A celulose é o polímero mais abundante na natureza, sendo sua biodegradação realizada por enzimas como exoglicanases, endoglicanases e b-glicosidases, denominadas celulases. Entre os microrganismos capazes de secretar estas enzimas, destacam-se os fungos filamentosos, como Trichoderma, Penicillium e Aspergillus. Neste trabalho, em sua primeira etapa foi selecionado o fungo Aspergillus phoenicis entre seis fungos filamentosos para a produção de celulases. Foram testados doze meios de cultivos diferentes, buscando a escolha de um meio de cultivo baseado em resíduos agroindustriais para a produção de enzimas celulásicas. O meio de cultivo composto por resíduo de uva e peptona foi escolhido para efetuar de otimização do meio de cultivo, por meio da metodologia de superfície de resposta, realizando o planejamento fatorial 2². O cultivo submerso do fungo foi realizado em frascos erlenmeyers de 250 mL, com 50 mL de meio de cultivo, na temperatura de 30ºC, durante 120 horas em agitador de plataforma, a 120 rpm. Foram mensuradas as atividades de celulases totais, endoglicanases, e b-glicosidases. A atividade enzimática presente no sobrenandante do meio de cultivo foi então caracterizada quanto a diferentes valores de pH, temperatura, termoestabilidade, presença de sais e reagentes. Os resultados demonstram que as enzimas presentes no sobrenadante bruto da cultura possuem melhores atividade entre os pHs 3,0 e 5,0, temperatura de 60 ºC, mantendo-se estável por duas horas de incubação. A atividade enzimática sofreu perdas quando incubada na presença de Hg2+ , Cu+2, detergentes e ßmercaptoetanol. / Cellulose is the most abundant polymer in the nature, being its degradation carried out by enzymes such as exoglicanases, endoglicanases and b-glicosidases, called cellulases. Among the microorganisms capable to secret this enzymes, the fungi distinguished the filamentous fungi, such as Trichoderma, Penicillium and Aspergillus are the most important microrganisms. In this work, the fungus Aspergillus phoenicis was selected among six others filamentous fungi for the production of cellulases. Twelve culture media based on agroindustrial waste for cellulase production were tested. Culture medium with the composition of waste grape and peptone was chosen for the optimization of process, with the help of the response surface methodology, through factorial planning 2². The fungus was cultivated at a temperature of 30 ºC and 120 rpm on shaker rotatory during 120 hours. The activity of total cellulases, endoglucanases and b-glucosidases were measured. The enzymatic activity was characterized for the different values of pH, temperature, thermostability and presence of ions and others composts. The results demonstrated that the crude enzymes have the optimum activity between pH 3,0 and 5,0, at 60 ºC, temperature that it was remained steady for two hours of incubation. The enzymatic activity suffered losses when incubate in the presence of Hg2+, Cu+2, detergents and ß-mercaptoetanol.

A matéria prima do biodiesel pode conferir ao biocombustível uma maior suscetibilidade ao desenvolvimento microbiano no armazenamento. Neste sentido, avaliou-se o papel deteriogênico de três fungos filamentosos em meio aquoso com biodiesel produzido a partir de óleo de oliva, soja e linhaça, durante 120 dias. O experimento foi montado em frascos de vidro, com 30 mL de meio mineral e 15 mL de cada biodiesel, e adicionado inóculo dos fungos. O experimento foi conduzido em triplicata e as análises foram realizadas aos dias 0, 7, 14, 21, 28, 42, 60 e 120. A cada tempo amostral avaliou-se: formação de biomassa; consumo de fosfatos; produção de metabólitos e de lipase. Para determinar a concentração mínima fungistática e fungicida foram avaliados quatro antimicrobianos (MBO8%, MBO50%, MBO100% e NBM100%). Os fungos cresceram em todos os biodieseis testados, sendo que as medidas de tensão superficial não indicaram produção de biossurfactantes, e as de pH demonstraram a produção de metabólitos ácidos aos 120 dias. Aos 7 dias de incubação foi detectada a produção máxima de lipase e a presença dos ésteres palmitato (C16), estearato (C18), oleato (C18:1), linoleato (C18:2) e linolenato de metila (C18:3) na fase aquosa. Não foi observada degradação dos ésteres dos biodieseis pelos fungos. Os aditivos MBO (8 e 50%) não apresentaram atividade fungistática e fungicida nas concentrações testadas, no entanto, para o antimicrobiano NBM100% a concentração de 250ppm foi fungicida para os fungos testados. / The raw material for biodiesel can increase its susceptibility to microbial growth in storage. In this sense, we evaluated the deterioration role of three filamentous fungi in aqueous medium with biodiesel produced from olive oil, soybean and linseed oil for 120 days. The experiment was performed in glass vials with 30 ml mineral medium and 15 mL of each biodiesel, and the inoculum of the fungi added. The experiment was conducted in triplicate, and analyzes were performed on days 0, 7, 14, 21, 28, 42, 60 and 120. At each sampling time were evaluated: biomass formation, consumption of phosphates, production of metabolites and lipase. To determine the minimal fungistatic and fungicidal concentration was evaluated four antimicrobials (MBO8% MBO50% MBO100% and NBM100%). The fungi grew in all tested biodiesels, and the surface tension measurements indicated no biosurfactant production, the pH values demonstrated the production of acidic metabolites in 120 days. After 7 days of incubation, the maximum production of lipase was detected and the presence of the esters methyl palmitate (C16), stearate (C18), oleate (C18: 1), linoleate (C18: 2) and linolenate (C18: 3) were detected in aqueous phase. There was no degradation of esters of biodiesels by fungi. The additives MBO (8 and 50%) showed fungistatic and fungicidal activity at the concentrations tested, however, for the antimicrobial NBM100% the concentration 250ppm was fungicidal for all the fungi tested.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6697_1.pdf: 733102 bytes, checksum: accd4cc4c26b11550133404636073b04 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Óleo diesel é um combustível derivado do petróleo obtido a partir de processos de refino, sendo uma mistura de compostos altamente tóxicos ao meio ambiente e ao ser humano. Durante a extração, processamento, transporte e armazenamento alguns acidentes podem acontecer ocasionando danos incalculáveis aos ecossistemas. Dentre as técnicas de tratamento, a biorremediação é uma tecnologia que preconiza o uso de microrganismos ou seus produtos e processos para diminuir a poluição ambiental. Os fungos são considerados importantes organismos nos processos de biodegradação de hidrocarbonetos. A princípio, a ação combinada com outros microrganismos pode aumentar o grau de descontaminação quando comparados a utilização dos fungos isoladamente. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial de fungos filamentosos para degradar óleo diesel, verificar a toxicidade dos resíduos e a produção de enzimas ligninolíticas utlizadas nos processos de biorremediação. A biodegradação foi avaliada utilizando-se concentrações crescentes, 5 a 11% da fonte oleosa. Aspergillus terreus se destacou na concentração de 7% quando atingiu 82,50% de degradação em um dos picos do composto oleosos. Na maior concentração de diesel a linhagem de A. terreus apresentou 38,49%. Para o consórcio o melhor resultado da degradação foi de 72,44% (16), porém o índice de germinação foi de apenas 1,06%. Nos ensaios enzimáticos houve uma produção de 1.944 U/L de lacase e 2.683 U/L de lignina peroxidase. Os fungos quando utilizados isoladamente apresentaram uma degradação melhor do óleo diesel do que em consórcios

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-05-23T19:22:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese_definitiva_flavia.pdf: 1806679 bytes, checksum: 8511fdc9a18650f169157fd79794a228 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T19:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese_definitiva_flavia.pdf: 1806679 bytes, checksum: 8511fdc9a18650f169157fd79794a228 (MD5) Previous issue date: 2015-02-10 / CAPES / A biorremediação é uma tecnologia na qual se utiliza micro-organismos capazes dedegradadrem compostos químicos, como os presentes no óleo diesel e outros petroderivados, além do petróleo. O óleo diesel é um combustível fóssil, derivado do petróleo, utilizado em diferentes motores, formado basicamente por hidrocarbonetos (composto químico formado por átomos de hidrogênio e carbono, além de conter na composição, pequena quantidade, oxigênio, nitrogênio e enxofre). É o principal combustível comercializado no Brasil, possuindo inclusive refinaria no estado de Pernambuco. Vários acidentes estão relacionados a esse petroderivado. Os danos causados por esses acidentes são objetos de pesquisas na tentativa de remediar os efeitos causados por conta da contaminação, em especial por problemas com derramamento no mar e na terra. No presente trabalho foi realizado isolamento, identificação, avaliação da atividade enzimática, bem como o potencial biodegradador de micro-organismos, em culturas puras e culturas mistas, isolados de água do mar a partir da coleta realizada no Complexo Portuario de Suape, PE, Brasil. Foram isolados 187 fungos, sendo destes 2513% do tipo leveduras e 74,87% filamentosos. Das 140 linhagens de filamentosos isolados procedentes de água do mar foram identificados 23 dos gêneros Aspergillus e 20 de Penicillium, e 97 de outras espécies de fungos. O fungo identificado como Aspergullus terreus foi o que apresentou uma maior atividade para a enzima manganês peroxidase com 7668U/L na concentração de 3% de óleo diesel. A produção de lacase foi observada com as três concentrações de óleo diesel (1%, 3%, e 5%) pelo fungo Aspergillus awamori, cuja produção foi de 1660U/L, 1650U/L e 1240U/L, respectivamente. Uma melhor produção da enzima lignina peroxidase observou-se com o fungo Aspergullus niger, nas concentrações de 3% e 1% de óleo diesel, com atividades de 128U/L e 102U/L, respectivamente. Nos ensaios de degradação, as concentrações utilizadas de óleo diesel foram de 1%, 5% e 10%. Os micro-organismos associados apresentaram valores de degradação até quase 50%, em 5% óleo diesel, quando apresentados na concentração de 10%, os percentuais de degradação chegaram quase a 20% dos constituintes do óleo diesel. Quando em culturas mistas entre fungos filamentosos e bactérias observou-se degradação superior a 20% e fungos filamentoso e levedura, degradação próxima aos 30%. Os resultados apresentados demonstram a eficiência do uso de micro-organismos em processos biotecnológicos, nos processos de biotratamento de poluentes derivados de petroderivados, demonstrando que os fungos filamentosos são eficientes e promisores na remoção de poluentes tóxicos. / Bioremediation is a technology in which it is used degrading micro -organisms of the chemical compounds in diesel and other oil petroderivados, beyond petroleum. Diesel oil is a fossil fuel, derived from petroleum, used in different engines, consisting primarily of hydrocarbons (chemical compound made up of hydrogen and carbon atoms, and contain the composition, small amount, oxygen, nitrogen and sulfur). It is the main fuel sold in Brazil, including having refinery in the state of Pernambuco. Several accidents are related to this petroderivado. The damage caused by these accidents is research objects in an attempt to repair the effects because of contamination, in particular by problems with spill on sea and land. In the present work was carried out isolation, identification, assessment of enzymatic activity as well as the potential biodegradador of microorganisms isolated from sea water from the collection held at the Port of Suape, PE, Brazil. 195 fungi were isolated; of these 14% are type yeast and filamentous 76%. Of the 140 strains isolated from filamentous coming from seawater were 23 of the genera Aspergillus and Penicillium 20 and 97 of other species of fungi. The fungus encoded as Aspergullus terreus was the one with a manganese peroxidase activity with 7668U / L at a concentration of 3 % diesel fuel. The production of laccase was observed with all three concentrations of diesel oil (1%, 3% and 5%) by Aspergillus awamori, whose production was 1660U / L, 1650U / L, 1240U / L, respectively. For the lignin peroxidase enzyme observed with Aspergullus niger fungus at concentrations of 3% and 1% of diesel oil with activities of 128U / l and 102u / l, respectively. In degradation testing, the concentrations used of diesel oil were 1 %, 5% and 10%. The micro -organisms associated degradation values presented to almost 40% , 5 % diesel oil and presented in a concentration of 10% , the percentage of degradation reached almost 20% of diesel oil constituents . The results show the efficiency of the use of microorganisms in biotechnological processes in bioremediation processes petroderivados derivatives pollutants, showing that filamentous fungi are efficient and promisores in removing toxic pollutants.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1611_1.pdf: 1139279 bytes, checksum: 13fba9643abab60fece169537288d269 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos queratinolíticos ocorrem em muitos habitats naturais e sintéticos. Estes microrganismos existem juntos a outros fungos que possuem uma baixa atividade pela queratina e utilizam principalmente os produtos de sua decomposição. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a capacidade queratinofílica e queratinolítica de fungos filamentosos isolados de amostras de água de piscinas e de solo dos filtros destas piscinas em parques aquáticos de Recife-PE, selecionar a linhagem mais promissora para a produção da queratinase, avaliar parâmetros de melhores condições para produção dessa enzima e incorporar as amostras ao acervo da Micoteca URM/UFPE. As culturas foram isoladas da água de piscinas e do solo dos filtros de piscinas do parque aquático I e apenas água de piscinas dos parques aquáticos II e III, utilizando-se as técnicas Hair Bait e diluição de água e suspensão de solo dos filtros em água destilada esterilizada. A identificação foi efetuada através de observações das características macroscópicas e microscópicas das colônias. Para selecionar a linhagem mais promissora foi utilizado o meio líquido contendo sais e pena de frango. O estudo das melhores condições de produção foi avaliado os seguintes parâmetros: temperatura, pH, tempo de produção, velocidade de agitação, concentração do substrato e quantidade do inóculo. As atividades queratinolítica e proteásica foram determinadas espectrofotometricamente a 280 e 440 nm, respectivamente. Utilizando as técnicas Hair Bait e diluição e suspensão e plaqueamento em superfície, foram isoladas 49 espécies de fungos provenientes da água e do solo dos filtros das piscinas do parque I, e 31 espécies provenientes da água do parque II e 33 do parque aquático III. Dentre as espécies estudadas para a atividade queratinolítica Paecilomyces farinosus apresentou o melhor resultado com 4,2 U/mL de atividade enzimática. As melhores condições para a produção de queratinases são: pH 7,8, 30 °C, 180 rpm, 2,0% de pena de frando, 105 esporos/mL por quatro dias. A condição adequada para se ter uma maior produção de proteases, com menor custo, seria com pH 6,2, 30 °C, 180 rpm, 2,0% de pena de frango, 105 esporos/mL por 4 dias. Em todas as amostras o resultado da atividade proteásica obtido foi menor que 1 U/mL, comprovando que para a degradação da queratina é necessário uma atividade proteolítica bastante específica. A água e o solo dos filtros das piscinas são ricos em fungos potencialmente patógenos ao homem

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-20T12:15:35Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Telma Matos Guimaraes - 2013.pdf: 3613198 bytes, checksum: 0db69968e4da150a386327dd2a7a8213 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-20T12:16:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Telma Matos Guimaraes - 2013.pdf: 3613198 bytes, checksum: 0db69968e4da150a386327dd2a7a8213 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-20T12:16:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Telma Matos Guimaraes - 2013.pdf: 3613198 bytes, checksum: 0db69968e4da150a386327dd2a7a8213 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-05-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The " Microbial Models of Mammalian Metabolism" using filamentous fungi be used to study the biotransformation as an alternative to identify and product mammalian metabolites, with the goal of evaluate the profile of biotransformation of LASSBio 897, this This model was appliedto 3-thyenilidine-3,4-methylenedioxybenzoylhydrazide (LASSBio-897), a potential antihypertensive agent. The fungi Aspergillus alliaceus NRRL315, Beauveria bassiana ATCC 7159, Cunninghamella echinulata ATCC9244, NRRL1757 and Mortierela isabelina NRRL 1757 e Muccor plumbeus ATCC4740 were selected for the biotransformation LASSBio-897. The biotransformation was carried outin culture medium PDSM and Corn Steep at two different concentration sof the substrate.The monitoring of there action kinetics was done by methods thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography(HPLC), separation and purification of the formed products was performed by colun chromatography (CC). Nuclear magnetic resonance (RMN) methods, mass spectrometry and spectroscopyin the region of Infrared (IR) assisted in the elucidation of the structure of the biotransformation products of LASSBio 897. We identified four metabolites in the reaction mixture and, based on information obtained by MS and NMR was proposed structure of 3-tienilidena-3,4-dihydroxybenzoilidrazine (Met. I), 1,3-benzodioxol-5-carboxamide (Met. II), 1, 3-benzodioxol acid (Met. III) and sulfoxide (Met. IV); A simultaneous study of the pharmacokinetics of LASSBio 897 in healthy Beagle dog indicated the presence of MET.I and II in dog serum confirming the importance of applying this model.to obtain metabolites mamalia. / O ―Modelo Microbiano do Metabolismo Animal‖ utilizando fungos filamentosos, pode ser usado para estudos de biotransformação como forma alternativa para identificar e produzir metabólitos de mamíferos. Com o objetivo de avaliar o perfil de biotransformação do LASSBio 897, esse modelo foi aplicado a 3-tienilidina-3,4- metilenedioxibenzoilidrazida (LASSBio-897), um potencial agente anti-hipertensivo. Os fungos Aspergillus alliaceus NRRL 315, Beauveria bassiana ATCC 7159, Cunninghamella echinulata ATCC 9244, Mortierela isabelina NRRL 1757 e Muccor plumbeus ATCC4740 foram selecionados. A biotransformação foi realizada nos meios de cultura PDSM e Corn Steep em duas concentrações diferentes. O monitoramento das cinéticas reacionais foi feito por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), a separação e purificação dos produtos formados foi realizada por Cromatografia em Coluna (CC). Métodos de ressonância nuclear magnética (RMN), Espectrometria de Massas (EM) e Espectroscopia na região do Infravermelho (IV) auxiliaram na elucidação da estrutura dos compostos obtidos pela biotransformação do LASSBio 897. Quatro metabólitos foram identificados na mistura reacional, com base em informações obtidas por MS e RMN foram propostas as estruturas 3,4-tielidina diidroxibenzoilidrazina (Met. I); 1,3-benzodioxol-5-carboxiamida (Met. II); ácido 1,3-benzodioxóico (Met. III) e sulfóxido (Met. IV). Um estudo simultâneo de farmacocinética do LASSBio 897 em cão saudável da raça Beagle indicou a presença do Met. I e do Met. II no soro do animal. Confirmando a importância da aplicação deste modelo para obtenção de metabólitos de maíferos.

Submitted by Sáboia Nágila (nagila.saboia01@gmail.com) on 2016-07-29T14:48:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação-Michele Alves Sanches.pdf: 930400 bytes, checksum: 3b455ac91457a2d15e86539fbdc9d3e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-26T13:29:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação-Michele Alves Sanches.pdf: 930400 bytes, checksum: 3b455ac91457a2d15e86539fbdc9d3e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-26T13:32:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação-Michele Alves Sanches.pdf: 930400 bytes, checksum: 3b455ac91457a2d15e86539fbdc9d3e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T13:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação-Michele Alves Sanches.pdf: 930400 bytes, checksum: 3b455ac91457a2d15e86539fbdc9d3e3 (MD5) Previous issue date: 2016-03-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O homem tem a necessidade de misturar a água com substâncias insolúveis em suas atividades diárias e industriais. Os surfactantes, derivados de petróleo, têm sido utilizados com essa finalidade, no entanto, esses apresentam problemas quanto a sua toxicidade e biodegradabilidade. Os biossurfactantes de origem microbiana são uma alternativa para essa situação, porém, o seu custo de produção é alto, e em parte, devido aos substratos que são utilizados nos bioprocessos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi investigar a utilização de resíduos como substrato para produção de biossurfactantes por fungos filamentosos isolados de amostras de solo da região Amazônica. Foram realizados bioprocessos com cinco isolados fúngicos sabidamente produtores de biossurfactantes, com a finalidade de investigar qual deles produziria em menor tempo. Em seguida, foi avaliada a possibilidade de utilização de resíduos (cascas de tucumã, pupunha, banana, cupuaçu e também o óleo pós-fritura) como subtrato para o bioprocesso com o isolado selecionado. Os fatores que influenciam na produção do biossurfactante foram avaliados por planejamento fatorial. O fungo Fusarium oxysporum 87-2LIVI produziu altos níveis de biossurfactantes em três dias de bioprocesso. E também se destacou devido a alta produção de biossurfactante utilizando a casca de pupunha como substrato. O pH e extrato de levedura foram os fatores mais importantes relacionados a produção de biossurfactante por esse isolado. Desta forma, o presente trabalho demonstrou que isolados da espécie F. oxysporum, isolados de solo Amazônico, são potenciais produtores de surfactantes e que resíduos Amazônicos, em especial casca de pupunha, possui potencial para ser utilizado como substrato. / Human being has the need to mix water with insoluble substances in their daily and industrial activities. Surfactants derived from petroleum have been used for this purpose, however, they have problems such as their toxicity and biodegradability. Biosurfactants from microbial origin are an alternative to this, on the other hand, its production cost is high due to the substrates that are used in the bioprocesses. In this context, the aim of this study was to investigate the use of wastes as a substrate for the production of biosurfactants by filamentous fungi isolated from soil samples in Amazon region. Bioprocess were conducted with five known fungi isolates producers of biosurfactants in order to investigate which of them would produce in a shorter time. Then, we evaluated the possibility using wastes of peel from tucumã, peach palm, banana, cupuacu and also the post-fry oil as substrate for the bioprocess with the selected isolated. Factors that influence the production of biosurfactant were evaluated by factorial design. As a result, the fungus Fusarium oxysporum 87-2LIVI produced high levels of biosurfactants in three days of bioprocess. Moreover, this specie also showed highlight due to high biosurfactant production using peach palm peel as substract. The pH and yeast extract were the most important factors related to production of biosurfactant by this isolated. Thus, the present study showed isolated of F. oxysporum specie from Amazonian soil is potential producer of surfactants and also Amazon waste, particularly, peel of peach palm has the potential to be used as a bioprocess substrate for production of biosurfactant.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliandra de Freitas Sia.pdf: 1557550 bytes, checksum: e4d21c384795b53b83656a535e1bf31f (MD5) Previous issue date: 2012-09-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The filamentous fungi are an important group of microorganisms, being not only one of the most numerous among the microorganisms due to their potential in biotechnological processes such as the production of antibiotics, enzymes, vitamins and others. The fungi are also plant, animals and human pathogens, acting sometimes as toxins producers. The fungal growth is a routine practice at microbiological laboratories and the Potato Dextrose Agar (PDA) medium is the most used medium due to be a rich source of starch. However, in some regions of Brazil, the potato production has a quite high cost. For this reason the aiming of the present work was the search for new alternative sources of starch. Thus, initially several tubercles: cassava (Manihot esculenta), sweet potato (Ipomoea batatas), carrot (Daucus carota), ginger (Zingiber officinale) and yam (Dioscorea alata) were tested as a starch source to fungal growth. The cassava (Manihot esculenta) showed the best results to fungal growth. This species is a tropical plant with a great commercial importance to Brazil, Africa and other parts of the world. In brazilian north and northeast regions, the cassava is hugely cultivated by a low cost. After the first screening, it was optimized the utilization of Cassava Dextrose Agar (CDA) media. Many fungal species of biotecnological importance (Beauveria bassiana, Aspergillus niger, Penicillium sp., Fusarium sp., Phanerochaete chrysosporium) were evaluated to growth, development sporulation and hyphal formation. The BDA media was used as a control. The present results demonstrated a high efficiency of MDA to fungal growth. However, in MDA was observed a reduction of fungal sporulation comparing with BDA. Finally, both media BDA and MDA, were used to the endophytic fungal isolation from: guarana (Paullinia cupana) and olives (Olea europea). The fungal identification demonstrated that isolates varied according to host plant. The fungal diversity was higher in guaraná being higher using the MDA in comparison with the BDA media. To both media, it was obtained a low number of isolated fungi from O. europea. The present results clearly demonstrated that the cassava is an feasible important starch source, being a potential alternative media, mainly in tropical countries / Os fungos filamentosos são um importante grupo de micro-organismos, não apenas por serem os mais numerosos dentre todos os micro-organismos, mas devido ao seu potencial em processos biotecnológicos como a produção de antibióticos e enzimas, fontes de vitaminas, alimentação e outros. Os fungos também são conhecidos como patógenos de plantas, animais e humanos, e produtores de toxinas. Cultivar fungos é uma rotina em laboratórios de microbiologia e um dos meios muito utilizado é o Batata Dextrose Ágar (BDA), que utiliza a batata como uma fonte rica em amido. Em algumas regiões do país, como a Região Norte, a batata tem um elevado custo e por este motivo a busca por novas fontes de amido é uma alternativa. Assim, outros vegetais devem ser pesquisados visando a substituição da batata. No presente trabalho foram inicialmente utilizados mandioca (Manihot esculenta), batata-doce (Ipomoea batatas), cenoura (Daucus carota), gengibre (Zingiber officinale) e cará (Dioscorea alata), sendo demonstrado que a mandioca (Manihot esculenta) é uma alternativa relevante para o cultivo de fungos. Esta espécie vegetal é uma planta tropical de grande importância comercial no Brasil, na África e em outras regiões do mundo, sendo que para a região Norte a mandioca é muito cultivada e também de baixo custo. Assim, após a triagem inicial com outros tubérculos, foi realizada a avaliação e otimização do meio de cultura de Mandioca Dextrose Ágar (MDA). Para o ensaio do meio com mandioca foram utilizadas diversas espécies de fungos com importância biotecnológica (Beauveria bassiana, Aspergillus niger, Penicillium sp., Fusarium sp., Phanerochaete chrysosporium). Foi avaliada a taxa de crescimento, a esporulação e a formação de hifas no meio de cultura BDA (utilizado como controle) e MDA. Os resultados comprovaram a eficiência do MDA para o crescimento dos fungos analisados, destacando-se a taxa de crescimento radial em meio sólido e peso seco do micélio em meio líquido. Entretanto, em MDA há uma menor esporulação dos fungos quando comparado ao BDA. Finalmente, foi realizado, utilizando meio BDA e MDA, o isolamento de fungos endofíticos de duas plantas: guaraná (Paullinia cupana) e oliveira (Olea europea), nos quais o meio de cultura MDA também se mostrou eficiente. A identificação de fungos endofíticos revelou que eles variaram conforme a planta hospedeira. A diversidade de fungos endofíticos foi maior em guaraná no meio MDA que em BDA, e o número de isolados foi menor em oliveira nos dois meios utilizados. Assim, do ponto de vista econômico e social, o substrato de mandioca pode ser considerado uma alternativa de alta potencialidade na obtenção de meios de cultura para laboratórios de micologia, especialmente em países tropicais

Foram estudadas trinta e uma cepas fúngicas não identificadas, as quais foram denominadasX1 a X31. O potencial fotoprotetor foi avaliado pela medida espectrofotométrica da absorçãodos extratos na região do UV (280-400 nm). Os extratos com os melhores perfis de absorção em cultura estacionária foram X1, X2, X6, X12, X13, X18, X19, X22, X24 e X31 e, em cultura agitada X4 e X17. A reprodutibilidade do processo foi avaliada e as cepas fúngicas que apresentaram coeficiente de variação menor que 15% foram selecionadas para o estudo de fotoestabilidade. A fotoestabilidade dos extratos foi avaliada pela medida da viabilidade celular de fibroblastos L929 tratados com extratos previamente irradiados sob radiação UVA (11,2 J/cm2) e UVB (3,43 J/cm2) e extratos não irradiados, bem como, pela comparação das áreas sob as curvas de absorção na região do UV dos extratos irradiados e não irradiados. Os extratos selecionados para o estudo de fotoestabilidade foram X4, X12, X19, X22, X24 e X31. Os extratos não irradiados apresentaram os seguintes valores deIC50 para viabilidade celular (citotoxidade): X4-130µg/ml, X19-20µg/ml, X22-10 µg/ml e X24-60µg/ml. Após a radiação UVA e UVB, os extratos apresentaram redução significativa da viabilidade celular em relação ao IC50 dos extratos não irradiados. Sob luz UVB, os extratos X12 (IC50 35µg/ml) e X31 (IC50 70µg/ml) mantiveram a mesma porcentagem de redução da viabilidade celular quando comparado ao IC50 dos extratos não irradiados. No entanto após exposição à luz UVA, o extrato X12 aumentou a viabilidade celular de 50% (quando não irradiado) para 75% (irradiado). Enquanto que o extrato X31, mesmo após a radiação UVA, manteve a mesma redução de 50% da viabilidade celular. Nessa etapa os extratos selecionados foram os X12 e X31. O espectro de absorção na região do UV obtido para o extrato X12 mostrou uma redução da absorbância de 28,3% sob radiação UVB e de 60% sob radiação UVA em relação ao extrato não irradiado. O extrato X31 apresentou uma redução da absorbância de 17,6% e30% sob radiação UVB e UVA respectivamente, em relação ao extrato não irradiado. Os fungos selecionados foram identificados por PCR, sugerindo que o fungo X12 seja o Aspergillus terreus e o X31 seja o Talaromyces pinophilus. Por fim, foi feita a identificação da substância ativa do extrato X12 empregando a técnica de desreplicação, a qual fez o uso da instrumentação analítica acoplada UHPLC-DAD-(ESI)-HRMS associada ao banco de dados Chapman& Hall\'s Dictionary of Natural Products (DNP). No extrato X12 o composto majoritário foi identificado como sendo a citreoviridina. Assim, os resultados do presente trabalho permitiu estabelecer um procedimento para a seleção de fungos produtores de compostos absorvedores de radiação UV, que poderia ser aplicado na obtenção de novos filtros orgânicos naturais para protetores solares. / It were studied thirty-one fungal strains not identified, which were named X1 to X31. The photoprotective potential was assessed spectrophotometrically by measuring absorption of the extract in the UV region (280-400 nm). The extracts that presented the best absorption profiles in stationary culture were X1, X2, X6, X12, X13, X18, X19, X22, X24 and X31, and X4 and X17 in stirred culture. The reproducibility of the process was evaluated and fungal strains that showed a coefficient of variation lower than 15% were selected for the study of photostability. The photostability of the extracts was assessed by measuring cell viability of L929 fibroblasts treated with extracts previously irradiated under UVA light (11,2 J/cm2) and UVB (3,43 J/cm2) and not irradiated extracts, as well as by comparison of the areas under the curves of absorption in the UV region of the irradiated and non-irradiated extracts. The extracts selected for the study of photostability were X4, X12, X19, X22, X24 and X31. The non-irradiated extracts showed the following IC50 values for cell viability (cytotoxicity): X4- 130?g/ml X19-20?g/ml, X22-10/ml and X24-60?g/ml. After UVA and UVB radiation, the extracts showed significant reduction in cell viability compared to the IC50 of the unirradiated extracts. Under UVB light, the X12 extracts (IC50 35?g/ml) and X31 (IC50 70mg/ml) maintained the same percentage of cell viability reduction when compared to the IC50 of the unirradiated extracts. However after exposure to UVA light, X12 extract increased the cell viability from 50% (when not irradiated) to 75% (irradiated). While X31 extract even after the UVA irradiation, remained the same 50% of reduction in cell viability. At this stage the selected extracts were X12 and X31. The absorption spectrum in the UV region obtained for X12 extract showed a decrease in absorbance of 28.3% under UVB and 60% under UVA radiation relative to non-irradiated extract. The X31extract showed a reduction in absorbance of 17.6% and 30% in UVA and UVB radiation, respectively, compared to non-irradiated extract. The selected fungi were identified by PCR, suggesting that X12 fungus is Aspergillus terreus and X31 is the Talaromyces pinophilus. Finally it was identified the active substance of X12 extract employing dereplication technique which makes use of coupled analytical instrumentation UHPLC-DAD- (ESI) HRMS associated to the Chapman and Hall\'s Dictionary of Natural Products (DNP) database. The majority compound of X12 extract was identified as the citreoviridin. Thus, the results of this study allowed us to establish a procedure for the selection of producers of UV absorbing compounds from fungi, which could be applied in obtaining new natural organic filters for sunscreens.

Submitted by Danielle Karla Martins Silva (danielle.martins@ufpe.br) on 2015-03-04T13:06:12Z No. of bitstreams: 2 TESE_FlaviaPaivaCoutinho.pdf: 1135606 bytes, checksum: a3c2782bb5ef75d4e73741021e963738 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T13:06:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE_FlaviaPaivaCoutinho.pdf: 1135606 bytes, checksum: a3c2782bb5ef75d4e73741021e963738 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq / O fósforo (P) é essencial às plantas, porém em geral os solos brasileiros apresentam baixo teor de fósforo solúvel (0,03 mg kg-1 P), tornando necessária a aplicação de altas dosagens de adubos fosfatados. Diversos micro-organismos do solo, incluindo bactérias e fungos, têm a capacidade de solubilizar diferentes formas de fosfatos, aumentando a disponibilidade desse elemento às plantas. Entre os fungos, os micorrízicos arbusculares (FMA) são conhecidos por contribuir para o crescimento das plantas, aumentando a aquisição de P e de outros nutrientes devido à expansão da área de absorção das raízes. Neste estudo foram selecionados isolados de fungos solubilizadores de fosfato (FSP) eficientes em disponibilizar P às videiras (Vitis vinifera L. cv. Cabernet sauvignon), na presença ou não de FMA, em solos com ou sem adição de fosfato de rocha. A partir de solo rizosférico de videiras foram isolados 220 espécimes de fungos solubilizadores de P, sendo 216 Aspergillus e quatro Penicillium. Destes, dez foram selecionados a partir do índice de solubilização (IS) e testados para avaliação da capacidade de solubilizar, in vitro, fontes de fosfato [termofosfato (TEF), superfosfato simples (SFS), fosfato de rocha arad (FRA) e fosfato monoamônico (MAP)]. Foi observado que 10 a 90 % dos espécimes eram potencialmente capazes de solubilizar essas fontes de P e diminuir o pH do meio de cultura líquido. Três espécimes (FSP 39, 145 e 220) foram testados para determinar a dosagem de inóculo adequada para atingir a máxima solubilização de MAP, SFS, TEF e FRA. Estes fungos mostraram máxima solubilização e maiores percentuais de eficiência de solubilização na dosagem de esporos 107 mL-1. Em casa de vegetação, 90 dias após a inoculação de videiras com glomerosporos, o tratamento com FMA promoveu incremento significativo na biomassa seca aérea (0,60 g planta-1), porém a adição de fosfato de rocha anulou este benefício. A aplicação de FSP de forma isolada (0,40 g planta-1) ou em combinação com FMA (0,42 g planta-1) resultou em aumento na produção de biomassa seca aérea, diferindo significativamente do controle (0,21 g planta-1) em solo sem adição de fosfato. Para o teor de nutrientes (N, K e P), as plantas inoculadas diferiram estatisticamente das não inoculadas. Conclui-se que a solubilização in vitro de MAP, SFS, TEF e FRA pelos fungos pode constituir alternativa para aproveitamento eficiente dessas fontes de P. Os FMA, isolados ou em combinação com FSP, podem promover maior crescimento das plantas, aumentando o uso eficiente de nutrientes disponíveis no solo e possibilitando redução nas doses de adubação fosfatada.