogenous pattern. Thus, this cis-regulatory region likely requires the presence of other regulatory regions. We also evaluated the role of mAsh1, cPax6, cNgn2 e Brn in regulating cScrt2 expression through overexpression of these factors in chick neural tubes and subsequent qPCR and in situ hybridization. Overexpression of mAsh1 and cNgn2 increased slightly cScrt2 expression level as seen by in situ hybridization. Overexpression of cPax6 and mBrn-Eng, reduced cScrt2 levels, with more severe effects with Brn.

Embora os glicocorticoides (GCs) sejam os anti-inflamatórios mais prescritos mundialmente, níveis elevados de GCs potencializam alguns aspectos da resposta inflamatória em regiões do encéfalo de ratos, dependentes da ativação dos receptores GR. Neste estudo visamos avaliar os efeitos dos glicocorticoides em alguns aspectos da resposta inflamatória induzida por LPS nas populações de células (neurônio, micróglia e astrócitos) primárias de córtex frontal derivadas de ratos Wistar neonatos. Através de ensaios EMSA e imunofluorescência, avaliamos indicativos da ativação do fator NFKB em culturas mistas e enriquecidas expostas ao pré-tratamento com CORT, seguido do estímulo inflamatório LPS. Verificamos que a CORT não exerceu sua clássica atividade anti-inflamatória, pois não foi capaz de diminuir a ativação do NFKB induzida pelo LPS nas culturas mistas, sugerindo ser parcialmente dependente da ativação de GR, concentração dos GCs e interações celulares, já que os astrócitos em culturas mistas exibem respostas diferentes quanto ao NFKB, mas a microglia e neurônios não. / Although glucocorticoids (GCs) are the most commonly prescribed anti-inflammatory worldwide, high levels of GCs enhance some aspects of the inflammatory response in brain regions of rats, dependent on activation of GR. In this study, we aim to evaluate the effects of glucocorticoids in some aspects of the inflammatory response LPS-induced in populations of cells (neurons, astrocytes, and microglia) in primary frontal cortex derived from newborn rats. Through EMSA and immunofluorescence assays, we evaluated the indicative factor NFKB activation in mixed and enriched cultures exposed to pretreatment with CORT, followed by the LPS inflammatory stimulus. We found that CORT did not exerted its classic anti-inflammatory activity, whereas it was not able to decrease the activation of NFKB LPS-induced in mixed cultures, suggesting be partially dependent on the GR activation, GCs concentration and cellular interactions, since astrocytes in mixed cultures exhibit different responses relative to NFKB, but neurons and microglia did not.

Introdução: A modulação da resposta imune em muitas situações clínicas persiste como um dos problemas mais desafiadores em imunologia. Citocinas são fundamentais para esta regulação e são amplamente estudadas. Após a ligação com receptores específicos na superfície das células alvo, uma das principais vias de sinalização é o sistema JAKs/STATs. No entanto, em contraste com as citocinas, não existem estudos detalhados sobre a cinética expressão intracelulares de STAT in vitro. Objetivo: Determinar por citometria de fluxo, a cinética expressão de proteínas STAT 1, 3, 4, 5 e 6 fosforiladas, a produção de citocinas associadas e expressão de seus receptores em PBMC humanas estimuladas in vitro com fito-hemaglutinina (PHA) e antígeno de citomegalovírus (CMV). Metodologia: Foram avaliados CMNs de 23 doadores saudáveis em relação à cinética de expressão STATs (12 doadores estimulados com PHA e 11 estimulados com CMV), secreção de citocinas e expressão de seus receptores. Resultados: Em células estimulada com PHA e CMV, pSTAT1 e 6 tiveram sua expressão aumentada precocemente (4h e três dias, respectivamente). pSTAT3 teve sua expressão aumentada em momentos posteriores (respectivamente 36h e 6 dias). A indução de expressão de pSTAT4 e 5 foi observada nos tempos mais tardios da cinética em células estimuladas com PHA (24-36h), enquanto observamos constante baixo nível de expressão em todos os tempos analisados em células estimuladas com CMV. No que diz respeito á secreção de citocinas em células estimuladas com PHA, níveis maiores de IL-6, IL-10 e IL-4 foram detectados a partir de 12h, enquanto aumento da secreção de IFN-y e IL-2 ocorreu a partir de 24h. Com CMV, apenas IL-6 mostrou um aumento da secreção nos dias 4 e 6. Os receptores de citocinas CD119 (IFN-g), CD126 (IL-6), CD210 (IL-10), CD212 (IL-12), CD25 (IL -2) e CD124 (IL-4) tiveram um aumento da expressão após 24-36h de estimulação com PHA. Com estímulo de CMV, CD126, CD212, CD25, também aumentaram a expressão em tempos tardios (5-6 dias), enquanto os outros receptores mantiveram níveis baixos de expressão em todos os momentos estudados. Discussão: Houve uma correlação entre a cinética de expressão de pSTAT3 e 5, e a cinética das citocinas associadas e de seus receptores (IL-6 / CD126, IL-10 / CD210 e IL-2 / CD25). A cinética de expressão de pSTAT4 se correlacionou com a expressão de CD212. (IL-12p70 não foi detectada no presente estudo). Entretanto a expressão de pSTAT1 e 6 precedeu à de IFN-y / CD119 e IL-4 / CD124. Conclusão: A determinação da cinética de expressão pSTAT in vitro pode contribuir para a compreensão da regulação da resposta imune a patógenos distintos e, potencialmente, ajudar no desenvolvimento de novos alvos terapêuticos bem como de novas estratégias destinadas a modular as vias de sinalização em diversas condições clínicas associadas à desregulação imunológica / Introduction: Modulation of immune responses in many clinical situations persists as one of the most challenging issues in immunology. Cytokines are fundamental to this regulation and have already been extensively studied. After binding with its specific receptors on the surface of the target cells, the main signaling pathway is the JAKs/STATs system. However, in contrast to cytokines, there are no detailed studies on the in vitro intracellular expression kinetics of STATs. Objective: To determine by flow cytometry the kinetics of phosphorylated STAT1, 3, 4, 5 and 6 proteins expression in human PBMCs in vitro stimulated with phytohemagglutinin (PHA) and cytomegalovirus antigen (CMV), and the associated cytokine production and cytokine receptors expression. Methodology: We evaluated PBMCs from 23 healthy donors regarding the kinetics of STATs expression (12 donors stimulated with PHA and 11 stimulated with CMV), cytokine secretion and respective receptors expression. Results: In PHA and CMV stimulated cells, pSTAT 1 and 6 expression increased early, 4h and 3days respectively). pSTAT3 expression augmented at later times (respectively 36h and 6 days). pSTAT4 and 5 expression were observed late in PHA stimulated cells (24-36h), while there was a constantly low level of expression in all times analyzed. Regarding cytokine release In PHA stimulated cells, IL-6, IL10 and IL-4 secretion started to increase at 12h while IFN-y and IL-2 increased at 24h. With CMV, only IL-6 showed increased expression at days 4 and 6. The cytokines receptors CD119 (IFN-g), CD126 (IL-6), CD210 (IL-10), CD212 (IL-12), CD25 (IL-2) and CD124 (IL-4) had increased expression at 24-36h with PHA stimulation. With CMV stimulation, CD126, CD212, CD25 also had increased expression at late times (5-6 days) while the other receptors maintained low expression levels at all times. Discussion: There was a correlation in between the pSTAT3 and 5 expression kinetics and the associated cytokines and cytokine receptors kinetics (IL-6/CD126, IL-10/CD210 and IL-2/CD25. pSTAT4 expression kinetics correlated with that of CD212 expression (IL-12p70 was not detected in the present study). The higher pSTAT1 and 6 expressions preceded that of IFN-y/CD119 and IL-4/CD124, respectively. Conclusion: Determination of pSTAT expression kinetics in vitro can contribute to the understanding of the regulation of immune responses to distinct pathogens and potentially help in the design of new therapeutic targets as well as new strategies aimed at modulating signaling pathways